JPS6012973A - 悪性黒色腫のある患者のリンパ球からのヒトの単一クロ−ン抗体 - Google Patents
悪性黒色腫のある患者のリンパ球からのヒトの単一クロ−ン抗体Info
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- JPS6012973A JPS6012973A JP59046964A JP4696484A JPS6012973A JP S6012973 A JPS6012973 A JP S6012973A JP 59046964 A JP59046964 A JP 59046964A JP 4696484 A JP4696484 A JP 4696484A JP S6012973 A JPS6012973 A JP S6012973A
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- cells
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- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
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- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2474/00—Immunochemical assays or immunoassays characterised by detection mode or means of detection
- G01N2474/20—Immunohistochemistry assay
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
- Y10S436/813—Cancer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/863—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving IgM
- Y10S530/864—Monoclonal
- Y10S530/865—Human
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
背 景
本発明は、研究費番号ＣＡ −１７６６ならびにＣＡ−
０８７４８の下にアメリカ国立がん研究所人間保健サー
ビス部により提供された資金でその全部または一部を行
なった。従って、アメリカ合衆国政府は本発明に一定の
権利を有している。
０８７４８の下にアメリカ国立がん研究所人間保健サー
ビス部により提供された資金でその全部または一部を行
なった。従って、アメリカ合衆国政府は本発明に一定の
権利を有している。
本発明は、ヒト細胞の表面抗原ならびに細胞内成分を識
別するヒト単一クローン抗体を産生ずるハイシリドーマ
、ならびにそのようなハイシリドーマを作る方法に関す
る。そのヒト単一クローン抗体（ＨｍＡｂ（ａ） ）は
、がんに伴なう疾病の診断に有用である。
別するヒト単一クローン抗体を産生ずるハイシリドーマ
、ならびにそのようなハイシリドーマを作る方法に関す
る。そのヒト単一クローン抗体（ＨｍＡｂ（ａ） ）は
、がんに伴なう疾病の診断に有用である。
悪性変異を伴なう抗原性変化を明確にするととならびに
それらの変化が起源の宿主において免疫認識を引出すか
どうかを検出することは、腫瘍免疫学の中心的関心であ
る。それらの問題への血清学的接近は、ハイシリドーマ
技術の出現により大巾に強化されて来℃いる（クーラー
。
それらの変化が起源の宿主において免疫認識を引出すか
どうかを検出することは、腫瘍免疫学の中心的関心であ
る。それらの問題への血清学的接近は、ハイシリドーマ
技術の出現により大巾に強化されて来℃いる（クーラー
。
Ｇ、ならびにＣ，ミルシュタイン。１９７５ 、Ｎａｔ
ｕｒｅ（ＬＯｎｄ、）２５６：４９５）。単一クローン
抗体は実験的がんならびにヒトのがんの抗原構造につい
て多くの情報を提供しつつあり、そしてハイシリドーマ
分析は、腫瘍を持った動物ならびにヒトにおける腫瘍抗
原に対する体液性免疫反応を詳細に分析するのに大きな
価値を持つようになることが約束されている。
ｕｒｅ（ＬＯｎｄ、）２５６：４９５）。単一クローン
抗体は実験的がんならびにヒトのがんの抗原構造につい
て多くの情報を提供しつつあり、そしてハイシリドーマ
分析は、腫瘍を持った動物ならびにヒトにおける腫瘍抗
原に対する体液性免疫反応を詳細に分析するのに大きな
価値を持つようになることが約束されている。
従来の血清学を利用してヒトの腫瘍関連免疫反応の疑問
を解決しようとする過去の努力の問題は、特異性の件が
つきまとうことにあった（オールドＨＬ＠ Ｊｌｌ １
９８１１ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５−４１ ：３６１）。
を解決しようとする過去の努力の問題は、特異性の件が
つきまとうことにあった（オールドＨＬ＠ Ｊｌｌ １
９８１１ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ５−４１ ：３６１）。
バーキットリンパ腫や肝ｍ（ジラルド。
Ｇ、ならびにＥ、ペス。１９８０．ヒトのがんにおける
ウィルスの役割り。第１巻（エルゼピア／ノースーホラ
ンド、ニューヨーク））のような腫瘍に対するウィルス
関連抗原、そしてヒト白血球抗原や血液型抗原を除いて
は、ヒト抗体によって検出されるその他の類のヒトのか
ん抗原の性質と意義は不明である。ヒトのかん細胞の表
面抗原と反応する抗体の頻度ならびに特異性を評価する
ために、我々は一連の黒色腫、星状細胞腫、胃がんなら
びに白血病の患者からの血清の自家反応性を分析した（
ケアリー、Ｔ、Ｅ、。
ウィルスの役割り。第１巻（エルゼピア／ノースーホラ
ンド、ニューヨーク））のような腫瘍に対するウィルス
関連抗原、そしてヒト白血球抗原や血液型抗原を除いて
は、ヒト抗体によって検出されるその他の類のヒトのか
ん抗原の性質と意義は不明である。ヒトのかん細胞の表
面抗原と反応する抗体の頻度ならびに特異性を評価する
ために、我々は一連の黒色腫、星状細胞腫、胃がんなら
びに白血病の患者からの血清の自家反応性を分析した（
ケアリー、Ｔ、Ｅ、。
Ｔ、タカハシ、Ｌ、Ａ、レスニック、Ｈ，Ｆ、エトゲン
ならびにり、 Ｈ，オールド、ｌ ９７６ 、 Ｐｒｏ
ｃ、Ｎａｔｌ。
ならびにり、 Ｈ，オールド、ｌ ９７６ 、 Ｐｒｏ
ｃ、Ｎａｔｌ。
Ａｃａｄ、Ｓｃ１．、 アメリカ合衆国。７３：３２７
８；シク、Ｈ，，Ｔ、タカハシ、Ｈ，Ｆ、エトゲンなら
びにり。
８；シク、Ｈ，，Ｔ、タカハシ、Ｈ，Ｆ、エトゲンなら
びにり。
Ｈ，オールド。ｌ ９７６ 、ムμＬ上旦、す４：８７
３；シク、Ｈ，，Ｔ、タカハシ、Ｌ、Ａ、レスニック、
Ｈ。
３；シク、Ｈ，，Ｔ、タカハシ、Ｌ、Ａ、レスニック、
Ｈ。
Ｆ、エトゲ／ならびにり、 Ｈ，オールド。１９７７゜
Ｊ、Ｅｘ 、Ｍｅｄ、 １４５ ： ７Ｂ４ ；アルピ
ノ、 Ａ、Ｐ、、Ｋ。
Ｊ、Ｅｘ 、Ｍｅｄ、 １４５ ： ７Ｂ４ ；アルピ
ノ、 Ａ、Ｐ、、Ｋ。
０、ロイド、 Ａ、Ｎ、ホートン、Ｈ，Ｆ、エトゲンな
らびにり、 Ｈ，オールド。１９８１．ム」ｎユ讃回４
」１：１７６４；ノロインドシュツク、Ｍ、、Ｈ＠シク
、Ｔ。
らびにり、 Ｈ，オールド。１９８１．ム」ｎユ讃回４
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、Ｔ。
タカハシ、Ｒ，ウェダ、Ｊ、ランンホフ、Ｈ，Ｆ、エト
グンならびにり、Ｈ，オールド。１９７８．Ｐｒｏｓ。
グンならびにり、Ｈ，オールド。１９７８．Ｐｒｏｓ。
Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、、アメリカ合衆国７
５：５１２２；ウェブＩ Ｒｅ＃ Ｈ”シク２Ｍ、プロ
インドシュツク。
５：５１２２；ウェブＩ Ｒｅ＃ Ｈ”シク２Ｍ、プロ
インドシュツク。
Ｔ、タカハシ、Ｗ、ウィトモア、ジュニア、Ｈ，Ｆ。
エトゲン、に、Ｏ，ロイドならびにり、Ｊ、オールド。
１９７９、ム上狂ユＭす、１５０：５６４；ガレット。
Ｔ、 Ｊ、、 Ｔ、タカハシ、Ｂ、Ｄ、クラークソンな
らびにり、Ｊ、オールド。１９７７ 、 Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
らびにり、Ｊ、オールド。１９７７ 、 Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
Ｓｅ１．、アメリカ合衆国７４：４５７Ｂ）。自家抗体
によって検出された３分類の抗原はこのようにして定義
して来ている。第１類の抗原は自家腫瘍細胞に限定され
、正常であれまたは悪性であれ他のいかなる細胞型にも
検出されていない。
によって検出された３分類の抗原はこのようにして定義
して来ている。第１類の抗原は自家腫瘍細胞に限定され
、正常であれまたは悪性であれ他のいかなる細胞型にも
検出されていない。
第２類の抗原は共通抗原であり、自家腫瘍と同様に他家
腫瘍の一定の割合いに見出される。最近の事実は、それ
らが限られた範囲の正常組織に検出されるので、第２類
の抗原のあるものは自己抗体的分化抗原であることを示
している（ワタナベＴ、、Ｃ，Ｓ、プケＡ−、Ｈ，タケ
ヤマ、 Ｋ、Ｏ。
腫瘍の一定の割合いに見出される。最近の事実は、それ
らが限られた範囲の正常組織に検出されるので、第２類
の抗原のあるものは自己抗体的分化抗原であることを示
している（ワタナベＴ、、Ｃ，Ｓ、プケＡ−、Ｈ，タケ
ヤマ、 Ｋ、Ｏ。
ロイド、Ｈ，シク、Ｌ、Ｔ、Ｃ，リー、Ｌ、Ｒ，）ラパ
ソス。
ソス。
Ｈ，Ｆ、エトゲンならびにり、 Ｊ、オールド。１９８
２゜Ｌ堕ム亙練、１５６：１８Ｂ４゜）。第３類の抗原
は、正常ならびに悪性の培養に広く分布している。それ
ら広範に発現した抗原は深くは分析されていない。第３
類の反応性は比較的普遍的であるけれども、Ｍｌ類なら
びに第２類抗原に対する抗体はまれに見出される（患者
のｌＱ／＃−セント）。
２゜Ｌ堕ム亙練、１５６：１８Ｂ４゜）。第３類の抗原
は、正常ならびに悪性の培養に広く分布している。それ
ら広範に発現した抗原は深くは分析されていない。第３
類の反応性は比較的普遍的であるけれども、Ｍｌ類なら
びに第２類抗原に対する抗体はまれに見出される（患者
のｌＱ／＃−セント）。
ハイブリドーマ法を用いたヒト単一クローン抗体の生産
のための技術が、がん患者の体液性免疫反応のそれらの
伊［究を拡大するのに利用されて来ている。
のための技術が、がん患者の体液性免疫反応のそれらの
伊［究を拡大するのに利用されて来ている。
マウスならびにラットの単一クローン抗体の生産におけ
るハイシリドーマ技術の成功と対照的に、ヒト抗体産生
交配株での同様な研究は遅れている。多数の研究者の一
般的経験は、業物標識したヒト黒色腫あるいはリンパ芽
球様細胞との融合が生育力のあるクローンをわずかしか
生じないということであった。
るハイシリドーマ技術の成功と対照的に、ヒト抗体産生
交配株での同様な研究は遅れている。多数の研究者の一
般的経験は、業物標識したヒト黒色腫あるいはリンパ芽
球様細胞との融合が生育力のあるクローンをわずかしか
生じないということであった。
要約
本発明は、ヒトの単一クローン抗体を主属するハイツリ
ドーマならびにそれらハイシリドーマを形成する方法を
提示する。
ドーマならびにそれらハイシリドーマを形成する方法を
提示する。
本発明のヒト単一クローン抗体産生ハイブリドーマ細胞
系は、ヒト黒色励細胞系、マウス黒色腫細胞系、あるい
はヒトリンパ芽球様細胞系を正常人ならびに悪性黒色腫
のある人からのヒトリンパ球と融合させることにより形
成した。
系は、ヒト黒色励細胞系、マウス黒色腫細胞系、あるい
はヒトリンパ芽球様細胞系を正常人ならびに悪性黒色腫
のある人からのヒトリンパ球と融合させることにより形
成した。
そのリンパ球は、悪性黒色腫のある正常人のり７２節あ
るいは腫瘍標本から得た。正常人あるいは悪性黒色腫の
ある人からの末梢血リンパ球もまた融合に用いた。
るいは腫瘍標本から得た。正常人あるいは悪性黒色腫の
ある人からの末梢血リンパ球もまた融合に用いた。
それらのハイクリドーマ細胞系により生産されたヒト単
一クローン抗体は、ヒト細胞の細胞表面抗原あるいは細
胞質成分を認識し、そして正常細胞と悪性細胞との間の
識別をするのに有用である。
一クローン抗体は、ヒト細胞の細胞表面抗原あるいは細
胞質成分を認識し、そして正常細胞と悪性細胞との間の
識別をするのに有用である。
説 明
本発明は、細胞表面抗原ならびに細胞質成分を認識する
ヒト単一クローン抗体を産生ずるようなハイシリドーマ
細胞系により産生されるヒト単一クローン抗体を包含す
る。それらヒト単一クローン抗体によって認識される抗
原の中には、Ｍａ４細胞表面抗原系ならびに細胞質中の
核、核小体および細胞骨格成分がある。より詳細には、
細胞表面抗原ならびに細胞質成分を認識するヒト単一ク
ローン抗体は、Ｍｎ２．Ｍ２Ｏ３゜Ｍ３１１．Ｍ２Ｏ３
，Ｍ２Ｏ３，ならびにＭ３１１の諸抗体である。それら
のヒト単一クローン抗体を包含するパネルが作られてい
る。
ヒト単一クローン抗体を産生ずるようなハイシリドーマ
細胞系により産生されるヒト単一クローン抗体を包含す
る。それらヒト単一クローン抗体によって認識される抗
原の中には、Ｍａ４細胞表面抗原系ならびに細胞質中の
核、核小体および細胞骨格成分がある。より詳細には、
細胞表面抗原ならびに細胞質成分を認識するヒト単一ク
ローン抗体は、Ｍｎ２．Ｍ２Ｏ３゜Ｍ３１１．Ｍ２Ｏ３
，Ｍ２Ｏ３，ならびにＭ３１１の諸抗体である。それら
のヒト単一クローン抗体を包含するパネルが作られてい
る。
さらに本発明は、ヒト単一クローン抗体Ｍａ４でのＭａ
４抗原系のイムノアッセイ（免＆ １１１定法）を包含
する、正常ヒト細胞とに瘍ヒト細胞の間を識別するため
の方法を包含している。その方法によって、黒色腫、腎
ＰＩＭＨｍ瘍ならびに乳房腫瘍が検出できるであろう。
４抗原系のイムノアッセイ（免＆ １１１定法）を包含
する、正常ヒト細胞とに瘍ヒト細胞の間を識別するため
の方法を包含している。その方法によって、黒色腫、腎
ＰＩＭＨｍ瘍ならびに乳房腫瘍が検出できるであろう。
本発明のヒト単一クローン抗体は、各種のがんに伴なう
疾病の診断に有用である。すなわち、そのヒト単一クロ
ーン抗体は、本発明のヒト単一クローン抗体によるＭａ
４細胞内抗原のイムノアッセイによってヒト上皮細胞に
対して使用されるであろう。
疾病の診断に有用である。すなわち、そのヒト単一クロ
ーン抗体は、本発明のヒト単一クローン抗体によるＭａ
４細胞内抗原のイムノアッセイによってヒト上皮細胞に
対して使用されるであろう。
本発明の測定は、点色腫細胞を含有する組織を点色腫細
胞抗原を認識する抗体、望ましくは一種またはそれ以上
の表面細胞抗原あるいは細胞質成分に対する単一クロー
ン抗体と接触させること、ならびに言及した単一クロー
ン抗体と言及した抗原との間の抗原反応を観察すること
を包含している。本発明の繁用される具体化において、
測定する組織はまず摘出され、そしてそれから新鮮なま
ま、あるいはその術式において周知の方法により凍結さ
れあるいは・ぐラフイン中に包埋されて言及した単一ク
ローン抗体と接触する。この具体化において、言及した
抗体は抗体の所在を追跡できる色のついた基あるいは酵
素、詳細にはパーオキシダーゼとその基質のような色素
を形成する物質で、螢光物質で、あるいは放射活性元素
で標識をつげることができる。摘出した組織の血清学的
測定もまた本発明の具体化である。すなわち、受動血球
凝集測定法、抗体阻害測定法、あるいは糖蛋白質媒介免
疫付着測定法が利用できる。同様にして、抗マウス免疫
グロブリン測定法ならびにプロティンＡ測定法が採用で
きる。
胞抗原を認識する抗体、望ましくは一種またはそれ以上
の表面細胞抗原あるいは細胞質成分に対する単一クロー
ン抗体と接触させること、ならびに言及した単一クロー
ン抗体と言及した抗原との間の抗原反応を観察すること
を包含している。本発明の繁用される具体化において、
測定する組織はまず摘出され、そしてそれから新鮮なま
ま、あるいはその術式において周知の方法により凍結さ
れあるいは・ぐラフイン中に包埋されて言及した単一ク
ローン抗体と接触する。この具体化において、言及した
抗体は抗体の所在を追跡できる色のついた基あるいは酵
素、詳細にはパーオキシダーゼとその基質のような色素
を形成する物質で、螢光物質で、あるいは放射活性元素
で標識をつげることができる。摘出した組織の血清学的
測定もまた本発明の具体化である。すなわち、受動血球
凝集測定法、抗体阻害測定法、あるいは糖蛋白質媒介免
疫付着測定法が利用できる。同様にして、抗マウス免疫
グロブリン測定法ならびにプロティンＡ測定法が採用で
きる。
本発明のもう一つの詳細な具体化において。
測定する組織は個体そのままあるいはその一部分全体を
包含しており、抗体を個体に投与し、抗体を放射活性の
、あるいは他の工坏ルギーに富んだ元素で標識し、そし
て全身またはその一部を腫瘍細胞の場所での放射活性の
位置測定のために外部から走査する。
包含しており、抗体を個体に投与し、抗体を放射活性の
、あるいは他の工坏ルギーに富んだ元素で標識し、そし
て全身またはその一部を腫瘍細胞の場所での放射活性の
位置測定のために外部から走査する。
本発明の方法はまた、患者における腫瘍の治療も包含し
ており、そこにおいては、黒色腫細胞の細胞抗原、詳細
には細胞分化抗原を認識する単一クロー／抗体を、腫瘍
細胞の生育あるいは増殖を抑制するのに効果的な量だけ
患者に投与する。この方法の詳細な具体化において七の
抗体は、異物毒性剤、化学療法剤、放射性核種、毒素、
補体活性化物質ならびに凝血促進物質を包含する、破壊
性の物質を生ずる組織を破壊する可能性を持つ薬剤で標
識する。
ており、そこにおいては、黒色腫細胞の細胞抗原、詳細
には細胞分化抗原を認識する単一クロー／抗体を、腫瘍
細胞の生育あるいは増殖を抑制するのに効果的な量だけ
患者に投与する。この方法の詳細な具体化において七の
抗体は、異物毒性剤、化学療法剤、放射性核種、毒素、
補体活性化物質ならびに凝血促進物質を包含する、破壊
性の物質を生ずる組織を破壊する可能性を持つ薬剤で標
識する。
下記の例はこの発明の説明を意図したものであり、いか
なる方法においても、特にここに記述しならびに主張し
たハイシリドーマ、単一クローン抗体ならびに細胞系の
本質的に機能的な同一物に関して同じものに限定するも
のではない。
なる方法においても、特にここに記述しならびに主張し
たハイシリドーマ、単一クローン抗体ならびに細胞系の
本質的に機能的な同一物に関して同じものに限定するも
のではない。
ヒ）ｌ−りｐ−ン抗体の入手可能性
本発明において公開した細胞系は、メリーラ／ド州ペテ
スダ市のアメリカン タイプ カルチャー コレクショ
ンに寄託してあり、そして下記の寄託番号を持っている
。
スダ市のアメリカン タイプ カルチャー コレクショ
ンに寄託してあり、そして下記の寄託番号を持っている
。
と１＝！二彊諷 」Ｌ至ｉ
Ｎａ４ ＨＢ８２２２
Ｍ５４ ＨＢ８２３４
３０４
３０５
ヒト単一クローン抗体 ノリＳ３ＩＬ
Ｍ３０７ １（Ｂ ８２３５
Ｍ３１１ ＨＢ８２３６
寄託は単に公開可能とする目的のためであり、本発明の
目的を寄託した特定な材料＋Ｃ限定することを意図する
ものではない。
目的を寄託した特定な材料＋Ｃ限定することを意図する
ものではない。
胞系８ＫＯ−００７（オルソン、Ｌ、、ならびにＨ，Ｓ
。
。
カプラＶ 、 １９８０ 、 ＰｒｏＣ，Ｎａｔ’１．
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、、アメリカ合衆国？７：５４２
９）は、カリホルニア州すニーベイルのベクトンーデツ
キ／ソ／ カンパニーから入手し、そしてスローンーケ
ツターリンダ インステイテユートのＪ、７オ博士によ
ってマイコゾラスマ汚染除去された。５ＫＯ−００７は
、イグシロ／Ｈ鎖とラムダし鎖とを分泌する。ヒトのＬ
ＩＣＲＬＯＮ／ＨＭＦ２（ＬＩＣＲ−２と略記）細胞系
（エドワーズ、 Ｐ、Ａ、Ｗ、、 Ｃ，Ｍ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、、アメリカ合衆国？７：５４２
９）は、カリホルニア州すニーベイルのベクトンーデツ
キ／ソ／ カンパニーから入手し、そしてスローンーケ
ツターリンダ インステイテユートのＪ、７オ博士によ
ってマイコゾラスマ汚染除去された。５ＫＯ−００７は
、イグシロ／Ｈ鎖とラムダし鎖とを分泌する。ヒトのＬ
ＩＣＲＬＯＮ／ＨＭＦ２（ＬＩＣＲ−２と略記）細胞系
（エドワーズ、 Ｐ、Ａ、Ｗ、、 Ｃ，Ｍ。
スミス、 Ａ、Ｍ、ネピルならびにＭ、Ｊ、オヘア。
１９８２ 、 Ｅｕｒ＠Ｊ、ＩｍｍｕｎＯｌ、 １２：
６４１ ）は、ルードビツヒ インステイテユート オ
シ キャンサー リサーチのロンドン支所のＭ、オへア
、Ｐ。
６４１ ）は、ルードビツヒ インステイテユート オ
シ キャンサー リサーチのロンドン支所のＭ、オへア
、Ｐ。
エドワーズならびにＭ、ネビルの各博士から入手した。
このリン／ｅ芽球様細胞系はガンマ、Ｈ鎖ならびに１ヱ
、ｅ Ｌ鎖を分泌し、そしてニジスタイン−バール ウ
ィルス核抗原（ｇＢＮＡ）を表現する。クロ七らによっ
て０Ｍ１５００細胞系から開発されたヒドリン、ｅ芽球
様細胞系ＧＭ４６７２（クロ七、 Ｃ，Ａ、、 Ａ、リ
ンネンパツノ１．Ｗ、ホール。
、ｅ Ｌ鎖を分泌し、そしてニジスタイン−バール ウ
ィルス核抗原（ｇＢＮＡ）を表現する。クロ七らによっ
て０Ｍ１５００細胞系から開発されたヒドリン、ｅ芽球
様細胞系ＧＭ４６７２（クロ七、 Ｃ，Ａ、、 Ａ、リ
ンネンパツノ１．Ｗ、ホール。
２、ステブレウスキーならびにＨ，コツロウスキー。
１９８０ 、 Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄ、）２８８：
４ＢＢ）は、ニューシャーシー州カムデン市のイ／ステ
イテユートオゾ メディカル リサーチのヒユーマン
グネテイツク ミ二一タント セｙ デポジトリ−から
入手した。この細胞系もＢＢＮＡを表現し、そし″′ｃ
〃ンマ！Ｈ鎖とカツノぞ−Ｌ鎖を分泌する。
４ＢＢ）は、ニューシャーシー州カムデン市のイ／ステ
イテユートオゾ メディカル リサーチのヒユーマン
グネテイツク ミ二一タント セｙ デポジトリ−から
入手した。この細胞系もＢＢＮＡを表現し、そし″′ｃ
〃ンマ！Ｈ鎖とカツノぞ−Ｌ鎖を分泌する。
マウス黒色腫細胞系Ｎ８−１ （ケーラー、 Ｇ、、
Ｃ。
Ｃ。
Ｓ、ホウならびにＣ，ミルシュタイン、１９７６゜Ｅｕ
ｒ、 Ｊ＊ Ｉｍｍｕｎｏｌａ ６ ： ２９２ ）は
、スローンーケツターリ／グ インステイテユートのＵ
、ノ１ンマ−リンク博士から入手した。それらの細胞系
はロズウエル パーク メモリアル インステイテユー
ト １６４０培地（２ミリモルのグルタミン、１パーセ
ントの非必須アミノ酸類、１００単位／ミリリットルの
ペニシリンならびに１マイクログラム１ミリリツトルの
８−アザグアニンを含有）中で生育した。４Ｘ１０ の
アミノゾテリンを含有する培地中では発育は生じなかっ
た。
ｒ、 Ｊ＊ Ｉｍｍｕｎｏｌａ ６ ： ２９２ ）は
、スローンーケツターリ／グ インステイテユートのＵ
、ノ１ンマ−リンク博士から入手した。それらの細胞系
はロズウエル パーク メモリアル インステイテユー
ト １６４０培地（２ミリモルのグルタミン、１パーセ
ントの非必須アミノ酸類、１００単位／ミリリットルの
ペニシリンならびに１マイクログラム１ミリリツトルの
８−アザグアニンを含有）中で生育した。４Ｘ１０ の
アミノゾテリンを含有する培地中では発育は生じなかっ
た。
融合の手法。悪性黒色腫の３３名の患者からのリンパ節
と腫瘍標本を無菌状態下に小さなはさみで細断した。結
果得た細胞懸濁液を２回ＲＰＭＩ−１６４０培地洗浄し
、そして融合のためのリン、４球源として用いた。２５
名の黒色腫患者からの末梢血液リンパ球は、フィコ−ル
ーツ・イパツク（ファルマシア ファインケミカルズ。
と腫瘍標本を無菌状態下に小さなはさみで細断した。結
果得た細胞懸濁液を２回ＲＰＭＩ−１６４０培地洗浄し
、そして融合のためのリン、４球源として用いた。２５
名の黒色腫患者からの末梢血液リンパ球は、フィコ−ル
ーツ・イパツク（ファルマシア ファインケミカルズ。
ファルマシア インコーポレーションの部門、ニューシ
ャーシー州ビスカタウェイ市）比重遠心法によりヘパリ
ン化靜脈血かも精製した。Ｂ細胞をさらに富化するため
に、Ｔリンパ球なノイラミニダーセ処理ヒツジ赤血球で
のロゼツト形成ならびにフィコ−ルーツ・イノ七ツク遠
心法を通じての遠心分離によって除去した。
ャーシー州ビスカタウェイ市）比重遠心法によりヘパリ
ン化靜脈血かも精製した。Ｂ細胞をさらに富化するため
に、Ｔリンパ球なノイラミニダーセ処理ヒツジ赤血球で
のロゼツト形成ならびにフィコ−ルーツ・イノ七ツク遠
心法を通じての遠心分離によって除去した。
リンパ球と骨髄腫／リンパ芽球様細胞は、ｌ：１もしく
はｌ：２の比率で、３分間３７℃で、１５パーセント（
容ｉｔ／容量）ジメチルスルホキサイド中に溶解した４
１．５ ／”−セント（重量／容量）ポリエチレング
リコール〔分子量４０００（Ｊ、Ｔ、ペーカー ケミカ
ル コーポレーション、フィリッゾスパーク市、ニュー
シャーシー州） ）０、２ ミＩＪ ！Ｊフットル中融
合した。各融合実験において、２Ｘ１０’と５ＸｌＯ’
の間のリンパ球を用いた。融合後に細胞は、１５パーセ
ントウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ １６４０培地中
に１夜放置した。それから細胞を１５パーセントウシ胎
仔血清、２Ｘ１０ モル濃度ヒポキサ／チン、４×１０
モル濃度アミノプテリン、３．２Ｘ１０ モル濃度チ
ミジ／ならびに２Ｘｌ Ｏモル濃度２−メルカノトエタ
ノールを含有するＰＲＭＩ １６４０培地（ＨＡＴ培地
）に再懸濁し、セしてＢＡＬＢ／ＣあるいはＣ５７Ｂ
Ｌ ／ ６牌細胞（１０’細胞／ウエル）あるいは腹水
細胞（１−２Ｘ１０’細胞／ウエル）から調製したフィ
ーダ一層のある播槙ずみのコスタ−３６９６穴プレート
（コスタ−、ケンブリッジ市、マサチュセツッ州）中に
ウェルあたり１０細胞入れた。細胞はＨＡＴ培地中に少
なくとも４週間保持した。
はｌ：２の比率で、３分間３７℃で、１５パーセント（
容ｉｔ／容量）ジメチルスルホキサイド中に溶解した４
１．５ ／”−セント（重量／容量）ポリエチレング
リコール〔分子量４０００（Ｊ、Ｔ、ペーカー ケミカ
ル コーポレーション、フィリッゾスパーク市、ニュー
シャーシー州） ）０、２ ミＩＪ ！Ｊフットル中融
合した。各融合実験において、２Ｘ１０’と５ＸｌＯ’
の間のリンパ球を用いた。融合後に細胞は、１５パーセ
ントウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ １６４０培地中
に１夜放置した。それから細胞を１５パーセントウシ胎
仔血清、２Ｘ１０ モル濃度ヒポキサ／チン、４×１０
モル濃度アミノプテリン、３．２Ｘ１０ モル濃度チ
ミジ／ならびに２Ｘｌ Ｏモル濃度２−メルカノトエタ
ノールを含有するＰＲＭＩ １６４０培地（ＨＡＴ培地
）に再懸濁し、セしてＢＡＬＢ／ＣあるいはＣ５７Ｂ
Ｌ ／ ６牌細胞（１０’細胞／ウエル）あるいは腹水
細胞（１−２Ｘ１０’細胞／ウエル）から調製したフィ
ーダ一層のある播槙ずみのコスタ−３６９６穴プレート
（コスタ−、ケンブリッジ市、マサチュセツッ州）中に
ウェルあたり１０細胞入れた。細胞はＨＡＴ培地中に少
なくとも４週間保持した。
骨髄腫／リンパ芽球様細胞糸とリンパ球の融合後の細胞
の生長。ＬＩＣＲ−２，５ＫＯ−００７゜０Ｍ４６７２
ならびにＮ５−１との融合の結果を第１表に示す。
の生長。ＬＩＣＲ−２，５ＫＯ−００７゜０Ｍ４６７２
ならびにＮ５−１との融合の結果を第１表に示す。
（以下余白）
クローン性増殖を含むシェルは、ＭＳ−１マウス骨髄腫
糸と融合した後に最も頻繁に出現した。
糸と融合した後に最も頻繁に出現した。
リンパ球源は、ＮＥＩ−１融合の場合にはクローン性増
殖の頻度に影響しなかった。リンパ節あるいは末梢血か
らのリンパ球との融合後にクローンは同頻度で出現した
。３種のヒト骨髄腫／リンノ々芽球様細胞系との融合は
、生育するクローンの頻度が３から２５倍低い結果であ
った。リンパ節からのリン／ｑ球の場合に、ＬＩＣＲ−
２との融合は、５ＫＯ−００７あるいは０Ｍ４６７２と
の融合よりもクローン性増殖の頻度がより高い結果であ
った。リンパ球源として末梢血とのＬＩＣＲ−２あるい
は５ＫＯ−００７の融合においては、一様に劣る結果を
得た（中央値は融合させたす７２球１０あたり１りμｍ
／）。しかしながら、ＬＩＣＲ−２との融合に先立つＴ
細胞の除去による末梢血り７２球のＢ細胞数富化は、生
育するクローンの頻度をより高くする結果を与えた。富
化Ｂ細胞ならびに未精製末梢血リンパ球での結果の直接
比較を実施した３例において、クローン性増殖の頻度は
、Ｔ細胞除去群にお（・て５かｇ）２０倍高かった。
殖の頻度に影響しなかった。リンパ節あるいは末梢血か
らのリンパ球との融合後にクローンは同頻度で出現した
。３種のヒト骨髄腫／リンノ々芽球様細胞系との融合は
、生育するクローンの頻度が３から２５倍低い結果であ
った。リンパ節からのリン／ｑ球の場合に、ＬＩＣＲ−
２との融合は、５ＫＯ−００７あるいは０Ｍ４６７２と
の融合よりもクローン性増殖の頻度がより高い結果であ
った。リンパ球源として末梢血とのＬＩＣＲ−２あるい
は５ＫＯ−００７の融合においては、一様に劣る結果を
得た（中央値は融合させたす７２球１０あたり１りμｍ
／）。しかしながら、ＬＩＣＲ−２との融合に先立つＴ
細胞の除去による末梢血り７２球のＢ細胞数富化は、生
育するクローンの頻度をより高くする結果を与えた。富
化Ｂ細胞ならびに未精製末梢血リンパ球での結果の直接
比較を実施した３例において、クローン性増殖の頻度は
、Ｔ細胞除去群にお（・て５かｇ）２０倍高かった。
生育クローンによる免疫グロブリンの生産。
細胞の生育している穴からの上清は、ヒトミュー、ガン
マあるいはアルファＨ鎖の生産について試験した。ＬＩ
ＣＲ−Ｚ系は、上清ミＩＪ ＩＪットル当り１０ノナグ
ラムから１００ノナグラムの間の鎖を生産した。しかし
ながら少数のウェル（１０バーセント以下）は、ガンマ
鎖を２マイクログラム／ミリリツトルもの高濃度含有し
ていた。０Ｍ４６７２は、１０ノナグラム−ｌマイクロ
グラム／ミリリットルのイムノグロブ１ノンＧを生産し
た。５ＫＯ−００７ある０をまＭＳ−１の上溝中には、
ミュー、ガンマ−ある（・（末アルファＨ鎖のいずれも
検出しなかった。融合後（ま、ミュー、ガンマ−（２０
０ノナグラム／ミリリツトル）またはアルファＨ鎮は、
５０−８０．ξ−七／トの穴で検出した（第１＆）。ミ
ュー、ガンマおよびアルファ陽性のウェルの相対的比率
を１、標本から標本でばらついており、融合の相手とし
て用いたリンパ球あるいは骨髄腫／リンパ芽球様細胞系
の起源との関係において、一定の様式はみとめなかった
（第１表）。イムノグロブリンの生産水準は０．３マイ
クログラム−４０マイクログラム／ミリリツトルの範囲
であった。
マあるいはアルファＨ鎖の生産について試験した。ＬＩ
ＣＲ−Ｚ系は、上清ミＩＪ ＩＪットル当り１０ノナグ
ラムから１００ノナグラムの間の鎖を生産した。しかし
ながら少数のウェル（１０バーセント以下）は、ガンマ
鎖を２マイクログラム／ミリリツトルもの高濃度含有し
ていた。０Ｍ４６７２は、１０ノナグラム−ｌマイクロ
グラム／ミリリットルのイムノグロブ１ノンＧを生産し
た。５ＫＯ−００７ある０をまＭＳ−１の上溝中には、
ミュー、ガンマ−ある（・（末アルファＨ鎖のいずれも
検出しなかった。融合後（ま、ミュー、ガンマ−（２０
０ノナグラム／ミリリツトル）またはアルファＨ鎮は、
５０−８０．ξ−七／トの穴で検出した（第１＆）。ミ
ュー、ガンマおよびアルファ陽性のウェルの相対的比率
を１、標本から標本でばらついており、融合の相手とし
て用いたリンパ球あるいは骨髄腫／リンパ芽球様細胞系
の起源との関係において、一定の様式はみとめなかった
（第１表）。イムノグロブリンの生産水準は０．３マイ
クログラム−４０マイクログラム／ミリリツトルの範囲
であった。
ふたたび、分泌されるイムノグロゾリｙの量と融合の相
手あるいはリンパ球の起源の違いとの間に明確な関係は
認めなかった。１種以上のイムノグロブリン類を含有す
るウェルにＬＩＣＲ−２ならびに８ＫＯ−００７との融
合後にしばしば遭偶した。はとんどの例において、２種
のイムノグロブリンのあるウェルは、ミューあるいはア
ルファどちらかのＨ鎖と第２のＨ鎖を含有していた。こ
のことは（雑種細胞（ＬＩＣＲ−２あるいはＧＭ４６７
２融合の場合において）による２種のＨ鎖の生産、ある
いはエプスタイン−パール ウィルス（ＥＢＶ）−転換
細胞の多クローン性増殖によるものであろう。
手あるいはリンパ球の起源の違いとの間に明確な関係は
認めなかった。１種以上のイムノグロブリン類を含有す
るウェルにＬＩＣＲ−２ならびに８ＫＯ−００７との融
合後にしばしば遭偶した。はとんどの例において、２種
のイムノグロブリンのあるウェルは、ミューあるいはア
ルファどちらかのＨ鎖と第２のＨ鎖を含有していた。こ
のことは（雑種細胞（ＬＩＣＲ−２あるいはＧＭ４６７
２融合の場合において）による２種のＨ鎖の生産、ある
いはエプスタイン−パール ウィルス（ＥＢＶ）−転換
細胞の多クローン性増殖によるものであろう。
Ｎ８−１ならびに１．ＩＣＲ−２との融合から誘導した
細胞によるイムノグロブリン生産の安定性は、限定希釈
法を用いたイムノグロブリンのウェルのサブカルチャー
により検討した。ＬＩＣＲ−２融合からのイムノグロブ
リンのウェル（ｗ＠ｌ １ ）の７７パーセン） （７
６／９９ ）からの細胞が１回のサブカルチャー（融合
後２−３力月の間ン後イムノグロゾリ／を生産し続け、
そして６１／＃−セントが第２回のサブカルチャー（３
−４力月で）後もイムノグロブリンのままであった。マ
ウス／ヒトのクローンは、より低い割合いがイムノグロ
ブリン生産を持続しており、ＭＳ−１融合からのイムノ
グロブリンの穴の５８パーセント（４３／７４）が第１
回のサブカルチャー（融合後２力月で）後もイムノグロ
ブリンのままであり、そして第２回のザブカルチャー（
３力月目）の後は３０パーセントがイムノグロブリンで
あった。
細胞によるイムノグロブリン生産の安定性は、限定希釈
法を用いたイムノグロブリンのウェルのサブカルチャー
により検討した。ＬＩＣＲ−２融合からのイムノグロブ
リンのウェル（ｗ＠ｌ １ ）の７７パーセン） （７
６／９９ ）からの細胞が１回のサブカルチャー（融合
後２−３力月の間ン後イムノグロゾリ／を生産し続け、
そして６１／＃−セントが第２回のサブカルチャー（３
−４力月で）後もイムノグロブリンのままであった。マ
ウス／ヒトのクローンは、より低い割合いがイムノグロ
ブリン生産を持続しており、ＭＳ−１融合からのイムノ
グロブリンの穴の５８パーセント（４３／７４）が第１
回のサブカルチャー（融合後２力月で）後もイムノグロ
ブリンのままであり、そして第２回のザブカルチャー（
３力月目）の後は３０パーセントがイムノグロブリンで
あった。
細胞表面抗原との反応性に関 る ムノ ロブリンのス
クリーニング。イムノグロブリンのウェルの上清は、１
０１ｉｔの黒色腫、２種の神経膠原、そして８種の上皮
性がんを含む２０細胞系のパネルを用いて、赤血球ロゼ
ツト形成測定により細胞表面抗原との反応性を試験した
（第２表）。
クリーニング。イムノグロブリンのウェルの上清は、１
０１ｉｔの黒色腫、２種の神経膠原、そして８種の上皮
性がんを含む２０細胞系のパネルを用いて、赤血球ロゼ
ツト形成測定により細胞表面抗原との反応性を試験した
（第２表）。
（以下余白）
３５８
スクリーニングした７７１個のウェルで、６個のウェル
の上溝で陽性反応を検出した（０．８パーセント）。そ
れら６個のウェルから抗体分泌クローンを分離する努力
をした結果、Ｍ ａ ４と命名した１株の細胞系を確立
した。それはヒト細胞の表面抗原に対するイムノグロブ
リ／Ｍ抗体を産生じ続ける。そのＭａ４細胞系は、ＬＩ
ＣＲ−２と再発性悪性黒色腫の３５才の男性の所属り７
２節からのリンパ球との融合から誘導したものである。
の上溝で陽性反応を検出した（０．８パーセント）。そ
れら６個のウェルから抗体分泌クローンを分離する努力
をした結果、Ｍ ａ ４と命名した１株の細胞系を確立
した。それはヒト細胞の表面抗原に対するイムノグロブ
リ／Ｍ抗体を産生じ続ける。そのＭａ４細胞系は、ＬＩ
ＣＲ−２と再発性悪性黒色腫の３５才の男性の所属り７
２節からのリンパ球との融合から誘導したものである。
その細胞系は４回サシクローン化（細胞１個／ウェル）
しており、１２力月の期間にわたってイムノグロブリン
Ｍ（５マイクログラム／ミリリツトル）ならびにイムノ
グロゾリ／Ｇ（２マイクログラム／ミリリツトル）の安
定した生産を維持している。Ｍａ４細胞系はフロー サ
イトメトリーにより４倍体であり、核型分析によりヒト
染色体のみを含有している。
しており、１２力月の期間にわたってイムノグロブリン
Ｍ（５マイクログラム／ミリリツトル）ならびにイムノ
グロゾリ／Ｇ（２マイクログラム／ミリリツトル）の安
定した生産を維持している。Ｍａ４細胞系はフロー サ
イトメトリーにより４倍体であり、核型分析によりヒト
染色体のみを含有している。
第１図は、Ｍａ４細胞系がＨ鎖とＬ＠０２種の明確な組
を分泌することを示している。５ＫＯ−００７の点色腫
患者の腋窩リンパ節からのリンパ球との融合から誘導し
たもう一つのイムノグロブリン分泌細胞系は、２回クロ
ーン化し、そして５力月の期間にわたってイムノフロプ
リｙａ（検出可能な反応性がない）を生産し続けている
。５Ｄ８−ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析（８０
Ｂ−ＰＡＧＥ）は、Ｂｅ３と命名したこの細胞系もＬ鎖
とＨ鎖の２種の明確な組を産生じていることを示してい
る（第１図）。
を分泌することを示している。５ＫＯ−００７の点色腫
患者の腋窩リンパ節からのリンパ球との融合から誘導し
たもう一つのイムノグロブリン分泌細胞系は、２回クロ
ーン化し、そして５力月の期間にわたってイムノフロプ
リｙａ（検出可能な反応性がない）を生産し続けている
。５Ｄ８−ポリアクリルアミドゲル電気泳動分析（８０
Ｂ−ＰＡＧＥ）は、Ｂｅ３と命名したこの細胞系もＬ鎖
とＨ鎖の２種の明確な組を産生じていることを示してい
る（第１図）。
免疫グロブリン測定。細胞の生育しつつある集団の入っ
たウェルからの上清を、酵素免疫測定法によりヒトのミ
ュー、ガンマおよびアルファＨ鎖について測定した。あ
らかじめヒトイムノフロゾリンＧ（５０マイクログラム
／ミリリツトル）、イムノグロブリンＡ（５０マイクロ
グラム／ミリリツトル）、あるいはイムノグロブリンＭ
（１０マイクログラム／ミリリツトル）（カッペル ラ
ボラトリーズ、コクランピル市、ペンシルバニア州）で
コスタ−３６９６９６ウｚルプレートを４℃で一晩プレ
コードした。そのプレコートしたウェルは、りん酸緩衝
化生理食塩水ｐＨ７，５（ＰＢＳ）で洗浄し、そして３
０分間ガンマグロブリンネ含のウシ給仕血清（ギブコラ
ゼラトリーズ、グランド アイランド市、ニューヨーク
州）と培養した。１：１００に希釈したアルカリホスフ
ァターゼを連結したヒツジの抗ヒトミュー、ガンマおよ
びアルファＨ鎖抗体（シグマ ケミカル コーポレーシ
ョン、セントルイス市、ミズリー州）を被検上清とある
いは１５パーセントウシ胎仔血清含有のＲＰＭＩ１６４
０培地中に希釈したイムノグロブリンＧ、イムノフロゾ
リ／ＡあるいはイムノグロブリンＭ標準液と混和（１：
１（容積／容積）〕シて９０分間培養した（標準液の最
終濃度は１０ナノグラム／ミリリツト／ｌ／、１００ナ
ノグラム／ミリリツトル、１マイクログラム／ミリリツ
トル、ｌＯマイクログラム／ミリリットルならびに１０
０マイクログラム／ミリリツトルであった）。そして混
液をプレコートしたウェルに移し、６０分間培養し、そ
してウシ給仕血清で洗浄した。アルカリホスファターゼ
活性はノ々う二トロフェニルりん酸ジナトリウム塩（シ
グマケミカル カ／）に−）を基質としアルチック２１
０！リーダー（アルチック システムズコーポレーショ
ン、ファーミンクテール市、ニューヨーク州）で光学濃
度の変化を測定する方法を用いて検出した。その測定法
は１００ナノグラム／ミリリツトルまたはそれ以上のミ
ュー。
たウェルからの上清を、酵素免疫測定法によりヒトのミ
ュー、ガンマおよびアルファＨ鎖について測定した。あ
らかじめヒトイムノフロゾリンＧ（５０マイクログラム
／ミリリツトル）、イムノグロブリンＡ（５０マイクロ
グラム／ミリリツトル）、あるいはイムノグロブリンＭ
（１０マイクログラム／ミリリツトル）（カッペル ラ
ボラトリーズ、コクランピル市、ペンシルバニア州）で
コスタ−３６９６９６ウｚルプレートを４℃で一晩プレ
コードした。そのプレコートしたウェルは、りん酸緩衝
化生理食塩水ｐＨ７，５（ＰＢＳ）で洗浄し、そして３
０分間ガンマグロブリンネ含のウシ給仕血清（ギブコラ
ゼラトリーズ、グランド アイランド市、ニューヨーク
州）と培養した。１：１００に希釈したアルカリホスフ
ァターゼを連結したヒツジの抗ヒトミュー、ガンマおよ
びアルファＨ鎖抗体（シグマ ケミカル コーポレーシ
ョン、セントルイス市、ミズリー州）を被検上清とある
いは１５パーセントウシ胎仔血清含有のＲＰＭＩ１６４
０培地中に希釈したイムノグロブリンＧ、イムノフロゾ
リ／ＡあるいはイムノグロブリンＭ標準液と混和（１：
１（容積／容積）〕シて９０分間培養した（標準液の最
終濃度は１０ナノグラム／ミリリツト／ｌ／、１００ナ
ノグラム／ミリリツトル、１マイクログラム／ミリリツ
トル、ｌＯマイクログラム／ミリリットルならびに１０
０マイクログラム／ミリリツトルであった）。そして混
液をプレコートしたウェルに移し、６０分間培養し、そ
してウシ給仕血清で洗浄した。アルカリホスファターゼ
活性はノ々う二トロフェニルりん酸ジナトリウム塩（シ
グマケミカル カ／）に−）を基質としアルチック２１
０！リーダー（アルチック システムズコーポレーショ
ン、ファーミンクテール市、ニューヨーク州）で光学濃
度の変化を測定する方法を用いて検出した。その測定法
は１００ナノグラム／ミリリツトルまたはそれ以上のミ
ュー。
ガンマ、あるいはアルファーＨ鎖を検出し、そして各イ
ムノグロブリン類に１００ナノグラム／ミリリツトルま
たはそれ以上から１００マイクログラム／ミリリツトル
またはそれまでの範囲にわたって特異的であった。
ムノグロブリン類に１００ナノグラム／ミリリツトルま
たはそれ以上から１００マイクログラム／ミリリツトル
またはそれまでの範囲にわたって特異的であった。
ハイゾリドーｉからのヒト単一クローン抗体の特性
細胞表面ならびに細胞内抗原に対する抗体反応性。２０
０ナノグラム／ミリリツトルまたはそれ以上のイムノグ
ロブリンを含有する穴からの上溝は次のヒト腫瘍細胞糸
のパネルを用いて細胞性抗原に対する反応性に関してス
クリーニングした。即ち、黒色腫（ＳＫ−ＭＥＬ−１３
，１９゜２３．２８，２９，３７，９３，１４７，１６
５セし工ＭｅＷｏ ） ；悪性神経膠原（Ｕ２５１ＭＧ
、ＳＫ−ＭＧ−３）；上皮性が／ｖ （５Ｋ−ＲＣ−７
，５Ｋ−ＲＣ−９゜ＢＴ−２０，ＣＡＭＡ、２５３Ｊ、
ＨＴ２９，０Ｖ２７Ｔ４そしてＣａ１ｕ−１）。細胞表
面抗原を検出するために、標的細胞をファルコン３０３
４プレートにのせ、そしてイムノグロブリンＧＣｆロチ
インＡ（ＦＡ）測定〕ならびにイムノグロブリンＭ〔免
疫粘着（ＩＡ）測定〕のための赤血球ロゼツト化測定を
先に記述した様に実施した（ツク−Ｈ，、Ｔ、タカハシ
、 Ｈ，Ｆ、エトゲンならびにり。
０ナノグラム／ミリリツトルまたはそれ以上のイムノグ
ロブリンを含有する穴からの上溝は次のヒト腫瘍細胞糸
のパネルを用いて細胞性抗原に対する反応性に関してス
クリーニングした。即ち、黒色腫（ＳＫ−ＭＥＬ−１３
，１９゜２３．２８，２９，３７，９３，１４７，１６
５セし工ＭｅＷｏ ） ；悪性神経膠原（Ｕ２５１ＭＧ
、ＳＫ−ＭＧ−３）；上皮性が／ｖ （５Ｋ−ＲＣ−７
，５Ｋ−ＲＣ−９゜ＢＴ−２０，ＣＡＭＡ、２５３Ｊ、
ＨＴ２９，０Ｖ２７Ｔ４そしてＣａ１ｕ−１）。細胞表
面抗原を検出するために、標的細胞をファルコン３０３
４プレートにのせ、そしてイムノグロブリンＧＣｆロチ
インＡ（ＦＡ）測定〕ならびにイムノグロブリンＭ〔免
疫粘着（ＩＡ）測定〕のための赤血球ロゼツト化測定を
先に記述した様に実施した（ツク−Ｈ，、Ｔ、タカハシ
、 Ｈ，Ｆ、エトゲンならびにり。
Ｈ，オールド、 １９７６、Ｊ、 Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、
１４４：８７３；プロインドシュツク、 Ｍ、、 Ｈ
，ツク、Ｔ。
１４４：８７３；プロインドシュツク、 Ｍ、、 Ｈ
，ツク、Ｔ。
タカハシ、Ｒ，ウェダ、Ｊ、ランソホ７ 、 Ｈ，Ｆ、
エトゲンならびにり、 Ｈ，オールド、シト工Ｎａ ｔ
ｌ。
エトゲンならびにり、 Ｈ，オールド、シト工Ｎａ ｔ
ｌ。
Ａｃａｄ、 Ｓｃ１．、アメリカ合衆国■：５１２２
）。
）。
イムノグロブリンＡ抗体は、精製抗ヒトイムノグロブリ
ンＡ（アキュレイト ケミカル アンド サイエンティ
フィック コーポレーション、。
ンＡ（アキュレイト ケミカル アンド サイエンティ
フィック コーポレーション、。
ウエストハリイ市、ニューヨーク州） ヲｏ、 ０１パ
ーセント塩化クロムでヒト赤血球に接合させて調製した
インジケーター細胞により検出した。
ーセント塩化クロムでヒト赤血球に接合させて調製した
インジケーター細胞により検出した。
吸収試験は先に記述した手順に従って実施した（ケアリ
イ、 Ｔ、 Ｅ、、 Ｔ、タカハシ、Ｌ、Ａ、レスニッ
ク、Ｉ（、Ｆ、エトゲンならびにり、 Ｊ、オールド。
イ、 Ｔ、 Ｅ、、 Ｔ、タカハシ、Ｌ、Ａ、レスニッ
ク、Ｉ（、Ｆ、エトゲンならびにり、 Ｊ、オールド。
迷ｊ５．７３：３２７Ｂ）。細胞内抗原を検出するため
に、上清を間接免疫螢光試験によりスクリーニングした
。７アルコ７３０３４プレートで生育している標的細胞
を室温で５分間、ｌ：１（容積／容積）メタノールニア
七トン混液で固定した。細胞は室温で１時間上清と培養
し、洗浄し、そしてフルオレスセインイソチオシアネー
トと接合したヤギ抗ヒトイムノグロブリン（カペルラボ
ラトリーズ インコーポレーション）の１＝５０希釈液
と４５分間培養した。螢光はライン ダイアルックス
２ｏ顕微鏡で判定した。
に、上清を間接免疫螢光試験によりスクリーニングした
。７アルコ７３０３４プレートで生育している標的細胞
を室温で５分間、ｌ：１（容積／容積）メタノールニア
七トン混液で固定した。細胞は室温で１時間上清と培養
し、洗浄し、そしてフルオレスセインイソチオシアネー
トと接合したヤギ抗ヒトイムノグロブリン（カペルラボ
ラトリーズ インコーポレーション）の１＝５０希釈液
と４５分間培養した。螢光はライン ダイアルックス
２ｏ顕微鏡で判定した。
クロロホルム：メタノール抽出。細胞は、クロロホルム
：メタノールで既報の手順により抽出した。抗体抑制試
験は、その細胞抽出物な抗体含有の上清（終末点下の２
希釈段階に希釈ンと混和し、２０℃で１時間培養し、そ
して５Ｋ−ＲＣ−９標的細胞を用いて残存抗体反応性を
試験することにより実施した。
：メタノールで既報の手順により抽出した。抗体抑制試
験は、その細胞抽出物な抗体含有の上清（終末点下の２
希釈段階に希釈ンと混和し、２０℃で１時間培養し、そ
して５Ｋ−ＲＣ−９標的細胞を用いて残存抗体反応性を
試験することにより実施した。
反応分析。
細胞は、ミリリットルあたりｌＸｌ０’細胞で１２時間
にわたりイーグルの最低必須培地（メチオニンを欠く）
、１ノξ−セントウシ給仕血清ならびに５０キユーリー
の〔■ｓ〕メチオニンにュー イングランド ヌクレア
ー、？ストｙ市、マサチュセッッ州）中で培養した。培
養した液の中のイムノグロブリンは、ウサギ抗ヒトイム
ノグロブリン抗体（アキュレート ケミカル アンド
サイエンティフィック コーポｖ−ショア）ｔｘラヒに
スタフィロコッカス アウレウス（ベテスタ リサーチ
ラ２ラドリーズ、ペテスダ市、メリーランド州）で沈
降させ、そして免疫沈降はレムリ〔レムリ、Ｕ、に、。
にわたりイーグルの最低必須培地（メチオニンを欠く）
、１ノξ−セントウシ給仕血清ならびに５０キユーリー
の〔■ｓ〕メチオニンにュー イングランド ヌクレア
ー、？ストｙ市、マサチュセッッ州）中で培養した。培
養した液の中のイムノグロブリンは、ウサギ抗ヒトイム
ノグロブリン抗体（アキュレート ケミカル アンド
サイエンティフィック コーポｖ−ショア）ｔｘラヒに
スタフィロコッカス アウレウス（ベテスタ リサーチ
ラ２ラドリーズ、ペテスダ市、メリーランド州）で沈
降させ、そして免疫沈降はレムリ〔レムリ、Ｕ、に、。
１９７０ 、 Ｎａｔｕｒｅ （ロンドン）２２７：６
８０ ）の方法に従ってＮａＤｏｄＳＯ４／ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（ドデシル硫酸ナトリウム−アク
リルアミドゲル電気泳動、５ＤＳ−ＰＡＧＥ ）により
分析した。
８０ ）の方法に従ってＮａＤｏｄＳＯ４／ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（ドデシル硫酸ナトリウム−アク
リルアミドゲル電気泳動、５ＤＳ−ＰＡＧＥ ）により
分析した。
Ｍａ４抗原の定義。ＭｓＬ４細胞系の培養からの上清は
、５Ｋ−ＲＣ−９（ヒト胃がんから誘導した確立した細
胞系）と反応性が高いことが判明した（第２図）。反応
性は、イムノグロブリンＭ抗体に関する免疫粘着測定法
により検出されたが、イムノブロイリンＡあるいはイム
ノグロブリンＧ抗体を検出する測定では検出されなかっ
た。
、５Ｋ−ＲＣ−９（ヒト胃がんから誘導した確立した細
胞系）と反応性が高いことが判明した（第２図）。反応
性は、イムノグロブリンＭ抗体に関する免疫粘着測定法
により検出されたが、イムノブロイリンＡあるいはイム
ノグロブリンＧ抗体を検出する測定では検出されなかっ
た。
（Ｍａ４細胞系の構築に用いたリンパ球を提供した患者
からの血清は、免疫粘着測定により８に−ＲＣ−９標的
細胞と反応しなかった（力価ｌ：２）。〕第３図は、４
種類の他の確立したヒト細胞系におけるＭａ４上清との
免疫粘着試験を示している。
からの血清は、免疫粘着測定により８に−ＲＣ−９標的
細胞と反応しなかった（力価ｌ：２）。〕第３図は、４
種類の他の確立したヒト細胞系におけるＭａ４上清との
免疫粘着試験を示している。
肺がんから誘導した細胞系である５Ｋ−ＬＣ−１３なら
びに乳がんから誘導した細胞系であるＡＩＡｂとは反応
がみられたが、２８１類の黒色腫細胞系とはみられなか
った。第４図は、８１種の異なりた細胞型のノでネルを
用いた吸着分析によるＭａ４抗体の反応性の分析を示し
ている。
びに乳がんから誘導した細胞系であるＡＩＡｂとは反応
がみられたが、２８１類の黒色腫細胞系とはみられなか
った。第４図は、８１種の異なりた細胞型のノでネルを
用いた吸着分析によるＭａ４抗体の反応性の分析を示し
ている。
Ｍａ４抗体により検出された抗原は、熱に安定（１００
℃で１０分間）であり、そしてトリノシンならびにプロ
テイナーゼＫによる処置に抵抗性があることがわかった
。Ｍａ４陽性細胞系５Ｋ−ＲＣ−９のクロロホルム：メ
タノール抽出物は、Ｍａ４抗体反応性を完全に抑制した
。Ｍａ４陰性細胞糸（２５３ＪならびにＢＴ−２０）か
らの抽出物は、抑制活性を有していない。
℃で１０分間）であり、そしてトリノシンならびにプロ
テイナーゼＫによる処置に抵抗性があることがわかった
。Ｍａ４陽性細胞系５Ｋ−ＲＣ−９のクロロホルム：メ
タノール抽出物は、Ｍａ４抗体反応性を完全に抑制した
。Ｍａ４陰性細胞糸（２５３ＪならびにＢＴ−２０）か
らの抽出物は、抑制活性を有していない。
細胞表面抗原に対する反応性を試験した７７１のイムノ
グロブリンのウェルからの上清は、間接免疫螢光測定に
よって細胞内抗原に対する反応性も試験した。２４個の
ウェル（４）ξ−セント）は、核、核小体、細胞骨格成
分あるいは他の細胞質構成成分と反応′１−る抗体を含
んでいた（第２表）。これらのウェルの４個からイムノ
グロブリンＭ抗体を分泌する細胞系を誘導した。
グロブリンのウェルからの上清は、間接免疫螢光測定に
よって細胞内抗原に対する反応性も試験した。２４個の
ウェル（４）ξ−セント）は、核、核小体、細胞骨格成
分あるいは他の細胞質構成成分と反応′１−る抗体を含
んでいた（第２表）。これらのウェルの４個からイムノ
グロブリンＭ抗体を分泌する細胞系を誘導した。
そしてそれらの細胞系による抗体産生は、４から７力月
の観察期間にわたって安定していた。
の観察期間にわたって安定していた。
抗体Ｍ３０７ならびにＭ３１１は５ＫＯ−００７とり７
２節９７２球の融合から由来し、そしてＭ２Ｏ３とＭ２
Ｏ３はＬＩＣＲとリンパ節リンパ球の融合から由来して
いた。抗体Ｍ３１１は核の顆粒染色を示した。抗体Ｍ３
０５ならびにＭ２Ｏ３は、広い範囲の培養細胞型におい
て細胞質構成成分と反応した。Ｍ２Ｏ３は細胞骨格ネッ
トワークを染色し、セしてＭ２Ｏ３による染色は濃い網
状パターｙを示した。抗体Ｍ３０４も細胞質構成成分と
反応したが、この抗体の場合には反応は神経外胚葉山来
の細胞系に限定された（第６図）。星状細胞腫（試験し
た９株中９株）、黒色＠（試駆した１６６株中９）、神
経芽細胞腫（試験した３株中１株）そして正常な黒色細
胞が抗体Ｍ３０４と反応した。１８ｍの上皮性がんある
いは正常腎臓または繊維芽細胞の培養とは反応が観察さ
れなかった。
２節９７２球の融合から由来し、そしてＭ２Ｏ３とＭ２
Ｏ３はＬＩＣＲとリンパ節リンパ球の融合から由来して
いた。抗体Ｍ３１１は核の顆粒染色を示した。抗体Ｍ３
０５ならびにＭ２Ｏ３は、広い範囲の培養細胞型におい
て細胞質構成成分と反応した。Ｍ２Ｏ３は細胞骨格ネッ
トワークを染色し、セしてＭ２Ｏ３による染色は濃い網
状パターｙを示した。抗体Ｍ３０４も細胞質構成成分と
反応したが、この抗体の場合には反応は神経外胚葉山来
の細胞系に限定された（第６図）。星状細胞腫（試験し
た９株中９株）、黒色＠（試駆した１６６株中９）、神
経芽細胞腫（試験した３株中１株）そして正常な黒色細
胞が抗体Ｍ３０４と反応した。１８ｍの上皮性がんある
いは正常腎臓または繊維芽細胞の培養とは反応が観察さ
れなかった。
ハイシリドーマの方法論により悪性黒色腫のある患者の
体液性免疫反応を分析する試みにおいて、領域リンパ節
、末梢血液ならびに願瘍浸潤物からのリンパ球１５７を
ＳＫＯ−００７（ヒト黒色腫細胞糸）、ＬＩＣＲＬＯＮ
／ＨＭ７２（ＬＩＣＲ−２）ならびに０Ｍ４６７２（ヒ
トリンノぞ芽球様細胞系）、あるいはＮ８−１ （マウ
ス黒色膀細胞系）と融合した。ＭＳ−１とのリンパ節す
ンノぞ球の融合は、５ＫＯ−００７あるいは０Ｍ４６７
２との融合よりも３から４倍高い頻度の結果を得た。
体液性免疫反応を分析する試みにおいて、領域リンパ節
、末梢血液ならびに願瘍浸潤物からのリンパ球１５７を
ＳＫＯ−００７（ヒト黒色腫細胞糸）、ＬＩＣＲＬＯＮ
／ＨＭ７２（ＬＩＣＲ−２）ならびに０Ｍ４６７２（ヒ
トリンノぞ芽球様細胞系）、あるいはＮ８−１ （マウ
ス黒色膀細胞系）と融合した。ＭＳ−１とのリンパ節す
ンノぞ球の融合は、５ＫＯ−００７あるいは０Ｍ４６７
２との融合よりも３から４倍高い頻度の結果を得た。
末梢血リン、４球の場合には、Ｎ５−１は、 ＬＩＣＲ
−２あるいは５ＫＯ−００７との融合よりも２５倍高い
頻度のクローンを与えた。ヒトイムノグロブリンまたは
Ｈ鎖の生産は、生育している細胞を含む穴の５０−８０
パーセントにおいて検出し、そしてイムノグロブリンの
濃度は０．３マイクログラム−４０マイクログラム／ミ
リリツトルの範囲であった。サブカルチャーにおいて、
Ｎｓ−ｔｇ尋クローンは容易に培養できたが、一方ＬＩ
ＣＲ−２ならびに５ＫＯ−００７クローンはより生育が
遅かった。本研究において、イムノグロブリン分泌は、
ＭＳ−１誘導クロー／よりもＩ、ＩＣＲ−２誘導クロー
ンにおいてより安定な性格であることが判明した。７７
１のイムノグロブリン分泌培養を細胞表面あるいは細胞
内抗原に対１−る抗体に関してスクリーニングするため
に、２０種のヒト培養細胞系のパネルを用いた。
−２あるいは５ＫＯ−００７との融合よりも２５倍高い
頻度のクローンを与えた。ヒトイムノグロブリンまたは
Ｈ鎖の生産は、生育している細胞を含む穴の５０−８０
パーセントにおいて検出し、そしてイムノグロブリンの
濃度は０．３マイクログラム−４０マイクログラム／ミ
リリツトルの範囲であった。サブカルチャーにおいて、
Ｎｓ−ｔｇ尋クローンは容易に培養できたが、一方ＬＩ
ＣＲ−２ならびに５ＫＯ−００７クローンはより生育が
遅かった。本研究において、イムノグロブリン分泌は、
ＭＳ−１誘導クロー／よりもＩ、ＩＣＲ−２誘導クロー
ンにおいてより安定な性格であることが判明した。７７
１のイムノグロブリン分泌培養を細胞表面あるいは細胞
内抗原に対１−る抗体に関してスクリーニングするため
に、２０種のヒト培養細胞系のパネルを用いた。
細胞表面抗原に対する反応性は頻度が低かった（６培養
）が、細胞内抗原に対する反応性はより晋遍的であった
（２７培養）。黒色腫のある患者の腋下りｙ／ｅ節から
のリンパ球とＬＩＣＲ−２の融合から誘導した４倍体細
胞により分泌されたイムノフロゾリンＭ単一りローフ抗
体で、糖脂質の性質のある新しい細胞表面抗原を同定し
た。その雑種細胞糸は４回すゾクｐ−ン化し、そして５
マイクログラムのイムノグロブリン間／ミリリットルを
分路している。このイムノグロブリンＭ抗体により検出
される抗原は、黒色腫細胞系２３株中５株ならびに上皮
性がん細胞系３０株中１２株において認めた。正常細胞
から誘導した１１株の培養では反応を認めなかつた。核
、核小体、細胞骨格構成成分あるいはその他の細胞質成
分を検出するヒト抗体を分泌する安定した細胞糸も本研
究において分離した。
）が、細胞内抗原に対する反応性はより晋遍的であった
（２７培養）。黒色腫のある患者の腋下りｙ／ｅ節から
のリンパ球とＬＩＣＲ−２の融合から誘導した４倍体細
胞により分泌されたイムノフロゾリンＭ単一りローフ抗
体で、糖脂質の性質のある新しい細胞表面抗原を同定し
た。その雑種細胞糸は４回すゾクｐ−ン化し、そして５
マイクログラムのイムノグロブリン間／ミリリットルを
分路している。このイムノグロブリンＭ抗体により検出
される抗原は、黒色腫細胞系２３株中５株ならびに上皮
性がん細胞系３０株中１２株において認めた。正常細胞
から誘導した１１株の培養では反応を認めなかつた。核
、核小体、細胞骨格構成成分あるいはその他の細胞質成
分を検出するヒト抗体を分泌する安定した細胞糸も本研
究において分離した。
抗体の一つは、神経外胚葉誘導のａｍに限定された細胞
内抗原を検出した。ヒト単一クローン抗体を分離ならび
に分析にそれらを方法を用（・ることによって、今や黒
色腫に対する体液性免疫反応の目録を定義することが可
能となったといえよう。
内抗原を検出した。ヒト単一クローン抗体を分離ならび
に分析にそれらを方法を用（・ることによって、今や黒
色腫に対する体液性免疫反応の目録を定義することが可
能となったといえよう。
（以下余白）
すＭ
第１図。Ｍａ４細胞系ＣＭ１列）、Ｉ、ＩＣＲ−２ヒト
リンパ芽様細胞系（第２列）、Ｂｅ３細胞系（第３列）
、ならびに５ＫＯ−００７ヒト黒色腫細胞系（第４列）
の培養上清から沈降したｒ、８６ｓ ）メチオニン標識
イムノグロブリンのオートラジオグラフ。Ｍｇ２はリン
パ節リンパ球のＬＩＣＲ−２との融合から誘導し、そし
てＢｅ３はりンパ節リンパ球の５ＫＯ−００７との融合
から誘導した。 どちらの細胞系も１クエルあたりｌ細胞で２回すックロ
ーｙ化した。Ｍｇ２はミューとガンマ両方のＨ鎖ならび
に２ｓ［の明確なＬ鎖（Ｌ）を産生ずる。Ｍｇ２により
分泌される２種のＬ鎖の一つはＬＩＣＲ−２親細胞系に
より分泌されるＬ鎖に対応する。（分泌濃度が低いため
に、ＬＩＣＲ−２上清中にはカンマＨ鎖は観察されなか
った。）１１ｓ３はガンマとイノシロ／両方のＨ＠なら
びに２種のＬ鎮を産生する。１組のＨ鎖とＬ鎮は５ＫＯ
−００７ｉ細胞系のイプシロンおよびラムダ生産物に対
応する。 第２図。３通りの血清学的測定、免授粘崩反応、受冴沈
降反応および抗イムノグロブリンＡ、により測定したＭ
ａ４培養上清の５Ｋ−ＲＣ−９腎力（ん細胞との反応性
。 第３図。Ｍａ４培養培養土基種のヒトかん細胞系との反
応性。５Ｋ−ＬＣ−１３（肺カーん） 、 ＡＩＡｂ（
乳がん）、８に−ＭＥＬ−２１ならびにＳＫ−ＭＬ−３
７（黒色腫）。血清学的測定法二免役粘着反応。 第４図。５Ｋ−ＲＣ−９％がんＩ？４１１胞に刻するＭ
ａ４培養上清（１：１ＢＯＫ希釈した）の免疫粘着反応
性の吸収分析。Ｍａ４反応性は、ＡＩＡｂ （乳カーん
）、８に−ＬＣ−１３（肺がん）ならびに５Ｋ−ＲＣ−
９（胃がん細胞）により吸収された。ＳＫ−ＭＥＬ−２
１（黒色腫）、 ８に−Ｌｙ−１６（す／）を）撞）な
らびにヒツジ赤血球は、Ｍａ４反応性を吸収しなかった
。−１ＡＩＡｂ；ロコ、 ５Ｋ−ＬＣ−１３；。 ８に−ＲＣ−９； Ｏ、５Ｋ−Ｌｙ−１６；・、ＳＫ−
ＭＥＬ−２１；ム、ヒツジ赤血球；Δ、未吸収Ｍ ａ
４培養上清。 第５図。黒色腫患者のリンノ臂節からのリンパ球のＬＩ
ＣＲ−２（Ｍ２Ｏ３ならびにＭ３０５抗体）ならびにＳ
ＫＯ−００７（Ｍ３０’ｌならびにＭ３１１抗体）との
融合から誘導した培養の上清中のイムノグロブリンＭに
より検出した細胞内抗原。Ａ）Ｍ３１１は核抗原を検出
する。（標的はＳ Ｋ −ＭＥｌ。 −６３点色腫細胞系）、倍率１０００倍； Ｂ） Ｍ２
Ｏ３は細胞骨格構造を検出する（標的細胞ＷＩ−３８胎
児繊維芽細胞）、倍率４００倍；Ｃ）Ｍ２Ｏ３は濃い細
胞質ネットワークを検出する（標的細胞ＷＩ−３８）、
倍率２００倍；Ｄ）Ｍ２Ｏ３は神経外胚葉山来の細胞に
より表現される細胞質抗原を検出する（標的細胞８に−
ＭＥＬ−９３黒色腫細胞系）１倍率４００倍。 第６図。Ｍ３０４抗体の間接免疫螢光測定を用〜・た培
養細胞のパネルとの反応性。水平の棒は免疫螢光反応の
強さく０かＩ’ｐ３＋）を示す。 特許出願人 スローンーケツタリングインステイテユー
トフオー キャンサー リサーチ 乃１閉 μｍ ε４１１■−−６６ｋｄ ど−と− ４４ｋｄ １ ２ ３ ４ ＬＩＣＲＨＭｙ２ ５ＫＯ−００７ 弔４巴 Ｍａ４土清の肴４尺雫 吊６０ 第１頁の続き ０発 明 者 ハンチ・ブルツクス アメリカ合衆国１００２１ニュー・ ヨーク・ニュー・ヨーク壽イー スト７３ストリート５１１番地 ０発 明 者 リチャード・ジエイ・コートアメリカ合
衆国１００２１ニユー・ ヨーク・ニュー拳ヨークーイー スト７３ストリート５０２番地 ＠ｌ！ 間者 バーバート・エフ・エチゲンアメリカ合
衆国０６８４０コネチカ ット・ニュー・キャナン・オー バールツク・ドライブ４８番地 ０発 明 者 ロイド・ジエイ・オールドアメリカ合衆
国１００２４ニユー・ ヨーク−ニュー・ヨーク−ウニ スト・エンド・アヴエニュ６００ 番地 手続補正書働幻 昭和５９年７月２０日 ■ からのヒトの単一クローン抗体 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 アメリカ合衆国、 １００２１ ニュー ヨー
ク。 ニュー ヨーク、ヨーク アヴエニュ １２７５番地 ５、補正指令の日付 昭和５９年６月２６日 ６、 補正の対象 （１） 明細書の「発明の詳細な説明」及び「図面の簡
単な説明」の各欄 （２） 図 面 ７、補正の内容 ■）明細書第３８頁下から第８行「第６図」を「第５図
」に訂正する。 ２）同第４６頁第１〜１４行の第５図に関する全記載を
削除する。 ３） 同第４６頁第１５行「第６図」を「第５図」に訂
正する。 ４）図面「第６図」を図面コピーに未配した通り「第５
図」と訂正する。 ８、 添付書類の目録 図面コピー（第５図） １通 −石事 黒色腹 ０１２３ ＡＮ−１ ｙＬグ」Ｌ ０１２３ 乳 η゛ん 卯！＃カーん 牌ｖ？′ん 、鰭ｇｙん
リンパ芽様細胞系（第２列）、Ｂｅ３細胞系（第３列）
、ならびに５ＫＯ−００７ヒト黒色腫細胞系（第４列）
の培養上清から沈降したｒ、８６ｓ ）メチオニン標識
イムノグロブリンのオートラジオグラフ。Ｍｇ２はリン
パ節リンパ球のＬＩＣＲ−２との融合から誘導し、そし
てＢｅ３はりンパ節リンパ球の５ＫＯ−００７との融合
から誘導した。 どちらの細胞系も１クエルあたりｌ細胞で２回すックロ
ーｙ化した。Ｍｇ２はミューとガンマ両方のＨ鎖ならび
に２ｓ［の明確なＬ鎖（Ｌ）を産生ずる。Ｍｇ２により
分泌される２種のＬ鎖の一つはＬＩＣＲ−２親細胞系に
より分泌されるＬ鎖に対応する。（分泌濃度が低いため
に、ＬＩＣＲ−２上清中にはカンマＨ鎖は観察されなか
った。）１１ｓ３はガンマとイノシロ／両方のＨ＠なら
びに２種のＬ鎮を産生する。１組のＨ鎖とＬ鎮は５ＫＯ
−００７ｉ細胞系のイプシロンおよびラムダ生産物に対
応する。 第２図。３通りの血清学的測定、免授粘崩反応、受冴沈
降反応および抗イムノグロブリンＡ、により測定したＭ
ａ４培養上清の５Ｋ−ＲＣ−９腎力（ん細胞との反応性
。 第３図。Ｍａ４培養培養土基種のヒトかん細胞系との反
応性。５Ｋ−ＬＣ−１３（肺カーん） 、 ＡＩＡｂ（
乳がん）、８に−ＭＥＬ−２１ならびにＳＫ−ＭＬ−３
７（黒色腫）。血清学的測定法二免役粘着反応。 第４図。５Ｋ−ＲＣ−９％がんＩ？４１１胞に刻するＭ
ａ４培養上清（１：１ＢＯＫ希釈した）の免疫粘着反応
性の吸収分析。Ｍａ４反応性は、ＡＩＡｂ （乳カーん
）、８に−ＬＣ−１３（肺がん）ならびに５Ｋ−ＲＣ−
９（胃がん細胞）により吸収された。ＳＫ−ＭＥＬ−２
１（黒色腫）、 ８に−Ｌｙ−１６（す／）を）撞）な
らびにヒツジ赤血球は、Ｍａ４反応性を吸収しなかった
。−１ＡＩＡｂ；ロコ、 ５Ｋ−ＬＣ−１３；。 ８に−ＲＣ−９； Ｏ、５Ｋ−Ｌｙ−１６；・、ＳＫ−
ＭＥＬ−２１；ム、ヒツジ赤血球；Δ、未吸収Ｍ ａ
４培養上清。 第５図。黒色腫患者のリンノ臂節からのリンパ球のＬＩ
ＣＲ−２（Ｍ２Ｏ３ならびにＭ３０５抗体）ならびにＳ
ＫＯ−００７（Ｍ３０’ｌならびにＭ３１１抗体）との
融合から誘導した培養の上清中のイムノグロブリンＭに
より検出した細胞内抗原。Ａ）Ｍ３１１は核抗原を検出
する。（標的はＳ Ｋ −ＭＥｌ。 −６３点色腫細胞系）、倍率１０００倍； Ｂ） Ｍ２
Ｏ３は細胞骨格構造を検出する（標的細胞ＷＩ−３８胎
児繊維芽細胞）、倍率４００倍；Ｃ）Ｍ２Ｏ３は濃い細
胞質ネットワークを検出する（標的細胞ＷＩ−３８）、
倍率２００倍；Ｄ）Ｍ２Ｏ３は神経外胚葉山来の細胞に
より表現される細胞質抗原を検出する（標的細胞８に−
ＭＥＬ−９３黒色腫細胞系）１倍率４００倍。 第６図。Ｍ３０４抗体の間接免疫螢光測定を用〜・た培
養細胞のパネルとの反応性。水平の棒は免疫螢光反応の
強さく０かＩ’ｐ３＋）を示す。 特許出願人 スローンーケツタリングインステイテユー
トフオー キャンサー リサーチ 乃１閉 μｍ ε４１１■−−６６ｋｄ ど−と− ４４ｋｄ １ ２ ３ ４ ＬＩＣＲＨＭｙ２ ５ＫＯ−００７ 弔４巴 Ｍａ４土清の肴４尺雫 吊６０ 第１頁の続き ０発 明 者 ハンチ・ブルツクス アメリカ合衆国１００２１ニュー・ ヨーク・ニュー・ヨーク壽イー スト７３ストリート５１１番地 ０発 明 者 リチャード・ジエイ・コートアメリカ合
衆国１００２１ニユー・ ヨーク・ニュー拳ヨークーイー スト７３ストリート５０２番地 ＠ｌ！ 間者 バーバート・エフ・エチゲンアメリカ合
衆国０６８４０コネチカ ット・ニュー・キャナン・オー バールツク・ドライブ４８番地 ０発 明 者 ロイド・ジエイ・オールドアメリカ合衆
国１００２４ニユー・ ヨーク−ニュー・ヨーク−ウニ スト・エンド・アヴエニュ６００ 番地 手続補正書働幻 昭和５９年７月２０日 ■ からのヒトの単一クローン抗体 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 アメリカ合衆国、 １００２１ ニュー ヨー
ク。 ニュー ヨーク、ヨーク アヴエニュ １２７５番地 ５、補正指令の日付 昭和５９年６月２６日 ６、 補正の対象 （１） 明細書の「発明の詳細な説明」及び「図面の簡
単な説明」の各欄 （２） 図 面 ７、補正の内容 ■）明細書第３８頁下から第８行「第６図」を「第５図
」に訂正する。 ２）同第４６頁第１〜１４行の第５図に関する全記載を
削除する。 ３） 同第４６頁第１５行「第６図」を「第５図」に訂
正する。 ４）図面「第６図」を図面コピーに未配した通り「第５
図」と訂正する。 ８、 添付書類の目録 図面コピー（第５図） １通 −石事 黒色腹 ０１２３ ＡＮ−１ ｙＬグ」Ｌ ０１２３ 乳 η゛ん 卯！＃カーん 牌ｖ？′ん 、鰭ｇｙん
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 ヒト骨髄腫細胞系、マウス骨髄腫細胞系、あるい
はヒトリンパ芽球様細胞系と悪性黒色腫を持つ個体から
のヒトリンパ球との融合により形成される、ヒト単一ク
ローン抗体を産生するハイブリドーマ細胞系。 ２ 言及されているヒトリンパ球が悪性黒色腫を持つ個
体からのリンパ節あるいはに瘍標本からのものである特
許請求の範囲第１項に記載のハイブリドーマ細胞系。 ３、 言及されているヒト９フ１４球が悪性黒色腫を持
つ個体からの末梢血リン・青味である特許請求の範囲第
１項に記載のハイブリドーマ細胞系。 ４、特許請求の範囲第１項に記載のハイブリドーマ細胞
系により産生されるヒト単一クローン抗体。 ５、 ヒトあるいはマウスの骨髄腫細胞系、あるいはヒ
トリンパ芽球様細胞系の、悪性黒色腫を持つ個体からの
ヒトリンパ球との融合によって単一クローン抗体産生細
胞系を形成する方法。 ＆ 融合の間にウシ給仕血清が存在し、該血清が約１０
から２０パーセントの間の濃度（容積／容積）で存在す
る特許請求の範囲第５項に記載の方法。 ７、特許請求の範囲第５項の方法により形成するハイブ
リドーマ細胞系。 ８、 特許請求の範囲第６項のハイブリドーマ細胞系に
より産生ずる単一クローン抗体。 ９、 ヒト細胞の細胞表面抗原、あるいは細胞内抗原を
認識する単一クローン抗体の産生により特徴づけられる
ヒト抗体産生ハイシリドーマ細胞系。 １０、言及した単一クローン抗体がＭｇ２ 、 Ｍ５４
。 Ｍ２Ｏ３，Ｍ２Ｏ３ならびにＭ３１１の群から選択され
るものである特許請求の範囲第９項に記載のハイツリド
ーマ細胞系。 １１、言及した抗体を持つヒト腫瘍細胞が黒色腫細胞で
ある特許請求の範囲第９項に記載のヒト単一クローン抗
体産生ハイツリドーマ細胞系。 １２ 言及した細胞表面抗原がＭａ４抗原系である特許
請求の範囲第９項に記載のヒト単一クローン抗体産生ハ
イブリドーマ細胞系。 １３、言及した抗原が核、核小体あるいは細胞質に伴な
う細胞内抗原である特許請求の範囲第９項に記載のヒト
単一クローン抗体産生バイブリド−ｉ細胞系。 １４、ヒト細胞表面抗原あるいはヒト細胞内抗原を認識
するヒト単一クローン抗体。 １５、言及した細胞内抗原か核、核小体あるいは細胞質
に伴なっているものである特許請求の範囲第１４項に記
載のヒト単一クローン抗体。 １６、言及した細胞抗原かがん細胞あるいは正常細胞内
にあるいは上にある特許請求の範囲第１４項に記載のヒ
ト単一クローン抗体。 １７、Ｍｎ２．ＭＢ２．Ｍ２Ｏ３，Ｍ２Ｏ３，Ｍ２Ｏ３
ならびにＭＢ１１の群から選択した特許請求の範囲第１
４項に記載のヒト単一クローン抗体。 １Ｂ、ヒト細胞表面Ｍａ４を認識する特許請求の範囲第
１４項に記載のヒト単一クローン抗体。 １９、ヒト細胞質抗原Ｍ３０５を認識する特許請求の範
囲第１４項に記載のヒト単一クローン抗体。 ２０６ ヒト細胞質抗原Ｍ３０４を認識する特許請求の
範囲第１４項に記載のヒト単一クローン抗体。 ２１、ヒト細胞質抗原Ｍ３０７を認識する特許請求の範
囲第１４項に記載のヒト単一クローン抗体０ ２２ 核に伴なうヒト細胞内抗原Ｍ３１１を認識する特
許請求の範囲第１４項に記載のヒト単一クロー／抗体。 ２３、ヒト細胞質抗原Ｍ５４を認識する特許請求の範囲
第１４項に記載のヒト単一クローン抗体。 ２４、細胞表面抗原あるいは細胞質抗原を認識するヒト
単一クローン抗体を用いるヒト細胞の免疫測定法。 ２５、ヒト単一クロー／抗体Ｍａ４．Ｍ５４ 、Ｍ２Ｏ
３。 Ｍ２Ｏ３，Ｍ２Ｏ３あるいはＭＢ１１を用いる特許請求
の範囲第２４項に記載の免疫測定法。 ２６、ヒトの上皮性がん細胞を含む標本のヒト単一クロ
ーン抗体Ｍ５４による免疫測定法よりなるヒトの上皮性
がん細胞を検出する方法。 ２７、正常細胞と腫瘍細胞とを含む標本のヒト単一クロ
ーン抗体Ｍａ４による免疫測定法よりなるｌ正常細胞と
腫瘍細胞とを識別する方法。 ２８、ヒト抗体Ｍ３１１による免疫測定法よりなるヒト
細胞の細胞質中の細胞内物質を検出する方法。 ２９、ヒト細胞抗原を認識するヒト単一クローン抗体よ
りなる表現型判定のパネル。 ３０、言及したヒト単一クロー／抗体がヒト細胞抗原Ｍ
ａｃ、Ｍ５４ 、Ｍ３０４ 、Ｍ３０５ 、Ｍ２Ｏ７な
らびに１ｉ１３１１である特許請求の範囲第２９項に記
載のパネル。 ３１、言及した細胞の特許請求の範囲第２９項に記載の
パネルに対する反応の判定よりなるヒト細胞の表現型判
定の方法。 ３ｚヒト単一クロ一ン抗体Ｍａ４．Ｍ５４ 、Ｍ２Ｏ３
゜Ｍ２Ｏ３ならびにＭＢ１１よりなる特許請求の範囲第
２９項に記載のパネル。 ３３、血清学的測定法よりなる特許請求の範囲第２４項
に記載の免疫測定法。 ３４、摘出したヒト組織標本の特許請求の範囲第２３項
に記載の免疫測定法。 ３５、放射免疫測定法よりなる特許請求の範囲第２４項
に記載の免役測定法。 ３６、酵素結合免疫測定法よりなる特許請求の範囲第２
４項に記載の免疫測定法。 ３７、言及した単一り四−ン抗体がヒトに投与され、言
及した抗体が放射活性原素により標識され、そして抗体
の局在が言及したヒトの体外スキャンニングにより観察
される特許請求の範囲第２４項に記載の免疫測定法。 ３８、患者に黒色腫の細胞抗原を認識するヒト単一クロ
ーン抗体の抗黒色腫有効量を投与することよりなるヒト
の患者の黒色腫を治療する方法。 ３９、フレイム３７の方法であって、１“及したヒト単
一クローン抗体が組織破壊をもたらす薬剤で標識されて
いる特許請求の範囲第３７項に記載の免疫測定法。
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- 1984-03-12 JP JP59046964A patent/JPS6012973A/ja active Pending
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Also Published As
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