JPS60114199A - 新規モナコリン類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規モチコリン類さらに詳しくは一般式（Ｉ） る基（ここでＭは水素原子、１価金属アンモニウム、４
級アミン又はＣ１〜Ｃ４のアルキル基を示す）を示す〕 で表わされる新規モチコリン類（以下総称して「ＮＫ−
８２６３Ｊという）に関する。

高１度の血中コレステロールとアテローム性動脈硬化症
との間に密接な関連のあることが知られており、本発明
者の１人である遠藤は微生物生産物中に哺乳動物のコレ
ステロールを減少させる物質の検索を行いその結果特開
昭５５−１３９３９６及び特開昭５６−５７７９８に開
示さ」ｔだ如く血中コレステロール低下作用を有するモ
ナコリンーＪ及びモナコリンーＬが発見された。

本発明者らはモナコリンーＪ及びモナコリンーＬの生産
菌であるモナスカス・ルーベル（Ｍｏｎａｓｃｕｓ　ｒ
ｕｂｅｒ　）　ＦＥＲＭ−Ｐ　ｌ’ｌｈ　４８２２につ
き研究を進めた結果、該生産菌を変異処理して得られた
ー変異株が文献未載でありコレステロールである化合物
）を生産することを見い出した。

又、この化合物は更に昆虫幼虫の未成熟変態を引き起こ
すこと、また植物根部の伸長抑制効果を有することも見
い出した。

本発明は上記知見に基づいて完成されたものである。

上記一般式（Ｉ）においてＲ中のＭの１価金属としては
ナトリウム、カリウムなどがあげられ、４級アミンとし
てはモノエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、
トリエチルアンモニウムなどの低級アルキルアンモニウ
ムなどがアケら」する。

本発明の目的物質ＮＫ−８２６３はモナスカス・ルーベ
ル（Ｍｏｎａｓｃｕｓ　ｒａｂｅｒ　）に属する一変異
株により生産される。該変異株は、例えばモナスカスΦ
ルーベル（Ｍｏｎａｓｃｕｓ　ｒｕｂｅｒ　）の−菌株
（微工研菌寄第４８２２号）を親株とし、Ｘ線、紫外線
などの照射や亜硝酸ニトロソグアニジンなどの化学的処
理などの通常の変異処理により得ることができる。

このようにして得られるＮＫ−８２６３生産菌としては
例えばＮＫ−８２０８２Ｍ株カーあげられ、このものは
通産省工業技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第
７２０３号（Ｆ’ＥＲＭ−ＰＮ［１７２０３）として寄
託されてい。

この菌株はＮＫ−８２６３を生産する点に於て親株と異
なる。

本発明のＮＫ−８２６３を得るためＮＫ−８２６３生産
菌は同化可能な炭素源、窒素源、無機塩及び生育に必要
な栄養素を含む培地で好気的に培養される。

好適な炭素源としてはグルコース、マルトース、デキス
トリンデンプン、ラクトース、シュークロース、グリセ
リンなどが利用出来る。

−などが利用できる。

ＮＫ−８２６３は振盪培養、通気攪拌培養など好気的培
養により生産され培養温度は２０〜３０℃培地ｐＨは６
〜８が望ましい。

ＮＫ−８２６３の培養液からの単離はその性状である化
合物）として種々の方法を適当に組合せて行いつる。

すなわち例えばエーテル、酢酸エチル、クロロホルム、
ベンゼンなどによる抽出、塩による沈澱、セファデクス
などを用いるゲル濾過、活性炭、シリカゲルその他の吸
着樹脂などを用いる吸着クロマトグラフィーなとである
。これらの手段の組合せによりＮ−に−８２６３のラク
トン型が培養液から純品として単離される。

ＮＫ−８２６３のラクトン型を水酸化ナトリウムのよう
な塩基で加水分解すると酸型のナトリウム塩を得ること
ができる。他のカチオンの塩基を用いて加水分解すれば
対応する塩を得ることができる。これらの塩を注意深く
酸性にすればＮＫ−８２６３の酸型を得ることができる
。

酸型は酸性ｐＨでラクトン型に変換できる。ずたＮＫ−
８２６３は酸性又は塩基性触媒の存在下にメタノール、
エタノール、プロパツールなどの炭素数１ないし４個の
低級アルコールと反応させると対応するエステルを容易
に導くことができる。

次にＮＫ−８２６３のラクトン型の理化学的性状を示す
。

１）分子式　Ｃ２４１−Ｉ３４０６ ２）分　子　量　４１８（質量スペクトルによる）３）
融　点　１４５℃ ４）旋　光　度　〔α〕乙５＋２７３．８°（Ｃ＝０．
５．メタノール）５）紫外部吸収スペクトル（メタノー
ル中）第１図に示す。

６）光外部吸収スペクトル（ＫＢｒ） 第２図に示す。

７）　Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣＩａ中）第３図
に示す。

８）　１３ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ２中）第
４図に示す。

９）質量スペクトル（ｍ／Ｉ） ４１８、（Ｍ　）、　３０２　（Ｍ−’１１６　）。

２８４　（Ｍ−１３４）、２２４　（Ｍ−１９４）、１
９８（Ｍ−２２０）、１７２（Ｍ−２４６）、１５９（
Ｍ−２５９）。

１５７（Ｍ−２６１） １０）性状外観　中性、白色針状結晶 １１）　溶解性　メタノール、エタノール、グロバノー
ル、アセトン、酢酸エチル、クロロホ ルム、ベンゼンに可溶 ヘキサン、石油エーテルに不溶 次にＮＫ−８２６３のステロール生合成阻害作用、犬を
用いたステロール低下作用、急性毒性並びに昆虫及び植
物に対する効果を示す。

ｌ）ステロール生合成阻害作用 ラット肝無細胞系におけるＮＫ−８２６３の〔１４Ｃ〕
酢酸からのステロールへの生合成抑制能を測定した・ アデノシン３リン酸（ＡＴ　Ｐ　）　０．２　μｍｏｌ
ｅ、　ＭｇＣｌ２１２μｍｏ　ｌｅ　、還元型グルタチ
オン１．２μｍｏｌｅ、グルコース１リン酸１μｍｏｌ
ｅ、コエンサイムＡ（’Ｃｏ４　）　８　ｎｍｏｌｅ、
ニコチン酸アミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ　）
　０．０５　μｍｏｌｅ、　＝　：Ｉチン酸アミドアデ
ニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ　）　０．０５　
μｍｏｌｅ、　［１−１４Ｃ〕酢酸ナトリウム０．２　
ｎｍｏｌｅ　（Ｉ　Ｃｉ／ｍｏｌｅ　）を含有する０、
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）　１５０μｌにジメチ
ルスルホキシドに溶解したＮＫ−８２６３（ラクトン型
）溶液１０μｍを加えて軽く攪拌後、ラット肝のミクロ
ソーム画分０．１　ｍ９と上清画分１　ｍｇを含む０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）４０μｍを加えて反応
を開始した。

３７℃で２時間インキュベーション後１５％ＫＯＨ（エ
タノール）１ｍ７１！を加えて反応を停止し７５℃で１
時開けん化した。次めで水冷下水１　ｍｌと石油エーテ
ル２　ｍｌを加えミキサー上で２０秒間激しく攪拌した
。１５分間放置後、石油エーテル層１　ｍｌを採取して
バイアル瓶ニ移シトルエン系シンチレーション（ＡＣ８
ＩＩ）ｌｏｍ／！を加えて放射活性を測定した。

ＮＫ−８２６３溶液の代わりにジメチルスルホキシド１
０μｍを加えたものをコントロールとした。ブランクに
は酵素溶液の代わりに０．１、　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液４
０μｌを加えた。

種々の濃度におけるＮＫ−８２６３（ラクトン型）のス
テロール生合成阻害率を測定し５０％阻害濃度をめたと
ころ１９ｍ９／ｍ／！であった。

２）血中コレステロール低下作用 １４ケ月令の健常雄性ピーグル大に餌に混ぜたＮＫ−８
２６３（ラクトン型）を１００ｍｇ／ｋｙ　／　ｄａｙ
となるよう４日間投与した。薬物投与終了後採血して血
中ステロール値を測定したところ薬物投与前の血中ステ
ロール値に比較し２０％低下していた。

３）急性毒性 ＮＫ−８２６３（ラクトン型）のマウス経口投与による
急性毒性（ＬＤ５０　）は２Ｐ／ｋｇ、であった。

４）昆虫の幼虫に対する効果 人工飼育したヨトウガの幼虫にＮＫ−８２６３（ラクト
ン型）の水溶液を投与し効果を調べた。すなわち５令幼
虫の頭蓋すれ期の１８時間前及び１２時間前にＮＫ−８
２６３（ラクトン型）の水溶液（２ｒｎ９／ｍｌ）をそ
れぞれ２５ｍ１づつ計１００１１Ｌ９を第４腹脚部より
注入したところ未成熟変態を引き起こし早熟虫山となっ
て処理群３０匹のうち２４匹（８０％）が死亡した。

５）植物の根部伸長に対する効果 海砂を敷した内径９Ｃｒｎのプラスチックカップに大根
（時無）及び小麦（農林６号）の種子をカップ当り２０
粒づつ播種した。ＮＫ−８２６３（ラクトン型）の２０
％水利剤を０、Ｏ５ｐｐｍから１　ｐｐｍ　までの４濃
度に水で希釈し予め用意したカップの中に３０ｍ１づつ
加えた。処理後これらのカップは照度１０２００ルック
ス照射時間１日当り１０時間、２５℃の生育箱内に置き
９日後に地上部長及び最長根長を各濃度１５個体づつ測
定し平均をめた。

結果を表１に示す。

表１゜ この表から明らかなように小麦、大根共に０．５ｐｐｍ
及び１　ｐｐｍのＮＫ−８２６３（ラクトン型）で根部
伸長が著しべ抑制された。

以上の如＜ＮＫ−８２６３は種々の生理活性を示すが特
に血中コレステロール低下作用を利用して抗脂血症剤、
抗動脈硬化剤として使用することが非常に有効でありカ
プセル剤、錠剤、注射剤の形で投与することができる。

経口的使用が通常では有効であり投与量は年令、症状、
体重等により異なるが通常は成人に対し１日約１０〜ｉ
ｏｏｏｍｉｐを１〜３回に分けて投与される。しかし必
要に応じ使用量を増すことができる。

また殺虫剤および植物生育調節剤などとしての用途も期
待される。

次に本発明化合物の製法を実施例により説明する。

実施例】。

１）醗酵 下記の組成を有する種培養培地１−ｅを５１容の三角フ
ラスコに分注し、１２０　’Ｃ１３０分間殺菌をした。

これにモナスカス争ルーベル（Ｍｏｎａｓｃｕｓ　ｒｕ
ｂｅｒ）　ＮＫ　−８２０８２Ｍ　（Ｐ　Ｅ　ＲＭ−Ｐ
ｆｆｉ７２０３（を接種し、２７℃で回転振盪培養機で
３日間培養した。

種培養培地組成 グルコース　３　％（ｗ／ｖ　） 大豆粉　３　％ Ｎａ　Ｎ　Ｏ３０，２％ Ｍｇ　８０４７　Ｈｚｏ　０．１％ シリコンＫＭ７０（信越化学工業）　ｏ、ｏ３％水道水 ｐＨ６，５ 下記の組成を有する生産培地１２０’ｆｆｌを２００！
培養槽に仕込み１２０℃、３０分間の殺菌をした。前記
の種培養物３！を接種し温度２５℃、通気量８０詔、攪
拌数３００　ｒｐｍ、内圧０．５ｋｆＪ／ｄで１０日間
培養した。培養液はＥ過助剤を加えフィルタープレスで
濾過した。

生産培地組成 グリセリン　８　％（ｗ／ｖ） グルコース　１　％ 大豆粉　５　％ ペプトン　０８　％ ＮａＮＯ３０，１％ Ｚｎ　ＳＯ４−６Ｈ２Ｏ０，０５％ プｏナール５Ｔ−１（東邦化学工業）　０．０３％シリ
コンＩ（Ｍ２Ｏ（信越化学工業）００３％水道水 ｐＨ６，５ ２）精製 得られた培養ろ液１　］　２．．ｅをクロマト用活性炭
カラム５５詔に吸着させ水洗した後、２０％アセトンを
含有する０、ＩＮ水酸化す、トリウム水溶液６石、次い
で２０％アセトン水１２．ｅ３で洗い６０％アセトン水
で溶出するとＮＫ−８２６３を含む両分が得られた。

この両分を濃縮してアセトンを除去した後、ダイヤイオ
ンＨＰ−２０（三菱化成工業（株製）のカラム（１，５
Ａ）に吸着させ、水洗後２５％アセトン水で溶出すると
ＮＫ−８２６３含有画分８００チル−ｎ　−ヘキサン（
３：１）２００ｒｎｌｊで抽出し、抽出液にアセトン７
０ｍ１及び濃アンモニア水１０ｍ１を加え約１ｏｏｒｎ
ｌまで濃縮するとＮ　Ｋ−８２６３のアンモニウム塩が
析出した。結晶をＦ取後水に溶解し、ダイヤイオンＨＰ
−２１１−ｅのカラムに吸着させ２５％アセトン水で溶
出し、活性画分５５０　ｍ（Ｅを得た。該活性画分を１
００ｍ６に濃縮し希塩酸でｐＨ５，０とし、酢酸エチル
−ｎ−一＼キサン（３：１）１００ｍ６で抽出した。抽
出液を無水硫酸す〒リウムで脱水して濃縮乾固すると２
３１の白色粉末が得られた。アセトン−水（４５：５５
）より再結晶し、Ｎ　Ｋ　−８２６３のラクトン型の白
色針状結晶１．６Ｐが得られた。

実施例２．ＮＫ−８２６３のナトリウム塩実施例１の結
晶３００　ｍ９をエタノール１０ｍ１ＶＣ溶解し、０．
ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液４．８　ｍｌを加えた。室
温で２時間放置後、濃縮・乾固してＮＫ−８２６３のナ
トリウム塩３２０ｍ夕を得た。

融　点　１３３℃　白色無定形粉末 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ） ３４５０．２９６０，１７３０，１７１５，１５６０゜
Ｊ２１０硼 実施例３．ＮＫ−８２６３のジエチルアミン塩実施例２
で得たす）　ＩＪウム塩２１０ｍ９を水２０ｍ１に溶解
し希塩酸でｐＨ５とし、酢酸エチル２０ｍ１！で２回抽
出した。抽出液を水洗し無水硫酸ナトリウムで脱水した
後アセトン１０ｍ１ジエチルアミン６０ｍ２を加えると
ジエチルアミン塩が析出した。

結晶をＥ過しアセトンで洗浄後乾燥してＮＫ−８２６３
のジエチルアミン塩１９ＯｒＩＱを得た。

融　点　１０２°Ｃ５白色針状結晶 赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ） ３４５０．２９６０，２５００，２４．２０，１７４−
０゜１７２０．１５５５，１４５０，１２２０ｃｂ実施
例４．ＮＫ−８２６３の酸型 実施例３と同様の操作により得たＮＫ−８２６３のジエ
チルアミン塩３００ｍｇを３０ｍ１の水に溶解し、希塩
酸でｐＨ３，０とし３０　ｍｌ！の酢酸エチル−ｎ−ヘ
キサン（３：１）で抽出した。抽出液を冷水で水洗し無
水硫酸ナトリウムで脱水し減圧下に濃縮・乾固すると２
４５　ｍ９の無色油状物を得た。

酸型の油状物は放置するとゆっくりラクトン型に変わる
。ＣＤＣＩａ中における１３Ｃ・核磁気共鳴スペクトル
は下記の通りである。残りの分子のスペクトルは閉環に
よりわずかに変化する。

Ｃ３６９，７３ ｃｒ、　７１．６２ １ｄ［ｇ例５．　ＮＫ−８２６３のエチルエステル実施
例１で得た結晶５００ｍｇを２０ｍ１のエタノールに溶
解し、金属ナトリウムを２ｍｇ加えさらに１５分後２ｍ
ｇを加えた。１時間後反応液を酢酸工ｆ）Ｌ’−ｎ−＋
＼キサ７（１：１）１００ｍ／！で希釈し、水洗し、飽
和食塩水で洗浄後無水硫酸す）　ＩＪウムで脱水した。

脱水剤を除去後、Ｆ液を濃縮・乾固しシリカゲルクロマ
トグラフィーにかげエタノール−ジクロルメタン（１：
１００）で溶出し、エステルを含む画分を得た。

この画分を濃縮・乾固してＮＫ−８２６３のエチルエス
テルの無色樹脂状物２３０　ｒｌＬ９を得た。

赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ） ３４５０．２９６０．１７４０，１７２０．］２１０ｔ
ｙｎ−’

【図面の簡単な説明】

第１図はＮＫ−’８２６３のラクトン型の紫外部吸収ス
ペクトル図であり、第２図はＮＫ−８２６３のラクトン
型の赤外部吸収スペクトル図であり第３図はＮＫ−８２
６３のラクトン型のＩ−Ｉ’核磁気共鳴スペクトル図で
ある。第４図はＮＫ−８２６３のラクトン型の０１３核
磁気共鳴スペクトル図である。 特許出願人　日本化薬株式会社 日本新薬株式会社 遠　藤　章 手続補正書 昭和５８年１２月２８日 東京都千代田区富士見−丁目１１番２号（４０８１日本
化薬株式会社 代表者　取締役社長　坂野　常和 京都府京都市南区吉祥院西）庄門口町１４番地（４１５
）日本新薬株式会社 代表者　取締役社長　森下　弘 東京都杉並区宮前３−２−１９ 東京都千代田区富士見−丁目１１番２号別紙の通り 補正の内容 １、願書２枚目（２）出願人の欄を添付願書のとおり１
こ訂正する。 ２、明細書、９ページ、６行目のｒ１９ｍｇ／ｍｌＪを
ｒ　１９　ｎ　ｇ　／　ｍ　ｌ　Ｊに訂正する。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 れる基（ここでＭは水素原子、１価金属アンモニウム、
   ４級アミン又はＣ１〜Ｃ４のアルキル基を示す）を示す
   〕 で表わされる新規モチコリン類