JPS5976047A - （−）−１１−ｏ−メチル−１５−デオキシスパガリンおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は下記式（Ｉ） （ハ） で表わされる（−１−１１−ｏ−メチル−１５−デオキ
シスパガリン並びにその塩に関し、またそれらを合成す
る製造法に関する。

本発明者らは、先にバチルス属に属する菌株バチルス・
ラテロスポルスＢＭＧ　１　’６２−　ａＦ２（微工研
菌寄第５２３０号）の培養によって取得したスパガリン
が各種の動物移植癌に対して優れた制癌効果を有するこ
とを発見した（ザ・ジャーナル・オプφアンチビオチク
ス、３４巻、１６１９頁、１９８１年）。このスパガリ
ンの化学構造は、次式（ｍ） で表わされる（１５８）−１−アミノ−１９−グアニジ
ノ−１１，１５−ジヒドロキシ−４，９゜１２−トリア
ザノナデカン−１０，１３−ジオンであり、１１位の立
体配置は未だ決定されていないが、左旋性の比旋光度を
持つエピマーである（ザージャーナル・オブ・アンチビ
オチク７３４巻、１６２２頁、１９８１年）。寸だ、構
造式（ｍ）の化合物は、（８１−’７−ゲアニジノー；
３−ヒドロキシヘプタンアミドとグリオキシルスペルミ
ジンとの縮合によっても合成され、Ｋｎら」ｔだ１１位
のエピマーの混合物は天然型の（−）−スパガリンと非
天然型の（制−スパガリンに分Ｉｆ！１１された（ザ・
ジャーナル・オプ・アンチビオチフス、３４巻、１６２
５頁、１９８１年）。

本発明者らは、天然スパガリン或いは合成スパガリンの
誘導体に関し、鋭意研究を進めた結果、Ｈ−スパガリン
の１１位の水酸基の立体配置を保持したｉｔメチル化し
、次いで１５位の水酸基をデオキシ化することにより製
造した前記Ｃｌ１式で表わされる（−１−１１−ｏ−メ
チル−１５−デオキシスパガリンが優れた制癌効果を有
することを発見し、さらに−一スバガリンと比較して化
学的安定性が著しく改善されていることを見い出し、本
発明を完成した。

本発明による（−１−’　１１−　ｏ−メチル−１５−
デオキシスパガリンの理化学的性質および生物学的性質
は次の通りである。

（１）理化学的性質 本発明により得られる制癌性物質である日−１１−０−
メチル−１５−デオキシスパガリンは遊離塩基の状態で
は不安定なため、通常の方法により酸を加えて任意の酸
付加塩とすることが好ましい。付加する酸としては、塩
酸、リン酸、ホウ酸などの無機酸または酢酸、クエン酸
、酒石酸、グルタル酸などの有機酸が用いられる。

（−１−１’　１−　ｏ−メチル−１５−デオキシスパ
ガリン三塩酸塩は、白色吸湿性の粉末で、明確な融点を
測定できない。＠八”　−：３ｎ　−＋。

（Ｃ１，水）を示し、元素分析値は、（４０２７％、Ｉ
（８，’５４％、Ｎ゛１８．１３％、ＣＩ　’Ｉ　り、
６９％でＣｌ８　Ｈ３９Ｈ７０３・３ＨＣＩ・３／Ｆｌ
１２０の理論値（Ｃ４０，１９％、Ｈ８，４３％、Ｎ１
８．２３％、　（：Ｉ　＋　！１．７７％）に一致した
。赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠として測定）：　３
４２０．２９５０゜１６５０．１５２０，１４６０，１
３６０，１１９０゜］　Ｉ１６０．　］　０９０ｆｆｉ
−”。プロトンＮ　Ｍ　ｒ（、スペクトル（重メタノー
ル中ＴＭ’Ｓを基準物質として測定）＝δ値１．２〜２
．０　（Ｃｌ−Ｉ２　Ｘ　６　）　、　２．０〜２．５
（ＣＨ２Ｘ２）、２．９〜３．４　（ＮＣＩ（２ｘ５　
）、　３．３７　（ＯＣＨ３）　、　ｊ、２６　（Ｃｌ
−１）。高速液体クロマトグラフィー（以下１−Ｉ　Ｐ
　Ｌ　Ｃと略す）（カラム：ヌクレオシル５Ｃｔｓ　４
１×１５０ｍｍ、　　溶媒ニアセトニトリル−０，００
５Ｍペンタンスルホン酸ナトリウム−１−０，０１ＭＮ
ａ２Ｔ−ＴＰＯ４（ｐｉ−１３）＝９　：　９１゜流速
：　０．８　ｍｌ／　ｍｉｎ、検出２０５　ｎｍ）でＲ
，ｔｌ　３．７１　ｍｉｎに単一ピークを示した。

Ｈ−１１−０−メチル−１５−デオキシス＝５− パガリンはＨ−スパガリンと比較して化学的安定性にお
いて優れている。Ｈ−１１−ｏ　−メチル−１５−デオ
キシスパガリン三塩酸塩の６０℃で４時間保温した時の
残存率（％）を（Ｈ−スパガリン三塩酸塩のそれと比較
した結果を第１表に示す。本結果から明らかなように、
−一スパガリンはｐＩ−Ｉ　５以上のアルカリ側では特
に不安定であったが、Ｈｌｌ−ｏ−メチル−１５−デオ
キシスパガリンは、ｌ）Ｈ４〜８では分解が全く見られ
ず、ｐＨ９〜１０のアルカリ条件下でも極めて安定であ
った。

６− 第１表 残存率の測定はトＴ　Ｐ　Ｌ　Ｃを用いた。

カラム：ヌクレオシル　５０１Ｂ 溶　媒：Ｈ−スパガリンの場合 アセトニトリル−０，０１Ｍペンタンスルホン酸すＩ−
リウム＋　０．０１　ＭＮａ２■−ＩＰＯ４（ｐ＋−１
３）＝６：９４ （−１−１１−ｏ−メチル−１５−デオキシスパガリン
の場合アセトニトリル−０，００５Ｍペンタンスルホン
酸すトリウム＋０．０１　ＭＮａ２ＨＰＯ４（ｐ’ｌＴ
３　）＝９：９１ （２）生物学的性質 本発明の（−１−１１−０−メチル−１５−デオキシス
パガリンは著量な制癌作用を有し、下記の如く、癌の移
植をうけたマウスに対して顕著な延命効果を示す。

雄性Ｂ　Ｄ　Ｆ、系マウス（５週令）にマウス白血病Ｌ
　１２１０細胞１０万個を腹腔内に接種し、続いてその
当日より１日１回６日間連続で、生理的食塩水に溶解し
た試料を腹腔内に投与し、３０日間飼育観察して延命率
〔Ｔ／Ｃ×１００−（処理群の平均生存日数／無処理群
の平均生存日数）Ｘ１００Ｉを求めた。Ｈ−１１−ｏ−
メチル−１５−デオキシスパガリン三塩酸塩の試験結果
なＨ−スパガリン三塩酸塩についての試験結果とともに
第２表に示した。

寸だ、（−１−１１−ｏ−メチル−１５−デオキシスパ
ガリンの毒性は比較的弱く、優れた制癌剤として使用さ
れうるものである。

第２表 　９一 本発明の化合物は、−一般式Ｉ （式中Ｘ１は保護されたアミン基、Ｘ２は保護基を示す
）で表わされるＨｌｌ−ｏ−メチルスパガリンの誘導体
の１５位の水酸基をデオキシ化し、次いで保護基を脱離
することを特徴とする次式（Ｉｌ に） で表わされる←ｌ−１１−０−メチルー１５−デオキシ
スパガリンまたはその塩の製造法にある。

本発明の原料となる一般式Ｉ （式中、　ｘ’　、　ｘ２は前記に同じ）で表わされる
（−１−１’１−　ｏ−メチルスパガリンの誘導体は次
式冊ａ） １０− で表わされる一一スバガリンの１位のアミン基および４
位イミノ基を保護し、−一スパガリンの誘導体とした後
、１１位の水酸基を、立体を保持したままメトキシ基に
変換することにより合成することができる。

保護基としては、従来ペプチド合成などで常用されてい
るアミノ保護基を使用しうるが、ここでは、保護基の導
入方法、除去方法が簡単ナペンジルオキシカルボニル基
やバラメトキシベンジルオキシカルボニル基などのアラ
ルキルオキシカルボニル基が軽重しい。Ｈ−スパガリン
にこれらのアミン保護基を導入するには、公知の方法、
例えば活性エステル法を用いることが、有利である。一
般にこれらの方法では、Ｈ−スパガリンの有するグアニ
ジノ基とは反応しない。

１１位の水酸基を異性化することなくメトキシ基に変換
するためには、例えばジアゾメタンを作用させる方法を
用いることができる。

Ｈ−スパガリンの誘導体に無水塩化メチレンなどの溶媒
中、ジアゾメタンの塩化メチレン溶液を反応させる。本
反応はジアゾメタンだけでも進行するが、触媒として、
三フッ化ホウ素、塩化アルミニウム、ホウフッ化水素酸
、二酸化セレンなどのルイス酸触媒の存在下で反応が促
進される。反応温度は通常−１０℃−１０℃で、軽重し
くは０℃であり、反応時間は温度によって異るが、通常
２時間〜８時間である。

一般式（ｍで表わされる（−１−１１−ｏ−メチルスパ
ガリンの誘導体の１５位の水酸基のデオキシ化は常法に
よって行うことができる。

例えば、一般式［有］の有するβ−ヒドロキシアミド構
造に着目し、１５位の水酸基を脱水し、α、β−不飽和
アミド構造をもつ次の一般式（） （式中、ｘｌ　、　ｘ２は前記に同じ）で表わされる＠
−１１−ｏ−メチルー１５−デヒドロキシスパガリンの
誘導体を得、次いで１４．１５位の二重結合を還元する
ことにより達成される。

より具体的に説明すると、１５位の水酸基を脱水するた
めに、中性条件下緩和な条件で行える公知の脱水方法、
例えば、塩化銅（１価または２価）の存在下、ジシクロ
へキシルカルボジイミドを作用させる。ジシクロへキシ
ルカルボジイミドは過剰に用いる方が、反応時間を短縮
できる。溶媒としては、原料化合物の溶解性よりＤＭＦ
が好１しく、反応温度は通常室温〜１００℃であり、反
応時間は、温度により異るが通常数時間〜数日である。

一般式（ＩＶ）で表わされる（−１−１１−０−メチル
−１５−デヒドロキシスパガリンの誘導体の１４．１５
位の二重結合の還元は常法により行うことができる。例
えば、接触還元を行うことにより達成される。この際、
アミン保護基がアラルキルオキシカルボニル基でアｈ１
３− ば、この接触還元により同時に脱保護され、←ｌ−１１
−ｏ−メチルー１５−デオキシスパ合溶媒が好ましく、
触媒としては、パラジウム、白金などが使用されつる。

！、た塩酸、酢酸などの酸を加えることにより、反応が
促進されうる。アミン保護基がアラルキルオキシカルボ
ニル基以外の場合は、そのアミン保護基に応じて公知の
脱保護の方法を用い除去できる。

本発明で得られる←ｌ−１１−ｏ−メチルー１５−デオ
キシスパガリンの精製は、カルボキシル基を活性基とす
る陽イオン交換体によるカラムクロマトグラフィーを行
うのが好まシく、例えば、ＣＭ−セファデックス■　Ｃ
−２５（Ｎａ型、スウェーデン、ファルマシア製）をつ
めたカラムを用い、水−１Ｍ塩化ナトリウムによるグラ
ジェント溶出することが推奨される。

１４− 次に実施例により本発明を説明するが、本発明はこれら
の実施例に限定されるものではない。

実施例１゜ ｆ−１−１−Ｎ、４−　（ベンジルオキシカルボニル）
−］　］−］］０−メチルスパガリン塩の合成（イ）（
−１−１−Ｎ、４−ビス（ペンジルオキシ力ルポニルス
バガリン： （＠−スパガリン三塩酸塩２．３７（４，４８ミリモル
）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド１１ｍ１と水１１ｍ
１の混合液に溶がし、水冷下トリエチルアミン１．２５
ｍ１（８，９６ミリモル）を加え、さらＫＮ−ベンジル
オキシカルボニルオキシコハク酸イミド２．２４　Ｐ（
８，９７ミリモル）をＮ、Ｎジメチルホルムアミド１エ ５℃で１５時間攪拌した。反応液を減圧σ１３縮して得
た残渣を０．　５　ＭＮａ　Ｃ１　１　０　ｍｅに溶が
し、０．５ＭＮａＣｌで平衡化したダイヤイオン０１目
）−２０（三菱化成製）４００ｍｌのカラムにかけ、０
．５ＭＮａ　Ｃ１　１　４３、水１．．ｅで洗浄後、メ
タノールで溶出しな（１５１ずつ分画）。分画２］−３
０を合して濃縮乾固し、白色粉末状のｆ−１−１−Ｎ．
４−ビス−（ベンジルオキシカルボニル）スパガリン塩
酸塩２．８７ｐを得た（収率８２％）。

＠Ｉ％５−１１°（Ｃ１，水）。プロトンＮＭＲ，スペ
クトル（重メタノール中測定）δ値：１．３〜２、０　
（　ＣＨ２ｘ６　）、　２．３　８　（　Ｃｌ−４２　
）、　２．９〜３．４　（　Ｎ　ＣＨ２Ｘ５）、　４．
０（ＣＩ］）、　５．０４（ＣＨ２）、５．０７（ＣＨ
２）、５．５６（ＣＨ）、７．３０（ＣａＩ（ｓＸ２）
。

（口ｌ　　Ｈ−１−Ｎ，４−ビス−（ベンジルオキシカ
ルボニル）　−　１　１　−　ｏ−メチルスパガリン：
前項（イ）で得られたＨ−１−Ｎ，４−ビス−（ベンジ
ルオキシカルボニル）スパガリン塩酸塩５、８　６　ｍ
ｇ　（　０．７　５ミリモル）を塩化メチレン１２ｍ１
に溶かし、水冷下、３７ノ化ホウ素−エーテル錯ｈｘ　
ｏ．　１ｍｇを塩化メチレン４　ｍｌに溶かした溶液３
．７　８ｍ１（　０．７　５ミリモル）を加えた。次い
でジアゾメタンの塩化メチレン溶液を３０分がら１時間
間隔に１　ｍｌずつ合計９ｍ７！加えた。反応開始後、
３時間で攪拌を市め、希酢酸数滴を加え減圧濃縮し、残
渣を５０％メタノール水ニー１　ｍｌに溶かし、ダイヤ
イオＪ’　Ｉ（Ｐ−２　０　（　１　０　０　ｍｌ　）
のカラムにかけ，１０％メタノール水３　０　０　ｍｌ
で溶出後、メタノールで溶出した（１５７ずつ分画）。

分画２５−３０を合して減圧濃縮して得た残渣（４ｏＯ
ｍｙ）をシリカゲル６０（メルク社ＦＪ）４ｏｙのカラ
ムにかげ、１０％メタノール−クロロホルムで溶出し、
Ｊ（ＰＬＣ　（カラム：ヌクレオシル５　ＣＩ８＋　４
０Ｘ１　５０ｍｍ．溶出液ニアセトニトリル−〇、Ｏ　
Ｉ　Ｍ　（ＮＨ４）２Ｉ（ＰＯ４−　Ｉ　：　１流速：
　０．　８　ｍｌ　／　ｍｉｎ　）で、Ｒ，ｔ　１　０
．４　７　ｍｉｎ　ＶＣ　Ｕ　Ｖ吸収（２２０ｎｍ）を
示す分画な集め、減圧濃縮して、白色粉末状の←Ｉ−　
１　−　Ｎ，４−ビス−（ベンジルオキシカルボニル）
　−　１　１　−　０−メチルスパガリン塩酸塩１４３
ｍｇを得た（収率２６．４％）。

＠：”　−　１　４．　４°（Ｃ１，メタノール）。プ
ロトンＮＭＲスペクトル（重メタノール中測定）δ値＝
１．３〜２．０　（　ＣＨ２　Ｘ６　）、　２．４　２
　（　ＣＩ（２　）、　２．９〜３４（ＮＣＩ−１２Ｘ
　５　）、　３、３　７（ＯＣＨ３　）、　４．０　（
ＣＩ（）、　５．０３１７− （ＣＩ−１２　）、　　５．０８（ＣＩ（２　）、　　
５．３４　＜ｃＨ）：　　７．２９（Ｃ６Ｉ−Ｉ５Ｘ　
２　）。

実施例２。

（−１−　１　１−ｏ−メチル−１５−デオキシスパガ
リン三塩酸塩の合成 （イｌ　　ｆ−１−１−Ｎ，４−ビス−（ベンジルオキ
シカルボニル）　−１　１　−　ｏ−メチル−１５−デ
ヒドロキシスパガリン： 実施例１で得た←ｌ−　１　−　Ｎ，４−ビス−（ベン
ジルオキシカルボニル）−１１−ｏ−メチルスパガリン
塩酸塩１３４．８〜（０．１８７ミリモル）をＤＭＦｌ
．２ｍ／！に溶かし、ジシクロへキシルカルボジイミド
１９２．９〜（０．９３５ミリモル）とＣｕ　Ｃ１　５
．　６　ｍ９を加え、７０℃で３時間加温した。

冷却後、析出したＤＣ−尿素を炉去し、涙液を減圧濃縮
して得た残渣を３０％メタノール水５ｍｌに溶かし、ｐ
Ｈを７に調整後、ダイヤイオンＨＰ−２０（８０ｍｌ）
のカラムにかけた。水３　０　０　ｍｌ、１０％メタノ
ール水３　０　０　ｍｅで洗浄後、メタノールで溶出し
た。坂口反応陽性画分１８− を集め、減圧濃縮して（−１−１−Ｎ、４−ビス−（ベ
ンジルオキシカルボニル）　−１１−ｏ−メチル−１５
−デヒドロキシスパガリン塩酸塩の粗生成物１１４■を
得た。プロトンＮ　Ｍ　１（・スペクトル（重メタノー
ル中測定）において、δ６．０２と６８７にオレフィン
プロトンのシグナルを示す。

（口ｌ　　（−１−１１−ｏ−メチル−１５−デオキシ
スパガリン： 前項（イ）で得た（−）　−１−Ｎ、４−ビス−（ベン
ジルオキシカルボニル）−１１−ｏ−メチル−１５−デ
ヒドロキシスパガリン塩酸塩の粗生成物１１４ｍ９をエ
タノール５　ｍｌと水５　ｍｌの混合液に溶かし、１Ｎ
−塩酸０．３２　ｍｌと１０％パラジウム−炭素５０　
ｍ９を加え、水素気流中、室温で１．５時間攪拌した。

触媒をＥ去し、Ｐ液を減Ｆ［濃縮して得た残渣をＣＭ−
セファデックスに−２５（Ｎａ型）１００ｍｌのカラム
にかけ、水５００ｍ１−Ｉ　ＭＮａＣｌ　５００ｍｌに
よるグラジエンＩ・溶出を行った（１０Ｉずつ分画）。

分画６９−７４を合して減圧濃縮し、残渣をメタノール
５　ｍｌで３回抽出した。この抽出液をセファデックス
ＬｔＴ−２０（１５０ｍ１）のカラムにかけ、メタノー
ルで溶出し脱塩した（５ｇ−ずつ分画）。分画１６−２
１を合して濃縮乾固し、白色粉末状の（−１−１１−ｏ
−メチル−１５−デオキシスパガリン三塩酸塩１７．４
ｍｇを得た（全収率１６．７％）。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記式（Ｉ） （へ） で表わされるＨ　−１１−ｏ−メチル−１５−デオキシ
   スパガリン並びにその塩。
2. （２）下記一般式ｌ （式中Ｘ゛は保護されたアミン基、Ｘ２は保護基を示す
   ）で表わされる←ｌ−１１−ｏ−メチルスパガリンの誘
   導体の１５位の水酸基をデオキシ化し、次いで保護基を
   脱離することを特徴とする次式（Ｄ で表わされるＨ　−１１−ｏ−メチル−１５−デオキシ
   スパガリンまたはその塩の製造法。