JPS5931786A - ホスフアチジルコリン型リン脂質化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はリン脂質化合物に係り、特に、重合性の基を
有するホスファチジルコリン型リン脂質化合物に関する
。

現在、医薬物質や酵素などを微小なカプセルに封入して
医薬品として提供する試みが種々なされている。

このようなマイクロカブセル化の初期の方法は、乳化法
による高分子化合物のカプセル化（特公昭４５−２７５
７号および特公昭５０−１７９５０号）や界面重縮合反
応による重合体（ポリアミドなど）の生成を伴なったカ
プセル化（特公昭５３−７３９５号および特公昭５３−
７３９６号）である。しかしながら、これらの方法では
、例えばカプセル化材料である重合体の著しｂ毒性やそ
の合成過程で必要な有機溶媒（例えば、ジオキサン、ア
セトン、キシレン、ベンゼン）がカプセル中へ残存する
ことによる毒性、さらＫはカプセルの粒径が大きい（数
μｍ〜１０００μｍ）ために血栓などの障害を引き起し
易因という問題がちり、得られたカプセルを医薬品とし
て使用するには問題があった。

ところで、医薬物質や酵素をマイクロカプセルに封入す
る主たる目的は、主として、生体内で不安定な医薬物質
や酵素の活性を長時間保持させ、その効果を長時間持続
させることである。

したがって、特に医薬品としてマイクロカプセルを使用
することを目指す場合、既述の従来技術の問題点を含め
て次の条件が特に重要となる。すなわち、 （１）　　マイクロカプセル粒径をより微小化（数μｍ
以下）すること、 （２）生体内におけるカプセルの安定性を向上させるこ
と、および （３）　　カプセル材料の毒性を低下させることである
。

このような条件をかなりの程度に満足する技梠 術として、生体膜の成分である各種のリン葉質が水中で
微小な球状の集合体（リポソーム、粒径０．０５〜１０
μｍ）を形成することを利用して、重合性の基を有する
リン脂質化合物を合成し、これによって形成されるリポ
ソームをそのままの状態を保って重合し、マイクロカプ
セルを得る技術が、最近、報告されている。例えば、Ｓ
、ＩＬ、　Ｒｅｇｅｎ他によるＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　
ｔｈｅ　ＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌ　５ｏｃｉ
ｅｔｙ　、　１０４　、７９１〜７９５（１９８２）（
以下、文献（１）という）　、Ｈ−Ｈ−Ｈｕｂ他による
Ａｎｇｅｗａｎｔａ　Ｃｈｅｍｌｅ　Ｉｎｔｅｒｎａｔ
ｉｏｎａｌＥｄｉｔ１ｏｎ英語版、１９，９３８〜９４
０（１９８０）（以下、文献（ＩＩ）という）、および
Ａ、ＡｋｉｍｏｔｏらによるＡｎｇｅｗａｎｔｅ　Ｃｈ
ｅｍｌｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｄｉｔｉｏｎ
英語版、２０．９０〜９１　（１９８１）（以下、文献
価という）参照。

これら文献（Ｉ）〜（２）には次に示す重合性リン脂質
化合物が記載されている。

文献（Ｉ） および 文献（ＩＩ） 一５＝ および １ − 文献（１） １ 〇− これら合成リン脂質化合物は水中でリポソーム（あるい
はベヒクル）を形成する。このリポソームをそのｔまの
状態でマイクロカプセル化させるには、各化合物におけ
る重合性の基（す６一 なわち、文献（１）の化合物ではビニル基、文献（ＩＤ
の化合物ではジアセチレン基、文献価の化合物ではブタ
ジェン基）を重合させる必要がある。

文献（Ｄの化合物の重合を開始させるには、適当な重合
開始剤（例えば、アゾビスインブチロニトリル等のアゾ
系開始剤、過酸化ベンゾイル等の有機過酸化物系開始剤
、過硫酸カリウム等の開始剤）を加えることが必要であ
る。したかって、文献（１）の化合物は、これを重合さ
せた場合、重合開始剤断片が残存し、その毒性が問題と
なってくる。なお、この化合物は紫外線照射によっても
重合可能であるが高いエネルギーを必要とし、よシ短波
長光を必要とする。

文献（ｎ）および［相］の化合物は紫外線の照射により
重合するので、文献（１）の化合物にみられるような問
題は生じない。しかしながら、その重合丈メｈ大’　（
［）　σ）イビ、パ≧々勿　７“１１１、−ＣＨ＝ＣＨ
−ＣＨ＝ＣＨ−重合　−Ｃ）（−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ−／ 等の形式で進行し、得られるカブセル比重合体中に多数
の不飽和結合が残る。不飽和結合部位は生体内において
代謝を受は易く、その代謝物（ビニル基のエポキシ化物
等）が著しく毒性の高いものとなる可能性がある。

したがって、この発明の目的は、重合開始剤の添加を必
要とせずに重合してマイクロカプセル化することができ
、しかも重合して得られるマイクロカプセル重合体中に
不飽和結合が残存しないタイプの合成リン脂質化合物を
提供することである。

この発明罠よれば、一般式 ％式％ の正の整数、およびｔは１３ないし２１の正の整数）で
示されるホスファチジルコリン型リン脂質化合物が提供
される。

一般式囚で示されるこの発明のリン脂質化合物を製造す
るには、まず一般式 （ただし、ｍおよびｎは既述のとおり）で示される酸ク
ロリドを一般式 （ただし、Ｌは既述のとおシ）で示されるグリセロール
誘導体と縮合反応させて一般式を得る。この縮合は式（
Ｂ）と式（９）の化合物モル比０．５：１ないし３：１
の割合で用い、適当量の脱塩酸剤（ピリジン等）を含有
する適当な溶媒（例、ｔば、無水のテトラヒドロフラン
、クロロホルム、ジクロルメタン等）中で０℃ないし３
０℃の温度でおこなう。反応時間は、通常、工ないし２
０時間である。

ついで、式（ハ）で示される縮合生成物をＶａｎ　Ｒ。

Ｈ１ｒｔ他によってＰｈａｒｍ、　Ａｃｔｓ　Ｈ＠ｌｖ
、　＋　３３　。

３４９　（１９５８）に記載されている方法に準じて次
に示す工程で反応させることによって目的とする一般式
（４）の化合物が得られ石。

１０− 縮合生成物（Ｄ）＋Ｃｔ２−ＰＯＣＨ’２ＣＨ２Ｂｒ（
２）Ａ安ＣＨ３ＣＯＯ− なお、式（Ｂ）で示される酸クロリドのうち、ｍが０の
ものは、Ｙ、　Ｉｗａｋｕｒａ他によってＢｕｌｌ。

Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　、　Ｊａｐ、　＋　４±、１８
６〜１９１（１９６８）に記載されている方法に従って
ｐ−カルボキシスチレンと塩化チオニルとを反応させる
ことによって合成できる。また、式（Ｂ）で示される酸
クロリドのうちｍが１の場合は、まずＸ３．８ｖａｎ他
によってＯｒｇａｎｌｃ　５ｙｎｔｈｅａＬｓ＋２．２
７６（１９５０）に記載された方法を改良して得られる
式 ％式％ （） （ただし、ｎは既述のとおり、Ｒはメチル基、エチル基
、プロピル基捷たはブチル基）で示されるアルカンジカ
ルボン酸モノエステルｅモノクロリドを無水塩化アルミ
ニウムの存在下に臭化エチルベンゼンと反応させて式 （ただし、ｎおよびＲは既述のとおシ）で示される化合
物を得る。ついでこれを過剰のアルカリ（例えば、水酸
化ナトリウム、水酸化カリウム）とアルコール中で加熱
反応させた後、塩酸等で酸性化して式 で示される化合物を得る。これを塩化チオニルまたはシ
ーウ酸クロリド等と反応させることによって式（Ｂ）で
示される化合物が得られる。

一般式（Ｃ）で示されるグリセロール誘導体はり。

Ａｒｎｏｌｄらによって、Ｌｉｅｂ、　Ａｎｎ、　Ｃｈ
ｅｍ、ｅ　７０３　ｔ２３４〜２３９　（１９６７）に
記載されている方法を改良して、２−フェニル−５−ｍ
−ジオキｋｙルキルプロミドを反応させた後、エタノー
ル中で硫酸により加水分解することによって得られる。

なお、一般式（Ｃ）で示されるグリセロール誘導体のう
ちｔが１３．１５，１７．１９または２１のものを合成
するための原料であるアルキルプロミドは市販品として
安価に入手できるので都合がよい。

この発明のホスファチジルコリン型リン脂質化合物は、
天然リン脂質からリポソームを得るための一般的な方法
（例えば、Ｄ、Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏａ他によ
るＢｌｏａｈｉｍｌａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙａｉａ　Ａ
ｅｔａ、　１３　Ｌ６３９〜６５２　（ｊ９６７）等参
照）に、準じてその１種または２種以上を処理すること
によって水中テ粒径０．０３〜１μｍのリポソームを形
成する。リポソームの形成のしやすさは、一般式（３）
においてｍが０のときよりもｍが１のときの方１３− が大きく、また、ｎの値は大きい方がよい。こうして得
られるす列？ンーム分散水溶液に紫外光全光や紫外単色
光（例えば、２４０　ｎｍｔ　３１０ｎｍ）を照射する
ことによって迅速に重合反応が進行し、マイクロカプセ
ルが生成する。この重合に際して重合開始剤等の添加剤
を加える必要は一切ないとともに、既述の文献（Ｉｆ）
および（至）における化合物のように重合体中に不飽和
結合が残存することはない。この発明のホスファチジル
コリン型リン脂質化合物はそれ自体の毒性も低い。

したがって、この発明のホスファチジルコリン型リン脂
質から得られるマイクロカプセルは゛その中に医薬物質
や酵素等を封入（医薬物質や酵素等を含有する生理的に
許容できる水溶液中での重合による）することによって
医薬品として、あるいは臨床検査等各種検査用試薬とし
て有用である。また、写真用感光剤等や色素等を封入す
ることによってよシ鮮明々写真や印刷画像を得るための
材料ともなる。

１４− 以下、この発明の実施例を記す。

実施例１ （Ａ−１）　　　Ｈ，Ｈｉｂ’ｂｅｒｔ他によるＪ、　
Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、、６２．１６０：ｌ〜１６１３（１９２９）に
記載のによるＪｕｎ、　Ｌ［ｅｂ、　Ａｎｎ、　Ｃｈｅ
ｍ、　＋　７０９　＋２３４〜２３９　（１９６７）に
記載の方法に従って臭化ステアリルと反応させて、２−
ステアリロキシ−１，，３−ｆロノクンジオール金合成
した。

Ｃ７３，７５（７３，３） ただし、（）内の値はＣ２１Ｔ（４４０３の計算値 ５　　　　　　３１、．９ ６　　　　　　　２６．１ ２０　　　　　　２２．７ ２１　　　　　　１４、Ｉ ＩＲスペクトル（ＫＢｒベレット）（ｃｍ−１）：３３
５０．２９４０． ２８７０．１４７０． １１２０．１０８０、 ８０ （Ａ−２）　　２−ステアリロキシ−１，３−プロノぐ
フジオール４．５５グラム（１３，２ミリモル）に無水
クロロホルム３０−および乾ｉビｌＪジン２．５ｍｌ　
ｆ加えて溶解し、これにＹ、　Ｉｗａｋｕｒａらによる
Ｂｕｌｌ、Ｃｈｏｍ、Ｓｏｃ、＋　　Ｊａｐ−ｓ　↓１
，１８６〜１９１（１９６８）に記載の方法に従って合
成したｐ−ビニルベンゾイルクロリド２．２グラム（１
３，２ミリモル）の無水クロロホルム（１５ｄ）溶ｉを
３０分間かけて徐々に滴下した。この反応溶液を室温で
１８時間攪拌した後、これを０．５Ｎ塩酸各５０−で２
回、水各５０−で３回、炭酸ナトリウム１チ水溶液５０
Ｔｎｌで１回洗浄し、硫酸す）　ＩＪウムで脱水した。

得られた溶液をろ過し、減圧下で溶媒を除去した。残分
をシリカゲルカラム（直径４．５　ｃｒｎ　％長さ３５
ｃｒｒＬ）分画に供し、目的分画を集め、溶媒を減圧留
去した後、油状残分をオイルポンプを用いて５０℃で乾
燥して目的物を得た。収量３．６グラム・シリカダル薄
層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）（Ｗ媒りロロホルム）
：Ｒｆ＝０．２３（紫外線吸収、工２による呈色あり） 質量スペクトル：　Ｍ＋＝４７４　（分子量４７４）１
７− 元素分析値：　Ｃ７６，０７（７５，９）Ｈｌｏ、６０
（１０，５） ただし、（）内はＣ３０Ｈ５００４の計算値。

”Ｃ−ＮＭＲスペクトルδ（ｐｐｍ）値：６　　　　　
　２６．１ ２０　　　　２３．７ ２１　　　　１４．１ ２２　　　１６６．２ ２３　　　　　１２８．９ ２４　　　１２９．９ ２５　　　１２６．１ ２６　　　１４２．１ ２７　　　１３５．９ ２８　　　１１６．５ １８− ロモエチル）エステルノ合成 Ｖｏｎ　Ｒ，ＨｌｒｔらによるＰｈａｒｍａ、　Ａｃｔ
ａ　Ｈｅ１ｖ−＋ｌユ、３４９　（１９５８）に記載の
方法に従って合成したＣｌ３Ｆ（０）ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ
　５．　Ｏグラムの無水クロロホルム（１５ｒｎ１．）
溶液を氷冷し、これにトリエチルアミン５−１および上
記（４）で得たモノオール１．５グラムのクロロホルム
（１０１ｎｌ）溶液を２時間かけて別々のロートから同
時に滴下した。この反応溶液を室温で２時間反応させた
後、ＴＬＣで反応の進行を確認した。ついで、この反応
溶液を氷冷し、これに０．５Ｎ塩化カリウム水溶液２０
−を１時間かけて滴下した。さらに１時間攪拌した後メ
タノール１５＋ｄを加え、クロロホルム層（暗赤色）を
分液した。クロロカダルカラムクロマトグラフィー（ク
ロロホルム／メタノール＝　１０／１　）で目的物（黄
色油状）を単離した。収量１，４グラム。

１９− り呈色あり） １５Ｃ−を収Ｒスペクトルδ値ニ ア〜１９　　　　２９．７ ２０　　　　　２２．７ ２１　　　　　１４．１ ２２　　　　１６５．８ ２３　　　　１２８．８ ２４　　　　１３０．０ ２５　　　　１２６．１ ２６　　　　１４２．１ ２７　　　　１３５．９ ２８　　　　１１６．６ ２Ｏ− ＩＲスペクトル（ＫＢｒベレットＸｃｒｎ−１）：２９
３０．２８５０．１７２０．１６１０，１４６０゜１２
７０．１２１０．１１００，１０１５．９９ｏ１９１０
．８６０ の合成 前記（Ｂ）で得たリン酸エステル化合物１．３グラムを
無水ブタノン１５−に溶解し、ドライアイス−メタノー
ル浴でドラッグして冷却し液化したトリメチルアミン１
５ｆｎｌを加えてステンレス管中に入れて封管し、５５
℃に熱し、攪拌しながら１０時間反応させた。管を開放
し、これを０℃に冷却し、生じた沈でん（生成物）？：
ろ集し、アセトンで洗浄した後乾燥した。この生成物か
ら臭素イオンを除去するためこれをメタノール５０−一
水５−の混合溶媒に懸濁させＡｇ（０ＯＣＣＨ５）２ダ
ラムを加え、暗所で攪拌しながら２時間反応させた。反
応溶液をろ過し、ろ液を濃縮した後、シリカダルカラム
クロマトグラフ＝２１− イー（クロロホルム／メタノール／水＝６５／２５１５
　）分画に供し、目的分画を集め、濃縮した。この濃縮
物をクロロホルムに溶解し、多量のアセトン中に注下、
再沈でんさせ、沈でんを遠心分離し、真空乾燥して目的
とするホスファチジルコリン型リン脂質化合物を得た。

２２− ”Ｃ−ＮＭＲス被クトり（δ値）ニ ア〜１９　　　　２９．７ ２０　　　　　２２．７ ２１　　　　　１４．１ ２２　　　　１６６．１ ２３　　　　１２９．１ ２４　　　　１２９．９ ２５　　　　１２６．０ ２６　　　　１４２．０ ２７　　　　１３５．９ ２８　　　　１１６．５ ２９　　　　　５９．４ ３０　　　　　６６．３ ３１　　　　　５４．３ １７１５．１６１５．１４７０．１２８へ１２１０．１
０９０．１０６０．９７０．９２０．８６０，８２０ 参考例 実施例１で得たリン脂質化合物を濃度が３．５Ｘ１０Ｍ
となるように水に加えた。これを窒素下で超音波処理（
７５Ｗ、４０℃で５分間）シ、さらに室温で１時間放置
した後、５００Ｗの水銀灯（牛尾電機製ＵＩ−５０１Ｃ
型）を用い、光路長３０ｃＩｒＬで光照射した。リン脂
質化合物の紫外吸収スペクトルを経時的に測定した。

反応に伴い、特性吸収帯（λｍ□２６０　ｎｍ付近）の
吸収が減少し、約１５分後に該吸収が消失し、重合が完
了したことを確認した。この重合物の形状を電子顕微鏡
（日立製Ｈ−５００型）によって測定したところ、平均
粒径０．２５μｍの微小球形であることがわかった。こ
の重合物液に等溶積のエタノールを加えたところ、その
形状は変化せず、重合マイクロカプセルが重合前に較べ
て安定であることがわかった。また、重合前のリポソー
ム（ベヒクル）の脂質二重層の熱転移温度は約−４，５
℃であったが、重合後では約１６．５℃であった。

実施例２ Ｓ、Ｓｗａｍ他によるＯｒｇａｎｌｅ　５ｙｎｔｈｅｓ
ｉｓ　、　２　＋２７６　（１９５０）に記載されてい
る方法に従って合成したセパシン酸モノエチルエステル
・モノクロリド１０．０グラム（４０，２ミリモル）、
ブロモエチルベンゼン６．２グラム（３３，５ミＩＪミ
ニウム１１．２グラム（８３，８ミリモル）　’ｃ　添
加した。この混合物を水浴中で４時間攪拌した後、室温
で終夜攪拌した。水浴中で再度冷却した後、この混合物
に氷と水を添加し、ついで濃塩酸５．７ｄ’ｉゆっくり
と加えた。これに、メチレンクロリドと水を適当量加え
て振盪した後メ２５− チレンクロリド層を分離し、また水層にメチレンクロリ
Ｐを加えてさらに抽出した。メチレンクロリド層を合せ
ナトリウムで脱水した後、メチレンクロリドおよびニト
ロベンゼンを減圧下で蒸発除去し、シリカゲルカラム（
ｉ径４．、長さ３５儂）で分画し、所望の生成物を得た
。

収量６．６グラム（収率４９チ）。

質量ス（クトル：　Ｍ＋＝３９６（Ｃ２ｏＨ２９０３Ｂ
ｒ１の分子量３９６．３９８） チモールブルーによ る呈色あシ） １３７０．１２６０．１２２０．１１８０．１１３０、
１０９５．１０３０ 元素分析値：Ｃ６０，２０（６０，５）Ｈ７，６１（７
，４） ただし、（）内のイ直はＣ２ｏＨ２９０３Ｂｒ１の計算
値 ２６− Ｓ５ｃｍＮ皿ス被クトルδ値： １　　　　　　３３．１ ２　　　　　　３９．０ ３　　　　　１４３．９ ４　　　　　１２８．４ ５　　　　　１２８．８ ６　　　　　１３５．８ ７　　　　　１９９．８ ８　　　　　　３８．５ ９．１４　　２４．９，２４．３ １０〜１３　　２９．３，２９．１ １５　　　　　　３４．３ １６　　　　　１７３．７ １７　　　　　　６０．１ １８　　　　　　１４．３ ２７− （Ｂ）ｐ−（クロロカルがニルノナノイル）スチレンの
合成 ＣＢ−１）　　ｊ二記（４）で得たｐ−（エトキシカル
ビニルノナノイル）フェニルエチルプロミド３．３グラ
ム（８３ミリモル）を１級エタノール４０ｍ１と粉末水
酸化カリウム６グラムとの混合物に加え、これを還流下
に２．５時間熱した後水冷した。

生成した沈でんをろ集し、乾燥した後、水１０〇−に溶
解した。この溶液に濃塩酸５ゴを加え、生成した沈でん
を集め、減圧乾燥した。この生成物を熱トルエン５０−
と石油エーテル１５０−の混合物から再結晶させて所望
の生成物（ｐ−（ヒドロキシカルボニルノナノイル）ス
チレン）を得た。収量１．１グラム（収率４６チ）。

１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（δ値）ニ ー９只− １１１６，５９，１４２４，４，２４，６３１４１，８ ４１２６，３１５３４，１ ５１２８，４１６１８０，１ ６１３６，１ ７２００，０ ８３８，５ １，３４（Ｓ’、　８Ｈ、−（ＣＨ２→Ｔ）２．３１（
ｄ、４Ｈ，−Ｃ（０）ＣＣＩ（２−）２．３５（ｔ、２
Ｈ，−ＣＩ４２Ｃ（０）−０−）５．４９（ｑ、２Ｈ，
−Ｃ＝ＣＨ２） ２９− ２８６０．１７２５．１６８５．１６１０．１４７０．
１４４０．１４１０．１３８０．１３１０．１２４５．
１１９０，１１２０゜９９５．９８０．９１０．８４０ 質量ス被りトル：　Ｍ＋＝２８８　（Ｃ１ａＨｚ４０５
の分子量２８８） （Ｂ−２）　　上記（Ｂ−１）で得たｐ−（ヒドロキシ
カルがニルノナノイル）スチレ：／　１．０グラム（３
，５ミリモル）に乾燥ベンゼン２５−およびジメチルホ
ルムアミド１滴を加えて攪拌した。

これにシュウ酸ジクロリド１ｍ（１１，８ミリモル）を
滴下し、室温で２時間攪拌した後減圧下で溶媒を除去し
た。残分をオイルｌンプで乾燥し、所望の酸クロリド生
成物であるｐ−（クロロカルボニルノナノイル）スチレ
ンを得た。

３０− 実施例１　（Ａ−１）で得た２−ステアリロキシ−１，
３−プロノ臂ンジオール０９９５グラム（２，８９ミリ
モル）に乾燥メチレンクロリド３０−および乾燥ピリジ
ン０．５−を加えて攪拌した。これに、前記（Ｂ−２）
で得た酸クロリド全量（３，５ミリモル）全乾燥メチレ
ンクロリド１０−に溶解した溶液を１０分間かけてゆっ
くりと滴下し、終夜攪拌した。この反応混合物からメチ
レンクロリド全留去し、残分をクロロホルムに溶解した
。この溶液を０．５Ｎ塩酸、水、２チ炭酸ナトリウム水
溶液および水で順次洗浄した後硫酸ナトリウムで脱水し
た。これを減圧下で蒸発処理に供し、残分を乾燥した後
、ベンゼン／エーテル−９／１の流出溶媒を用いてシリ
カダルカラム（直径２ＣｒｒＬ１長さ３０儒）で精製し
て所望のエーテル生成物を得た。

３ｌ− Ｒｆ＝０．２８（シクロヘキサ乙４詐酸エチル−３／１
） （紫外ｍ吸収、プロムチトルカ−に よる呈色あり） 質量スペクトル：Ｍ＋−６１４（分子量６１４）元素分
析値：　Ｃ７６，３８（７６，２）８１０．８２（１０
，７） ただし、（）の値はＣ３９Ｈ６６０５の計算値 ”Ｃ−ＮＭＲス４クトル（δ値）ニ ーｑワ− ３６２，０１４’　　　　　　２４．９１’　　　　１
１６．４　　　　１５’　　　　　　３４．２２’　　
　　１３５．９　　　　１６’　　　　　１７３．６３
’　　　１４１．８　　　　　１“　　　　１４．１４
’　　　１２６．２　　　　　２“　　　　２２．７５
’　　　１２８．４　　　　　３“　　　　３１．９６
’　　　１３６．１　　　　１７“　　　　２６．１７
’　　　１９９．７　　　　１８“　　　　７ｏ、５８
’　　　　　３８．５ ９’　　　　　２４．３ １６９０．１６１０．１４７５．１４００゜１３７０．
１２９５．１２３０１１１８５．１１３５．９９５．９
８０．９１ｏ１ ８４０．７３０ ３３− ホスホリルコリンの合成 実施例１　（Ｂ）で用いたＣ４２Ｐ（０）ＯＣＨ２ＣＨ
２Ｂｒ　３．　Ｏグラムを乾燥クロロホルム１０−に溶
解し、氷冷した。これに、上記（（１’ｌで得たエーテ
ル生成物１．０グラム（２９ミリモル）を乾燥クロロホ
ルム１０ゴに溶解した溶液、および乾燥トリエチルアミ
ン４−を乾燥クロロホルム１．０ｔｎｔＫ：溶解した溶
液をそれぞれ別々のろう斗から同時に滴下した。この反
応混合物を室温で２０時間攪拌した後、Ｑ、５Ｍ塩化カ
リウム水溶液１０−をゆっ〈シ滴下し、さらに室温で１
時間攪拌した。

これにメタノール１０ｍを加えた後、クロロホルム層を
集め、水で１回洗浄し、蒸発乾固した。

残分を、さらに、五酸化リン上で減圧乾燥した後、乾燥
ブタノン１５ｍに溶解した。この溶液をステンレス鋼製
耐圧反応管（２０ｏ−用）に仕込み、−２５℃に冷却し
た後、乾燥トリメチルアミン１５−を加えて密栓した。

この反応混合物を６０℃のポリエチレングリコール浴中
で９時間反応させた後生成した沈でんをろ集し、３４− 乾燥ブタノンで洗浄した。

こうして得た生成物をそのままメタノール７０−に溶解
し、酢酸銀２．５グラムを加え、暗色において室温で１
．５時間攪拌した。ろ通抜、ろ液を蒸発に供し、残分を
減圧乾燥した後、シリカダルカラム（クロロホルム／メ
タノール／水−６５／２５／４　）で精製した。こうし
て所望のホスファチジルコリン型リン脂質化合物を得た
。

収量０．６０グラム（収率２８チ）ｇ 呈色あシ） ”　Ｃ−ＮＭＲスペクトル（δ値）： 炭素番号　δ（ｐｐｍ）　　炭素番号　　　δ（ｐｐｍ
）１．３　　　６４．３　　　　　７’　　　　　１９
９．８２　　　７７．０　　　　　８’　　　　　　３
８．５４　　　５９．０　　　　　９’　　　　　　２
４．４６　　　５４．４　　　　１４’　　　　　　２
４．９１’　　　１１６．５　　　　１５’　　　　　
　３４．３２’　　　１３５．９　　　　１６’　　　
　　１７３．７３’　　　１４１．８　　　　　１“　
　　　　１４．１４’　　　１２６．３　　　　　２“
　　　　　２２，７５’　　　１２８．４　　　　　３
“　　　　　３１．９６’　　　１３６．１　　　　１
７“　　　　　２６．１１７３５．１６８５．１６１５
．１４７０゜１４１０．１３６０．１２４０．１２１０
．１０９５．１０８０．９７５．９２５、４５ 窒素分析値：Ｎ１．８０（１，７９） ただしく）内はＣ４４Ｈ７８Ｎ１０８Ｐ１の計算値。

手続補正書 昭和５８年１１月１６日 １、事件の表示 特願昭５７−１４０９６３号 ２、発明の名称 ホスファチジルコリン型リン脂質化合物３、補正をする
者 事件との関係　　特許出願人 氏名　　　　　土　　１）　英　　俊 ４、代理人 住所　　東京都港区虎ノ門１丁目 ２６番５号第１７森ビル ７、補正の内容 （１）明細書第１８頁下から２ないし１行目にある「２
−ステアリル」を「２−〇−ステアリル」と訂正する。

（２）明細書第２１頁５ないし６行目にある「２−ステ
アリル」を「２−Ｏ−ステアリル」と訂正する。

（３）明細書第１８６行目にある「ホスホリルコリン」
を「ホスホコリン」と訂正する。

（４）明細書第３３頁下から１行目にある「２−ステア
リル」をｒ２−０−ステアリル」と訂正する。

（５）明細書第１８頁１行目にある「ホスホリルコリン
」を「ホスホコリン」と訂正する。

（６）明細書第３６頁の表の右欄にある「炭素番号」の
下側にあるｒ１７”Ｊの直下にｒ１８”Ｊを挿入する。

（７）明細書第３６頁の表の右欄にある「σ（ｐｐｍ）
」の下側にあるｒ２６．ＩＪの直下にｒ７０．５Ｊを挿
入する。

（８）明細書８２４頁下から１６行目にある「参考例」
を「参考例１」と訂正する。

（９）明細書第２５頁４行目にある「であった。」と同
５行目にある「実施例２」との間に行を改めて以下の文
章を挿入する。

「参考例　２ 実施例１で得たリン脂質化合物２０＋ａｇに０．０５Ｍ
−リン酸緩衝水（ｐＨ７、０）　１０ｍｌを加え、窒素
雰囲気下で超音波処理　（５０Ｗ　。

４０℃で２０分間）し、さらに４０℃で１時間静置した
のち、３０Ｗの低圧水銀ランプ（理工科学産業株式会社
製ＵＶＬ−３０ＬＡ）を用いて、窒素下に５０℃で光源
から５０鳳の距離から光照射した。重合の確認は、この
リポソーム水溶液１５１を」二記緩衝液１０ｍ１に稀釈
（リン脂質化合物濃度Ｓ ３．８４ｘｌＯＭ）Ｌ、紫外吸収スペクトルを経時的に
測定することによっておこなった。反応に伴い、リン脂
質子ツマ−に基づく吸収（λ％αｇ２６Ｌｎｍ）が消失
し、新たに入−３Ｘ２５１　ｎｍの吸収が生じた。Ａ　
ｗｑａ×の吸収は１時間後には完全に消失しており、重
合の完結を確認した。

なお、生成重合体は、クロロホルム、メタノール等の有
機溶媒に不溶であった。

参考例　３ すし 実施例１でたリン脂質化合物の重合をさらに確認するた
めに、エタノール中で酸化白金を触媒として室温で一時
間水素ガスを吹込んでビニル基の接触水素還元をおこな
った。得られた水素添加物と元のリン脂質化合物および
光重合物の各々の紫外吸収スペクトルを比較し、水素添
加物と光重合物の類似から、光重合物において重合によ
りビニル基が消失していることが判明した。次に、紫外
吸収スペクトルの測定結果を示す。

９　　　　　　　　　　　　　　　　　　　εｗ＋、ｘ
）リン脂質　エタノ−２７Ｂｎ＋＊（２ｘｌＯ）、２１
５ｎ＋ｗ（０，９ヒ　　　　　　　　　　　　ル　　　
　　　　　　　　　　　　５！１０　　　　２０４ｎ層
　　１．４８ｘｌＯ水素添加　エタノール　２５１ｎｍ
（１，４３ｚ１０４）　。

２０５ｎｍ　　１．４８ｘｌＯ 光重合物　　水　　　　２５１ｎｍ（１，１３ｘｌＯ”
）２０２ｎｍ　　１．２３ｘｌＯＩＩ 参考例　４ 紫外光照射による重合の難易度を実施例１のリン脂質化
合物と文献（ＩＩＩ）に記載されたジエン型化合物との
間で比較した。各々１００ｍｇに水を加えて超音波処理
（５０Ｗ、４０℃で２０分間）し、１％（ｗハ）濃度の
リポソーム水溶液を作り、参考例２と同一の条件で光照
射した。この水溶液の一部を採取し２．０ｘｌＯＭとな
るように水で稀釈し、紫外吸収スペクトルを経時的に測
定した。文献（ＩＩＩ）の化合物は入■０に２６１ｎｍ
の吸収が完全に消失するのに７時間を要するのに対し、
実施例１のリン脂質化合物にあっては、λｗａＸ２．６
１ｎｍの吸収の消失は２時間以内で完了した。Ｊ（１０
）明細書第３６頁最終行にある「計算値。」の次に行を
改めて以下の文章を挿入する。

ｒ参考例　５ 実施例２で得たリン脂質化合物２０ｍｇを、参考例２と
同様にして重合させて重合化リポソームが得られること
を確認した。なお、生成重合体は、クロロホルム、メタ
ノール等の有機溶媒に不溶であった・ 実施例　３ 実施例１の（Ａ−１）に従い、２−フェニル−５−ｍ−
ジオキサノールと臭化ミリスチルとを反応させて合成し
た。収率２９％。融点５５．５−５６℃。

元素分析値（重量％）：Ｈ（１２，５８）Ｃ（７０，７
８） （但し括弧内はＣ１ヮＨ，、Ｏ，の 計算値） Ｃ−ＮＭＲスペクトルδ（ｐｐｍ）値（’ＣＤ　ＣＩ、
。

ＴＭＳ） １．３　　８１．９　　　　６　　　　２８．０２　　
　７９．８　　　　　？−１５２１１，３−３０，０４
７０，２１６２２，７ ５３１、！３　　　　１７　　　１４．１質量スペクト
ル：　Ｍ＋１　＝２８！３（分子量２８８）（Ａ−２） ２−ミリスチルオキシ−１，３−Ｐクロパンジオール１
．０ｇと実施例２の（Ｂ）で合成したｐ−（クロロカル
ボニルノナノイル）スチレンとを実施例２（Ｃ）の手法
に従って反応させて１−（ｐ−ビニルベンソイルノナメ
イル）グリセロ−ミリスチルエーテル−２を合成した。

収率３６％。シリカゲルＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１７　（ベ
ンゼン／エーテル＝９／１） （紫外吸収、ブロモチモールブルーによる呈色あり） 質量スペクトル：Ｍ＝５５８（分子量５５８）石−ＮＭ
Ｒ（重クロロホルム、ＴＭＳ）：δ　（ｐｐｍ） ０．８８（ｔ、３Ｈ，−ＣＨ，）；　　１．２６（Ｓ幅
広、　−（ＣＨ駄−）；１、［ｌ（ｔ、２Ｈ，−ＣＯＣ
：Ｈ２−）；　　２．０Ｂ（ｔ、　ＩＨ，−０Ｈ）２．
３２（ｔ、２Ｈ，−Ｃ）Ｉ２ＣＯＯ−）。

２．８２（ｔ、２Ｈ，ＫＯ−ＣＯＣＨ２−）；３．５−
３．７（ｍ、５Ｈ，−Ｈ（２−、−ｃＨ−）　；？ ４、１５（ｄ、２Ｈ，−ＣＨ，ＱＣニー）　。

５．３５，５．８２，８．７（ｄ、ｄ、ｑ、ＩＨ，ＩＨ
，ＩＨ，−ＣＨ＝ＣＨ，）　；７、Ｃ９（ｄ、ｄ、２Ｈ
，２ｎ、　−＠−）”Ｃ−ＮＭＲ（重クロロホルム、Ｔ
ＭＳ）：δ（ｐｐｍ） ３　　　８２．０　　　　１４°　　　　２４．９１’
　　　１１８．５　　　　１５’　　　　　３４．２２
’　　　１３５．９　　　　１８’　　　　　１７３．
７３’　　　１４１．８　　　　１″　　　　　１４．
１４’　　　１２６．３　　　　２″　　　　　２２．
７５°　　１２８．４　　　　３”　　　　　　３１．
９６’　　　１３８．２　　　　１３”　　　　　２Ｅ
ｔ、１７’　　　１９９．８　　　　１４″　　　　７
０．６８’　　　　　　３８．５ ９’　　　　　　２４．４ （Ｂ）ｒａＣ−１−８−−ビニルベンゾイル）ノナノイ
ル−２−０−ミリスチル−グリセロ−３−ホスホコリン
実施例２の（Ｄ）の手法に従い、上記１−（ｐ−ビニル
ベンソイルノナノイル）グリセロ−ミリスチルエーテル
−２のホスホコリン化をおこなうことによって合成した
。収率３０％。

シリカゲルＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２７　（クロロホルム／
メタノール／水＝　８５／２５／４）（紫外吸収、ブロ
モチモールブルーによる呈色あり） 元素分析値（重量％）：　Ｎ　　ｔｓｇＯ（１９，３）
（括弧内はＣ４ｏ　Ｈ２ＯＮＩ　　Ｏ１？　　ＰＩの計
算値）１３Ｃ−ＮＭＲ（重クロロホルム、ＴＭＳ）：δ
　（ｐｐｍ） −２−品　　δ　　ｍ）５−　−算　　δ　　ｍ４　　
　　　　５９．　　　　　　　　１４°　　　　　　　
　２４，９１’　　　　１１８．３　　　　　　　１５
’　　　　　　　　　３４．３２’　　　　１３５゜８
　　　　　　１６°　　　　　　　１７３．ｆｉ３　”
　　　１４１．８　　　　　　　１″　　　　　　　　
　１４．１４’　　　　１２６．１　　　　　　　２″
　　　　　　　　　２２．８５’　　　　１２８．３　
　　　　　　３″　　　　　　　　　３１．９６’　　
　　　１３６．１　　　　　　　１３”　　　　　　　
　　２８．０７’　　　　１９９．８　　　　　　　１
４″　　　　　　　　７０．５８’　　　　　３８．５
　　　　　　　５　　　　　　　　　８６．４９’　　
　　　２４．４　　　　　　　６　　　　　　　　　５
４．４ＩＲスペクトル（クロロホルム溶液）ＣＩＩｌ：
２９４０、２８７０．１７３０．１Ｂ８０．１８１０．
１４７０゜＋４１０．１３８０．−１２２０．１１８０
．１０９０．９７５゜２０ 参考例　６ 実施例３で得たリン脂質化合物２０ｍｇを、参考例２と
同様にして重合させて重合化リポソームが０ 得られることを確認した。なお、生成重合体は、クロロ
ホルム、メタノール等の有機溶媒に不溶であった。」 １

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ％式％ の正の整数、およびｔは１３ないし２１の正の整数）で
   示されるホスファチジルコリン型リン脂質化合物。
2. （２）ｔが１３＃１５，１７．１９または２１である特
   許請求の範囲第１項記載のリン脂質化金物。