JPS6022296B2 - 麻疹ウイルス凝集反応用赤血球 - Google Patents
麻疹ウイルス凝集反応用赤血球Info
- Publication number
- JPS6022296B2 JPS6022296B2 JP7407677A JP7407677A JPS6022296B2 JP S6022296 B2 JPS6022296 B2 JP S6022296B2 JP 7407677 A JP7407677 A JP 7407677A JP 7407677 A JP7407677 A JP 7407677A JP S6022296 B2 JPS6022296 B2 JP S6022296B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- blood cells
- red blood
- measles virus
- monkey
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は麻疹ウイルス凝集反応用の赤血球に関する。
麻疹ウイルスの日1(赤血球凝集反応抑制)試験は中和
試験や補体結合試験に比べて簡単で再現性が良いため、
麻疹の血清学的診断に非常に有用な手段となっている。
試験や補体結合試験に比べて簡単で再現性が良いため、
麻疹の血清学的診断に非常に有用な手段となっている。
特に麻疹ワクチン接種後の幼児の血清学的診断には欠か
せない試験法である。しかしながら麻疹ウイルス特異H
A抗原は各種サルの赤血球のみを凝集させ、一般によく
用いられているヒツジや鳥類の赤血球に対しては全く凝
集性を有していない。
せない試験法である。しかしながら麻疹ウイルス特異H
A抗原は各種サルの赤血球のみを凝集させ、一般によく
用いられているヒツジや鳥類の赤血球に対しては全く凝
集性を有していない。
したがって凝集反応用赤血球としては各種のサル赤血球
のみが用いられるが、感度の良いことからアフリカミド
リザルが一般に推奨されている。かかるサル赤血球はサ
ルの飼育に多大の労力と時間とを要すること、また採血
の困難さのため高価であり、したがって麻疹ウイルスの
HA試験やHI試験を実際に行う病院・診療所・研究所
などにおける日常の臨床検査での使用に大きな限界があ
った。一方、この隣路を克服するため、これらのサル赤
血球をホルムアルデヒドにより安定化しようという種々
の試みが報告されているが、麻疹ウイルス特異HA抗原
に対する血球のレセプターがホルムアルデヒドにより容
易に破壊されるため、いずれも成功していない。本発明
は、かかる技術的背景のもとに、長期間保存しても被凝
集性の低下しない安定化された麻疹ウイルス凝集反応用
のサル赤血球を提供するものである。すなわち、本発明
は、麻疹ウイルス特異HA抗原により凝集されうるサル
の赤血球を約0.003〜0.04%(重量/容量パー
セント:以下同様)の濃度の炭素数4以上の低級脂肪族
ジアルデヒドで固定処理した麻疹ウイルス凝集反応用赤
血球である。
のみが用いられるが、感度の良いことからアフリカミド
リザルが一般に推奨されている。かかるサル赤血球はサ
ルの飼育に多大の労力と時間とを要すること、また採血
の困難さのため高価であり、したがって麻疹ウイルスの
HA試験やHI試験を実際に行う病院・診療所・研究所
などにおける日常の臨床検査での使用に大きな限界があ
った。一方、この隣路を克服するため、これらのサル赤
血球をホルムアルデヒドにより安定化しようという種々
の試みが報告されているが、麻疹ウイルス特異HA抗原
に対する血球のレセプターがホルムアルデヒドにより容
易に破壊されるため、いずれも成功していない。本発明
は、かかる技術的背景のもとに、長期間保存しても被凝
集性の低下しない安定化された麻疹ウイルス凝集反応用
のサル赤血球を提供するものである。すなわち、本発明
は、麻疹ウイルス特異HA抗原により凝集されうるサル
の赤血球を約0.003〜0.04%(重量/容量パー
セント:以下同様)の濃度の炭素数4以上の低級脂肪族
ジアルデヒドで固定処理した麻疹ウイルス凝集反応用赤
血球である。
本発明においては、麻疹ウイルス特異HA抗原により凝
集されうるサル料動物赤血球のいずれを用いてもよい。
集されうるサル料動物赤血球のいずれを用いてもよい。
このようなサルの代表例としては、たとえばアフリカミ
ドリザル、アカゲザル、カニクイザルなどが挙げられる
。炭素数4種以上の低級脂肪族ジアルデヒドとしては、
たとえばグルタルジアルデヒド、スクシンジアルデヒド
、アジピンジアルデヒドなどが挙げられとりわけ炭素数
4〜6のものが好ましく、グルタルジアルデヒドが最も
好都合に使用される。
ドリザル、アカゲザル、カニクイザルなどが挙げられる
。炭素数4種以上の低級脂肪族ジアルデヒドとしては、
たとえばグルタルジアルデヒド、スクシンジアルデヒド
、アジピンジアルデヒドなどが挙げられとりわけ炭素数
4〜6のものが好ましく、グルタルジアルデヒドが最も
好都合に使用される。
本発明においては、かかる低級脂肪族ジアルデヒドを約
0.003〜0.04%の低濃度で含有する水性溶液を
用いて上記したサル赤血球が固定処理される。この水性
溶液の媒体としては、赤血球とほぼ等張の塩濃度を有す
る水性媒体たとえば生理食塩水やリン酸緩衝液などを用
いるのが好ましい。固定処理は、一般にかかる低級脂肪
族ジアルデヒド水性溶液にサルの赤血球を懸濁して静直
することにより行なわれ、通常約2〜40qoとりわけ
約20〜25q0の温度で行なうのがよい。このように
して固定処理したサルの赤血球は、麻疹ウイルス特異H
A抗原に対する十分な被凝集性を有し、かつ安定である
。
0.003〜0.04%の低濃度で含有する水性溶液を
用いて上記したサル赤血球が固定処理される。この水性
溶液の媒体としては、赤血球とほぼ等張の塩濃度を有す
る水性媒体たとえば生理食塩水やリン酸緩衝液などを用
いるのが好ましい。固定処理は、一般にかかる低級脂肪
族ジアルデヒド水性溶液にサルの赤血球を懸濁して静直
することにより行なわれ、通常約2〜40qoとりわけ
約20〜25q0の温度で行なうのがよい。このように
して固定処理したサルの赤血球は、麻疹ウイルス特異H
A抗原に対する十分な被凝集性を有し、かつ安定である
。
これが本発明の凝集反応用赤血球の最も本質的な特徴を
構成するものである。すなわち、ホルムアルデヒドーこ
よる固定処理や通常の0.5〜2%濃度の低級脂肪族ジ
アルデヒドーこよる固定処理では血球に安定性を付与す
ることはできるが、同時に麻疹ウイルス特異HA抗原に
対する被凝集性が著しく損われる。これに対して約0.
003〜0.04%というきわめて低濃度の低級脂肪族
ジアルデヒドで固定化した本発明の麻疹ウイルス凝集反
応用の赤血球は、安定化されかつ麻疹ウイルス特異HA
抗原に対する被凝集能力が実質的に低下していない。な
お、約0.003%未満の低級脂肪族ジアルデヒド濃度
では実質的にサル赤血球が固定化されない。かくして得
られる本発明の凝集反応用赤血球はきわめて安定であり
、後記実験例からも明らかなように長期間保存しても新
鮮赤血球と同程度の被凝集能力を持続する。
構成するものである。すなわち、ホルムアルデヒドーこ
よる固定処理や通常の0.5〜2%濃度の低級脂肪族ジ
アルデヒドーこよる固定処理では血球に安定性を付与す
ることはできるが、同時に麻疹ウイルス特異HA抗原に
対する被凝集性が著しく損われる。これに対して約0.
003〜0.04%というきわめて低濃度の低級脂肪族
ジアルデヒドで固定化した本発明の麻疹ウイルス凝集反
応用の赤血球は、安定化されかつ麻疹ウイルス特異HA
抗原に対する被凝集能力が実質的に低下していない。な
お、約0.003%未満の低級脂肪族ジアルデヒド濃度
では実質的にサル赤血球が固定化されない。かくして得
られる本発明の凝集反応用赤血球はきわめて安定であり
、後記実験例からも明らかなように長期間保存しても新
鮮赤血球と同程度の被凝集能力を持続する。
本発明の安定化赤血球は、たとえば約0〜100Cの氷
室内で0.05%のNaN3を含むリン酸緩衝液に懸濁
して保存するか、あるいは乳糖もしくは熊糖の水性溶液
で洗浄後、凍結乾燥して保存するのが好ましい。また使
用に際しては単にこれらをHA抗原用希釈液で希釈する
か再浮遊するかしたのち、新鮮赤血球と全く同様に使用
できる。以下に本発明を実施例ならびに実験例によりさ
らに具体的に説明するが、これらが本発明の範囲を制限
するものでないことはいうまでもない。
室内で0.05%のNaN3を含むリン酸緩衝液に懸濁
して保存するか、あるいは乳糖もしくは熊糖の水性溶液
で洗浄後、凍結乾燥して保存するのが好ましい。また使
用に際しては単にこれらをHA抗原用希釈液で希釈する
か再浮遊するかしたのち、新鮮赤血球と全く同様に使用
できる。以下に本発明を実施例ならびに実験例によりさ
らに具体的に説明するが、これらが本発明の範囲を制限
するものでないことはいうまでもない。
実施例 1アフリカミドリザルの大腿部静脈から採血し
た赤血球に等量の山sever液(※1)を添加したの
ち、(−)P斑(※2)で3度洗浄し1%血球浮遊液を
調製する。
た赤血球に等量の山sever液(※1)を添加したの
ち、(−)P斑(※2)で3度洗浄し1%血球浮遊液を
調製する。
この血球浮遊液に1/1蟹容量の0.11%のグルタル
ジァルデヒドの(−)P斑溶液をゆっくり鷹拝しながら
加えて最終濃度0.01%となし、20℃で1時間静瞳
して固定処理したのち(−)P斑で6度洗浄し遊離のグ
ルタルジアルデヒドを除去する。次いで10%血球濃度
になるように0.05%のNaN3を含む(一)PBS
に懸濁する。(※1) AIsever液の組成は下記
のとうりである。
ジァルデヒドの(−)P斑溶液をゆっくり鷹拝しながら
加えて最終濃度0.01%となし、20℃で1時間静瞳
して固定処理したのち(−)P斑で6度洗浄し遊離のグ
ルタルジアルデヒドを除去する。次いで10%血球濃度
になるように0.05%のNaN3を含む(一)PBS
に懸濁する。(※1) AIsever液の組成は下記
のとうりである。
ブドウ糖 20.5夕クエ
ン酸ナトリウム 8タクェン酸
0.55夕NaC1
4.2夕蒸留水で全量1
000の‘とする。
ン酸ナトリウム 8タクェン酸
0.55夕NaC1
4.2夕蒸留水で全量1
000の‘とする。
(※2)(一)P斑の組成は下記のとうりである。
NaC1 80
夕KC1 2
夕KH2P04 2
夕Na2HP04・2日20
14.4タ蒸留水で全量loo0泌とする。
夕KC1 2
夕KH2P04 2
夕Na2HP04・2日20
14.4タ蒸留水で全量loo0泌とする。
実施例 2
実施例1で得たグルタルジアルデヒド処理赤血球を5%
乳糖水性溶液で洗浄したのち、10%濃度になるように
同じ5%乳糖水性溶液に懸濁し凍結乾燥アンプルに1泌
づっ分注する。
乳糖水性溶液で洗浄したのち、10%濃度になるように
同じ5%乳糖水性溶液に懸濁し凍結乾燥アンプルに1泌
づっ分注する。
このアンプルをドライアイスとァセトンの混合物で予備
凍結したのち真空乾燥器にとりつけ約一20qoで凍結
乾燥する。実施例 3 実施例2で使用した5%乳糖水性溶液の代りに5%鳶糖
水性溶液を用い、全く同様に処理して凍結乾燥赤血球を
調製した。
凍結したのち真空乾燥器にとりつけ約一20qoで凍結
乾燥する。実施例 3 実施例2で使用した5%乳糖水性溶液の代りに5%鳶糖
水性溶液を用い、全く同様に処理して凍結乾燥赤血球を
調製した。
実施例 4
アカゲザル赤血球、カニクイザル赤血球を実施例1およ
び2と全く同様に処理してそれぞれの安定赤血球を調製
した。
び2と全く同様に処理してそれぞれの安定赤血球を調製
した。
実施例 5
実施例1において0.01%のグルタルジアルデヒドの
代りに0.025%のスクシンジアルデヒドを用い全く
同様に固定処理して安定化赤血球を調製した。
代りに0.025%のスクシンジアルデヒドを用い全く
同様に固定処理して安定化赤血球を調製した。
実施例 6
実施例1において0.01%のグルタルジアルデヒドの
代りに0.03%のアジピンジアルデヒドを用い全く同
様に固定処理して安定化赤血球を調製した。
代りに0.03%のアジピンジアルデヒドを用い全く同
様に固定処理して安定化赤血球を調製した。
実験例 1
無処理赤血球、グルタルジアルデヒド処理赤血球および
ホルムアルデヒド処理赤血球の麻疹ウイルスHA反応に
おける感度および安定性の比較。
ホルムアルデヒド処理赤血球の麻疹ウイルスHA反応に
おける感度および安定性の比較。
実施例1と同様にして採血したアフリカミドリザル赤血
球につき下記の〜肋の処理を行い、麻疹ウイルスHA試
験に供した。け 無処理赤血球 採血後、(一)PBSで3度洗浄し、(一)PBSで1
0%浮遊液とした赤血球。
球につき下記の〜肋の処理を行い、麻疹ウイルスHA試
験に供した。け 無処理赤血球 採血後、(一)PBSで3度洗浄し、(一)PBSで1
0%浮遊液とした赤血球。
川 グルタルジアルデヒド処理赤血球
採血後(一)PBSで3度洗浄して(一)PBSに懸濁
させた1%血球浮遊液に、最終濃度が第1表記教の濃度
になるように1/1咳容量の種々の濃度のグルタルジァ
ルデヒドの(‐)P母溶液をゆっくり燭拝しながら加え
、第1表記教の条件で固定処理したのち(‐)P斑で6
度洗浄して遊離のグルタルジアルデヒドを除去する。
させた1%血球浮遊液に、最終濃度が第1表記教の濃度
になるように1/1咳容量の種々の濃度のグルタルジァ
ルデヒドの(‐)P母溶液をゆっくり燭拝しながら加え
、第1表記教の条件で固定処理したのち(‐)P斑で6
度洗浄して遊離のグルタルジアルデヒドを除去する。
次いで10%血球濃度になるように0.05%のNaN
3を含む(−)P既に懸濁する。【ゥ’ホルムアルデヒ
ド処理赤血球 採血後(一)PBSで3度洗浄して(一)PBSに懸濁
させた1%血球浮遊液に、最終濃度が第1表記戦の濃度
になるように1/1鉾容量の種々の濃度のホルムァルデ
ヒドの(−)P聡溶液を徐々に添加し第1表記教の条件
で固定処理したのち、(一)PBSで6度洗浄して遊離
のホルムアルデヒドを除去する。
3を含む(−)P既に懸濁する。【ゥ’ホルムアルデヒ
ド処理赤血球 採血後(一)PBSで3度洗浄して(一)PBSに懸濁
させた1%血球浮遊液に、最終濃度が第1表記戦の濃度
になるように1/1鉾容量の種々の濃度のホルムァルデ
ヒドの(−)P聡溶液を徐々に添加し第1表記教の条件
で固定処理したのち、(一)PBSで6度洗浄して遊離
のホルムアルデヒドを除去する。
ついで10%血球濃度になるように0.05%のNaN
3を含む(一)PBSに懸濁する。上記の赤血球を用い
パーマネントV型プレート上でSeverのマイクロタ
イマー法(‘‘Joumaloflmmunology
’’第斑巻(1962)第320〜327頁参照)によ
り、麻疹ウイルス特異HA抗原のHA価を測定した。
3を含む(一)PBSに懸濁する。上記の赤血球を用い
パーマネントV型プレート上でSeverのマイクロタ
イマー法(‘‘Joumaloflmmunology
’’第斑巻(1962)第320〜327頁参照)によ
り、麻疹ウイルス特異HA抗原のHA価を測定した。
結果は第1表に示すとうりであった。
第 1 表
※ 赤血球を蒸留水に懸濁したときの溶血反応を観察し
た。
た。
十:溶血反応陽性(安定化されているい)。一:溶血反
応陰性(安定化されている)。実験例 2 実施例2および4によって得られた各種サルの凍結乾燥
した安定化赤血球を氷室内で保存したのち蒸留水で再浮
遊せしめた赤血球について実験例1に準じて麻疹ウイル
スHI反応における感度を新鮮赤血球と比較した。
応陰性(安定化されている)。実験例 2 実施例2および4によって得られた各種サルの凍結乾燥
した安定化赤血球を氷室内で保存したのち蒸留水で再浮
遊せしめた赤血球について実験例1に準じて麻疹ウイル
スHI反応における感度を新鮮赤血球と比較した。
結果は第2表に示すとうりであった。
第2表
Claims (1)
- 1 麻疹ウイルス特異HA抗原により凝集されうるサル
の赤血球を約0.003〜0.04%(重量/容量パー
セント)の濃度の炭素数4以上の低級脂肪族ジアルデヒ
ドで固定処理した麻疹ウイルス凝集反応用赤血球。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP7407677A JPS6022296B2 (ja) | 1977-06-21 | 1977-06-21 | 麻疹ウイルス凝集反応用赤血球 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP7407677A JPS6022296B2 (ja) | 1977-06-21 | 1977-06-21 | 麻疹ウイルス凝集反応用赤血球 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS548716A JPS548716A (en) | 1979-01-23 |
JPS6022296B2 true JPS6022296B2 (ja) | 1985-06-01 |
Family
ID=13536711
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP7407677A Expired JPS6022296B2 (ja) | 1977-06-21 | 1977-06-21 | 麻疹ウイルス凝集反応用赤血球 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS6022296B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5821436A (ja) * | 1981-07-31 | 1983-02-08 | Toyo Tire & Rubber Co Ltd | 大型タイヤトレツド組成物 |
JPS5843807A (ja) * | 1981-09-11 | 1983-03-14 | Toyo Tire & Rubber Co Ltd | 耐サイドカツト性にすぐれた大型タイヤ |
JPS58168611A (ja) * | 1982-03-30 | 1983-10-05 | Sumitomo Chem Co Ltd | 分岐重合体及びその製造方法 |
JPH06865B2 (ja) * | 1984-12-07 | 1994-01-05 | 住友化学工業株式会社 | ジエン系エラストマ−組成物 |
JPH06103311B2 (ja) * | 1985-08-23 | 1994-12-14 | 株式会社日立製作所 | 多項目自動分析装置 |
JPH01233298A (ja) * | 1988-03-11 | 1989-09-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | 抗体、その製造法、hmlcを測定するための試薬、ならびにモノクローナル抗体 |
-
1977
- 1977-06-21 JP JP7407677A patent/JPS6022296B2/ja not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS548716A (en) | 1979-01-23 |
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