JPS60172300A - リパ−ゼ活性測定方法 - Google Patents
リパ−ゼ活性測定方法Info
- Publication number
- JPS60172300A JPS60172300A JP2729684A JP2729684A JPS60172300A JP S60172300 A JPS60172300 A JP S60172300A JP 2729684 A JP2729684 A JP 2729684A JP 2729684 A JP2729684 A JP 2729684A JP S60172300 A JPS60172300 A JP S60172300A
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- JP
- Japan
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- fatty acid
- lipase
- reaction
- polyethylene glycol
- alcohol
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
測定方法に関するものである。
従来のり・ぞーゼ活性測定法は、オリーブオイル又はト
リオレインを適当な緩衝液に懸濁させ、これにリパーゼ
を作用させて濁度の変化を測定することによってめる方
法であるが、この方法は懸濁方法あるいは懸濁状態によ
Ｑ発現するリパーゼの活性が異なるなど感度及び再現性
に問題があった。このほか、古くは遊離脂肪酸をアルカ
リ滴定するＣｈｅ ｒｒｙ−Ｇｒａｎｄａ ｌ ｌらの
方法があったが滴定操作が難かしいために個人差を生じ
やすいという問題があった。また、α−ナフトール誘導
体などの合成基質を用いる方法も開発されているが、基
質が水に不溶であること、アリルエステラーゼなど仙の
エステラーゼも作用してしまうことなどにより誤差を生
じやすいという問題があった。
リオレインを適当な緩衝液に懸濁させ、これにリパーゼ
を作用させて濁度の変化を測定することによってめる方
法であるが、この方法は懸濁方法あるいは懸濁状態によ
Ｑ発現するリパーゼの活性が異なるなど感度及び再現性
に問題があった。このほか、古くは遊離脂肪酸をアルカ
リ滴定するＣｈｅ ｒｒｙ−Ｇｒａｎｄａ ｌ ｌらの
方法があったが滴定操作が難かしいために個人差を生じ
やすいという問題があった。また、α−ナフトール誘導
体などの合成基質を用いる方法も開発されているが、基
質が水に不溶であること、アリルエステラーゼなど仙の
エステラーゼも作用してしまうことなどにより誤差を生
じやすいという問題があった。
本発明者らは、これらの問題点を解決してリパーゼの活
性を正確かつ簡便に測定する方法を開発すべく種を検討
の結果、水溶性の新規なリ・ヤーゼ基質金開発するに至
り、この基質を用いれば前記の問題点をことごとく解決
してリノや一ゼ活性を正Ｕ（ｔ’．かつ簡便に測定しう
ろことを見出して本発明を完成することができた。
性を正確かつ簡便に測定する方法を開発すべく種を検討
の結果、水溶性の新規なリ・ヤーゼ基質金開発するに至
り、この基質を用いれば前記の問題点をことごとく解決
してリノや一ゼ活性を正Ｕ（ｔ’．かつ簡便に測定しう
ろことを見出して本発明を完成することができた。
すなわち、本発明はアルコール重合体の脂肪酸エステル
をり・母−ゼの反応基質として用いることを特徴とする
ＩＪ 、臂一ゼの活性測定方法に関するものである。
をり・母−ゼの反応基質として用いることを特徴とする
ＩＪ 、臂一ゼの活性測定方法に関するものである。
アルコール重合体はポリエチレングリコール、ポリビニ
ルアルコールなどである。分子量は問わないが通常２０
０〜２０，０００程度であシ、例えばヒト由来のリノ＋
−ゼの場合には５００〜２，０００程度、そして細菌由
来のリパーゼの場合には２．０００〜６．０００程度が
特に好適である。
ルアルコールなどである。分子量は問わないが通常２０
０〜２０，０００程度であシ、例えばヒト由来のリノ＋
−ゼの場合には５００〜２，０００程度、そして細菌由
来のリパーゼの場合には２．０００〜６．０００程度が
特に好適である。
脂肪酸は炭素数が５〜２２程度のものが適当であり、例
えば、ラウリン酸、ノぐルミチン酸、ステアリン酸、ベ
ヘン酸、オレイン酸、リルン酸、ヤ７油脂肪酸、硬化牛
脂脂肪酸などである。
えば、ラウリン酸、ノぐルミチン酸、ステアリン酸、ベ
ヘン酸、オレイン酸、リルン酸、ヤ７油脂肪酸、硬化牛
脂脂肪酸などである。
アルコール１１ｆ合体に脂肪酸をエステル結合させる方
法は公知の方法に準じて行なえばよく、酸触媒を利用す
る方法、酸クロライド化する方法、酸アミド化する方法
などをいずれも利用できる。エステル化部位はポリエチ
レングリコールなどの場合には両末端の水酸基の一方又
は両方になるが、ポリビニルアルコールなどの場合には
各重合単位ごとに水酸基があるためこれらを適宜エステ
ル化しうる。ポリビニルアルコールの場合のエステル化
量は水溶性及び酵素作用の容易性などから定められ、通
常は全水酸基の１／１０−１／３程度をエステル化する
のがよい。
法は公知の方法に準じて行なえばよく、酸触媒を利用す
る方法、酸クロライド化する方法、酸アミド化する方法
などをいずれも利用できる。エステル化部位はポリエチ
レングリコールなどの場合には両末端の水酸基の一方又
は両方になるが、ポリビニルアルコールなどの場合には
各重合単位ごとに水酸基があるためこれらを適宜エステ
ル化しうる。ポリビニルアルコールの場合のエステル化
量は水溶性及び酵素作用の容易性などから定められ、通
常は全水酸基の１／１０−１／３程度をエステル化する
のがよい。
このようなアルコール重合体脂肪酸エステルは水溶性の
ものでなければならない。
ものでなければならない。
例としては、ぼりエチレングリコールオレイト１、ＪＰ
リエチレングリコールノ９ルミテート、ポリエチレン
グリコールステアレート、？リビニルアルコールパルミ
テート、ホリビニルアルコールオレイトなどを誉げるこ
とができる。
リエチレングリコールノ９ルミテート、ポリエチレン
グリコールステアレート、？リビニルアルコールパルミ
テート、ホリビニルアルコールオレイトなどを誉げるこ
とができる。
測定方法としては、この反応基質に測定対象であるＩＪ
ノ９−ゼを作用させてアルコール重合体と脂肪酸に分
解し、この系の変化を定量すればよい。
ノ９−ゼを作用させてアルコール重合体と脂肪酸に分
解し、この系の変化を定量すればよい。
リパーゼの反応条件は当該リパーゼの活性、至適ＰＨ１
至適温度、測定機器の感度などを考慮して定めればよい
。
至適温度、測定機器の感度などを考慮して定めればよい
。
系の変化量は、本発明の反応基質が水溶性である特徴を
活かしてアルコール重合体又は脂肪酸の生成量を比色定
量する方法が簡便な点で好都合である。
活かしてアルコール重合体又は脂肪酸の生成量を比色定
量する方法が簡便な点で好都合である。
アルコール重合体の比色定量法としては、例えばポリエ
チレングリコールの場合にはポリエチレングリコール酸
化酵素（ｐＥＧｏ）で酸化せしめ、それによる水素受容
体であるジクロロフェノールインドフェノールの吸収の
減少を比色定量する方法がある。この方法における反応
は次のように進行ＨＯ＋ＣＨ２−ＣｌＩ２−０西メＨ２
−ＣＨ２−ＯＨ＋ ＲＣ００Ｈ（１１）の反応の時点で
ジクロロフェノールインドフェノールに水素が移動し、
ジクロロフェノールインドフェノールは還元・されて宵
色から無色のロイコ体になる。ポリエチレングリコール
ハＰＫＧＯの作用によって（Ｉｆ）、（ＩＩＩ）、（Ｉ
Ｖ）、（Ｖ）と反応が進行し、各反応ごとにジクロロフ
ェノールインドフェノールを還元する。従ってジクロロ
フェノールインドフェノールの還元はポリエチレングリ
コールの重合度に応じて増幅され、その割合は例えばポ
リエチレングリコールの重合度（ｎ）が約２０の場合に
は７倍程度である。この方法に使用するＰＥＧＯの種類
、由来は問わないが、例えば回合ら（Ａｐｐｌ ｌｅｄ
ａｎ’ｄＦ：ｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｅｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ １９７８．Ａｐｒ、６７９−６８４）
が分離した微生物から得られるものを使用することがで
きる。ポリビニルアルコールの場合にはポリビニルアル
コール酸化酵素の存在が知られている。この方法は、本
発明者らが新たに開発したものであり、きわめて簡単に
測定できるとともに、反応の増幅効果によって測定感匿
も大ｒｌＪに向上するという利点を有している。
チレングリコールの場合にはポリエチレングリコール酸
化酵素（ｐＥＧｏ）で酸化せしめ、それによる水素受容
体であるジクロロフェノールインドフェノールの吸収の
減少を比色定量する方法がある。この方法における反応
は次のように進行ＨＯ＋ＣＨ２−ＣｌＩ２−０西メＨ２
−ＣＨ２−ＯＨ＋ ＲＣ００Ｈ（１１）の反応の時点で
ジクロロフェノールインドフェノールに水素が移動し、
ジクロロフェノールインドフェノールは還元・されて宵
色から無色のロイコ体になる。ポリエチレングリコール
ハＰＫＧＯの作用によって（Ｉｆ）、（ＩＩＩ）、（Ｉ
Ｖ）、（Ｖ）と反応が進行し、各反応ごとにジクロロフ
ェノールインドフェノールを還元する。従ってジクロロ
フェノールインドフェノールの還元はポリエチレングリ
コールの重合度に応じて増幅され、その割合は例えばポ
リエチレングリコールの重合度（ｎ）が約２０の場合に
は７倍程度である。この方法に使用するＰＥＧＯの種類
、由来は問わないが、例えば回合ら（Ａｐｐｌ ｌｅｄ
ａｎ’ｄＦ：ｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｅｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ １９７８．Ａｐｒ、６７９−６８４）
が分離した微生物から得られるものを使用することがで
きる。ポリビニルアルコールの場合にはポリビニルアル
コール酸化酵素の存在が知られている。この方法は、本
発明者らが新たに開発したものであり、きわめて簡単に
測定できるとともに、反応の増幅効果によって測定感匿
も大ｒｌＪに向上するという利点を有している。
脂肪酸の比色定量法としては、例えば遊離してくる脂肪
酸に、アシルＣｏＡシンセターゼ、ＣｏＡオキシダーゼ
及びノｅ−オキシダーゼを順次作用させてクロモダンの
生成量全比色定量する方法、アルカンモノオキシゲナー
ゼ及びルブレドキシンレダクターゼを作用させてＮＡＤ
ＰＨ減少量を比色定量する方法、アルカンモノオキシダ
ナーゼ及びチトクロムＰ−４５０レダクターゼを作用さ
せてＮＡＤＨの減少Ｒｔ比色定損する方法などを利用す
ればよく、そのほかの既存の方法もすべて利用しうる。
酸に、アシルＣｏＡシンセターゼ、ＣｏＡオキシダーゼ
及びノｅ−オキシダーゼを順次作用させてクロモダンの
生成量全比色定量する方法、アルカンモノオキシゲナー
ゼ及びルブレドキシンレダクターゼを作用させてＮＡＤ
ＰＨ減少量を比色定量する方法、アルカンモノオキシダ
ナーゼ及びチトクロムＰ−４５０レダクターゼを作用さ
せてＮＡＤＨの減少Ｒｔ比色定損する方法などを利用す
ればよく、そのほかの既存の方法もすべて利用しうる。
上記の方法において酵素を利用する場合には、すｚ４−
ゼの反応後に他の酵素を加えてさらに反応させてもよく
、全ての酵素等の試薬を予め加えておいて反応を連続的
に行なわせてもよい。また、定量方法もレートアッセイ
法によってもよく、終点法を利用してもよい。
ゼの反応後に他の酵素を加えてさらに反応させてもよく
、全ての酵素等の試薬を予め加えておいて反応を連続的
に行なわせてもよい。また、定量方法もレートアッセイ
法によってもよく、終点法を利用してもよい。
本発明の方法で測定しうるリパーゼの種類は特に制限さ
れるものではなく、膵液、胃液、血清、尿等の各種体液
由来のリパーゼ、ヒマ、ナタネ菜の種子由来のリパーゼ
、カビ、酵母、細菌等各種微生物由来のリパーゼなどそ
の種類を問わず測定できる。
れるものではなく、膵液、胃液、血清、尿等の各種体液
由来のリパーゼ、ヒマ、ナタネ菜の種子由来のリパーゼ
、カビ、酵母、細菌等各種微生物由来のリパーゼなどそ
の種類を問わず測定できる。
本発明の方法は基質に特゛徴があシ、基質として水溶性
のものを開発したことによって容易にかつ正確にリパー
ゼを比色定量できた。
のものを開発したことによって容易にかつ正確にリパー
ゼを比色定量できた。
次に、本発明の方法に使用されるアルコール重合体脂肪
酸エステルの合成例を示す。
酸エステルの合成例を示す。
合成例１
ノ９ルミチン酸１モルの・ジオキサン溶液に塩化チオニ
ル２モルを加え、−昼夜還流後・ジオキサン・及び過剰
の塩化チオニルを減圧下で留去してパルミチン酸クロラ
イドを得た。次に、このパルミチン酸クロライドをジメ
チルホルムアミドに溶解し、これにピリジンを添加後さ
らに２当量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ ） ｋ
加えて一昼夜反応させた。減圧下で溶媒を留去し、残っ
た反応物を水に溶解してシリカダルを用いたクロマトグ
ラフィーで精製し、ポリエチレングリコールパルミテー
トを得た。
ル２モルを加え、−昼夜還流後・ジオキサン・及び過剰
の塩化チオニルを減圧下で留去してパルミチン酸クロラ
イドを得た。次に、このパルミチン酸クロライドをジメ
チルホルムアミドに溶解し、これにピリジンを添加後さ
らに２当量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ ） ｋ
加えて一昼夜反応させた。減圧下で溶媒を留去し、残っ
た反応物を水に溶解してシリカダルを用いたクロマトグ
ラフィーで精製し、ポリエチレングリコールパルミテー
トを得た。
以上の方法でＰＥＧ ４０００及びＰＥＧ １０００を
それぞれエステル化してこれらの星ステル化物の融点を
測定したところ以下の通りであった。
それぞれエステル化してこれらの星ステル化物の融点を
測定したところ以下の通りであった。
ＰＥＧ ４０００ノやルミチー） ５１．１〜５４．３
℃Ｐ、ｇＧ １０００ノやルミテート ３５〜３８．５
℃被−スト法で測定した、ＰＥＧ４０００パルミテート
の赤外線吸収スペクトルを第１図に、そしてＰＥＧ１０
００ Ａ’ルミテートの赤外線吸収スペクトルを第２図
にそれぞれ示す。
℃Ｐ、ｇＧ １０００ノやルミテート ３５〜３８．５
℃被−スト法で測定した、ＰＥＧ４０００パルミテート
の赤外線吸収スペクトルを第１図に、そしてＰＥＧ１０
００ Ａ’ルミテートの赤外線吸収スペクトルを第２図
にそれぞれ示す。
合ＤＹ例２
Ｐ２Ｏ３代わりにポリビニルアルコール（ＰＶＡ ）５
００を用いて合成例１と同様にエステル化を行ない、Ｐ
ｖＡ５００ノやルミテートを得た。こ、のエステルの融
点は９８〜１０２．１℃であり、ペースト法で測定した
赤外線吸収スペクトルは第３図に示す通シであった。
００を用いて合成例１と同様にエステル化を行ない、Ｐ
ｖＡ５００ノやルミテートを得た。こ、のエステルの融
点は９８〜１０２．１℃であり、ペースト法で測定した
赤外線吸収スペクトルは第３図に示す通シであった。
合成例３
ＰＥＧ１００Ｏ２０１／ （０，０２モル）、ピリジ７
２ ｍｌ及“び塩化オレオイル１２ｇ（０，０４モル）
をジメチルホルムアミド約２００ｍＪに溶解して１２時
間反応させた。反応後減圧下で溶媒を留去し、残った反
応物を水で溶解してシリカダルを用いたクロマトグラフ
ィーで精製し、ＰＥＧ１０００オレイトを得た。
２ ｍｌ及“び塩化オレオイル１２ｇ（０，０４モル）
をジメチルホルムアミド約２００ｍＪに溶解して１２時
間反応させた。反応後減圧下で溶媒を留去し、残った反
応物を水で溶解してシリカダルを用いたクロマトグラフ
ィーで精製し、ＰＥＧ１０００オレイトを得た。
このエステルの融点は７２，４〜７５．１℃であり、ペ
ースト法で測定した赤外線吸収スペクトルは第４図に示
す通シであった。
ースト法で測定した赤外線吸収スペクトルは第４図に示
す通シであった。
以下、実施例を示す０
実施例Ｉ
ＰＩＧ １０００７′Ｑルミチー） １０ ｒｎＭ、ア
シルＣＯＡシンセターゼ３Ｕ１４−アミノアンチピリン
０．５ｍＭ及びフェノール３ｍＭを含むｐＨ８，２のト
リス−塩酸緩衝液ｌ ｍｌに血清検体５０μｌを加えて
３７℃で１０分間インキュベートした。これにＣｏＡオ
キシダーゼ３ｔＪＸパーオキシダーゼ３０Ｕ及びＮ−エ
チルマレイミド１ｍＭ’ｉ含む溶液１ｍ１２加えて発色
させ、５０５ｎｍにおける吸光度を測定した。尚、基質
を加えないほかは上記と同様にして吸光度を測定し、こ
の値をブランクとして差引いた。
シルＣＯＡシンセターゼ３Ｕ１４−アミノアンチピリン
０．５ｍＭ及びフェノール３ｍＭを含むｐＨ８，２のト
リス−塩酸緩衝液ｌ ｍｌに血清検体５０μｌを加えて
３７℃で１０分間インキュベートした。これにＣｏＡオ
キシダーゼ３ｔＪＸパーオキシダーゼ３０Ｕ及びＮ−エ
チルマレイミド１ｍＭ’ｉ含む溶液１ｍ１２加えて発色
させ、５０５ｎｍにおける吸光度を測定した。尚、基質
を加えないほかは上記と同様にして吸光度を測定し、こ
の値をブランクとして差引いた。
ΔＥ／ｍｉｎ ： １分間当シの吸光度の変化１２Ｘ１
０３：クロモダンの分子吸光係数０．０５ ：検体量 １．０５ ：総反応液量 １／２ ：Ｈ２Ｏ２２分子より１分のクロモダンが生成
するための係数 得られた結果を下表に示す。尚、従来法であるオリーブ
オイル懸濁液を用いた比濁法でも同じ血清検体のリパー
ゼ活性を測定した結果を併せて同表に示す。
０３：クロモダンの分子吸光係数０．０５ ：検体量 １．０５ ：総反応液量 １／２ ：Ｈ２Ｏ２２分子より１分のクロモダンが生成
するための係数 得られた結果を下表に示す。尚、従来法であるオリーブ
オイル懸濁液を用いた比濁法でも同じ血清検体のリパー
ゼ活性を測定した結果を併せて同表に示す。
本発明法 従来法
血清（Ａ） １．４Ｕ／１２．３％ ０．８３Ｕ／１３
．８９６血清の） １．３ ３．４ ０．２７ ’ ６
．９血清（Ｃ） ７．３ １．３ ．１．５ ２．９実
施例２ ポリエチレングリコールオレイト（平均分子量１５００
） １０ｍＭ ５ＰＫＧＯ４０００Ｕ／ｌ及びツクｏ
ａフェノールインドフェノール０．２ ｍＭを含むトリ
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，２、５０ｍＭ） １ ｍｌに
血−１１０μ／’に加え、３７℃でインキュベートして
５８０ｎｍにおける吸光度の変化を連続的に記録した。
．８９６血清の） １．３ ３．４ ０．２７ ’ ６
．９血清（Ｃ） ７．３ １．３ ．１．５ ２．９実
施例２ ポリエチレングリコールオレイト（平均分子量１５００
） １０ｍＭ ５ＰＫＧＯ４０００Ｕ／ｌ及びツクｏ
ａフェノールインドフェノール０．２ ｍＭを含むトリ
ス−塩酸緩衝液（ｐＨ８，２、５０ｍＭ） １ ｍｌに
血−１１０μ／’に加え、３７℃でインキュベートして
５８０ｎｍにおける吸光度の変化を連続的に記録した。
この吸光度の直線性のある変化部分から１分間轟シの吸
光度の変化量をめ、下記の式を用いてリパーゼ活性を算
出した。
光度の変化量をめ、下記の式を用いてリパーゼ活性を算
出した。
測定結果を次に示す。
ｘ ＳＤ ＣＶ
血清（Ａ） ｎ ＝１０ ２．５ ０．０５１ ２．４
％血清（Ｂ） ｎ ＝１０ １６．１ ０．１５９ １
．０１
％血清（Ｂ） ｎ ＝１０ １６．１ ０．１５９ １
．０１
図面はいずれも本発明の方法に使用されるアルコール重
合体脂肪酸エステルの赤外線吸収スペクトルを示すもの
である。 特許出願人 富士レビオ株式会社 代理人弁理士 １） 中 政 浩 第２図 第１図 ５皮歇（ｃｍ−り 第４図 第３図 ＢＬｉ先（ｃｍ−リ 手続補正書（方式） 昭和５９年６月２０日 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 １事件の表示 特願昭５９−２７２９６号 ２発明の名称 リパーゼ活性測定方法 ３補正をする者 事件との関係 特許出願人 名称 富士レビオ株式会社 ４代理人 居所 〒１０４東京都中央区京橋二丁目１番３号６補正
の対象 明細書の図面の簡単な説明の欄 明細書第１２頁に記載された図面の簡単な説明の欄第３
行の「である。」の後に次の記載を加入する。 ｒ ｉ１図はポ’Ｊエチレングリコール４０００ノやル
ミテート、第２図はポリエチレングリコール１０００パ
ルミテート、第３図はポリビニルアルコール５００ ノ
！ルミテート、そして第４図はポリエチレングリコール
１０００オレイトについて、それぞれペースト法で測定
して得られた結果を示している。」 以上
合体脂肪酸エステルの赤外線吸収スペクトルを示すもの
である。 特許出願人 富士レビオ株式会社 代理人弁理士 １） 中 政 浩 第２図 第１図 ５皮歇（ｃｍ−り 第４図 第３図 ＢＬｉ先（ｃｍ−リ 手続補正書（方式） 昭和５９年６月２０日 特許庁長官 若 杉 和 夫 殿 １事件の表示 特願昭５９−２７２９６号 ２発明の名称 リパーゼ活性測定方法 ３補正をする者 事件との関係 特許出願人 名称 富士レビオ株式会社 ４代理人 居所 〒１０４東京都中央区京橋二丁目１番３号６補正
の対象 明細書の図面の簡単な説明の欄 明細書第１２頁に記載された図面の簡単な説明の欄第３
行の「である。」の後に次の記載を加入する。 ｒ ｉ１図はポ’Ｊエチレングリコール４０００ノやル
ミテート、第２図はポリエチレングリコール１０００パ
ルミテート、第３図はポリビニルアルコール５００ ノ
！ルミテート、そして第４図はポリエチレングリコール
１０００オレイトについて、それぞれペースト法で測定
して得られた結果を示している。」 以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ アルコール重合体の脂肪酸エステルをリパーゼの反
応基質として用いることを特徴とするリノや−ゼの活性
測定方法 ２ アルコール重合体が、Ｊ？ ＩＪエチレングリコー
ル又テリビニルアルコールである特許請求の範囲第１項
記載の測定方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2729684A JPS60172300A (ja) | 1984-02-17 | 1984-02-17 | リパ−ゼ活性測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2729684A JPS60172300A (ja) | 1984-02-17 | 1984-02-17 | リパ−ゼ活性測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60172300A true JPS60172300A (ja) | 1985-09-05 |
| JPH0558719B2 JPH0558719B2 (ja) | 1993-08-27 |
Family
ID=12217121
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2729684A Granted JPS60172300A (ja) | 1984-02-17 | 1984-02-17 | リパ−ゼ活性測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60172300A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0383605A2 (en) * | 1989-02-17 | 1990-08-22 | Nabisco, Inc. | Polyvinyl oleate as a fat replacement |
-
1984
- 1984-02-17 JP JP2729684A patent/JPS60172300A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0383605A2 (en) * | 1989-02-17 | 1990-08-22 | Nabisco, Inc. | Polyvinyl oleate as a fat replacement |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0558719B2 (ja) | 1993-08-27 |
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