JPS60172316A - 凝集剤 - Google Patents
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- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
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- C02F1/52—Treatment of water, waste water, or sewage by flocculation or precipitation of suspended impurities
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の要約〕
凝集剤は、たとえばシュードモナスの菌株のような微生
物を連続培養またはバッチ式培養により調節条件下で増
殖させて生成され、かつ培養した微生物を自然に或いは
熱もしくは化学溶菌剤を用いて人工的に調整された溶菌
にかける。
物を連続培養またはバッチ式培養により調節条件下で増
殖させて生成され、かつ培養した微生物を自然に或いは
熱もしくは化学溶菌剤を用いて人工的に調整された溶菌
にかける。
溶菌の程度は、生成物の生産速度および品質を最適化す
るように調節され、次いで生成物をたとえば水処理およ
び製紙のような工業用途に使用するために貯蔵すること
ができる。
るように調節され、次いで生成物をたとえば水処理およ
び製紙のような工業用途に使用するために貯蔵すること
ができる。
本発明は、有機凝集剤の製造方法およびこの方法により
製造される有ｔａ＆ｉ集剤に関するものである。
製造される有ｔａ＆ｉ集剤に関するものである。
本発明によれば、培地中で微生物を増殖させ、培養され
た微生物を、高分子量化合物を含有する物質を生成する
程度まで調節された溶菌にかけることを特徴とする有機
凝集剤の製造方法が提供される。
た微生物を、高分子量化合物を含有する物質を生成する
程度まで調節された溶菌にかけることを特徴とする有機
凝集剤の製造方法が提供される。
さらに本発明によれば、前記方法にしたがって関節され
た溶菌にかけた微生物の生産物である高分子量化合物を
含有する物質からなる有機凝集剤が提供される。
た溶菌にかけた微生物の生産物である高分子量化合物を
含有する物質からなる有機凝集剤が提供される。
微生物は、典型的にば好気的に増殖する好気性微生物で
ある。この種の微生物の例はシュードモナスの菌株、た
とえばシュードモナス、フルオし／ツセンス（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ ９ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ）または
シュードモナス・プチダ（Ｐ、 ｐｕｔｉｄａ ）１１
Ｌびにバチルスの菌株、たとえばバチルス・セレウス（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ、ｃｅｒｅｕｓ ）およびイー・コリ
である。
ある。この種の微生物の例はシュードモナスの菌株、た
とえばシュードモナス、フルオし／ツセンス（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ ９ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ）または
シュードモナス・プチダ（Ｐ、 ｐｕｔｉｄａ ）１１
Ｌびにバチルスの菌株、たとえばバチルス・セレウス（
Ｂａｃｉｌｌｕｓ、ｃｅｒｅｕｓ ）およびイー・コリ
である。
凝集剤を産生するメカニズムは完全には理解されていな
いが、培養された微生物を溶菌にかげると、菌体中に存
在する高分子量成分が放出されかつ／または高分子量の
分解生成物が生成されるものと思われる。この種の高分
子量化合物は蛋白質、核酸および／または多糖類である
と思われ、かつこれらの物質は恐らく重合体架橋理論に
したがって、或いは凝集の静電理論にしたがって所要の
凝集作用をもたらすと思われる。
いが、培養された微生物を溶菌にかげると、菌体中に存
在する高分子量成分が放出されかつ／または高分子量の
分解生成物が生成されるものと思われる。この種の高分
子量化合物は蛋白質、核酸および／または多糖類である
と思われ、かつこれらの物質は恐らく重合体架橋理論に
したがって、或いは凝集の静電理論にしたがって所要の
凝集作用をもたらすと思われる。
＃Ｌ集剤の効率は全ての低分子量重合体またはその他の
１氏分子量物質を除去して高めることができる。これは
、たとえば濾過または透析のような方法により達成する
ことができる。これらには炭水化物も包含される。
１氏分子量物質を除去して高めることができる。これは
、たとえば濾過または透析のような方法により達成する
ことができる。これらには炭水化物も包含される。
微生物は連続培養またはバッチ式培養のいずれでも培養
することができる。連続培養の場合、−（ＩＢに連続醗
酵装置が使用され、オートリシスを用いる場合には典型
的には０．０３ｈｒ−１未満、好ましくは０．０２１＋
ｒ−’未満の低希釈速度が使用される。化学処理、熱処
理またはその他の外部処理により溶菌を行なう場合には
それより高い希釈速度が好適であり、この希釈速度は使
用する微生物に依存する。培養は通常の温度およびｐｌ
＋の条件下で典型的には約２５℃かつｐｎ約７．２５に
て行なうことができる。しかしながら、２０〜４５℃の
範囲（たとえば中温性微生物の場合）または４０〜７０
℃（たとえば高温性微生物の場合）の範囲の温度および
４〜８ （微生物に依存する）の範囲のｐＨを使用する
こともできる。
することができる。連続培養の場合、−（ＩＢに連続醗
酵装置が使用され、オートリシスを用いる場合には典型
的には０．０３ｈｒ−１未満、好ましくは０．０２１＋
ｒ−’未満の低希釈速度が使用される。化学処理、熱処
理またはその他の外部処理により溶菌を行なう場合には
それより高い希釈速度が好適であり、この希釈速度は使
用する微生物に依存する。培養は通常の温度およびｐｌ
＋の条件下で典型的には約２５℃かつｐｎ約７．２５に
て行なうことができる。しかしながら、２０〜４５℃の
範囲（たとえば中温性微生物の場合）または４０〜７０
℃（たとえば高温性微生物の場合）の範囲の温度および
４〜８ （微生物に依存する）の範囲のｐＨを使用する
こともできる。
バッチ式培養の場合には、同様な温度を微化物に応じて
５．５〜８の範囲の初発ｐｌ＋にて使用することができ
る。バッチ式培養の場合、微生物は一般に微生物に応じ
て収穫前に１０〜２７０時間、好ましくは２４〜２３０
時間培養される。
５．５〜８の範囲の初発ｐｌ＋にて使用することができ
る。バッチ式培養の場合、微生物は一般に微生物に応じ
て収穫前に１０〜２７０時間、好ましくは２４〜２３０
時間培養される。
連ｉゾ５培んおよびバッチ式培養の両者は、凝９５剤の
産生が最適比される制令で鉱物質、塩類および徹ｊ”ｆ
’ｉ要素を含有する培地にて行われる。一般に、培地は
資化性炭素’ｉｓ−＜たとえばグルコース）を含有し、
さらに蛋白質（たとえばペプトン）を含有することもで
きる。実際には、凝ユ１１剤は調節された溶菌工程（以
下説明する）により生成されるが、培地成分が生成され
る凝集剤の品質に影響を及ぼす。たとえば、連続培＃培
地は６．５５ｇ ／ Ａの濃度のオルト燐酸二ナトリウ
ムと、０．９２ｇ ／βの濃度のオルト燐酸−ナトリウ
ムと０．８９ｇ ／ Ｒの濃度のエチレンジアミンテト
う酸１ｊｉｔナトリウム塩と、０．１２ｇ／ｌの濃度の
［（）マグネシウムと、２．０８ｇ／βの濃度の硫酸カ
リウムと、３．８ｇ／ｎの濃度の塩化アンモニウムと、
０．０５〜２Ｗ／Ｖ％、好ましくは０．２５〜ＩＷ／Ｖ
％の濃度のグルコースと、必要に応し２Ｗ ／ Ｖ ％
まで、好ましくは０．１〜０．５ Ｗ／Ｖ％の濃度のベ
プＩ−ンとから構成することができる。
産生が最適比される制令で鉱物質、塩類および徹ｊ”ｆ
’ｉ要素を含有する培地にて行われる。一般に、培地は
資化性炭素’ｉｓ−＜たとえばグルコース）を含有し、
さらに蛋白質（たとえばペプトン）を含有することもで
きる。実際には、凝ユ１１剤は調節された溶菌工程（以
下説明する）により生成されるが、培地成分が生成され
る凝集剤の品質に影響を及ぼす。たとえば、連続培＃培
地は６．５５ｇ ／ Ａの濃度のオルト燐酸二ナトリウ
ムと、０．９２ｇ ／βの濃度のオルト燐酸−ナトリウ
ムと０．８９ｇ ／ Ｒの濃度のエチレンジアミンテト
う酸１ｊｉｔナトリウム塩と、０．１２ｇ／ｌの濃度の
［（）マグネシウムと、２．０８ｇ／βの濃度の硫酸カ
リウムと、３．８ｇ／ｎの濃度の塩化アンモニウムと、
０．０５〜２Ｗ／Ｖ％、好ましくは０．２５〜ＩＷ／Ｖ
％の濃度のグルコースと、必要に応し２Ｗ ／ Ｖ ％
まで、好ましくは０．１〜０．５ Ｗ／Ｖ％の濃度のベ
プＩ−ンとから構成することができる。
バッチ式培養の培地は１３．６ｇ ／ ７！の濃度のオ
ルト燐酸−カリウムと、２ｇ／βの濃度の硫酸アンモニ
ウムと、０．２ｇ／βの濃度の硫酸マグネシウムと、３
．７８ｇ、’２の濃度の水酸化カリウムと、上記範囲の
濃度のグルコースおよびペプトンとから構成することが
できる。
ルト燐酸−カリウムと、２ｇ／βの濃度の硫酸アンモニ
ウムと、０．２ｇ／βの濃度の硫酸マグネシウムと、３
．７８ｇ、’２の濃度の水酸化カリウムと、上記範囲の
濃度のグルコースおよびペプトンとから構成することが
できる。
バッチ式培養成いは連続培養のいずれにおいても、培地
は一般に使用前に殺菌される。
は一般に使用前に殺菌される。
凝集剤を産生ずるための増殖条件は、問題とする微生物
につき確定された増殖条件とすべきである。最適な凝集
剤の産生が生ずる正確な条 ′件は、スポット生産およ
び物質の試験により容易に決定することができる。
につき確定された増殖条件とすべきである。最適な凝集
剤の産生が生ずる正確な条 ′件は、スポット生産およ
び物質の試験により容易に決定することができる。
調節された溶菌工程は、凝集剤の産生が起るのはこの工
程であるため重要である。調節された溶菌は３種の方法
で達成することができる。
程であるため重要である。調節された溶菌は３種の方法
で達成することができる。
すなわち、熱処理による方法、化学溶菌剤の使用による
方法、または菌体を自然に溶菌させる方法（オートリシ
ス）である。
方法、または菌体を自然に溶菌させる方法（オートリシ
ス）である。
熱処理は次のように行なうことができる。培養後菌体を
たとえば典型的には１６３６Ｘ ｇにて約５〜２５分間
遠心分Ａｌｔすることにより培地から取り出す。菌体を
ｊ脱イオン水に再懸濁させた後、これを典型的には微生
物に応じて５０〜１００°Ｃの温度、好ましくは７０〜
１００℃の温度にてこの使用？ＸＡ度に応して５秒〜１
００券間、好ましくは１〜３０分間にわたり熱処理し、
次いで典型的には約１〜５分間、好ましくは２〜４．５
分間にわたり急速冷却する。代案として、熱処理は菌体
がまだ培地中に存在する間に行なうこともできる。
たとえば典型的には１６３６Ｘ ｇにて約５〜２５分間
遠心分Ａｌｔすることにより培地から取り出す。菌体を
ｊ脱イオン水に再懸濁させた後、これを典型的には微生
物に応じて５０〜１００°Ｃの温度、好ましくは７０〜
１００℃の温度にてこの使用？ＸＡ度に応して５秒〜１
００券間、好ましくは１〜３０分間にわたり熱処理し、
次いで典型的には約１〜５分間、好ましくは２〜４．５
分間にわたり急速冷却する。代案として、熱処理は菌体
がまだ培地中に存在する間に行なうこともできる。
調節された溶菌を達成するには、化学溶菌剤を使用する
こともできる。適する溶菌剤の例はステリコールであり
、これはキシレノールを含有するアルコール性のアニオ
ン性洗剤溶液である。適する溶菌剤の池の例は２つの部
分からなる試薬系であって、この試薬系の一方は５％の
タウ・コーニング消泡性Ｒ，ｐ、エマルジョンと０．１
１ＩＩｇ／ ｍｌのキシレンシフノールＦＦとを含有す
るＴＥ緩衝剤であり、かつ他方はドデシル硫酸ナトリウ
ムを２０℃で飽和させた１モルのＮａ０ＩＩである。熱
処理に関し上記したように菌体を遠心分離しかつ溶菌剤
の溶液中に再懸濁させ、次いで約１分間激しく攪拌して
溶菌剤の作用を高める。このように生成された凝集剤を
、好ましくは溶菌剤を除去するための、たとえば適当な
溶剤による洗浄、或いは透析による処理にかける。さも
ないと、凝集剤の変性を引き起こすからである。
こともできる。適する溶菌剤の例はステリコールであり
、これはキシレノールを含有するアルコール性のアニオ
ン性洗剤溶液である。適する溶菌剤の池の例は２つの部
分からなる試薬系であって、この試薬系の一方は５％の
タウ・コーニング消泡性Ｒ，ｐ、エマルジョンと０．１
１ＩＩｇ／ ｍｌのキシレンシフノールＦＦとを含有す
るＴＥ緩衝剤であり、かつ他方はドデシル硫酸ナトリウ
ムを２０℃で飽和させた１モルのＮａ０ＩＩである。熱
処理に関し上記したように菌体を遠心分離しかつ溶菌剤
の溶液中に再懸濁させ、次いで約１分間激しく攪拌して
溶菌剤の作用を高める。このように生成された凝集剤を
、好ましくは溶菌剤を除去するための、たとえば適当な
溶剤による洗浄、或いは透析による処理にかける。さも
ないと、凝集剤の変性を引き起こすからである。
上記方法のいずれかの代案として、たとえば菌体を充分
に溶菌するまで培地中に放置することにより自然溶菌さ
せるオートリシスであり、次いで混合物を約３０００ｒ
ｐｍにて約５分間遠心分ヌ１［することにより生成した
凝集剤を分離する。
に溶菌するまで培地中に放置することにより自然溶菌さ
せるオートリシスであり、次いで混合物を約３０００ｒ
ｐｍにて約５分間遠心分ヌ１［することにより生成した
凝集剤を分離する。
凝集剤の活性は、たとえば安息香酸ナトリウムのような
保存料を凝集剤に対し典型的にはＯ，ＬＷ／Ｖ％以下の
最終濃度で添加して維持し、ま）こは固定することがで
きる。保存料は、溶菌工程の直前またはその間或いはそ
の直後に添加することができる。
保存料を凝集剤に対し典型的にはＯ，ＬＷ／Ｖ％以下の
最終濃度で添加して維持し、ま）こは固定することがで
きる。保存料は、溶菌工程の直前またはその間或いはそ
の直後に添加することができる。
本発明の凝集剤は、たとえば水処理および製紙のような
凝集剤の工業用途に使用することができる。
凝集剤の工業用途に使用することができる。
以下、連続培養の増殖による本発明の具体例を、実施例
１〜３で説明する。
１〜３で説明する。
割Ｗ既１
培地を実験として次のように作成した。次の諸成分を個
々に水道水を用いて熔解させ、混合し、かつ４．２１２
に希釈した： Ｎａ２１１ＰＯ４（１２１１２０） ２７．５ｇＮ８１
１□ｐｏ午 （２１１２０） ３゜８７５ｇ１！ＤＴＡ
３．７５ｇ ＭＨ３Ｏ１Ｆ（７１１２０） ０．５ｇＫ２Ｓｏ千 ８
．７５Ｂ 次いで、この溶液を１５ｐｓｉｇの圧力下で１２１℃に
て２０分間殺菌した。
々に水道水を用いて熔解させ、混合し、かつ４．２１２
に希釈した： Ｎａ２１１ＰＯ４（１２１１２０） ２７．５ｇＮ８１
１□ｐｏ午 （２１１２０） ３゜８７５ｇ１！ＤＴＡ
３．７５ｇ ＭＨ３Ｏ１Ｆ（７１１２０） ０．５ｇＫ２Ｓｏ千 ８
．７５Ｂ 次いで、この溶液を１５ｐｓｉｇの圧力下で１２１℃に
て２０分間殺菌した。
１９ｇの塩化アンモニウムを４００１の水道水に熔解さ
せかつ上記と同様に殺菌した。２７．５ｇのｙキストロ
ースー水塩を４ＱＯｍｌの水道水に溶解させかつ上記と
同様に殺菌した。このように作成した３ｆＩｔの溶液を
次いで無菌的に合して、醗酵用の培地を作成した。殺菌
は３種の溶液について別々に行なった。何故なら、−緒
に殺菌すると主成分が相互反応して培地を劣化するから
である。最終的ＣＡＮ比は２．１３４１である。蒸留水
が必要な微屋要素を与えた。
せかつ上記と同様に殺菌した。２７．５ｇのｙキストロ
ースー水塩を４ＱＯｍｌの水道水に溶解させかつ上記と
同様に殺菌した。このように作成した３ｆＩｔの溶液を
次いで無菌的に合して、醗酵用の培地を作成した。殺菌
は３種の溶液について別々に行なった。何故なら、−緒
に殺菌すると主成分が相互反応して培地を劣化するから
である。最終的ＣＡＮ比は２．１３４１である。蒸留水
が必要な微屋要素を与えた。
上記培地を使用して、シュードモナス・フルオレスセン
ス（Ｎ ＣＩ Ｂ ９０４６）を連続醗酵装置で培養し
た。この実施例において、醗酵装置は１１の実働容疑を
有したが、それより大きい寸法もｔ’Ｊ ｔｊヒである
。培養の際、無菌培地を連続的に醗酵装置へポンプ供給
し、かつ空気を滅菌フィルタを通して導入した。
ス（Ｎ ＣＩ Ｂ ９０４６）を連続醗酵装置で培養し
た。この実施例において、醗酵装置は１１の実働容疑を
有したが、それより大きい寸法もｔ’Ｊ ｔｊヒである
。培養の際、無菌培地を連続的に醗酵装置へポンプ供給
し、かつ空気を滅菌フィルタを通して導入した。
培養の際、醗酵装置中の液体を攪拌し、かつ溶存酸素レ
ヘルを８０％〜９８％に維持した。温度は２５℃または
その近辺に維持し、かつｐＨは７．５の一定に保った。
ヘルを８０％〜９８％に維持した。温度は２５℃または
その近辺に維持し、かつｐＨは７．５の一定に保った。
ポンプを調節して醗酵装置への液体の平均流速を毎時１
７．３ｍｌにし、これは０．０１’７３ｈｒ司の希釈速
度に相当する。定常状態が維持されるよう確保するため
、培地の濁りを醗酵装置から採取した試料により分光光
度針を用いて定期的に検査した。醗酵装置からの醗酵液
を無菌条外下で収集壜に集めて、全工程を無菌状態で行
なった。回収は２４１．７５時間にわたり行ない、これ
は３９６９．５ｍｌの液量に相当する。この実施例にお
いて、収集壜は室温においた。
７．３ｍｌにし、これは０．０１’７３ｈｒ司の希釈速
度に相当する。定常状態が維持されるよう確保するため
、培地の濁りを醗酵装置から採取した試料により分光光
度針を用いて定期的に検査した。醗酵装置からの醗酵液
を無菌条外下で収集壜に集めて、全工程を無菌状態で行
なった。回収は２４１．７５時間にわたり行ない、これ
は３９６９．５ｍｌの液量に相当する。この実施例にお
いて、収集壜は室温においた。
醗酵装置における上記の増殖条件は、増殖過程が定常状
態に達した後に微生物を維持するのに丁度充分であった
。
態に達した後に微生物を維持するのに丁度充分であった
。
その後、収集壜を醗酵装置から切り離し、これによ′り
外気に露呈させた。ステリ：Ｊ−ルを加えて微仕物の溶
菌を行ない、かつ内容物を３００゜ｒｐｍで５分間遠心
分離して生成したｔ１ｉ性凝集剤を分８１１シた。１７
５１の収量の粘性凝集剤が得られ、これを使用に供する
まで冷凍機中で貯蔵した。凝４ＪΣ剤の乾燥重量固形物
含有量は２．０５３ ｇであり、この景は凝集剤の試料
を１６０℃にて約２４時間乾燥した後に測定したもので
ある。固形物質はほぼ１００％の蛋白質と少量の炭水化
物とを含有することが判明した。蛋白質含有量はビュー
レット法で測定した。
外気に露呈させた。ステリ：Ｊ−ルを加えて微仕物の溶
菌を行ない、かつ内容物を３００゜ｒｐｍで５分間遠心
分離して生成したｔ１ｉ性凝集剤を分８１１シた。１７
５１の収量の粘性凝集剤が得られ、これを使用に供する
まで冷凍機中で貯蔵した。凝４ＪΣ剤の乾燥重量固形物
含有量は２．０５３ ｇであり、この景は凝集剤の試料
を１６０℃にて約２４時間乾燥した後に測定したもので
ある。固形物質はほぼ１００％の蛋白質と少量の炭水化
物とを含有することが判明した。蛋白質含有量はビュー
レット法で測定した。
このように製造した凝集剤の凝集効果を試験するため、
陶土と脱イオン水との懸濁物を用いて、標準沈降試験を
行なった。陶土／水の懸濁物をガラス管中で振とうした
後、試験すべき試料をこのガラス管の頂部に液状で導入
し、次いでこのガラス管をシールしかつ静かに約１５秒
間づつ３回転倒させ、その後垂直に保った。ガラス管の
目盛りにより沈降時間を記録した。所定の乾燥重量に対
する沈降時間が早い程、凝集剤は良好である。この沈降
試験は迅速であるが、比較的簡単な試験であり、結果に
も成る程度の変動が観察された。５秒間の沈降時間を得
るには、平均してこの凝集剤０．９＋ｇ （乾燥固形物
）が必要とされることが判明した。これに対し、工業用
３２集剤（デカボールＣ３３０１’ ）を用いて行った
比較試験では、同じ沈降時間を得るため３．３７■（乾
燥固形物）が必要とされることが判明した。
陶土と脱イオン水との懸濁物を用いて、標準沈降試験を
行なった。陶土／水の懸濁物をガラス管中で振とうした
後、試験すべき試料をこのガラス管の頂部に液状で導入
し、次いでこのガラス管をシールしかつ静かに約１５秒
間づつ３回転倒させ、その後垂直に保った。ガラス管の
目盛りにより沈降時間を記録した。所定の乾燥重量に対
する沈降時間が早い程、凝集剤は良好である。この沈降
試験は迅速であるが、比較的簡単な試験であり、結果に
も成る程度の変動が観察された。５秒間の沈降時間を得
るには、平均してこの凝集剤０．９＋ｇ （乾燥固形物
）が必要とされることが判明した。これに対し、工業用
３２集剤（デカボールＣ３３０１’ ）を用いて行った
比較試験では、同じ沈降時間を得るため３．３７■（乾
燥固形物）が必要とされることが判明した。
実施例２
同し′！Ａ置を用いたが、次のような異なる工程パラメ
ータを選択することにより実施例１を反（ダした。
ータを選択することにより実施例１を反（ダした。
培地の流速は毎時７．３ ｍｌ （希釈速度０．００７
３ｈｒ−１：とし、流出物回収時間は３８４．３時間で
あり、溶存酸素含量は８４〜９４％であり、温度は２４
〜２５℃であり、かつｐｌｌは７．１〜７．２５とした
。２１５１の収量の液状凝集剤を、実施例１に記載した
と同様に遠心分離により抽出した。抽出した凝集剤の乾
ｊＭ屯甲は２．５６４ｇであると判明した。ビューレッ
ト試験において、この凝集剤の固形物は約３６Ｊｉ量％
の蛋白質を含有することが判明した。
３ｈｒ−１：とし、流出物回収時間は３８４．３時間で
あり、溶存酸素含量は８４〜９４％であり、温度は２４
〜２５℃であり、かつｐｌｌは７．１〜７．２５とした
。２１５１の収量の液状凝集剤を、実施例１に記載した
と同様に遠心分離により抽出した。抽出した凝集剤の乾
ｊＭ屯甲は２．５６４ｇであると判明した。ビューレッ
ト試験において、この凝集剤の固形物は約３６Ｊｉ量％
の蛋白質を含有することが判明した。
実施例１に記載した沈降試験と同様に、実施例２の凝集
剤で得られた沈降時間は製造された液状凝集剤の希釈度
に依存した。しかしながら、５秒間の沈降時間を得るに
は、平均して２．１７ｍｇ（乾燥固形物）の実施例２の
凝集剤が必要とされることが判った。
剤で得られた沈降時間は製造された液状凝集剤の希釈度
に依存した。しかしながら、５秒間の沈降時間を得るに
は、平均して２．１７ｍｇ（乾燥固形物）の実施例２の
凝集剤が必要とされることが判った。
実施例３
同じ装置を用いたが、この場合培地流速を０．０２５ｈ
戸の希釈速度を与えるよう毎時２５．７ｍｌまで増大さ
せることにより、実施例１を反復した。
戸の希釈速度を与えるよう毎時２５．７ｍｌまで増大さ
せることにより、実施例１を反復した。
１１７ ｍｌの収量の液状凝集剤を遠心分離により抽出
しノこ。
しノこ。
沈降試験において、最小沈降時間は５秒以上であり、１
０秒間の沈降時間を得るには平均して］、、７５℃１ｇ
（乾燥固形物）の凝集剤が必要とされることが判った
。
０秒間の沈降時間を得るには平均して］、、７５℃１ｇ
（乾燥固形物）の凝集剤が必要とされることが判った
。
実施例１〜３の結果を下表に示す：
希釈速度が低い程、流出液の静止時間が長くなる。実験
的証明は流出液容器における静止時間を２倍にすると、
生成される凝集剤の量が２倍以上となることを示唆して
いる。
的証明は流出液容器における静止時間を２倍にすると、
生成される凝集剤の量が２倍以上となることを示唆して
いる。
０．００１〜０．１ｈｒ−’ の範囲の希釈速度を使用
し得ると思われるが、０．０３ｈｒ司未滴の速度が好適
である。溶存酸素含有量は培養の段階および培地の流速
に応じて２〜９０％の範囲で変化しうるが、好ましくは
８０％以上とすべきである。２５℃の温度が好適である
が、２０〜７０℃の範囲の温度も使用することができる
。ｐＨは７．２５に維持するのが好適であるが、４”〜
８もしくはそれ以上のｐｌｌでさえ用いることができる
。
し得ると思われるが、０．０３ｈｒ司未滴の速度が好適
である。溶存酸素含有量は培養の段階および培地の流速
に応じて２〜９０％の範囲で変化しうるが、好ましくは
８０％以上とすべきである。２５℃の温度が好適である
が、２０〜７０℃の範囲の温度も使用することができる
。ｐＨは７．２５に維持するのが好適であるが、４”〜
８もしくはそれ以上のｐｌｌでさえ用いることができる
。
バッチ式培養を用いる本発明の具体例を以下の実施例４
〜６で説明する。
〜６で説明する。
これらのバッチ式培養例においては、下記する培地を個
々の実施例で特定したように僅かに変１ヒさせて使用し
、かつこれら成分をｌ１ｌｉｌ々に水道水で溶解させか
つ所定濃度まで希釈した：オルト燐酸−カリウム １３
．６ｇ ／ １硫酸アンモニウム ２ｇ／ｌ 硫酸マグネシウム ０．２ｇ／ １ 水酸化カリウム ３．７８ｇ／ １ グルコース（変化量） ０．０５騨／Ｖ％〜２貨／Ｖ％
ベプＩ・ン（変化量） ０．１ｗ／ｖ％〜２ｖ４／ｖ％
グルコースは他の成分とは別途に殺菌した。
々の実施例で特定したように僅かに変１ヒさせて使用し
、かつこれら成分をｌ１ｌｉｌ々に水道水で溶解させか
つ所定濃度まで希釈した：オルト燐酸−カリウム １３
．６ｇ ／ １硫酸アンモニウム ２ｇ／ｌ 硫酸マグネシウム ０．２ｇ／ １ 水酸化カリウム ３．７８ｇ／ １ グルコース（変化量） ０．０５騨／Ｖ％〜２貨／Ｖ％
ベプＩ・ン（変化量） ０．１ｗ／ｖ％〜２ｖ４／ｖ％
グルコースは他の成分とは別途に殺菌した。
培地は１２１℃かつ１５ｐｓｉｇにて殺菌した。
実施例４
５００１のガラス振とうフラスコを準備し、グルコース
０．２５％とペプトン０．２５％とを含有する、ｌ１記
バッチ式培地２００ ｍｌを加え、これに殺菌ループを
用いて寒天板から直接にシュードモナス・フルオレッセ
ンスを接種した。フラスコに殺菌しうるポリプロピレン
ホームの栓を施し、これを空気の流入を可能にしかつフ
ィルタとして作用させた。培養物を振とう培養器にて２
５℃で増殖させた。４ｍｌの試料を接種してから８９時
間後に培養物から取り出し、次の処理にかけて凝集剤を
得た。化学溶菌剤、すなわちステリコールをこの例で使
用した。試料を１６３６Ｘ ｇにて２５分間遠心分離し
、上澄液を捨てた。次いで、菌体ペレットを０．５ ｎ
＋１の予め作成したステリコール溶液（０，２ｍｌのス
テリコール濃厚物＋４．８１の脱イオン水）に再懸濁さ
せ、そして激しく１分間攪拌した。攪拌を開始してから
５分後、凝集剤を実施例１〜３に記載したと同じ方法を
用いて凝集能力につき試験した。
０．２５％とペプトン０．２５％とを含有する、ｌ１記
バッチ式培地２００ ｍｌを加え、これに殺菌ループを
用いて寒天板から直接にシュードモナス・フルオレッセ
ンスを接種した。フラスコに殺菌しうるポリプロピレン
ホームの栓を施し、これを空気の流入を可能にしかつフ
ィルタとして作用させた。培養物を振とう培養器にて２
５℃で増殖させた。４ｍｌの試料を接種してから８９時
間後に培養物から取り出し、次の処理にかけて凝集剤を
得た。化学溶菌剤、すなわちステリコールをこの例で使
用した。試料を１６３６Ｘ ｇにて２５分間遠心分離し
、上澄液を捨てた。次いで、菌体ペレットを０．５ ｎ
＋１の予め作成したステリコール溶液（０，２ｍｌのス
テリコール濃厚物＋４．８１の脱イオン水）に再懸濁さ
せ、そして激しく１分間攪拌した。攪拌を開始してから
５分後、凝集剤を実施例１〜３に記載したと同じ方法を
用いて凝集能力につき試験した。
実施例５
実施例４と同様に０．２５Ｗ／Ｖ％のグルコースと０．
２５Ｗ／Ｖペプトンとを含有するバッチ式培養物を作成
した。２５℃にて１６３時間培養した後、２００ ｍｌ
の培養物を回収し、次いで１６３６Ｘ ｇにて２０分間
遠心分離した。菌体ペレットが形成され、これを２５ｍ
１の脱イオン水に再懸濁させた。この懸濁物を３０分間
静置し、その後これを短時間かつ激しくＩＩＩ！ドして
懸濁を完全となし、そしてガラス煮沸管に移した。この
濃厚菌体懸濁物を次いで９０°Ｃの水浴中に５分間浸漬
し、その後これを流水で冷却した。しだがって、熱が溶
菌剤として作用し、かつこの作用を流水により急１・５
■止ざ ・Ｕ ノこ。
２５Ｗ／Ｖペプトンとを含有するバッチ式培養物を作成
した。２５℃にて１６３時間培養した後、２００ ｍｌ
の培養物を回収し、次いで１６３６Ｘ ｇにて２０分間
遠心分離した。菌体ペレットが形成され、これを２５ｍ
１の脱イオン水に再懸濁させた。この懸濁物を３０分間
静置し、その後これを短時間かつ激しくＩＩＩ！ドして
懸濁を完全となし、そしてガラス煮沸管に移した。この
濃厚菌体懸濁物を次いで９０°Ｃの水浴中に５分間浸漬
し、その後これを流水で冷却した。しだがって、熱が溶
菌剤として作用し、かつこの作用を流水により急１・５
■止ざ ・Ｕ ノこ。
生成した物質は極めて粘性であり、したがっ°ζこれを
希釈しく４ｍ１の試料＋１６ｍ１の脱イオン水）、冷却
の直後に上記と同様に沈降試験を行った。
希釈しく４ｍ１の試料＋１６ｍ１の脱イオン水）、冷却
の直後に上記と同様に沈降試験を行った。
一実施例６
実施例５におけると同じ培地を使用し、かつ培養物を２
１１時間増殖させ、その後にフラスコを煮沸浴中に３分
間浸漬した。培養物は透明かつゼラチン状となり、この
物質３０ｍ ｌを１０％安息香酸ナトリウム溶液３０ｍ
ｌと混合して、５Ｗ／Ｖ％の安息香酸ナトリウム溶液
における凝集剤の溶液を作成した。この溶液と安息香酸
ナトリウムで処理しないゼラチン状物質との両者を次い
で沈降試験にかげ、これにより１４￥られた異なる結果
は安息香酸ナトリウムが固定剤かつ１呆存料として作用
し、溶菌を防止することを示した。
１１時間増殖させ、その後にフラスコを煮沸浴中に３分
間浸漬した。培養物は透明かつゼラチン状となり、この
物質３０ｍ ｌを１０％安息香酸ナトリウム溶液３０ｍ
ｌと混合して、５Ｗ／Ｖ％の安息香酸ナトリウム溶液
における凝集剤の溶液を作成した。この溶液と安息香酸
ナトリウムで処理しないゼラチン状物質との両者を次い
で沈降試験にかげ、これにより１４￥られた異なる結果
は安息香酸ナトリウムが固定剤かつ１呆存料として作用
し、溶菌を防止することを示した。
このように溶菌を調節することにより、優秀な凝集剤が
生成された。
生成された。
さらに実験が示すところでは、たとえばイー・コリ （
ＮＣＩＢ １００００）およびバチルス・セレウス（Ｂ
ＲＩ、 ２４０１）のような池の微生物をこれら特定微
生物に適する工程条件を選択して使用することができ、
さらに各場合につき必要とされかつ通ずる化学溶菌剤ま
たは熱を用いることによりこれら他の微生物を処理する
ことができる。
ＮＣＩＢ １００００）およびバチルス・セレウス（Ｂ
ＲＩ、 ２４０１）のような池の微生物をこれら特定微
生物に適する工程条件を選択して使用することができ、
さらに各場合につき必要とされかつ通ずる化学溶菌剤ま
たは熱を用いることによりこれら他の微生物を処理する
ことができる。
生成凝集剤を冷凍機中で貯蔵したり或いはこれを上記実
施例にお４ノると同様に使用する前に保存料で処理する
代りに、たとえば凍結、噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥
、ホルマリン中での貯蔵Ｊ′夕よびアルコール中での貯
蔵のような他の貯蔵法も使用することができる。たとえ
ば、この凝集剤は約−１０℃に凍結させることにより、
はば劣化することなく、少なくとも１７ケ月間にわノこ
り充分に貯蔵しうろことが判明した。溶菌剤の使用は、
微生物の分解を促進することにより凝集剤の生成時間を
短縮することができる。
施例にお４ノると同様に使用する前に保存料で処理する
代りに、たとえば凍結、噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥
、ホルマリン中での貯蔵Ｊ′夕よびアルコール中での貯
蔵のような他の貯蔵法も使用することができる。たとえ
ば、この凝集剤は約−１０℃に凍結させることにより、
はば劣化することなく、少なくとも１７ケ月間にわノこ
り充分に貯蔵しうろことが判明した。溶菌剤の使用は、
微生物の分解を促進することにより凝集剤の生成時間を
短縮することができる。
しかしながら、凝集剤の効果はｉ［１１分子は化合物（
恐らく蛋白質）の生成に依存するので、これら高分子は
化合物の分解を防止するのが重要であり、かつこの分解
を抑制するよう溶菌剤の効果を調節する必要がある。培
養物が溶菌剤、たとえばステリコールのようなフェノー
ル性の滅菌剤により汚染された場合、溶菌剤の除去また
はその化学的中和により、たとえば溶菌剤を水、アルコ
ールまたはアセトンで洗浄することにより分解を抑制す
ることができる。
恐らく蛋白質）の生成に依存するので、これら高分子は
化合物の分解を防止するのが重要であり、かつこの分解
を抑制するよう溶菌剤の効果を調節する必要がある。培
養物が溶菌剤、たとえばステリコールのようなフェノー
ル性の滅菌剤により汚染された場合、溶菌剤の除去また
はその化学的中和により、たとえば溶菌剤を水、アルコ
ールまたはアセトンで洗浄することにより分解を抑制す
ることができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）培地中で微生物を増殖させ、培養された微生物を
高分子量化合物を含有する物質を生成する程度まで調節
された溶菌にかけることを特徴とする有機凝集剤の製造
方法。 （２）微生物を連続培養で増殖させ、温度とｐＨと希釈
速度とを所定範囲内に維持する特許請求の範囲第１項記
載の方法。 （３）温凌を２０〜７０℃の範囲に維持し、ｐＨを４〜
８の範囲に維持し、かつ希釈速度をＯ，ＯＱ１〜０ 、
１１＋−の範囲にする特許請求の範囲第２項記・戊の方
法。 （４）微生物の増ηハの際、培地の溶存酸素レベルを８
０〜９８％に維持する特許請求の範囲第１項記載の方法
。 （５）微生物を培地に接柱しかつ次いで所定時間にわた
り攪拌するバッチ式培養で増殖させる特許請求の範囲第
１項記載の方法。 （，６）８１１節された溶菌は化学溶菌剤で行なう特許
請求の範囲第１項記載の方法。 （７）溶・菌剤がキシレノールを含有する洗剤溶液であ
わ、それらの成分を所定時間にわたり攪拌し、前記溶菌
剤を次いで洗浄により除去して溶菌を停止させる特許請
求の範囲第６項記載の方法。 （８）調節された溶菌は、微生物を５０〜１００℃の範
囲の高温度に所定時間にわたり露呈させた後に急速冷却
して行なう特許請求の範囲第１項記載の方法。 （９）ｍ節された溶菌は、微生物を自然に所定時間にわ
たり溶菌させ、次いでこれを保存料を用いて固定するこ
とにより行なう特許請求の範囲第１項記載の方法。 （１０）調節された溶菌を停止させ、かつ保存料を用い
て固定する特許請求の範囲第１項記載の方法。 （１１）保存料が安息香酸ナトリウムである特許請求の
範囲第９項または第１０項記載の方法。 （１２）培地が資化性炭素を含有し、かつ調節された／
８■１工程の前に遠心分離により微生物を前記培地から
除去する特許請求の範囲第１項記載の方法。 （１３）高分子量化合物が蛋白質を含有し、かつ低分子
量化合物を調節された溶菌の生成物から除去する特許請
求の範囲第１項記載の方法。 （１４） 微生物がシュードモナスの菌株である特許請
求の範囲第１項記載の方法。 （１５）高分子〜量化合物を含有する物質からなり、か
つ特許請求の範囲第１項乃至第１４項のいずれかに記載
の方法によりＭｔｕ造される有機凝集剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8400816 | 1984-01-12 | ||
| GB848400816A GB8400816D0 (en) | 1984-01-12 | 1984-01-12 | Flocculating agent |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60172316A true JPS60172316A (ja) | 1985-09-05 |
Family
ID=10554898
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60002313A Pending JPS60172316A (ja) | 1984-01-12 | 1985-01-11 | 凝集剤 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0149514A3 (ja) |
| JP (1) | JPS60172316A (ja) |
| GB (2) | GB8400816D0 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03505401A (ja) * | 1988-06-27 | 1991-11-28 | ジェネックス・コーポレーション | 組換えタンパク質の培養培地への熱放出 |
| RU2050333C1 (ru) * | 1992-12-14 | 1995-12-20 | Лимнологический институт СО РАН | Способ обезвреживания отбельных стоков целлюлозно-бумажного производства |
| CA2176496C (en) * | 1993-11-29 | 1999-09-28 | Kathleen A. Clark | Method for extracting nucleic acids from a wide range of organisms |
| NL1025149C2 (nl) * | 2003-12-30 | 2005-07-04 | Univ Delft Tech | Werkwijze voor het produceren van een fermentatieproduct uit een organisme. |
| KR100601982B1 (ko) * | 2005-01-20 | 2006-07-18 | 삼성전자주식회사 | 흡열반응을 통한 가열-냉각 과정에 의한 세포 용해 방법 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3346463A (en) * | 1964-09-10 | 1967-10-10 | Kerr Mc Gee Chem Corp | Stabilization and enhancement of the activity of flocculants |
| US3681283A (en) * | 1970-09-02 | 1972-08-01 | Gen Mills Inc | Waste treatment with nucleoprotein flocculating agent |
| US3684706A (en) * | 1971-01-26 | 1972-08-15 | Ralph A Bomstein | Waste treatment with microbial nucleoprotein flocculating agent |
| US4356095A (en) * | 1973-11-23 | 1982-10-26 | Mobil Oil Corporation | Water-soluble polymers and utilization thereof |
| ZA747631B (en) * | 1973-12-04 | 1975-12-31 | American Bioculture | Production of algal bio-polymers |
| JPS5516410Y2 (ja) * | 1974-04-09 | 1980-04-17 | ||
| JPS5186189A (ja) * | 1974-12-25 | 1976-07-28 | Ajinomoto Kk | Biseibutsunyorutanpakugyoshukatsuseibutsushitsuno seizoho |
| GB1573429A (en) * | 1977-04-21 | 1980-08-20 | Hartley Simon Ltd | Treatment of effluents |
| FR2445299A1 (fr) * | 1978-12-28 | 1980-07-25 | Rhone Poulenc Ind | Adjuvant de floculation pour la purification des eaux et composition renfermant ledit adjuvant |
| FR2516397B1 (fr) * | 1981-11-16 | 1988-01-15 | Rhone Poulenc Spec Chim | Adjuvant de floculation et procede pour la purification des eaux |
| US4490471A (en) * | 1981-12-11 | 1984-12-25 | Ciba-Geigy Corporation | Microorganisms of the genus Pseudomonas and process for degrading compounds which contain methyl groups in aqueous solutions |
-
1984
- 1984-01-12 GB GB848400816A patent/GB8400816D0/en active Pending
-
1985
- 1985-01-03 GB GB08500101A patent/GB2155002A/en not_active Withdrawn
- 1985-01-04 EP EP85300063A patent/EP0149514A3/en not_active Withdrawn
- 1985-01-11 JP JP60002313A patent/JPS60172316A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2155002A (en) | 1985-09-18 |
| EP0149514A3 (en) | 1987-07-01 |
| GB8500101D0 (en) | 1985-02-13 |
| EP0149514A2 (en) | 1985-07-24 |
| GB8400816D0 (en) | 1984-02-15 |
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