JPS5924387B2 - リウマチ因子検出用試薬゜ - Google Patents
リウマチ因子検出用試薬゜Info
- Publication number
- JPS5924387B2 JPS5924387B2 JP8920477A JP8920477A JPS5924387B2 JP S5924387 B2 JPS5924387 B2 JP S5924387B2 JP 8920477 A JP8920477 A JP 8920477A JP 8920477 A JP8920477 A JP 8920477A JP S5924387 B2 JPS5924387 B2 JP S5924387B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- latex
- rheumatoid factor
- reagent
- serum
- sucrose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はリウマチ因子検出用試薬に関するものである。
リウマチ因子の血清学的検査法には、ウサギガンマグロ
ブリンをヒツジ赤血球に感作させた赤血球凝集反応（ワ
ーラーローズ反応、ヘラー変法、等）とヒトガンマグロ
ブリンをラテックス粒子に吸着させたラテックス凝集反
応が広く、用いられている。特に後者のラテックス凝集
反応は、その簡便さから、慢性関節リウマチ患者のスク
リーニング検査として、利用価値も高く、国内外のメー
カーから数多くの製品が市販されている。しかし、従来
のラテックス凝集反応試薬は、血清中の非特異反応成分
の影響を除くため、血清をグリシン緩衝液で２０倍に希
釈して用いなければならず、希釈の手間がかかること、
又、希釈の際に誤差が生じることなど、精度管理の上か
らも問題があつた。ラテックス凝集反応の代りに、担体
をイオン交換樹脂にかえ、血清希釈の手間を省いた製品
も市販されたが、凝集像と非凝集像の差がはつきりとせ
ず、この為、判定がしずらく、ラテックス凝集反応ほど
利用されていない。本発明のリウマチ因子検出用試薬は
、従来のラテックス凝集反応と異り、希釈しない血清で
の検査を可能にし、上記難点を解消するものである。
ブリンをヒツジ赤血球に感作させた赤血球凝集反応（ワ
ーラーローズ反応、ヘラー変法、等）とヒトガンマグロ
ブリンをラテックス粒子に吸着させたラテックス凝集反
応が広く、用いられている。特に後者のラテックス凝集
反応は、その簡便さから、慢性関節リウマチ患者のスク
リーニング検査として、利用価値も高く、国内外のメー
カーから数多くの製品が市販されている。しかし、従来
のラテックス凝集反応試薬は、血清中の非特異反応成分
の影響を除くため、血清をグリシン緩衝液で２０倍に希
釈して用いなければならず、希釈の手間がかかること、
又、希釈の際に誤差が生じることなど、精度管理の上か
らも問題があつた。ラテックス凝集反応の代りに、担体
をイオン交換樹脂にかえ、血清希釈の手間を省いた製品
も市販されたが、凝集像と非凝集像の差がはつきりとせ
ず、この為、判定がしずらく、ラテックス凝集反応ほど
利用されていない。本発明のリウマチ因子検出用試薬は
、従来のラテックス凝集反応と異り、希釈しない血清で
の検査を可能にし、上記難点を解消するものである。
すなわち、多数検体の検査を短時間に、しかも正確に行
なうことを可能にした。現在市販されているリウマチ因
子検出用ラテックス凝集反応試薬は、ヒトガンマグロブ
リンとラテックスを混合した懸濁液、あるいは、更に牛
血清アルブミン等の高分子保護物質を加えた懸濁液であ
るが、ヒトガンマグロブリンがラテックスに吸着した際
に、ラテックス表面の界面電位が低下し、その為に起る
自然凝集を完全に抑えることが出来ない。この為、血清
中の非特異反応成分との反応が起りやすく、希釈しない
血清原液での使用は不可能であつた。そこで本発明者は
、この血清中の非特異反応成分との反応を抑える為、種
々の化合物を添加した場合の効果を実験したところ、シ
ヨ糖、塩化コリンの添加により非特異反応が抑えられる
ことを見い出した。この場合、各々単独でも効果はある
が、両者を加えることにより、効果は更に高まる。
なうことを可能にした。現在市販されているリウマチ因
子検出用ラテックス凝集反応試薬は、ヒトガンマグロブ
リンとラテックスを混合した懸濁液、あるいは、更に牛
血清アルブミン等の高分子保護物質を加えた懸濁液であ
るが、ヒトガンマグロブリンがラテックスに吸着した際
に、ラテックス表面の界面電位が低下し、その為に起る
自然凝集を完全に抑えることが出来ない。この為、血清
中の非特異反応成分との反応が起りやすく、希釈しない
血清原液での使用は不可能であつた。そこで本発明者は
、この血清中の非特異反応成分との反応を抑える為、種
々の化合物を添加した場合の効果を実験したところ、シ
ヨ糖、塩化コリンの添加により非特異反応が抑えられる
ことを見い出した。この場合、各々単独でも効果はある
が、両者を加えることにより、効果は更に高まる。
以上のように、直径０．１μから１．０μのラテツクス
粒子にヒトガンマグロブリンを吸着させた０．２％から
２．０％の懸濁液中にシヨ糖、あるいは（及び）塩化コ
リンを１．０％〜１０．０％の割合に加えることにより
、希釈しない血清でのリウマチ因子検出用ラテツクス凝
集反応が可能になつた。
粒子にヒトガンマグロブリンを吸着させた０．２％から
２．０％の懸濁液中にシヨ糖、あるいは（及び）塩化コ
リンを１．０％〜１０．０％の割合に加えることにより
、希釈しない血清でのリウマチ因子検出用ラテツクス凝
集反応が可能になつた。
また、一般的に補体の影響を阻止する為に、血清学的検
査においては、被検血清を５６℃で３０分間加熱し、非
動化を行なうのが常法であるが、リウマチ因子検出反応
も例外ではない。つまり、本発明による試薬を使う場合
も、被検血清を５６℃で３０分間加熱し、非動化して検
査しなければならないが、Ｃ反応性蛋白質測定用試薬で
、補体の影響を阻止する為、ソジウムポリアネト一 二
ルスルホネート（ＳＰＳ）が非常に効果があることが知
られている。
査においては、被検血清を５６℃で３０分間加熱し、非
動化を行なうのが常法であるが、リウマチ因子検出反応
も例外ではない。つまり、本発明による試薬を使う場合
も、被検血清を５６℃で３０分間加熱し、非動化して検
査しなければならないが、Ｃ反応性蛋白質測定用試薬で
、補体の影響を阻止する為、ソジウムポリアネト一 二
ルスルホネート（ＳＰＳ）が非常に効果があることが知
られている。
その発明は、特願昭５１−３９５７７に示されている。
そこでリウマチ因子検出反応においても、補体の影響を
阻止する為、研究を重ねた結果、同様にソジウムポリア
ネト一 ニルスルホネートが効果があることを見い出し
た。すなわち、前述の試薬にソジウムポリアネトールス
ルホネートを加えるか、または別に血清にソジウムポリ
アネトールスルホネートを含むグリシン緩衝液を添加す
ることにより、リウマチ因子検出反応においても５６℃
で３０分間の加熱処理をすることなく補体の影響を除く
ことが出来、５６℃で３０分間、加熱処理し非動化した
場合と一致し☆ｒた成績を得ることが出来た。又、本発
明のリウマチ因子検出用試薬はシヨ糖、塩化コリンを添
加してある為、試薬の安定性の面からも優れている。す
なわち、長時間の保存でも、従来のリウマチ因子検出用
ラテツクス凝集反応試薬と異なり、ラテツクス粒子の自
然凝集は起らず、乾燥によるクロット（ラテツクスのか
たまり）の発生もみられない。つまり本発明は、シヨ糖
、塩化コリンの添加により非特異反応が抑制され、血清
の希釈を必要とせず、更にソジウムポリアネトールスル
ホネートの添加により補体の影響を除くことが出来、非
動化処理を必要としない、安定性に優れたリウマチ因子
検出用ラテツクス凝集反応試薬を提供するものである。
以下に本発明の実施例を例示すると共に、従来法との比
較成績を示し、更に具体的に説明する。
そこでリウマチ因子検出反応においても、補体の影響を
阻止する為、研究を重ねた結果、同様にソジウムポリア
ネト一 ニルスルホネートが効果があることを見い出し
た。すなわち、前述の試薬にソジウムポリアネトールス
ルホネートを加えるか、または別に血清にソジウムポリ
アネトールスルホネートを含むグリシン緩衝液を添加す
ることにより、リウマチ因子検出反応においても５６℃
で３０分間の加熱処理をすることなく補体の影響を除く
ことが出来、５６℃で３０分間、加熱処理し非動化した
場合と一致し☆ｒた成績を得ることが出来た。又、本発
明のリウマチ因子検出用試薬はシヨ糖、塩化コリンを添
加してある為、試薬の安定性の面からも優れている。す
なわち、長時間の保存でも、従来のリウマチ因子検出用
ラテツクス凝集反応試薬と異なり、ラテツクス粒子の自
然凝集は起らず、乾燥によるクロット（ラテツクスのか
たまり）の発生もみられない。つまり本発明は、シヨ糖
、塩化コリンの添加により非特異反応が抑制され、血清
の希釈を必要とせず、更にソジウムポリアネトールスル
ホネートの添加により補体の影響を除くことが出来、非
動化処理を必要としない、安定性に優れたリウマチ因子
検出用ラテツクス凝集反応試薬を提供するものである。
以下に本発明の実施例を例示すると共に、従来法との比
較成績を示し、更に具体的に説明する。
実施例 １直径０．１μから１．０μのラテツクス粒子
の２．０％懸濁液１容にラテツクス粒子１７ｎｙ当り２
００μ７になるようにヒトガンマグロブリン溶液を加え
、よく混合した後、５６℃で３０分加熱する。
の２．０％懸濁液１容にラテツクス粒子１７ｎｙ当り２
００μ７になるようにヒトガンマグロブリン溶液を加え
、よく混合した後、５６℃で３０分加熱する。
この懸濁液に０．２容の５０，０％シヨ糖溶液を加えた
後、グリシン緩衝液（ＰＨ８．２）でラテツクス濃度が
、最終０，５％になるように調整する。保存にあたつて
は、アジ化ナトリウム等の防腐剤を適量添加する。実施
方法としては、凝集反応用スライドグラス上に、被検血
清０．０５ｍ１を滴下し、その上に、上記リウマチ因子
検出用試薬０．０５ｍ１を加え、スライドグラスを上下
左右に振り、１分間後に凝集の有無を判定する。判定は
第１図に示す判定基準に従つて行なつた。
後、グリシン緩衝液（ＰＨ８．２）でラテツクス濃度が
、最終０，５％になるように調整する。保存にあたつて
は、アジ化ナトリウム等の防腐剤を適量添加する。実施
方法としては、凝集反応用スライドグラス上に、被検血
清０．０５ｍ１を滴下し、その上に、上記リウマチ因子
検出用試薬０．０５ｍ１を加え、スライドグラスを上下
左右に振り、１分間後に凝集の有無を判定する。判定は
第１図に示す判定基準に従つて行なつた。
１５例の非動化した血清について、２０倍希釈する従来
法と比較した成績を第１表に示す。
法と比較した成績を第１表に示す。
実施例 ２直径０．１μから１．０μのラテツクス粒子
の２．０％のラテツクス懸濁液１容にラテツクス１ｍ９
当り３００ｔｔＶになるようにヒトガンマグロブリン溶
液を加え、よく混合した後、５６℃で３０分間加熱する
。
の２．０％のラテツクス懸濁液１容にラテツクス１ｍ９
当り３００ｔｔＶになるようにヒトガンマグロブリン溶
液を加え、よく混合した後、５６℃で３０分間加熱する
。
この懸濁液に０．２容の５０．０％塩化コリン溶液を加
えた後、グリシン緩衝液（ ＰＨ８．２）でラテツクス
濃度が最終濃度で０．５％になるように調整する。保存
にあたつては、アジ化ナトリウム等の防腐剤を適量添加
する。実施方法は実施例１の項と同様である。１５例の
非動化した血清について、２０倍希釈する従来法と比較
した成績を第２表に示す。
えた後、グリシン緩衝液（ ＰＨ８．２）でラテツクス
濃度が最終濃度で０．５％になるように調整する。保存
にあたつては、アジ化ナトリウム等の防腐剤を適量添加
する。実施方法は実施例１の項と同様である。１５例の
非動化した血清について、２０倍希釈する従来法と比較
した成績を第２表に示す。
実施例 ３直径０．１μから１．０μのラテツクス粒子
の２．０％ラテツクス懸濁液１容にラテツクス１即当り
２００μｖになるようにヒトガンマグロブリン溶液を加
え、よく混合した後、５６℃で３０分間加熱する。
の２．０％ラテツクス懸濁液１容にラテツクス１即当り
２００μｖになるようにヒトガンマグロブリン溶液を加
え、よく混合した後、５６℃で３０分間加熱する。
この懸濁液に０．２容の５０．０％シヨ糖溶液、及び０
．２容の５０．０％塩化コリン溶液を加え：た後、グリ
シン緩衝液（ ＰＨ８．２）でラテツクス濃度が最終濃
度で０．５％になるように調整する。保存にあたつては
、アジ化ナトリウム等の防腐剤を適量添加する。実施方
法は実施例１の項と同様である。１５例の非動化した血
清について２０倍希釈する従来法と比較した成績を第３
表に示す。
．２容の５０．０％塩化コリン溶液を加え：た後、グリ
シン緩衝液（ ＰＨ８．２）でラテツクス濃度が最終濃
度で０．５％になるように調整する。保存にあたつては
、アジ化ナトリウム等の防腐剤を適量添加する。実施方
法は実施例１の項と同様である。１５例の非動化した血
清について２０倍希釈する従来法と比較した成績を第３
表に示す。
実施例１、及び実施例２でも、ある程度、従来法と似た
成績を示しているが、実施例３の如くシヨ糖と塩化コリ
ンの両方を添加することにより、効果はいつそう強くな
り、従来法と完全に一致した成績を示した。
成績を示しているが、実施例３の如くシヨ糖と塩化コリ
ンの両方を添加することにより、効果はいつそう強くな
り、従来法と完全に一致した成績を示した。
実施例 ４
直径０．１μから１．０μのラテツクス粒子の２．０％
ラテツクス懸濁液１容にラテツクス１即当り２００μｖ
になるようにヒトガンマグロブリン溶液を加え、よく混
合した後、５６℃で３０分間加熱する。
ラテツクス懸濁液１容にラテツクス１即当り２００μｖ
になるようにヒトガンマグロブリン溶液を加え、よく混
合した後、５６℃で３０分間加熱する。
この懸濁液に０．２容の５０．０％シヨ糖溶液、０．２
容の５０．０％塩化コリン溶液、単独、あるいは両方を
加え、更にソジウムポリアネトールスルホネートを０．
０１％から０．１％の割合に加えた後、グリシン緩衝液
（ ＰＨ８．２）でラテツクス濃度が０．５％になるよ
うに調整する。保存にあたつては、アジ化ナトリウム等
の防腐剤を適量添加する。実施方法は、実施例１の項と
同様である。１５例の血清について、非動化せずに上記
試薬を使用した場合と、非動化して実施例３の試薬を使
用した場合の成績を第４表に示す。
容の５０．０％塩化コリン溶液、単独、あるいは両方を
加え、更にソジウムポリアネトールスルホネートを０．
０１％から０．１％の割合に加えた後、グリシン緩衝液
（ ＰＨ８．２）でラテツクス濃度が０．５％になるよ
うに調整する。保存にあたつては、アジ化ナトリウム等
の防腐剤を適量添加する。実施方法は、実施例１の項と
同様である。１５例の血清について、非動化せずに上記
試薬を使用した場合と、非動化して実施例３の試薬を使
用した場合の成績を第４表に示す。
ソジウムポリアネトールスルホネートを添加した場合は
非動化した場合と同様の成績を示した。
非動化した場合と同様の成績を示した。
実施例 ５直径０．１μから１．０μのラテツクス粒子
の２．０％懸濁液１容にラテツクス１η当り２００μ７
になるようにヒトガンマグロブリン溶液を加え、よく混
合したのち、５６℃で３０分間加熱する。
の２．０％懸濁液１容にラテツクス１η当り２００μ７
になるようにヒトガンマグロブリン溶液を加え、よく混
合したのち、５６℃で３０分間加熱する。
この懸濁液に０．２容の５０．０％シヨ糖溶液、０．２
容の５０．０％塩化コリン溶液、単独、あるいは両方を
加え、グリシン緩衝液（ＰＨ８．２）でラテツクス濃度
が、最終濃度で０．５％になるように調整した液を第１
液とする。次にグリシン緩衝液（ＰＨ８．２）に、ソジ
ウムポリアネトールスルホネートを０．０１％から０．
１％の割合に加えた液を第２液とする。実施方法として
は、凝集反応用スライド上に、被検血清を０．０５ｍ１
滴下し、その上に、上記試薬第２液を０．０５ｍ１１つ
いで第１液を０．０５ｍ１加える。スライドグラスを上
下左右に振り、１分間後に凝集の有無を判定する。１５
例の血清について、非動化せずに上記試薬を使用した場
合と、非動化して実施例３の試薬を使用した場合の成績
を第５表に示す。
容の５０．０％塩化コリン溶液、単独、あるいは両方を
加え、グリシン緩衝液（ＰＨ８．２）でラテツクス濃度
が、最終濃度で０．５％になるように調整した液を第１
液とする。次にグリシン緩衝液（ＰＨ８．２）に、ソジ
ウムポリアネトールスルホネートを０．０１％から０．
１％の割合に加えた液を第２液とする。実施方法として
は、凝集反応用スライド上に、被検血清を０．０５ｍ１
滴下し、その上に、上記試薬第２液を０．０５ｍ１１つ
いで第１液を０．０５ｍ１加える。スライドグラスを上
下左右に振り、１分間後に凝集の有無を判定する。１５
例の血清について、非動化せずに上記試薬を使用した場
合と、非動化して実施例３の試薬を使用した場合の成績
を第５表に示す。
実施例 ６
実施例３の試薬について、長期間の経時変化を研究した
成績が、第６表である。
成績が、第６表である。
従来のリウマチ因子検出用試薬では、２あ〜１０℃で１
年間保存したものは、リウマチ因子陰性血清でも、かな
りの非特異反応がみられるのに対し、本発明による試薬
は１年後でも安定であつた。
年間保存したものは、リウマチ因子陰性血清でも、かな
りの非特異反応がみられるのに対し、本発明による試薬
は１年後でも安定であつた。
第１図は本発明のリウマチ因子検出用試薬を用いて、リ
ウマチ因子の検出を実施する際の判定基準となる凝集像
の状態及び判定記号を示し、記号は次の意味を表わす。 廿・・・・・・大きな凝集像が認められる。
ウマチ因子の検出を実施する際の判定基準となる凝集像
の状態及び判定記号を示し、記号は次の意味を表わす。 廿・・・・・・大きな凝集像が認められる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 直径０．１μから１．０μのラテックス粒子１ｍｇ
に対して、１００μｇから５００μｇのヒトガンマグロ
ブリンを吸着せしめた０．２％から２．０％のラテック
ス懸濁液及びシヨ糖、あるいは（及び）塩化コリンを含
有することを特徴とするリウマチ因子検出用試薬。 ２ シヨ糖を１．０％〜１０．０％の割合で含有するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載のリウマチ因
子検出用試薬。 ３ 塩化コリンを１．０％〜１０．０％の割合で含有す
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載のリウマ
チ因子検出用試薬。 ４ シヨ糖を１．０％〜１０．０％及び塩化コリンを１
．０％〜１０．０％の割合で含有することを特徴とする
特許請求の範囲第１項記載のリウマチ因子検出用試薬。 ５ 直径０．１μから１．０μのラテックス粒子１ｍｇ
に対して、１００μｇから５００μｇのヒトガンマグロ
ブリンを吸着せしめた０．２％から２．０％のラテック
ス懸濁液と、シヨ糖または塩化コリンを単独あるいは両
方を１．０％〜１０．０％の割合で含有し、更にソジウ
ムポリアネトールスルホネートを０．０１％〜０．１％
の割合で含有することを特徴とするリウマチ因子検出用
試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8920477A JPS5924387B2 (ja) | 1977-07-27 | 1977-07-27 | リウマチ因子検出用試薬゜ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8920477A JPS5924387B2 (ja) | 1977-07-27 | 1977-07-27 | リウマチ因子検出用試薬゜ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5426327A JPS5426327A (en) | 1979-02-27 |
| JPS5924387B2 true JPS5924387B2 (ja) | 1984-06-08 |
Family
ID=13964177
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8920477A Expired JPS5924387B2 (ja) | 1977-07-27 | 1977-07-27 | リウマチ因子検出用試薬゜ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5924387B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0668492B2 (ja) * | 1986-03-20 | 1994-08-31 | 日立化成工業株式会社 | リウマチ因子の定量法 |
| JPH0672888B2 (ja) * | 1986-03-24 | 1994-09-14 | 日立化成工業株式会社 | リウマチ因子定量用試薬 |
| DE3919393A1 (de) * | 1989-06-14 | 1990-12-20 | Hoechst Ag | Verfahren zur stabilisierung von auf festphasen immobilisierten biologisch aktiven substanzen |
| WO2002018953A1 (fr) * | 2000-08-29 | 2002-03-07 | Kyowa Medex Co.,Ltd | Reactifs et methode d'immunoessai d'agglutination fortement reproductible |
| CN107966440A (zh) * | 2017-11-17 | 2018-04-27 | 西双版纳州质量技术监督综合检测中心 | 橡胶胶乳中蔗糖的检验方法 |
-
1977
- 1977-07-27 JP JP8920477A patent/JPS5924387B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5426327A (en) | 1979-02-27 |
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