JPS60169500A - 生理活性物質の固定化方法 - Google Patents
生理活性物質の固定化方法Info
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- JPS60169500A JPS60169500A JP59026803A JP2680384A JPS60169500A JP S60169500 A JPS60169500 A JP S60169500A JP 59026803 A JP59026803 A JP 59026803A JP 2680384 A JP2680384 A JP 2680384A JP S60169500 A JPS60169500 A JP S60169500A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は酵素、血畝タンパク質等の生理活性物質を担体
であるキトサンを用いて確実かつ効果的に固定化する処
理方法に関するものである。
であるキトサンを用いて確実かつ効果的に固定化する処
理方法に関するものである。
更に詳しくは、本発明は担体としてのキトサンの形状を
変化させることなく酵素、血漿タンパク質等の生理活性
物質を固定化するために、多官能試薬をモル濃度、ＰＨ
値及びイオン強度を調整した酢酸緩衝溶液に溶解し、こ
の液中でキトサンと反応させ、しかる後生理活性物質を
確実に固定化する方法に関するものである。
変化させることなく酵素、血漿タンパク質等の生理活性
物質を固定化するために、多官能試薬をモル濃度、ＰＨ
値及びイオン強度を調整した酢酸緩衝溶液に溶解し、こ
の液中でキトサンと反応させ、しかる後生理活性物質を
確実に固定化する方法に関するものである。
担体に生理活性物質を固定化する一般的な方法としては
、水不溶性担体に物理的１汲着、イオン結合及び共有結
合で結合させる担体結合法、架橋試薬を用いて分子間に
架橋を形成させ不溶化さす架橋法、そして酵素等を担体
ゲルの格子中に包埋させるとか酵素等を担体で被似する
包括法等が知られている。生理活性物質を固定化させる
４−Ｌ！体としては、種々の材料が提案されているか、
このような材料としては水不溶性を有しかつ、安価な担
体てあり、固定化が確実になされる必要かあり、そのよ
うな性質を有する担体としてキチンより誘導されるキト
サンを用いることが好適である。
、水不溶性担体に物理的１汲着、イオン結合及び共有結
合で結合させる担体結合法、架橋試薬を用いて分子間に
架橋を形成させ不溶化さす架橋法、そして酵素等を担体
ゲルの格子中に包埋させるとか酵素等を担体で被似する
包括法等が知られている。生理活性物質を固定化させる
４−Ｌ！体としては、種々の材料が提案されているか、
このような材料としては水不溶性を有しかつ、安価な担
体てあり、固定化が確実になされる必要かあり、そのよ
うな性質を有する担体としてキチンより誘導されるキト
サンを用いることが好適である。
キトサンは、甲殻類、昆虫類等に含まれ自然界に広く分
布して存在しているＮ−アセチル−１）−グルコサミン
β−１４−グリコシド結合している多糖類であるキチン
を、濃苛性アルカリで熱処理し、アセチル基を加水分解
して脱ア七チル化キチンとしたものてあり、キトサン自
体抗凝血性に勝れ、生体組織との親和性も良く、酵素や
免疫吸着体の担体等ノぐイオマテリアルとしても勝れた
素拐である。
布して存在しているＮ−アセチル−１）−グルコサミン
β−１４−グリコシド結合している多糖類であるキチン
を、濃苛性アルカリで熱処理し、アセチル基を加水分解
して脱ア七チル化キチンとしたものてあり、キトサン自
体抗凝血性に勝れ、生体組織との親和性も良く、酵素や
免疫吸着体の担体等ノぐイオマテリアルとしても勝れた
素拐である。
生理活性物質を担体に固定化する方法については上述し
た通り、種々の固定化法が知られているか、キトサンを
担体として生１！Ｉ！ 活性物質を固定化する方法につ
いても、ゲルタールアルデヒドによる架橋法及びＮ ａ
ｍ、２処理による共有結合法による方法（特開昭５２−
３８９２）、吸着及びカルボジイミド試薬によるペプタ
イド結合による方法（特公昭５３−１０１５０）、又、
主に菌体にス・１する包括法（特開昭５３−１３６５８
４．）等か従来提案されている。
た通り、種々の固定化法が知られているか、キトサンを
担体として生１！Ｉ！ 活性物質を固定化する方法につ
いても、ゲルタールアルデヒドによる架橋法及びＮ ａ
ｍ、２処理による共有結合法による方法（特開昭５２−
３８９２）、吸着及びカルボジイミド試薬によるペプタ
イド結合による方法（特公昭５３−１０１５０）、又、
主に菌体にス・１する包括法（特開昭５３−１３６５８
４．）等か従来提案されている。
しかし、特開昭５２−３８９２号で開示されている三官
能試薬であるゲルタールアルデヒドを用い酵素を固定化
する架橋法では、ゲルタールアルデヒドを酵素と担体を
反応させた後に添加する方法てあり、担体と酵素を直接
反応させることは酵素の分子量の大きさに対しキトサン
のアミノ基か短かく立体障害を生し固定化量を増すこと
か出来ず、ＮａＮＯ２処理のジアゾ法は架橋法より固定
化量が低く、担体強度を低下させる欠点がある。
能試薬であるゲルタールアルデヒドを用い酵素を固定化
する架橋法では、ゲルタールアルデヒドを酵素と担体を
反応させた後に添加する方法てあり、担体と酵素を直接
反応させることは酵素の分子量の大きさに対しキトサン
のアミノ基か短かく立体障害を生し固定化量を増すこと
か出来ず、ＮａＮＯ２処理のジアゾ法は架橋法より固定
化量が低く、担体強度を低下させる欠点がある。
吸着法、ペブタイド結合法、包括法等、キトサンを担体
とし生理活性物質を固定化する開示されている方法にお
いては、酸性溶液で生理活性物質とキトサンを接触させ
るか、この時に、キトサンが溶１ｇ（シ、ゲル化状態と
なるので、次工程として固定化物の回収工程を必要とし
、何れもキトサンと生理活性物質が直接固定化に関与し
、上述した立体障害及び酵素のＣ末端固定化の確率か高
く、Ｎ末端固定化に比べ化学的に不安定となる欠点かあ
る。これらの欠点を解決するため本発明者等は検羽の結
果、キトサンを不溶解の状態のままで生理活性物質を固
定化する、固定化量か高い確実な固定化法を開発した。
とし生理活性物質を固定化する開示されている方法にお
いては、酸性溶液で生理活性物質とキトサンを接触させ
るか、この時に、キトサンが溶１ｇ（シ、ゲル化状態と
なるので、次工程として固定化物の回収工程を必要とし
、何れもキトサンと生理活性物質が直接固定化に関与し
、上述した立体障害及び酵素のＣ末端固定化の確率か高
く、Ｎ末端固定化に比べ化学的に不安定となる欠点かあ
る。これらの欠点を解決するため本発明者等は検羽の結
果、キトサンを不溶解の状態のままで生理活性物質を固
定化する、固定化量か高い確実な固定化法を開発した。
キトサンはＪ）Ｈ６，０より酸・性器ではその溶液に溶
解する性質があり、特に、キトサンを膜状、繊維状に成
型した状態のキトサンを担体として使用した時に溶解し
てしまっては、全くその形状を利用することかできない
。本発明者等は、モル濃度。
解する性質があり、特に、キトサンを膜状、繊維状に成
型した状態のキトサンを担体として使用した時に溶解し
てしまっては、全くその形状を利用することかできない
。本発明者等は、モル濃度。
１） １１を成る範囲とした酢酸緩衝溶液に強酸と強塩
より成る正塩を添加し、成る範囲のイオン強度を持たせ
た溶液とすることてキトザンの溶Ｍを防止し、しかも三
官能試薬であるゲルタールアルデヒドとギトザンの反応
性を促進し、生理活性物質の固定化量も従来の方法より
高水準にし得ることを見出した。
より成る正塩を添加し、成る範囲のイオン強度を持たせ
た溶液とすることてキトザンの溶Ｍを防止し、しかも三
官能試薬であるゲルタールアルデヒドとギトザンの反応
性を促進し、生理活性物質の固定化量も従来の方法より
高水準にし得ることを見出した。
緩衝溶液としては、酢酸−酢酸す） ＩＪウム系。
塩酸−酢酸ナトリウム系、ギ酸−水酸化ナトリウム糸、
クエン酸−クエン酸ナトリウム系、燐酸塩−クエン酸系
等かあるが、生理１古性物質の固定化量及び取扱上から
、酢酸−酢酸す） ＩＪウム糸か好ましい。
クエン酸−クエン酸ナトリウム系、燐酸塩−クエン酸系
等かあるが、生理１古性物質の固定化量及び取扱上から
、酢酸−酢酸す） ＩＪウム糸か好ましい。
酢酸緩衝溶液のモル濃度が高いとキトサンの溶解を押え
るためにイオン強度をかなり高くする必要性か生し、そ
の結果緩衝作用か減少するので、好適な酢酸緩衝溶液の
モル濃度の範囲は、モル濃度をＭとすると、 ０．０５ ＜ Ｍ ＜ ０．２０ である。イオン強度は上記緩衝液のモル濃度とも関連す
るか、イ剖ン強度か０：３〜１０になるυ［１＜上記酢
酸緩衝溶液に正塩を添加する。イオン強度が、０３以下
になると担体であるキトサンか溶液に溶解し、１０以上
になるとキトサンは不溶性であるか生理活性物質の固定
化能力が低下する傾向かあり好ましくない。イオン強度
を調節する薬品としての正塩は、塩化ナトリウム、塩化
カリウム。
るためにイオン強度をかなり高くする必要性か生し、そ
の結果緩衝作用か減少するので、好適な酢酸緩衝溶液の
モル濃度の範囲は、モル濃度をＭとすると、 ０．０５ ＜ Ｍ ＜ ０．２０ である。イオン強度は上記緩衝液のモル濃度とも関連す
るか、イ剖ン強度か０：３〜１０になるυ［１＜上記酢
酸緩衝溶液に正塩を添加する。イオン強度が、０３以下
になると担体であるキトサンか溶液に溶解し、１０以上
になるとキトサンは不溶性であるか生理活性物質の固定
化能力が低下する傾向かあり好ましくない。イオン強度
を調節する薬品としての正塩は、塩化ナトリウム、塩化
カリウム。
硫酸ナトリウム、硫酸カリウム等の強酸と強塩基より得
られる正塩が用いられる。
られる正塩が用いられる。
従来から知られているように、キトサンの溶解について
は特に溶液のＰＩ−１が関係するものであり、本発明に
おいて上記の範囲に緩衝溶液のモル濃度及びイオン強度
を設定した場合、溶液のＰ Ｉ−１か次のような範囲に
おいてキトサンを溶解することなく、多官能試薬と反応
させ得ることが判明した。
は特に溶液のＰＩ−１が関係するものであり、本発明に
おいて上記の範囲に緩衝溶液のモル濃度及びイオン強度
を設定した場合、溶液のＰ Ｉ−１か次のような範囲に
おいてキトサンを溶解することなく、多官能試薬と反応
させ得ることが判明した。
１０Ｍ−１−３，００≦Ｐ Ｉニー１≦５Ｍ＋４．２５
・・・（１，）但しＭは酢酸緩衝溶液のモル濃度てあり
、Ｐｉ−１値は小数２位を四捨五入した値とする。Ｐ
ｉ−１が１０Ｍ＋３．ＯＯ域以下では担体としてのキト
サンの溶解が認められる傾向にあり、又、５Ｍ＋４．２
５域以上ては多′ば能試薬の脱落か見られ、例え固定化
が出来ても固定化効果が減する傾向にある。ＰＩ−Ｉ値
の制御は同一モル濃度の酢酸緩衝溶液の組成である酢酸
と酢酸す） ＩＪウムの溶液の混合比を変えることで行
なう。
・・・（１，）但しＭは酢酸緩衝溶液のモル濃度てあり
、Ｐｉ−１値は小数２位を四捨五入した値とする。Ｐ
ｉ−１が１０Ｍ＋３．ＯＯ域以下では担体としてのキト
サンの溶解が認められる傾向にあり、又、５Ｍ＋４．２
５域以上ては多′ば能試薬の脱落か見られ、例え固定化
が出来ても固定化効果が減する傾向にある。ＰＩ−Ｉ値
の制御は同一モル濃度の酢酸緩衝溶液の組成である酢酸
と酢酸す） ＩＪウムの溶液の混合比を変えることで行
なう。
従って、上記したように本発明は、酢酸溶液のモル濃度
が０．０５〜０．２０モルの範囲でｌ） １−Ｊ値が上
記（１，）式に示す範囲にあり、正塩を加えてイオン強
度を０．３〜１０とした溶液に多官能試薬を溶解し、該
液中でキトサンと反応させた後、生理活性物質を付加固
定することを特徴とするものである。
が０．０５〜０．２０モルの範囲でｌ） １−Ｊ値が上
記（１，）式に示す範囲にあり、正塩を加えてイオン強
度を０．３〜１０とした溶液に多官能試薬を溶解し、該
液中でキトサンと反応させた後、生理活性物質を付加固
定することを特徴とするものである。
上記モル濃度とＰ ｉ（値との関係を参考迄にグラフに
示すと添イ」図面のようになり、本発明によって特定さ
れる範囲はグラフ中の斜線で示した部分に該当する。こ
の範囲は実施例として記載した実験結果及び同様の試験
結果がら得られたものである。
示すと添イ」図面のようになり、本発明によって特定さ
れる範囲はグラフ中の斜線で示した部分に該当する。こ
の範囲は実施例として記載した実験結果及び同様の試験
結果がら得られたものである。
担体としてのキトサンの形状は粉粒状、膜状。
繊維状の何れでもよい。多官能試薬としては、グリオギ
ザ−ルアグルクールアルデヒド、コハク酸アルデヒド、
マレイン酸アルデヒド、ヘキザメチレンジイソシア不一
ト等が挙げられるか、ゲルタールアルデヒドか一般的に
供されている。
ザ−ルアグルクールアルデヒド、コハク酸アルデヒド、
マレイン酸アルデヒド、ヘキザメチレンジイソシア不一
ト等が挙げられるか、ゲルタールアルデヒドか一般的に
供されている。
本発明に用いられる生理活性物質としては、加水分解酵
素、転移酵素、酸化還元酵素、リアーゼ。
素、転移酵素、酸化還元酵素、リアーゼ。
シンテターゼ、イソメラーゼ７等の凡ての酵素。
血清アルブミン、γ−グロブリン、フィブリノーゲン、
の他すポタンパク質、糖タンパク質、ムコタンパク質等
各種血慢タンパク質である。
の他すポタンパク質、糖タンパク質、ムコタンパク質等
各種血慢タンパク質である。
多官能試薬を反応させたキトサンに対し、生理活性物質
を固定化する方法は、従来から知られている共有結合法
による。即ち、生理活性物質を、そのものに好適なＰＩ
−１の緩衝溶液に溶解して多官能試薬と反応したキトサ
ンを接触反応させ、多官能試薬のキトサンと反応してい
ないもう一方の官能基に対し生理活性物質を固定化する
。
を固定化する方法は、従来から知られている共有結合法
による。即ち、生理活性物質を、そのものに好適なＰＩ
−１の緩衝溶液に溶解して多官能試薬と反応したキトサ
ンを接触反応させ、多官能試薬のキトサンと反応してい
ないもう一方の官能基に対し生理活性物質を固定化する
。
本発明の方法によれば、担体としてのキトサンを不溶解
の状態で生理活性物質を固定化できるので、例えば、キ
トサンをカラム等に充填して本発明のモル濃度、 ｌ）
Ｉ−１，、イオン強度を限定した酢酸緩衝溶液中で多
官能試薬と反応させ、しかる後、生理活性物質をそのま
まの状態で固定化可能である。従って、従来の如くキト
サンが溶解したり、ゲル化状態になるので多官能試薬と
反応したキトサン物質を再回収して再びカラムに詰め充
填し固定化すると言うわずられしい工程を経ずに一度に
生理活性物質を固定化出来る利点かある。本発明の方法
で得られた物質はアフイニテイクロマト用担体、バイオ
センサー、免疫吸着体、一般的少体材眉その他食品工業
等広い範囲の分野で応用利用出来る。
の状態で生理活性物質を固定化できるので、例えば、キ
トサンをカラム等に充填して本発明のモル濃度、 ｌ）
Ｉ−１，、イオン強度を限定した酢酸緩衝溶液中で多
官能試薬と反応させ、しかる後、生理活性物質をそのま
まの状態で固定化可能である。従って、従来の如くキト
サンが溶解したり、ゲル化状態になるので多官能試薬と
反応したキトサン物質を再回収して再びカラムに詰め充
填し固定化すると言うわずられしい工程を経ずに一度に
生理活性物質を固定化出来る利点かある。本発明の方法
で得られた物質はアフイニテイクロマト用担体、バイオ
センサー、免疫吸着体、一般的少体材眉その他食品工業
等広い範囲の分野で応用利用出来る。
次に実施例をもって本発明を更に詳細に説明する。
実施例１
酢酸緩衝溶液のモル濃度を０．０３．０．０５．０．１
０゜０．１５．０．２０モルでＰｌ−１値を３．０．３
５．４．０． ／１．５゜５．０．５．３．５．５に夫
々調節し、これに塩化す） ＩＪウムを用いてイオン強
度を夫々０．２．０．３．０．５゜０．８． ］、、０
．１．２と組合せた溶液を調整し、これに２５％ゲルタ
ールアルデヒド１．２５ ｍｌを添加し各５０ｍ１の溶
液を作成した。
０゜０．１５．０．２０モルでＰｌ−１値を３．０．３
５．４．０． ／１．５゜５．０．５．３．５．５に夫
々調節し、これに塩化す） ＩＪウムを用いてイオン強
度を夫々０．２．０．３．０．５゜０．８． ］、、０
．１．２と組合せた溶液を調整し、これに２５％ゲルタ
ールアルデヒド１．２５ ｍｌを添加し各５０ｍ１の溶
液を作成した。
この各溶液に５．１デニールのキトサン繊維を１ｇづつ
加えて、２７℃で４０分てゲルタールアルデヒドと反応
させた。
加えて、２７℃で４０分てゲルタールアルデヒドと反応
させた。
次いで０．１モルリン酸−〇１モルリン酸２ナトリウム
ノ緩？Ｇｍ液（ＰＩ−Ｉ ７．４） ］０００ｍ／！て
過剰のゲルタールアルデヒドを洗浄後、試料を０．５％
のウシ血清アルブミン（和光純薬工業製）を含んだ０．
１モルリン酸−０１モルリン酸２ナトリウム緩衝溶液（
Ｐ ］−１７，４）の５０ｍｄ溶液中て３０”Ｃ，１時
間で反応させウシ血清アルブミンの固定化を行った。固
定化後の残液を検液として２８０ ？ｎμの吸光度を以
ってウシ血清アルブミンの固定化量（ｍ９／キトサンｇ
）をめた。これの結果を第１表に示す。以下表中×はキ
トサンが溶解してしまうことを、又△は多官能試薬の脱
落により固定化か不可能であることを示す。
ノ緩？Ｇｍ液（ＰＩ−Ｉ ７．４） ］０００ｍ／！て
過剰のゲルタールアルデヒドを洗浄後、試料を０．５％
のウシ血清アルブミン（和光純薬工業製）を含んだ０．
１モルリン酸−０１モルリン酸２ナトリウム緩衝溶液（
Ｐ ］−１７，４）の５０ｍｄ溶液中て３０”Ｃ，１時
間で反応させウシ血清アルブミンの固定化を行った。固
定化後の残液を検液として２８０ ？ｎμの吸光度を以
ってウシ血清アルブミンの固定化量（ｍ９／キトサンｇ
）をめた。これの結果を第１表に示す。以下表中×はキ
トサンが溶解してしまうことを、又△は多官能試薬の脱
落により固定化か不可能であることを示す。
第 １ 表
実施例２
酢酸緩衝溶液を用い、実施例１と同様にモル濃度、Ｐ
Ｈを調節し、塩化カリウムでイオン強度を調整した溶液
に２５％ゲルタールアルデヒド１２５ｍ１を含む各５０
ｍ１の溶液を作成した。
Ｈを調節し、塩化カリウムでイオン強度を調整した溶液
に２５％ゲルタールアルデヒド１２５ｍ１を含む各５０
ｍ１の溶液を作成した。
各溶液にキトサン繊維１ｇを加え２７°Ｃで４０分反応
させゲルタールアルデヒド−キトサン繊維を得た。
させゲルタールアルデヒド−キトサン繊維を得た。
この繊維を０１モルリン酸＋０．１モルリン酸２−３−
） ’Ｊ ウＡ緩衝溶液（Ｐ Ｉ−１７，４） １０
００ｍ１で洗浄した後、カタラーゼ（１３１５９ｕｎｉ
）１！７゜ＷＯＲＴｌ−１１ＮＧＴＯＮ １）、 Ｓ、
ＩＮＣ，） １０ｍ９を含ム０．１モルリン酸＋０．
１モルリン酸２ナトリウム緩衝溶液（ＰＩ−１７，４）
１０ｍｌ中で２８℃、１時間反応し固定化カタラーゼ繊
維を得た。
） ’Ｊ ウＡ緩衝溶液（Ｐ Ｉ−１７，４） １０
００ｍ１で洗浄した後、カタラーゼ（１３１５９ｕｎｉ
）１！７゜ＷＯＲＴｌ−１１ＮＧＴＯＮ １）、 Ｓ、
ＩＮＣ，） １０ｍ９を含ム０．１モルリン酸＋０．
１モルリン酸２ナトリウム緩衝溶液（ＰＩ−１７，４）
１０ｍｌ中で２８℃、１時間反応し固定化カタラーゼ繊
維を得た。
固定化後の残液を検液として２８０ｍμの吸光度を以っ
て固定化量をめた、その結果は第２表の通りである。
て固定化量をめた、その結果は第２表の通りである。
第 ２ 表
実施例３
実施例１と同様に酢酸酸性緩衝溶液のモル濃度。
ＩＪ Ｈ値を変化させ更に、塩化ナトリウムでそのイオ
ン強度を変化させた溶液を作り、夫々の溶液に２５％ゲ
ルタールアルデヒド３．７５ｍ１を添加し各１、５０
ｍｌの溶液を作り、夫々に２０〜４０メ゛ンシユのキト
サン粉粒物３ｇを加え２７℃で４０分てゲルタールアル
デヒドと反応させた。
ン強度を変化させた溶液を作り、夫々の溶液に２５％ゲ
ルタールアルデヒド３．７５ｍ１を添加し各１、５０
ｍｌの溶液を作り、夫々に２０〜４０メ゛ンシユのキト
サン粉粒物３ｇを加え２７℃で４０分てゲルタールアル
デヒドと反応させた。
次いで夫々を０１モルリン酸＋０．１モルリン酸２ｔ
）！Ｊ ウＡ溶液（ＰＩ（７，４）１０００ｍｌで洗浄
した後、α−アミラーゼ（２０ユニツ）／〃１ｇ、和光
純薬工業製）５０℃ノを０１モルリン酸＋０１モルリン
酸２ナトリウム溶液（１） Ｉ−Ｊ ７．４ ） １０
ｍｉ＋：Ｊｍ解させた液で２８℃、１時間反応させ固
定化アミラーゼを得た。
）！Ｊ ウＡ溶液（ＰＩ（７，４）１０００ｍｌで洗浄
した後、α−アミラーゼ（２０ユニツ）／〃１ｇ、和光
純薬工業製）５０℃ノを０１モルリン酸＋０１モルリン
酸２ナトリウム溶液（１） Ｉ−Ｊ ７．４ ） １０
ｍｉ＋：Ｊｍ解させた液で２８℃、１時間反応させ固
定化アミラーゼを得た。
この固定化後の残液を検液として２８０ｍμの吸光度を
以ってα−アミラーゼの固定化量を測定した、この結果
を第３表に示した。
以ってα−アミラーゼの固定化量を測定した、この結果
を第３表に示した。
第 ３ 表
図面は酢酸緩衝溶液のモル濃度とＰ Ｈが、キトサンの
溶解と、キトサンと多官能試檗との反応に及ぼす影響を
示すグラフである。 特許出願人 富士紡績株式会社 代理人 弁理士 大 野 克 躬 大 野 令 子 〃 大 野 柳之輔 →Ｌル儂鷹ル） 手続補正書（自発） 昭和５９年２月２５１１ 特許庁長官若杉和夫殿 １ １０．１イ１．。よイ ＼−・ °″゛ 工 昭和５９年２月１５日 提出の特許願 ２゜発明の名称 生理活性物質の固定化方法 注 所 東京都中央区日本橋人形町１丁目１８番１２号
５、補正の対象 明細魯：発明の詳細な説明の項 １ 明細当第４頁７行［］「が溶解し、ゲル化状態と」
を「が溶解したり、又はゲル化状態と」に補正する０ ２、同第５頁１行目「強酸と強塩」を「強酸と強塩基」
に補正する。 ３ 同第１０頁４行目「２７°Ｃて４０分て」を「２７
°Ｃで４０分」に補正する。 ４ 同第１０頁６〜７行目「０．１モルリン酸−０１モ
ルリン酸２ナトリウム」を「０１モル１ナトリウムリン
酸＋０１モルリン酸２ナトリウム」に補正する。 ５ 同第１０頁１０行「０１モルリン酸−０１モルリン
酸２ナトリウム」を「０１モル１ナトリウムリンｍ＋０
．１モルリン酸２ナトリウム」に補正する０ ６ 同第１０頁１１行目ｒ （ＰＩ−１７，４）’ ｔ
Ｄ ５０ ｍｌ溶液中テｊ ヲ「（ＰＩ−１７，４）
５０ｍ１溶液中で」に補正する０ ７ 同第１０頁１２行目「時間で反応させ」を「時間反
応させ」に補正する。 ８ 同第１２頁９〜１０行１；ｌ ｒ ０．１ ％ルｔ
） ン酸＋０１モルリン酸２ナトリウム」を「０１モル
１すトリウムリン酸＋Ｏ，，１モルリン酸２ナトリウム
」に補正する０ ９ 同第１２頁１．２−１３行目ｒ １．０ ＃ｌ！；
’を含む０１モルリン酸＋０１モルリン酸２ナトリウム
」を「５０ｍ９ヲ含ｂ ０．１モル１ナトリウムリン酸
＋０１モルリン酸２ナトリウム」に補正する。 ］０．同第１２頁１４行目ｒ１．ｏｍｌＪをｒ５０ｍＪ
に補正する。 １１、同第１４頁９〜１０行「０１モルリン酸＋０１モ
ルリン酸２ナトリウム溶液」をｉ ０．１モル１ナトリ
ウムリン酸＋０１モルリン酸２ナトリウム緩衝溶液」に
補正する。 １２、同第１４頁１２−１３行目ｒ ５０ ｍｑを０１
モルリン酸＋ ０．１モルリン酸２ナトリウム溶液（Ｐ
Ｉ Ｉ ７．４ ）１０ｍ、ｌに」を「２００ｍ９を０
．１モル１ナトリウＡＩ］ン酸＋０．１モルリン酸２ナ
トリウム緩衝溶液（Ｐ ｌ−１７、４） ２００ ｍｌ
に」に補正する。 １３、同第１５頁２行目「■／キトサンｇ」 を［ｍ！
１７／キトザン３ｇ」に補正する。 １４、図面中「５Ｍ−＋４２５」とあるをｒ ５ Ｍ＋
４．２５ ｊと訂正する。 一→ｃＩｌ／ｓＪしＬ←）
溶解と、キトサンと多官能試檗との反応に及ぼす影響を
示すグラフである。 特許出願人 富士紡績株式会社 代理人 弁理士 大 野 克 躬 大 野 令 子 〃 大 野 柳之輔 →Ｌル儂鷹ル） 手続補正書（自発） 昭和５９年２月２５１１ 特許庁長官若杉和夫殿 １ １０．１イ１．。よイ ＼−・ °″゛ 工 昭和５９年２月１５日 提出の特許願 ２゜発明の名称 生理活性物質の固定化方法 注 所 東京都中央区日本橋人形町１丁目１８番１２号
５、補正の対象 明細魯：発明の詳細な説明の項 １ 明細当第４頁７行［］「が溶解し、ゲル化状態と」
を「が溶解したり、又はゲル化状態と」に補正する０ ２、同第５頁１行目「強酸と強塩」を「強酸と強塩基」
に補正する。 ３ 同第１０頁４行目「２７°Ｃて４０分て」を「２７
°Ｃで４０分」に補正する。 ４ 同第１０頁６〜７行目「０．１モルリン酸−０１モ
ルリン酸２ナトリウム」を「０１モル１ナトリウムリン
酸＋０１モルリン酸２ナトリウム」に補正する。 ５ 同第１０頁１０行「０１モルリン酸−０１モルリン
酸２ナトリウム」を「０１モル１ナトリウムリンｍ＋０
．１モルリン酸２ナトリウム」に補正する０ ６ 同第１０頁１１行目ｒ （ＰＩ−１７，４）’ ｔ
Ｄ ５０ ｍｌ溶液中テｊ ヲ「（ＰＩ−１７，４）
５０ｍ１溶液中で」に補正する０ ７ 同第１０頁１２行目「時間で反応させ」を「時間反
応させ」に補正する。 ８ 同第１２頁９〜１０行１；ｌ ｒ ０．１ ％ルｔ
） ン酸＋０１モルリン酸２ナトリウム」を「０１モル
１すトリウムリン酸＋Ｏ，，１モルリン酸２ナトリウム
」に補正する０ ９ 同第１２頁１．２−１３行目ｒ １．０ ＃ｌ！；
’を含む０１モルリン酸＋０１モルリン酸２ナトリウム
」を「５０ｍ９ヲ含ｂ ０．１モル１ナトリウムリン酸
＋０１モルリン酸２ナトリウム」に補正する。 ］０．同第１２頁１４行目ｒ１．ｏｍｌＪをｒ５０ｍＪ
に補正する。 １１、同第１４頁９〜１０行「０１モルリン酸＋０１モ
ルリン酸２ナトリウム溶液」をｉ ０．１モル１ナトリ
ウムリン酸＋０１モルリン酸２ナトリウム緩衝溶液」に
補正する。 １２、同第１４頁１２−１３行目ｒ ５０ ｍｑを０１
モルリン酸＋ ０．１モルリン酸２ナトリウム溶液（Ｐ
Ｉ Ｉ ７．４ ）１０ｍ、ｌに」を「２００ｍ９を０
．１モル１ナトリウＡＩ］ン酸＋０．１モルリン酸２ナ
トリウム緩衝溶液（Ｐ ｌ−１７、４） ２００ ｍｌ
に」に補正する。 １３、同第１５頁２行目「■／キトサンｇ」 を［ｍ！
１７／キトザン３ｇ」に補正する。 １４、図面中「５Ｍ−＋４２５」とあるをｒ ５ Ｍ＋
４．２５ ｊと訂正する。 一→ｃＩｌ／ｓＪしＬ←）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 酢酸緩衝溶液のモル濃度が０．０５〜０２０モルであっ
て、Ｐ Ｉ（値が１式で示される範囲にあり、更に正塩
を加えてイオン強度を０３〜１．０とした溶液に多官能
試薬を溶解し、該液中でキトサンと反応させた後、生理
活性物質をイ」加固定化することを特徴とする生理活性
物質の固定化方法。 １０Ｍ＋３．ＯＯ≦ＰＩ−１’＝ ５Ｍ＋４．２５ （
Ｉ）但し、Ｍ：酢酸緩衝溶液のモル濃度
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59026803A JPS60169500A (ja) | 1984-02-15 | 1984-02-15 | 生理活性物質の固定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59026803A JPS60169500A (ja) | 1984-02-15 | 1984-02-15 | 生理活性物質の固定化方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60169500A true JPS60169500A (ja) | 1985-09-02 |
Family
ID=12203459
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59026803A Pending JPS60169500A (ja) | 1984-02-15 | 1984-02-15 | 生理活性物質の固定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60169500A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5045535A (en) * | 1987-12-24 | 1991-09-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method, apparatus and a composition for a polysaccharide-containing matrix having covalently bound haptens |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS51128489A (en) * | 1975-04-10 | 1976-11-09 | Nestle Sa | Enzyme product |
| JPS523892A (en) * | 1975-06-28 | 1977-01-12 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | Method of enzyme immobilization |
-
1984
- 1984-02-15 JP JP59026803A patent/JPS60169500A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS51128489A (en) * | 1975-04-10 | 1976-11-09 | Nestle Sa | Enzyme product |
| JPS523892A (en) * | 1975-06-28 | 1977-01-12 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | Method of enzyme immobilization |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5045535A (en) * | 1987-12-24 | 1991-09-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method, apparatus and a composition for a polysaccharide-containing matrix having covalently bound haptens |
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