JPH06510913A - ４，５‐ジヒドロゲルダナマイシン及びそのヒドロキノンの製造及び使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ４，５−ジヒドロゲルダナマイシン及びそのヒドロキノンの製造及び使用 ｒｅｐｔｏ！１ｌｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ　（Ｐｆｉｚｅｒカル チャーコレクション番号ＦＤ２９０６８．ＮＲＲＬ　３６０２の継代培養による 誘導体）を、標準発酵方法及び条件を使用して発酵させ、次いで標準分離方法を 使用して本発明の化合物を単離することによる、４．５−ジヒドロゲルダナマイ シン及びそのヒドロキノンを製造する新規方法に係わる。ヒドロキノンは、４， ５−ジヒドロゲルダナマイシンから化学合成することもできる。

４．５−ジヒドロゲルダナマイシン及びそのヒドロキノンは、アンサマイシンの ベンゾキノン系同族体の抗生物質に属する化合物である。４．５−ジヒドロゲル ダナマイシン及びそのヒドロキノンは、アンサマイシンのベンゾキノン系同族体 としてよく知られたゲルダナマイシンの誘導体であると考えられる。ゲルダナマ イノン自体は、微生物Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ 、　ＮＲＲＬ３６０２を発酵させ、それを発酵ブロスから分離することにより得 られる。ゲルダナマイシンは、所定の微生物、主に酵母及び真菌↓こ対して有効 であることが知られている。ゲルダナマイシンの製造及び有用性は米国特許第３ ．５９５．９５５号に開示されてもする。４，５−ジヒドロゲルダナマイシンは 、従来、ゲルダナマイシンを接触水素化することにより合成されてＬｚる。この ４，５−ジヒドロゲルダナマイシンの半合成については、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉ ｎ　ｔｈｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐ ｒｏｄｕｃｔｓ、　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　。

れる。現在までのところ、４．５−ジヒドロゲルダナマイシンの有用性は当分野 において開示されて＋ｌｓな０゜Ｄｅｒｗｅｎｔ　ａｂｓｔｒａｃｔｓ　８２− ９８３θＯＥ、　８１−７０’７９６［１，８Ｏ−７２３８８Ｃ及び８Ｏ−６２ ７６０Ｃには、ゲルダナマイシンの半合成誘導体及びそれらの抗腫瘍剤としての 使用が記載されてＬ）る。

発明の要約 本発明は、下記の化学式Ｉを有する４、５−ジヒドロゲルダナマイシン及び化学 式■を有する４、５−ジヒドロゲルダナマイシンのヒドロキノンの製造方法を提 供する。

本発明方法は、微生物Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ 、ＡＴＣＣ５５２５６を水性栄養培地において液内有酸素増殖させ、次いて式１ 及び■の化合物を単離すること力）らなる。本発明者らは、これまで本発明化合 物を産生ずると１よ知られてＧ）なかった微生物Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈ ｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、ＡＴＣＣ５５２５６を発酵させることにより、４， ５−ジヒドロゲルダナマイシン及びそのヒドロキノンが得られることを見い出し た。４゜５−ジヒドロゲルダナマイシンは、哺乳動物、特番ニヒトｌこおける増 殖障害、特に癌を治療することにおＬ）で貴重な有用性を有することが示されて いる。更ｉこ４．５−ジヒドロゲルダナマイシンは、所定のダラム陽性及び陰性 菌感染を治療することにおいて有効であること、殺つィルス斉１及び除草剤とし ても有効であること、並び４こ、抗真菌性及び抗原生動物性を有することも期待 される。また該化合物（ま免疫抑制性を有するが故に、限定的ではなＬＮが、慢 性関節１ノウマチ及び移植片対宿主反応疾患を含む種々の自己免疫疾患を治療す ることにおいて有効であることが期待される。

４．５−ジヒドロゲルダナマイシンのヒドロキノン）マ、天然資源から単離する こともできるし化学合成することもで及び４，５−ジヒドロゲルダナマイシンを 単離するのと実質的に同じ方法で単離し得る。更１ここのヒドロキノン（よ、４ ．５−ジヒドロゲルダナマイシンを化学的還元剤を用％Ｘで還元することにより 化学合成することもできる。４，５−ジヒドロゲルダナマイシンのヒドロキノン ＋ｔ、４．５−ジヒドロゲルダナマイシンに対して上述したのと同じ全ての疾患 に有効であることが期待される。本発明（よ、天然供給源、即ち５ｔｒｅｐｔｏ ＩＩｌｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、　ＡＴＣＣ５５２５６から４． ５−ジヒドロゲルダナマインン及び４．５−ジヒドロゲルダナマイシンヒドロキ シンを製造する新規方法を提供すると共に、本発明の化合物の新規使用をも提供 する。更に、４．５−ジヒドロゲルダナマイシンからヒドロキノンを化学合成す る方法も提供する。

発明の詳細 ＰｆｉｚｅｒカルチャーコレクションＦＤ２９０６８としても参照される５ｔｒ ｅ　ｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、ＮＲＲＬ３６０２は、ブダ ペスト条約のちとに、寄託物を永続的に保存し、本出願に関して特許が付与され た際には即刻一般入手可能とする正式寄託機関である＾ｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐ ｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、　Ｒｏｃｋｖｉｌｉｅ、　Ｍａｒ ｙｌａｎｄに寄託されており、５ｔｒｅｐｔｏＩＩｌｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃ 。

ｐｉｃｕｓ　ＡＴＣＣ５５２５６の受託番号が与えられている。本出願係属中、 ３７　ＣＦＲ１，１４及び３５　ＵＳＣ１２２のもとに、また本出願の対応特許 または従属特許（ｐｒｏｇｅｎｙ）が出願されている国の外国特許法に従って、 米国特許商標庁長官によって正当権利者と判断された者は寄託物を使用し得る。

寄託されている微生物の一般使用に関する全ての制限は１９９３年６月２日また は特許付与口のいずれか早いほうの時点で最終的に解除される。

化合物（Ｉ）及び（ＩＩ）は、Ｓ　ｔ　ｒｅｐ　ｔｏＩｌｙｃｅｓ　投μｙｓｃ ｏｐｉｃｕｓ。

ＡＴＣＣ５５２５６の発酵ブロスから単離し得る天然産物である。

４．５−ジヒドロゲルダナマイシン及びそのヒドロキノンを得るためにＳｔｒｅ ｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｆｃｕｓ、ＡＴＣＣ５５２５６を増殖さ せる方法は、ゲルダナマイシンを得るためにこれを増殖させる場合と同じである 。増殖方法は当分野において標準的なものであり、米国特許第３．５９５．９５ ５号に見ることができ、この特許の教示は参照により本明細書の一部を構成する ものとする。５ｔｒｅｐｔｏｉｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、ＡＴＣ Ｃ５５２５６培養物は、糖、澱粉、グリセロールのごとき炭水化物源：粗挽き大 豆粉、カザミノ酸、酵母抽出物のごとき有機窒素源；可溶性穀粒（ｇｒａｉｎ　 ５ｏｌｕｂｌｅｓ）　、魚粉、粉末綿実粕のごとき増殖物質：鉄、コバルト、銅 、亜鉛などの微量元素を含む鉱物塩からなる培地において、２４℃〜３６℃で液 内状態で撹拌及び通気しながら増殖させ得る。ＡＴＣＣ５５２５６培養物を接種 した傾斜培地から栄養細胞を掻き取ることにより、接種材料は調製される。傾斜 培養器における初回増殖に適した固相培地はＡＴＣＣＮｏ、　１７２であり、そ の組成を以下に示す。

＾ＴＣＣ＃１７２　ｇｅＬ 可溶性澱粉　２０ 酵母抽出物　５ ”ＮＺ　Ａｌｌ１ｉｎｅ＾　５ 炭酸カルシウム　１ 寒天　２０ 蒸留水を１０００ｉ１になるまで加え、ＫＯＨを用いてｐＨ７，０に調整した。

”ＮＺ　Ａｍ１ｎｅ＾はＫｒａｆｔ、Ｉｎｃ、、Ｐｒｏｄｕｃｔ　ｏｆ　Ｑｕｅ ｓｔ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ） の登録商標である。

５ｔｒｅｐｔｏａ＋ｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、　ＡＴＣＣ５５２ ５６を培養し、式Ｉ及びＨの化合物を単離することは、ゲルダナマイシンを与え る従来の発酵に使用する場合と同様の方法で行われる。

例えば米国特許第３．５９５．９５５号参照。培養は、水性栄養培地において液 内有酸素条件下で、撹拌しながら温度２４℃〜３６°Ｃで実施するのが好ましい 。培養に有効な栄養培地は、糖、澱粉及びグリセロールのごとき資化可能炭素源 ；粗挽き大豆粉、カザミノ酸及び酵母抽出物のごとき有機窒素源を含む。更に、 可溶性穀粒、魚粉及び粉末綿実粕のごとき増殖物質、並びに、塩化ナトリウムの ごとき鉱物塩や、鉄、コバルト、銅及び亜鉛のごとき微量元素も含まれる。炭酸 カルシウム及びリン酸塩のごとき緩衝剤も使用される。発酵の間に過度の起泡が 認められるならば、植物油またはシリコーンのごとき消泡剤を発酵培地に加えて もよい。液内増殖槽内の培地への通気は、１分間に発酵ブロス単位容積当たり約 １７２〜２容積の無菌自由空気がスパージャ−を通してブロス中に強制送給され るよう維持されるのが好ましい。撹拌は、発酵分野の当業者には一般に知られて いる撹拌装置によって維持し得る。撹拌速度は、使用する撹拌装置のタイプに従 う。振盪フラスコは通常１５０〜２００サイクル／分で作動させ、発酵器は通常 ３００〜１７００回転／分で作動させる。無菌状態は、勿論、微生物の移入及び その増殖の間ずっと維持される必要がある。

本発明の抗生物質の調製のための接種材料は、前述の培養物の傾斜培養器または 培養物を接種したＲｏｕｘボトル由来の増殖物を使用することにより得られる。

傾斜培養器またはＲｏｕｘボトルにおける微生物の初回増殖に適した固体培地は ＡＴＣＣ培地Ｎｏ、　１７２である。増殖物を使用して振盪フラスコもしくは接 種槽のいずれかを接種することもできるし、または振盪フラスコから接種槽に播 種することもできる。振盪フラスコ内での増殖は通常４〜５日間で最高に達する が、液内接種槽内の接種材料は通常２〜３日間が最も好ましい期間である。

ダラム陽性及び除性微生物に対して活性であるナイジェルシン及びエライオフィ リンが発酵ブロス中で同時生成され、４．５−ジヒドロゲルダナマイシンの生成 を伴なう増殖の優れた指標となる。従って、５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａ ｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ６５３８ＰまたはＢａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　 ＡＴＣＣ６６３３の感受性味を使用してブロスを生物学的アッセイすることによ り、発酵ブロスのバイオ活性（ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ）をモニターし得る。

ブロスを浸透させた円形濾紙を取り巻く阻害ゾーンを抗菌力（ａｎｔｉｂｉｏｔ ｉｃ　ｐｏｔｅｎｃｙ）の尺度として使用する標準プレートアッセイが使用され る。更に、シリカゲルを使用する薄層クロマトグラフィーも、発酵培地中に産生 される抗生物質を検出すると共に、発酵ブロスから抽出された組物質及び精製物 質の組成を分析するための有効なツールである。

酢酸エチルを用いてクロマトグラムを展開し、バニリン試薬を噴霧し、ＴＬＣプ レートを８０℃で加熱することにより抗生化合物を可視化する。展開したプレー ト上に、Ｓ、　ａｕｒｅｕｓまたはＢ、　５ｕｂｔｉｌｉｓを播種した寒天を重 層し、３７℃で１６時間インキュベートして抗生物質を可視化する。

Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、　ＡＴＣＣ５５２５ ６の発酵によって産生される式１及び■の化合物は、未濾過の全発酵ブロスを一 般自然ｐＨの有機溶剤、例えばクロロホルム、酢酸エチル、メチルイソブチルケ トンまたはブタノールを用いて抽出するなどの慣用方法によって分離及び回収し 得る。

或いは、増殖を完了した後に菌糸体を分離し、有機溶剤を用いて菌糸体を抽出す ることもできる。更に、溶剤抽出物を希薄シロップ状に濃縮し、クロマトグラフ ィーによって純粋な抗生物質を得ることができる。

式Ｉ及び■の化合物の分離及び回収の代表的方法は以下の通りである。５ｔｒｅ 　ｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、　ＡＴＣＣ５５２５６を発酵 させた全ブロスをメチルイソブチルケトンを用いて抽出する。溶剤を蒸発させて 希薄シロップを得る。このシロップを塩化メチレン中に溶解し、シリカゲルカラ ムに添加し、純粋塩化メチレンから純粋酢酸エチルまでの濃度勾配を用いて溶出 する。薄層クロマトグラフィーによって溶出液を調査する。化合物Ｉを含むフラ クションを合わせ、蒸発乾固する。化合物■を含むフラクションを合わせ、蒸発 乾固する。所望であれば結晶化またはカラムクロマトグラフィーによって生成物 を更に精製することもできる。

式１及びＨの化合物は、所定の属の真菌性植物病原体、ダラム陽性及び陰性菌、 及び所定の寄生微生物に対して有効であることが期待される。４．５−ジヒドロ ゲルダナマイシン及びそのヒドロキノンは、米国特許第３．５９５．９５５号に 記載の方法を使用して上述の微生物に対する使用を試験し得る。

式１の化合物は所定のヒト癌細胞の増殖を阻害する。４゜５−ジヒドロゲルダナ マイシンのｆｎ　ｖｉｔｒｏ活性は、Ｍ、　Ｃ，Ａ１１ｅｙら、　Ｃａｎｃｅｒ 　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　４８．５８９−６０１．１９８８年２月１日に記載の方法 に従い、５ＫＢＲ３及びＭＣＦ７細胞系を使用して測定した。

４．５−ジヒドロゲルダナマイシンは、癌、とりわけヒトの乳癌、卵巣癌及び胃 癌を治療することにおいて特に重要である。式Ｈの化合物も同じ目的で有効であ ることが期待される。

４．５−ジヒドロゲルダナマイシンは、当業者にはよく知られた方法で判定する と、強力な免疫抑制作用を有する。

この活性は通常、ＩＬ−２及びホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテ ート（ＰＭＡ）で刺激したＴ細胞増殖の阻害を、薬物未処理対照と比較したトリ チニウム化チミジンの取込みの減少を測定して評価することにより決定される。

化合物■も免疫抑制作用を有すると期待される。

式Ｉ及び■の化合物を抗癌剤のごとき抗増殖剤として使用する場合、それは哺乳 動物被検者に単独で投与することもできるし、好ましくは、標準診療医薬により 医薬組成物において医薬的に容認可能な担体もしくは希釈剤と組合わせて投与す ることもできる。化合物は経口または非経口的に投与し得る。非経口投与として は静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、及び局所投与が挙げられる。

本発明の式１または■の化合物を経口使用するためには、化合物は例えば錠剤も しくはカプセルの形態または水性溶液もしくは懸濁液として投与し得る。経口使 用の錠剤の場合、一般に使用される担体としてはラクトース及びコーンスターチ が挙げられ、ステアリン酸マグネシウムのごとき潤滑剤が一般に添加される。カ プセル形態の経口投与に有効な希釈剤はラクトース及び乾燥コーンスターチであ る。

水性懸濁液が経口使用に要求される場合は、有効成分を乳化剤及び懸濁剤と組合 わせる。所望であれば、所定の甘味料及び／または着香剤を加えることもできる 。筋肉内、腹腔内、皮下及び静脈内使用のためには、通常は有効成分の無菌溶液 を調製するが、溶液のｐＨは適当に調整及び緩衝する必要がある。静脈内使用の ためには、溶質の全濃度を、製剤を等張性にするよう調節する必要がある。

式ＩまたはＨの化合物を含む医薬組成物において、担体対有効成分の重量比は通 常１：１０〜１０・１の範囲である。

しかしながら、個々の事実で選択される比は、有効成分の溶解度、予定される投 与量、及び当該投与経路といった要因に従う。

式Ｉまたは■の化合物をヒト被検者に使用する場合、日投与量は通常、処方箋を 書く医師によって決定される。また投与量は、個々の患者の年齢、体重及び応答 性、並びに、患者の症状の重さ、及び投与する特定の化合物の効力に従って変化 する。しかしながら、はとんどの場合に有効な用量は必要に応じて（例えば４〜 ６時間毎に）０．０１〜０．５ｇである。長期継続投与においては、はとんどの 場合、有効用量は一度にまたは数回に分けて、０．０１〜１．０ｇ／日、好まし くは２０〜２５０ａ＋ｇ／日である。一方で、場合によっては上記範囲外の用量 を用いることも必要となり得る。

更に説明するために以下の実施例を与える。

実施例１ １、接種材料の調製 傾斜培養器及びＲｏｕｘボトルにおける初回増殖に適した固体培地は＾ＴＣＣ培 地Ｎｏ、　１７２である。３０ｈｌ振盪フラスコに、１０ｈｌの培地を分配し、 次いで振盪フラスコを１２０℃、　１５ｐ、ｓ。

ｉ、で３０分間滅菌した。冷却後、この培地に、ＡＴＣＣＮｏ、　１７２寒天培 地上で増殖させたＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ、＾ ＴＣＣ５５２５６培養物由来の栄養細胞懸濁液を接種した。フラスコを、変位１ −１／２〜２−１／２インチ及び１５０〜２００サイクル／分（ＣＰＭ）の振盪 装置上で２８℃で３〜５日間振盪した。

振盪フラスコは以下の培地のいずれかを使用して調製した： ＪＤＹＴＴ　ｇ　／　１ セレローズ（Ｃｅｒｅｌｏｓｅ）　１０コーンスターチ　５ トウモロコシ浸漬液　５ ＮＺ　Ａｍ１ｎｅ　ＹＴＴ　５ 塩化コバルト　０．００２ 炭酸カルシウム　３ ｐＨ６，９〜７．１に Ｃ’　ｇ　／　／ セレローズ　１０ 大豆粉　１０ トウモロコシ発酵産物　５ コーンスターチ　１０ 塩化ナトリウム　５ 塩化コバルト　０．００２ 炭酸カルシウム　１ ｐＨ７，０〜７．２に ２．４．５−ジヒドロゲルダナマイシンの発酵及び単離１つの振盪フラスコを使 用し、下記の培地のいずれかを３リットル含む５リットル発酵容器を接種した： 硫酸アンモニウム　５ 大豆粉　１０ 酵母抽出物　２．５ 塩化カリウム　４ 内袖出物　１ 塩化コバルト　０．００２ 炭酸カルシウム　３ ｐＨ７，１〜７．３に コーンスターチ　４０ 粉末綿実粕　４ 塩化コバルト　０．００２ 炭酸カルシウム　６ ビール酵母　２ 塩化ナトリウム　２ 硫酸マグネシウム・７１，０　０．５ 硝酸アンモニウム　２ ｐＨ６，９〜７．２に 輩＾ＣＢ−Ｍ　ｇ　／　１ グリセロール　１０ 酵母抽出物　１０ 硝酸ナトリウム　、２ 塩化コバルト　０．００２ 硫酸マグネシウム・７１１２０　０．５０二塩基性リン酸カリウム　１ 塩化カリウム　０．５ 硫酸第一鉄　０．０１ ｐＨ６，９〜７．２に 各容器に消泡剤として１ｍｌのＰ２Ｏ００（シリコーン）を加え、容器を密封し 、１２０℃、　１５ｐ、ｓ、ｉ、で１時間滅菌した。

次いで、ポットに１つ（約３％接種材料）のフラスコで接種し、２８℃で７２〜 １２０時間発酵させ、１分間に液体容積と同容積の空気量で、１７００回転／分 で撹拌した。

ブロス及びそれからの回収物のバイオ活性を、Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉ ｓ　ＡＴＣＣ６６３３または５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　Ａ ＴＣＣ６５３８Ｐの感受性株を使用することによりモニターした。

ブロス及び回収物中の成分を、純粋酢酸エチル系中のシリカゲルプレートを使用 することにより以下のように可視化した。展開したプレートにバニリン試薬（７ ５ａ＋１のエタノール中に３ｇのバニリンを溶解し、８５％リン酸で１００ａ＋ １１こ希釈したもの）を噴霧し、８０℃に加熱した。抗生物質１ま濃青／紫色に 変色して現れた。展開後の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレートを暗い箱 の中で２５４μｌの光で見ると可視化された。発酵が完了した時点で発酵器を停 止した。

全ブロスを、１／３容積のブロスｐＨのメチルイソブチルケトンを用いて抽出し 、ＤｅＬａｖａ１分離器において分離し、溶剤相をオイル状になるまで真空下に 濃縮した。このオイルに、ヘキサン／アセトニトリル１０：１を使用する３管向 流（３ｔｕｂｅ　ｃｏｕｎｔｅｒｃｕｒｒｅｎｔ）を実施した。４，５−ジヒド ロゲルダナマイシン及びそのヒドロキノンを含む下相（ＣＨ，ＣＮ）を分離し、 合わせ、真空下に濃縮した。残留物を塩化メチレン中に溶解し、Ｄａｒｃｏ　Ｇ ６０　（活性炭）で処理し、濾過し、濃縮した。濃縮物を塩化メチレン中の１ｌ ａｔｅｒｓ　Ｐｒｅｐ　５００シリカゲルカラムに添加し、純粋塩化メチレンか ら純粋酢酸エチルまでの濃度勾配に付して溶出した。４，５−ジヒドロゲルダナ マイシンに富むフラクシヨン（Ｒ，＝９：　Ｉ　ＣｌＩＣｌ３／アセトンにおい て２．５〜３）を合わせ、クロマトグラフィーを繰返し実施し、純粋な４．５− ジヒドロゲルダナマイシンを単離した。４．５−ジヒドロゲルダナマイシンを高 温のイソプロピルエーテルから結晶化し、５０℃の真空オーブン内で一晩乾燥し た。融点２２１〜２２２℃。

式Ｈのヒドロキノン（Ｒ、＝　９　：　Ｉ　ＣＨＣｂ／アセトンにおいて１〜１ ．５）に富むフラクションを合わせ、クロマトグラフィーを繰返し実施し、純粋 なヒドロキノンを単離した。

実施例２ ４．５−ジヒドロゲルダナマイシンヒドロキシンの化学合成水１００■ｌ中に溶 解した１０ｇのヒドロ亜硫酸ナトリウムを１００ｍ１の酢酸エチルと混合するこ とにより反応を開始し、次いでこの溶液に２００ｍｇの４，５−ジヒドロゲルダ ナマイシンを加えた。Ａｎａｌｔｅｃｈシリカゲルプレート及び系として純粋酢 酸エチルを使用するＴＬＣにより反応をモニターした。反応はバニリン噴霧によ ってＵＶ光（２５４μｍ）下に観察した。２０分後、反応はほとんど完了してい た。

水性層を酢酸エチルで２回抽出した。次いで溶剤層をｐＨ７，０リン酸緩衝液を 用いて逆抽出した。溶剤を無水硫酸ナトリウムで脱水し、ゴム状になるまで濃縮 した。

残留物をイソプロピルエーテル（ＩＰＥ）中に取込み、沸騰するまで加熱し、次 いで３時間撹拌した。イソプロピルエーテル溶液を濾過し、固体をフィルター上 で乾燥した。

乾燥４．５−ジヒドロゲルダナマイシンを実験室真空下で５０℃に維持した。

国際調査報告 ＋、１．１．ｌＡｅｅｉｍ−ｅ＋−ＰＣＴ／ＵＳ　９２／１０１８９＾Ｎ）−４ ＾ＮｃＩ　＾Ｎ　ＮＦ：Ｘ　Ａ　Ｎｆ’ＪＥ：ＸＥフロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃｌ２Ｒ１：５５） （７２）発明者　モイヤー、マイケル・ビーアメリカ合衆国、コネチカット・０ ６４１３、クリントン、クリストファー・レイン・１６Ｉ

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. １．式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）の化合物を製造する方法であって、（ ａ）水性栄養培地において液内有酸素条件下に微生物Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ 　ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ，ＡＴＣＣ５５２５６を増殖させるステップであ って、前記栄養培地が炭化水素源、有機窒素源、増殖物質及び微量元素を含む鉱 物塩を含むステップ；及び（ｂ）前記式（Ｉ）の化合物を単離するステップから なる方法。
2. ２．哺乳動物被検者における増殖障害の治療に有効な医薬組成物であって、医薬 的に容認可能な担体または希釈剤と、増殖障害治療量の式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）の化合物とを含む医薬組成物。
3. ３．哺乳動物被検者における自己免疫疾患の治療に有効な医薬組成物であって、 医薬的に容認可能な担体または希釈剤と、自己免疫疾患治療量の式（Ｉ）：▲数 式、化学式、表等があります▼（Ｉ）の化合物とを含む医薬組成物。
4. ４．哺乳動物被検者における細菌、ウイルス、菌または原生動物感染の治療に有 効な医薬組成物であって、医薬的に容認可能な担体または希釈剤と、細菌、ウイ ルス、菌または原生動物感染治療量の式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）の化合物とを含む医薬組成物。
5. ５．式（ＩＩ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）の化合物。
6. ６．請求項５に記載の式（ＩＩ）の化合物を製造する方法であって、（ａ）水性 栄養培地において液内有酸素条件下に微生物Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈｙｇ ｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ，ＡＴＣＣ５５２５６を増殖させるステップであって、前 記栄養培地が炭化水素源、有機窒素源、増殖物質及び微量元素を含む鉱物塩を含 むステップ；及び（ｂ）前記式（ＩＩ）の化合物を単離するステップからなる方 法。
7. ７．哺乳動物被検者における増殖障害の治療に有効な医薬組成物であって、医薬 的に容認可能な担体または希釈剤と、増殖障害治療量の請求項５に記載の化合物 とを含む医薬組成物。
8. ８．哺乳動物被検者における自己免疫疾患の治療に有効な医薬組成物であって、 医薬的に容認可能な担体または希釈剤と、自己免疫疾患治療量の請求項５に記載 の化合物とを含む医薬組成物。
9. ９．哺乳動物被検者における細菌、ウイルス、菌または原生動物感染の治療に有 効な医薬組成物であって、医薬的に容認可能な担体または希釈剤と、細菌、ウイ ルス、菌または原生動物感染治療量の請求項５に記載の化合物とを含む医薬組成 物。