JPS60194363A - 過酸化水素の定量法 - Google Patents

過酸化水素の定量法

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JPS60194363A
JPS60194363A JP4995084A JP4995084A JPS60194363A JP S60194363 A JPS60194363 A JP S60194363A JP 4995084 A JP4995084 A JP 4995084A JP 4995084 A JP4995084 A JP 4995084A JP S60194363 A JPS60194363 A JP S60194363A
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hydrogen peroxide
quantifying
coloring
calibration curve
hydrogen
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Kazuhiko Yamanishi
山西　一彦
Toshiro Hanada
寿郎 花田
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Wako Pure Chemical Industries Ltd
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    • C09B11/04—Diaryl- or thriarylmethane dyes derived from triarylmethanes, i.e. central C-atom is substituted by amino, cyano, alkyl
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    • C09B11/12—Amino derivatives of triarylmethanes without any OH group bound to an aryl nucleus
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、シクロデキストリン（以下、ＣＤと略称する
。）又は修飾シフロブキストリ／（以下、修飾ＣＤと略
称する。）全円いて包接したトリフェニルメタノ誘導体
を発色成分とする過酸化水素の定量法に関する。
酵素を用いて、物質の量全定量しようとする酵素分析法
は、その特異性及び簡易迅速性がすぐれているため、体
液、動物臓器、植物２食品などの分析に広く利用されて
おり、特に血清成分全測定する臨床化学分析に於ては種
々の酵素分析法が開発され、採用されている。これら酵
素分析法のなかでも、オキシダーゼの作用により生成す
るＨ２Ｏ２をペルオキシダーゼ（ＰＯＤ　）と発色成分
である被酸化性呈色試薬全円いてこれを発色系に導き、
その呈色を比色定量する方法が、コレステロール。
υノ脂質、尿酸、グルコース、クレアチン、トリグリセ
ライド等の測定や血清酵素の活性測定などに用いられて
いる。かかる目的に用いられる被酸化性呈色試薬として
は、４−アミノアンチピリンと、フェノール系化合物、
ナフト−ル系化合物又はアニリノ系化合物との組合せ試
薬、３−メチルベノゾチアゾリノ／ヒドラゾノ（ＭＢＴ
Ｈ）とアニリノ系化合物との組合せ試薬、　２．２’−
アジノビス（３−エチルベンゾチアソＩＪ　：、ｙ　−
６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ　）　、ロイコメチレノブ
ルー誘導体などの試薬がちジ、測定する過酸化水素濃度
に応じてそれぞれ使い分けられている。
最近、上記呈色試薬のほかに、高感度の被酸化性呈色試
薬としてトリフェニルメタノ量誘導体が開発され、実用
面への応用が期待されている。この呈色剤は呈色波長が
６００ｍ４以上の長波長側にあり、分子吸光係数も７万
以上と大きく、しかも呈色後の経時的退色がほとんどな
いなど従来の被酸化性呈色試薬と比べてすぐれた長所？
有している。
しかしながら、高感度である為に、却ってそれが実用上
障害になる場合もある。即ち、高感度である為にその用
途が超微量の過酸化水素の定量という狭い測定範囲に限
定され、例えば、４−アミノアンチビリノーフェノール
系程度の感度で充分であるような過酸化水素濃度試料の
測定では、試料採取量全超微量（例えば」０μを以下）
にしなければならないので計量誤差が大きくなり測定値
のバラツキの原因となったり、又、試料採取誤差を小さ
くするためには試料を予め希釈する操作を行う必要があ
る等実用上の問題点を有する。そこで、呈色波長が長波
長側にあり、呈色後の経時的退色が殆どないなどの長所
全もつトリフェニルメタン≠訪導体の感度を、下は５，
０００位から上は１０万以上の高感度まで広い範囲にわ
たって調節できる方法があればその応用範囲は飛躍的に
広くなり、従来の発色剤にみられないメリットが期待で
きることになる。
本発明者らはこの要望に応えるべく鋭意研究の結果、ト
リフェニルメタン誘導体音ＣＤ又は修飾ｃＤｚ′：包接
することによシ発色感度の調節が可能となり、更に試薬
溶液の安定化効果及び溶解性向上の効果も併せ得られる
ことを見出し本発明を完成するに至った。
即も、本発明はシクロデキストリン又は修飾シフロチキ
ストリ／を用いて包接した一般式〔式中、Ｒ１、Ｒ２ｒ
　Ｒ３＋　Ｒ４は低級アルキル基を表わし、夫々同じで
あっても異っていても良く、ｘ、　、　ｘ２　はどちら
も−〇　（ＣＨ２）　ｎ　５０３Ｍ＋　（但し、Ｍ、は
水素又はアルカリ金属イオノ又はＮＨ：ヲ示し、ｎは２
〜４の整数を示す。）を示づ“が、又はどちらか一方が
一〇　（ＣＨ２）　ｎ５０３Ｍ＋　（但し、Ｍ、　、　
ｎは前記と同じ）又は−８０３Ｍ２（但し、Ｍ２は水素
又はアルカリ金属イオン又はＮｌ（、’（（示す。）を
示し、他方が水素ケ示す。〕で表わされるトリフェニル
メタン誘導体を発色成分として用いる過酸化水素の定量
法の発明である。
一般にＣＤ又は修飾ＣＤは、水溶液中で有機化合物と混
合すると速やかに包接体全形成し、製剤の安定化、溶解
性の調節、液状薬品の粉末化、刺激性や惑奥などのマス
ク、或いは揮発性の調節等に優れた効果ケ有することが
知られており、これらの用途に広く利用されている。又
、呈色剤ＫＣＤ又は修飾ＣＤｉ添加すると、通常は溶解
住め向上等の効果により発色感度の増加がおこると考え
られるので、かかる目的での使用例も多い。
しかしながら、本発明によれば、トリフ導体層メタンｍ
＝導体全ＣＤ又は修飾ＣＤで包接することにより全く意
外なことに発色感度を逆に低下させることができ、その
結果、トリフェニルメタ／誘導体の使用範囲が超微量物
質の定量に限定されることなく、その優れた特性、即ち
呈色波長が長波長側にあり、且つ呈色後の経時的退色が
殆んどないなどの特性音生かして幅広い用途への応用が
可能となった。本発明に於て、ＣＤ又は修飾ＣＤを用い
ることによる発色速度への影響は全くない。
又、トリフェニルメタノ誘導体の１つであり、呈色試薬
として公知の化合物（特開昭５６−号公報っであるビス
（ｐ−ジエチルアミノフェニル）２−スルホフェニルメ
タノは、血清中ノ微量成分の酵素的測定法（Ｈ２０２生
成系）において通常用いられるｐＨ６〜８の緩衝液には
０．０１　ｍＭの濃度でも完溶しない程溶解し難い為（
通常は一旦酸性側で溶解し、然る後ｐＨヲ中性付近に調
整するが、それでもせいぜい０．５　ｍＭ程度である。
）、これまでその方面の用途での実用化は困難であった
が、本発明の方法、即ち、ＣＤ又は修飾ＣＤ　ｉ用いて
包接することによシ溶解性が増大し、２０ｍＭまたはこ
れ以上の濃度にも可溶となり、実用化が可能となった。
本発明に用いられるトリフェニルメタ／誘導体としては
例えば、前記ビス（ｐ−ジエチルアミンフェニル）２−
スルホフェニルツタノナトリウム塩（以下、ＢＳＰＭと
略称する。）の他、本発明者らが先に特許出願したビス
（ｐ−ジエチルアミンフェニル）４−スルホプロホキジ
フェニルメタンナトリウム塩（以下、ＢＳｐｒｏＰＭと
略称する。〕、及ヒビス（ｐ−ジエチルアミンフェニル
）３，４−ジスルホプロポキシフェニルメタノジナトリ
ウム塩（以下Ｂ　Ｓ　ｄｉｐｒｏ　Ｐ　Ｍと略称する。
）などがあるが、これらに限定されるものではない。
又、本発明に用いられるＣＤは、α、β、γ。
δなどいずれのタイプでも使用できる。修飾ＣＤとして
は例えば ７９−ＣＤ　（０Ｈ）ｒｅ　（ＯＮＯ２）２　。
βＣＤ’　（ＯＨ）　ＩＱ、２　（ＯＰＯ３Ｈ）　１．
ｓ　。
７９−ＣＤ　（−０Ｈ）＋、ｔｏｓｏ３Ｈ）２　。
／　ＣＤ　（０Ｈ）ｒｓ、ａ　（０−ＣＨ２Ｃ０２Ｈ）
２．５　。
１１　ＣＤ　（ＯＨ）　＋９．３　（ＯＣＨ２ＣＨ２Ｃ
Ｈ２ＳＯ３Ｈ）　１．７　。
７９　ＣＤ　（０Ｈ）１ｓ、ｓ　（ＯＣＩ（２ＣＩ（２
ＣＨ２５Ｏ３Ｈ）ｚ、ｉ　。
／９−ＣＤ　（ＯＲ）　ｒｓ、。（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ
２８０３Ｈ）　ｓ、ｏ　。
などがあるがとわらに限定されるものではない。
これら修飾ＣＤは一般的製造方法にょシ容易に製造する
ことができる。有機合成化学　第３５巻第２号Ｊ２３（
４１）〜１２４（４２）頁（１９７７）。
ＣＤ又−修飾ＣＤを用いて包接するには、ＣＤ又は修飾
ＣＤ　（（水又は緩衝液に溶がした溶液中にトリフェニ
ルメタ／誘導体を加えて溶解すればよい。このようにし
て、水又は緩衝液に難溶なりＳＰＭも短時間で簡単に溶
解することができる。トリフェニルメタ／誘導体に対す
るＣＤ又は修飾ＣＤの量はトリフェニルメタ／誘導体に
対し等モル以上であればよいが、通常はｊＯ〜］、００
０倍モルが好１しく用いられる。ＣＤ又は修飾ＣＤ　ｉ
用いて包接することにより発色感度は、例えばＢＳＰＭ
ではα−ＣＤ包接で最高５５２％程度、β−ＣＤ包接で
最高３７４％程度まで低下し、Ｂ　Ｓ　ｄｉｐｒｏ　Ｐ
　Ｍではα−ＣＤ包接で最高３８７％程度、β−ＣＤ包
接で最高２９０％程度まで低下し、又ＢＳ　ｐｒｏ　Ｐ
Ｍ　ではα−ＣＤ包接で最高５３７％程度、β−ＣＤ包
接で最高３８８％程度まで低下する。
以上の如く、本発明は、過酸化水素をペルオキシダーゼ
（ＰＯＤ）とトリフェニルメタン誘導体を用いて発色系
に導き、その呈色を比色定量することによｐ過酸化水素
全定量する過酸化水素の定量法に於て、ＣＤ又は修飾Ｃ
Ｄ　ｉ用いてトリフェニルメータ／誘導体を包接するこ
とにより、発色速度に影響？与えることなく発色感度を
調節し、更に溶解性の向上、試薬溶液の経時安定性向上
等に顕著な効果をもたらすなど、従来の方法を極めて効
果的に改良するものであり、生体試料１％に血液や尿な
どの体液中の微量成分の酵素法（Ｈ２Ｏ２生成系）によ
る測定に於て極めて有効な測定法を提供するものであっ
て、斯業に貢献するところ甚だ犬なるものである。
以下に本発明全実施例により更に具体的に説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。
実施例Ｉ　Ｈ２Ｏ２定量法 （１）試薬の調製 ■　発色試液 ０．１　Ｍ　トリスル塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）にβ−
ＣＤ０．２％、ペルオキシダーゼ６．０００　Ｕ／ｌの
濃度になるよう溶解し、これにＢＳＰＭを０．１　ｍＭ
の濃度になるように溶解する。
■　Ｈ２Ｏ２標準液 １５　ｍｇ／Ｌ　、　３０　ｍｆ／Ｌ　、　４５　ｍｇ
／’Ｌ　、　６０　ｍｌ／ｌ、７５ｍ７／ｌの各濃度の
Ｈ２Ｏ２水溶液ヲ調製する。
（２）測定操作 各濃度のＨ２Ｏ２標準液を夫々２０１１ｔとり、発色試
液３−を加えて３７℃恒温槽中３０分間加温後、試薬ブ
ランク全対照として６３０ηｒＲＫおける吸光度全測定
する。
縦軸に吸光度、横軸にＨ２Ｏ２濃度をとった検量線全第
１図に示す。検量線は原点を通る直線であり、Ｈ２Ｏ，
、１ｓ　ｍｇ／　ｔのときの吸光度はＢＳＰＭ’ｉ包接
せずにそのまま用いた参考例１に於ける対応する値の３
７４係である。
実施例２　Ｈ２Ｏ２定量法 （Ｊ）　試薬の調製 ■　発色試液 実施例１の発色試液組成のβ−ＣＤ０．２％をα−ＣＤ
　１％に置きかえた発色試液全調製する。
■　Ｈ２Ｏ２標準液 実施例１に同じ。
（２）　測定操作 実施例１と同様にして吸光度を測定する。
検量線を第１図に示すが、検量線は原点を通る直線であ
り、Ｈ２Ｏ２１５ｍｙ／　Ｌのときの吸光度は参考例Ｉ
の対応する値の５５２％である。
参考例】Ｈ２Ｏ３定量法 （１）　試薬の調製 ■　発色試壺 ０．１　Ｍ　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）にペル
オキシダーゼ６．０００　Ｕ／ｌ　、　ＢＳＰＭを０１
ｍＭの濃度になるように加え、撹拌溶解する。
このとき、ＢＳＰＭは完溶しないので、約１０分間撹拌
後不溶分は戸去する。ｖ５Ｌｔ−発色試液とする。
■　Ｈ２Ｏ２標準液 実施例１に同じ。
（２）測定操作 実施例１と同様にして吸光度？測定する。
検量線を第１図に示すが、ＢＳＰＭの溶解度が低い為発
色剤不足を来し検量線は直線にならない。
実施例３　Ｈ２Ｏ２定量法 Ｄ）　試薬の調製 ■　発色試夕ｒ（ ０，１Ｍ　トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）にＢ　Ｓ
　ｄｉｐｒｏ　Ｐ　Ｍ　Ｏ，Ｊ　ｍＭ　、β　−ＣＤ０
２％、　ベ　ルオキシダーゼ６，０００　Ｕ／ｌの濃度
になるよう溶解する。
■　Ｈ２０２標準液 実施例工に同じ。
（２）　測定操作 実施例１と同一操作により波長６２０ｎ、ｍの吸光度を
測定する。検量線を第２図に示す。検量線は原点を通る
直線であり、Ｈ２Ｏ２１ｓ　ｒｑ　／ｌのときの吸光度
はＢ　Ｓ　ｄｉｐｒｏ　Ｐ　Ｍ　ｆ包接せずにそのまま
用いた参考例２の対応する値の２９０チである。
実施例４　Ｈ２Ｏ２定量法 （１）試薬の調製 ■　発色試液 実施例３０発色試液組成のβ−ＣＤ０．２％をα−ＣＤ
　Ｉチに置きかえた発色試液を調製する。
■　Ｈ２Ｏ２標準液 実施ｆ＋Ｊ　１に同じ。
（２）測定操作 実施例３と同様にして吸光度を測定する。
検量線全第２図に示す。検量線は原点全通イ直線で９、
Ｈ２０２１ｓ　ｍｙ／　ｔのときの吸光度は疫考Ｖ／１
１２の対応する値の３８７％である。
参考例２Ｈ２ｏ２定量法 （１）試薬の調製 ■　発色試液 実施例３の発色試液組成に於て、β− ＣＤを除いた組成の発色試液を調製する。
■　Ｈ２Ｏ２標準液 実施例１に同じ。
（２）測定操作 実施例３と同様にして吸光度全測定する。
検量線を第２図に示す。検量線は原点を通る直線となる
。
実施例５Ｈ２０２定泄法 （□）試薬の調製　−−−−％Ｗ／ ■　発色試液 ０．１　Ｍ　＋−リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）にＢ
　Ｓ　ｐｒｏ　Ｐ　Ｍ　Ｏ，１ｍＭ　、β−ＣＤ０．２
％、ペルオキシダーゼ６．０００　Ｕ／ｌのａ度になる
よう溶解する。
パ管□ 実施例１に同じ。
：２）　測定操作 実施例３と同様にして吸光度全測定する。
検量線を第３図に示す。検量線は原点を通る直線であり
、Ｈ２Ｏ２Ｊ　ｓ　ｍｙ／　ｔのときの吸光度はＢＳｐ
ｒｏＰＭを包接せずにその捷１用いた参考例３の対応す
る値の３８．８％である。
匙施例６　Ｈ２ｏ２定量法 ｌ）試薬の調製 ■　発色試液 実施例５の発色試液組成に於て、β− ＣＤ０．２％盆α−ＣＤ　１％に置きかえた発色試液全
調製する。
■　Ｈ２Ｏ２標準液 実施例１に同じ。
（２）　測定操作 実施例３と同様にして吸光度を測定する。
検量線全第３図に示す。検量線は原点を通る直線であり
、Ｈ２Ｏ２１５ｍｙ／　ｌのときの吸光度は参考例３の
対応する値の５３７％である。
参考例３Ｈ２ｏ２定量法 （１）　試薬の調製 ■　発色試液 実施例５の発色試液組成に於て、β− ＣＤを除いた組成の発色試液全調製する。
■　Ｈ２Ｏ２標準液 実施例工に同じ。
（２）測定操作 実施例３と同様にして吸光度を測定する。
検量線を第３図に示す。検量線は原点を通る直線になる
。
実施例７　総コレステロールの定量法 （１）　試薬の調製 、■　発色試液 ０．１　Ｍ　）　リス−塩酸緩衝液　（ｐＨ７，０）　
にＥＳｄｉｐｒｏ　Ｐ　Ｍ　Ｏ，０５ｍＭ　、ウリカー
ゼ３００　Ｕ／ｌ　。
コレステロールオキシター　セ１５０　Ｕ／ｌ　。
β−ＣＤ０．２　％　、ト　リ　ト　７　Ｘ　−１００
０，１５％になるように溶解して発色試液とする。
■　コレステロール標準液 １００　Ｔｑ／ｄ１２、２００１ｎ７７ｄｌ　、　３０
０　ｍ？／ｄ１！、　４００ｍｙ／ｄ７！、　５００７
ｎ’ｉ／ｄｅ　、各濃度のコレステロールのイングロパ
ノール溶液を調製する。
（２）測定操作 各濃度のコレステロール標準液を夫々２０μｔと９、発
色試液３ｍｌを加えて３７℃恒温槽中１０分間加温後、
試薬ブラック金対照として波長６２０　ｎｍにおける吸
光度全測定し検量線を作成する。検量線を第５図に示す
。検量線は原点を通る直線となり、コレステロール濃度
２００■／ｄｌで０２１０の吸光度を示し、通常の光度
計による測定に適している。
参考例４　総コレステロールの定量法 （】）試薬の調製 ■　発色試液 実施例７の発色試液組成に於て、β− ＣＤ　ｉ除いた組成の発色試液全調製する。
■　コレステロール標準液 実施例７に同じ。
（２）　測定操作 実施例７と同様にして吸光度全測定する。
検量線を第４図に示す。検量線は原点を通る直線になる
が、コレステロール濃度２００Ｔｎｆ／ｄｅで吸光度０
７３Ｊと高値であり、対数目盛を用いた光度計では精度
が悪くなる。
実施例８　トリグリセライドの定量法 （１）　試薬の調製 ■　発色試液 ０．０５　Ｍ　）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）にＢ
　Ｓ　ｄｉｐｒｏ　ＰＭ　Ｏ，０５ｍＭ　、ウリカー上
３００Ｕ／Ａリボプロテイノリバ−ゼ５，０００　Ｕ／
ｌ　、グリセロキナーゼ４，０００　Ｕ／ｌ　、グリセ
ロール−３−リン酸オキシダーゼ１，０００　Ｕ／ｌ　
、ペルオキシダーゼ３，０００　Ｕ／ｌ　、β−ＣＤ０
．２％。
ＡＴＰ　１，０００　ｖｎｇ／ｌ　、塩化マグネシウム
５ｍＭト　リ　ト　７　Ｘ　−４０５０，１％　、エ　
マ　−ル　ＮＣ（イ、Ｅ王石鹸（株）曲品名〕１．Ｏ％
を含む溶液全調製する。
■　グリセリン標準液 １０．４　ｍ９／ｄｅ　、　２０．８　ｍｙ／ａ　、　
３１．２　ｍｙｌｄｌ　。
４１．６　Ｔｎ７／ｄｅ　、　５２．ＯＴｎｑ／ｄｉ　
、　６２．４　ｍｙｌｄｌの各濃度のグリセリフ水溶ｉ
ｖ調製する。（但し、トリオレインとして夫々Ｚｏｏ　
ｍｙ／ｃｔｐ　、　２００ｍｇ／ｌｉｅ　、　３００　
ｍｙｌｄｌ　、　４００　ｍｙｌｄｌ　、　ｓｏｏ　ｍ
ｇ／ｃｔｅ。
６００　ｍｙｌｄｌに相当する濃度のもの。）（２）　
測定操作 血清２０μｔ’ｊ３Ｈとり発色試液３−ｔカロえて３７
℃恒温槽中１０分間加温後試薬盲検を対照として波長６
２０　ｎｍの吸光度を測定する。
又、各濃度のグリセリン標準液を夫々２０μｔと９、発
色試ｉ３ｄ’ｉ加えて、血清の場合と同一操作により吸
光度全測定し検量線全作成する。検量線全第５図に示す
。検量線は原点を通る直線となり、トリグリセライド濃
度２００　ｍｙｌｄｌで０１８５の吸光度を示し、通常
の光度計による測定に適している。
参考例５　トリグリセライドの定量法 （１）試薬の調製 ■　発色試液 実施例８の発色試液から、β−ＣＤｉ除いた組成の発色
試液全調製する。
■　グリセリン標準液 実施例８に同じ。
（２）　測定操作 実施例８と同様にして各濃度のグリセリン標準液を発色
させ吸光度を測定し検量線を作成する。検量線を第５図
に示す。検量線は原点を通る直線となるが、トリグリセ
ライド濃度３００　Ｔｑ／ｄｉでの吸光度が０．９５１
と高値でちゃ、対数目盛ケ用いた光度計では精度が悪く
なる。
実施例８と参考例５による血清トリグリセライド測定値
の比較を次表に示す。
γ　＝０．９９９ 第１表に示す通り実施例８と参考例５は、γ−〇９９９
と良い相関全庁す。
【図面の簡単な説明】
第１図は、ＢＳＰＭ全発色剤とした実施例１．実施例２
．参考例１に於けるＨ２Ｏ２の検量線である。 但し、−ｘ−ｘ−は実施例１．−・−・−は実施例２゜
−〇−〇−は参考例１を表わす。 第２図は、ＢＳ　ｄｉｐｒｏ　ＰＭ　ｆ発色剤とした実
施例３、実施例４．参考例２に於けるＨ２０２の検量線
である。但し、−ｘ−ｘ−は実施例３．−・−・−は実
施例４．−ｏ−ｏ−は参考例２を表わす。 第３図は、Ｂ　Ｓ　ｐｒｏ　ＰＭ　ｆ発色剤とした実施
例５゜実施例６．参考例３に於けるＨ２Ｏ２の検量線で
ある。 但し、−×−×−は実施例５．−・−・〜は実施例５　
、−ｏ−ｏ−は参考例３を表わす。 第４図は、Ｂ　Ｓ　ｄｉｐｒｏ　Ｐ　Ｍ　ｆ発色剤とし
た実施例７及び参考例４に於ける総コレステロール定量
用の検量線である。但し、−ｘ　−ｘ−は実施例７゜−
０−０−は参考例４を表わす。 第５図は、Ｂ　Ｓ　ｄｉｐｒｏ　Ｐ　Ｍ　ｆ発色剤とし
た実施例８、参考例５に於けるトリグリセライド定量用
の検量線である。但し、−ｘ　−ｘ−は実施例８゜−〇
−０−は参考例５を表わす。 尚、上記測定のセル層厚はＪｏｗｎである。 特許出願人　和光純薬工業株式会社 手続補正書 昭和ダ７年　３月　３ｏ日 特許庁長官　殿　嘲し １、事件の表示 １オロら　９．ろト　多　月　１　リ　り鳴眼ンβミぐ
コキキ許系べ丸２−０．．ユ　〃０望１牌０ 嬬會Δムｙｌ＜壷い火１広 ３、　補正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　５４１ オオテカ／ヒガ７リ　ド／ヨウマチ　チョウメ　パッチ
住所　大阪府大阪市東区道修町３丁目１０番地連絡先７
）：Ｌ０３−２７０−８５７１名称　和光純薬工業株式
会社 代表者　−カ　−生　の９９ ４、補正命令の日付 ｌ　、擢学べ ５、　補正の対象 発明の詳細な説明の欄。 ６、補正の内容 （１）明細書１８頁４行目に記載の「コレステロールオ
キシダーゼ１５０Ｕ／ｌ、ｊの次に［ペルオキ７ダーゼ
ａ、ｏｏｏＵ／ｌ、Ｊを挿入する。 以上 手続補正書 昭和ダ２年　４月２３日 特許庁長官　殿　１ト １４　事件の表示 対オロ　リ　９４４オ各今１１巨４ｂント９　’ｌ　１
５０−５２　発明の名称 娘峠イら水素ｌ」式 ３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　５４１ 住所　大阪府大阪市東区道修町３丁目１０番地連絡先置
　０３−２７０−８５７１ 名称　和光純薬工業株式会社 代表者　−カ　−生　＠ｑす 、／−一〜〜 ４、補正命令の日付　′＾：、、１．、・　自　沁　′
１９・爪２７゛″ ＼；東唾−−−　ノ′ ５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６　補正の内容 （１）明細書１０頁１２行目に記載の「最高３８８チ程
度まで低下する。１の後に改行して次の文章全挿入する
。 「本発明の方法は、従来酵素法（Ｉ（２０２生成系ンで
測定されているすべての測定項目に適用可能であり、例
えば体液中のコレステロール、リン脂’ＪＲ、グルコー
ス、クレアチン、トリグリセライド、尿酸等の基質の測
定や、血清酵素の活性測定等に使用し得る。（但し、尿
酸については、あらかじめ尿酸にウリカーゼ全作用させ
てｌ−１ｚ（Ｊｚｉ生成させた後、β−シクロデキスト
リンで包接したトリフェニルメタン誘導体をベルオキシ
ダーゼと共に添加し、呈色させる必要がある。）］ 以上 ３４３−

Claims (5)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）　ンクロテキストリン又は修飾シクロデキストリ
    ／ヲ用いて包接した一般式 〔式中、Ｒ，、Ｒ２，Ｒ３，Ｒ，は低級アルキル基を表
    わし、夫々同じであっても異っていても良く、Ｘ、　、
    　Ｘ２はどちらも一０（ＣＨ２）　ｎＳＱＭＩ（但し、
    ＭＩは水素又はアルカリ金属イオン又はＮル全示し、ｎ
    は２〜４の整数を示す。）を示すか、又はどちらか一方
    が−０（ＣＨ２）ｎ　Ｓ　０３Ｍ、（但し、Ｍ、　、　
    ｎ　Ｕ前記と同じ）又は−３ｏ３Ｍ２（但し、Ｍ２は水
    素又はアルカリ金属イオン又はＮＨ４ヲ示す。）全示し
    、他方が水素を示す。〕で表わされるトリフェニルメタ
    ン誘導体全発色成分として用゛いる過酸化水素の定量法
    。
  2. （２）　ペルオキシダーゼの存在下、発色成分を酸化発
    色させてその呈色を特徴とする特許請求の範囲第】項に
    記載の過酸化水素の定量法。
  3. （３）過酸化水素が、酵素反応により生成する過酸化水
    素である特許請求の範囲第１項又は第２項に記載の過酸
    化水素の定量法。
  4. （４）過酸化水素が、生体試料中の微量成分の定量に於
    て酵素反応により生成する過酸化水素である特許請求の
    範囲第３項に記載の過酸化水素の定量法。
  5. （５）生体試料中の微量成分の定量が、基質、又は酵素
    反応により生成した物質に酸化酵素を作用させ生成する
    過酸化水素を定量することにより行う生体試料中の基質
    又は酵素活性の定量である特許請求の範囲第４項に記載
    の過酸化水素の定量法。
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EP19890117475 EP0355864A3 (en) 1984-03-15 1984-06-12 Method of quantitatively measuring an oxidative substance by using triphenyl methane type leuco compounds as coloring matter
EP19840902363 EP0174371B1 (en) 1984-03-02 1984-06-12 Triphenylmethane derivatives and method for determining oxidative substances using them as color-forming component
DE8484902363T DE3483269D1 (de) 1984-03-02 1984-06-12 Triphenylmethanabkoemmlinge und verfahren zur bestimmung der oxydativen agenzien bei deren verwendung als farbstoffbilder.
PCT/JP1984/000305 WO1985003942A1 (en) 1984-03-02 1984-06-12 Triphenylmethane derivatives and method for determining oxidative substances using them as color-forming component
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01118768A (ja) * 1987-10-31 1989-05-11 Wako Pure Chem Ind Ltd 発色試液の安定化方法

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