JPS60105964A - 蛋白質ｍｐ２およびその製法 - Google Patents

蛋白質ｍｐ２およびその製法

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JPS60105964A
JPS60105964A JP59196963A JP19696384A JPS60105964A JP S60105964 A JPS60105964 A JP S60105964A JP 59196963 A JP59196963 A JP 59196963A JP 19696384 A JP19696384 A JP 19696384A JP S60105964 A JPS60105964 A JP S60105964A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は人間の胎盤から得られる膜と会合した組織蛋白
質の群に関する。本発明はさらにこれら蛋白質の取得法
にも関する。これら蛋白質はこれら蛋白質の検出および
測定に役立て・らＩれうる抗血清および抗体の取得に使
用されうる。
ＭＰよおよびＰＰ、として表示される２種類の膜と会合
した蛋白Ｉ４は西ドイツ特許出願箱３３１４２９３号お
よび同第３３１５００．０号明細書の記載から知られて
いる。
本明細書に記載される蛋白質はこれらとけ物理的、化学
的および免疫化学的性質が異なる。
本明細書記載の蛋白質はコラーゲン、フィブリン、フィ
ブロネクチン、アクチンまたはラミニンのような人間の
組織の他の知られた構造蛋白質とも同一ではなく、これ
らとは物理的、化学的または免疫化学的性質も同様に相
異する。
人間の蛋白質から得られる本明細書中に記載される複雑
な組成を有する膜と会合した組織蛋白質（ＭＰ２）の群
はそれらの沈降係数および分子量に関してかなシの相異
を示すが、しかし々からこれらは免疫化学的に同一であ
るかまたは部分的に関連しておりそしてまたそれらの他
の物理的性質および化学的組成において相互に非常に類
似しているＯ ＭＰ２蛋白質はゲルい過により４棟類の明らかに相互に
離れたフラクション（Ｉ〜ＩＶ）Ｋ分離されうる。これ
ら蛋白質の考；り成にはそれらの抗原決定基が相異する
合計少くとも４種類の異なる成分が含まれている。
本発明は下記の特徴を有するＭＰ２と呼ばれる蛋白質に
関する、すなわち ａ）　ｃｔＱ−グロブリンとβ、−グロブリンとの間の
範囲にある電気泳動移動度、 ｂ）ｐＨ４，４〜５，０の範囲内にある等・電点、ｃ）
　７〜２０８以上の範囲内にある沈降係数５２０ｗ’こ
こで主フラクション（ＴＶ、ＩＩＩ、■およびｌ）はそ
ハぞれ約７．９．１４および２０８で沈降する、 ｄ）　２０００００〜１００００００の範囲内にある分
子量、ここで主フラクション（＋ｖ、ｒｕ、ｎおよびＩ
）は分子量約２１００００．４０００００．７５０００
０および１ｏｏｏｏｏｏを有する、ｅ）吸光率Ｆ”　（
２８０ｎｍ　）　１２．５±０２、ｆ）炭水化物含量ａ
Ｏ±３．２チ（マンノース１．４±０．４　％　、フコ
ースｃＬ４±α２チ、ガラクトースｔ２±（１４％、Ｎ
−アセチル−グルコサミン２．６±１８％、Ｎ−アセチ
ル−ノイラミン酸２．４±１．４％）、および ｇ）　アスパラギン酸、グルタミン酸、ロイシン、バリ
ン、セリンおよびグリシンが最も多情に存在するアミノ
酸に属するアミノや組成。
第１表によりフラクション■および■についてのアミノ
酸分析の結果を例示する。
第１表 基１００個当りの基数（モル係） アミノ酸　フラクション■　フラクションＩＶシスティ
ン　２．８０　６．５５ メチオニン　１．８０　ｔ　５５ トリプトフアン　２．６０　２．９５ アスパラギン酸　１［Ｌ７５　１　［１１５スレオニン
　４，８５　４．５５ セリｙ　７．５０　ａ１５ 基１００個当シの基数（モル係） アミノ酸　フラクション■　フラクション■グルタミン
酸　９．２０　９．７０ プロリン　５．４５　、６．２５ グリシン　６．７０　７．７０ アラニン　６．４０　６．０５ パリｙ　７．３５　７．３０ イソロイシン　４．９０　４．６５ ０イシ７　ａ９５　７９０ チロシン　３．３５　３．２５ フエニルアラニン　４．４５　３．８０ヒスチジン　２
．４５　２．６５ リジン　５．５０　５．６０ アルギニン　４．９０　４．２５ ＭＰ２−組織蛋白質の特徴的な指標を説明するだめに以
下に詳述する。
電気泳動移動度はＢｅｃｋｍａｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎ
ｔｓ社製のＭｉｃｒｏｚｏｎｅ　Ｒ２０，０型装置を用
いアセチルセルロース箔（Ｆｉｒｍａ　５ａｒｔｏｒｉ
ｕｓ社製）上ｐＨａ６のジエチルバルビッール酸ナトリ
ウム緩衝液を用いて測定した。
等電点はストックホルムのＦｉｒｍａ　ＬＫＢ　社製（
７）カラム（４４０ｄ）を用いて測定した。
ＡｍｐｈｏｌｉｒＰ混合物はｄ１４．０〜６．０を有し
た。
沈降係数はＦｉｒｍａ　Ｂｅｃｋｍａｎ社製の分析用超
遠心器（５ｐｉｎｃｏ装置、Ｅ型）中毎分６００００回
転でダブルセクターセル中滉−スキャンナー技法を用い
２８０ｎｍで測定した。溶媒としては水が使用された。
蛋白質り度は２１／ｌであった。
分子量の測定まだは計測にはゲルＦ５１φ上および超遠
心層中における挙動ならびにドデシル硫酸す）　ＩＪウ
ム（以下ＳＤＳと略記する）を含有するポリアクリルア
ミドゲル中における電気泳動移動が用いら九た。後者方
法においてはα１ｇ／　１　［］　Ｏｍｇのドデシル硫
酸ナトリウムを含有するｚ５または１０１！／１００ｄ
のポリアクリルアミド（以下ＦＡＡと略記する）を含有
するゲルが使用された。天然の蛋白質の分子量を測定す
るだめにはＭＰ２フラクションＩ〜■を水または０．０
１モル／ｌのトリス緩衝液中に溶解して適用する。比較
物質としてはフェリチン（分子量４５００００）、フィ
ブリン安定化因子のサブ単位Ｓ（分子量１８００００）
、妊娠特異的β、−糖蛋白質（分子ｆｔ９００００）な
らびにヒトアルブミンが用いられた。
吸光率の測定には物質１■を蒸留水に溶解させて１　ｍ
ｌの溶液となして用いた。
炭水化物は以下のようにして測定した。配糖体結合を加
水分解したのち遊離された中性糖をボレート複合物とし
て陰イオン交換体カラムで分離しく　Ｙ、Ｃ，Ｌｅｅ氏
他、Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、第２７巻第５６７頁
（１９６９年）参照）、溶離液中にＣｕ（１）−ビシン
コニネート試薬を混合することによシ着色さぜ（Ｋ、Ｍ
ｏｐｐｅｒおよびＭ、　Ｇｉｎｄｌｅｒ氏のＡｎａｌ、
　Ｂｉｏｃｈｅｍ、第５６巻第４４０頁（１９７３年）
参照）そして内部棹準としてラムノースを使用すること
により定量的に測定した。アミノ糖はニンヒドリンとの
反応により検出および測定した。ノイラミン酸含量はＷ
ａ　ｒ　ｒ　ｅ　ｎ氏の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　
’Ｆ！ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　、第■巻第４６３〜４６５
頁（１９６３年）参照）により測定した。
アミノ酸分析はＳｌＭｏｏｒｅ　、　Ｄ、　Ｈ，Ｓｐａ
ｃｋｍａｎ　およびＷ、　Ｈ，５ｔｅｉｎ氏のＡｎａｌ
、　Ｃｈｅｍ、第３Ｑ巻第１１８５頁（１９５８年）記
載の方法に従いＦｉｒｍａ　Ｂｅｃｋｍａｎ社製の液体
クロマトグラフィー用ＭｕｌｔｉｃｈｒｏｍＢを用いて
実施した。シスチンは蛋白質を過蟻酸を用いて酸化（Ｓ
、Ｍｏｏｒｅ氏他のＡｎａｌ、　Ｃｈｅｍ、第３０巻第
１１８５頁（ｉ９５８年）参照）しそして次にクロマト
グラフィー（３，１ｖ（ＯＯｒｅ氏のＪ、Ｂｉｏ。
Ｃｈｅｍ、第２６８巻第２３５頁（１９６３年）参照）
したのちにシスティン酸として測定した。トリシトファ
ン含量はＨ，Ｅｄｅｌｈｏｃｈ氏のＢｉｏｃｈｅｍｉｓ
−ｔｒｙ第６巻第１９４８頁（１９６７年）記載の方法
により直接測光測定される。
本発明はさらド、 （１）　分娩に際して得られるような成熟した人間の胎
盤を粉砕し、すべての可溶性成分が除去されるまで生理
食塩溶液で洗い、そしてかくして得られた組織残留物を
α５〜５．ｌｉｌ／１００Ｗｔｌの非イオン系洗浄剤を
含有する溶液好ましくは２７！／１００ｍ／Ｕのポリエ
チレングリコール−ｐ−イソオクチルフェニルエーテル
を含有する溶液で抽出し、上澄み液を分離し、水または
緩衝溶液で透析しそして濃縮し、 （２）得られた溶液中に含有される胎盤の可溶化された
組織抗原を免疫吸着によりさらに濃縮し、 （３）免疫吸着により抗原かつ濃縮された溶液をデルＦ
渦にかけそして同時に比較的分子量の小さい他の可溶化
された胎盤の蛋白質（ＭＰｌ・ｐｐ、　）を実質上分離
し、そして （４）　ｎ％台によりＭＰ２フラクション中に時として
まだ不純物として存在する随伴蛋白質（免疫グロブリン
および膜と会合した蛋白ｑｉｉＭＰ工の痕跡ならびに’
ｉ’ＷにＭＢ２−フラクション■中に現われるフェリチ
ン）を逆免疫吸すｌ、すなわちこれら随伴蛋白質に対応
する相体と結合した抗体により除去しそしてかくして不
純物を含量々いＭＢ２−フラクションを取得する、こと
を特１＠、とする膜と会合しだ暗盤蛋白暫ＭＰ２の取得
法にも関する。
分離操作で得られるフラクションにおけるようなＭＰ２
蛋白質の検出には、前記しだ／Ｒラメーターと並んでま
た免疫化学的方法も役立てら九うる、何故ならＭＢ２−
蛋白質は抗原性質を有するからである。
ＭＢ２−蛋白質の４１・ｖ成には、それらの抗原決定基
が相異する合計少くとも４種の成分（Ａ、Ｂ。
ＣおよびＤ）が含′まれている。ＭＢ２−フラクション
Ｉ−１％’におけるこれら異なる抗原領域の分布を凧２
表に示す。フラクションｌ−Ｉｎは全４種の抗原ＩＪ［
１域を含／１１゛する。その際成分Ａは最も大−１≠：
に存在するとしわれる。これに対しフラクション■にお
いては成分Ｂが優勢である。成分Ｃ１ｄこのフラクショ
ンにおいては実際上完全に欠落している。
第２表 ＭＰ２−フラクション■〜Ｉｖにおける抗原領域Ａ、Ｂ
％ＣおよびＤの分布 一−−−−−−−−−ヨと一−Ｌ−− １　＋＋　十＋−（＋） ｔｒ　＋十十＋　（＋１ ｍ　＋＋　（＋）　十　（＋） ｒｖ　＋　十＋　＋ 千十非常に強い、十強い、（＋）弱いおよび−出現せず 従って、精製されたフラクションｒ−ＩＶで家兎を免疫
することにより、抗原領域Ａ、Ｂ、ＣおよびＤに対する
またはこれら成分の一部のみに対する変動する量の抗体
を含有する抗血Ｉｆｆが取得されうる。相当する胎盤フ
ラクションまたはＭＰ２−フラクションを用いて適当に
吸収させることによシこれら抗血清は１種類のまたは他
の抗原領域に対して特異的となされうる。これら蛋白質
中に含有される抗原決定基のそれぞれ１捕類のみと反応
するモノクローナル抗体はＭＰ２−蛋白・７ケで免疫さ
れたマウスの牌１；蔵細胞をマウスの骨Ｑ　ＩＦｔｊ　
ＩＩＩ胞と混合（融合）させそして次に形成されノｃハ
イブリッド細胞を選択しそしてさらに増殖さ、Ｉ亡るこ
とにより得られる。かかる方法の一種は例えばＫｉ：ｉ
ｈ　１　ｅ　ｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ氏によりＮａｔ
ｕｒｅ、　第２５６巻第４９５〜４９７＠（１９７５年
）に記載されている。
従って：Ｘ４Ｐ２−蛋白質はどれら蛋白複合物の全体に
対するまたはそれぞれのフラクション卦よび成分に対す
る抗血清を８周製するためまたはそれぞれこれら蛋白質
中に含有される抗原決定基の１種類とのみ反応する抗体
（モノクローナル抗体）を取得するために使用されうる
。
抗血清および抗体はＭＰ２−蛋白質重たは抗原的にそれ
らと関連する蛋白質を組織中において局在させるため、
および体液中において検出および測定するだめに使用さ
れうる。さらにこれら抗血清および抗体は、その助けに
よってＭＰａと免疫化学的に同一であるかまたはＢ／Ｉ
Ｆ、１と部分的に関連する蛋白質を組織抽出物または体
液から単離せしめうる色装吸着剤の１１にも役立てられ
つる。
沈澱する抗体を用いるＭＰ２−蛋白質の免疫化学的ｔＴ
ＩＥ明には例えばオクタ口＝　−（０ｕｃｈｔｅｒｌｏ
ｎｙ）によるゲル拡散試験が用いられうる。図は家兎を
フラクションＩＩで免疫することにより得られる抗血清
とＭＰ２−フラクション■〜ＩＶとのこの試験における
免疫学的反応を示すものである。
比佼的分子量の高いフラクションＩおよび■に外いては
種々の抗原領域に対する沈澱は実質上一本の線に一致し
ているが、一方比較的分子量の低いフラクションＩｎお
よび■においては沈澱は幾分か別れている。異なる抗原
領域Ａ、Ｂ、ＣおよびＤに対するそれぞれの線の割当て
が第１図に示される。
ＭＰ２−蛋白１６　またけそれらと免疫学的に部分的に
関連する蛋白質を検出するには放射線免疫検定または酵
素免疫検定のよりなよシ感度の良い免疫化学的方法も用
いられうる。
ＭＰ２−蛋白質オたはそれらと部分的に関連する抗原の
検出および測定は診断上重要である。
ＭＰ２−蛋白質重たはそれらと免疫化学的に同一である
かオたけ関連する蛋白質は人間のある種の器官に比較的
高ｔ’Ｊ度に存在する。従って例えば胎児の胃腸管およ
び成人の腎臓中に見られる。
これらの器官の疾患においては細胞崩壊が進んだ結果と
してＭＰ２−抗原が血清捷たは尿中に高濃度に現われう
る。それゆえ体液中におけるこれら抗原の検出および測
定はかかる器官の疾患の識別、疾病経過の監視および治
療の検査に使用されつる。人間の他の大部分の器官中に
はＭＰ２に関連する蛋白質は存在しないかまだは痕跡に
しか存在しない。
従って）Ｂ２−蛋白質は、ＭＰ２−蛋白質またはそれら
の成分を免疫化学的方法で検出および測定するのに役立
てられうる抗血清および抗体の調製に使用されうる。
一方ではＭＰ２−蛋白質およびそれらの成分に対する抗
体は免疫学的に同一であるか才たけ部分的に関連する蛋
白質を単離するのに役立てられうる免疫ｒｙｋ’Ｒ剤の
調製に使用されうる。＊発明を以下の実施例によ＃）説
明する。
実施例 （１，１）　−＋−胎盤の粉砕および洗浄膜と会合した
蛋白質ＭＰ２の単離には分娩で得られるような成熟した
人間の胎盤が使用された。
胎盤を初め一２０℃に冷凍し、冷凍された状態で切ＰＩ
ｆＴ混合機（カンターミキザー）を用すて粉砕しそして
この形態で一２０℃で使用時まで保存する。生理食塩溶
液で洗浄することによりはじめにすべての溶性組織蛋白
質を除去し７た。これには粉砕された胎盤組織５００ｇ
に食塩溶液７００ｄを加え、短時間ホモジナイズし、次
に４℃で数時間１７）拌しそして終りに遠心分離した。
上澄みを捨て、残留物を新だに食塩溶液７００ｍ１と数
時間１１拌１．７そして再び遠心分離した。この洗浄工
程を合計６回反復した。この方法で胎盤組織から可溶性
成分が実質上除去された。
（１，２）　）ライドン（Ｔｒｉｔｏｎ　）■Ｘ−１０
０を用いる胎盤組織の抽出 組織残留物を水１００ｉＪ中のホリエチレング＋）　：
ｊ　−ｋ　−ｐ−インオクチルフェニルエーテル（Ｔｒ
ｉｔｏｎ　Ｘ−１００）　２　ｍｅの溶液各７００ゴず
つを用いて６回抽出する。その場合４℃でそれぞれ２０
時間攪拌しそして次に遠心分離した。
抽出液をはじめ水でそして次に１モル／１３（ＤＮａＣ
６および１１１／１１のナトリウムアジドを含有する０
、１−Ｆ＝に／ｌのトリス−ＨＣＩ　Ｗ　（ｍｊ液（ｐ
ｉＩａＯ）（緩衛溶液■）で透析した。透析物を限外濾
過器（Ｆａ、　Ａｍｌｃｏｎ社製）上ｐｕ−ｉｏ膜を用
いそれぞれ約２００　ｍ、ｌとなるまで濃縮しそして次
に合した（フラクションＡ） （２）　免疫吸＠によるＭＰ２−蛋白Ｊυの濃縮（２，
１）　免疫吸着剤の調製 可溶化された胎盤蛋白質フラクションＡを用いて家兎を
免疫することにより多価抗血７〃を調製した。このもの
はＭＰ２−蛋白仙に対する抗体のみならずトライトンＸ
−１００で可溶化された他の組織抗原に対する抗体をも
含有した。かかる抗血清プール３５０罰を０．０２モル
／ｌの燐酸塩緩衝液（ｐｔｌ　７．０　）で透析しそし
て免疫グロブリンを分Ｉ批するために同じ緩ａｉ液を用
いＤ　ＥＡＥセルロースでクロマトグラフィーした。
通過した免疫グロブリンフラクション（蛋白質３、　、
ｂ　３　ｇ　）を次に、ブロムシアン４５．３　Ｎで活
性化されだビード形の特にｘｓｎ製されたアガロース（
スウェーデン、ウプサラのＰｈａｒｍａｃｉａ社製５ｅ
ｐｈａｒｏｓｅ■）３６３．９と反応えイカ、＜　ｔ、
−ｃｍａに共有結合させた。この操作１”ｊＡｘｅｎ氏
他によりＮａｔｕｒｅ　’Ｍ　２１４　僑ｍ　１３０２
頁（１９６７年）に記１１＆されている。この方法で調
製された免疫吸着剤を用いてＭＰ２−蛋白質が胎盤フラ
クションＡからの可溶化された他の抗原と一緒にさらに
演縮できた。
（２，２）　免疫吸着の実施 免疫吸−／ｈ剤を緩衝溶液■中に懸濁させ、クロマトグ
ラフィーカラムに充填（５，０ｘ２０　ｃｒｒＬ）　Ｌ
そして経価溶液■ヤ洗った。次にフラクションＡの％を
カラムに適用すると、ＭＰ２−蛋白質および他の可溶化
された抗原が免疫吸着により結合された。次にカラムを
緩衝液■で充分に洗った。吸−諸された蛋白質を次に６
モル／ｌの尿諸溶液約６００　ｒｔｔｌを用いてカラム
から溶出させ７”Ｃ８ＭＰ２を含有する溶出液を緩衝液
■で透析しそして限外濾過器を用いて約２０　ｍｅまで
＃縮した。
１回の吸着当りの収量は蛋白質約２０〜４０ｍ７であっ
た。
カラム中のＩ及着剤は蛋白質の溶１惟Ｉσ徒に再び緩衝
溶液■で充分に洗浄した。これは可溶化された抗原を免
疫吸着により結合させるのに７４４　ｊｊＰ用される。
（３）　ゲル沖過による旧２〜蛋白質の分１ｉｊｆ＃免
疫吸着により濃縮されたＭＰ２−蛋白質をアクリルアミ
ドアガロースＡｃＡ　−３４（ストックホルムのＬＫＢ
　社ｉＪｃ！　）でのゲル濾過により、それらの分子量
の相異に基づき４種の相互に明らかに異なるフラクショ
ン（【〜■）に分けた。その際フラクション【は［空量
（ｖｏｉｄ　ｖｏｌｕｍｅ　）　Ｊの直後にカラムから
出てきた。他の大抵の可溶化された膜抗原（ＭＰ、およ
びｐｐ、）は２０００００以下の分子量を有しておりそ
してそれゆえデル濾過においてはＭＰ２−蛋白質から実
質上分離された。λ０２−フラクションｒ〜■は限外濾
過器（Ｆａ、　Ａｍ１ｃｏｎ社１ｉ１１４）上ＰＭ−１
０膜を使用して濃縮した。
（４）逆免疫吸着によるＭＰ２−フラクションの高度精
製 ゲルｐ過において得られたＭＰ２−フラクションは痕跡
のＭＰＩ　、ｈよび免疫グロブリンによりまだ部分的に
汚染されておシ、一方フラクション１■は特にまだフェ
リチンを含有した。これら不純物は逆免疫吸着、すなわ
ちこれら随伴蛋白質に対するす４体と結合した抗体を用
いて除去できた。次ＩＣ梢壊された蛋白質溶液を水で透
析しそして凍結乾燥した。
【図面の簡単な説明】
添付図面は家兎をフラクション■で免疫することにより
得られる抗血清と１Ｎ４Ｐ２−フラクション１〜■との
オクタロニ＝（（よるゲル拡散試験における免疫学的反
応を示すものである。 ゲゼルシャフト α＝　抗−ＭＰ２　家兎静

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １）下記の特徴を有する蛋白質ＭＰ２．すなわちａ）α
    ２−グロブリンとβ１−グロブリンとの間の範囲にある
    電気泳動移動度、 ｂ）　ｐＨ４，４〜５．０の範囲内にある等電点、ｃ）
    　７〜２０８以上の範囲内にある沈降係数日；。、ここ
    で主フラクション（■、１■、■およびＩ）はそれぞれ
    約７．９．１４および２０Ｓで沈降する、 ｃｌ）２０ＤＯｒ）Ｏ〜１００００００の範囲内にある
    分子量、ここで主フラクション（ｒｖ、ｎｒ、■および
    ｌ）は分子量約２１００［ＩＤ、４［１０［］［１０，
    ７５００ＱＯおよび１００００００を有する、ｅ）吸光
    ＊Ｅ”、几（２８０ｎｍ　）　Ｌ２．５±０．２、ｆ）
    炭水化物含量８．０±６．２チ（マンノース１．４±［
    Ｌ４チ、フコース０．４±０．２チ、ガラクトース１．
    ２士α４チ、Ｎ−アセチル−グルコサミン２．６±１８
    ％、Ｎ−アセチルーノイラミン酸２．４±１．４係）、
    および ｇ）７スノクラキン酸、グルタミン酸、ロイシン、バリ
    ン、セリンおよびグリシンが最も多量に存在するアミノ
    酸に属するアミノ酸組成。 ２）下記の特徴、すなわち ａ）　０１ｙ−グロブリンとβ、−グロブリンとの間の
    範囲にある電気泳動移動度、 ｂ）ｐＨ４，４〜５．０の範囲内にある等電点、ｃ）　
    ７〜２０８以上の範囲内にある沈降係数５２０ｗ’ここ
    で主フラクション（■、■、■およびＩ）はそれぞれ約
    ７．９．１４および２０Ｓで沈降する、 ｄ）　２０００００〜１ｏｏｏｏｏｏの範囲内にある分
    子量、ここで主フラクション（ｒｖ、ｍ、ｎおよびＩ）
    は分子量約２１００００．４．０００００．７５０００
    ０および１００００００を有する、ｅ）吸光率Ｅ”　（
    ２８０ｎｍ）　１２．５±０．２．１１ｆｆ＋ ｆ）炭水化物含ｆｆ１ａＯ±３．２％（マンノース上４
    ±０．４係、フコース０．４±０．２係、ガラクトース
    ｔ２±ｃＬ４チ、Ｎ−アセチル−グルコサミン２．６±
    １．８係、Ｎ−アセチル−ノイラミン酸２．４±１．４
    係）、および ｇ）　アスパラギン酸、グルタミン酸、ロイシン、バリ
    ン、セリンおよびグリシンがＪ″１号も多量に存在する
    アミノ酸に属するアミノ酸組成を有する蛋白質ＭＰ２を
    取得するに当り、生理食塩溶液を用いて抽出した胎盤物
    質を０．５〜５、！ｉ’／１００＋πｌの非イオン系洗
    浄剤を含有する溶液で抽出し、上澄液を水または緩＠溶
    液で透析し、得られる溶液中に含有される胎盤の可溶化
    された組織抗原を免疫吸着によりさらに濃縮し、得られ
    る溶液中の濃縮された蛋白質をデル沖過にかけそして比
    較的分子量の小さい他の蛋白質を実質上分離しそして場
    合によりまだ不純物として存在する随伴蛋白質を逆免疫
    吸着により除去しそしてＭＰｇ蛋白質を取得することを
    特徴とする方法。
JP59196963A 1983-09-23 1984-09-21 蛋白質ｍｐ２およびその製法 Granted JPS60105964A (ja)

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