JPS60144625A - 液体試料の螢光検出装置 - Google Patents
液体試料の螢光検出装置Info
- Publication number
- JPS60144625A JPS60144625A JP33084A JP33084A JPS60144625A JP S60144625 A JPS60144625 A JP S60144625A JP 33084 A JP33084 A JP 33084A JP 33084 A JP33084 A JP 33084A JP S60144625 A JPS60144625 A JP S60144625A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- light
- component
- sample
- fluorescence
- liquid sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6445—Measuring fluorescence polarisation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Spectrometry And Color Measurement (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の技術分野〕
本う６明はレーザラ゛Ｃ照射によって液体試料が発する
１ノ光から上記液体試料を篩感度に検出することのでき
る液体試料の蛍光検出装置に関する。
１ノ光から上記液体試料を篩感度に検出することのでき
る液体試料の蛍光検出装置に関する。
散体クロマトグラフの検出法として、液体試料に含まれ
る発蛍光物質にレーザ光等の励起光を照射し、該物質が
発する蛍光強度を測定する手法が知られている。このよ
うな蛍光検出法によれば、その蛍光強度が前記励起光強
度に比例することから、大出力レーザ光乞用いること等
によって１０−９〜．ｌ ｏ−１２（七に／１３ ）オ
ーダの極微量の物質（成分）を検出することができ、液
体クロマドグ２７の検出におり″る利点が多大である。
る発蛍光物質にレーザ光等の励起光を照射し、該物質が
発する蛍光強度を測定する手法が知られている。このよ
うな蛍光検出法によれば、その蛍光強度が前記励起光強
度に比例することから、大出力レーザ光乞用いること等
によって１０−９〜．ｌ ｏ−１２（七に／１３ ）オ
ーダの極微量の物質（成分）を検出することができ、液
体クロマドグ２７の検出におり″る利点が多大である。
然し乍ら、一般的に前記液体試料へ照射する励起光の入
射点における散乱光が検出目的とする蛍光に対１゛るバ
ックグラウンド（雑音）とな゛る。またこのバックグラ
ウンド光の強度も前記励起光強度に比例して増大１″る
ので、成る強度以上ではＳ／Ｎの向上が望めず、結局検
出感度の向上を図ることができないと云う問題があった
。
射点における散乱光が検出目的とする蛍光に対１゛るバ
ックグラウンド（雑音）とな゛る。またこのバックグラ
ウンド光の強度も前記励起光強度に比例して増大１″る
ので、成る強度以上ではＳ／Ｎの向上が望めず、結局検
出感度の向上を図ることができないと云う問題があった
。
そこで従来では、上記励起光の入射点における散乱光を
除去するべ（、液体試料を保持するガラスセルを省いて
、該液体試料をノエットノズルから吐出させて液柱化し
、この液柱に対して励起光を照射する等の工夫が施され
ている。しかし、このような工夫を施すと、装置構成が
相当大尉りなものとなる等の不具合があった。
除去するべ（、液体試料を保持するガラスセルを省いて
、該液体試料をノエットノズルから吐出させて液柱化し
、この液柱に対して励起光を照射する等の工夫が施され
ている。しかし、このような工夫を施すと、装置構成が
相当大尉りなものとなる等の不具合があった。
〔発明の目的〕 □
本発明はこのような事情を考慮してなされたもので、そ
の目的とするところは、大尉りな装置構成とすることな
しに、励起光の散乱光による悪影響を取除いて高感度な
蛍光検出を可能とづ−る液体試料の蛍光検出装置を提供
することにある。
の目的とするところは、大尉りな装置構成とすることな
しに、励起光の散乱光による悪影響を取除いて高感度な
蛍光検出を可能とづ−る液体試料の蛍光検出装置を提供
することにある。
本発明は液体試別に対する励起光の散乱強度が、その偏
光成分によって大きく異なることに１着目し、特定方向
の直線偏光成分のみからなるレーザ光を液体試料に照射
するようにし、且つ上記レーザ光の光軸およびその偏光
方向が為す平面内において、前記レーザ光の照射によっ
て液体試料が発生した蛍光の前記レーザ光の直線偏光方
向と直交する方向の偏光成分のみを検出するようにした
ものである。
光成分によって大きく異なることに１着目し、特定方向
の直線偏光成分のみからなるレーザ光を液体試料に照射
するようにし、且つ上記レーザ光の光軸およびその偏光
方向が為す平面内において、前記レーザ光の照射によっ
て液体試料が発生した蛍光の前記レーザ光の直線偏光方
向と直交する方向の偏光成分のみを検出するようにした
ものである。
かくして本発明によれば、レーデ光の液体試料への照射
によって生じる散乱光の偏光方向と、蛍光検出する偏光
成分とが９０’すれているので、上記散乱光の蛍光検出
系への混入が効果的に抑制される。従って、散乱光の発
生自体を抑制することなしに、その検出系のいを格段に
向上させることが可能となる。また上記偏光系の設定は
、例えばレーデ光路、及び蛍光検出光路への直線偏光素
子の介挿によって簡易に実現することができ、前述した
ような液体試料の液中な形成する如き装置構成の複雑化
を招くことがない。これ故、簡易にいり向上を図り、且
つその検出感度の向上を図ることができるので、実用上
多大なる効果が奏せられる。
によって生じる散乱光の偏光方向と、蛍光検出する偏光
成分とが９０’すれているので、上記散乱光の蛍光検出
系への混入が効果的に抑制される。従って、散乱光の発
生自体を抑制することなしに、その検出系のいを格段に
向上させることが可能となる。また上記偏光系の設定は
、例えばレーデ光路、及び蛍光検出光路への直線偏光素
子の介挿によって簡易に実現することができ、前述した
ような液体試料の液中な形成する如き装置構成の複雑化
を招くことがない。これ故、簡易にいり向上を図り、且
つその検出感度の向上を図ることができるので、実用上
多大なる効果が奏せられる。
以下、図面を参照して本発明装置につぎ説明する。
第１図は本発明の詳細な説明する為の央験装置の概略構
成図である。ＣＷレーザ発振器１より出力されるランダ
ム偏光のレーザ光は、チョッノ母躯動回路２により回転
部□動される回転スリット板３を介□して所定周期の断
続光として周波数変調される。しかして、この周波数変
調されたレーザ光は、グラン・トムソン（Ｇｒａｎ−Ｔ
ｏｍｓｏｎ ） ｆリズム４を介して図中紙面と平行Ｉ
Ｚ方向の直線％＋ｉ光成分（Ｐ成分）として取出され、
試料５に照射される。尚、ここでは試料５を等制約に実
現するものとしてミラーが用いられている。またＯｉｌ
記グリグリズム４光成分選択性が完全でないことから、
前記試料６に照射されるレーザ光には、図中紙面と直角
な方向の血縁偏光成分（Ｓ成分）が若干含まれズいる。
成図である。ＣＷレーザ発振器１より出力されるランダ
ム偏光のレーザ光は、チョッノ母躯動回路２により回転
部□動される回転スリット板３を介□して所定周期の断
続光として周波数変調される。しかして、この周波数変
調されたレーザ光は、グラン・トムソン（Ｇｒａｎ−Ｔ
ｏｍｓｏｎ ） ｆリズム４を介して図中紙面と平行Ｉ
Ｚ方向の直線％＋ｉ光成分（Ｐ成分）として取出され、
試料５に照射される。尚、ここでは試料５を等制約に実
現するものとしてミラーが用いられている。またＯｉｌ
記グリグリズム４光成分選択性が完全でないことから、
前記試料６に照射されるレーザ光には、図中紙面と直角
な方向の血縁偏光成分（Ｓ成分）が若干含まれズいる。
しかしてこのレーザ励起光の試料５への照射によって該
ＦＡ利５が発生する蛍光と着像し得るミラーによる反射
光は、前記Ｓ成分のみを選択的に透過する如く配置され
た直？ＴＭ偏光板６を介して光電子増倍管７に人力され
、受光検出される。ロックインアンゾ８は、前記チョッ
ノや駆動回路２に同期して、その周波数変調成分と同−
周波蘇の慌出信号成分のみを検波増幅しており、その出
力はモニタ９によって例えは−己録されるようになって
いる。
ＦＡ利５が発生する蛍光と着像し得るミラーによる反射
光は、前記Ｓ成分のみを選択的に透過する如く配置され
た直？ＴＭ偏光板６を介して光電子増倍管７に人力され
、受光検出される。ロックインアンゾ８は、前記チョッ
ノや駆動回路２に同期して、その周波数変調成分と同−
周波蘇の慌出信号成分のみを検波増幅しており、その出
力はモニタ９によって例えは−己録されるようになって
いる。
ここで今、前記ＣＷレーデ発振器１が出力するレーザ光
のＰ成分およびＳ成分の強度ケそれぞ′れＩＦ 、 １
．とじ、プリズム４における上記Ｐ成分およびＳ成分の
透過率をそれぞれＡＰ５Ａｓｓ また試料５における上
記各成分の反射率をそれぞれＲＰ ＨＲ８、史に偏光板
６における各成分のＡ−率□をそれぞれＢＰ、Ｒ８で表
わすものとする。
のＰ成分およびＳ成分の強度ケそれぞ′れＩＦ 、 １
．とじ、プリズム４における上記Ｐ成分およびＳ成分の
透過率をそれぞれＡＰ５Ａｓｓ また試料５における上
記各成分の反射率をそれぞれＲＰ ＨＲ８、史に偏光板
６における各成分のＡ−率□をそれぞれＢＰ、Ｒ８で表
わすものとする。
試料５における蛍光は、実際に液体試料を対象とした場
合、その振動緩和が非常に速く、通常１０−９秒程度以
下で終了する。従って、上記試料５における蛍光は、一
般に偏光のない自然光であると着像することができる。
合、その振動緩和が非常に速く、通常１０−９秒程度以
下で終了する。従って、上記試料５における蛍光は、一
般に偏光のない自然光であると着像することができる。
つまり、試料５が発する蛍光のＰ成分およびＳ成分をそ
れぞれＦｐ、Ｆ、とじた場合、 Ｆ、 ＝ Ｆ。
れぞれＦｐ、Ｆ、とじた場合、 Ｆ、 ＝ Ｆ。
□であると云える。しかして、上Ｎｒ２宙光の強度は励
起光強度に比例し、従って偏光板６に到達する蛍光のＰ
成分およびＳ成分の強Ｋｆｐ、ｆｓは、Ｃ１を比例係数
として次式で示すことができる。
起光強度に比例し、従って偏光板６に到達する蛍光のＰ
成分およびＳ成分の強Ｋｆｐ、ｆｓは、Ｃ１を比例係数
として次式で示すことができる。
ｆｐ°＝ｆｓ０
＝Ｃ１（ＩｐａＡｐ・（１−Ｒｐ）＋ｌ５−Ａ、・（１
−Ｒｓ））そして、これらの蛍光成分が偏光板６を介し
て光電子増倍管７に到達する強度は、 として表現される。
−Ｒｓ））そして、これらの蛍光成分が偏光板６を介し
て光電子増倍管７に到達する強度は、 として表現される。
一方、光電子増倍管７に入射する散乱光のＰ成分および
Ｓ成分をそれぞれＥＰ 、 Ｅ、で示すと、その比例係
数をＣ３としたとき次のように示される。
Ｓ成分をそれぞれＥＰ 、 Ｅ、で示すと、その比例係
数をＣ３としたとき次のように示される。
そして、この装置における検出感度を決定する上記蛍光
と散乱光との検出比（ｓ／１′Ｊ）は、Ｓ／Ｎ ＝ （
ｊｐ＋ｆｓ）／（Ｅｐ＋Ｅｓ）で示され、この値が太ぎ
い程、＾い検出感度を得ることが０」能と１．ＣるＯ ところで、前記Ｃ會し−デ発伽器１は、ランダム偏光の
レーザ光を出力するから、そのＰ成分とＳ成分の強度は
時間的な平均として ＩＰ＝ Ｉ。
と散乱光との検出比（ｓ／１′Ｊ）は、Ｓ／Ｎ ＝ （
ｊｐ＋ｆｓ）／（Ｅｐ＋Ｅｓ）で示され、この値が太ぎ
い程、＾い検出感度を得ることが０」能と１．ＣるＯ ところで、前記Ｃ會し−デ発伽器１は、ランダム偏光の
レーザ光を出力するから、そのＰ成分とＳ成分の強度は
時間的な平均として ＩＰ＝ Ｉ。
として考えることができる。従って前記蛍光と散乱光と
の一比は、Ｃ１を定数として次のように表わすことがで
きる。
の一比は、Ｃ１を定数として次のように表わすことがで
きる。
”Ｐ＋Ｅ８ Ａｐ−ＲｐＢｐ −’ｒ ＡＨ・Ｒｓ−Ｂ
。
。
またこのとき、前記試料５０反射率ＲＰ 、 Ｒｓは一
般に数−程度であり と近似することができる。また偏光板６の性質から Ａｐ ＋ Ａｓ ＝ ｃｏｎｅｔ （Ｑ）であるから、
前記比は、Ｃ４を定数として次のように示すことができ
る。
般に数−程度であり と近似することができる。また偏光板６の性質から Ａｐ ＋ Ａｓ ＝ ｃｏｎｅｔ （Ｑ）であるから、
前記比は、Ｃ４を定数として次のように示すことができ
る。
Ｅｐ ＋ Ｅｓ Ａｐ−Ｒｐ４ｐ ＋ Ａｓ・ｇｓ−ｇ
ｓ更に試料５に対する励起光の入射角がブリュースター
角の場合、周知の如く ｌもｐ＝０ となる。そして、平面における反射は一般にｌζｓ ）
Ｒｐ であるから、 ｆＬ、 ／ ｉｔ、、 ＝ Ｉｔ とすると、上記Ｒは ０ ＜ Ｒ＜ １ な７；） ｊｌｔｊをとる。従って、前述した比は、Ｃ
Ｂを定数として次のように整理することができる。
ｓ更に試料５に対する励起光の入射角がブリュースター
角の場合、周知の如く ｌもｐ＝０ となる。そして、平面における反射は一般にｌζｓ ）
Ｒｐ であるから、 ｆＬ、 ／ ｉｔ、、 ＝ Ｉｔ とすると、上記Ｒは ０ ＜ Ｒ＜ １ な７；） ｊｌｔｊをとる。従って、前述した比は、Ｃ
Ｂを定数として次のように整理することができる。
Ｆｏｐ ＋ ＥＢ ＡＰ−ｕｐ−Ｒ＋ Ａｇ−Ｂｓ以上
のように、−光電子増倍管７により検出される試料５の
蛍光と散乱光との比は、前記プリズム４および偏光板６
のＰ成分およびＳ成分に対する透過率に依存することが
判る。
のように、−光電子増倍管７により検出される試料５の
蛍光と散乱光との比は、前記プリズム４および偏光板６
のＰ成分およびＳ成分に対する透過率に依存することが
判る。
ところで、これらのプリズム４および偏光板６等の偏光
素子の生透過偏光成分に対する透過率Ｔム、ＴＢは、そ
れぞれ個有の値をとり、また上記主透過偏光方向と直交
する偏光成分との透過率比Ａ、、 Ｂａもそれぞれ個有
な一定値をとる。そして、これらの偏光素子は、その光
軸な中心とした回転によって前述したＰ成分を選択する
か、或いはＳ成分を選択するかが決定されるだけである
。従って、前記プリズム４および偏光板６の主透過偏光
方向を上記Ｐ成分、Ｓ成分のいずれを透過させるように
設定することによって、前記光電子増倍管７で検出され
る蛍光と散乱光との比が変化する。次に示す第１表は、
プリズム４および偏光板６の主透過偏光方向をそれぞれ
異ならせたときの、前述した比の値を示すものであり、
〔〕を付して併記される値は、受光散乱光の相対強度を
示している。
素子の生透過偏光成分に対する透過率Ｔム、ＴＢは、そ
れぞれ個有の値をとり、また上記主透過偏光方向と直交
する偏光成分との透過率比Ａ、、 Ｂａもそれぞれ個有
な一定値をとる。そして、これらの偏光素子は、その光
軸な中心とした回転によって前述したＰ成分を選択する
か、或いはＳ成分を選択するかが決定されるだけである
。従って、前記プリズム４および偏光板６の主透過偏光
方向を上記Ｐ成分、Ｓ成分のいずれを透過させるように
設定することによって、前記光電子増倍管７で検出され
る蛍光と散乱光との比が変化する。次に示す第１表は、
プリズム４および偏光板６の主透過偏光方向をそれぞれ
異ならせたときの、前述した比の値を示すものであり、
〔〕を付して併記される値は、受光散乱光の相対強度を
示している。
但し、上式中Ｃ６は定数を示しており、受光散乱ブＣの
強度は、受光蛍光と受光散乱光との比を［ＣＳ・（１＋
ｎａ）／Ｔム〕なる値で除して正規化した値の逆数とし
て定義される。
強度は、受光蛍光と受光散乱光との比を［ＣＳ・（１＋
ｎａ）／Ｔム〕なる値で除して正規化した値の逆数とし
て定義される。
また第２表は、Ｈｅ−Ｎｅレーザのランダム偏光を光諒
とし、前記プリズム４および偏光板６による作用を達成
するものとして同一仕様の偏光板を用いて、ブリュスタ
ー角反射条件で行われた散乱光強度の実験結果を示すも
のである。
とし、前記プリズム４および偏光板６による作用を達成
するものとして同一仕様の偏光板を用いて、ブリュスタ
ー角反射条件で行われた散乱光強度の実験結果を示すも
のである。
尚、この実験に用いも７．れた偏光板の透過率比Ａ（１
＊ Ｂ（Ｉは、それぞれ１０−３以下の値を示すことが
判っており、上記第２表に示す如くめられた実験結果か
ら、前記第１表に示される値Ｒ＋ ！”０１ ＊Ｂａを
めると、その近似値とし゛〔、 Ａａ＝ Ｂａさ５×１Ｏ−５ Ｒユ２ Ｘ １０−３ を得ることができる。尚、前記試料５０反射角が直角で
ある場合、その反射率Ｒは１０−〜１０程度となる。
＊ Ｂ（Ｉは、それぞれ１０−３以下の値を示すことが
判っており、上記第２表に示す如くめられた実験結果か
ら、前記第１表に示される値Ｒ＋ ！”０１ ＊Ｂａを
めると、その近似値とし゛〔、 Ａａ＝ Ｂａさ５×１Ｏ−５ Ｒユ２ Ｘ １０−３ を得ることができる。尚、前記試料５０反射角が直角で
ある場合、その反射率Ｒは１０−〜１０程度となる。
これらの実験結果によって示されるように、本発明に係
る蛍光検出法、つまり試料５に対する励起光の偏光成分
と、試料５の蛍光検出を行う偏光方向とを直交する関係
に定めることによって、その散乱光受光強腹を十分低く
抑えることが可能となる。特に、両省共にＳ“成分の偏
光を用いる場合に比して、散乱ｆｔ、受光強度の大幅な
抑制を図ることが可能となる。
る蛍光検出法、つまり試料５に対する励起光の偏光成分
と、試料５の蛍光検出を行う偏光方向とを直交する関係
に定めることによって、その散乱光受光強腹を十分低く
抑えることが可能となる。特に、両省共にＳ“成分の偏
光を用いる場合に比して、散乱ｆｔ、受光強度の大幅な
抑制を図ることが可能となる。
第２図はこのような理論の下で完成された本発明の実施
例装置の概略構成図である。
例装置の概略構成図である。
レーデ発振器１１は、例えは鉛直方向の直線偏光レーデ
光（Ｓ成分）を発振出力するものであり、とのレーザ光
は１／２波長板１２を介して水平方向の直線偏光レーザ
光（Ｐ成分）に変換されて液体試料１３に照射される。
光（Ｓ成分）を発振出力するものであり、とのレーザ光
は１／２波長板１２を介して水平方向の直線偏光レーザ
光（Ｐ成分）に変換されて液体試料１３に照射される。
この液体試料１３は、例えば石英板等により構成された
セル１４内に保持されている。しかして上記液体試料１
３は、上記レーザ光の照射を受けて蛍光を発し−この蛍
光は前記レーデ光の光軸およびその直線、偏光方向がな
す平面内に設けられた受光器、１５により検出されるよ
うになっている。この受光器１５と前記液体試料１３と
の間には、鉛直方向の直線偏光成分のみを透過する如く
、その主透過方向を定めた偏光板１６、および前記レー
ザ光波長を遮断し、ｎｉＪ記試料Ｚ３からの蛍光波長を
透過せしめる干渉フィルタ１７が設り−られている。
セル１４内に保持されている。しかして上記液体試料１
３は、上記レーザ光の照射を受けて蛍光を発し−この蛍
光は前記レーデ光の光軸およびその直線、偏光方向がな
す平面内に設けられた受光器、１５により検出されるよ
うになっている。この受光器１５と前記液体試料１３と
の間には、鉛直方向の直線偏光成分のみを透過する如く
、その主透過方向を定めた偏光板１６、および前記レー
ザ光波長を遮断し、ｎｉＪ記試料Ｚ３からの蛍光波長を
透過せしめる干渉フィルタ１７が設り−られている。
しかしてこのように構成された本装置によれは、液体試
料１３には、直軸偏光されたＰ成分からなるレーザ光の
みが□照射され、とのレーザ光１ｉ（ｉ’ ＊−ｑによ
っ又液体試料１□３が発した蛍光は、上述した平面内に
おいてその直線偏光成分であるＳ ＪＡ分の６か検出さ
れることになる。このとき、１１Ｊ記偏光板１６の存在
によって、受光器１５が検出し得る蛍光々量は、該偏光
板１６が存在しない場合に比して半減するが、レーデ光
照射によって液体試料１３において発生した散乱光の受
光器１５への到達（入力）が大幅に抑制されることＫな
る。更に偏光板１６を透過した微弱な散乱光は、前記レ
ーデ光の波長成分を有していることから、干渉フィルタ
１７によって更に弱められることＫなる。
料１３には、直軸偏光されたＰ成分からなるレーザ光の
みが□照射され、とのレーザ光１ｉ（ｉ’ ＊−ｑによ
っ又液体試料１□３が発した蛍光は、上述した平面内に
おいてその直線偏光成分であるＳ ＪＡ分の６か検出さ
れることになる。このとき、１１Ｊ記偏光板１６の存在
によって、受光器１５が検出し得る蛍光々量は、該偏光
板１６が存在しない場合に比して半減するが、レーデ光
照射によって液体試料１３において発生した散乱光の受
光器１５への到達（入力）が大幅に抑制されることＫな
る。更に偏光板１６を透過した微弱な散乱光は、前記レ
ーデ光の波長成分を有していることから、干渉フィルタ
１７によって更に弱められることＫなる。
、従って、受光器１６における蛍光と散乱光との検出比
（Ｓ／Ｎに相当する）が極めて高くなり、所謂バックグ
ラウンド信号を大幅に抑制した高感度な蛍光検出が可能
となる。これ故、前記液体１３中の種々の微量蛍光性物
質や、本来蛍光性の弱い物質等を高感度に検出すること
が可能、となり、液体クロマトグラフの検出等に多大な
効果が奏せられる。つまり、励起光を物足方向の直線偏
光成分とし、この励起光によって試料が発した蛍光を上
記励起光の偏光方向と直交する方向の偏光成分のみとし
て検出することにより、散乱光の悪影響を抑えた島感腿
な蛍光検出が可能となる。
（Ｓ／Ｎに相当する）が極めて高くなり、所謂バックグ
ラウンド信号を大幅に抑制した高感度な蛍光検出が可能
となる。これ故、前記液体１３中の種々の微量蛍光性物
質や、本来蛍光性の弱い物質等を高感度に検出すること
が可能、となり、液体クロマトグラフの検出等に多大な
効果が奏せられる。つまり、励起光を物足方向の直線偏
光成分とし、この励起光によって試料が発した蛍光を上
記励起光の偏光方向と直交する方向の偏光成分のみとし
て検出することにより、散乱光の悪影響を抑えた島感腿
な蛍光検出が可能となる。
ところで、前述した励起光として紫外光を用いた場合、
この光の偏光板１６（４，６）への照射によって、該偏
光板７６Ｃ４，６）自体が蛍光を発することがある。こ
の偏光板１６（４゜６）からの蛍光は前述した散乱光と
同様に、試料１３の蛍光検出における妨害要素となる。
この光の偏光板１６（４，６）への照射によって、該偏
光板７６Ｃ４，６）自体が蛍光を発することがある。こ
の偏光板１６（４゜６）からの蛍光は前述した散乱光と
同様に、試料１３の蛍光検出における妨害要素となる。
これについて考県してみると、Ｐ成分の励起光を試料に
Ｉｉ’ｉ’を射し、その蛍光のＳ成分を検出する場合、
その偏光板６に入射する散乱光の強度がＣ７・（１＋Ａ
α・Ｒ） と１よるのに対し゛〔、Ｓ成分の励起光を試料に照射し
、その蛍光のＰ成分を検出するときに偏光板６に入射す
る散乱光の強度は Ｃ７・（Ａａ＋ Ｒ） となる。但し、Ｃ７は係数である。これらの散乱光強度
を対比ずれは明らかなように、前述した如（ ０＜ ｈａ ＜ １０−２ ０〈Ｒ（０，５ であるから、Ｐ成分の励起光を試料に照射し、その蛍光
のＳ成分直線偏光を検出するようにした方が、散乱光（
偏光板の蛍光を含む）の悪影響を抑えた高感度な検出を
可能とし得ることが判る。従って、結果的には、装置構
成、つまりその光学偏光系を第２図に示す如く設定した
方が好都合上ある。
Ｉｉ’ｉ’を射し、その蛍光のＳ成分を検出する場合、
その偏光板６に入射する散乱光の強度がＣ７・（１＋Ａ
α・Ｒ） と１よるのに対し゛〔、Ｓ成分の励起光を試料に照射し
、その蛍光のＰ成分を検出するときに偏光板６に入射す
る散乱光の強度は Ｃ７・（Ａａ＋ Ｒ） となる。但し、Ｃ７は係数である。これらの散乱光強度
を対比ずれは明らかなように、前述した如（ ０＜ ｈａ ＜ １０−２ ０〈Ｒ（０，５ であるから、Ｐ成分の励起光を試料に照射し、その蛍光
のＳ成分直線偏光を検出するようにした方が、散乱光（
偏光板の蛍光を含む）の悪影響を抑えた高感度な検出を
可能とし得ることが判る。従って、結果的には、装置構
成、つまりその光学偏光系を第２図に示す如く設定した
方が好都合上ある。
また、このような蛍光検出を行う場合、その励起光とし
て前述したレーザ光を用いるようにすれば、その偏光方
向の安定性、出力強度の安定性に優れる為、液体クロマ
トグラフ分析等のような長時間に亘る検出処理に如都合
である。
て前述したレーザ光を用いるようにすれば、その偏光方
向の安定性、出力強度の安定性に優れる為、液体クロマ
トグラフ分析等のような長時間に亘る検出処理に如都合
である。
尚、本発明は上記実施例に限定されるものではない。例
えば励起光源としてレーザ光以外のものを用いることも
可能である。またレーザ光を用いる場合には、ヘリウム
・カドミウム・レーザ、Ｎ２レーザ、エキシマレープ、
或いは’ｉ’Ｊ祝Ｍで発振するレーザ光の高調波等を用
いることができる。また、レーザ発振器自体が単一の直
線偏光成分のレーザ光のみを出力するものであっても良
く、ランダム偏光のレーザ光の特定方向の直線偏光成分
のみを偏光素子を介して取出すようにしてもよい。また
本装置で用いられる偏光素子としては、グランド・トム
ソングリズム。
えば励起光源としてレーザ光以外のものを用いることも
可能である。またレーザ光を用いる場合には、ヘリウム
・カドミウム・レーザ、Ｎ２レーザ、エキシマレープ、
或いは’ｉ’Ｊ祝Ｍで発振するレーザ光の高調波等を用
いることができる。また、レーザ発振器自体が単一の直
線偏光成分のレーザ光のみを出力するものであっても良
く、ランダム偏光のレーザ光の特定方向の直線偏光成分
のみを偏光素子を介して取出すようにしてもよい。また
本装置で用いられる偏光素子としては、グランド・トム
ソングリズム。
ダイクロイックフィルム、ポラロイド偏光板等を適宜そ
の仕様に応じて採用することができる。
の仕様に応じて採用することができる。
その他、本発明はその費旨を逸脱しない範囲で種々変形
しく実施することができる。
しく実施することができる。
第１図は本発明の蛍光検出原理を説明する為の実験装置
の構成図、第２図は本発明の一実施例装置の概略構成図
である。 １・・・レーザ発振器、４・・・プリズム（偏光素子）
、５・・・試料、６・・・偏光板、７・・・光電子増倍
管、１ノ・・・レーザ発振器、１２・・・１／２波長板
、１３・・・液体試料、１４・・・セル、１５・・・受
光器、１６・・・偏光板、１７・・・干渉フィルタ。
の構成図、第２図は本発明の一実施例装置の概略構成図
である。 １・・・レーザ発振器、４・・・プリズム（偏光素子）
、５・・・試料、６・・・偏光板、７・・・光電子増倍
管、１ノ・・・レーザ発振器、１２・・・１／２波長板
、１３・・・液体試料、１４・・・セル、１５・・・受
光器、１６・・・偏光板、１７・・・干渉フィルタ。
Claims (1)
- 液体試料を保持する手段と、特定方向の直線偏光成分だ
けからなるレーザ光を上記液体試料に照射１″る手段と
、上記レーザ光の光軸およびそのレーザ光の直膨偏光方
向が為す平面内において、１１１記レーザ光照射によっ
て前記液体試料が発生した虫先のｕｉＪ記レーし元の直
線偏光成分と旧交１ろ方向の偏光成分のみを検出する手
段とを具備したことを特徴とする液体試料の蛍光検出装
置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33084A JPS60144625A (ja) | 1984-01-06 | 1984-01-06 | 液体試料の螢光検出装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33084A JPS60144625A (ja) | 1984-01-06 | 1984-01-06 | 液体試料の螢光検出装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60144625A true JPS60144625A (ja) | 1985-07-31 |
| JPS6218846B2 JPS6218846B2 (ja) | 1987-04-24 |
Family
ID=11470887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33084A Granted JPS60144625A (ja) | 1984-01-06 | 1984-01-06 | 液体試料の螢光検出装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60144625A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007139744A (ja) * | 2005-11-23 | 2007-06-07 | Korea Inst Of Scinence & Technology | ラボオンアチップでの蛍光偏光測定方法及び装置 |
-
1984
- 1984-01-06 JP JP33084A patent/JPS60144625A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007139744A (ja) * | 2005-11-23 | 2007-06-07 | Korea Inst Of Scinence & Technology | ラボオンアチップでの蛍光偏光測定方法及び装置 |
| JP4527080B2 (ja) * | 2005-11-23 | 2010-08-18 | コリア インスティチュート オブ サイエンス アンド テクノロジー | ラボオンアチップでの蛍光偏光測定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6218846B2 (ja) | 1987-04-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4750837A (en) | Fluorometer with reference light source | |
| GB1305082A (ja) | ||
| JPS58204340A (ja) | 気体試料中のエ−ロゾル粒子量を連続測定する方法と装置 | |
| JPS62129741A (ja) | 光音響分析方法及び装置 | |
| US3843258A (en) | Dual beam absorption type optical spectrometer | |
| JPS6217179B2 (ja) | ||
| JPH05142146A (ja) | ガス測定装置 | |
| EP0241268A2 (en) | Improved pulse light system fluorometer | |
| JPH0479570B2 (ja) | ||
| Hieftje et al. | Correction of quenching errors in analytical fluorimetry through use of time resolution | |
| JPS6394136A (ja) | 蛍光分析方法及び装置 | |
| US4208129A (en) | Sensitive laser spectroscopy measurement system | |
| JPS60144625A (ja) | 液体試料の螢光検出装置 | |
| JPH0352575B2 (ja) | ||
| JP2973639B2 (ja) | シ―ト状物体の特性測定装置 | |
| JPH05240768A (ja) | 花粉検出器 | |
| US4775237A (en) | Electro-optical detection system | |
| CN106932318A (zh) | 半导体泵浦碱金属蒸气激光器的诊断装置及方法 | |
| JPS62278436A (ja) | 蛍光測定法及び装置 | |
| JP2760681B2 (ja) | ガス中ヨウ素濃度の測定方法及び装置 | |
| US3680960A (en) | Atomic absorption photometer | |
| JPS59182341A (ja) | 試料発光の異方性測定装置 | |
| JPS5919843A (ja) | 光学式水分計 | |
| JP3197132B2 (ja) | レーザ光を用いた計測装置 | |
| JPH0131580B2 (ja) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |