JPS5942455A - 非a、非b肝炎抗原 - Google Patents
非a、非b肝炎抗原Info
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- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は非A1非B肝炎抗原に関する。プラムペルり(
Blumberg、 Bull、 N、Y、 Acad
、 Med、/9乙弘。
Blumberg、 Bull、 N、Y、 Acad
、 Med、/9乙弘。
1/−0,377)による肝炎8表面抗原Chepat
itis Bsurface antl(7en (H
BsAg ) 〕の発見及びフエインストン等(Fe1
nstone et at、、 5cience、 /
973r/g2. /θ2乙〕による肝炎Aウィルス(
hepatltlsA virus (HAV ) )
の発見以来A型及びB型肝炎は特異的血清学的試験によ
り区別され得るようになった。他の型の肝炎であってそ
の作用因子が未同定である腰仙の型の肝炎ビ非A1非B
肝炎″と表記している。アメリカ金銭国ではHSs A
g陽性の供血者の血液を現在のところ輸血に使用しない
が非A1非B肝炎は輸血後の肝炎の症例の約g9チの原
因をなす(Alter et at、、 Lancet
2 : g3g−g’l/、 /q73. A
lter et al、、 Am、
J、 Med、 ScL+、270 : 329
−3311.、 /9’R)。5単位又はそれ以下の単
位の輸血を受けたアメリカ人の5.lI〜/g、5%は
非A1非B肝炎を発現する( Alteret at、
、 前掲文献)。 ″肝炎C′″という名称がこの病
気に対して提案されたけれども大部分の臨床家と研究者
とはこの病気を非A1非B肝炎と呼んでいるがその理由
は状況証拠からこの病第を移す因子がひとつ以上である
と想像されることにある。
itis Bsurface antl(7en (H
BsAg ) 〕の発見及びフエインストン等(Fe1
nstone et at、、 5cience、 /
973r/g2. /θ2乙〕による肝炎Aウィルス(
hepatltlsA virus (HAV ) )
の発見以来A型及びB型肝炎は特異的血清学的試験によ
り区別され得るようになった。他の型の肝炎であってそ
の作用因子が未同定である腰仙の型の肝炎ビ非A1非B
肝炎″と表記している。アメリカ金銭国ではHSs A
g陽性の供血者の血液を現在のところ輸血に使用しない
が非A1非B肝炎は輸血後の肝炎の症例の約g9チの原
因をなす(Alter et at、、 Lancet
2 : g3g−g’l/、 /q73. A
lter et al、、 Am、
J、 Med、 ScL+、270 : 329
−3311.、 /9’R)。5単位又はそれ以下の単
位の輸血を受けたアメリカ人の5.lI〜/g、5%は
非A1非B肝炎を発現する( Alteret at、
、 前掲文献)。 ″肝炎C′″という名称がこの病
気に対して提案されたけれども大部分の臨床家と研究者
とはこの病気を非A1非B肝炎と呼んでいるがその理由
は状況証拠からこの病第を移す因子がひとつ以上である
と想像されることにある。
非A1非B肝炎の診断は血清学的試験による既知の病原
因子即ち:HAV及びB型肝炎ウィルス(HBV)、サ
イトメガロウィルス、エプシュタインーバ/l/ (E
psteln−Barr ) ウィルス、水痘帯状庖
疹(varicella−zoster ) 又は単
純庖疹の除外に依然としてもとづいている。
因子即ち:HAV及びB型肝炎ウィルス(HBV)、サ
イトメガロウィルス、エプシュタインーバ/l/ (E
psteln−Barr ) ウィルス、水痘帯状庖
疹(varicella−zoster ) 又は単
純庖疹の除外に依然としてもとづいている。
従って本発明の目的(寸非A1非B肝炎抗原の単離方法
の提供にある。他の目的は非AXyl=s侃原の検出方
法の提供にある。更に他の目的は免疫原としての効力を
もつと共に非A1非BJI−1−扱に対するワクチン製
造用として使用可能な非A1非B肝炎抗原の提供にある
。なおその他の目的は診断剤としてsr++用され得る
非A、非B肝炎抗原含有組成物の提供にある。これら及
びその他の不発明の目的は下部によって明かとなろう。
の提供にある。他の目的は非AXyl=s侃原の検出方
法の提供にある。更に他の目的は免疫原としての効力を
もつと共に非A1非BJI−1−扱に対するワクチン製
造用として使用可能な非A1非B肝炎抗原の提供にある
。なおその他の目的は診断剤としてsr++用され得る
非A、非B肝炎抗原含有組成物の提供にある。これら及
びその他の不発明の目的は下部によって明かとなろう。
粒子寸法約λ、θ〜約3.Onm 及びC5Ct 中の
密度約/、2’l〜約/、29f/lnlを有する非A
1非B肝炎抗原は同密度集合帯法及びクロマトグラフィ
Gこよる分画法にもとづき単離塔れる。
密度約/、2’l〜約/、29f/lnlを有する非A
1非B肝炎抗原は同密度集合帯法及びクロマトグラフィ
Gこよる分画法にもとづき単離塔れる。
本発明に従うと
下記の皇項P[Jち:
(a) 肝臓病の診断に用いられる特異的検査により
辿j定された肝中の高量の酵素、 (b) 黄痕を含む臨床的徴症の可能性、及び(C)
診断()査により決定される現在活性なHAV又は
HBVによる感染の不存在 により非A1非B抗原をもつと臨床的に診断された患者
の血液 から標準的方法によシ血清を採取する。この直情の使用
により供血者から得られた血清をスクリーニングして非
A1非B抗体を含有する血清の所在を検する。竹異的血
il′i!試料中の抗体の存在の測定のために免疫拡散
検査法を用いる。
辿j定された肝中の高量の酵素、 (b) 黄痕を含む臨床的徴症の可能性、及び(C)
診断()査により決定される現在活性なHAV又は
HBVによる感染の不存在 により非A1非B抗原をもつと臨床的に診断された患者
の血液 から標準的方法によシ血清を採取する。この直情の使用
により供血者から得られた血清をスクリーニングして非
A1非B抗体を含有する血清の所在を検する。竹異的血
il′i!試料中の抗体の存在の測定のために免疫拡散
検査法を用いる。
成る拙清が非A1非B抗原をもつと決定されるとこの血
清を同W1′度集合帯法に供して密度勾配をもつフラク
ションについて抗体(免疫拡散検査法によシ予めその存
在が既知されている)使用の下に抗原活性を検する。密
度勾配は例えばC5C1゜NaBr 又はショ糖中で
の密度勾配である。CsC1の場合には非A1非B肝炎
抗原は密度約/、、211〜/、29y−/fullの
密度範囲内に見出される。この抗原は粒子寸法約λ〜約
5nm ff肩すると共にp■14〜//において安
定である。この抗原は約41 Q nm以下の大きなウ
ィルス様粒子群の下部(サブユニット)成分であシ得る
ものであシこのサブユニット成分は約/、3/〜E/、
3FF/rnlの比較的高い密度範囲内に見出され、こ
のサブユニット成分は同じ抗原性を有する。
清を同W1′度集合帯法に供して密度勾配をもつフラク
ションについて抗体(免疫拡散検査法によシ予めその存
在が既知されている)使用の下に抗原活性を検する。密
度勾配は例えばC5C1゜NaBr 又はショ糖中で
の密度勾配である。CsC1の場合には非A1非B肝炎
抗原は密度約/、、211〜/、29y−/fullの
密度範囲内に見出される。この抗原は粒子寸法約λ〜約
5nm ff肩すると共にp■14〜//において安
定である。この抗原は約41 Q nm以下の大きなウ
ィルス様粒子群の下部(サブユニット)成分であシ得る
ものであシこのサブユニット成分は約/、3/〜E/、
3FF/rnlの比較的高い密度範囲内に見出され、こ
のサブユニット成分は同じ抗原性を有する。
抗原活性をもつ密度勾配フラクションを集めてこれをク
ロマトグラフ処理にかける。コラムから得られたフラク
ションを前述の抗体の使用下に免疫拡散検査法にかけて
分析し、抗原存在が認められたフラクションを集める。
ロマトグラフ処理にかける。コラムから得られたフラク
ションを前述の抗体の使用下に免疫拡散検査法にかけて
分析し、抗原存在が認められたフラクションを集める。
分子量約250 、000〜約/ 、 300 、00
0ダルトンを有するフラクションの中に抗原性が発見さ
れた。最高抗原性は分子量約lIOθ、000〜約bo
o、oooダルトンをもつフラクシコン中に見出された
。ナトリウムドデシルサルフェートで処理された抗原は
分子量約so 、 oo。
0ダルトンを有するフラクションの中に抗原性が発見さ
れた。最高抗原性は分子量約lIOθ、000〜約bo
o、oooダルトンをもつフラクシコン中に見出された
。ナトリウムドデシルサルフェートで処理された抗原は
分子量約so 、 oo。
ダルトンをtつ成分であることがウェスタンブロック法
Cwestern block method、 To
bli et al、。
Cwestern block method、 To
bli et al、。
J、Proc、 Nat、 Acad、 Scl:、
Vol 、 7乙、 p、 ’7330(/q
79)) によって示された。
Vol 、 7乙、 p、 ’7330(/q
79)) によって示された。
コラムからの溶出用の溶剤でない他の溶剤中での抗原で
あることが望まれるならばフラクションを透析し得る。
あることが望まれるならばフラクションを透析し得る。
濃度約/:/、000〜約/:10.000 のホルマ
リンを用い約2’l〜約/20時間、適宜の温度で処理
することにより抗原をワクチン用に不活性化させ得る。
リンを用い約2’l〜約/20時間、適宜の温度で処理
することにより抗原をワクチン用に不活性化させ得る。
好適条件はホルマリン濃度約/:4t、000、処理待
間約7.2時間、漉度約33〜約グ/Cである。
間約7.2時間、漉度約33〜約グ/Cである。
抗原を任意にミョウバン上に吸着させて免疫原性を増加
させ、任意に他の補助剤と共に投与し得る。
させ、任意に他の補助剤と共に投与し得る。
本発明の非A1非B肝炎抗原は感受性をもつ動物種例え
ばチムパンジイ及びヒトに対し約/〜約700μm、好
適には約5〜約sOμz1最も好適には約10〜約30
μ2の投与量において免疫原性である。下記の鎖側は本
発明を例示するが本発明を該例に限定するものではない
。
ばチムパンジイ及びヒトに対し約/〜約700μm、好
適には約5〜約sOμz1最も好適には約10〜約30
μ2の投与量において免疫原性である。下記の鎖側は本
発明を例示するが本発明を該例に限定するものではない
。
例 /
非A1非B肝炎抗原の単離
穐清中グルタミック オキザロアセティツクトランスア
ミナーゼ酵素の高量及び匍消中ダルタミツク ピルベー
ト トランスアミナーゼ酵素の高酸、並びに黄痕の存在
にもとづく肝炎の臨床的便症を持つと共に同位元素標識
免疫診断検査法によりHAVにも又はHBVにも詐った
ことがないと決定された患者から採血し、これから公知
方法で血清を侑た。この血清試料を諸抽清試料のスクリ
ーニングのために使用して免疫拡散検査法(Abbot
rheophoresls plate ) にも
とづき抗体含有面精のD[在を決定した。
ミナーゼ酵素の高量及び匍消中ダルタミツク ピルベー
ト トランスアミナーゼ酵素の高酸、並びに黄痕の存在
にもとづく肝炎の臨床的便症を持つと共に同位元素標識
免疫診断検査法によりHAVにも又はHBVにも詐った
ことがないと決定された患者から採血し、これから公知
方法で血清を侑た。この血清試料を諸抽清試料のスクリ
ーニングのために使用して免疫拡散検査法(Abbot
rheophoresls plate ) にも
とづき抗体含有面精のD[在を決定した。
非A1非B抗原含有崩清(7ml)をCsC6密度:/
、/、/、2、/、3、/、り及び/、乙の5個の6.
2InlcDfilから成る。3/rnlのCsC7溶
液によって検した。ペックマン回転器(Beckman
SW 27 rotor )中に第一番目の拘清試料を
置き23.00Orpm で/6時間遠心処理して密度
勾配を測定した。/dのフラクションを取り水に対して
透析した。諸フラクションを凍結乾燥し蒸留水で200
μlへ再構成した。諸フラクションについて既述の抗体
使用下の免疫拡散検査法により抗原活性を検した。抗原
活性は密度/、、24〜/、、29?//nlの範囲に
対応し、最高活性は密度/、27ji’ / mlに対
応することが見出された。
、/、/、2、/、3、/、り及び/、乙の5個の6.
2InlcDfilから成る。3/rnlのCsC7溶
液によって検した。ペックマン回転器(Beckman
SW 27 rotor )中に第一番目の拘清試料を
置き23.00Orpm で/6時間遠心処理して密度
勾配を測定した。/dのフラクションを取り水に対して
透析した。諸フラクションを凍結乾燥し蒸留水で200
μlへ再構成した。諸フラクションについて既述の抗体
使用下の免疫拡散検査法により抗原活性を検した。抗原
活性は密度/、、24〜/、、29?//nlの範囲に
対応し、最高活性は密度/、27ji’ / mlに対
応することが見出された。
長さ約、250、直径約711111の容量10m1の
クロマトグラフ用コラム(5ephaross CL乙
日column)に常法により吸着剤を詰めた。上部記
載の透析され再構成された密度勾配フラクション(複数
)の集合物のθ、りmlの負荷量をコラムへ供給した。
クロマトグラフ用コラム(5ephaross CL乙
日column)に常法により吸着剤を詰めた。上部記
載の透析され再構成された密度勾配フラクション(複数
)の集合物のθ、りmlの負荷量をコラムへ供給した。
このコラムをリン酸塩緩衝fヒ食塩水(PBS)で75
分間当シ約/ mlの速度で溶出し0.5dずつのフラ
クション< r、a ′Iji)を集めた。次にこれら
のフラクションを凍結乾燥し/フラクション当シ100
μtの割合の蒸留水で再構成した。次にこれらのフラク
ションについて、予め単離された抗体使用下の免疫拡散
検査法により分析した。最高抗原活性は分子量約りoo
、ooo ダルトンを有するフラクションに該当し、活
性を4、つ分子量lll0囲は25θ、θθθ〜/、3
00.θOθグルトンであった。
分間当シ約/ mlの速度で溶出し0.5dずつのフラ
クション< r、a ′Iji)を集めた。次にこれら
のフラクションを凍結乾燥し/フラクション当シ100
μtの割合の蒸留水で再構成した。次にこれらのフラク
ションについて、予め単離された抗体使用下の免疫拡散
検査法により分析した。最高抗原活性は分子量約りoo
、ooo ダルトンを有するフラクションに該当し、活
性を4、つ分子量lll0囲は25θ、θθθ〜/、3
00.θOθグルトンであった。
例 コ
例/でセファローズ CL乙B コラムから溶出された
物質は分子に範囲230.000〜/、3θo 、oo
。
物質は分子に範囲230.000〜/、3θo 、oo
。
ダルトンを有し、これを集めて濃度/ : ’1.00
0のホルマリンで7.2時間37Cで処理し抗原を不活
性fヒすることによりワクチンとして好適に使用される
物質を製造した。
0のホルマリンで7.2時間37Cで処理し抗原を不活
性fヒすることによりワクチンとして好適に使用される
物質を製造した。
例 3
例コの不活性化製品をミョウバン上に吸着させ、pl+
6.0〜71gに緩衝fヒされた窮理食塩水中にこれを
懸濁させた。
6.0〜71gに緩衝fヒされた窮理食塩水中にこれを
懸濁させた。
例 ダ
例/のセファローズ CL/、B から溶出された抗
原性憬有フラクションを蒸留水に対して透析することに
より蒸留水含有の非A1非B抗原組成物を製造した。こ
の組成物は例2呂己載の辿シの不活性比処理の後にワク
チンとして有用であり、又そのまま抗原として或は診断
用抗原として弔用である。
原性憬有フラクションを蒸留水に対して透析することに
より蒸留水含有の非A1非B抗原組成物を製造した。こ
の組成物は例2呂己載の辿シの不活性比処理の後にワク
チンとして有用であり、又そのまま抗原として或は診断
用抗原として弔用である。
例 S
例/のセファローズ CLろBから溶出された抗原性保
南フラクノヨンを貧塩水に7J’ して透析することに
より食′垣水含本の非A1非B抗原糾成物をZ’b ’
iMした。この組成物は例2記載の連υの不活性化処理
の後にワクチンとして有用であり、又そのまま抗原とし
て或は診断用抗原として有用である。
南フラクノヨンを貧塩水に7J’ して透析することに
より食′垣水含本の非A1非B抗原糾成物をZ’b ’
iMした。この組成物は例2記載の連υの不活性化処理
の後にワクチンとして有用であり、又そのまま抗原とし
て或は診断用抗原として有用である。
例 乙
セファローズ CIJ、Bコラムから溶出して得られた
約/ Q m!/の非A1非B肝炎抗原に対し1濃塩酸
でpH乙、gVC調節されたトリス緩衝液(trlsM
fer )の5mノ中の、2%ナトリウム ドデシル
サルフェート及び5% 2−メルカゾトエタノールを用
いて核抗原を処理した。この処理溶液を700cに3分
間側温保持(7てがらこの溶液に対しQ 、 5 ml
の30チグリセロール及びo、夕係ブo Jh 7−1
− /−ル背の追跡用染料を加えた。こ(1)調製物を
、/2.、rチポリアクリルアミドダルqs。
約/ Q m!/の非A1非B肝炎抗原に対し1濃塩酸
でpH乙、gVC調節されたトリス緩衝液(trlsM
fer )の5mノ中の、2%ナトリウム ドデシル
サルフェート及び5% 2−メルカゾトエタノールを用
いて核抗原を処理した。この処理溶液を700cに3分
間側温保持(7てがらこの溶液に対しQ 、 5 ml
の30チグリセロール及びo、夕係ブo Jh 7−1
− /−ル背の追跡用染料を加えた。こ(1)調製物を
、/2.、rチポリアクリルアミドダルqs。
m のコラムであって該ダルの上に更(fこ6゛チの爪
m用ダルff有する該コラムに対して鏑用した。このダ
ルコラムを、ioogルトの1区界内で八、5− tノ
ドリス−グリシン−ナトリウム ドデシ/L/ サル
フェート緩衝液によシ展開させた。展開を75時間継続
した。クマシー青で着色さ?て追跡実験を平行して行う
ことにより上記のグル中にso 、ooθダルトンの分
子量を有する帯(バンド)の4任をフめた。この帯の部
分をグルがら切り取り20 ml生理食塩水10.1%
ナトリウム ドデシル サルフェート混合溶液を用いて
溶出処理した。このナトリウム ドデシル サルフェー
ト溶液を生理食塩水に対する充分な透析処理によって除
去することによシワクチン中へ処方するために使用し得
る製品を得た。
m用ダルff有する該コラムに対して鏑用した。このダ
ルコラムを、ioogルトの1区界内で八、5− tノ
ドリス−グリシン−ナトリウム ドデシ/L/ サル
フェート緩衝液によシ展開させた。展開を75時間継続
した。クマシー青で着色さ?て追跡実験を平行して行う
ことにより上記のグル中にso 、ooθダルトンの分
子量を有する帯(バンド)の4任をフめた。この帯の部
分をグルがら切り取り20 ml生理食塩水10.1%
ナトリウム ドデシル サルフェート混合溶液を用いて
溶出処理した。このナトリウム ドデシル サルフェー
ト溶液を生理食塩水に対する充分な透析処理によって除
去することによシワクチン中へ処方するために使用し得
る製品を得た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 (1) 約2.0〜約5 、0 nrn の粒子寸法及
びC3Ct中約/、2弘〜約/、29f/mlの密度を
有する粒子群から本質的に成ることを特徴とする実質上
線fヒされた非A1非B肝炎抗原。 (2) 約Ωso、 Ooo〜約/、300,000
ダルトンの分子量を有する特許請求の範囲第+1+項に
記載の抗原。 (3) 約50.θQOグルトンの分子量を有する特
許NI”!求の範囲第(1)項記載の非A1非B肝炎抗
原の下部成分としての抗原成分。 (4ン・特許請求の範Ii!1llI第(1)項記載の
抗原を水性媒質中に含有することを特徴とする組成物。 (5) 媒質が水、食塩水又はリン、1蔽塩緩衝比食
塩水である特許請求の範囲第イ4)項に記載の組成物。 (6)ミョウバン上に吸着されている特許請求の範囲第
(11項に記載の抗原。 +7) ゛p許請求の範囲第(1)項記載の抗原の免
疫学的有効量と生理学上許各可能な媒質とから成ること
を特徴とするワクチン。 (8) 診断検査において免疫複合体を形成するため
の有効量で特許請求の範囲第(])項記載の抗原を水性
fR質中に含有することを特徴とする診断剤。 (9) 非A1非B肝炎抗原を含有する血清を同密度
犯合・11)法にかけてC3Ct 巾約/、、21I〜
約/、Ω71・/dに4トシい密度と約λ、0〜約5
、 Q nmの粒子寸法とを有するフラクション/を選
択することを特徴とする非A1非B抗原の単離方法。 00 分子量約230.000〜約/、30θ、00θ
ダルトンを有する粒子群が分離されるように1μ択フラ
クシヨンを処理する特許請求の範囲第(9)項に記載の
方法。 (1B 処理の結果分子量約’、100,000〜約b
oo、oo。 グルトンを有する粒子群が分離される特許請求の節回7
.1 (91項に記i或の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US37484682A | 1982-05-05 | 1982-05-05 | |
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Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
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Family
ID=23478432
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP58078839A Pending JPS5942455A (ja) | 1982-05-05 | 1983-05-04 | 非a、非b肝炎抗原 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0093438B1 (ja) |
JP (1) | JPS5942455A (ja) |
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Families Citing this family (7)
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JPS61176856A (ja) * | 1985-02-01 | 1986-08-08 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 非a非b型肝炎抗原 |
JPS6391328A (ja) * | 1986-10-07 | 1988-04-22 | Mitsubishi Kasei Corp | 非a非b型肝炎抗原 |
NZ222465A (en) * | 1986-11-07 | 1992-11-25 | Pasteur Institut | Nanb (non a, non b hepatitis viral) antigen |
FR2606515B1 (fr) * | 1986-11-07 | 1992-02-21 | Pasteur Institut | Procede pour l'isolement d'un nouvel agent viral et de l'antigene qui lui est associe, agent viral et antigene obtenus par ce procede et procede de detection dudit antigene a l'aide d'un reactif immunologique approprie |
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Citations (1)
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JPS57198867A (en) * | 1981-06-02 | 1982-12-06 | Eisai Co Ltd | Non-a, non-b hepatitis related antigen and diagnostic therefor |
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-
1983
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- 1983-05-03 CA CA000427289A patent/CA1208554A/en not_active Expired
- 1983-05-04 JP JP58078839A patent/JPS5942455A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS57198867A (en) * | 1981-06-02 | 1982-12-06 | Eisai Co Ltd | Non-a, non-b hepatitis related antigen and diagnostic therefor |
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Publication number | Publication date |
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CA1208554A (en) | 1986-07-29 |
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