JPS6022296B2 - 麻疹ウイルス凝集反応用赤血球 - Google Patents
麻疹ウイルス凝集反応用赤血球Info
- Publication number
- JPS6022296B2 JPS6022296B2 JP7407677A JP7407677A JPS6022296B2 JP S6022296 B2 JPS6022296 B2 JP S6022296B2 JP 7407677 A JP7407677 A JP 7407677A JP 7407677 A JP7407677 A JP 7407677A JP S6022296 B2 JPS6022296 B2 JP S6022296B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- blood cells
- red blood
- measles virus
- monkey
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は麻疹ウイルス凝集反応用の赤血球に関する。
麻疹ウイルスの日１（赤血球凝集反応抑制）試験は中和
試験や補体結合試験に比べて簡単で再現性が良いため、
麻疹の血清学的診断に非常に有用な手段となっている。
試験や補体結合試験に比べて簡単で再現性が良いため、
麻疹の血清学的診断に非常に有用な手段となっている。
特に麻疹ワクチン接種後の幼児の血清学的診断には欠か
せない試験法である。しかしながら麻疹ウイルス特異Ｈ
Ａ抗原は各種サルの赤血球のみを凝集させ、一般によく
用いられているヒツジや鳥類の赤血球に対しては全く凝
集性を有していない。
せない試験法である。しかしながら麻疹ウイルス特異Ｈ
Ａ抗原は各種サルの赤血球のみを凝集させ、一般によく
用いられているヒツジや鳥類の赤血球に対しては全く凝
集性を有していない。
したがって凝集反応用赤血球としては各種のサル赤血球
のみが用いられるが、感度の良いことからアフリカミド
リザルが一般に推奨されている。かかるサル赤血球はサ
ルの飼育に多大の労力と時間とを要すること、また採血
の困難さのため高価であり、したがって麻疹ウイルスの
ＨＡ試験やＨＩ試験を実際に行う病院・診療所・研究所
などにおける日常の臨床検査での使用に大きな限界があ
った。一方、この隣路を克服するため、これらのサル赤
血球をホルムアルデヒドにより安定化しようという種々
の試みが報告されているが、麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原
に対する血球のレセプターがホルムアルデヒドにより容
易に破壊されるため、いずれも成功していない。本発明
は、かかる技術的背景のもとに、長期間保存しても被凝
集性の低下しない安定化された麻疹ウイルス凝集反応用
のサル赤血球を提供するものである。すなわち、本発明
は、麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原により凝集されうるサル
の赤血球を約０．００３〜０．０４％（重量／容量パー
セント：以下同様）の濃度の炭素数４以上の低級脂肪族
ジアルデヒドで固定処理した麻疹ウイルス凝集反応用赤
血球である。
のみが用いられるが、感度の良いことからアフリカミド
リザルが一般に推奨されている。かかるサル赤血球はサ
ルの飼育に多大の労力と時間とを要すること、また採血
の困難さのため高価であり、したがって麻疹ウイルスの
ＨＡ試験やＨＩ試験を実際に行う病院・診療所・研究所
などにおける日常の臨床検査での使用に大きな限界があ
った。一方、この隣路を克服するため、これらのサル赤
血球をホルムアルデヒドにより安定化しようという種々
の試みが報告されているが、麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原
に対する血球のレセプターがホルムアルデヒドにより容
易に破壊されるため、いずれも成功していない。本発明
は、かかる技術的背景のもとに、長期間保存しても被凝
集性の低下しない安定化された麻疹ウイルス凝集反応用
のサル赤血球を提供するものである。すなわち、本発明
は、麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原により凝集されうるサル
の赤血球を約０．００３〜０．０４％（重量／容量パー
セント：以下同様）の濃度の炭素数４以上の低級脂肪族
ジアルデヒドで固定処理した麻疹ウイルス凝集反応用赤
血球である。
本発明においては、麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原により凝
集されうるサル料動物赤血球のいずれを用いてもよい。
集されうるサル料動物赤血球のいずれを用いてもよい。
このようなサルの代表例としては、たとえばアフリカミ
ドリザル、アカゲザル、カニクイザルなどが挙げられる
。炭素数４種以上の低級脂肪族ジアルデヒドとしては、
たとえばグルタルジアルデヒド、スクシンジアルデヒド
、アジピンジアルデヒドなどが挙げられとりわけ炭素数
４〜６のものが好ましく、グルタルジアルデヒドが最も
好都合に使用される。
ドリザル、アカゲザル、カニクイザルなどが挙げられる
。炭素数４種以上の低級脂肪族ジアルデヒドとしては、
たとえばグルタルジアルデヒド、スクシンジアルデヒド
、アジピンジアルデヒドなどが挙げられとりわけ炭素数
４〜６のものが好ましく、グルタルジアルデヒドが最も
好都合に使用される。
本発明においては、かかる低級脂肪族ジアルデヒドを約
０．００３〜０．０４％の低濃度で含有する水性溶液を
用いて上記したサル赤血球が固定処理される。この水性
溶液の媒体としては、赤血球とほぼ等張の塩濃度を有す
る水性媒体たとえば生理食塩水やリン酸緩衝液などを用
いるのが好ましい。固定処理は、一般にかかる低級脂肪
族ジアルデヒド水性溶液にサルの赤血球を懸濁して静直
することにより行なわれ、通常約２〜４０ｑｏとりわけ
約２０〜２５ｑ０の温度で行なうのがよい。このように
して固定処理したサルの赤血球は、麻疹ウイルス特異Ｈ
Ａ抗原に対する十分な被凝集性を有し、かつ安定である
。
０．００３〜０．０４％の低濃度で含有する水性溶液を
用いて上記したサル赤血球が固定処理される。この水性
溶液の媒体としては、赤血球とほぼ等張の塩濃度を有す
る水性媒体たとえば生理食塩水やリン酸緩衝液などを用
いるのが好ましい。固定処理は、一般にかかる低級脂肪
族ジアルデヒド水性溶液にサルの赤血球を懸濁して静直
することにより行なわれ、通常約２〜４０ｑｏとりわけ
約２０〜２５ｑ０の温度で行なうのがよい。このように
して固定処理したサルの赤血球は、麻疹ウイルス特異Ｈ
Ａ抗原に対する十分な被凝集性を有し、かつ安定である
。
これが本発明の凝集反応用赤血球の最も本質的な特徴を
構成するものである。すなわち、ホルムアルデヒドーこ
よる固定処理や通常の０．５〜２％濃度の低級脂肪族ジ
アルデヒドーこよる固定処理では血球に安定性を付与す
ることはできるが、同時に麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原に
対する被凝集性が著しく損われる。これに対して約０．
００３〜０．０４％というきわめて低濃度の低級脂肪族
ジアルデヒドで固定化した本発明の麻疹ウイルス凝集反
応用の赤血球は、安定化されかつ麻疹ウイルス特異ＨＡ
抗原に対する被凝集能力が実質的に低下していない。な
お、約０．００３％未満の低級脂肪族ジアルデヒド濃度
では実質的にサル赤血球が固定化されない。かくして得
られる本発明の凝集反応用赤血球はきわめて安定であり
、後記実験例からも明らかなように長期間保存しても新
鮮赤血球と同程度の被凝集能力を持続する。
構成するものである。すなわち、ホルムアルデヒドーこ
よる固定処理や通常の０．５〜２％濃度の低級脂肪族ジ
アルデヒドーこよる固定処理では血球に安定性を付与す
ることはできるが、同時に麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原に
対する被凝集性が著しく損われる。これに対して約０．
００３〜０．０４％というきわめて低濃度の低級脂肪族
ジアルデヒドで固定化した本発明の麻疹ウイルス凝集反
応用の赤血球は、安定化されかつ麻疹ウイルス特異ＨＡ
抗原に対する被凝集能力が実質的に低下していない。な
お、約０．００３％未満の低級脂肪族ジアルデヒド濃度
では実質的にサル赤血球が固定化されない。かくして得
られる本発明の凝集反応用赤血球はきわめて安定であり
、後記実験例からも明らかなように長期間保存しても新
鮮赤血球と同程度の被凝集能力を持続する。
本発明の安定化赤血球は、たとえば約０〜１００Ｃの氷
室内で０．０５％のＮａＮ３を含むリン酸緩衝液に懸濁
して保存するか、あるいは乳糖もしくは熊糖の水性溶液
で洗浄後、凍結乾燥して保存するのが好ましい。また使
用に際しては単にこれらをＨＡ抗原用希釈液で希釈する
か再浮遊するかしたのち、新鮮赤血球と全く同様に使用
できる。以下に本発明を実施例ならびに実験例によりさ
らに具体的に説明するが、これらが本発明の範囲を制限
するものでないことはいうまでもない。
室内で０．０５％のＮａＮ３を含むリン酸緩衝液に懸濁
して保存するか、あるいは乳糖もしくは熊糖の水性溶液
で洗浄後、凍結乾燥して保存するのが好ましい。また使
用に際しては単にこれらをＨＡ抗原用希釈液で希釈する
か再浮遊するかしたのち、新鮮赤血球と全く同様に使用
できる。以下に本発明を実施例ならびに実験例によりさ
らに具体的に説明するが、これらが本発明の範囲を制限
するものでないことはいうまでもない。
実施例 １アフリカミドリザルの大腿部静脈から採血し
た赤血球に等量の山ｓｅｖｅｒ液（※１）を添加したの
ち、（−）Ｐ斑（※２）で３度洗浄し１％血球浮遊液を
調製する。
た赤血球に等量の山ｓｅｖｅｒ液（※１）を添加したの
ち、（−）Ｐ斑（※２）で３度洗浄し１％血球浮遊液を
調製する。
この血球浮遊液に１／１蟹容量の０．１１％のグルタル
ジァルデヒドの（−）Ｐ斑溶液をゆっくり鷹拝しながら
加えて最終濃度０．０１％となし、２０℃で１時間静瞳
して固定処理したのち（−）Ｐ斑で６度洗浄し遊離のグ
ルタルジアルデヒドを除去する。次いで１０％血球濃度
になるように０．０５％のＮａＮ３を含む（一）ＰＢＳ
に懸濁する。（※１） ＡＩｓｅｖｅｒ液の組成は下記
のとうりである。
ジァルデヒドの（−）Ｐ斑溶液をゆっくり鷹拝しながら
加えて最終濃度０．０１％となし、２０℃で１時間静瞳
して固定処理したのち（−）Ｐ斑で６度洗浄し遊離のグ
ルタルジアルデヒドを除去する。次いで１０％血球濃度
になるように０．０５％のＮａＮ３を含む（一）ＰＢＳ
に懸濁する。（※１） ＡＩｓｅｖｅｒ液の組成は下記
のとうりである。
ブドウ糖 ２０．５夕クエ
ン酸ナトリウム ８タクェン酸
０．５５夕ＮａＣ１
４．２夕蒸留水で全量１
０００の‘とする。
ン酸ナトリウム ８タクェン酸
０．５５夕ＮａＣ１
４．２夕蒸留水で全量１
０００の‘とする。
（※２）（一）Ｐ斑の組成は下記のとうりである。
ＮａＣ１ ８０
夕ＫＣ１ ２
夕ＫＨ２Ｐ０４ ２
夕Ｎａ２ＨＰ０４・２日２０
１４．４タ蒸留水で全量ｌｏｏ０泌とする。
夕ＫＣ１ ２
夕ＫＨ２Ｐ０４ ２
夕Ｎａ２ＨＰ０４・２日２０
１４．４タ蒸留水で全量ｌｏｏ０泌とする。
実施例 ２
実施例１で得たグルタルジアルデヒド処理赤血球を５％
乳糖水性溶液で洗浄したのち、１０％濃度になるように
同じ５％乳糖水性溶液に懸濁し凍結乾燥アンプルに１泌
づっ分注する。
乳糖水性溶液で洗浄したのち、１０％濃度になるように
同じ５％乳糖水性溶液に懸濁し凍結乾燥アンプルに１泌
づっ分注する。
このアンプルをドライアイスとァセトンの混合物で予備
凍結したのち真空乾燥器にとりつけ約一２０ｑｏで凍結
乾燥する。実施例 ３ 実施例２で使用した５％乳糖水性溶液の代りに５％鳶糖
水性溶液を用い、全く同様に処理して凍結乾燥赤血球を
調製した。
凍結したのち真空乾燥器にとりつけ約一２０ｑｏで凍結
乾燥する。実施例 ３ 実施例２で使用した５％乳糖水性溶液の代りに５％鳶糖
水性溶液を用い、全く同様に処理して凍結乾燥赤血球を
調製した。
実施例 ４
アカゲザル赤血球、カニクイザル赤血球を実施例１およ
び２と全く同様に処理してそれぞれの安定赤血球を調製
した。
び２と全く同様に処理してそれぞれの安定赤血球を調製
した。
実施例 ５
実施例１において０．０１％のグルタルジアルデヒドの
代りに０．０２５％のスクシンジアルデヒドを用い全く
同様に固定処理して安定化赤血球を調製した。
代りに０．０２５％のスクシンジアルデヒドを用い全く
同様に固定処理して安定化赤血球を調製した。
実施例 ６
実施例１において０．０１％のグルタルジアルデヒドの
代りに０．０３％のアジピンジアルデヒドを用い全く同
様に固定処理して安定化赤血球を調製した。
代りに０．０３％のアジピンジアルデヒドを用い全く同
様に固定処理して安定化赤血球を調製した。
実験例 １
無処理赤血球、グルタルジアルデヒド処理赤血球および
ホルムアルデヒド処理赤血球の麻疹ウイルスＨＡ反応に
おける感度および安定性の比較。
ホルムアルデヒド処理赤血球の麻疹ウイルスＨＡ反応に
おける感度および安定性の比較。
実施例１と同様にして採血したアフリカミドリザル赤血
球につき下記の〜肋の処理を行い、麻疹ウイルスＨＡ試
験に供した。け 無処理赤血球 採血後、（一）ＰＢＳで３度洗浄し、（一）ＰＢＳで１
０％浮遊液とした赤血球。
球につき下記の〜肋の処理を行い、麻疹ウイルスＨＡ試
験に供した。け 無処理赤血球 採血後、（一）ＰＢＳで３度洗浄し、（一）ＰＢＳで１
０％浮遊液とした赤血球。
川 グルタルジアルデヒド処理赤血球
採血後（一）ＰＢＳで３度洗浄して（一）ＰＢＳに懸濁
させた１％血球浮遊液に、最終濃度が第１表記教の濃度
になるように１／１咳容量の種々の濃度のグルタルジァ
ルデヒドの（‐）Ｐ母溶液をゆっくり燭拝しながら加え
、第１表記教の条件で固定処理したのち（‐）Ｐ斑で６
度洗浄して遊離のグルタルジアルデヒドを除去する。
させた１％血球浮遊液に、最終濃度が第１表記教の濃度
になるように１／１咳容量の種々の濃度のグルタルジァ
ルデヒドの（‐）Ｐ母溶液をゆっくり燭拝しながら加え
、第１表記教の条件で固定処理したのち（‐）Ｐ斑で６
度洗浄して遊離のグルタルジアルデヒドを除去する。
次いで１０％血球濃度になるように０．０５％のＮａＮ
３を含む（−）Ｐ既に懸濁する。【ゥ’ホルムアルデヒ
ド処理赤血球 採血後（一）ＰＢＳで３度洗浄して（一）ＰＢＳに懸濁
させた１％血球浮遊液に、最終濃度が第１表記戦の濃度
になるように１／１鉾容量の種々の濃度のホルムァルデ
ヒドの（−）Ｐ聡溶液を徐々に添加し第１表記教の条件
で固定処理したのち、（一）ＰＢＳで６度洗浄して遊離
のホルムアルデヒドを除去する。
３を含む（−）Ｐ既に懸濁する。【ゥ’ホルムアルデヒ
ド処理赤血球 採血後（一）ＰＢＳで３度洗浄して（一）ＰＢＳに懸濁
させた１％血球浮遊液に、最終濃度が第１表記戦の濃度
になるように１／１鉾容量の種々の濃度のホルムァルデ
ヒドの（−）Ｐ聡溶液を徐々に添加し第１表記教の条件
で固定処理したのち、（一）ＰＢＳで６度洗浄して遊離
のホルムアルデヒドを除去する。
ついで１０％血球濃度になるように０．０５％のＮａＮ
３を含む（一）ＰＢＳに懸濁する。上記の赤血球を用い
パーマネントＶ型プレート上でＳｅｖｅｒのマイクロタ
イマー法（‘‘Ｊｏｕｍａｌｏｆｌｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
’’第斑巻（１９６２）第３２０〜３２７頁参照）によ
り、麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原のＨＡ価を測定した。
３を含む（一）ＰＢＳに懸濁する。上記の赤血球を用い
パーマネントＶ型プレート上でＳｅｖｅｒのマイクロタ
イマー法（‘‘Ｊｏｕｍａｌｏｆｌｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
’’第斑巻（１９６２）第３２０〜３２７頁参照）によ
り、麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原のＨＡ価を測定した。
結果は第１表に示すとうりであった。
第 １ 表
※ 赤血球を蒸留水に懸濁したときの溶血反応を観察し
た。
た。
十：溶血反応陽性（安定化されているい）。一：溶血反
応陰性（安定化されている）。実験例 ２ 実施例２および４によって得られた各種サルの凍結乾燥
した安定化赤血球を氷室内で保存したのち蒸留水で再浮
遊せしめた赤血球について実験例１に準じて麻疹ウイル
スＨＩ反応における感度を新鮮赤血球と比較した。
応陰性（安定化されている）。実験例 ２ 実施例２および４によって得られた各種サルの凍結乾燥
した安定化赤血球を氷室内で保存したのち蒸留水で再浮
遊せしめた赤血球について実験例１に準じて麻疹ウイル
スＨＩ反応における感度を新鮮赤血球と比較した。
結果は第２表に示すとうりであった。
第２表
Claims (1)
- １ 麻疹ウイルス特異ＨＡ抗原により凝集されうるサル
の赤血球を約０．００３〜０．０４％（重量／容量パー
セント）の濃度の炭素数４以上の低級脂肪族ジアルデヒ
ドで固定処理した麻疹ウイルス凝集反応用赤血球。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7407677A JPS6022296B2 (ja) | 1977-06-21 | 1977-06-21 | 麻疹ウイルス凝集反応用赤血球 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7407677A JPS6022296B2 (ja) | 1977-06-21 | 1977-06-21 | 麻疹ウイルス凝集反応用赤血球 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS548716A JPS548716A (en) | 1979-01-23 |
| JPS6022296B2 true JPS6022296B2 (ja) | 1985-06-01 |
Family
ID=13536711
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7407677A Expired JPS6022296B2 (ja) | 1977-06-21 | 1977-06-21 | 麻疹ウイルス凝集反応用赤血球 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6022296B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5821436A (ja) * | 1981-07-31 | 1983-02-08 | Toyo Tire & Rubber Co Ltd | 大型タイヤトレツド組成物 |
| JPS5843807A (ja) * | 1981-09-11 | 1983-03-14 | Toyo Tire & Rubber Co Ltd | 耐サイドカツト性にすぐれた大型タイヤ |
| JPS58168611A (ja) * | 1982-03-30 | 1983-10-05 | Sumitomo Chem Co Ltd | 分岐重合体及びその製造方法 |
| JPH06865B2 (ja) * | 1984-12-07 | 1994-01-05 | 住友化学工業株式会社 | ジエン系エラストマ−組成物 |
| JPH06103311B2 (ja) * | 1985-08-23 | 1994-12-14 | 株式会社日立製作所 | 多項目自動分析装置 |
| JPH01233298A (ja) * | 1988-03-11 | 1989-09-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | 抗体、その製造法、ｈｍｌｃを測定するための試薬、ならびにモノクローナル抗体 |
-
1977
- 1977-06-21 JP JP7407677A patent/JPS6022296B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS548716A (en) | 1979-01-23 |
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