JPS6018397B2 - Ｄ−グルコ−スをｄ−フルクト−スに変える方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ァクチノブラネス（比ｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ
）虜の微生物を培養して酵素を取り出し、この酵素によ
りＤーグルコースを処理することによって○ーグルコー
スをＤ−フルクトースに変える方法に関する。

フルクトースとは一般にグルコースよりも実質的に甘い
と考えられている。

しかし、グルコースは安価な材料から容易に入手できる
。それ故、グルコースのフルクトースへのコンパーシヨ
ンのための実用的で経済的な方法が望まれる。グルコー
スのフルクトースへのアルカリによる異性化は、収量が
低いか、３０％以上の高収量の場合は望ましくない副生
成物を生じる額向がある。このコンパーションを効果的
に行うためのアルカリの使用に代わるものは、酵素の利
用であり、経済的で効率的な方法により酵素を利用する
ために多くの努力がなされてきた。Ｄ−グルコースをＤ
ーフルクトースに変える一またはそれ以上の化学的中間
体（例えばＤーグルコースーホスフェート）を伴ういく
つかの酵素があるが、現在のところ実用的であるとは思
われない。直接○ーグルコースをＤ−フルクトースに変
える酵素が一層望ましいものである。多くのこれらの酵
素がラクトバチルス（凶ｃｔｏｂａｃｍ船 ） ゾ イ
ド モ ナ ス（ＰｓｅｕｄｏｍｏＭｓ）、パスツー
レラ（Ｐａｓｔｅ川ｅｌｌａ）、ロイコ／ストク（Ｌｅ
比ｏｎｏｓＫ℃）、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ）およびエアロバクター（Ａｅｒｏｂａｃ
ｔｅｒ）属の微生物から製造されている（ＢｉＭｈｉｍ
・Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ１５４、６７０一６８０〔
１９総〕のＹａｍａｋａによる論文参照）。上記の微生
物によって、多量のグルコースィソメラーゼが形成され
るためには、酵素を誘導するために生長線質中に、キシ
ロースまたはキシランが存在せねばならない。純粋なキ
シロースは、比較的高価であり、生成媒質中にキシラン
が用いられるときには、微生物は、キシランを加水分解
し得る酵素も生成せねばならない。キシロースまたはキ
シランを含む煤質中で微生物を生長させるために要する
出費を節減するために、酵素を継続的に生成する細菌を
得んとする試みが広く行なわれてきたり−（Ｌｅｅ）、
ヘイス（比ｙｅｓ）およびロング（Ｌｏｎｇ）（米国特
許第３６４５８４８号）は、アルスロバクター（んｔｈ
ｒｏ舷ｃｔｅｒ）属に属する微生物の特定の菌株が、キ
シロースまたはキシランの存在しない培地中で生長され
るときに、グルコースまたはキシロースを対応するケト
ースに直接変える酵素を生成可能であることを示してい
る。不満足なことには、生成されるィソメラーゼは比較
的少量であり、生長培地は、酵母エキスや肉蛋白質のよ
うな比較的高価な窒素源を必要とする。本発明の目的は
、グルコース異性イは酵素生産館を有する微生物を選択
し、この微生物から取り出した酵素によりＤーグルコー
スをＤーフルクトースに変える方法を提供することにあ
る。

我々は、アクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａ船ｓ）
属に属する微生物が、キシロースまたはキシランの全く
存在しない培地で生長されたときに、グルコースイソメ
ラーゼを生成し得ることを見出した。さらに、比較的多
量のグルコースイソメラーゼが、コーンスチープリカー
、塩およびタップ水（ｔａｐｗａｔｅｒ）からなる堵地
中で、アクチノプラネス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ）
によって生成され得る。

酵素は、高度の温度安定性を示し重大な活性の損失ない
こ、８０一８６０の高温が異性化に用いられ得る。全体
の細胞（ｗｈｏｌｅＣｅｌｌ）または細胞を含まぬ抽出
液（Ｃｅｌｌｆｒｅｅｅ丸ｒａｃね）が異性化を効果的
に行なうために用いられ得る。保存培養菌（ｓｔＭｋｃ
肌ｍｅｓ）は、通常、炭素、窒素（通常、コーンスチー
プリカー）および無機塩の源を含む堵地中で培養される
。接種（ｉ肌ｃｕｌａ）は１〜２日間、空気の存在下で
、ほぼ２５一３５℃で回転振とう機上で、この培地中で
有機体を生長させることによって行なわれる。３％から
１０％の最終容量の発酵材料（ｆｅ皿ｅｎｔｏｒ）を含
有する接種材料は、適当な発酵材料に含まれる鱒菌培地
に移される。

俊種された培地は、縄拝して１ザ０から４０℃好ましく
は２５０〜３０℃に保温さめへ（ｉｎｃ心ａｔｅｄ）１
〜７日の間１分間につき１容量の空気流を維持する。空
気流は、１分間につき０．３から１．５容量の範囲でも
よい。酵素の最大収量のためには、発酵の肉は６．０と
８．５との間、好ましくは６．４と７．５との間に保た
れるべきである。最大のィソメラーゼ活性は、これらの
条件下で、３日から５日後に得られる。ついで完全な細
胞が収穫されそれ自体用いられるが、酵素が当該技術に
知られている技術によって細胞から抽出され得る。培養
ブイヨン１ミリリットルあたり３■単位に近い活性レベ
ルが、３日後に得られる。活性の単位は、１分間に７５
℃で、１．８Ｍのグルコース、０．０３ＭのＰＨ７．０
におけるりん酸ヱステル緩衝剤、０．０脚Ｍの硫酸マグ
ネシウムおよび０．０００３Ｍの硫酸第一コバルト中で
、グルコースから１マイクｏモルのフルクト−スを生成
する酵素の童と定められる。本発明の実施において得ら
れるイソメラーゼ活性レベルは、用いられる個々の菌株
および生長塔地によって異なる。培養ブイヨン１の‘あ
たり５山単位の活性度レベルは、コーンスチープリカー
中で生長されたアクチノプラネスミズアリエンシス（Ａ
ｃｔｉ肌ｐｌａｎｅｓｍｉｓｓｏｕｒｉｅｎｓｉｓ）Ｎ
ＲＲＬ、ＮＲＲＬＢ−３３４２の場合に観察された。以
下の実施例は、本発明の実施を設明するが、発明は、こ
れらに限定されないことが理解されるべきである。特に
Ｘ線、紫外線の照射、化学薬品による処理等によって、
上記の有機体から人工的に生成される変種（ｎ山ａｎＧ
）は勿論、サブカルチヤー（Ｓｕ戊ｕｌｔｕｒｅｓ）、
自然変種、変体（Ｖａｒｉａｎｔｓ）等を含むことを意
図するものである。実施例 １ 本実施例は、多数のアクチノプラネス種、すなわちアク
チノプラネスミズアリエンシス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａ船
ＳｍｉＳＳｏｕｒｉｅｎＳｉＳ）ＮＲＲＬ Ｂ−３３４
２（工業技術院微生物工業技術研究所受託番号徴工研菌
等第７９３２号）、アクチノプラネスフィリッピネスシ
ス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａ肥ｓｐｈｉｌｉｐｐｉ肥ｎｓｉ
ｓ）ＡＴＣＣ１２４２７、アクチノプラネスアルメニア
カス（ＡｃｔｉｎｏｐｌａＭｓ ａｎｎｅｎｌａｃｕｓ
）ＡＴＣＣ１５６７６、およびアクチノプラネス種（Ａ
ｃｔｉ肌ｐｌａｎｅｓｓｐ．）ＡＴＣＣ２３３４２から
のグルコース異姓化酵素の製造を示す。

これらの微生物は、１．７％のトリプトン（Ｔｒｙｐｔ
ｏｎｅ）、０．３％のソイトン（Ｓｏれｏｍ）、０．２
５％のグルコース、および２．０％の寒天からなる斜面
上の保存塔地（ＳｔのｋＣ山ｔｕｒｅ）中に別々に保存
される。

接種材料（ｉｍにｕｌ山ｍ）は、微生物を保存培地から
１．７％のトリプトン０．３％のソィトン、０．２５％
のＫ２ＨＰ０４および０．２５％のグルコースからなる
８の‘の殺菌塔地を含む試験管に移して製造される。接
種材料は、この試験管中で、２８℃において２〜３日間
振とうしながら培養される。ついで接種材料は、グルコ
ース異性イ○酵素を生成するために、次の生長塔地（匁
ｏｗ仇ｍｅｄｉａ）の一つに接種される。培地Ｎｏ．１ トリプトン（Ｔｒｙｐｔｏｎｅ） １．
７％ソイトン（Ｓｏれｏｎｅ）
０．３Ｋ２ＨＰ０４
０．２５Ｄ−キシロース
１．０タップ水（ねｐ側ｔｅｒ）で、容積ま
で満たされる。

培地のＰＨは、約７．０に調整される。砂糖および他の
栄養素が別々に殺菌され、ついで混合される。培地Ｎｏ
．２ 培地Ｎｏ．１と同機に製造されるが、０．２５％のＤ−
グルコースがＤ−キシロースのすべてと瞳き換えられる
。

培地Ｎｏ．３ コーンスチープリカーからの培地の製造は以下に示す実
施例２に記載される。

培養の柵はすべての場合に７．０であった。他の適した
培地は、デイステイラ ーズソリユブル（ｄＭｉｌｌｅ
でｓｓｏｌ肋ｌｅｓ）、ベプトン酵母エキス、カゼイン
水藤物（Ｃａｓｅｉｎ ｈｙｄｒｏｌｙｚａに）、大豆
水解物（Ｓｏｙｂｅａｎｈｙｄｒｏｌ舵ａｔｅ）および
魚たん白質水解物（ｆｉｓｈｐｒｏにｉｎｈｙｄｒｏｌ
松ａに）を含有する。記載された培地の混合物も用いら
れ得ることが理解されるべきである。培養は、各々の接
種材料の５叫を２５０の‘のヱルレンマイヤーフラスコ
中でトリプトンーソイトン塔地の７５の【またはコーン
スチ−プリカーの９５叫に加えることによって始められ
る。細胞（Ｃｅｌｌ）は、２８瓜ｐｍで、Ｇ一２６ニュ
ー。プランスウイツク・サイエンテイフイツク・ジヤイ
ロータリー・シェーカー（ＮｅｗＢ【肌ｓＭｃｋ Ｓｃ
ｉｅｎｔｉｈｃ ＧｙｒｏｔａひＳｈａｋＭ）を用いて
振とうして、９筋時間２８℃に、保温される。細胞は、
１０分間１５００比ｐｍで培養物３０の‘を遼心分離し
て集められる。細胞は÷度タップ水（ｔａｐ側ｔｅｒ）
で洗われ、０．１２けりん酸ェステル緩衝剤（ｐＨ７．
０）の１４私中にけん濁される。細胞けん濁液は、つい
で、プランソンソニフアイアーＪ−１７Ａ（Ｂ松ｎｓｏ
ｎＳｏｎｉｆｉｅｒ Ｊ−１７Ａ）で４℃で４分間、超
音波をかけられ（Ｓｏｎｉ６ｅｄ）、５分間１５００仇
ｐｍで遼心分離される。上澄み液は、グルコース異性Ｔ
Ｑ酵素の粗源として用いられた。グルコースイソメラー
ゼの活性は、次のようにして測定された。２．加けグル
コース、０．００４Ｍ Ｍが０４、および０．０００４
ＭＣＯＳ０４溶液３．０の‘に、０．１２Ｍりん酸ェス
テル緩衝剤ｐＨ７．０の粗酵素溶液が、技終容積４．０
の‘まで加えられた。

反応は、７９０で行なわれた。試料（Ｎｉｑ肌ｈｓ）が
、１０１ふ ２０および２５分に採取され０．０班ＣＩ
中に希釈された。試料のフルクトース含有量は、ポゲル
（Ｐｏ袋１１）によって記載されているス カトールー
ＨＣＩ法〔Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１１：１４３（
１９５４）〕によって自動分析機で分析された。カラー
展開（Ｃｏｌｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）は、３７０
に対照させて５２０で行なわれた。グルコース異性化酵
素は、煩斜から計算され、単位（Ｕ）で表わされた。活
性度の単位は、７５℃で１分間に上記に示された条件下
で、グルコースから１マイクロモルのフルクトースを生
成する酵素の量を定められる。トリプトンーソィトン培
地またはコーンスチープリカ−中で培養後の各種のアク
チノプラネス極微生物によるグルコース異性イは酵素の
生成は第１表に示される。これらの微生物のすべては、
培地中のＤーキシロースの存在または不存在下において
、グルコース異性イＱ酵素を生成可能である。しかしＤ
−キシロースの存在は非常にこの酵素の生成を増大する
。

第１表 のアクチノプラネス種によるグルコースィソメラ−ゼの
生成比活性度Ｕ たんコーンスチーブリカーは、Ｄ−
キシロース不存在下で、グルコース異性イ捉酵素を生成
する培地として使用され得る。

グルコース異性化活性度の最も有効な生成は、アクチ′
／プラネスミズアリェンシスＮＲＲＬＢ−３３４２種に
よって示された。以下のすべての実施例は、この微生物
を用いて行なわれた。実施例 ２ コーンスチープリカーの製法は、アクチノブラネスミズ
アリェンシスを用いた酵素の生成に大きな効果を有する
。

コーンスチーブリカーの各種の中和法が調べられた。ア
ルカリでｐＨ７．０に中和後コーンスチープリカーは、
ろ過されて主として、フィチン酸ェステル（ｐｈｙｔａ
にｓ）からなるトルーブが除かれ、硫酸第一コバルトお
よび硫酸第二鋼をそれぞれ０．１ｍＭおよび０．０５肌
Ｍの濃度で添加して実施例１の方法に従って、培養に用
いられた。水酸化ナトリウムの使用は、石灰または水酸
化アンモニウムと比べて、第２表に示されるように最良
の酵素生成を示す。

水酸化カリウムも適したアルカリである。第２表 グルコースィソメラーゼの生成に関するコーンスチープ
リカーの中和剤の効果中和剤 酵素の生成Ｕ／の【培
養ブイヨン石灰 １７．２
Ｎ比ＯＨ ２３．３ＮａＯＨ
２７．８中和後のト
ルーブ（ＳＩＭ袋）の除去は、第３表の結果に示される
ように必要である。

コーンスチープリカーは餌７．０に中和され、１リット
ルのェルレンマイヤーフラスコ中で５００の‘とされ、
３％団体分とされる。固体パーセントの算定は、製造者
によって記載された最初の固体に基づいている。ろ過に
よって除去され得る固体は、最終の固体含量を算出する
ときに、考慮されない。コバルト塩および鋼塩は上記の
ように加えられた。細胞は大気温度で４日間２８比ｐｍ
でニュー・プランスウイツクＧ−５３辰とう機（Ｎｅｗ
Ｂｍ船ｗｉｃｋ Ｇ−５＄ｈａｋｅｒ）を用いて培養さ
れた。第３表 実施例 ３ 微生物によって生成されるグルコースィソメラーゼの量
は、第４表に示されるように培地中に存在する有機窒素
源によって影響される。

第４表のデータは、Ｇ−２５ニュー・プランスウィツク
振とう機（Ｇ−２５ＮｅｗＢｒ皿ｓｗｉｃｋＳｈａｋｅ
ｒ）を用いて２８℃、２８０ＲｐＭで、３日間２５０の
‘、のエルレンマィヤーフラスコ中でブイヨン１００の
‘中の微生物を培養して得られた。有機窒素固体のレベ
ルは２％に調整され、中和され、ろ過され、グルコース
２５０の９、Ｋ２ＨＰ０４２２ｍｃ、およびＭ＄０４・
７日２０１１赦が加えられ、タップ水（松ｐＭｔｅｒ）
で容積まで満たされた。培地は、１筋ご間１２１℃で殺
菌された。細胞が採取され、超音波をかけられ（Ｓｏｎ
ｉｆｉｅｄ）酵素の活性度が測定された。

結果は、培養ブイヨン１ミリリットルあたりの活性度の
単位として表わされている。コーンスチープリカーは、
最大の活性度を示し好ましい有機窒素源である。第４表 グルコ−スィソメラ−ゼの生成に関する有機窒素源の効
果実施例 ４酵素の生成のための中和されトループの除
去されたコーンスチープリカーの（固体としての）穣週
の濃度は、第５表に示されるように３％であることが見
出された。

濃度は、培地の０．５％から約７％まで変り得る。培養
条件は、堵地がグルコースを含まず、ＣＯＳ０４・７４
０２．５ｍ９を加えられていることを除いて実施例３に
述べられたとおりである。細胞は、４日間培養され、採
取され、そして実施例１の方法に従って分析された。第
５ 酵素の生成に関するコ−ンス − 。

ｌカーの濃度の効果 実施例 ５ アクチノブラネスミズアリエンシス （Ａｃｔｉｎｏｐｌａ肥ｓｍｉｓｓｏｕｒｉｅｎｓｉｓ
）からのグルコースィソメラーゼの生成に関する各種の
炭水化物源の効果が試験された。

穏やかな刺激効果がフルクトースの場合に示された。培
地の約０．１重量％から２重量％のフルクトースが、フ
ルクトースが加えられる場合の好ましい範囲である。第
６表のデータは、３％のコーンスチープリカーおよび他
の栄養素を含有する培地に単位容量あたり０．２５重量
％（０．２５％Ｗ／Ｖ）の炭水化物を添加し、実施例１
の条件によって得られた。第６表 酵素の生成に関する炭水化物の効果 炭水化物源 酵素活性度Ｕ／の‘培養液なし
２８．０Ｄーキシロー
ス ３０．００−フルクト
ース ３５．２０ーガラクト
ース ３１．５第６表に示されるよ
うに、Ｄーキシロースはグルコースィソメラーゼの生成
に必要でなく、その温和な刺激効果はその使用を商業的
に正当化しない。

実施例 ６ アクチノプラネスミズアリェンシスの渚地への各種の金
属イオンの添加は、グルコースイソメラーゼの生成に影
響を与えることが見出された。

細胞は、第７表に示される個所にのみ追加の塩が加えら
れることを除いて３％のコーンスチープリカー中で、実
施例４の方法に従って培養された。第７表アクチノプラ
ネスミズアリエンシスからのグルコースイソメラーゼの
生成に関する金属イオンの効果追 加 酵素生成
Ｕ′の【培養ブイヨンなし
２２．８Ｃ。

十十（０，１肌Ｍ） ２７，３
ＣｏＨ（０．１肌Ｍ）Ｍｇ十十（０．４５ｍＭ）
２７．０Ｃ。十十（０，１肌Ｍ）ＣｕＨ（０，０５Ｍ
Ｍ） ３０，０約０．０５ｍＭから約０．５ｍＭ
のコバルトイオンおよび約０．０１のＭから約０．１ｍ
Ｍの銅イオンが加えられ得る。実施例 ７ グルコースイソメラーゼの生成は、培地の最初の柵によ
って影響されることが見出された。

第８表に示されるように最適の最初の恥は、７．０であ
ると見出された。培地はＮａＯＨでコーンスチープリカ
ーを中和し、ろ過し、ついで所望の餌に調整して製造さ
れ、実施例４の条件に従って用いられた。第８表 酵素の培養および生成に関する培地の 最初のｐＨの効果 たん白質の測定は、ローワＩＪ−（ＬｏＭｒｙ）（Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９３：２６５〔１９５１〕）の
酵素抽出液に関する方法によった。

実施例 ８ アクチノプラネスミズアリェンシスは、広い温度範囲に
わたって、培養しグルコースィソメラーゼ活性度を生成
することが見出された。

第９表に示されるように、技通の培養温度は２８℃であ
ることが見出された。

第９表のデー外ま実施例１に記載されたコーンスチープ
リカー塔地中で２−４日間、１が０一４５℃で微生物（
ｍｉｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍ）を培養して得られた。
第９表 酵「の生、Ｋ する塔 温 の効果 実施例 ９ アクチノプラネスミズアリヱンシスＮＲＲＬ ８−３３
４２からの酵素の生成は、自動ｐＨおよび泡制御を備え
たニュー・プランスウイツクＭ『１１隻塔酵器（Ｎｅｗ
Ｂｍ船ｗｉｃｋＭＦＩ１４ｆｅｒｍｅｎのｒ）中で行な
われた。

１０リットルの培地が、ＮａＯＨでｐＨ７．０に調整さ
れ、ろ過され、タップ水（ｔａｐ肌ｔｅｒ）で一定容量
にされたコーンスチープリカーを用いて製造された。

充分なコーンスチーブリカー（固体５０％）が用いられ
て、４％の技終濃度とされた。最終の固体含有革算定の
ときには、中和およびろ過の際の固体の損失は考慮に入
れられなかった。培地は、０．１ＭＭの硫酸第一コバル
トおよび０．０５ｍＭの硫酸第二銅が加えられ、３ひげ
間１２１００で殺菌された。培養は、２Ｍの日２ＳＱの
自動的添加によって軸７．０に制御され、３０ＣＯで５
日間行なわれた。鯛拝は２０皿ＰＭとされ、通気は１分
間につき１容積とされた。発酵は、同じ塔地かち得られ
た２独時間後の接種材料の１０％の添加によって始めら
れた。培養期間の終りに、培養ブイヨンは、１ミリリッ
トルにつき５母単位の活性度を含有した。実施例 １０ グルコースのフルクトースへの異性化は、全体の細胞（
Ｗｈｏｌｅｃｅｌｌ）または細胞を含まない抽出液（Ｃ
ｅｌｌｆｒｅｅｅｘｔねｃｔｓ）を用いて行なわれ得る
。

舞性化の餌は約５５から約９まで変り得るが、第１０表
に示されるように最適の餌は、７．０であることが見出
された。酵素は９０℃で感知される活性度を残留し、非
常に温度安定性を示す。これらの実験に用いられた酵素
は、実施例１に記載されたＤーキシロースを含まぬトリ
プトンソイトン培地中で培養されたアクチノプラネスミ
ズアリェンシスから誘導された。酵素活性度は、実施例
１に記載された方法に従って製造された粗酵素溶液１の
‘あたりの単位で表わされた。実験の条件は第１項長の
ような所望のｐＨを得るために適したりん酸ェステル緩
衝剤が代えられ、または第１１表のように温度が代えら
れた以外は、活性度分析の条件であった。第１項長のデ
ー外ま非酵素コンパーションに直されている。グルコー
ス濃度は、約１．皿Ｍより大である。第 １０ 表 グルコ−スィソメラ−ゼの活性度に 日のＬ 第１１表 温度の函数としてのグルコースィソメラーゼ活性度温度
℃ 活性度 Ｕ／似 ４０ ４．５ ５０ ９．１ ６０ ２０．７ ７０ ４３．５ ７５ ５７．５ ８０ ７４．５ ８５ １２７．０ ９０ １班．７ 実施例 １１ 二価の腸イオンが、上記の実施例のために製造されたグ
ルコースイソメラーゼの活性度に強い効果を有する。

最も強い効果は、マグネシウムとコバルトについて見ら
れる。第１２表および第１横長‘ま細胞を含まない酵素
エキスＣｅｌｌｆｒｅｅ ｅ舵Ｍｍｅｅ幻ｒａｃｔ）に
マグネシウムを添加した結果を示し、コバルトによって
付与された活性度の上昇を示す。二価の腸イオンの濃度
を除いては分析の条件は、活性度分析のために記載され
た条件である。ＭｇＨは０．１のＭから約９ＭＭの範囲
で、好ましくは０．３ｍＭ加えられる。ＣｏＨは約０．
５ｍＭから約０．６ｍＭ好ましくは０．１から０．３ｗ
Ｍ加えられる。第１２表グルコース異性化酵素の活性度
に関するＭ〆十の効果ＭｇＳ０４の濃度（ｍＭ） 酵
素活性度Ｕ／似０ ４．８
０．５ ２５．０１．０
４１．２２．０
４４．３３．０ ４
３５４．０ ４３５第１３表 ３．０ｍＭのＭｇＳ０４存在下のＣｏ＋＋濃度の函数と
してのグルコースィソメラーゼの活性度ＣＯＳ０４の濃
度（ｍＭ） 酵活性度Ｕ／泌０
４４．００．２ ４９
．００．３ ５４．００．４
５４．０実施例 １２完全
な細胞（油ｏｌｅｃｅｌｓ）（ァクチノブラネスミズア
リェンシスの振とうフラスコ培養からの湿った細胞１．
８のが、単位容積当り６の重量％（６０％ｗ／ｖ）のグ
ルコース１００のＺ、１８のＭのＣｃＳ０４２の【、０
．２ＭのＭｇＳ０４２泌およびｐＨ７．５の０．３２Ｍ
のりん酸ェステル（ｋ）緩衝剤１０私、にけん濁され、
４時間７５℃で水浴で保温された。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 培地において、アクチノプラネス （Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ）属に属しグルコース異性
   化酵素（ｇｌｕｃｏｓｅ ｉｓｏｍｅｒｉｚｉｎｇ ｅ
   ｎｚｙｍｅ）生産能を有する微生物を培養し、グルコー
   ス異性化酵素を取り出す工程と、このグルコース異性化
   酵素によりＤ−グルコースを処理する工程とを含むＤ−
   グルコースをＤ−フルクトースに変える方法。