JPS5980700A - ギノサポニンの分離法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はアマチャヅル（Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅ
ｎｔａ卿１１ｕｍＭ＆に：Ｌｎｏ　）のサポニンの構成
成分であるギノサボニン類およびその製造法に関する。

この発明のギノサボニン類は新規物質であって、式（Ｉ
）： 〔式中Ｒ１が〔β−ｐ−グルコピラノシル（ｌ→２）−
α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）〕−〕β−Ｄ−／
β−ｐ−グルコピラノシルは、Ｒ”が水素原子、β−ｐ
−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シル基、α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシル基もしくはβ−ｐ−グルコピラノシ
ル基であって、Ｒ１が水素原子もしくはヒドロキシ基で
あり、Ｒ１、Ｘ＞Ｅβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→２
）−β−Ｄ−グルコピラノシル基であるときは、Ｒｓが
α−−−ラムノピラノシル（１−６）−β−Ｄ−グルコ
ピラノシル基であって、Ｒ″が水素原子であり、 只１がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−
グルコピラノシル基であるときは、Ｒ１がβ−ｐ−グル
コピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基
、α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グル
コピラノシル基もしくはβ−ｐ−グルコピラノシル基で
あって、Ｒ１が水素原子であり、 Ｒ１がβ−Ｄ−グルコピラノシル基であるときはＲ１が
β−ｐ−キシノビラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコ
ピラノシル基もしくはα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→
６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基であって、Ｒ１が水
素原子であｐｌまたＲ″が水素原子であるときは、Ｒ１
がβ−ｐ−グルコピラノシル基、β−Ｄ−キシノピラノ
シル（１−６）−β−ｐ−グルコピラノシル基もしくは
α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−ｐ−グルコ
ピラノシル基であって、Ｒ８が水素原子もしくはヒドロ
キシ基である〕 で表わされる化合物である。

これらのキノサポニン類（Ｉ）の具体名を列挙すると次
の通りである。

２０Ｓ−プロトパナキサジオール−３−ｏ−（（β−ｐ
−グルコピラノシル（ｌ→２）−α−Ｌ−ラムノピラノ
シル（１→６））−β−ｐ−グルコピラノシド）−２０
−０−［β−ｐ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシド］−以下「ギノサボニンＡ」と称す
る− ２０８−プロトバナキサジオール−３−ｏ−（（β−ｐ
−グルコピラノシル（１→２）−α−Ｌ−ラムノピラノ
シル（１→６））−β−ｐ−グルコピラノシド）−２ｏ
−ｏ−Ｃα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕−以下「ギノサボニンＢ」と称す
る一 ２０Ｂ−プロトパナキサジオール−３−０−（Ｃβ−Ｄ
−グルコピラノシル（１→２）−α−ｂ−ラムノピラノ
シル（１→６））−β−ｐ−グルコピラノシド）　−２
０−０−β−ｐ−グルコピラノシド−以下［ギノサボニ
ン１！−１と称する−２０８−プロトバナキサジオール
−３−０−［β−ｐ−グルコピラノシル（１→２）−β
−ｐ−グルコピラノシド）　−２０−０−（α−も一ラ
ムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド
〕−以下「ギノサボニンＥ」と称する一２０Ｓ−プロト
バナキサジオール−３，２０−ビス−〇−〔α−Ｌ−ラ
ムノピラノシル（ｌ→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド
〕−以下［ギノサポニンＧ］と称する− ２０８−プロトバナキサジオール−３−０−（α−Ｌ−
ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−ゲルコピ２ノシ
ド）−２０−０−β−Ｄ−グルコピラノシドー以下「ギ
ノサボニンＫ」と称する−２０８−プロトバナキサジオ
ール−３−〇−β−ｐ−グルコピラノシド−２０−０−
（β−Ｄ−キシノピラノシル（１→６）−β−ｐ−グル
コピラノシド〕−以下「ギノサボニンエ」と称する−２
０８−プロトバナキサジオール−３−〇−β−ｐ−グル
コピラノシル−２０−０−［α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１−６）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−以下「ギノ
サボニンＪ」と称する一２０Ｓ−プロトパナキサジオー
ル−２０−０−（β−ｐ−キシロピラノシル（１→６）
−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−以下「ギノサポニンＭ
」と称する− ２０８−プロトパナキサジオール−２０−ｏ−（α−Ｌ
−ラムノピラノシル（１→６）−β−ｐ−グルコビラノ
シド〕−以下「ギノサポニンＮ」と称する− ２０３．２６−ヒドロキシプロトパナキサジオール−，
３−ｏ−（（β−ｐ−グルコピラノシル（１→２）−α
−Ｌ−ラムノピラノシル（１−６）１β−ｐ−ゲルコピ
２ノシド）−２０−ｏ−（α−Ｌ−ラムノピラノシル（
１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−以下「ギノサ
ポニンＯ］と称する− ２０Ｂ−プロトバナキサジオール−３−ｏ−（α−Ｌ−
ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシ
ド）−２０−０−（β−ｐ−グルコピラノシル（ｌ→６
）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−以下「プロギノサボ
ゲニンＡ２」と称する一プロトパナキサジオールー３−
ｏ−（（β−ｐ−グルコピラノシル（１→２）−α−Ｌ
−ラムノピラノシル（１→６））−β−Ｄ−グルコピラ
ノシｌ’）−以下「プロギノサボゲニンＡ　−Ｉ　Ｊ　
ト称する− ２０ｓ、２６−・ヒドロキシグロトバナキサジオール−
２０−ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシドー以下「プロギノ
サボグニンＯ１Ｊと称する−（以下余白、次頁に続く） ギノサボニン類（１）のうち、ギノサボニンＡ、Ｂ。

ＥＳＦ、Ｇ、Ｉ、ＪＳＫＳＭ、Ｎおｊび０はいずれもア
マチャノルのサポニンの構成成分であシ、例えば次の方
法によってアマチャヅルから抽出。

分離される。

先ず初めに、アマチャヅルを水または含水低級アルコー
ルで抽出する。　含水低級アルコールとしては５０　／
　％程度以下の含水メタノール、含水エタノール等が例
示される。　この抽出は加温または加熱下に行うのが好
ましい。　なお、原料のアマチャヅルは、抽出に先立っ
て予め細切し、あるいは常法によシ脱脂したものを用い
てもよい。

また抽出溶媒として含水像Ｍフルコールを用いた場合に
は抽出液を濃縮してアルコール分を除去したのち、適量
の水を加えて次の非イオン性吸着樹脂での処理に付すの
が好ましｈｏ 非イオン性吸着樹脂としては、スチレン−ジビニルベン
ゼン共重合体からなるハイポーラスなものが好ましく、
具体的にはアンバーライ）　ＸＡＤ　−２（米国ローム
アンドハース社Ｉ！り、セファデックシスＪ（２０（７
ア一マシヤフアインケミカルズ社製）などが繁用される
。　この処理は、吸着樹脂を充填し九カラムに上記で得
られた抽出液を通液して行うのが便利である。　この操
作によりサポニンがｍＷｔに吸着される。

次いで樹脂に吸着されたサポニンを低級アルコールで溶
出する。　溶出溶媒として用いられる低級アルコールと
してはメタノール、エタノール等が好ましい。　なお、
溶出に先立って予めカラムを水あるいは２０ンチ程度の
含水低級アルコールで洗浄するのが好ましい。

上記で得られた低級アルコール溶出液を次いでアルミナ
で処理する。　この処理も、アルミナを充填したカラム
を用いて行えば簡便である◇　この処理により、サポニ
ンはアルξすに吸着される。

なお、このアルミナでの処理に先立って上記の低級アル
コール溶出液を予め適宜濃縮しておいてもよい。

アルミナに吸着されたサポニンを次いで低級アルコール
または含水低級アルコールで、好ましくは５０１ｑ＆８
度Ｑ含水低級アルコールで溶出する０　この溶出液を濃
縮することにより、粗ギノサボニン類が得られる。

上記のようにして得られる粗ギノサボニン類は、ギノサ
ボニンＡ、ＢＸＥ、Ｆ、Ｇ、、Ｉ、Ｊ、Ｋ。

Ｍ、Ｎおよびθ等からなシ、これらの各成分は例えば次
の方法により分離、精製される。

すなわち、粗ギノサボニン類を水に溶解し、この水溶液
をスチレン系吸着樹脂、例えばサーノ（クロム（Ｓｅｒ
ｖａｃｈｒｏｍ　）　ＸＡＤ　−２（サーノ＜　（５ｅ
ｒｖａ　）社製〕で処理し、被吸着物質を４５−１００
％メタノール水溶液で溶出し、溶出液を濃縮後シリカゲ
ルカラムで処理する０ シリカゲルに吸着されたサポニンを次いでクロロホルム
・低級アルコール・水で好ましくはクロロホルム・メタ
ノール・水（６５：３５：ＩＯ下層）で溶出し、薄層ク
ロマトグラフィー（ＴＬＣ”）を指標とし、溶出液を７
２クシヨン１〜６に分画する０ フラクシ曹ン１〜３をそれぞれシリカゲルカ２ムで処理
し、次いでシリカゲルに吸着されたナポニンヲクロロホ
ルム・低級アルコール−６酸エチルＱ水で好ましくはク
ロロホルム・メタノール−酢酸エチル・水（２：２：４
：１ｆ層）で分画溶出する。

また、フラクション４および５もそれぞれシリカゲルカ
ラムで処理し、次いで、シリカゲルに吸着されたサポニ
ンを低級アルコール・酢酸エチル・水で好ましくはｎ−
ブタノール・酢酸エチル・水（４：１：２上層）で分画
溶出する。

また、フラクション６もシリカゲルカラムで処理し、次
いで、シリカゲルに吸着されたサポニンをクロロホルム
・低級アルコール中水で、好ましくハクロロホルム・メ
タノール・水（６５：３５：１０下層）で分画溶出する
。

上記で得られた各分画溶出液をｍ縮し、さらにＴＬＣの
結果を指標にして前記のシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーを繰返し、これらのギノサボニン類を各個別に分
離、精製すると、７ラクシヨン１からギノサボニンＭお
よびＮが、７ラクシヨン２からギノサボニンＩ、Ｊおよ
びＫが、７２クシヨン３かもギノサポニンＧが、フジク
クヨン４からギノサボニンＥおよびドが、フラクション
５からギノサボニンＢが、またフラクション６からギノ
サボニンＡがそれぞれ得られる。

また、ギノサボニン０は、粗ギノサボニン類をスチレン
系吸着樹脂で処理し、被吸着物質を３０〜４０嗟メタノ
ールで溶出し、溶出液を濃縮後シリカゲルカラムで処理
し、次いで吸着されたサポニンをクロロホルム・低級ア
ルコール・水テ、好ましくはりｐロホルムψメタノール
・水（６５：３５：１０下層）で分画溶出することによ
り、分離、精製できる。

さらにグロギノサボゲニンＡ、およびグロギノサボゲニ
ンＯ１はそれぞれギノサボニンＡおよびギノサボニン０
を酸素加水分解することによシ得られ、またプロギノサ
ポニンＡ−ＡＨはギノサボニンＡを５０チ酢酸で処理す
ることによ＃）製造できる。

また、ギノサボニンＦＳＧ、ＩＳＪ、に、ＭおよびＮは
他のギノサボニン類（Ｉ）を酵素加水分解することによ
っても製造できる。

このようにして得られるギノサボニンＭ　（Ｉ）は、す
べて新規であり、脂質分解抑制および脂質合成抑制作用
を有し、医薬として有用である。　そして、ギノサボニ
ン類（Ｉ）を医薬として用いる場合には、個々のサポニ
ンを有効成分として使用することができる。

次にこの発明を実施例により説明する。

実施例１ 乾燥したアマチャヅル全軍２Ｋｆを水３０ｔで熱時２回
抽出した。　両袖出液を合し、非イオン性吸着樹脂、ア
ンバーライトＸＡＤ　−２４ｔを充填し九カラムに通導
した。　吸着部を水１０ｆ１次いで２０チメタノール６
ｔで洗浄したのち、メタノール５ｔで溶出し、溶出液を
減圧下に蒸発乾固し、黄褐色粉末３７ｆを得九。　これ
をメタノール１ｔに溶解し、アルミナ３００ｔを充填し
九カラムに通導したのち、５０チメタノール約２ＯＬで
溶出した。　溶出液を減圧下に濃縮し、淡黄色粉末とし
て粗ギノサポニン２５ｆを得た。

粗ギノサボニン２０９を水１ｔに溶解し、スチレン系吸
着樹脂サーバクロムＸＡＤ　−２（サ−）＜社製）６０
０＋ｗｊを充填し九カラムに通導した。

吸着部を２０チメタノールより順次メタノール含量を増
しながら溶出し、４５〜１ｏｏｓメタノール溶出液を合
し、減圧下に蒸発乾固して淡黄色粉末１６９を得た。　
これをシリカゲル（３００ｆ）カラムクロマトグラフづ
−に付し、ＴＬＣを指標として、クロロホルム・メタノ
ール・水（６５：３５：ｌＯ下層）で１００−ずつ分画
溶出してフラクション１〜６を得、それぞれ蒸発乾固し
た０　これら７ラククヨン１〜３をそれぞれシリカゲル
（ｉｏｏｒ）カラムクロマトグラフィーに付し、クロロ
ホルム・メタノール・酢酸エチル・水（２：２：４：１
ｆ層）で分画溶出し、さらにこの操作を２回繰返し、フ
ラクション（１，１Ｆ）からギノサポニンＭ（６０１９
）およびギノサボニンＮ（ｘａｏＩＩＦ）を、フラクシ
ョン２（１，１ｆ）からギノサボニンＩ（６０ｑ）およ
びギノサボニンＪ（ｘｚｏｗＩ）ならびにギノサボニン
Ｋ（１１０ｗｇ）を、またクラクション３　（ＬＯｔ　
）からギノサポニンＧ（４５０１１１Ｆ）をそれぞれ得
た。

また７ラクシヨン４および５をそれぞれシリカゲル（２
００Ｆ）カラムクロマトグラフィーに付し、ｎ−ブタノ
ール・酢酸エチル・水（４：１：２上層）で分画溶出し
、さらにこの操作を２回繰返し７ラクシヨン４　（＆４
　ｆ　）からギノサボニンＤ（３５０ｑ）、ギノサボニ
ンＥ（１５００１ｖ）およびギノサボニンＦ（８０岬）
を、また７ラクシヨン５　（２，５ｆ　）からギノサボ
ニンＢ（２２０ｑ）およびギノサボニンＣ（２４０１１
ｖ）をそれぞれ得た。

さらに、７ラクシヨン６（０，９ｆ）をシリカゲル（１
００？）カラムクロマトグラフィーに付し、クロロホル
ム・メタノール・水（６５：３５：１０下層）で分画溶
出し、さらにこの操作を１回繰返してギノサボニンＡ　
（、５１０１１Ｆ）を得た。

各ギノサボニンの物性は後記の表１および表２に示す通
りである。

実施例２ ギノサボニンＡ２５０ｗｇを０．００５　Ｍ−燐酸２水
素ナトリウム水溶液（ｐＨ４，０）５０−に溶解し、こ
れに粗へスベリジナーゼ（田辺製薬株式会社製）　ｓ　
ｏ　０１ｑを加え、３７〜３８℃で６時間攪拌した。　
反応液をスチレン系吸着樹脂、サーバクロムＸＡＤ−２
（サーバ社＃り５０ゴを充填したカラムに通導し、水Ｉ
Ｌ次いで２０％メタノール２Ｌで洗浄したのち、メタノ
ール３００−で溶出した。

溶出液を減圧下に濃縮し、濃縮物をシリカゲル・カラム
・クロマトグラフィーに付し、クロロホルムやメタノー
ル中水（６５：３５：１０下層）で分画溶出して、ギノ
サボニンＦ（２０１１ｖ）、ギノサボニンＫ（１５ｑ）
およびグロギノサボニンん（３５ｖ）を得た。　ギノサ
ボニンＦおよびＫはＩＲおよびＮＭＲによシ、実施例１
で得られた標品と同定した。

また、プロギノサボゲニンＡ２の物性は後記の表１およ
び表２に示す通りである。

実施例３ ギノサボニンＡ１５０岬を５０僑酢＃１ｉｏ−に溶解１
７０℃で６時間攪拌したＯ　反応液をスチレン系吸着樹
脂、サーバクロム　ＸＡＤ　−２５０−を充填したカラ
ムに付して、プロサボゲニン両分約１００■を得た。　
これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ク
ロロホルム等メタノール・酢酸エチル・水（２：２：４
：１ｆ層）で分画溶出して、グロギノサボゲニンＡ−Ａ
）［３５〜を得た。　水晶の物性は後記の表１および表
２に示す通りである。

実施例４ ギノサボニンＡ４００ηを（１００５Ｍ−燐酸２水素ナ
トリウム水溶液（ＰＨ４，０）５０−に溶解した０　こ
れにセルラーゼ（シグマ社製）３００ηを加え、３７〜
３８℃で２４時間攪拌したＱ反応液を実施例２と同様に
処理して、ギノサボニンＫ（１１０岬）を得たＱ　水晶
はＩＲおよびＮＭＲにより、実施例１で得た標品と同定
した。

実施例５ ギノサボニンＢおよびＣの混合物１．４ｆをｏ−ｏｏｓ
Ｍ−燐酸２水素ナトリウム水溶液（ＰＨ４，０）２０　
ｏｗに溶解した。　これにセルラーゼ（シグマ社製）６
００岬を加え、３７〜３８℃で７時間攪拌した０反応液
をサーバクロム　ＸＡＤ−２（８０ｍ）のカラムで処理
して約１．１ｔの加水分解物を得た０これをシリカゲル
カラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム・メタ
ノール−酢酸エチル・水（２：２：４：１ｆ層）で分画
溶出してギノサボニンＫ（ｔ４０１ＩＦ）ならびにギノ
サボニンＦおよびＧを含む混合物（５５０ｗｉ）を得た
。　この混合物を再びシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーに付し、クロロホルム・メタノール・水（６５：３
５：１０下層）で分画溶出して、ギノサボニンＦ（５０
ｖ）およびギノサボ＝ｙＧ（ｔｓｏｑ）を得た０　これ
らのギノサボニンＦＸＧおよびＫはＩＲおよびＮＭＲに
より実施例１で得られた標品と同定した０ 実施例６ ギノサボニンＢおよびＣの混合物３００４を５０チ酢酸
１０ｍに溶解し、７０℃で６時間攪拌した。

反応液をサーバクロム　ＸＡＤ−２（５０ｍ）のカラム
に付して分画し、プロサボゲニン両分をシリカゲルカラ
ムクロマドグシフイーに付し１、クロロホルム・メタノ
ール会水（６５：３５：１０下層）で分画溶出してグロ
ギノサボゲニンＡ　−ＡＨ（３０η）を得た。　本品は
ＩＲおよびＮＭＲによシ、実施例３で得られた標品と同
定した。

実施例７ ギノサボニンＤおよびＥの混合物２２を０．００５Ｍ−
燐酸２水素ナトリウム水溶液（ｐＨ４，０）に溶解した
。　これにセルラーゼ（シグマ社製）１２を加え、３７
〜３８℃で２０時間攪拌した。

反応液をサーバクロム　ＸＡＤ−２（８０ｗｒｔ）のカ
ラムで処理して約１．６ｔの加水分解物を得た。

これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付シ、ク
ロロホルム・メタノール・酢酸エチル・水（２：２：４
：１下層）で分画溶出してギノサポ＝ｙＩ（３５５’ｒ
）、Ｊ（２５０ｗｇ）、Ｍ（８０１１ｖ）およびＮ（９
０η）を得た。　これらの各ギノサボエンはＩＲおよび
ＮＭＲによシ、実施例１で得られた標品とそれぞれ同定
し九− 実施例８ ギノサボニンＥ５１１１Ｐを０．００５　Ｍ−燐酸２水
素ナトリウム水溶液（ｐＨ４，ｏ）ｘ＊に溶解し、これ
にセル２−ゼ１０ｓｖを加え、３７〜３８℃で４時間攪
拌した。　反応液中にギノサボニンＪおよびＮが生成し
ていることを薄層クロマトグラフィーにより確認した。

実施例９ 実施例１で得た粗ギノサボニンをスチレン系吸着樹脂、
サーバクロム　ＸＡＤ−２で処理し、３０〜４０％メタ
ノールで溶出した。　溶出液を減圧下蒸発乾固し、淡黄
色粉末２ｆを得た。　これをシリカゲル（２００Ｆ）カ
ラムクロマドグ２フイーニ付シ、クロロホルム拳メタノ
ール−水（６５：３５：１０下層）で分画溶出し、さら
にこの操作を２回繰返し、ギノサボニンｏ（ｉｓｏｑ）
を得た。　本品の物性は後記の第１表およびＨ２表に示
す通りである。

ギノサポニン０１５０岬を０．００５Ｍ−燐酸２水素ナ
トリウム水溶液（１）Ｈ４０）３０ｍに溶解し、これに
セルラーゼ（シグマ社製）１５０岬を加え、３７〜３８
℃で２４時間攪拌した。　反応液を実施例２と同様に処
理して、プロギノサボゲニンＯ，（２０Ｗ　）を得た。

　本品の物性は後記の表１および表２に示す通りである
。

なお、実施例５および６において原料として使用したギ
ノサボニンＣの化学名は２０８−プｏ）パナギサジオー
ルー３−０−（β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−
β−Ｄ−グルコピラノシド）−２０−０−（β−Ｄ−グ
ルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド
〕であって、ルギンセノシドーＲｈ、　　と同定された
。　また、実施例７において原料として使用したギノサ
ボニンＤの化学名は２０Ｓ−プロトパナキサジオール−
３−０−（：β−Ｄ−ゲルコピ２ノシル（ｌ→２）−β
−Ｄ−グルコピラノシド）−２０−０−［β−Ｄ−キシ
ロピラノシル（１→６）−β−Ｄ−ゲルコピ２ノシド］
であって、ギンセノシドーＲｂ。

と同定された。

第　　１　　表 元素分析 サポニン化　　ｍｐ（’Ｃ）　　　分子式　　　理論値
　　実験値Ｃ％　Ｈ９ｉ　　Ｃ％　Ｈチ ギノサボニンＡ　　２０１−２０３　　Ｃ６ｏＨ１ｏ２
０２？−３Ｈ２０５５，０３８，３１５４，７８８，５
７ギノサボニンＢ　　１９６−１９８　　Ｃ６ｏＨ，ｏ
２０□６・３Ｈ２０５５，７１８，４２５５，６３８，
５６ギノサボニンＥ　　１９９−２０１　　Ｃ５４）Ｉ
９□０２□・３Ｈ２０５６，５２８，６１５６，３３８
，８６ギノサボニンＦ　　１９１−１９３　　Ｃ５４Ｈ
９□０□２＠３Ｈ２０５６，５２８，６１５６，３１８
，８６ギノサボニンＧ　　１９２−１９４　　Ｃ５４Ｈ
９□０□１虐３Ｈ２０５７，３３８，７３５７，ｉｌ　
８．７７ギノサボニンＩ　　１８３−１８５　　Ｃ４７
Ｈ８ｏ０１□・３Ｈ２０５８，１３８，９３５７，７７
８，７７ギノサボニンＪ　　１８９−１９１　　Ｃ４６
Ｈ８□０．７・４Ｈ２０５７，４７９，０４５７，５８
８，９２ギノサボニンＫ　　１８７−１８９　　Ｃ４８
Ｈ８□０，７・３Ｈ２０５８，５２９，００５８，４１
８，８９ギノサボニンＭ　　１５８−１６０　　Ｃ４□
Ｈ７ｏＯ，□・３／２Ｈ２０６２，９７９，４０６３，
２０９，６０ギノサボニンＮ　　１６５−１６７　　Ｃ
４□Ｈ７□０１□−２Ｈ２０６２，６６９，５２６２，
８９９，８１ギノサボニン０２０２−２０５Ｃ６ｏＨ１
ｏ２０□７・４Ｈ２０５４，２８８，３５５４，２８８
，３０グロギノサボゲニンＡ２　１８８−１９０　Ｃ５
４Ｈ９２０２□・Ｉ（２０５８，３６８，５３５８，３
２８，６０グロギノサボゲニン　　　１８３−１８５　
Ｃ４８Ｈ８２０，７・Ｈ２Ｏ６０，７４８，９２６０，
３８９゜０６Ａ−届 プロギノサボゲニン０．　　１６７−１６９　　Ｃ３６
Ｈ６□０．・Ｈ２Ｏ、６５，８２９，８２６６，０５９
，８５旋光度 −１，３８°（ｃ＝１．５　）−１８，１°３３７５，
１６４０，１１６０．１０７５１０４５．１０１５．９
８５ −３．３０°（ｃ＝１．５　）−４２，７°３３７５，
１６３５，１１６０．１０７０１０４５．１０１５．９
８５ ＋８．６１°（ｃ＝　１．４　）　＋９８．８°　３３
７５，１６４０，１１６０，１０７５１０４５．１０２
０．９８５ ＋７．７６°（ｃ＝１．７　）＋８９．０°３３７５，
１６３５，１１６５．１０７０１０４０．１０１５．９
８５ ＋１．６３０（ｅ＝２．０　）＋１８．４°３３７５，
１６４０，１１５５，１０６５１０４５．１０１５．９
８５ ＋１４．２°（ｃ＝１．５）＋１３８°３３７５，１６
３５，１１６０，１０７５１０３５．１０１５．９９０ ＋１３．３°（ｃ＝１．５　）＋１３３°３３７５．１
６４０．１１６０．１０７０１０４０．１０１５．９９
０ ＋１３．４°（ｃ＝１．８）＋１３２°３３７５，１６
３５．１１６５．１０７０１０４５．１０２０．９９０ ＋２５．７°（ｃ、＝１．０　）＋２０１°３３７５．
１６３５，１１６５．１０７５１０４０．１０２５．９
８５ −１．３１°ＣＣ＝２．５　）−１７，４°＆３７５，
１６４０，１１６０，１０７０１０４０．１０１５．９
８０ ＋４．２４°（ｃ＝１．５　）　＋４７．１°　３３７
５，１６３５，１１６５，１０７５１０３５．１０１５
．９９０ −　　−　３３７５．１６３５，１１６０，１０７０１
０４０．１０２０．９８０ ＋３１．７０（ｃ＝Ｚ９）＋２０８°３３７５，１６４
０，１１５０，１０７５１０３５．１０１５．９９０ 第　　２　　ら ＰＭＥ’、スペクトルデー サポニン化、　　　　　　　メチル　　　　　　　　Ｃ
−２４Ｈ１，２５ｓ、１カ１Ｂ、１．／１Ｂ、１．／１
８−タ アノメリック　プロトン ４．７８ｄ、　　　４よ１ｔｊｄ、　　　５．すｂα（
Ｊ＝７）（Ｊ＝７）（Ｊ＝７） サポニン名　　　　　　　　メチル ギノサボニンＪ　　　Ｉｆ）０．７８ｓ、０．９４ｓ、
０．９４ｓ、０．９４ｓ１２２ｓ　、　１５１ｓ　、　
１．６９ｓ　、　１．６９ｓ第２表続き ＰＭＲスペクトルデータ Ｃ−２４Ｈアノメリック　プロトン （Ｊ＝６）　　　　　　　　　　（Ｊ＝７）（Ｊ＝７）
次に本発明のギノサボニン類の薬理効果について述べる
。

人間を含めた哺乳動物は、外より取入れた脂肪とか１Ｍ
質の過剰分を脂肪細胞に変換して貯え、外からの補給が
ない場合これを脂肪分解して脂肪酸やグルコースに変え
てエネルギー源として利用する。　この脂肪細胞の脂肪
分解には、脳下垂体ホルモンである副腎皮質刺戟ホルモ
ン（ＡＣＴＨ）や副腎皮質ホルモンであるアドレナリン
が大きく作用し、分解を促進する。　逆に１脂肪細胞の
脂肪分解を抑制し、血液中の血糖量が増大しないように
する働きを持つものが、糖尿病薬として有名な膵臓ホル
モンのインシュリンである。　この発明によるギノサボ
ニン類は脂肪細胞に対して、インシュリン様の作用をも
ちＡＣＴＨの脂肪分解促進を抑制する。　その効果はギ
ノサボニンＢの抑制率１８チからギノサボニンＮの３８
チ抑制率まで、ＡＣＴＨの脂肪分解促進作用を、平均２
８％抑制する効力をもつ。

脂肪細胞におけるアドレナリンの脂肪分解促進作用に対
してのギノサボニン類の抑制力は全体的にＡＣＴＨに対
する場合に比べて弱いが、ギノサボニンＢおよびＥのみ
は３０チ以上のアドレナリン脂肪分解抑制効力をもつ０ また脂肪細胞は、グルコースを中性脂肪に変換して貯え
る作用を有するが、脂肪細胞のグルコースから中性脂肪
を合成する能力を上記ギノサボニン類はいずれも抑制す
る作用を有し平均約５０％の抑制力をもつ。

従って本発明のギノサボニン類は、脂肪＋ｍ胞における
脂肪分解抑制剤および脂肪合成抑制剤としての新しい脂
質代謝剤としての医薬品の用途が期待される。　次に本
発明のギノサボニン類の薬理試験結果を示す。

薬理試験結果 ■、試験用脂肪細胞の調整 使用動物は体重ｉ５０〜１ｓｏｔのｗｉｓｔｅｒ系雄ラ
ットを使用し、このラットから副キ丸脂肪組織をとり出
し、Ｒｏｄｂｅｌｌの方法ＣＭ、Ｒｏｄｂｅｌｌ：　Ｊ
−Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｍ、２３９，３７５　　（１９６４））によシ脂
肪細胞を得た。　この脂肪組織４ｔを小切片にし、Ｋｒ
ｅｂｏ　Ｒ４ｎｇｅｒ　Ｂｉｃａｒｂａｎａｔｅ　Ｂｕ
ｆｆｅｒ　　１０　ｔｄ　（アルブミン０．４ｆ、コラ
ゲナーゼ１１１Ｆ、グルコース５キを含む。　ｐＨ７，
４）に入れ３７℃で５０分間加温し、３００　ｒ、ｐｌ
ｍ、で遠心分離し浮上する脂肪細胞層を分取する。　こ
の脂肪細胞に前記緩衝液１０ｆｎｔ（ｐＨ７，４）を加
えよくふりまぜて洗い３００　ｒ、ｐ−ｍ−で３θ秒間
遠心分離する。　この操作を２回繰返し、脂肪細胞を完
全に洗い、この脂肪細胞を試験に用いた。　検体液はギ
ノサボニンＡ、Ｂ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｊ、に、Ｍ、Ｎ、
０およびグロギノサボゲニンＡ２．Ａ−ＡＨ，０１のそ
れぞれを水溶液とし、ｐＨ７，４に調整したものを用い
た。

■、試験方法および結果 １）　　ＡＣＴＨによる脂肪細胞の脂肪分解に及ばずギ
ノサボニン類の影響 ａ、試験方法 コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞をＫｒｅｂｓＲｉｎ
ｇｅｒ　Ｂ　１ｃａｒｂｏｎａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒ　（
ＫＲＢ　、　ｐＨ７，４）中に懸濁し、その溶液０．３
−（脂肪細胞１ｏｏＷｑ相当）。

ＡＣＴＨ溶液０．１ｍ（１μｔのＡＣＴＨを含む）、各
サポニン溶液０．１ｄ（５００μＶのサポニンを含む）
および５％アルブミン溶液０．３　ｄ　（ＫＲＢにとか
し、ｐＨ７，４に調整した溶液）を共栓試験管に入れ、
３７℃で２時間加温し、Ｄｏｌｅの方法（Ｖ、　Ｐ　。

Ｄｏｌｅ：Ｊ−Ｂｉｏｌ−Ｃｈｅｍ−，３５、１５０（
１９５８）　〕に従って遊離する脂肪酸を測定した。

すなわち、反応系にＤｏｌｅの抽出液３ゴを分取し、チ
モールブルー溶液１ゴを加える。　この溶液に窒素ガス
を吹込んで攪拌しなからｏ、ｏｏｓ規定水酸化ナトリウ
ム水溶液で滴定し、検量線よシ遊離脂肪酸量を測定する
。

なお、脂肪分解抑制率は次式により求められる。

Ａ　：　ＡＣＴ）１　（１μｆ／ｄ　）のみの添加によ
り生じた遊離脂肪酸量 Ｂ　：　ＡＣＴＨ（１μ２／−）＋サポニン（２０μ？
□）の添加により生じた遊離脂肪酸量 ｂ、試験結果 ＡＣＴＨによる脂肪細胞の脂肪分解に対するギノサボニ
ン類の抑制率の測定結果を第３表に示した。

第　３　表 無添加　　　　　　〇　　− ＡＣＴＨ（１ａｙ／ｙａ）　　　　　　８．４　０（−
）＋ギノサボニンＡ（２０μｒ／ｄ）　　６．１　　２
　７’　　　　（’）＋ｐ　　　Ｂ（ｔ　　　）６．９
　　１８（１）＋　＃　　Ｅ（１）５．９３０ ＜１＞十Ｉ　　　Ｆ（１）６１　２５ （Ｉ）＋　＃　　Ｇ（ｔ　　）５．８３１（＃）＋　＃
　　Ｉ（＃　）６．６２１（＃）＋　ｚ　　Ｊ（ｚ　　
）５．３３７（１）＋　＃　　Ｋ（＃　　）６．１２７
（’）＋　＃　　Ｍ（＃　　）６．４２４（＃）＋　＃
　　Ｎ（＃　　）５゜２３８ＡＣＴＨ（１μｆ／ｄ）＋
イノサポニン０（２０μｆ／ｄ）　　　５．６　　３　
３１　　（Ｉ）　＋ブロギノナ長外嘘’Ａ２（１）　　
　６．２　　２６１　　　（＃）　　＋　　　ｚ　　Ａ
−ＡＨ（ｚ　　）　　　６．３　　２５ｔ　　（Ｊｌ　
）　　＋　　　＃　　　０１（１）　　５−９　３０以
上のどと＜　ＡＣＴＨ１μｆ／ｄを脂肪細胞に作用させ
３７℃で２時間保つとき脂肪を分解して＆４μＥｑ／ｆ
の遊離脂肪酸を生成するが、ギノサボニン類をそれぞれ
２０μｆ／−添加すると上記のごとく明らかにＡＣＴＨ
の脂肪分解作用を抑制し、遊離脂肪酸の生成量が減少す
る。　その平均抑制率は２８％である。

２）アドレナリンによる脂肪細胞の脂肪分解に対するギ
ノサボニン類の影響 ａ、試験方法 コツゲナーゼ処理して得た脂肪細胞をＫｒｅｂｓＲｉｎ
ｇｓｒ　Ｐｈｏｓｂａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒ　（ＫＲＰ　
、　ｐＨ７，４）に懸濁し、その溶液０．３　ｄ　（脂
肪細胞１００岬相当）、アドレナリン溶液０．１ｄ（１
μｔのアドレナリンを含む）各サポニン溶液０．１ｍ（
２０μｆのサポニンを含む）および５チアルプミン溶液
０．５ｄ（ＫＲＰに溶解しｐＨ７，４に調整した溶液）
を共栓試験管に入れ、３７℃で２時間加温し、Ｄｏｌｅ
の方法（前記１）と同様）に従って遊離する脂肪ｒＲ量
を測定した。　すなわち反応系にＤｏｌｅの抽出液３ｇ
ｌ１．を加え５分間振とう後、ヘプタン３−を分取し、
チモールブルー溶液１−を加える。　この溶液を音素ガ
スで攪拌しながら０．００８規定水酸化ナトリウム水溶
液で滴定し検量線よシ遊離脂肪酸量を求める。

なお、上記抑制率は前記１）に用いた式と同じ式を用い
た。

ｂ、試験結果 アドレナリンによる脂肪細胞の脂肪分解に対するギノサ
ボニン類の抑制率の測定結果を第４表に示した。

（以下余白次頁につづく） 第　　４　　表 無添加　　　　　　　〇　　− アドレナリ７（ＡＤ）　　（１μ９Ａ）　　　　　　　
　１４．１　　　　　０ＡＤ（ｎμｔ／＊）＋ギノサボ
ニンＡ（２０μｆＡｎｔ）　　１３．４　　　　　５１
（１）＋ｔ　　　Ｂ（ｚ　　）　　９．１　　３５＃（
＃　）＋　　ｌ　　Ｂ（１）　　９．４　３３＃（＃　
）＋　　＃　　Ｆ（ｔ　）１３．４　　５Ｉ（、Ｉ　）
＋　　Ｉ　　Ｇ（＃　）１３．８　　２＃（＃　）＋　
　Ｉ　　Ｉ（１）１２．７　１０＃（＃　）＋　　Ｉ　
　Ｊ（１）１３．１　　７Ｉ（ｔ　）−１−ｔ　　Ｋ（
＃　）１３．８　　２’（＃）＋　　＃　　ＭＣＩ　）
１＆５　　４＃（＃　）＋　　＃　　Ｎ（＃　）１３．
３　　　ｇ＃（＃　　）＋　　Ｉ　　Ｏ（１）誹３．９
１１（ｌ　）十カ躯邦外ｙａ、（＃　　）　１３．０　
　　　ｇ＃（＃　）＋　　ｔ　　Ａ−ＡＨ（ｚ　）　１
２．４　１２Ｉ（ｚ　）＋　＃　　Ｏ（１）１２．６　
１１以上のごとくアドレナリンｌμｔ／ｖａｔを脂肪細
胞に作用させ３７℃で２時間保つとき、脂肪を分解して
１４６１μＥｑ／ｆの遊離脂肪酸を生じる。　このとき
ギノサボニン類をそれぞれ２０μｆ／−共存させるとい
ずれの場合も脂肪分解を抑制し、遊離脂肪酸の生成は減
少する。　しかしＡＣＴＨによる脂肪分解に対するギノ
サボニン類の抑制率と比べると小さい。　ただギノサボ
ニンＢおよびＥのみはＡＣＴＨに対するときより強い効
果を示す。

３）脂肪細胞におけるグルコースからの脂肪合成におよ
ぼすギノサボニン類の影響 ａ、試験方法 不法はカーボンに放射能マークした１４Ｃ−グルコース
を脂肪細胞に作用させ、脂肪合成にくりこまれ、中性脂
肪として脂肪細胞にとりこまれたグルコース量を放射能
カウント量により測定、その脂肪合成能に及ぼすギノサ
ボニン類の影響を試験する。

すなわち、コラゲナーゼ処理して得た脂肪細胞。

をＫＲＢ中に懸濁し、その溶液０．３５＋ｄ（脂肪細胞
１００！ｌｖ相当）、各サポニン溶液０．１ｍ（２０μ
ｆのサポニンを含む）、５％アルブミン溶液０．５ｄ（
ＫＲＢ　溶液Ｘ０ｍＭグルコースを含む、ｐＨ７，４）
、１４ｃ　−ｙルコ−スｉｉ　ｏ、ｏ　５１ｒＩｌ（ｏ
、ｓμＣｉ　、　ＫＲＰ溶液ｔ　ＰＨ７，４ｅ　１０　
ｍ　Ｍグルコースを含む）を共栓試験管に入れ、３７℃
で３０分加温し、Ｄｏｌｅ　の抽出液５１１！７！を加
え５分間振とり後、ヘゲタン３−および水２Ｗｔを加え
５分間振とぅする。　ヘプタン層３−を分取し、アルカ
リ性エタノール溶液（０，５規定水酸化ナトリウム溶液
、５０チエタノール溶液）を３−加え５分間振とぅする
。

エタノール層を１−分取し、トルエンシンチレーション
溶液１０−を加え、Ｓｋｉｐｇｋｉ　ｅｔ　ａｌの方法
〔Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｂｙｓ、Ａｃｔａ、　１０
６．３８６（１９６５）〕により測定した。

ｂ）試験結果 脂肪細胞におけるグルコースからの脂肪合成におよばず
ギノサボニン類の促進率を測定し第５表に示した。

第５表 な　　し　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
１５００　　　　１００ギノサボニンＡ（２０μｆ／ｌ
ｄ）　　　　　　８０１３　　　　３７Ｂ（＃　　）　
　　　１２３０８　　　５７Ｅ（＃　　　）　　　　　
１０２４８　　　　４８Ｆ（ｔ　　　）　　　　　１１
６２０　　　　５４Ｇ（１）　　　　　　８９２５　　
　　４２Ｉ（＃　　　）　　　　　１０５６４　　　　
４９Ｊ（＃　　　）　　　　　１１６５０　　　　５４
＃　　　　Ｋ（＃　　　）　　　　　１３６００　　　
　６３Ｍ（＃　　　）　　　　　１２６５０　　　　５
９Ｎ（１）　　　　　　９８７０　　　　４６０（＃　
　　）　　　　　８２６３　　　　３８角ギノ力ゲ式値
２（＃　　　）　　　　　１２６５０　　　　５９％式
％ 以上のごとくギノサボニン類の共存しない場合に比べ、
脂肪細胞におけるグルコースの中性脂肪としてのとり込
みは、はとんどが半分以下となり、ギノサボニン類がそ
れぞれ脂肪卸目胞におけるグルコースからの脂肪合成を
抑制する作用のあることは明らかである。

特許出願人　竹本常松

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アマチャヅルを水または含水低級アルコールで抽出
   し、抽出液を非イオン性吸着樹脂で処理したのち被吸着
   物質を低級アルコールで溶出し、この溶出液をアルミナ
   で処理したのち被吸着物質を低級アルコールまたは含水
   低級アルコールで溶出してギノサボニン類を単離するこ
   とを特徴とするギノサボニンの分離法。 ２、低級アルコールがメタノール又はエタノールである
   特許請求の範囲第１項記載の分離法。 ３、非イオン性吸着樹脂がスチレン−ジビニルベンゼン
   共重合体からなるバーイボ−ラスな樹脂である特許請求
   の範囲第１項記載の分離法。