JPS5928400B2 - 酵素による脂肪族あるいは脂環族グリコシドの製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は酵素による脂肪族あるいは脂環族グリコシドの
新規な製造方法に関するものである。

医薬品の中ではジギトキシン（ｄｉｇｉｔｏｘｉｎ ）
のような配糖体が重要な地位を占めているが、これらの
化学合成は、反応の選択性、立体特異性の低き、反応の
煩雑さなどから困難なことが多い。

一方、グリコシターゼを用い、アリールグリコシドとア
ルキルアルコールとの間にトランスグリコシデージョン
を行なわせる方法は、反応が選択的、立体特異的且つ１
段階の反応であるので、極めて好ましいものである。

しかし高級アルキルアルコールは、水に難溶なものが多
く、十分な基質濃度が得られない。

又、４これを克服するために有機溶媒を使用して溶解度
を上げると酵素が失活し、高収率に目的配糖体を得るこ
とが困難であった。

本発明者らは、原理的には化学合成法より優れている酵
素法のこれらの欠点を克服すべく鋭意研究を進めた結果
、高濃度の有機溶媒中で安定なα−および／またはβ−
グリコシターゼを用いることにより、本発明を完成する
に至った。

すなわち、本発明は、高濃度の有機溶媒を含有する水溶
液中または水相と有機溶媒相とからなる分散媒体中で、
高濃度の有機溶媒中で安定なα−および／またはβ−グ
リコシターゼの存在下に、α−および／またはβ−アリ
ールグリコシドと置換または未置換の脂肪族あるいは脂
環族アルコールとを反応させることを特徴とする酵素に
よる脂肪族あるいは脂環族グリコシドの製造方法である
。

本発明では高濃度の有機溶媒中で安定なα−および／ま
たはβ−グリコシターゼを用いることにより有機溶媒を
含有する水溶液中または水相と有機溶媒相とからなる媒
体中で反応を行なうことができ、水に難溶なアルコール
のグリコシドが得うれる。

また酵素を用いることによって目的物が高収率に得られ
る。

さらに目的とするα−グリコシド又はβ−グリコシドを
選択的に製造することができる。

また水単独の反応系の場合に比較して、本発明の有機溶
媒を用いる反応系では好ましい温度依存性が得られる。

本発明に用いるα、β−グリコシダーゼとしては、有機
溶媒に安定なものであればいかなる起源のものでも良い
が、工業的応用を計る点から微生物起源のものが好まし
くアスペルギルスオリゼー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
ｏｒｙｚａｅ ）、クルイベロマイセスラクチス（Ｋｌ
ｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ Ｌａｃｔｉｓ ）などのα−
２β−グリコシダーゼなどが挙げられる。

本発明に用いる有機溶媒に安定なα−２β−グリコシダ
ーゼとは、有機溶媒濃度５０％の水溶液あるいは分散媒
体中で相対活性３０係以上を示すものである（水溶媒の
同条件下での酵素活性を１００％とする）。

本発明に用いる有機溶媒としては、アセトフェノン、ア
ニソール、クロロベンゼン、四塩化炭素、ニトロベンゼ
ン プロピオフェノン ヘキサンベンゼン、アセトニト
リル、アセトン、ジオキサン ジメチルスルホキシド
ジメチルホルムアミド、クロロホルム、酢酸エチルエス
テルなどを用いる。

又、本発明に用いるアルコールそのものを溶媒成分とす
ることもできる。

高濃度の有機溶媒を含有する水溶液とは、有機溶媒を３
０〜８０係、好寸しくは３０〜５０チを含む溶液をいう
。

また水相と有機溶媒相とからなる分散媒体としては、水
相と有機溶媒相との混合比（Ｖ／Ｖ）が１：１０〜１０
：１であるものが好ましい。

本発明に用いるα−２β−アリールグリコシドとは置換
もしくは未置換のアリール基と糖類との結合体である。

置換もしくは未置換のアリール基とし℃は、例えばフェ
ニル、トルイル、ｐ−ニトロフェニル、ｐ−ハロゲン化
フェニル、ナフチル基などが挙げられる。

糖類としてはグルコース、ガラクトースなどの単糖類、
マルトース、ラクトース、ゲンチオビオースなどの三糖
のほか、オリゴ類などが挙げられる。

具体的には、フェニル−β−Ｄ−ガラクトシド、フェニ
ル−β−Ｄ−グルコシド、トルイル−β−Ｄ−ガラクト
シドなどが挙げられる。

本発明に用いる置換または未置換の脂肪族あるいは脂環
族アルコールとは炭素原子数１〜４ｏの第１級、第２級
あるいは第３級アルコールでアリ、またモノグリコール
あるいは２価以上のアルコールとしては、メタノール、
エタノール、シクロへキサノール イソグロパノール
オクタツールエチレングリコール、エチレングリコール
モノアルキルエーテル、クリセロール、サリシルアルコ
ール、ベンジルアルコール等を挙げることができる。

本発明方法において、α−および／またはβ−アリール
グリコシドと置換または未置換の脂肪族あるいは脂環族
アルコールとの反応割合は、アリールグリコシド１当量
に対してアルコール１当量以上であ・ることか好ましい
。

また反応のｐＨは通常３〜９の間で選択するが、アスペ
ルギルスオリゼーのグリコシダーゼを用いル場合にはｐ
Ｈ５附近、クルイベロマイセスラクチスの酵素を用いる
場合にはｐＨ７附近が好ましい。

反応時間は通常５〜３００分であり、反応温度は通常４
〜５０℃である。

本発明方法により得られる脂肪族あるいは脂環族グリコ
シドは医薬品などの用途に利用される。

以下、本発明を実施例により具体的に説明する。

実施例 １゜ フェニル−β−Ｄ−ガラクトシド及びシクロヘキサノー
ルよりシクロヘキシル−β−Ｄ−Ｊ／ラクトシトの合成 フェニル−β−Ｄ−ガラクトシド２５．６ｍｙ（０，１
ミリモル）とシクロヘキサノール０．６５ｍｌヲ０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５゜Ｏ）ｏ、４ｍｌとアセトニト
リル０．５ ｍｌの混液に溶解し、これに、アスベルギ
ルスオリゼのβ−ガラクトシダーゼ（輿入製３８０００
μ／ｇ）１．５７ｍｇを０．１７７１／の上記リン酸緩
衝液に溶解したものを加え、４℃で３時間反応させた。

これに、０．１Ｍ炭酸ナトリウム液１ｒｒＬｌを加えて
酵素を失活させたのち、メタノール２．５ｍｌを加え、
酵素を沈殿させた。

４℃で１時間放置後遠心分離し、酵素を除いた上清を、
高速液体クロマトグラフィーにかけ、生成物の分離定量
を行なった。

シクロへキシル−β−Ｄ−ガラクトシドは、４０チの収
率で得られた。

実施例 ２ フェニル−β−Ｄ−グルコシド及びｎ−オクタツールよ
りｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコシドの合成 ０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７，０１０ゴにフェニル−
β−Ｄ−グルコシド１．０２＆、Ｌ−システィン０．３
２ｇ、クルイペロマイセスラクチスのグリコシダーゼ（
合同酒精）０．５０．！ｉ’を溶解する。

一方、ニトロベンゼン７０ｍ／にｎ−オクタツール１．
３（Ｂｉ’を溶かし、二液を合したのち、スターラーを
用い、３５℃で１．５時間激しく攪拌した。

冷却後、四塩化炭素及び水苔１２７７１／を加え遠心分
離し、二相を完全に分離した。

水相をとり、メタノール３３ｍ１を加え、室温に１時間
放置し、酵素を沈殿させ、遠心分離して除いた。

上清の溶媒をロータリーエバポレーターで除いたのち、
残渣をクロロホルム−メタノール−水−１０：４：１（
容量比）の下層にて抽出し、これを、シリカゲルカラム
（１００ｍ／）にかけた。

同じ溶媒で溶出し、ｎ−オクチルグルコシド相当分画を
ロータリーエバポレーターにかけ、溶媒を留去した。

得られたｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコシドは、４８ｍ
７で収率は、４，１係であった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 高濃度の有機溶媒を含有する水溶液中または水相と
   有機溶媒相とからなる分散媒体中で、高濃度の有機溶媒
   中で安定なα−および／またはβ−グリコシターゼの存
   在下に、α−および／またはβ−アリールグリコシドと
   置換または未置換の脂肪族あるいは脂環族アルコールと
   を反応させることを特徴とする酵素による脂肪族あるい
   は脂環族グリコシドの製造方法。