JPS60177264A - 多価抗原の測定法及び測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明（は液体試料中の多価、すなわち少なくとも二官
能性りがンド（抗原）の免疫化学的６１１＋定法に関す
る。

従来技術 異なる抗原決定因子に作用する二Ｊｊの抗体ケ使用する
多価抗原（ペゾチド、蛋白・ｌイ）の４故な測定は例え
ばＪ、　Ｃ１１ｎ、　Ｏｈｅｍ、　０１ｉｎ、　Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ。

第１８巻（１９８０）１ソ７〜２（Ｊ８貞７Ｊ）ら２座
ラジオイムノアツセイ法（２−５ｉｔｅ　ｉｍｍｕｎ。

ｒａｄｉｏｍｅｔｉｓｃｈｅｒ　Ａｓ５ａｙ）もしくは
２座目学搾６イムノアツセイ法（２−５ｉｔｅ　ｉｍｍ
ｕｎｏ　ｅｎｚｙｍｏｍｏｔｒｉｅｃｈｅｒ　Ａｓ５ａ
ｙ）として公知である。最もしばしは行なわれるのは、
１ずｎ（１３定すべさ抗原を好適な１１体材料、例えば
セファロース、アガロース、フ０ラスチック管等への結
合により同相に存在する。ｐ、　１の抗体と共に恒温保
持することにより該公知測定法全実施することである。

この第１の１恒温保持の間に一般に大過剰で存在してい
なけれはならない第１抗体が測定すべき抗原の１つの抗
原決定因子と結合する。次いで、同相から試料ｔＬヶ常
法で分離して、引き続く第２の４１．Ｌ　ｊ晶保持にお
ける非特異な物質、レリえは人血清たんばくもしくは交
差反応性抗原による妨’？５Ｆ　Ｆシャットアウトする
。次いで液相中の標識した第２の抗体の一定叶全同相と
共に恒温保持する。この際、第２の抗体の特異性が、測
定すべき抗原の第１の抗体とは異なるもう１つの決定因
子に作用し、これによりＩｌｌ定すべき抗原の同じｂ’
ｒ合立に＋５’Ｊ　して両方の抗体同志が競合しないよ
うに第２の抗体の特異性ｔ　ｙＩＵ択するのが有利であ
る。なぜならば、こＶノことによりテストの感度が影８
４ｔうけるためである。この第２の直温医伯の間、同様
に過剰に存在する第２０標識した抗体は測定すべき抗原
の分子の全結合位と反応する。第２０直温保持の後、標
識物質の活性は同相又は上澄で測定される。この１祭、
辿常測定は准相全洗出しだ後同相に関して行なう。

この除、測定した活性が測定すべき抗原の量に１１ぼ比
例しているのが治利である。

この２工程サンドイツチ法は、」場合により交差反応性
抗原がすでに第１の相分ｈｉｔの際に除去されるので有
利である。高感度が安来されるので、両方の抗体が本当
に異なる特異性葡有していなければならないテストシス
テムにおいて、Ａｉｌ記のことは特に重要である。この
場合には両方の抗体の１方に関してのみ、怖い特異性の
侠来があり、１１１Ｌ方は交差反応性抗原に対し完全に
特異性である必要はない。

しかしながらこの方法は６つの犬へな欠点勿有する。

１　第１の恒温保持工程において１方の反応成分は同相
であり、他方は浴ＩＩイしている。１１１ユつて、反応
の速度定数は両方σう反応成分（抗原及び２ｉ％’　１
抗体）が（ｇ　Ｐｉｉしている場合より小さい。

しかしながら、結合していない抗ＩＪ８ｔは相分ｇ］１
のローに除去され、結果ｅこ、；鵠、ルが生じるので、
すべての抗原分子が固相にＰｉｉ合して存在する壕で１
亘１＋’＋古物冒寺？イ丁なわなければならない。

２　’３ｊＬ原ＶＣ特異的に結合性の抗体の同相への結
合は、ｑ；かな結合収率のために比較的多量の第１抗体
を必要とするが、この抗体は多くの場合−ＩＩＩＥ　、
・；？に＋ｔ％　＋１１１１な′１≧グ！まであり、９
９にシト￥１１生という理由から小さな祷向、１タリえ
ばボ兎、モルモット等に抗血（１゛？金・洩イ：）シな
ければならない３局合は高価であ５゜更に固、１１１へ
の請合反応の隊に抗体へσノ硯和性低下が生じ、このこ
とは感鹿にマイナスに死’ｒｌする。

６　回じＩ＞’１．原にズ・１して元な５特異性ｒ偶す
る２（・ｕの抗体電・洩刊トすることは、例えば２４！
１の異なる１；山十・）ｊ４申で免役１ヒするか、又は
１４！ｊｌのＩＩＩＩＪ　ｑ勿からσノ仇体：ｊｉ、’
、団忙測定すべき抗原への兎凝吸４ｊにより好１１ζな
フラグメントに分離することにより、一般ＩｔＣｔｔ用
がかかり、かついろいろ限定されてのみ可能である。

ＡｉＪ記欠点？！−眠りｍ’；　＜ためにすでに多くの
こころみが公り、１１である。こうして、米Ｉシｉｌ　
’Ｉ’＋、Ｆ許ｉル４０９８８７６号明δ４］１代、に
よれば、Ｊ冗原σへ（５１の同温保持を洛げｔしたアイ
ソトープ標識１ヒＪｉ’＋休と共に行なう。七の後はじ
めて固相精舎４几体忙姫加し、第２の・）４７１．１１
保持忙行なう。ここでは１回の相分ｐａｉｌのみが必要
でおり、このことは感１支及び実用性のある程度の上昇
７もたらす。しかしながら、両方の抗体が抗原に対し高
い特ｙ４　ｉ’ｉ　缶有していなければ多ト七の交差反
応性抗原の存（Ｅにおいて、ｄ１１］定すべきσＬ原の
見かけの（震１文は第２の抗体のあるいはありうる非ｑ
！ｆ−１′４性において高められ、第１の抗体の非特異
性において１・けられるので特異性の問題はまだｊ弄決
烙れずシて残っている。

西ドイツ国特許公開第２９２５５６５号公Ｙにには、同
相中に存在する第１の抗体及び俗＋１１１４１した第２
の標識比抗体金同時に抗原と恒ＬＡＡ保持する方法が記
載されている。ここでも前にりｔけた方法におけると同
じ間＋ｔ’ｔ’ｌがある。史ＶＣ１基ｉ婿となった方法
に１ヤ１してｆｊｉｌ記の欠点の２及び６もオくμ１１
１決のＩ捷筏る。

’ｌ！ＦＩＧ１１ｉ百５６−１２３８０２号公報には、
測定すべき抗原とη）゛ｆ合性である、ｊ４’ｒ２の抗
体に対してｌｉｒ、′４的に４’を用する１ｉＩＪｌ相
−抗体が１史用される方法が記載されている。ここ、で
は抗原に作用する抗体のｌｉ’ｄ　Ａｔ１への結合は回
ＩＩ＋！はれる。しかしながら、ｆ’Ａ：ｌ唄と１ｔｊ
７　ｘ゛４的に結合性の抗体唯−柚全１史用するので感
度は低下する。ｍｌり定すべき抗原の病ＩＷ測測定抗原
及びアイソトープ標識化抗原の一定・１ｔとＩｔ（？異
的な抗体との競合反応にエリ行なわれる。

ヨーロッパ′１′ｒぼ＝「公開第１０５／’１４号公報
には、同相抗体で８なくとも１方がモノクロン抗体でな
くてはならない更に二種の抗体と一１ｔ’ｉにザンドイ
ツチ原屑！によるづ元原測定に使用することが記載され
ている。この除、抗原全光ず液相中に存在する抗体と、
次いでトデ１相抗体と直温保持する。該方法＆Ｊ：目動
比會妨沓する２回の直温保持工８？ｒ：必要とし、長す
ぎる恒湿保持時間に導びき、かつ布釈なしの試料α）使
用は計明されないという欠点を有している。類似の方法
はクリ二カ／ｌ、−ケミストリー（ａｌｉｎ、　Ｏｉｘ
ｅｍ、）　ｉｌ、　２７部６巻、１９８１年、第８２６
〜ｄ　２７　ｖｉにも公知である。そこにはクレアチン
キナーゼＭＢ−イン酵素に関するラジオメトリー副定法
が記載されてお９、この方法においてｒｉ第１の恒１１
Ｍ保持工程中で該抗原を同時に異なる時〕゛４法で、か
つ異なるｌ１ｉＩＩ物種からの未標識及び標識化抗体と
反応させる。第２工程においては第１の！亘温保持工程
の未標識抗体に対して特Ａ社ケ有する同相中の抗体に’
ｆｉ加する。この方法の欠点は、再び抗原に特異性の二
種の兵なる抗体及び三４１１１の異なる劾物柚？必吸と
するということである。

つろ男が解決しようとする間屈点 従って、本発明の課題は基１鑓となる方法の前記の欠点
の１つ以上を従来の公知法より良好に１褐避することで
ある。特に、＋１山−ＩＪの１亘７品保持が必俣でおり
、抗体３−液イ目でＬｆｌ≦加する心安がなく、自動比
に好〕・１（であり、かつ高い感度と４？ｊ　Ｉｆｔイ
１する方法ｋ　ｆｋ供することである。更に、該方法は
場合により必要な抗体の幾ｍのために唯一の・Ｈ）１物
４！１・でも足りるか、もしくは抗ＬＴ［Ｌ醒独得のた
めに大きな・’＋ｄ）　ｉｌ勿を１史用することができ
ること？ｒ：ａＪ能とするのが艮い。

１）”４照点’ｒ：Ｍイ決するだめの手段本発明の課１
？αはｂ（１１及び第６レセデターは液相中に溶用して
おり、これらは抗原と結合性でおり、＠２レセゾターは
固相中に存在し、第ルセデターの１部とのみ結合性であ
り、第６レセデクーは標、・１ｔを竹しており、かつ第
１及び第２レセプターと交々反応しない、５神の異なる
レセプターと共に惧温保持し、液相から同相を分離し、
相の一方の賀Ｊ　＋ｌｉｋ　ｋ　６＋１１定することに
より多価抗原全測定するだめの方法において、抗原を陰
有する溶液と、第１及び第６レセゾター全溶醇性の形で
言置又は凍結乾燥して有する巣１の固トド社１体材料と
ｔ−緒にし、これらレセゾターが浴１仔した後得られた
溶液と、第２レセフ０ターを非溶解性の形で有する第２
の固体担体材ネ」とをすぐに接触させ、その後固体担体
材料から液体を分離し、標識全測定することを特徴とす
る多価抗原の測定法により解決する。

本発明においてＶセプターとしては特異的に結合性の完
全抗体（ポリクロン又はモノクロン）、七の抗体フラグ
メント、又は抗体又は抗体フラグメントとハシテン又は
抗原との０１合体である。第ルセデターとしては先金抗
体、又はハプテン又は抗原と結合もしくはこれらで標識
した抗体又は抗体フラグメントラ１史用するのが有オリ
であり、背にそれぞれモノクロンの抗体が有利である。

箱２レセプターとしてはｉＢ　ルセフ０ターの１部とだ
け結合性である抗体を使用するが、特に第ルセゾターの
Ｆｃ部とのみ結合性＋ｔｌｓある抗体が有利である。第
２レセプターとして第２レセフ０ターのハプテン部又は
−１７＋、原部とのみ特異的に結合性である抗体を１史
出してもよい。肉す２レセプターは免反グロブリンのＦ
ｃ部に対しても一般的に作１１１シてもよい。

、Ｉ５２レセプターと父差反応をしてはいけない・■６
レセプタ〜は信！　ｔｉ＋ｉζ比した、抗原と４．）合
性の、帛ルセデターとは異なる動物４」から得られた抗
体であってよい。

しかし、ＨＡ　ｓ　Ｆａｂ−フラグメントである第６レ
セプ゛ターｆ１吏用丈るのが有利でおる。この際、本４
１．明においてＦａｂ−７ラグメントとは（Ｆａｂ）２
及びＦａｂ’−フラグメントであってもよい。この場合
には第ろレセフ０クーは第ルセデターの抗体成分部分と
同じ動物種から得られてよい。このこと＆−、、Ｌ　、
　ｊＪ’、　ルセノ９ターがハフ０テン又Ｖ」抗原て４
１する抗体からなり、かつ第２レセフ０ターかこのハプ
テン又は抗原とのみ結合性である蛎６ｖＣも同じである
。将にイ］利であるのはフ；シろＶセｊ゛タ〜が第ルセ
ゾターの１部、！侍にＦ’ａｂ　−７ラグメントである
。弔３Ｖセデターとして第２レセプターと同じ（、ｙｂ
物槻由来の抗体を１・ｉｌ　ｉｌｌするとともできる。

前記の２つの方法においてｒ＝：ろ惺のレセプターのた
めに２４４の動物４重のみが必要であるという利点があ
る。第２レセゾクーが第１Ｖセプターのハシテン又は抗
原とのみ結合性である椀合、３　Ｏｌすべてのレセプタ
ーのために唯１棟の両物標〃ｓ必要でらるにすぎない。

第６及び第ルセプクーがモノクロン抗体、もしくは抗原
の榎々の又は／かつ反・４性の決定因子に作用する前記
モノクロン抗体のフラグメントを含有しているのがイｊ
利である。

第６レセデター金検出すべき抗原のｈｆより多量に使用
するのが有利である。この場合、すなわち過剰の場合に
は正錐な投与ｈｒもしくは止ａ（＋ｉな公知％°は心安
ではない。第６レセプターは専門家に公知の方法で標識
される。す≠素、′市光物賀、化学発光性物質又は放射
性物質と結合させることにより標識は行なわれる。こり
確のレセプターの標識化法はＬ４門永には公知で、あり
（例えば、０１ｉｎ、　Ｃｈｉｍ、　Ａｃｔａ第８１　
Ａ、　（１９７７年）、第１〜４Ｄ貞）、ここではこれ
以上の底明は省略する。

第１及び第６Ｖ七７°ターは溶解して、好適な４１４体
伺４・１上、１９すえば吸収性の紙片上に担持させ、１
＞Ｚ４又（・１凍結乾繰することにより、容易にそこか
らＣ（β１１口」能な形にする。

同相中に存在するト１）２レセデクーの不浴性担体拐斗
１への結合は常１１」の、生物学的に活性な末日１’ｔ
　ｋ固体１１］持南゛ＩＩ］、に固定するために冑−門
ばに公９、ＩＩの方法にエリ夫り似する仁と〃・できる
。共有結合でも、吸ｈ：：（＋話合でも好増である。し
かし、この１も：達成川面な、１収率及び容易な作−に
法のために、′ρ１１えばプ゛ラスチック又は例えば紙
のようなフリースへのた／この吸′２．イ結合が；ｈ　
４すでｈ　’５　。

好適であるのは、例えば内部、ｊ：（而Ｖこ’Ｉｆｒ　
２レセプクーが吸六的に破澱されているポリスチロール
及びり・１似りソ０ラスチックからなる試；横′Ｃｆで
ある。

仄いで、・１１μ扁保持（Ｉ″該イ中で、又は異なった
形の拝器甲で実施し、次いで相分離のためには例えば吸
引するか、又は芥器荀かたむけて流し出したりすること
により青から液相ｋｉ＊去するだけで十分である。・Ｈ
の洗浄後、鳴に酵素で＃識が行なわれている時にすぐに
標識の測定を七の中で行なう。その除、標識酵素、例え
ばペルオキシダーゼ又はβ〜がラクトシダーどのと古注
をこのために一般的に公知の方法で単に測定する、すな
わちこの標識酵素のために公知の、湧出試薬、例えは呈
色試薬を添加し、同相の存在で、又は分離後に１ｌｌｌ
ｊ定するだけで十分である。測定した４累活性は測定す
べき多官能性抗原の量の尺度である。しかし、第２ンセ
プターの固相担体としては碗子状物賀、ｔ；ＩＪえばイ
オン交侠８１脂、モレキュラージーブイ＝料、ｙｆシラ
ス１′立子、テラスチックδ等を挙けることもできる。

第２レセソ０ターの担体としては多孔質、シート状和体
例えば紙が有利でおる。

村パｋかｆＦ′ｆ−素でｔゴなく、放永付１王・吻ｊ直
、アイソトープ、蛍光物實又ｔよ化学麓元性！ｌ；７１
負で行なわれる場合にも、専門家に公知な方法の１方法
で実施される。従って、このｆｆ１ｌｌ定法はここでは
ν（り愛する。

本発明の特に＋Ｊ利々行Ｉ救としては、該方法の実施の
ためには試イ・Ｆ成金希釈しない形で、例えば面数、血
漿又は直情゛として１史用することができ、第１の相体
材料と共にｊｊｊｊ方のレセゾターが溶Ｉｌｆするため
に十分なｌｌ：ｊ間保有し、次いで分１４１１し１．ｊ
ｆ　２のＩ旦体拐料と共に恒温保持全行なう。

第１の相体材料とＶ）接触時間は一般に約１０秒〜１０
分間の間である。このためには西ドイツＬｌｊ＋特許公
ｆ；ｉＪ第３４２５０．０．８号公報中に記械されてい
る装置〆ずｌ上で実ｈ；１．するのが有利である。

本発明により通常？、　Ｓ、される２工禅サンドイツチ
法や１工程サンドイツチ法におけるより明らかに高い感
ｌ租が達成されることが判明し、このことは予想外のこ
とであった。

本づＩＣ明の有利な実が（１形によれば、第２レセプタ
ーのＦｃ一部に対して、又は第ルセゾターと結合してい
るハフ°テン又は抗原に対して１・［用する第２レセダ
ターｋ　ＢＱ用する。こうして、第ルセグターの結合位
と抗原との結合反応の際に１局舎により存在する立体障
害が回避されるのでｌ＋＆　度に史に上・注させること
が達せられた。このことは抗原が牛ｒに低い４度で測定
されなければならないような場合、例えば血清中のチレ
オトロピンの測定の場合は特に有利である。

本発明のもう１つの＋渫ｆ！堰は、 ａ）　２つの異なるｍｍ性の、抗原と結合性である第１
及び第６レセゾターで首でシした又はこれらと凍結乾燥
した、第６レセプ′ターが標＋１ｆｉＩＳｋ有する第１
の固体担体材料及び ｂ）可溶性の非標識第ルセグクーの１部との＋結合性の
不溶性紀２レセゾター【ざ有する、第１の担体材料とは
物理的に分離して存在する第２の一体担体材料からなる
が、但し停止域ｒヒ第６レセゾターはＦａｂ−フラグメ
ントである多価抗原の６ｊｌｌ定乾燥試系である。

物理的分離は例えば不溶性の第２レセプターと可溶性用
１及び第６レセデクーｋ　ｈｒＩ　して担体材料上に担
持させることにより行なうことができる。このことは第
ルセゾクー及び硝６レセプターを同時に又４″ｊ、順次
好虐な寸具体（例えは、）０ラスチツクＨ又は吸収性担
体、ｆ／ｌ）えば厭又は類似のもの）中又は上にＡ　結
＃、保するか、又は８浸させ、・（ち２レセプター會好
適な担体（例えばグラスチックｆ−１’　％　Ａ’ｉｉ
：又は粒状物）に吸着的又は共有的に冶゛１合させるこ
とにより達成することがでへる。測定すべへ多抽抗原金
言有する試料全売ず、Ｉｉ丁ｒｄ性のｔイ〉ルセゾター
及び′ｆ、５レセゾター忙′δ・ｆｌ−する→−１１休
１と、次いで不尋性メ）４２レセフ０ターが１・“・１
定さシしている相体２とラフ２、触させる。１１１３０
方法によれは、相互に結合した担体上に一方では第１及
び第ろレセｊターか、１Ｎｌ方ではＩ−：”ｙ　２レセ
ｆターが、自在してもよい。これは例えばＬ／セデター
４７％３る、相互に離ｎた位Ｉλに菖゛イ了する。１代
テープからなる。

７゛イシ　１　リノ　１ｆ　４Ｉｊ　な　実ｐｉ例　Ｖ
こ　エ　ノｔば、本つ色明　に　よ　、６試・：ｓ　ｖ
ｘ　（Ｊ’Ｃ体である第ルセグター及び１７ｐ系標識Ｆ
ａｂ−フラグメントで句る弔６レセデターτ含、打して
いるととて性向とする。媛尚剤がｒｉに業標、・１ンＶ
ハｔＩす走用システム金片有するＶ）がづＪ利−Ｃある
。

小元明による２、べＩ≦のもう１つの有利な実施形に、
Ｃわ、ば、’４＜　１及び第６レセ７°クーはモノクロ
ンであり、抗原りγ４なる決定因子に作用し、同じ＋Ｉ
Ｊ　′１勿イ車から由来する。

本づｒ、明による試薬のもう１つの０＠利な実施形によ
れば、第２レセプターがｒ５　ルセゾターのＦｃ一部に
対する抗体であり、第６レセフ０ターは４へ２レセプタ
ーと同じ１６１１勿神から由来し、これに対し紀ルセプ
ターはイ也のｌｌ１ｂ−瀕４【Ｉ【から由来する。

本発明による拭桑のもう１つσノ有利な実施形によれば
、６神すべての抗体は同じ勤！／ｌ柚からの抗体金含有
し、第２Ｖセゾターはハプテン標陣化モノクロン抗体で
あり、第２Ｖセゾターはり４１Ｌ／セゾターのハゲテン
に作用する。

本発明による試薬の第ルセゾター及びな）６レセデタ−
Ｑ工固体且４体利をｌ上にさ凝又は凍結乾・：Ｎユされ
て存在する。

木兄１工１」は少なくとも二種の４７Ｌ原決定因子を有
するＪ−べてのイ九加のＲ１１ｌ　ンεに幻り＋？４で
ある。このための例はナレオトロビン（ＴＳＨ）、α−
１−７エトプロテイン（α−１−Ｆ’ｅｔｏｐｒｏｔｅ
ｉｎ、ＡＦ’Ｐ）、ｈｃｕＸＩｌｓ／：ｉＥ、勘楠ＤＬ
加、黄体化ホルモン（ＬＥ）、卵胞刺−ホルモン（セ゛
Ｓ月）、１ｊ２−ミクログロブリン、岐注０す立腺ポス
ファクーセゞ、プロラクチン、フェリチン及びインシュ
リンである。

不兜明にお（・て、兇ルセプタ〜はりしＪＭと均賀に反
尾、′する。ｔＬって、この戊比、は固相結合不陽性第
ルセプター乞１５Ｉ傅４ｊｉ−る楊台より市い反応坪度
定叡をイ１１−る。固相への固定（不凝社化）において
抗１７１−類失が回通−されるので、第６レセゾターの
知、は史に臥少する。クリニカル・ケミストリー（Ｃ１
ｉｎ、Ｏｈｅｍ、　）第２７７６巻（１ソ８１年）中に
６己載されている力紙とは異ｌより、第１及び第６レセ
７″ターは２個の異なる動物４里からル侍する必女はな
（、これらのレセプターを、第２レセプターは第ルセグ
ターとのみ反応し、第６レセゾターとは反応しないよう
に退択１−る必安かある。

同−動物種から第ルセプターのための、および第６レセ
プターのための抗体を獲得づ−ることは抗面清娩侍のた
めに大きな劫物乞駒用することをも口Ｊ能とする。史に
、不兜明により感度も上昇１−る。こうしてＴＩＫ開し
て４　［３ｐｙ／　ｔｎｅ（１μＵハ１７　［Ｊ　ｐＶ
ゴ）より少さい感度か見い出され、１方２ｂ仝アンセイ
（サンドインチ汰）においては菖反は１θＤ　ｐｙ／ｍ
ｌ乞越えて（・た。

実施例 σ（に本発明ビ夾施例により静祝する。

例　１ チレオトロビン（ＴＳＨ）のｍ１１厘 第ルセプター及び第６レセプターは１６ノーの動物種（
マウス）に白米し、第３レセプターは標録したＦａｂ−
７ラグメントである。第ルセプターはモノクロン抗体で
あり、第６レセプターのＦａｂフラダメントもモノクロ
ンに坏に白米するか、これは第ルセグターのモノクロン
抗体とは異なるＴｌの次廼因子に作用１−る。第２レセ
プターは羊に白米し、マウスのモノクロン抗体のＦｃ郡
に対して作用する。

モノクロン抗体の形Ｗはクーラー及びミルシュタイｙ　
（Ｋｏｅｈｌ’ｅｒ　ｕｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ）の方
法（”ｈｏｕｒ　。

Ｊ　、Ｉｍ１＋１ｕｎ０１．’、第６春、２９ンｊｉ（
１９７６年）〕？こよりイ丁なう。

ａ）本丸り」による舐綴３ｘ作 試柴　： １、　恒扁保灼駁偵」牧（ＩＰ）： リ　：／−３−ヲー　ト　リ　ウ　ム　猛１虫Ｉ敢　１
５　ミ　リ　モ　ル（ｐｌ＋　７．４　）　、ＮａＣ１
１ｂ　４　ミ　リ　％／ｌ／　、ＥＤＴＡ５　ミ　リ　
モル、Ｒ８Ａ　［Ｊ、２　％　（ｐＨ７，４）２、　第
ルセフ０ター： マウス−（几−Ｔｌ　−４ＥＬＪｉｍ　７メ」（第ルセ
プター）： モノクロンの４九−ＴＳＨ−わＬ体？含有する、マウス
からの腹水に全血１，８モルのｋＪＨ，Ｆ２Ｏ３を加え
イ）。沈Ｉｋをリン版−ナトリウム１５ミリモル（ｐＨ
７−ＩＪ　）及びＲａＣＪ、　ｂ　Ｃ１’Ｚリモ／Ｉｚ
　７１’らのに、−ＷＭ＋＋取中に取り、このようにし
て侍られた浴′＃、をＤＫＡＥセルロースを介して朋蜘
させる。

６、　第３レセプター： 第ルセプターとは異なるわＬ原次定因子を態別する抗−
ＴＳＨ−ｉ１Ｌ坏（モノクロン）−ペルオキ７ダー′ｔ
″′接合体（第６レセプター）； マウス−わＬ−ＴＳＨ−抗血Ｙｂを第ルセプターと同様
に精製する。次いで、光全仇体分子から（Ｆ’ａｂ）２
乞例２に記載の力紙により取得７る。±イヨウワサビ・
ペルオキシダーゼとの結合は、ナカネ法により行なう〔
「免役螢光及び関連染色技術」（″工ｍｍｕｎｏｆｌｕ
Ｏｒｅｓｃｅｎｃｅａｎｄ　Ｒｅ１ａｔｅｄ　Ｓｔａｉ
ｎｉｎｇＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ″）、２１５〜２２４Ｊ
４（１９７８年）掲載のＭ、Ｂ、Ｗｉｌｓｏｎ。

Ｐ　、Ｋ　、Ｎａｋａｎｅ共署、［セイヨウワサビ争ベ
ルオキシダー′ｔ″を抗体に嵌合する旭沃系敏塩法にお
ける最近のＲ１１Ｊ　（”Ｒｅｃｅｎｔ　Ｄｅｖｅｌｏ
ｐｍｅｎｔｓｉｎ　ｔｈｅ　Ｐｅｒｉｏｃｌａｔｅ　Ｍ
ｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇＥｏｒｓｅ
ｒａｄｉｓｈＰｅｒｏｘｉｄａｓｅ　ｔｏ　Ａｒｔｒｄ
ｏｂｉｅｓ″′）、１１ｏｒｔｈ　Ｅｏｌｌａｎｄ　Ｂ
ｉｏｍｅｄｉｃａ、Ｉ　ＰｒｅｓＧ出版、Ｅｌｓｅｖｉ
ｅｒ　Ｊ　。

４．　々５２レセフ０ター： 羊−ｆＩｉニーマウス−Ｆ’ｃγ−ＵＬ体を同定した吸
庸羽（第ンレセゾターＩ＆庸剤）； 手−仇−マウス−Ｐｃγ−仇侮ｔｋに全反゛１．８モル
のＮＨ４ＢＯ４娶ＪＪＩＪえる。沈厳乞すン緻ナトリウ
ム１５ミリモル（ｐＨ７−（Ｊ　）及び１ＪａｃＪ！ｂ
Ｕミリモルの嶽慟ｉｌ＆にとり、このようにして侍られ
た酢液馨ＤＪｊ：ＡＨセルロース馨ブｒして通廼させる
。工ｇＧ乞言イｊ１−る１０００分（第２レセプタ）　
ｋ　袈定名のベーリンガーーマンハイム（ｂｏｅｈｒｉ
ｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉｍ　）の仕（虫省により″ｊ
占注化した第己和社１奴盾剤り゛ルタルジアルデヒド“
（ａ又階６６５　５２５）と結合させる。

５、指示系： ホスフェート／シトレート−収′９ｉＪ取（ｐ１４４．
４）ＩＵＯｉリモル中（７）　ＡＢＴＳＲ（２、２’−
アジノージ〔６−ニチルペンゾチアゾリンスルホイ’　
−ト（６）］　）　１．ｂミリモル、胸ｏｎ　ｘ＝　ｗ
−ナトリウム６．６ミリモル実ＭＭ： 々各ルセｆター５０１ｎｙ及び弗３レセプター１７Ｑｎ
＋Ｕ娶恒温銖待坂餉欧中に苺かし、大きさ６ｘ６訳、厚
さ１．Ｏｋの市販のホリエスデル厭より成るフリース上
に部下しかっ呈−で乾燥さぜる。この試楽馨含むペーパ
ーフリースを第１試業州体とする。

第１ｇ楽知体上に測定すべき虱桝もしくは既知葦のおし
原を含有１−る傑準冷准４０μノ娶ピペットム加し、次
いでンリース？エンベンドルフ遠心像中で直ちに遠心分
離する。その除に第１試桑ル体はエツペンドルンの容器
上に節電しが一つ各製電で俗離した数体は点心分離の際
に吸腐剤に結合している第２レセプター罠当り、これと
反応する。第２レセプターでは１試級当り吸ＭＡす２．
５”ｆ’ａ”使Ｊｌ」する。

振麹槻上で及応謳合物を６７°Ｃで１ｂ’Ａ−間恒温保
持１−る。

正確に１５分後に、反応容器をその仏五恢から取り出し
かつ冶心分ｈｌＥする。

上熟、春のアリコートをピペットで取り′ｉＪ）つ形成
した色糸ｋ　４０　ｂ　ｎｍでその吸光度についてｉ１
１＋１笈する。

２４・１の李（ンよるＴＳＩＩ舐浩を去１ｊい−Ｃ仄の
吸光度を但（ｊ笈した。

ｘ　Ｉｉ（、九度は］１ソノ！３ｉ　１＋　、　２　ｃ
ａｒ、でａ＋Ｉｊ　’１ｊｆｔし７Ｊ’　ツｈｄ　厚１
　ｍｒ、ｆ（ＪＡ）４　し　ｌこＯ ｂ）　＃ｉｒ単／よラーンドウインチ法（比軟）〆の点
乞ｔトＪ、いてＩｌ＋）に記載した試梨及び方法で夫／
ＪＩ！Ｉする。

１、秋、、１ｊ６ｉ１　／　ｅ４；　２レセブ２ター２
　、　りｔｒｙ　＜＜　ｉＪ、　１　’セフ″′クー２
０μｌと０．２ｍｅ中で１時間孤島イドに予めｉｌλ詞
抹持Ｊる。次いで、上亀みを吸引光（取しかつ残７Ｉ！
Ｌ娶１１（月当り１ゴのＩ　Ｐで６１仇う。

２、　このように第２レセプターでＭ＋Ｊ処理したし又
Ａｊ會り／柘２レセプター馨が（■及び柘６レセゾター
と振血機上６７℃で４時間恒温保持して、この別法でＧ
′！、司俗性第ルセプターの６≦加は省略する。

次いで、ｎ法のように上動み馨吸引貌↓し＼残＃？！ｌ
−洗いかつ間延した醇巣２ｈ性を指示系で検出１′る。

２榎の兵なるＴＳ）１絨科で次の吸九反餉を紳」足した
。

そ吸九反イ偵は層厚ＩＪ　、２Ｌ’Ｊｒｒ、で側足し、
層厚Ｉ　Ｕｎ＆に換昇した。

ｂ）法で（・まａ）法よりも著しく多１■の第ルセノタ
ーを反／ＩＪ　（１：　４　Ｌｌ　Ｏ）−ｆ−るにもか
かわらす、ｂ）法の慇度はａ）よりも１力らかにＵμ・
。

例　２ ヒト絨毛膜ゴナドトロピン（ＨＣＧの６ｉｌＪ定）試桑
： 緩偵瓜Ａニ リン敞ナトリウム、ｐＨ７，３（３７°Ｑ）　１００ミ
リモル塩化マグネシウム　２ミリモル Ｎａ（Ｊ　ＬＪ、９　％ Ｒ８Ａ（牛血消アルブミンン　（Ｊ、５　％Ｆａｂフラ
グメントの装造は、Ｅ、インカワ、Ｔ。

カワイ、Ｋ、ミャイ共者、１師累イムノアンセイＪ　（
”　Ｂ：ｎｚｙｍｅ　Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　”　）
、８１〜８９頁（１９８１）、医学音読（東京／ニュー
ヨーク在）中のＴ、キタガワにより行なう。抗体もしく
はａＫ−フラグメントへのβ−ガラクトシダーゼの共有
結合はＲ，Ｒ，ポーター（Ｒ，Ｒ，Ｐｏｒｔｅｒ着、”
　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、″、７６巻、１１９負（１９５
９）〕による万汰で行なう。

基質ｈオ欣： 級餉散Ａと１ＥｆＪ様に、付加的にオルト−ニトロフェ
ニルガラクトシド（ＯＮＰＧ）　５　ミ’）モル１、　
第１虱桑和体の装造は例１と同様にして、俗ａｈ４ｏμ
ノアａ′市販のポリエステル租より成る７リース上に崗
下し、次いで呈圃で乾燥させる。使用するまでの７リー
スの貯蔵は４℃及び相刈湿腿≦２０％で行なう。

２、ｉ２に桑相体の裟愈は、プロムンアンｒ古注化法（
＋８１ドイツ画付許公開第１７６８５１２号ＨＡｔｆｍ
’１１７）によりセルロース７リース上に羊のＭ　−Ｆ
ａｒ　−ａｉ体（工ｇＧｍｒ分）ヲ同定さぜ、その際Ｍ
Ｉ！、維材料１７当り抗体１０ｆｆｖを固定に使用する
。′６′ｃ浄により結合していない抗体を１去しかつ７
リースを注意深く室温で乾燥させる。フリースの貯蔵は
第１虱桑和体と同様九行なう。

ＨＯＧ　（ｉ’）測定は第１及び集２試業知体を用いて
、西ドイツ国％吐出細第２４２５００　Ｂ、　！：１号
明測豊に記載されている分析測定を実施するための装置
の使用下に竹なう。該明細簀は１つの信造部材より成る
目勤遠心分析磯用回転子差込部材を開示しており、この
栴這部材は一定の試桑で含反された吸収注知持伺科をそ
れぞれ包含する松飲個の虱条区分と連結している夙科装
入呈、少７エ（とも１１１ωのα合升左及びｙＩＩＪ定
呈娶有して他の屋及びこの呈から測定地に通じていて、
試料准体鞄送紐と少７よくともちμ分的に同一である掘
込Ｗ６娶有する除に、牛住刀向で内軸から外Ｔｏｙへ系
内する職科徹体−込路馨栴賊する。その原に、賦料欲捧
桶込路は拭科装入罠Ｐから、吸収ａ羽科が光−Ｖ（され
、緩泗牧を苫有する蚕ａ、とＣ及び呈ａとＣとの間に配
置した第１５Ｐ呈ｖＫ１ｔブ「して弗２弁呈ＶＫ２に逓
粕しかつう１Σ歴ＶＫ２から呈ｄ及びｉ＋ｏ果呈ＡＫ馨
ブｒして側足呈Ｘ圧放枕している。他の液体７ａ−収容
するため、ポンプ呈として鉤成した基′ＪＱ呈ＰＫか設
けられ゛〔お９、この嚇負呈ＰＫは配垣呈ＤＫ及び上官
Ｋａｐより成る自己九二装置ＭとひηＬ室けＫを介して
第２弁室ＶＫ２と連結している。第１ＢＡ、業辿体は組
込部材の区分ＣｌＩＣ配置しかつ褐２絨粂姐体は区分（
Ｌ（Ｃ配置する。及応保作はＭｉｊ記の例１と基本的に
同一であφ。試料４０μ］は直接区分ａに上嫌部の開口
部を通してピペット装入１−る。試料は未稀釈である。

市い圓に数と停止と乞父互に膨合わせた好堰なゾロクラ
ムにより函科と基質は分離マトリックスとキュベントの
方向に供和される。仄に、局い（９）私叡の迫上が行な
われ、低い回転数の中間抜部、の工程はイ１儒畝体牝り
送の調部」のためである。、Ｍ、賀／仇か浴液を計短毛
’ｐｇ　Ｄ　Ｋにより１川ぎの吸引分に分割する。

第１回魚心：試料と試料に角ノ欲をＶＫＩ中で遠心分離
し、第１吸引分はｉｔ　：ｔｊｌ：　ｋＤ　Ｋ中である
。

第１回イ９止：絨科は区分ｃ　Ｋ　ＩｉＬ勤しがつ第１
及び第３レセプターを俗Ｎｌする。弗１吸引基賀府液は
凝流創けに中に杉１コ１゛る。

第２回遠心：　ＳＣａと第１及Ｏ−第３レセプターはＶ
ＫＺ中に退し、それは魚心分ｐｌＬされ、試業の均一な
混合物が庄成される。ｊｅ　１吸引基賀府欲分はＵＫ中
に血協し、第２吸引恭賀俗数分はＮｉ蚕９メｌ）Ｋ中に
移行１゛る。

第２画１♂与止：試料ｔ１１１では数体Ｑよ区分ｄに見
込され、５分間名−止し、その間に像会体が指体に俵合
する。似合していないＱｊ　Ｊ（ＯＧも結合する。

反応のホゑ粕時に、また籠１合していないＦａｂ−初合
体が村、＠シないまま給液中に存在１−る。第２吸引基
り’ｄ’Ｎｆ液分はＵｘに離動１−る。

第６回思心：試料路からの液体は抽尿呈（Ａ旬中で府刺
血のｌｌｉ’ａｂ−仏合体と共にだ心分馳される。！：
Ａ４２基質吸引分はｔｌＫ中に蓄イ怪１〜る。第６かｙ
ｉ吸引分は＃ｌ’ｎｌ室ＤＫ中に合・仕″′３−る。

第６１怜止：第６基質吸引分がｉＫに供給される。

第４　［Ｌ！Ｊ刈二心：第４吸引分かＤＫへ第６吸引分
がｖｘ２へ 第４回停止：第４吸引分かυにへ 第６吸引分が区分ｄへ 第１θし取扱引分が第２試楽知体 上に４−ｉ−在する。

第５回迫上：第５吸引分がＤＫへ 第４吸引分かｖｘ２へ 第６吸引分がＡＫへ 第５回１か止：第５吸引分がＵｘへ 第４吸引分がｄへ 第２洗液か第２試弘知体上へ 第６回忠心：第６吸引分がＪ）Ｋへ 第５奴引分かｖｘ２へ 第４Ｉ！Ｘ引分かＡＫへ 第６１ｇ１件止：第６吸引分がυにへ 第５吸引分がｄへ 第６況敦吸引分か第２絨桑川体 上へ 第７回焦心：第７吸引分がＩ）Ｋへ 第６吸引分かＶＫ２へ 第５吸引分がＡＫへ 第７回停止：第７吸引分がｉＫへ 第６吸引分がｄへ 第４次液吸引分が第２試柴知体 上へ 第８１ａ蛭心：第８吸引分がＤＫへ 第７吸引分かＶＫ２へ 第６吸引分かＡＫへ 第８回１ち・止：第８吸引分かＭｘへ 第７吸引分がｄへ 恢出臥引分が掬シ２試楽用体上へ。

５分間の反応で基質は第２試柴作体上に結合した耐糸、
つまり軸合体形成によ１７　）ＪＣＧ使用菫に比例１−
る彫系分により分カイし、伸ｊ定丁べき色素か形ｍする
〇 第２回地心、第り試榮用体からの液体の第１アリコート
かＡＫ’４児全に満たしかつ残分はキュベント中にυに
、、Ａ、ｉ〜る。キュベント中で形成された色素の測定
か５７８　ｎｍ″′ｒ：竹なわれる。

試料の区分Ｃからｄへの流動は非常に短時間で（５６０
秒間）何なわれる。最終的に検出される基質浴蚕も同様
に４０μノであり、それ故試料の稀釈は７ダナル仰」′
ＪＥまで起こらない。

挾量皿吊の使用下に第１図の仮鼠腺が倚ら札これは軛囲
ｕａｏｌ　〜Ｉ　ＬｌＯｍＵ／ａｕ（旧ＣＧｏ、′）第
１工ＲＰ憬準により係準化）馨包含しかつ十分に敏感な
血ｆｆ＋及び皿しよう中のに３０Ｇ（１）御」足が可能
である。

例　６ α−１−ンエトプロテイン（ＡＦＰ）の倒１」廷ハプテ
ン似Ｈａ　Ｌだ第２レセプターを使１１ｊするが、この
際１″べての６仇体は同じ動物イ里がら由来する。笑ｙ
＋！］法もしくは使用坂餉敦は例２におけると同様であ
る。

組ルセプターとしてはジゴキシンで似舷した羊のＩＡ　
−ＡＦＰ　−Ｂ５体（１（ＪＱｒｆｌ／ｍｅ）　（ｎド
イツ１．ｉ！１騎訂第２５３７１２５’号門細沓にょる
ン乞使用し、第６レセプターとしてはＢｃＧにおいてあ
けた方法（例２）によ・・すβ−ガラクトシダーセ゛で
襟版した年のりＬ−ＡＦＰ−抗体を使用し、かつ同相結
合第２レセプターとしてはポリエステル紙からなる、羊
のジゴキシンにメゴする抗体か奴庸的にね合し又いる紙
テープン使用１−ａ）。

頭布法はプラスチック官がら公知のカ広と同祿足行なう
。１４ノられた侠駕腺と硲４＝Ｊの第２凶に示す。

例　４ チレオトロピン（ＴＳＩ−１）のｊｉｌｔ　＞ｉ試ぺ５
： １、　九に七イｒｈ！ｔ、＜ＩＰ）　：　スあｔ閂吏　
−す　ト　リ　ウ　ム九ｔｈｓ　す１ノ１５ミリモル（
ｐＨ７，４）、ＮａＣ１１ｂ　４ミリモル、ｘＤＴＡｂ
ミリモル、ｒａｓｈ　Ｌｌ、２　％　（ｐＨ／、４　）
２、　１′Ｉ、１１／セｆｊ’　−：羊−ノ７Ｌ　−Ｔ
ｓＥ　−ｋｍγｉ’＋’　：　８Ｉ　ｎ、ｕ　？ｒ、に
全１ｉｊ−１−８モルのＮｌ（、ｓ０４　’ｒ　〃１１
える。

ｔＡ：、級馨し、歇−ナトリウム１５ミリモル、ｐｌｉ
７．（Ｊと”ａｃｊ！　！：）　ｔＪ　ｍｒ、ｉとから
なる駁餉赦中に取り込み、このようにして侍られたγ＃
　ｍ　ンＤｍＡｍ−セルロースをブ１−シて通過させる
。引き続き工ｇＧを官有するフラクションを、ＨＵＧを
有する免投吸層体ン介して通過させることによ’１１　
ＴＳＢのα−鯛と反応性のｆｉｌｊ分を豚去する。該俗
隘敢をＴＢＨ娶有している兄投臥后捧上に部加する。吸
廂°体をｂｔｈｒ　ｔ、た佐、Ｔｋ３）］にメ１して免
投反応性のｕＬ体の俗離をフ０ロビオン叡１Ｍで７ゴな
う。引き醗きこの伯帥液？ＩＰで送信し、場会により超
確廟により咲縮する、 ３、亀３レセプター：仇体−ペルオキシダーセ゛−核合
坏二年−仇−ＴＳＥ　−’ＪｊＬ血市′ビ第ルセデター
とＩＱＩ様に和表し、引き枕きそこから（Ｅ′ａｂ）２
−フラグメントを渡僧する。（ｋ・ａｂ）２−７ラグメ
ントの装造はラモイ（ａ、Ｌａ＋１１ｏｙり寺（Ｊ、工
ｍ１ｎｕｎｏｌ。

Ｍｅｔｈｏｄｓ　２４＝、　５６谷、’ｍ２５ｂ　〜２
４３１１（１９８６年）ｈ照ンにより行７よう。四部ワ
丈ビーペルオキシダーセ１との軸台はナヵネの方法によ
り行なう（ウィルン７　（ｍ、Ｂ、Ｗｉｌｓｏｎ）、ナ
カ不（ｐ。

ｆｌＮａｋａｎｅ）”Ｑ　、　’ｊｑ　”　ＲｅＱｅｎ
ｔ　Ｊ）ｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ　１ｎｔｈｅ　Ｐｅｒ
ｉｏｄａｔ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｏｏｎｊｕｇａｔｉ
ｎｇＨｏｒｓｅ−ｒａｄｉｓｈ　Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ
　ｔｏ　ＡｎｔｉｂＯｄｉｅｓ”、１９７８年、エルス
フィール（ｇｌｓｅｖｉｅｒ）、ノース−ホランド・ビ
オメディカル・プレ入社（Ｎｏｒｔｈ）１ｏ］、：１ａ
ｎｄ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｒｅｅａ）、６工ｎ＋
ｍｕｎｏｆｌｕｏ−ｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｒｅｌ
’ｔｅｄ　ＳｔａｉｎｉｎｇＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ’中
第２１５〜２２４Ａ］ ４、第２レ上第２１５〜２ロバ−わ；、−牛−Ｐｃγ−
抗体乞有する吸后相：ロバーに一手−Ｆｃγ−ＦｊＬ　
Ｊｕｔ　ｋ　Ｋ　ＮＨａＳＯ４’ａ：全に１−８Ｍで’
１４＝　）ＪＩＪ　’ｌ−る。Ｍ　ｔＡ−ｋ、、％”玩
ｔ）Ｚナトリウム１５ミリモル、ｐＨ７、Ｕ及びＲａｃ
ノ５０ミリモルからンよる綴餉漱甲に取り込み、このよ
うにしてべｔられたＩ　ａ　ｉ　ＤＭＡｇ−セルロース
を介し又λＩｑ廼させる。ｉｇＧ乞苫有１−るフラクシ
ョン（第２レセプター）乞ベーリンガーφマンハイム社
の″わｌ　２１ｊ注吸廂沖」、クルタールジアルテ゛ヒ
トーγ１５性、化”（肚又南６６５′０）２り、）と壽
〜、辿塙の取９仏報に１ルつて結合さぜた。

５、Ｊ＋（示鴎介どＡＢＴＳ”　（ン、２′−アジノー
ジ６−エテルベンズチアゾリンスルホ不−トー（６１）
１．８ミリモル、ホス７エートーントレー１・−、ｉｌ
！＜餉ａ１０Ｏミリモル、ＰＩ′Ｉ４．４中ノＡＩ　傭
ｊ　ｔｎ−すトリウム６．６ミリモル １５ｔくノ（％： 失力田は例１に１４己祉したと同じ方法で行なうが、鉛
ルセプタ−１００ｎ）及び第６レセグター１　［Ｊ　Ｕ
　ｉｎＵ　”ｌ　１８　ＹｉｉＡ’Ｂ＜　Ｎ４ｇ　ｍｓ
　ＩＫ　（４Ｌｌμ〕）甲に齢かし、□ｘ（５ｍの大き
さのセルロースフリース上にγβｊ゛トする。梶床俊、
フリースンその使ハ３まで月Ｕ”　４°Ｃで貯紙する。

その他の実施は例１１に記弦したと同じ方法である。、
試料とじ又は４０μ）を１丈月むこうして侍られた検短
腺を第６図に示す。

４　図面のめＪ羊な祝りｊ 第１図はＨＯＧの６（ｊ）笈のための恢ＭＬ’腺のダシ
ン図であり、大振νｕ２にょるカ臥に促って１けられた
。第２図及び淘８６凶はＩＱＩ　’ｌ＞ｙにそれでれ火
力１ｑカ６及び４により侍られた恢２ｉ（豚のダラン凶
であり、第２図はＡｌｌ′Ｐの６１す廼のための、第６
図はＴＳｌｌのσ４１ｊ矩のための快気かメを示してい
る０死４図は例２により使用した目勤遂心分仙ｍ＃４左
込部伺の概略図である。

Ｐ　Ｋ　−−基＊ｔｈｉ％　Ｄ　Ｋ　”　１１１ｒ　、
ｉ二ｋｘｓ　ｘａｐ　＋＋　毛　・白　、ＵＫ−・・は
φＣ呈、Ｐ・・・試料装入呈、ａ、ｂ、ｃ。

ｄ・・・室、ＶＫＩ、ＶＦ、２・・・ゾ１−慾、Ａ　ｋ
Ｃ・・・捕集ｈイ、Ｋ・・・即」′Ａ二歴。

第１頁の続き 優先権主張　６１ｍ７月６叶０西ド ［相］発明者　へルムート・シュルム ベルガー ０発　明　者　ヴオルフガング・クレ ーマン ■発明者　マンフレート・パシュ ［相］発　明　者　フリートヘルム・フィード イツ（ＤＥ）［相］Ｐ３４２５００８．５ドイツ連邦共
和国ポリング・カイザー−ハインリツヒーシュトラーセ
　２３ ドイツ連邦共和国トウツアング・アルプスピツツシュト
ラーセ　７ ドイツ連邦共和国トウライング・アントンーバルトルー
シュトラーセ　７ ドイツ連邦共和国ハウスホーフェン・ハウプトシュトラ
ーセ１１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　第１及び第６レセゾターは液相中に俗解しており
   、これら鵜抗原と結合性であり、第２レセグタ−は同相
   中に存在し、第ルセヅターの１部とのみ結合性であり、
   第６レセゾターは標識τ有しており、かつ１４１及び第
   ２レセプターと文箱反応しない、３棹の異なるレセプタ
   ーと共に恒温採知し、液相から同相を分離し、相の一方
   の標識１：　＋ｌ！ＩＩ定することに工り多価抗原葡６
   １１定するだめの方法において、抗原ケ君有するＡａｒ
   夜と、第１及び第６レセノターｆＣ（（４ＩＱイ性グツ
   形で含浸又は凍佑乾燥して有する・８１の固体相体拐科
   と’？ｒ：　−ｒＰＢにし、これらレセフ０ターが４屏
   した後得られた浴液と、第２レセフ０ターを非１６鱗性
   の形で有する第２Ｖ）固体→Ｉ！体拐科と會すぐに接触
   させ、そσノ後同体４９体伺科から液体を分１催し、標
   識を測定することを特徴とする多価抗原の測定法。 ２、　第１７セゾターとして抗体ｔｉ史用する特許酸化
   した抗体？使用する特許、請求の範囲第１項記載の方法
   。 ４、第２レセプターとしてノ・ブテン又は抗原で標識化
   した抗体７ラグメント金団用する特許請求の範囲第１項
   記載の方法。 ５、　第２レセプターのＦｃ一部とのみ結合性である第
   ２レセプターを使用する特許請求のφα囲第２項記載の
   方法。 ６、　第１７セゾターのノ・ブテン部又は抗原部とのみ
   結合＋４：である第２レセゾタ−を使用する符許臼吉末
   の範囲第６項又は〆ｄ４項記載の方法。 ｌ　免疫グロブリンのＦｃ一部に作用する第２レセプタ
   ーを使用する特許請求の範囲第５項記載の方法。 ａ　Ｆａｂ−フラグメントであり、かつ第１７セゾター
   の抗体成分部分と同じ動物４ｙｎから由来する第６レセ
   フ０ターｒ　１９４用する特許請求の１ｌＩＩλｌＪＨ
   ’；、ｔ”、　Ｉ　ＣＦ↓から第７項１でのいずれか１
   項記載の方法。 ９、ｒ’！！３レセフ０ターとして第２レセゾターの１
   部ｔ１史川する特訝山１求の吊ｌ相第ｄ与ｉ己、）戊の
   方法。 １０、標識化完全抗体からなる第６Ｖセゾターを特徴と
   する特許請求の範囲第６項又は第４項記載の方法。 １１、第２レセゾターと同じ１ｌｌｔｌｌ′ｉ勿４市か
   ら由来の第６Ｖ七フ０ターｋｌ史用し、かつ第６Ｖセフ
   ０ターｔよ他の動物梗から由来しかつ／又はノ１ゾテン
   又は抗原で襟１試されている待、ｆ′ｆ珀求の範囲第１
   瑣ｉｔｓ載の方法。 １２、三イ・ｋすべでのＶセゾターが同じ動物種から由
   来する抗体もしくはそのフラグメントｒｔ有する特許梢
   Ａくの、矩囲第６項又は・π４項記載の方法。 １６、１１’ｉ：素、重光性物賀、化学発光性物質又は
   放射性物’？４で標識比されている第６レセゾターを特
   徴とする特許、請求の範囲第１項から第１２項までＯ）
   いずれか１項Ｓ己＋ｌ祝の方法。 １４、未希釈の試料溶ｉを便１４４する特許請求の範囲
   第１項から第１６項棟でのいずれか１亀記載の方法。 １５、　１ｉ）　２つの異なる溶解性の、抗原と結合性
   である第１及び第６レセデターで言浸した又はこれらと
   凍結乾燥した、ｔ′８６レセデターが４’；Ｊ　ｉＲｋ
   有する第１の固体担体材料及びｂ）町ｍ性の非標識第１
   【／セプターσノ１　？Ｊ、Ｓとのみ結合性の不浴性第
   ２し七フ０ター？Ｃ言有する、第１の担体材料とは物理
   的に分離して存在する第２の固体担体材料からなるが、
   但し標識化第６レセプターはＦａｂ−フラグメントであ
   る多価抗原の測定乾燥試薬。 １６、第ルセプターが抗体であり、第６レセプターが酵
   素標識した抗体のＦａｂ−フラグメントである特許請求
   の範囲第１５Ｊ頁す己載の試薬。 １７、第ルセゾター及び第６Ｖセフ０ターがモノクロン
   であり、抗原の異なる及び／又は反復決定因子に作用し
   、かつ同じ１［【ｂ物桃から由来する呼ｊ計ＦＩＴ求の
   ｄ覗四第１６項記成の試薬。 １Ｂ、第２レセゾターは第ルセプターのＦＣ一部に対す
   る抗体であり、かつ第６レセノターは第２レセゾターと
   同じ動物種から由来し、これに対し第６レセデターは他
   の動９勿神から由来する１斤４Ｆｍｌ求の範囲第１６項
   記載の試薬。 １’／、３神すべてのＶセデターが同じ動物（再からの
   抗体ｋｓ有しており、第ルセゾターはハフ０テン−抗原
   標１誠比モノクロン抗体であり、第２レセゾターｒｉ第
   ルセゾターのハフ°テンー抗原に作用する６　ｉｆ’Ｆ
   　請求の範囲第１７項記載の試・１．：≦０ ２ｔＪ、　、１？　ルセフ０ターは完全抗体であり、第
   ６レセグターは帛ルセゾターと同じ動物種から由来し、
   第２レセデクーは第１Ｖ七〕０ターのＦｃ部に作用する
   抗体である持ｒｔ’Ｆ　請求ｉ７，１範囲ξ４）１６項
   記＋ｊ９の試薬。 ２１．１子国削及び酵糸標、載測定用システムを含有す
   る特ｉ’Ｆ　ａｉ’をの範囲第１５ＪＡから第２Ｏ項ま
   でのいずれか１項記載の試薬。 ２２、第６レセプターがベルオキシタ゛−ゼ又はα−も
   しくはβ−イラクトシダービでセ’ｌ：　ｉｆ？＜され
   ている特♂「由をの範囲第１５ｇ１から第２１墳捷での
   いずれか１項記載の試薬。