JPS6031473B2 - 微生物によるポリアミンオキシダ−ゼ類の製造法 - Google Patents
微生物によるポリアミンオキシダ−ゼ類の製造法Info
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- JPS6031473B2 JPS6031473B2 JP54001035A JP103579A JPS6031473B2 JP S6031473 B2 JPS6031473 B2 JP S6031473B2 JP 54001035 A JP54001035 A JP 54001035A JP 103579 A JP103579 A JP 103579A JP S6031473 B2 JPS6031473 B2 JP S6031473B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は微生物によるポリアミンオキシダーゼ類の製造
法に関する。
法に関する。
一般にポリアミンオキシダーゼはポリアミン類の酸化的
脱アミノ反応を触媒する酵素であって、生体内にあって
は例えばスペルミン、スペルミジン等のポリアミン類の
分解代謝に関与する重要な役割を果すものである。
脱アミノ反応を触媒する酵素であって、生体内にあって
は例えばスペルミン、スペルミジン等のポリアミン類の
分解代謝に関与する重要な役割を果すものである。
近年、血液、尿−リンパ液等のいわゆる体液におけるポ
リアミン類の増加量と癌疾患との相関関係が注目されは
じめ、ポリアミンオキシダーゼの漣診断用酵素としての
新しい用途が開発されつつある（特開昭５０−９４９２
）。
リアミン類の増加量と癌疾患との相関関係が注目されは
じめ、ポリアミンオキシダーゼの漣診断用酵素としての
新しい用途が開発されつつある（特開昭５０−９４９２
）。
従来、ポリアミンオキシダーゼの供給源としては動物や
植物組織中から得られたものが使用されているが、これ
ら動植物組識を起源とするポリアミンオキシダーゼはい
ずれも活性が弱く、しかも大量に入手する事が困難であ
って安価に工業的に製造する事は至難であった。
植物組織中から得られたものが使用されているが、これ
ら動植物組識を起源とするポリアミンオキシダーゼはい
ずれも活性が弱く、しかも大量に入手する事が困難であ
って安価に工業的に製造する事は至難であった。
本発明者らは、ポリアミンオキシダーゼを工業的に安価
にして大量に製造する方法を確立すべ〈、種々の研究の
結果、ムコ−ル属、リゾープス属、ァブシディア属、ア
スベルギルス属、ベニシリウム属、モナスカス属、フザ
リウム属、ジベレラ属、スポロトリカム属、ベルティシ
リウム属、グリオフラジゥム属、フィトフソラ属、シリ
ンドカプロン属に属する微生物がポリアミンオキシダー
ゼ類を生成することを見出した。
にして大量に製造する方法を確立すべ〈、種々の研究の
結果、ムコ−ル属、リゾープス属、ァブシディア属、ア
スベルギルス属、ベニシリウム属、モナスカス属、フザ
リウム属、ジベレラ属、スポロトリカム属、ベルティシ
リウム属、グリオフラジゥム属、フィトフソラ属、シリ
ンドカプロン属に属する微生物がポリアミンオキシダー
ゼ類を生成することを見出した。
しかし、これら微生物のポリアミンオキシダーゼ類の生
産量は少く、培養塔地に誘導物質としてスペルミンおよ
び／又はスペルミジンの添加が必要であることも分った
。具体的に好適な微生物としては、スペルミン塔地にお
いてポリアミンオキシダーゼ類を産生する菌として、ム
コール属、リゾープス属、アプシディア属、アスベルギ
ルス属、ベニシリュウム属、モナスカス属、フザリウム
属、ジベレラ属、スポロトリカム属、ベルティシリウム
属、グリオクラジゥム属、フィトフソラ属、シリンドロ
カルポン属に属する菌があり、一方スペルミジン培地に
おいてポリアミンオキシダーゼ類を産生する菌としては
、ムコール属、リゾプス属、アスベルギルス属、ベニシ
リュウム属、フザリュウム属、ジベレラ属、フィトフソ
ラ属、シリンドロカルポン属に属する菌がある。
産量は少く、培養塔地に誘導物質としてスペルミンおよ
び／又はスペルミジンの添加が必要であることも分った
。具体的に好適な微生物としては、スペルミン塔地にお
いてポリアミンオキシダーゼ類を産生する菌として、ム
コール属、リゾープス属、アプシディア属、アスベルギ
ルス属、ベニシリュウム属、モナスカス属、フザリウム
属、ジベレラ属、スポロトリカム属、ベルティシリウム
属、グリオクラジゥム属、フィトフソラ属、シリンドロ
カルポン属に属する菌があり、一方スペルミジン培地に
おいてポリアミンオキシダーゼ類を産生する菌としては
、ムコール属、リゾプス属、アスベルギルス属、ベニシ
リュウム属、フザリュウム属、ジベレラ属、フィトフソ
ラ属、シリンドロカルポン属に属する菌がある。
本発明で使用する培地は炭素源、窒素源、無機物その他
栄養素を程よく含有する培地ならば合成培地、または天
然塔地のいずれも使用可能であり、液状でも固状でもよ
いが通常液体培地を使用するのが工業的に有利である。
栄養素を程よく含有する培地ならば合成培地、または天
然塔地のいずれも使用可能であり、液状でも固状でもよ
いが通常液体培地を使用するのが工業的に有利である。
液体培地による培養にあっては静贋培養法、雛梓培養法
、通気培養法など適宜に選択実施し得るが、大量に培養
するには深部通気培養によるのが有利である。培地には
スペルミン、スペルミジンの如きポリアミンオキシダー
ゼ類の誘導物質が１種類又は２種類以上適宜組み合わせ
て含有させられる。培地中のポリアミンオキシダーゼ類
の誘導物質の最適濃度は使用菌株、培地の組成等により
相違するが通常０．０１〜３．０％程度が最適である。
その他塔地中には使用菌株の種類に応じてその生育及び
目的とするポリアミンオキシダーゼの蓄積量が最大にな
るに必要な栄養源が必要に応じ含有させることが出来る
。培養の条件は目的とするポリアミンオキシダーゼの生
産蓄積量が最大になるように決定されるのがよいことは
いうまでもない。そのような条件はもちろん菌の種類、
培地の組成その他の条件に応じて相当の変動があるが、
培養開始時の恥は通常４．０〜７．０の範囲で好適には
５．０〜６．０付近で行われる。培養温度は２０〜４０
ｑＣの範囲で好適には２５〜３５ｏｏの範囲で行なわれ
る。このような条件下で１幼時間〜１２餌時間培養すれ
ば培養物中にポリアミンオキシダーゼ類が暮畢生成する
。このようにして培養物中に生産蓄積されたポリアミン
オキシダーゼ類は次のごとき方法で採取される。
、通気培養法など適宜に選択実施し得るが、大量に培養
するには深部通気培養によるのが有利である。培地には
スペルミン、スペルミジンの如きポリアミンオキシダー
ゼ類の誘導物質が１種類又は２種類以上適宜組み合わせ
て含有させられる。培地中のポリアミンオキシダーゼ類
の誘導物質の最適濃度は使用菌株、培地の組成等により
相違するが通常０．０１〜３．０％程度が最適である。
その他塔地中には使用菌株の種類に応じてその生育及び
目的とするポリアミンオキシダーゼの蓄積量が最大にな
るに必要な栄養源が必要に応じ含有させることが出来る
。培養の条件は目的とするポリアミンオキシダーゼの生
産蓄積量が最大になるように決定されるのがよいことは
いうまでもない。そのような条件はもちろん菌の種類、
培地の組成その他の条件に応じて相当の変動があるが、
培養開始時の恥は通常４．０〜７．０の範囲で好適には
５．０〜６．０付近で行われる。培養温度は２０〜４０
ｑＣの範囲で好適には２５〜３５ｏｏの範囲で行なわれ
る。このような条件下で１幼時間〜１２餌時間培養すれ
ば培養物中にポリアミンオキシダーゼ類が暮畢生成する
。このようにして培養物中に生産蓄積されたポリアミン
オキシダーゼ類は次のごとき方法で採取される。
ポリアミンオキシダーゼ類は通常主に菌体中に存在する
ので繭体中の酵素の採取法について述べる。培養終了後
培養液を炉過して得られた菌体を水又は緩衝液でよく洗
修する。得られた菌体を適量の緩衝液に懸濁し菌体を機
械的に破砕する。例えば乳鉢、ダィノーミル、フレンチ
プレス、超音波処理等によって破砕される。
ので繭体中の酵素の採取法について述べる。培養終了後
培養液を炉過して得られた菌体を水又は緩衝液でよく洗
修する。得られた菌体を適量の緩衝液に懸濁し菌体を機
械的に破砕する。例えば乳鉢、ダィノーミル、フレンチ
プレス、超音波処理等によって破砕される。
かくして得られた菌体の破砕液中より固形物を炉週もし
〈は遠心分離によって除去し次いで破砕液中のポリアミ
ンオキシダーゼ類は酵素単離の常法によって採取される
。また水その他の溶媒で抽出する菌体内酵素抽出法の常
法により容易に採取することもできる。一方、菌体から
培養液中に遊離された酵素については培養炉液から常法
により採取することができる。
〈は遠心分離によって除去し次いで破砕液中のポリアミ
ンオキシダーゼ類は酵素単離の常法によって採取される
。また水その他の溶媒で抽出する菌体内酵素抽出法の常
法により容易に採取することもできる。一方、菌体から
培養液中に遊離された酵素については培養炉液から常法
により採取することができる。
さらに精製するには例えば｛１）硫安による分画沈澱、
‘２｝アルコール等による分画沈澱、‘３’イオン交換
体によるカラムクロマト法、ｔ４’セフアヂックスによ
る節別分画、‘５｝ハイドロキシルアパタイトによるカ
ラムクロマト法等の方法を適宜組み合せ、あるいはくり
返すこと、他の常法の精製手段を必要に応じて用いるこ
ともできる。又通常の固定化手段により固定化酵素とす
ることもできる。本発明によって得られるポリアミンオ
キシダーゼ類には種々のタイプのポリアミンオキシダー
ゼがある。まず、スペルミジンとスペルミン両方に対し
て作用するポリアミンオキシダ−ゼーがあり、これを仮
にポリアミンオキシダーゼＡとした。次に、スペルミン
のみに作用するポリアミンオキシダーゼがあり、これを
仮にポリアミンオキシダ−ゼＢとした。次に、ポリアミ
ンオキシターーゼＡとポリアミンオキシダーゼＢの理化
学的性質を示す。
‘２｝アルコール等による分画沈澱、‘３’イオン交換
体によるカラムクロマト法、ｔ４’セフアヂックスによ
る節別分画、‘５｝ハイドロキシルアパタイトによるカ
ラムクロマト法等の方法を適宜組み合せ、あるいはくり
返すこと、他の常法の精製手段を必要に応じて用いるこ
ともできる。又通常の固定化手段により固定化酵素とす
ることもできる。本発明によって得られるポリアミンオ
キシダーゼ類には種々のタイプのポリアミンオキシダー
ゼがある。まず、スペルミジンとスペルミン両方に対し
て作用するポリアミンオキシダ−ゼーがあり、これを仮
にポリアミンオキシダーゼＡとした。次に、スペルミン
のみに作用するポリアミンオキシダーゼがあり、これを
仮にポリアミンオキシダ−ゼＢとした。次に、ポリアミ
ンオキシターーゼＡとポリアミンオキシダーゼＢの理化
学的性質を示す。
ポリアミンオキシダーゼＡの理化学的性質：１ 基質特
異性スペルミジンとスペルミンに対して極めて強く作用
するが他のアミン類に対しては作用しない。
異性スペルミジンとスペルミンに対して極めて強く作用
するが他のアミン類に対しては作用しない。
２ 作用
本酵素はスペルミジンスベルミンに対して２：１の割合
で作用し、過酸化水素を発生する。
で作用し、過酸化水素を発生する。
３ 至通ＰＨ
本酵素はｐＨ６．７〜７．２に至薄ｐＨを有す。
４ 安定ｐＨ範囲
本酵素は３０００、３０分処理した場合、ＰＨ５．５〜
７．２において９０％以上の残存活性を有す。
７．２において９０％以上の残存活性を有す。
５ 最適温度
本酵素は３５００付近に作用最適温度を有す。
６ 阻害性
本酵素はヒドロキシルアミン、フェニルヒドラジン、イ
ソニアジド、イプロニアジド、８ーヒドロキシキノリン
によって強く阻害され、かつ又、銀、水銀で強く阻害さ
れる。
ソニアジド、イプロニアジド、８ーヒドロキシキノリン
によって強く阻害され、かつ又、銀、水銀で強く阻害さ
れる。
ポリァミンオキシダーゼＢの理化学的性質：１ 基質特
異性スペルミンのみに強く作用し他のアミン類には全く
作用しない。
異性スペルミンのみに強く作用し他のアミン類には全く
作用しない。
２ 作用
本酵素はスペルミンに作用し、過酸化水素を発生する。
３ 至適ｐＨ本酵素はＰＨ５．５〜６．０に至薄ｐＨを
有す。
有す。
４ 安定ｐＨ範囲
本酵素は３０００、１０分処理した場合、ＰＨ３．２〜
５．０で９０％以上の残存活性を有する。
５．０で９０％以上の残存活性を有する。
５ 最適温度
本酵素は３０００付近に作用最適温度を有す。
６ 阻害性
本酵素はフェニルヒドラジン、ィソニアジド、イソプロ
ニアジド、８ーヒドロキシキノリン、〇ーフエナンスロ
リン、パラクロロマーキュリックベンソ′ェィト、及び
銀によって強く阻害される。
ニアジド、８ーヒドロキシキノリン、〇ーフエナンスロ
リン、パラクロロマーキュリックベンソ′ェィト、及び
銀によって強く阻害される。
本発明においてはポリアミンオキシダーゼ類が含有菌体
、菌体処理物、菌体抽出液、粗精製酵素、精製酵素もし
くはそれらの固定化物として得られる。
、菌体処理物、菌体抽出液、粗精製酵素、精製酵素もし
くはそれらの固定化物として得られる。
これらのポリアミンオキシダーゼ類酵素製品はポリアミ
ンに作用する反応系において最終生産物として過酸化水
素を生成するに対しポリアミンデヒドロゲナーゼは過酸
化水素を生成しないという明瞭な差異により区別するこ
とができる。
ンに作用する反応系において最終生産物として過酸化水
素を生成するに対しポリアミンデヒドロゲナーゼは過酸
化水素を生成しないという明瞭な差異により区別するこ
とができる。
すなわち、ポリアミンオキシダーゼ類はポリアミンを分
解する反応系において反応生成物として過酸化水素を生
成するから、その生成された過酸化水素をいわゆる過酸
化酸素による共役酸化反応により定量する方法でその酵
素力価を測定することができる。尚ポリアミンデヒドロ
ゲナーゼについてはターバーらの報告がある（Ｃ．Ｗ．
Ｔａめｒｅｔａｌ：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４５（
２０）．５４２４〜５４３３１９７０）。次に本発明に
おいて用いたポリアミンオキシダーゼ活性の測定法を示
す。４−アミノアンチピリン１０の９、フェノール０．
２の‘、ベルオキシダーゼ５の９を０．１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．２）１００地に溶解し、発色試薬を調製す
る。
解する反応系において反応生成物として過酸化水素を生
成するから、その生成された過酸化水素をいわゆる過酸
化酸素による共役酸化反応により定量する方法でその酵
素力価を測定することができる。尚ポリアミンデヒドロ
ゲナーゼについてはターバーらの報告がある（Ｃ．Ｗ．
Ｔａめｒｅｔａｌ：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４５（
２０）．５４２４〜５４３３１９７０）。次に本発明に
おいて用いたポリアミンオキシダーゼ活性の測定法を示
す。４−アミノアンチピリン１０の９、フェノール０．
２の‘、ベルオキシダーゼ５の９を０．１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ７．２）１００地に溶解し、発色試薬を調製す
る。
この発色試薬１．５の‘にスペルミン（１０ｍＭ）又は
スペルミジン（１０ｍＭ）０．５叫と試料０．５の‘を
加え３７Ｃで反応させ、その１分間当りの５０５ｎ肌の
吸光度変化量を測定する。試料のポリアミンオキシダー
ゼ活性単位は次の如く算出する。
スペルミジン（１０ｍＭ）０．５叫と試料０．５の‘を
加え３７Ｃで反応させ、その１分間当りの５０５ｎ肌の
吸光度変化量を測定する。試料のポリアミンオキシダー
ゼ活性単位は次の如く算出する。
すなわち毎分１．０りＭの過酸化水素を生成せしめるポ
リアミンオキシダーゼの量を１単位と規定する。
リアミンオキシダーゼの量を１単位と規定する。
このポリアミンオキシダーゼ１単位は上記５０５ｎのに
おける吸収において毎分０．００８の吸収増加に該当す
るものである。次に本発明の試験例及び実施例を示す。
おける吸収において毎分０．００８の吸収増加に該当す
るものである。次に本発明の試験例及び実施例を示す。
試験例 １
ス ペル ミ ン ０．０２５％、Ｋ２ＨＰ０４０．１
５％、ＫＨ２Ｐ０４０．１％、ＭｇＳ０４・７日２００
．０２％からなる培地（殺菌前ｐＨ５．５）（以下スペ
ルミン渚地という）を５００机【容坂口フラスコに１０
０叫ずつ分注し１２０００２０分殺菌後表１に示す各菌
株をあらかじめ０．１％グルコースを含むスペルミン塔
地で２８００４斑寺間振糧培養した種培養液１０の‘を
接種し２８００で４糊時間振濠培養後炉過し水で洗糠し
菌体を得る。
５％、ＫＨ２Ｐ０４０．１％、ＭｇＳ０４・７日２００
．０２％からなる培地（殺菌前ｐＨ５．５）（以下スペ
ルミン渚地という）を５００机【容坂口フラスコに１０
０叫ずつ分注し１２０００２０分殺菌後表１に示す各菌
株をあらかじめ０．１％グルコースを含むスペルミン塔
地で２８００４斑寺間振糧培養した種培養液１０の‘を
接種し２８００で４糊時間振濠培養後炉過し水で洗糠し
菌体を得る。
この菌体を０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）５の
‘に懸濁し超音波処理（２０ＫＨｚ、１０分）で菌体を
破砕する。破砕後、冷凍遠心機にて遠心分離（１２００
仇ｐｍ、２０分）し上燈を得る。
‘に懸濁し超音波処理（２０ＫＨｚ、１０分）で菌体を
破砕する。破砕後、冷凍遠心機にて遠心分離（１２００
仇ｐｍ、２０分）し上燈を得る。
得られた上燈液の各々のスペルミンオキシダーゼ活性及
びスべルミジンオキシダーゼ活性を測定した。その結果
を表１に示した。表 １ 表１により明らかな如くスペルミン培地においてポリア
ミンオキシダーゼ類を産生する菌としてはムコール属、
リゾプス属、アブシディア属、アスベルギルス属、ベニ
シリュウム属、モナスカス属、フザリウム属、ジベレラ
属、スポロトリカム属、ベルティシュリウム属、グリオ
クラジウム属、フィトフソラ属、シリドロカルポン属が
あげられる。
びスべルミジンオキシダーゼ活性を測定した。その結果
を表１に示した。表 １ 表１により明らかな如くスペルミン培地においてポリア
ミンオキシダーゼ類を産生する菌としてはムコール属、
リゾプス属、アブシディア属、アスベルギルス属、ベニ
シリュウム属、モナスカス属、フザリウム属、ジベレラ
属、スポロトリカム属、ベルティシュリウム属、グリオ
クラジウム属、フィトフソラ属、シリドロカルポン属が
あげられる。
試験例 ２
スペルミジ ン０．０２５％、Ｋ２ＨＰ０４０．１５％
、ＫＨ２Ｐ０４０．１％、ＭｇＳ０４・７日２００．０
２％培地（殺菌前ｐＨ５．５）（以下スペルミジン培地
という）で試験例１と同様の方法により得られた菌体破
砕液のスペルミンオキシダーゼ活性及びスペルミジンオ
キシダーゼ活性を測定した。
、ＫＨ２Ｐ０４０．１％、ＭｇＳ０４・７日２００．０
２％培地（殺菌前ｐＨ５．５）（以下スペルミジン培地
という）で試験例１と同様の方法により得られた菌体破
砕液のスペルミンオキシダーゼ活性及びスペルミジンオ
キシダーゼ活性を測定した。
その結果を表２に示した。表 ２表２により明らかな如
くスペルミジン培地においてポリアミンオキシダーゼ類
を産生する菌としてはムコール属、リゾプス属、アスベ
ルギルス属、ベニシリュウム属、フザリュウム属、ジベ
ラ属、シリンドロカルポン属があげられる。
くスペルミジン培地においてポリアミンオキシダーゼ類
を産生する菌としてはムコール属、リゾプス属、アスベ
ルギルス属、ベニシリュウム属、フザリュウム属、ジベ
ラ属、シリンドロカルポン属があげられる。
試験例 ３
べニシリウム・クリソゲナムＩＦ０４６２６を一つのス
ペルミジン培地１００の‘づつで培養した。
ペルミジン培地１００の‘づつで培養した。
一方はそのまま７２時間培養し、他方は培養途中の１２
、２４、３６、４劉時間目ごとにスペルミジンを０．０
２５タづつ添加しながら７幼時間培養した。両培養によ
るポリアミンオキシダ−ゼＢ（実施例１参照）の生成の
タイムコースを第１図に示した。第１図でａはスペルミ
ジンを途中添加せず、ｂは途中添加したものを示してい
る。第１図から明らかなように培養途中でスペルミジン
を添加すると約４〜５倍もの活性増大が認められた。
、２４、３６、４劉時間目ごとにスペルミジンを０．０
２５タづつ添加しながら７幼時間培養した。両培養によ
るポリアミンオキシダ−ゼＢ（実施例１参照）の生成の
タイムコースを第１図に示した。第１図でａはスペルミ
ジンを途中添加せず、ｂは途中添加したものを示してい
る。第１図から明らかなように培養途中でスペルミジン
を添加すると約４〜５倍もの活性増大が認められた。
試験例 ４
後述の実施例２で得られたポリアミンオキシダーゼＡに
、各種アミン類を反応時２ｍＭになる様に添加し、それ
ぞれに対する酸化活性を最大活性を示した基質（スペル
ミジン）に対する相対値で測定した。
、各種アミン類を反応時２ｍＭになる様に添加し、それ
ぞれに対する酸化活性を最大活性を示した基質（スペル
ミジン）に対する相対値で測定した。
対照として牛血糠アミンオキシダーゼを用い同様に測定
した。その結果を表３に示した。表 ３ 試験例 ５ 後述の実施例２で得られたポリアミンオキシダーゼＡ、
実施例１で得られたポリアミンオキシダーゼＢ、及び対
照として牛皿酸アミンオキシダーゼを用い、これらの酵
素類に対する阻害剤と金属の影響をみるために各阻害剤
及び各金属を添加して、生ずる酵素活性の変化を相対値
で測定した。
した。その結果を表３に示した。表 ３ 試験例 ５ 後述の実施例２で得られたポリアミンオキシダーゼＡ、
実施例１で得られたポリアミンオキシダーゼＢ、及び対
照として牛皿酸アミンオキシダーゼを用い、これらの酵
素類に対する阻害剤と金属の影響をみるために各阻害剤
及び各金属を添加して、生ずる酵素活性の変化を相対値
で測定した。
その結果を表４に示した。表 ４
実施例 １
べニシリウム・クリソゲナムＩＦ０４６２６をスペルミ
ジン培地１００の‘づつを入れた５００Ｍ容坂口フラス
コ１８本に種培養液を接種し、２８００で７幼時間振盤
培養する。
ジン培地１００の‘づつを入れた５００Ｍ容坂口フラス
コ１８本に種培養液を接種し、２８００で７幼時間振盤
培養する。
ただし、培養途中、１２、２４、３０ ４糊時間目ごと
にスペルミジン０．０２５タづつ各フラスコに添加した
。培養後菌体を集めて、湿菌体約１９夕を得る。
にスペルミジン０．０２５タづつ各フラスコに添加した
。培養後菌体を集めて、湿菌体約１９夕を得る。
この菌体を０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）３８
肌に懸濁し海砂５．７夕を入れ水中１５分間磨砕しさら
に超音波処理を１粉ン間したのち冷凍遠Ｄ機にて遠０分
離（１２００仇ｐｍ、２び分）し上燈８０叫を得た。得
られた上燈を０．０１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で２
４時間透析する。この透析によりポリアミンオキシダー
ゼ活性区分は沈澱するが、この沈澱部分を１０％飽和硫
安溶液に熔解しさらに冷凍遠心機にて、遠心分離（１２
００仇ｐｍ、２０分）しその上燈液を精製酵素含有液と
して９５叫得た。この精製酵素含有液はポリアミンオキ
シダーゼＢを３６ｕ／の（含有していた。
肌に懸濁し海砂５．７夕を入れ水中１５分間磨砕しさら
に超音波処理を１粉ン間したのち冷凍遠Ｄ機にて遠０分
離（１２００仇ｐｍ、２び分）し上燈８０叫を得た。得
られた上燈を０．０１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）で２
４時間透析する。この透析によりポリアミンオキシダー
ゼ活性区分は沈澱するが、この沈澱部分を１０％飽和硫
安溶液に熔解しさらに冷凍遠心機にて、遠心分離（１２
００仇ｐｍ、２０分）しその上燈液を精製酵素含有液と
して９５叫得た。この精製酵素含有液はポリアミンオキ
シダーゼＢを３６ｕ／の（含有していた。
実施例 ２
アスベルギルス・テレウスＩＦ０６３４６をあらかじめ
グルコース０．１％を含むスペルミジン培地（殺菌前ｐ
Ｈ５．５）にて２８００４報時間種培養し、この１０の
【をスペルミジン培地１００肌‘を含む５００の【容坂
口フラスコ２５本に接種し、２８ｏｏで１狐寺間毎に４
細時間まで０．０２５タスベルミジンを添加しつつ７独
特間振糧培養後炉遇し水で洗濃し菌体９夕を得る。
グルコース０．１％を含むスペルミジン培地（殺菌前ｐ
Ｈ５．５）にて２８００４報時間種培養し、この１０の
【をスペルミジン培地１００肌‘を含む５００の【容坂
口フラスコ２５本に接種し、２８ｏｏで１狐寺間毎に４
細時間まで０．０２５タスベルミジンを添加しつつ７独
特間振糧培養後炉遇し水で洗濃し菌体９夕を得る。
この菌体を０．０１Ｍリン酸緩衝液（冊７．２）１８地
に懸濁し２．７タ海砂を加え水中１５分間磨砕しさらに
超音波処理を１粉ご間した後冷凍遠０機にて遠０分離（
１２００仇ｐｍ、２０分）し上澄４０の‘を得た。
に懸濁し２．７タ海砂を加え水中１５分間磨砕しさらに
超音波処理を１粉ご間した後冷凍遠０機にて遠０分離（
１２００仇ｐｍ、２０分）し上澄４０の‘を得た。
得られた上燈を０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）
で２４時間透析する。この透析酵素液４０の‘をあらか
じめ０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）で緩衝化し
たＤＥＡＥセルロースのカラムに流過してポリアミンオ
キシダーゼ活性を吸着させる。次いでカラムに０．０１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を流して不純物を除去し
た後０．０１Ｍ〜０．８Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）
の直線濃度勾配法によりポリアミンオキシダーゼ活性含
有溶雛液として９５の‘を得る。この精製酵素含有液は
ポリアミンオキシダーゼＡを３触れ【含有していた。
で２４時間透析する。この透析酵素液４０の‘をあらか
じめ０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）で緩衝化し
たＤＥＡＥセルロースのカラムに流過してポリアミンオ
キシダーゼ活性を吸着させる。次いでカラムに０．０１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を流して不純物を除去し
た後０．０１Ｍ〜０．８Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）
の直線濃度勾配法によりポリアミンオキシダーゼ活性含
有溶雛液として９５の‘を得る。この精製酵素含有液は
ポリアミンオキシダーゼＡを３触れ【含有していた。
第１図は試験例３における培養比較実験を示す図で、ａ
は途中添加ないし、ｂは途中添加したものを示している
。 第１図
は途中添加ないし、ｂは途中添加したものを示している
。 第１図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ムコール属、リゾープス属、アブシデイア属、アス
ペルギルス属、ペニシリウム属、モナスカス属、フザリ
ウム属、ジベレラ属、スポロトリカム属、ベルテイシリ
ウム属、グリオラジウム属、フイトフソラ属、シリンド
カプロン属に属するポリアミンオキシダーゼ類生産菌を
培養し、培養物よりポリアミンオキシダーゼ類を採取す
ることを特徴とするポリアミンオキシダーゼ類の製造法
。 ２ 培養培地にスペルミンおよび／又はスペルミジンが
添加されることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
のポリアミンオキシダーゼ類の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54001035A JPS6031473B2 (ja) | 1979-01-11 | 1979-01-11 | 微生物によるポリアミンオキシダ−ゼ類の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54001035A JPS6031473B2 (ja) | 1979-01-11 | 1979-01-11 | 微生物によるポリアミンオキシダ−ゼ類の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5596093A JPS5596093A (en) | 1980-07-21 |
| JPS6031473B2 true JPS6031473B2 (ja) | 1985-07-22 |
Family
ID=11490302
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP54001035A Expired JPS6031473B2 (ja) | 1979-01-11 | 1979-01-11 | 微生物によるポリアミンオキシダ−ゼ類の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6031473B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6013665B2 (ja) * | 1979-12-24 | 1985-04-09 | 天野製薬株式会社 | 微生物ポリアミンオキシダ−ゼａｔ−１ |
| CN105621625B (zh) * | 2014-10-28 | 2018-03-16 | 中国石油化工股份有限公司 | 一种亚硝酸细菌生长促进剂及其制备方法 |
| JP6506232B2 (ja) | 2016-10-04 | 2019-04-24 | ファナック株式会社 | モータ制御装置、モータ制御方法、及びモータ制御プログラム |
-
1979
- 1979-01-11 JP JP54001035A patent/JPS6031473B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5596093A (en) | 1980-07-21 |
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