JPS5923791B2 - 固定化微生物の製造法 - Google Patents
固定化微生物の製造法Info
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- JPS5923791B2 JPS5923791B2 JP55181383A JP18138380A JPS5923791B2 JP S5923791 B2 JPS5923791 B2 JP S5923791B2 JP 55181383 A JP55181383 A JP 55181383A JP 18138380 A JP18138380 A JP 18138380A JP S5923791 B2 JPS5923791 B2 JP S5923791B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、固定化微生物の製造法に関するものであり、
さらに詳しくは澱粉にアクリルアミドメチル基を導入し
た重合性澱粉にアクリルアミドなでのビニル基を含む重
合性単量体を混合した水溶液に微生物の菌体を混合して
重合せしめ、生成した重合性ゲル中に微生物の菌体を包
括して固定化微生物を製造するものである。
さらに詳しくは澱粉にアクリルアミドメチル基を導入し
た重合性澱粉にアクリルアミドなでのビニル基を含む重
合性単量体を混合した水溶液に微生物の菌体を混合して
重合せしめ、生成した重合性ゲル中に微生物の菌体を包
括して固定化微生物を製造するものである。
固定化微生物は、微生物の菌体中に存在する酵素系の活
性を保持し、長期間にわたって繰返して使用することが
可能であり、目的によっては精製した酵素を樹脂担体に
結合した固定化酵素よりも工業的に有利性が高いもので
ある。
性を保持し、長期間にわたって繰返して使用することが
可能であり、目的によっては精製した酵素を樹脂担体に
結合した固定化酵素よりも工業的に有利性が高いもので
ある。
固定化微生物の製法としては、従来から種々な方法が知
られており、その代表的なものとして４微生物菌体をポ
リアクリルアミドゲル、寒天ゲノにカラギーナンゲル、
コラーゲンゲル、アルギン酸カルシウムゲル、ポリビニ
ールアルコールゲルなどのゲル内に包括して固定化する
方法がある（固定化酵素、千畑一部編、講談針１．９７
５ ）。
られており、その代表的なものとして４微生物菌体をポ
リアクリルアミドゲル、寒天ゲノにカラギーナンゲル、
コラーゲンゲル、アルギン酸カルシウムゲル、ポリビニ
ールアルコールゲルなどのゲル内に包括して固定化する
方法がある（固定化酵素、千畑一部編、講談針１．９７
５ ）。
微生物菌体をそのま＼固定化すれば、微生物菌体に含有
される酵素系をそのま＼酵素剤として取扱えるので、酵
素を抽出精製する工程を省略でき、酵素活性の歩留りも
高く保持することができる。
される酵素系をそのま＼酵素剤として取扱えるので、酵
素を抽出精製する工程を省略でき、酵素活性の歩留りも
高く保持することができる。
しかし、微生物菌体をそのま＼高分子物質のゲルの中に
包括してしまうため、酵素反応性が低下したり、また酵
素反応性を高めるため、高分子物質の包括度をゆるくす
れば、ゲル自体が機械的に軟弱になる欠点があり、工業
的に長期間使用できるようなゲルの探究が広く行われて
いるのが現状である。
包括してしまうため、酵素反応性が低下したり、また酵
素反応性を高めるため、高分子物質の包括度をゆるくす
れば、ゲル自体が機械的に軟弱になる欠点があり、工業
的に長期間使用できるようなゲルの探究が広く行われて
いるのが現状である。
本発明者らは、こうした観点から工業的に酵素反応性が
高く維持され、長期間にわたって繰り返し使用可能であ
って、機械的強度の高いゲルの探索を行なった結果、澱
粉にアクリルアミドメチル基を導入した重合性澱粉を用
いたゲルが上記目的に合うことを見い出し、本発明を完
成したのである。
高く維持され、長期間にわたって繰り返し使用可能であ
って、機械的強度の高いゲルの探索を行なった結果、澱
粉にアクリルアミドメチル基を導入した重合性澱粉を用
いたゲルが上記目的に合うことを見い出し、本発明を完
成したのである。
本発明で使用する澱粉にアクリルアミドメチル基を導入
した重合性澱粉は、商品名スターポール−１００（Ｓｔ
ａｒｐｏＪ −１００）として市販されている。
した重合性澱粉は、商品名スターポール−１００（Ｓｔ
ａｒｐｏＪ −１００）として市販されている。
これは、アメリカ合衆国のニー イー・スタレイ・マニ
ファクチアリング・カンパニー（Ａ 、 Ｂ 、 ５ｔ
ａｌｅｙ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏ、）の製
品であり、コーティング剤や接着剤への添加剤として使
用されており、容易に入手することができる。
ファクチアリング・カンパニー（Ａ 、 Ｂ 、 ５ｔ
ａｌｅｙ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏ、）の製
品であり、コーティング剤や接着剤への添加剤として使
用されており、容易に入手することができる。
重合性澱粉スターポール１００とアクリルアミド、アク
リル酸、ハイドロキシメチルアクリル醜Ｎ 、 Ｎ’−
メチレンビスアクリルアミド等のビニル基単量体との共
重合は、重合促進剤としてβ−ジメチルアミンプロピオ
ニトリルなどのアミン類の添加により、より低い温度で
重合反応を行なうことができる。
リル酸、ハイドロキシメチルアクリル醜Ｎ 、 Ｎ’−
メチレンビスアクリルアミド等のビニル基単量体との共
重合は、重合促進剤としてβ−ジメチルアミンプロピオ
ニトリルなどのアミン類の添加により、より低い温度で
重合反応を行なうことができる。
重合の開始は通常のアクリルアミドの重合に用いられる
方法、たとえば、紫外線、放射線などの照射、あるいは
過硫酸カリウムなどの過酸化物の添加により行なうこと
ができる。
方法、たとえば、紫外線、放射線などの照射、あるいは
過硫酸カリウムなどの過酸化物の添加により行なうこと
ができる。
また、ゲル内に包括し固定化する微生物菌体１ｄ。
細菌類、カビ類、放線菌類あるいは酵母菌類などの微生
物種が適宜用いられる。
物種が適宜用いられる。
これらの微生物菌体の調製は、通常の微生物用培養基に
より培養して得た生きた微生物の菌体でもよく、また、
それらの凍結乾燥処理あるいはアセトン等の有機溶媒処
理により乾燥した微生物の粉末菌体であってもよく、目
的に応じて適宜利用できる。
より培養して得た生きた微生物の菌体でもよく、また、
それらの凍結乾燥処理あるいはアセトン等の有機溶媒処
理により乾燥した微生物の粉末菌体であってもよく、目
的に応じて適宜利用できる。
次に本発明の方法を工程を追って説明する。
まず、固定化する微生物の菌体の調製は、目的とした酵
素系の生成が最も良好な培養条件で培養し、遠心分離法
などの方法によって培養液より微生物菌体を分離し、必
要に応じては水や緩衝液などにより洗浄して菌体を調製
する。
素系の生成が最も良好な培養条件で培養し、遠心分離法
などの方法によって培養液より微生物菌体を分離し、必
要に応じては水や緩衝液などにより洗浄して菌体を調製
する。
生成ゲル１００グ（湿重量）に対して２０チ以下に相当
する量の微生物の生菌体あるいは乾燥菌体を包括するよ
うに添加するが、ゲル化の方法は公地のゲル包括法によ
って行なうことが可能である。
する量の微生物の生菌体あるいは乾燥菌体を包括するよ
うに添加するが、ゲル化の方法は公地のゲル包括法によ
って行なうことが可能である。
例えば、重合性澱粉スターポール１００の水溶液に、適
宜アクリルアミド、Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアクリルア
ミドなどのビニル基単量体を溶かし、これに所定量の微
生物菌体を混合し、重合促進剤（たとえばβ−ジメチル
アミンプロピオニｌ−ＩＪルなと）、重合開始剤（たと
えば過硫酸カリウムなど）を加えて３５℃以下の低温で
重合させる。
宜アクリルアミド、Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアクリルア
ミドなどのビニル基単量体を溶かし、これに所定量の微
生物菌体を混合し、重合促進剤（たとえばβ−ジメチル
アミンプロピオニｌ−ＩＪルなと）、重合開始剤（たと
えば過硫酸カリウムなど）を加えて３５℃以下の低温で
重合させる。
生成したゲルを直径が２〜５Ｍの粒状になるように成形
した後、水あるいは緩衝液で適宜洗浄することにより、
目的の固定化微生物ゲルを調製することができる。
した後、水あるいは緩衝液で適宜洗浄することにより、
目的の固定化微生物ゲルを調製することができる。
このようにして得られた固定化微生物ゲルは、そのま＼
反応装置に充填して使用することができるが、微生物培
養液や界面活性剤含有液に懸濁することにより、固定化
微生物ゲルの酵素系の活性を高くした後に使用すること
もできる。
反応装置に充填して使用することができるが、微生物培
養液や界面活性剤含有液に懸濁することにより、固定化
微生物ゲルの酵素系の活性を高くした後に使用すること
もできる。
また、固定化微生物ゲルを通常の発酵操作と同様に微生
物培養液に接種（懸濁）して、通気撹拌などの操作によ
り、固定化微生物ゲルによる発酵生産を行なうことがで
きる。
物培養液に接種（懸濁）して、通気撹拌などの操作によ
り、固定化微生物ゲルによる発酵生産を行なうことがで
きる。
ゲル中の微生物濃度が低い場合には、酵素系の生成に良
好な微生物培養液にゲルを懸濁して培養することにより
、ゲル中の微生物濃度を高めることが可能である。
好な微生物培養液にゲルを懸濁して培養することにより
、ゲル中の微生物濃度を高めることが可能である。
上記の方法により調製される重合性澱粉ゲルの固定化微
生物は、微生物酵素反応、たとえば、ツマ−ラーゼ活性
を有するブレビバクテリウム、アンモニアゲネスを用い
るリンゴ酸の生産、トリフトファナーゼ活性を有するニ
ジエリチア・コリなどを用いるＬ−トＩＪブトファンの
生産、あるいはペニシリン・アシラーゼ活性を有するバ
チルス・メガテリウムなどを用いる半合成セファロスポ
リンの生産などに応用することができる。
生物は、微生物酵素反応、たとえば、ツマ−ラーゼ活性
を有するブレビバクテリウム、アンモニアゲネスを用い
るリンゴ酸の生産、トリフトファナーゼ活性を有するニ
ジエリチア・コリなどを用いるＬ−トＩＪブトファンの
生産、あるいはペニシリン・アシラーゼ活性を有するバ
チルス・メガテリウムなどを用いる半合成セファロスポ
リンの生産などに応用することができる。
また、バチルス・ライケニホルミスなどを用いることに
より、バシトラシンなどの抗生物質の生産や、ミクロバ
クテリウム アンモニアフィルムなどを用いることによ
り、Ｌ−グルタミン酸などのアミノ酸の生産を行なうこ
とができる。
より、バシトラシンなどの抗生物質の生産や、ミクロバ
クテリウム アンモニアフィルムなどを用いることによ
り、Ｌ−グルタミン酸などのアミノ酸の生産を行なうこ
とができる。
本発明によれば、従来のポリアクリルアミドゲル、アル
ギン酸カルシウムゲル、寒天ゲルあるいはコラーゲンゲ
ルなどに比較して、固定化微生物ゲルの機械的強度が高
く、また、ゲル内に固定化された微生物菌体の活性を高
く保持することができるので、本発明の方法は固定化微
生物の工業的利用を可能ならしめるものである。
ギン酸カルシウムゲル、寒天ゲルあるいはコラーゲンゲ
ルなどに比較して、固定化微生物ゲルの機械的強度が高
く、また、ゲル内に固定化された微生物菌体の活性を高
く保持することができるので、本発明の方法は固定化微
生物の工業的利用を可能ならしめるものである。
以下に実施例を挙げて本発明の方法を具体的に説明する
が、これらは単なる例示であって、本発明を限定するも
のではない。
が、これらは単なる例示であって、本発明を限定するも
のではない。
実施例 １
ブレビバクテリウム・アンモニアゲネスＡＴＣＣ６８７
１をグルコース２チ、尿素０．２％、リン酸第１カリウ
ム０．２％、硫酸マグネシウム０１０５懺コーン・スチ
ープ リカー１％、フマール酸５％、ＰＨ７，０の殺菌
した培地５０ｍ１に接種し、３０℃で２４時間培養した
。
１をグルコース２チ、尿素０．２％、リン酸第１カリウ
ム０．２％、硫酸マグネシウム０１０５懺コーン・スチ
ープ リカー１％、フマール酸５％、ＰＨ７，０の殺菌
した培地５０ｍ１に接種し、３０℃で２４時間培養した
。
この種培養５７１１１を上記と同じ組成の培地１００７
７２βを５ｏｏｍｇ容量の振盪フラスコに入れて殺菌し
た培地溶液に接種して、３０℃で２４時間振盪培養をし
た。
７２βを５ｏｏｍｇ容量の振盪フラスコに入れて殺菌し
た培地溶液に接種して、３０℃で２４時間振盪培養をし
た。
培養終了後１ｔを集めて遠心分離して菌体を集めた。
一方、重合性澱粉（スターポール１００ ） ５ｆを５
０両の水に懸濁し、９５℃に加熱して溶かし、透明な水
溶液とした。
０両の水に懸濁し、９５℃に加熱して溶かし、透明な水
溶液とした。
室温まで冷却した後、アクリルアミドを１５１加えてよ
く溶かし、先に調製シタブレビバクテリウム アンモニ
アゲネスの生菌体を添加してよく混合した。
く溶かし、先に調製シタブレビバクテリウム アンモニ
アゲネスの生菌体を添加してよく混合した。
この溶液に水を加えて全量を８５ｍ１にした後、重合促
進剤として５チβ−ジメチルアミノプロピオニトリル水
溶液を１０ｍ１、重合開始剤として２５チ過硫酸カリウ
ム水溶液５ｍｌ加えてよく混合し、１５℃に１５時間静
置して重合を行なった。
進剤として５チβ−ジメチルアミノプロピオニトリル水
溶液を１０ｍ１、重合開始剤として２５チ過硫酸カリウ
ム水溶液５ｍｌ加えてよく混合し、１５℃に１５時間静
置して重合を行なった。
微生物菌体を包括した弾力性のあるゲルを２喘四角の金
網で裏ごし５で、直径が約２ｒｒａｎの細断ゲルにした
のち、２１−の水で洗浄して１０７グの固定化微生物ゲ
ルを得た。
網で裏ごし５で、直径が約２ｒｒａｎの細断ゲルにした
のち、２１−の水で洗浄して１０７グの固定化微生物ゲ
ルを得た。
Ｐ Ｈ７，５のリン酸緩衝液（１／１．５モル）２００
ｍｌに、フマール酸ナトリウム３２１、セチルピリジニ
ウムクロライド０．０２ ｆおよび先に調製した固定化
微生物ゲル１０７グを混合し、３５℃で２４時間、振盪
反応を行なった。
ｍｌに、フマール酸ナトリウム３２１、セチルピリジニ
ウムクロライド０．０２ ｆおよび先に調製した固定化
微生物ゲル１０７グを混合し、３５℃で２４時間、振盪
反応を行なった。
反応終了液を沢過して、固定化微生物ゲルを１ｔの水で
よく洗浄した。
よく洗浄した。
反応終了後と洗浄液中の生成したＬ−ＩＪンゴ酸を分析
（ラクトバチルス・アラビノーザスを用いる微生物定量
法）した結果、１９．ＯｆのＬ−リンゴ酸が生成してい
た。
（ラクトバチルス・アラビノーザスを用いる微生物定量
法）した結果、１９．ＯｆのＬ−リンゴ酸が生成してい
た。
これは添加したフマール酸に対して７２％のモル収率で
あった。
あった。
実施例 ２
実施例１と同様にして５ｔの培養液より調製したブレビ
バクテリウム・アンモニアゲネスＡＴＣＣ６８７１の生
菌体を５等分した。
バクテリウム・アンモニアゲネスＡＴＣＣ６８７１の生
菌体を５等分した。
一方、重合性澱粉（スターポール−１００）およびアク
リルアミドの濃度を第１表のように設定し、実施例１と
同様にして、それぞれ固定化微生物菌体を調製した。
リルアミドの濃度を第１表のように設定し、実施例１と
同様にして、それぞれ固定化微生物菌体を調製した。
この時、微生物菌体、重合促進剤、重合開始剤の添加量
は、実施例１と同じであった。
は、実施例１と同じであった。
得られた固定化微生物ゲルの湿重量は第１表に示すとお
りであった。
りであった。
夫々のゲルを用いて、実施例】と同様に反応を行ｆ、ｆ
つたところ、第１表に示すように１９．５ｆから１６．
：ｌ−のＬ−ＩＪンゴ酸が生成していた。
つたところ、第１表に示すように１９．５ｆから１６．
：ｌ−のＬ−ＩＪンゴ酸が生成していた。
実施例 ３
実施例１と同様にして４１の培養液より調製したブレビ
バクテリウム アンモニアゲネスＡＴＣＣ６８７１の生
菌体を４等分した。
バクテリウム アンモニアゲネスＡＴＣＣ６８７１の生
菌体を４等分した。
一方、重合性澱粉（スターポールｌ ００ ）２０グを
２００ｍ１の水に懸濁し、９５℃に加熱して溶かし、透
明な水溶液とした。
２００ｍ１の水に懸濁し、９５℃に加熱して溶かし、透
明な水溶液とした。
常温まで冷却した後に４等分し、それぞれのスターポー
ル水溶液に、アクリルアミド、アクリル酸ナトリウム、
ハイドロキシメチルアクリル酸ナトリウム、Ｎ、ＮＬメ
チレンビスアクリルアミドをそれぞれ単独に５ｔづつ添
加して溶解せしめた後、先に調製したブレビバクテリウ
ム・アンモニアゲネスの生菌体をそれぞれ添加してよく
混合した。
ル水溶液に、アクリルアミド、アクリル酸ナトリウム、
ハイドロキシメチルアクリル酸ナトリウム、Ｎ、ＮＬメ
チレンビスアクリルアミドをそれぞれ単独に５ｔづつ添
加して溶解せしめた後、先に調製したブレビバクテリウ
ム・アンモニアゲネスの生菌体をそれぞれ添加してよく
混合した。
この溶液に水を加えて全量を８５ｍ１とした後、重合促
進剤として５％β−ジメチルアミノプロピオニ） ＩＪ
ル水溶液１０ｍ１、重合開始剤として２５％過硫酸カリ
ウム５ｍｌを加えてよく混合し、２０℃に１５時間静置
して重合を行なった。
進剤として５％β−ジメチルアミノプロピオニ） ＩＪ
ル水溶液１０ｍ１、重合開始剤として２５％過硫酸カリ
ウム５ｍｌを加えてよく混合し、２０℃に１５時間静置
して重合を行なった。
得られた微生物菌体を包括した弾力性のあるゲルを２ｔ
ｒａｎ四角の金網で裏ごし＼て直径が約２ｒＩｒ！ｒＬ
の細断ゲルにしたのち、２ｔの水で洗浄した。
ｒａｎ四角の金網で裏ごし＼て直径が約２ｒＩｒ！ｒＬ
の細断ゲルにしたのち、２ｔの水で洗浄した。
得られたゲルの湿重量を第２表に示した。
ＰＨ７，５のリン酸緩衝液（１／１５モル）８００７１
１１１Ｃ、フマール酸ナトリウム１２８ｔ？、セチ ル
ピリジニウムクロライドｏ、６ｓｙを溶かした水溶液を
４等分し、それぞれの水溶液に先に調製した固定化微生
物ゲルを懸濁して、３７℃で２４時間振盪反応を行なっ
た。
１１１Ｃ、フマール酸ナトリウム１２８ｔ？、セチ ル
ピリジニウムクロライドｏ、６ｓｙを溶かした水溶液を
４等分し、それぞれの水溶液に先に調製した固定化微生
物ゲルを懸濁して、３７℃で２４時間振盪反応を行なっ
た。
反応終了液を沢過して、固定化微生物ゲルを１ｔの水で
よく洗浄した。
よく洗浄した。
反応終了液と洗浄液中の生成したＬ−ＩＪンゴ酸を分析
したところ、第２表の成績を得た。
したところ、第２表の成績を得た。
実施例 ４
実施例１と同様にして調製した固定化微生物ゲル１０５
グを、Ｐ Ｈ７，５のリン酸緩衝液（１７１５モル）２
００７７２／ｌ、 フマール酸ナトリウム３２グ、セ
チルピリジニウムクロライド０．０２ｆの反応液に懸濁
し、内容積１，２ｔのミニジャーファーメンタ−（丸菱
理化製ＭＤ−１５０型）に入れて、３５℃で２４時間攪
拌反応を行なった。
グを、Ｐ Ｈ７，５のリン酸緩衝液（１７１５モル）２
００７７２／ｌ、 フマール酸ナトリウム３２グ、セ
チルピリジニウムクロライド０．０２ｆの反応液に懸濁
し、内容積１，２ｔのミニジャーファーメンタ−（丸菱
理化製ＭＤ−１５０型）に入れて、３５℃で２４時間攪
拌反応を行なった。
反応２４時間目から、フマール酸ナトリウム１６％、セ
チルピリジニウムクロライド０．０１％を含むＰ Ｈ７
，５のリン酸緩衝液（１／１５モル）を連続的に注入し
、同量の反応液を排出させる連続反応に切り変えて反応
を継続した。
チルピリジニウムクロライド０．０１％を含むＰ Ｈ７
，５のリン酸緩衝液（１／１５モル）を連続的に注入し
、同量の反応液を排出させる連続反応に切り変えて反応
を継続した。
連続反応の平均滞留時間は２４時間に設定した。
反応装置より排出された反応終了液を２４時間ごとに集
め、それぞれ生成したＬ−ＩＪンゴ酸を分析したところ
、第３表に示すように連続反応２０日間の後にも、Ｌ−
ＩＪンゴ酸の生成量には変動がなかった。
め、それぞれ生成したＬ−ＩＪンゴ酸を分析したところ
、第３表に示すように連続反応２０日間の後にも、Ｌ−
ＩＪンゴ酸の生成量には変動がなかった。
実施例 ５
エンテロバクタ−・スベシースＡＳＴ４９−４（微工研
菌寄第５５４３号）をペプトン２％、カザミノ酸１％、
酵母エキス０．５’％、コーン・スチープ リカー５％
、Ｌ−１リプトファン０．２チ、リン酸第１カリウム０
．０５１％、硫酸マグネシウム０．０５％、硫酸第一鉄
０．００３係、硫酸マンガン０．００３％、ＰＨ７，２
の組成の培地５ｍｌを直径１８ｍの試験管に分注し、１
２０℃、１０分間殺菌した培地に１白金耳接種し、３２
℃で２０時間振盪培養した。
菌寄第５５４３号）をペプトン２％、カザミノ酸１％、
酵母エキス０．５’％、コーン・スチープ リカー５％
、Ｌ−１リプトファン０．２チ、リン酸第１カリウム０
．０５１％、硫酸マグネシウム０．０５％、硫酸第一鉄
０．００３係、硫酸マンガン０．００３％、ＰＨ７，２
の組成の培地５ｍｌを直径１８ｍの試験管に分注し、１
２０℃、１０分間殺菌した培地に１白金耳接種し、３２
℃で２０時間振盪培養した。
この種培養液５ｍｌを種培養と同じ組成の培地１００ｍ
１を５００７７２１容量の振盪フラスコに入れて、１２
０℃、１０分間殺菌した本培養液に接種して、３２℃で
２０時間振盪培養した。
１を５００７７２１容量の振盪フラスコに入れて、１２
０℃、１０分間殺菌した本培養液に接種して、３２℃で
２０時間振盪培養した。
培養終了液２ｔを遠心分離して菌体を集めた。
重合性澱粉スターポール７．５１を５０ｍ１の水に懸濁
し、９８℃に加熱して溶かし透明な水溶液とした。
し、９８℃に加熱して溶かし透明な水溶液とした。
室温まで冷却した後、アクリルアミドを１２５７加えて
よく溶かし、先に調製したエンテロバクタ−・スペシー
スＡＳＴ４９−４の生菌体を添加してよく混合した。
よく溶かし、先に調製したエンテロバクタ−・スペシー
スＡＳＴ４９−４の生菌体を添加してよく混合した。
この溶液に水を加えて全量を８５７１１１にした後、重
合促進剤として５％β−ジメチルアミメプロピオニトリ
ル水溶液を１０ｍ１．重合開始剤として２５チ過硫酸力
リウム水溶液５ｍｌを加えてよく混合し、１５℃に１５
時間静置して重合を行った。
合促進剤として５％β−ジメチルアミメプロピオニトリ
ル水溶液を１０ｍ１．重合開始剤として２５チ過硫酸力
リウム水溶液５ｍｌを加えてよく混合し、１５℃に１５
時間静置して重合を行った。
かくして得られた弾力性のあるゲルを２’Ｍ四角の金網
で裏ごしして、直径が約２ｒｒｕｎの細断ゲルにした後
、２ｔの水で洗浄し、１１２１の固定化微生物を得た。
で裏ごしして、直径が約２ｒｒｕｎの細断ゲルにした後
、２ｔの水で洗浄し、１１２１の固定化微生物を得た。
ピルビン酸ナトリウム２０グ、酢酸アンモニウム２０グ
、インドール２０グ、ピリドキサールリン酸１００ＴＩ
Ｉ１１ エチレン ジアミン・４酢酸２１、水９００
７７２／、 メタノ−／Ｉ／］、ＯＯｍ／、 ＰＨ
９，０の組成の反応液２００ｍ１に、先に調製したエン
テロバクタ−スペシースＡＳＴ４９−４を包括した固定
化微生物ゲル１１２２を懸濁し、３２℃で振盪反応を行
なった。
、インドール２０グ、ピリドキサールリン酸１００ＴＩ
Ｉ１１ エチレン ジアミン・４酢酸２１、水９００
７７２／、 メタノ−／Ｉ／］、ＯＯｍ／、 ＰＨ
９，０の組成の反応液２００ｍ１に、先に調製したエン
テロバクタ−スペシースＡＳＴ４９−４を包括した固定
化微生物ゲル１１２２を懸濁し、３２℃で振盪反応を行
なった。
反応３６時間後に反応液とゲルを沢過して分離し、ゲル
を再び２００ｍ１の前記の反応液に懸濁して、繰り返し
て反応を行なった。
を再び２００ｍ１の前記の反応液に懸濁して、繰り返し
て反応を行なった。
このような操作により、７回の繰り返し反応によって生
成したＬ−１１Ｊブトフアンの収量は、第４表に示すと
おり変動がなかった。
成したＬ−１１Ｊブトフアンの収量は、第４表に示すと
おり変動がなかった。
実施例 ６
バチルス・ライケニホルミスＡＴＣＣ］、０７１６を可
溶性デンプン２係、グルコース０．５係、ペプトン１％
、脱脂大豆塩酸加水分解物５係、硫酸マグネシウム０．
５係、Ｐ Ｈ７，８の殺菌した培地５０ｍ１に接種し、
３２℃で１６時間振盪培養した。
溶性デンプン２係、グルコース０．５係、ペプトン１％
、脱脂大豆塩酸加水分解物５係、硫酸マグネシウム０．
５係、Ｐ Ｈ７，８の殺菌した培地５０ｍ１に接種し、
３２℃で１６時間振盪培養した。
この種培養５ｍｌを上記と同じ組成の培地１−ｏｏｍｇ
を５００７７２６容量の振盪フラスコに入れて殺菌した
培地溶液に接種して、３２℃で１３時間振盪培養した。
を５００７７２６容量の振盪フラスコに入れて殺菌した
培地溶液に接種して、３２℃で１３時間振盪培養した。
この培養終了液２００７１１１を遠心分離して菌体を集
めた。
めた。
一方、重合性澱粉スターポール１００の５１を８０ｍ１
の水に懸濁し、１００℃で１０分間加熱して溶解した。
の水に懸濁し、１００℃で１０分間加熱して溶解した。
２０℃まで冷却した後、１５１のアクリルアミドを加え
てよく溶かし、先に調製したバチルス・ライケニホルミ
スの生きた菌体を混合し、重合促進剤として５％β−ジ
メチルアミノプロピオニトリル１０７７２４重合開始剤
として２５％過硫酸カリウム水溶液５７１１１を加えて
よく混合し、２０℃に１０時間静置して重合を行なった
。
てよく溶かし、先に調製したバチルス・ライケニホルミ
スの生きた菌体を混合し、重合促進剤として５％β−ジ
メチルアミノプロピオニトリル１０７７２４重合開始剤
として２５％過硫酸カリウム水溶液５７１１１を加えて
よく混合し、２０℃に１０時間静置して重合を行なった
。
得られた弾力性のあるゲルを２門四角の金網で裏ごしし
て、直径が約２ｒｒａｎの細断ゲルにした後、あらかじ
め加熱殺菌した水２ｔでよく洗浄した。
て、直径が約２ｒｒａｎの細断ゲルにした後、あらかじ
め加熱殺菌した水２ｔでよく洗浄した。
得られたゲルの５０１を、先に示した組成の培地１００
ｍ１に懸濁して、３２℃で２３時間振とう培養を行なっ
た。
ｍ１に懸濁して、３２℃で２３時間振とう培養を行なっ
た。
培養終了後ｌこ培養終了液を無菌操作によってゲルを培
養液から分離し、新しく調製した同一組成の培地に再び
懸濁し、３２℃で２３時間振盪培養を繰り返し行なった
。
養液から分離し、新しく調製した同一組成の培地に再び
懸濁し、３２℃で２３時間振盪培養を繰り返し行なった
。
８回の繰り返し培養の結果を第５表に示した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 澱粉にアクリルアミドメチル基を導入した重合性澱
粉に重合性単量体を混合した水溶液に、微生物の菌体を
混合して重合せしめることを特徴とする固体化微生物の
製造法。 ２ 重合体単量体がアクリルアミド、アクリル醜ハイド
ロキシメチルアクリル酸およびＮ、Ｎ’−メチレンビス
アクリルアミドより選ばれた１種のビニル基単量体であ
る特許請求の範囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55181383A JPS5923791B2 (ja) | 1980-12-23 | 1980-12-23 | 固定化微生物の製造法 |
| EP81110169A EP0054800B1 (en) | 1980-12-23 | 1981-12-04 | Process for the production of immobilized microorganisms |
| AT81110169T ATE4057T1 (de) | 1980-12-23 | 1981-12-04 | Verfahren zur herstellung von immobilisierten mikroorganismen. |
| DE8181110169T DE3160566D1 (en) | 1980-12-23 | 1981-12-04 | Process for the production of immobilized microorganisms |
| US06/330,916 US4450233A (en) | 1980-12-23 | 1981-12-15 | Immobilization of microorganisms in a polymer gel |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55181383A JPS5923791B2 (ja) | 1980-12-23 | 1980-12-23 | 固定化微生物の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57105190A JPS57105190A (en) | 1982-06-30 |
| JPS5923791B2 true JPS5923791B2 (ja) | 1984-06-05 |
Family
ID=16099764
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55181383A Expired JPS5923791B2 (ja) | 1980-12-23 | 1980-12-23 | 固定化微生物の製造法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4450233A (ja) |
| EP (1) | EP0054800B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5923791B2 (ja) |
| AT (1) | ATE4057T1 (ja) |
| DE (1) | DE3160566D1 (ja) |
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| US4600692A (en) * | 1983-02-10 | 1986-07-15 | Purification Engineering, Inc. | Immobilized cells for preparing phenylalanine |
| US4551431A (en) * | 1983-04-21 | 1985-11-05 | Phillips Petroleum Company | The use of gallium and indium salts for the immobilization of proteins |
| US4728611A (en) * | 1983-07-29 | 1988-03-01 | Purification Engineering, Inc. | Production of phenylalanine with immobilized cells |
| US4710467A (en) * | 1983-07-29 | 1987-12-01 | Purification Engineering, Inc. | Process for preparing phenylalanine |
| JPS6034189A (ja) * | 1983-08-02 | 1985-02-21 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 油脂のエステル交換法 |
| US4615883A (en) * | 1985-10-23 | 1986-10-07 | Plant Genetics, Inc. | Hydrogel encapsulated nematodes |
| US4701326A (en) * | 1985-10-23 | 1987-10-20 | Plant Genetics, Inc. | Membrane-coated hydrogel encapsulated nematodes |
| US4859377A (en) * | 1987-07-10 | 1989-08-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Starch encapsulation of entomopathogens |
| AU613069B2 (en) * | 1987-07-10 | 1991-07-25 | United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The | Starch encapsulation of biocontrol agents |
| SE460518B (sv) * | 1988-02-17 | 1989-10-23 | Diffchamb Ab | Gelkropp innehaallande mikroorganismer foer steriliseringskontroll samt foerfarande foer att genomfoera en steriliseringskontroll |
| US5141744A (en) * | 1989-08-03 | 1992-08-25 | Temple University | Insecticide delivery system and attractant |
| WO1993009176A2 (en) * | 1991-10-29 | 1993-05-13 | Clover Consolidated, Limited | Crosslinkable polysaccharides, polycations and lipids useful for encapsulation and drug release |
| US6455751B1 (en) | 1999-03-03 | 2002-09-24 | The Regents Of The University Of California | Oxidizer gels for detoxification of chemical and biological agents |
| DE10150311A1 (de) * | 2001-10-11 | 2003-04-30 | Bayer Cropscience Ag | Verfahren zur Erhöhung der Wachstumsrate von Zellen in statischen Flüssigmedien |
| US8304313B2 (en) * | 2004-08-23 | 2012-11-06 | Semiconductor Energy Laboratory Co., Ltd. | Semiconductor device and its manufacturing method |
| US9334507B2 (en) | 2012-06-15 | 2016-05-10 | Microvi Biotech, Inc. | Bioprocesses for making butanol |
| US9255281B2 (en) | 2012-06-15 | 2016-02-09 | Microvi Biotech Inc. | Bioconversion processes using water-insoluble liquids |
| US9752164B2 (en) | 2012-06-15 | 2017-09-05 | Microvi Biotech, Inc. | Enhanced efficiency ethanol and sugar conversion processes |
| US10752528B2 (en) | 2012-06-15 | 2020-08-25 | Microvi Biotech, Inc. | Water treatment processes using biocatalysts |
| CN110628754A (zh) * | 2019-10-10 | 2019-12-31 | 浙江海洋大学 | 微生物泡沫型载体及其制备方法、水面石油污染的原位处理方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2633259C3 (de) * | 1975-07-23 | 1984-11-15 | Japan Atomic Energy Research Institute, Tokio/Tokyo | Verfahren zum Unbeweglichmachen von Enzymen oder enzymhaltigen Zellen |
| JPS5266681A (en) * | 1975-11-26 | 1977-06-02 | Saburo Fukui | Fixing of enzyme or microbial fungus |
| US4079025A (en) * | 1976-04-27 | 1978-03-14 | A. E. Staley Manufacturing Company | Copolymerized starch composition |
| IT1141249B (it) * | 1980-02-28 | 1986-10-01 | Italfarmaco Spa | Procedimento per la preparazione di copolimeri di polisaccaridi supprotanti attivita' enzimatica,e copolimeri cosi' ottenuti |
-
1980
- 1980-12-23 JP JP55181383A patent/JPS5923791B2/ja not_active Expired
-
1981
- 1981-12-04 EP EP81110169A patent/EP0054800B1/en not_active Expired
- 1981-12-04 DE DE8181110169T patent/DE3160566D1/de not_active Expired
- 1981-12-04 AT AT81110169T patent/ATE4057T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-12-15 US US06/330,916 patent/US4450233A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS57105190A (en) | 1982-06-30 |
| EP0054800B1 (en) | 1983-07-06 |
| DE3160566D1 (en) | 1983-08-11 |
| EP0054800A1 (en) | 1982-06-30 |
| ATE4057T1 (de) | 1983-07-15 |
| US4450233A (en) | 1984-05-22 |
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