JPS59231452A - 水性試験試料中のイオンを測定するための試験具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はイオン、特に水溶液中のイオンの測定、および
そのようなＸ＋６定を実施するための試験手段または試
験具に関する。本発明は、試験試料溶液を中に試験手段
または試験具と接触させさえずれは直ちに検査技師がそ
の結果を入手できるような、迅速かつ簡便な、イオンの
試験法を提供する。イオン選択性電極、多光（フレーム
）光度工１、原子吸光分光光度計等のような煩雑な、し
かも高価な電子装置を必要としない。滴定および他の実
験室的操作のような時間を要する湿式化学手法にたよる
必要もない。本発明によれば、検査技師は試験法Ｆ１を
細片試験具または同様の試験手段とＱｊに接触さゼ、つ
いで色の変化を観察することができる。

水性イオン濃度の測定は多くの技術に応用できる。水の
精製技術においては、イオン交換樹脂を用いた脱イオン
剤の飽和度を試験するために、カルシウム濃度を注意深
く監視しなければならない。海上の船舶での飲料水の製
造においては、海水中のナトリウムイオンまたは他のイ
オンの測定は重要である。血中のカリウム濃度の測定は
、心筋機能における筋肉の興奮性および刺激的変化に至
る症状の診断において医師を助ける。このような症状と
しては、ショフクによる、尿量過少症、無尿症、尿障害
および腎臓障害が挙げられる。

いうまでもなく、イオン濃度の迅速かつ筒便な測定法は
、上述の技術水準のみならず、このような迅速かつ正確
な測定が有益である他の場合の技術水準をも同様に、大
幅に高めることであろう。

従って、例えば、もし医学研究室の技術者が血清または
全血試料のカリウムまたはカルシウム濃度を数秒または
数分で正確に測定することができれば、このような迅速
な結果が診断を行う医師を助けるのみならず、また医学
研究室での効率を何倍も高めることになるであろう。

本発明以前には、溶液中のイオンの測定法は多光光度法
、原子吸光分光光度法およびイオン選択性電極を含んで
いた。あるイオンを試料溶液から選択的に中麺する、あ
る化合物および組成物を用いることがイオン選択性電極
においては普通となってきている。イオノフオアとして
知られるこれらの物質は、イオンを、それらの反対イオ
ンから選択的に中外する能力を有し、これによりイオノ
フオアを含有する相において、電荷分離そして、それに
相当する電気伝導率の変化を引起す。

イオン／イオノフオア現象の実例としては膜電極、液体
／静体分配および蛍光を利用するイオン試験がある。

イオン」仮ユ１ｊ 異なるイオン濃度を有する二つの溶液を導電性の膜で分
離すると、電位（ＥＭＦ）が生じる。このような系によ
り生じるＥＭＦは濃度すなわちイオン活動度の関数であ
る。この現象は数学的には周知のネルンストの等式（Ｎ
ｅｒｎｓｔ　Ｅｑｕａｔｉｏｎ）式中、εは特定の系の
ＥＭＦであり、Ｆはファラデーの定数［２３，０Ｂ２．
４±　０．００３カロリ（ポルト当量）−’］であり、
Ｒは気体定数であり、Ｔは温度（°Ｃ）であり、γおよ
びＣはそれぞれ試験下のイオンの活動度係数およびモー
ラル濃度であり、右下の添字ｌは膜の一方の側の溶液を
表わし右下の添字２は他方の側の溶液を表わし、ｎは反
応中に移行した電子数である により表わされる。

このような膜分離型電池においては、膜は、わずかでは
あるが、しかし、測定可能な程度のイオンが一方の溶液
から他方の溶液へ拡散できる簡単なフリットガラスバリ
ア（障害壁）であってもよい。またはポリ塩化ビニルの
ような非多孔性で、非導電性のフィルムにイオノフオア
を含浸したものを用いてもよい。イオノフオアが存在し
ない場合、フィルムは絶縁体であり、ＥＭＦを測定する
ことはできない：ところが、イオノフオアを混練すると
、電荷イオンがフィルムに引き寄せられ、弱いながらも
測定可能な電流を誘起することができる。イオノフオア
はその親和力が選択的であリ、従って、ある特定のイオ
ンのみと結合するので、このような電池はイオン選釈性
である。測定＋ｉｌ能ないかなるＥＭＦも、これらのイ
オンの存在だけに依る。

かくして、カリウムイオン（Ｋ＋）を測定するだめの電
池は　Ｋ＋に対して特異的なイオノフオア、例えば、パ
リノマイシンを使用して製造することができる。カリウ
ムが存在すると、パリノマイシンは、Ｋ＋と結合し、か
つ運搬することにより膜を横しＪる伝導路を生じさせ、
従って微少電流を流れさせる。対照濃度のに＋溶液を膜
の一方側に入れ、試験試料を他力側に入れる。生じたＥ
ＭＦをＪｌ１足し、等式（Ｉ）から未知濃度を初出する
のに用いる。Ｋ＋がパリノマイシン１１りと結合するの
で伝導路はに＋に対してのみ現われる。従って、生じた
ＥＭＦは只、Ｋ＋の膜を横切る濃度勾配のみに起因する
。

１１りを横切って流れる電流は極めて少ないので、有意
量のに＋イオンまたは反対イオンは）Ｉりを通過して運
搬されない。膜の電気的中性は、水素イオンの反対方向
への流れによっても、または、ＯＨ−のモ行な波れによ
っても維持される。この陰イオン効果は、Ｉ］標イオン
に対する、電極の特異性を減少させることがあり、最少
にすべき障害である。

このようなイオン選択性電極を使用するに当っての主な
難点は、時間の経過につれて、応答の精度および速度が
著しく低下することである。更に、イオン濃度の微小変
化がＥＭＦのごく微小な変化をおこすだけなので、精緻
な電圧計を必要とする。

パリノマイシンのようなある種の抗生物質は、リン脂質
二重層膜（生物学的膜）の電気的性質に影響を与えるが
、これらの抗生物質は、可動性電荷対の形で、陽イオン
を膜内で可溶化し、そのため、「担体」機構により、陽
イオンが膜内部の絶縁性炭化水素を横切ることができる
ということが知られている。かかる複合体は、膜を通し
て複合体の電荷を運ぶという目的のみを有し、そのため
、膜の両側の液体間の電位差を測定することができる。

１９６６年　８月　８日に出願されたスイス特許出願第
１１４２８／８８号は、イオン感知性電極に、アミノ酸
およびオキシ酸の巨大環式誘導体を含浸した多孔性膜を
用いることについて述べている。この膜を形成するのに
用いる材料はガラスフリットおよび他の多孔性膜である
。このような電極はイオン活動度の１１１定に効果的で
あるといわれている。

ハンブレン（Ｈａｍｂｌｅｎ）等に付与された米国特許
第４，０５３，３８１号は同様の技術を開示しており、
膜を横切るイオン可動性を有するイオン選択性膜を利用
している。

１制乙豆主二ユ直 イオン測定におけるイオノフオアの別の公知の応用とし
ては液体／液体分配を用いるものである。この操作にお
いては、水と混和しない有機溶媒に疎水性イオノフオア
を溶解する。ｊ。

Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｂｉｏｌ、　Ｉ：２９４−３４５　
（１９６９）において、アイゼマン（Ｅｉｓａｍａｎ）
等はマクロテトラリド・アクチン抗生物質を用いる、水
溶液から有機溶媒への陽イオンの選択的抽出について開
示している。この技法は抗生物質を含有する有機溶媒相
を、ピクリン酸塩およびジニトロフェノール塩のような
脂溶性の着色した陰イオンの陽イオン性塩を含有する水
溶液と共゛に単に振とうすることである。有機相の着色
の強度を次に分光光度計を用いて測定してどれだけの塩
が抽出されたかを示す。相移動もまたディー／ラス（旧
り等、　Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍ、　Ｉｎｔ。

Ｅｄ、　Ｅｎｇｌ、　１７：８５？　（１９７８）によ
り、並びにプルゲルマイスタ（Ｂｕｒｇｅｒｍｅｉｓｔ
ｅｒ）等、Ｔｏｐ、　Ｃｕｒｒ。

Ｃｈｅｍ、　　６９：９１　（１９７７）；　ニー（Ｙ
ｕ）等、”　ＭｅｍｂｒａｎｅＡｃｔｉｖｅ　Ｃｏｍｐ
ｌｅｘｏｎｅｓ”エルセピア、アムステルダム（Ｅｌｓ
ｅｖｉｅｒ、　Ａｍｓｔｅｒｄａｍｌ（１９７４）；お
よびダンカン（Ｄｕｎｃａｎ）　”　　Ｃａｌｃｉｕｍ
　ｉｎ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｙｓｔｅｍｓ、”　ケ
ンブリッジ・ユニウ゛アーシティ拳フレス（Ｃａｍｂｒ
ｉｄｇｅ　Ｕ＋＋１ｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ）（１
９７Ｅｆ）をはじめとする文献において研究されている
。

スミヨシ等、Ｔａ１ａｎｔａ、２４，７８３−７８５（
１９７７）は、血清中のに＋を測定するのに有用な別の
方法を述べている。この技法においては、血清はトリク
ロロ酩酊により除蛋白し、指示薬染料を添加し、ついで
パリノマイシンを含有するクロロホルムのような溶媒と
振とうする。

アイゼマン（Ｅｉｓｅｍａｎ）により示されたように、
化合物の分配は液体間で迅速かつ効果的に行われるが、
これは被運搬種を界面から離して迅速に拡１１交させる
ことかできる、イオンフォア１旦体とイオンの１１ｆ動
性のためである。このような機構は固相においては通常
不ＩＩｆ能であり、これは、同相においては、物質が固
定され、かつ非可動性で、さらには実質的にその拡散が
皆無であるためである。

蛍つ「性」Ｌ工」ＬＺ 水溶靜中のイオン活動度の測定のための更に別のアプロ
ーチとしては蛍光性陰イオンを利用するものがある（フ
ェインスタイン（ＦｅｉｎＳｔｅｉｎ）　等、Ｐｒｏｃ
、　Ｍａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、υ、Ｓ、Ａ、、６
８．２０３７−２０４１（１９７＋）ｌ。有機溶媒中に
陽イオン／イオノフオア複合体が存在することは知られ
ているが、純粋な水性媒体中でのその複合体の生成は今
まで検出されていないと述べている。フェインスタイン
（Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ）等は、水中におけるこのような
複合体の存在を、蛍光性塩、１−アニリノ−８−ナフタ
レンスルホン酸塩および２−１１１−　トルイジンスル
ホン酸塩を用いて実証した。

イオノフオア／陽イオン複合体と蛍光性染料との相互反
応により、蛍光発光の増大、寿命および分極の増加、な
らびに蛍光スペクトルの発光極大における有意のブルー
シフト（低波長側シフト）がもたらされることが判明し
た。イオノフオアおよび蛍光性物質の濃度が一定の場合
、蛍光発光強度は陽イオン濃度の関数であることが判明
した。

１団−標一　ヒイオノフむ１ 発色団物質に共有結合で結合したイオノフオアの接合体
を利用するイオン試験が米国特許第４，３８７，０１２
号に開示されている。使用に当っては、この接合体を液
体試料に添加し、溶液に発現する色を分光光度計を用い
て監視する。

この開示は溶液試験に限定されており、直接の１１視観
察を可能にするには不十分な色しか発現しないようであ
る。更に、このような系において＋１、これらの分子間
の直接結合のために、イオノフオアに対する発色団の化
学般的な比は一定である。この直接結合の故に、色強度
を調節することは不Ｏｆ能である。すなわち、発色団に
対するイオノフオアの比は一定である。

交力 本発明に至るまでの技術−にの発展の背景を要約すれば
、溶液中のイオンを試験するための多くの方法が知られ
ている。機器を用いる方法としては、イオン選択性電位
差測定、多光光度法および原子吸光光度法のような複雑
な技法が挙げられる。特定イオンと選択的に複合体を形
成するイオノフオアを使用することにより４つの基本的
アプローチが導かれている。すなわち、イオン選択性電
極、静体／液体分配、蛍光の増大、および発色団−標識
化イオノフオア接合体である。

しかしながら、これらのアプローチのいずれも、試験試
料溶液を試験手段または試験具と接触させることにより
、簡便かつ迅速な分析結果を検査技師に与えない。一方
、本発明によれば、検査技師は、試料を単に、浸漬−読
取り試験片または同様の構造の浸漬−読取り試験具と接
触させ、ついで、色の変化または他の検出可能な応答を
観察しさえすればよい。更に、このような応答を、それ
を発生する反応体の化学量論酌量を変えることにより調
節することができる。

本発明の特質は、水性試験試料中の特定のイオンの存在
の検出およびその濃度測定のための新規な試験手段の発
見に存する。この試験手段は２つの主成分、すなわち、
イオンと複合体を形成することの１丁能なイオノフオア
、およびイオノフオアとイオンの複合体と相互反応して
、色または蛍光の、変化または発現のような、検出可能
な応答をなすことの可能なりボーク物質を含有する疎水
性ビヒクルの微細球体を包含した親木性担体マトリック
スよりなる。

この試験手段を包含した試験具は、プラスチックフィル
ムのような細長い支持部材よりなり、この指示部相の一
方の平面部に試験手段を固着させる。

使用に際しては、試験試料を試験手段または試験具と接
触させる。次に、イオンの存在および／またはイオンの
濃度を、発生しまた検出可能な応答を観察することによ
り測定する。

本発明の試験手段および試験具は、迅速な結果をγえる
が、はとんどの場合、少なくとも２．３分で上のな検出
口ｆ能な応答がなされる。本発明の試験手段もしくは試
験具の他には煩雑な、高価な試験装置を全く必要としな
い。す−なわち、応答は、直接的な１」視検出を可能に
するに十分な強さになりうる。更に、試験手段に生じた
色または他の応答が、ある場合には、数１」の期間安定
であるので、多くの使用済の試験手段をある将来の時点
で読取りを行うために取っておくこともできる。

を濃 本議論において用いられているいくつかの用語を、この
時点で説明し、それぞれの意味に関して、読者が確実に
著者と同じ考えをもつよう（こしておかなければならな
い。従って、次の定義ｔ±、本発明の範囲を明らかにし
、その調製および使用を可能にするためになされる。

１、用語［イオノ７ｔアいｏｎｏｐｈｏｒｅ）　Ｊ　Ｌ
±、特定のイオン、ある場合には他のイオンを実質的（
こ排除して、特定のイオンと複合体を形成すること力く
可能な分子を含む。例えば、環状ポ１ノペプチドである
パリノマイシンは溶液中の力１ノウムイオンと選択的に
結合して陽イオン性の複合体を形成する。また、この用
語にはコロナンズ、り１ノプタンズおよびポダンズも含
まれる。

２、「リポータ物質」は、イオノフオア／イオン複合体
と相互反応して、色の変化または他の検ＢＪ可能な応答
をなすことができる物質である。従って、このリポータ
は、イオン性染料であってもよく、この染料がイオン化
状態では反対イオン、すなわち試験されるべきイオンに
対して電荷力く反対であるようなものである。これらの
例のし１くつ力）は、エリスロシンＢ、７−アミノ−４
−トリフルオロメチルクマリンおよび２．６−ジクロロ
インドフェノールのナトリウム塩である。このリポータ
はまたｐ−ニトロフェノールのようなフェノール性化合
物を含み、これらフェノール性化合物は非イオン化状態
では、比較的に無色であるが、イオン化すると呈色する
。リポータ物質はまた他の成分と共に検出可能な応答を
誘発することができる物質であってもよい。例えば、ヨ
ウ素化物イオンは、デン粉および酸化剤の存在下で、イ
オノフオア／イオン複合体と相互反応することにより検
出可能な応答をなすことがきでる。

３、「相ｑ反応」とは、検出可能な応答をもたらす、リ
ポータ物質とイオノフオア／イオン複合体の間の相互作
用を意味する。複合体と相互反応するりボーク物質の例
としては、リポータが複合体により無色から着色状態に
変化する場合であり、例工ば、ｐ−二トロフェノールの
場合である。

４、用語「検出可能な応答」とは、ここでは、直接観察
または計器を用いて感知されうる、試験手段系における
パラメータの変化または発現とじて意味づけられ、水性
試験試料中の特定のイオンの存在の関数である。いくつ
かの検出可能な応答としては、色、蛍光、反射率、ｐＨ
１化学ルミネセンスおよび赤外スペクトルの変化または
発現である。

５、ここで用いられる用語「中級アルキル（ｉｎｔｅｒ
ｍｅｄｉａｔｅ　ａｌｋｙｌ）Ｊとは、約４から約１２
個の炭素原子を有するアルキル基を意味する。このアル
キル基は直鎖および分枝の異性体を含み５．ＩＩ″置換
でもよいが、また置換が、本発明により特許請求されて
いる試験手段または試験具の操作を、そのイオン検出能
において妨害することがないならば、置換されていても
よい。

６、木開示において用いられる用語「低級アルキル」と
は、約１〜４の炭素原子を含有するフルキル部分として
意味づけられる。低級アルキルの意味には、メチル、エ
チル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、５ｅ
ｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。これら
は、非置換でもよく、また置換が、本発明により特許請
求されている試験手段または試験具の操作または機能性
を、そのイオン検出能において妨害することがないなら
ば、置換されていてもよい。

７　　「擬ハロゲン」とは、／＼ロゲン類と類似した様
式で、不飽和または芳香族環系に結合した場合、この環
系の求電子性または求核性に影響を及ぼすか、および／
または非局在化もし、くは共鳴によって；Ｅ荷分布に影
響を与える原子または原子群を意味する。従って、／＼
ロゲンは、Ｆ、　　ｌ。

Ｂｒおよび■のような第■放の原子を意味するか、擬ハ
ロゲン類は−ＣＮ、　−３ＣＮ、　−０ＣＮ、　−Ｎ３
．−ＣＯＲ。

−ＧＯＯＲ，−Ｃ；０ＮＨＲ，−Ｃ：Ｆ　　　−ＣＯ立
つ、−Ｎｏ２．−５Ｏ２ＯＦ３゜３′ 一５ｏ　Ｃ）Ｉ　　および−３０２Ｇ６１４４Ｃ）１３
（式中、Ｒはアルキ３ ルまたはアリールである）のような部分を包含する。

８、　ここで用いられる用語［小球体（ｇｌｏｂｕｌｅ
）　Ｊは、一種の球状球体もしくはそれに準する球体。

または球又は−相懸ＰＡ液もしくは乳濁液中におし）で
形成されるような他の形状の粒状物を指す。すなわち、
水中油型の懸角液または乳濁液が形成さ取囲まれた球状
体として存在する。懸濁液を形成するため供給されたエ
ネルギーが多ければ多い程、小球体の大きさはより小さ
くなる。同様に、小球体の大きさは、界面活性剤および
他の乳化剤のような添加剤により調節することができる
。

用語「小球体」の意味には、固体物質を微粉砕した粒子
もまた含まれる。従って、疎水性ビヒクルがポリマーの
ような非多孔性かつ非極性物質である場合は、粉砕する
か、さもなければ固体状粒子に微粉砕してもよい。

８、［親木性ｊとは、水と結合もしくは水を吸収する強
力なもしくは顕著な傾向を有する物質の特性を意味する
。親水性物質には、水を膨潤するかもしくは水で可逆ゲ
ルを形成するか、または水で湿潤するかもしくは水を浸
透するか、または水溶液を形成する物質が含まれる。

人隨王月 本試験゛手段は４つの基本的要素からなる。すなわち、
親木性担体マトリックス；疎水性ビヒクルの微細球体；
該微細球体に包含されたイオノフオア１および該微細球
体に同様に含まれたリポータ物質である。水性試験試料
が、該イオノフオアと複合体を形成しうるイオンを含有
する場合は、このイオンは該親水性球体に浸入し、該リ
ポータ物質と相互反応し、それにより検出９ｆ能な応答
を発生することがきでる。

１１゛マトリ・・クス 試験手段が特定イオンに対して検出可能な応答をなすた
めには、水性試験試料は疎水性球体の外表面に実質的に
妨害されることなく接近できることが必要である。従っ
て、球体が包含されてｌ、％る１［」体マｉ・す、クス
は、水性系により容易に湿潤されねばならず、すなわち
親木性でなければならなし）＋ 図！／Ｊな親水性を示すいくつかの物質の典型的なもの
は、セラチン、アガロース、ポリ（ビニルアルコール）
、ポリ（プロピレンイミン）、カラジーナ／、およびア
ルギン酸がある。これらは、水溶性ポリマーであり、乾
燥状態においては、水性媒体による湿間性が著しく大き
い。

使用に適切な、他の不溶性高分子物質としては、もし球
体の完全さが維持できるならば、紙および他のセルロー
ス系のような多孔性物質、焼結磁器フリット並びに同様
の多孔性、親木性マトリックスが挙げられる。従って、
例えば、適切な担体マトリックスは紙とゼラチンを組合
せたものである。この場合、ろ紙パッドに水性ゼラチン
と疎水性球体の安定な乳剤を含浸させてもよい。乾燥す
れば、試験手段をその意図する用途に供するまで、ろ紙
／ゼラチン担体マトリックスは球体の完全さを保持する
ことができる。

錬ｎ支よ〕ニス」ど 本発明の疎水性ビヒクルの第一の機能はイオノフオアお
よびリポータ物質を水性試験試料から隔離することであ
る。従って、試薬を試験試料からの上記のように隔離す
るのに十分な疎水性をビヒクルが有する限り、ビヒクル
は、液体物質または固体物質であってよい。更に、この
ビヒクルは、イオンがイオノフオアと複合体を形成する
ことができるイオンでなかったならば、実質的にイオン
の球体への浸透を妨害しなければならない。

疎水性ビヒクルとして有用な物質としては、水にｆ溶で
あり、しかも同時に、使用の際、実質的応答をなすに十
分な濃度でイオノフオアおよびリポータ物質を溶解する
ことがきでる液体を挙げることができる。それらは比較
的非蒸発性、すなわち、少なくとも約　１５０°Ｃの沸
点を有するものでなければならない。この範斡に入る典
型的な液体はリン酸トリクレジル、２−ニトロフェニル
オクチルニーデル、２−ニトロフェニルブチルエーテル
、フタル酸ジオクチル、リンＭ　ｌ−リス−２−エチル
−、キシル、セパシン酎ジー２−エチルヘキシル、およ
びアセチルリシノール醇ｎ−メチルである。

油類、および他の液体ビヒクルの他に、イオノフオアお
よびリポータ物質を含有および隔離するための固体物質
の微細粒子（球体）を利用することも同様に実施可能で
ある。従って、ビヒクルは、実質的に非多孔性および非
極性である有機ポリで−のような疎水性物質からなるこ
ともてきる。これらとしては、ポリ弗化ビニル、ポリ塩
化ビニル、塩化ビニル／酢酸ビニル共重合体、塩化ビニ
ル／塩化ビニリデン共重合体、塩化ビニル／酢酸ビこル
／ビニルアルコール玉元共重合体、塩化ビニリデン／ア
クリロニトリル共重合体およびポリウレタンを挙げるこ
とができる。勿論、多くの他の高分子物質も疎水性ビヒ
クルとしての使用に適するであろう。このような物質の
選択は十分に本開示により与えられる技術の範囲内のこ
とである。

イオノフ　ァ 本発明のイオノフオア要素は、用語の定義（項目１、前
出）によって特定されたように、実に範囲の広い概念で
ある。その環状原子鎖中に供与性原子を含有する多座環
式化合物を含む。このような多座環式化合物は単環式で
あっても多環式であってもよい。また、このイオノフオ
アは供与性原子を含有する開鎖であってもよい。従って
、イオノフオア要素には、コロナンズと呼ばれるイオン
特異性の単環式系、クリプタンズとして知られる多環式
のイオン特異性化合物、およびボダンズとして知られる
開鎖構造体が含まれ、それらは、イオンと選択的に複合
体を形成することができる。

コσナンズ コロナンズは単環式化合物であり、電子が豊富なまたは
電子が欠乏した状態の供与性原子を含み、それらの特異
構造の故に、特定の陽イオンおよび陰イオンと複合体を
形成することができる。

この用語には、その’ｉｔ環鎖が供与性原子として酸素
を含むクラウンエーテル類が含まれる。他のコロナンズ
は、＃素、硫黄および窒素のような電子が、霞富な原子
の取り合せたものを含有する化合物である。特定のコロ
ナンズの特異な大きさおよび幾何学性の故に、コロナン
ズは種々のイオンとの複合体形成に適用される。このよ
うな複合体形成においては、クラウンエーテル中の酸素
のように、電ｒの豐冨な原−ｒは重子が欠乏している陽
子に向って配向する。原子鎖の炭素原子セグメントは同
時にイオンから外側方向へ突出する。かくして得られた
イオン／コロナンド複合体はその中央では電荷を有する
が、その周辺では疎水性である。

クリプタンズ クリプタンズはコロナンドの多環式類縁体である。従っ
て、それらは二環式および三環式多座化合物を含む。ク
リプタンズにおいては、コロナンドの実質的に平面的な
配置と反対に、供与性原子の環状配置は、空間内の三次
元である。クリプタンドは三次元様式でイオンを事実」
二包むことができ、従って、複合体の形成においてはイ
オンに強力に結合することができる。コロナンズの場合
と同様、供与性原子は酸素、窒素および硫黄のような原
子を含むことができる。

ポタンズ イオンは非環状化合物とも複合体を形成することができ
る。例えば、酸素のような電子が豊富な原子の規則的な
連なりを含む線状鎖は、二ロナンズおよびクリプタンズ
と全く異る訳ではなく、正に荷電したイオンと結合して
複合体を形成する能力を有する。ボダンズとその他の２
イ円のイオノフオアとの主な構造上の違Ｉ７’ｔ±構造
の開環性である。従って、ボタンズはモノボタ′ンズ゛
、ジポタ゛ンズ、トリボダンズ等に更に区分すること力
くできる。従って、モノポダンドは供学性原子を含む単
一・の有機鎖であり、ジポタンドＩよ変動しうる空■１
１配向ができる架橋原子もしくは原子４１により結合し
たような２個の原子鎖であり、トｌノポタ゛ンドを土中
心厚イもしくは原子群に結合した３個の原−子鎖である
。

４、−−イオノフ　ァ 本発明に特に有用であると判明して（＼るイオノフオア
のいくつかを、それらのイオ／フオアカ蒐選択的に複合
体を形成することができる３イオンと共に、ここに、ク
リ挙する。

イ　　オ　　）　　フ　　オ　　ア　　　　　　　　　
力　グー　オ　ンバリノマイシン　　　　　　　　　　
Ｋ＋２２１） ス２２２） ン（クリブトフイ・２クス２１１） １２−クラウン−４Ｌｉ＋ １５−クラウン−５Ｎａ”　、に＋ １８−クラウン−６に４ ジヘンソー１８−クラウン−６に＋ ジシクロヘキサノー１８−クラウン−θ　　Ｋ＋クリプ
トフイ・ンクス（Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ）　ｉ；Ｊ：イー
・メルク、タルムスタツスト、独ＦＩ　（Ｅ、　Ｍｅｒ
ｃｋ。

Ｄａｒｍｓｔａｓｔ、　Ｇｅｒｍａｎｙ）の登録商標で
ある。

隻、１？二ノ」飢！ もし試験溶液中に重要なイオンが存在する場合、イオノ
フオア／イオン複合体と相互反応することにより検出可
能な応答をなすのはリポータ物質である。このリポータ
物質は発色性の反対イオンになりうる化合物のような単
一化合物から、その反応鎖が複合体の存在により誘起さ
れた際、検出可能な生成物を生成する反応性種の混合物
までその組成が様々の範囲にわたることができる。

従って、分析対象イオンが存在しない場合には、リポー
タ物質は不変であり、すなわち、検出可能な応答は認め
られない。また、監視下の特定イオンが存在する場合は
、複合体はリポータ物質と相〃反応して、リポータ物質
に検出Ｉ′１丁能な変化をおこさせる。

リポータが単一化合物である場合には、リポータは解離
性化合物を含んでもよく、これらは、解離した際、着色
イオン種を生成する。イオン性リポータは典型的には着
色イオンが分析対象物に対して電荷が反対であるように
選択される。分析対象物に対する反対イオンが蛍光性で
ある解は性化合物もまた有用である。このような発色団
および蛍光団リポータ物質の例には、ジクロロフェノー
ルインドフェノール、フルオレセインおよびその誘導体
、８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン酸、７−アミ
ノ−４−トリフルオロメチルクマリン、エリスロシンＢ
、オレンジ■、フロキシンＢ並びにイオシンＹがある。

エリスロシンＢ、フロキシンＢおよびエオシンＹの構造
は”　Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｈａｎｄｂｏｏｋｏｆ　Ｆｉｎ
ｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ　”　　（アルドリンチ・ケミ
力Ｊｌｚ　−カンパニー、Ｅ　ルウオーキー（Ａｌｄｒ
ｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｇｏｎｐａｎｙ、　Ｍｉｌｗ
ａｕｋｅｅ）（１９８３））　に与えられている。オレ
ンジ■構造は”　Ｔｈｅ　Ｍｅｒｃｋ　Ｉｒ＋４ｅ”９
版、メルク番アンド・カンパニー、インコーホレーテッ
ド、ラーウｘ　−（Ｍｅｒｋ　＆　Ｃｏ、、　Ｉｎｃ。

Ｒａｈｖａテ）（１９７Ｂ）に見出すことができる。

リポータ物質が反応性種の混合物からなる場合は、適切
な成分の組合せは極めて広い自由度をもって選択するこ
とが可能である。例えば、１つの系としては、ヨウ素化
物イオン、デンプンおよひ醇化剤であってもよい。疎水
性ビヒクルが（イオノフオアの他に）デンプンおよび酸
化剤を含有するような糸を、試験手段に利用することか
できるであろう。次いで、ヨウ素化物を試験試料に添加
することができるであろう。分析対象物イオンの存在ド
では、イオン／イオノフオア複合体の生成はヨウ素化物
のマトリ７クスとの結合を惹起し、ヨウ素化物がＭｌヨ
ウ素に変換されると正の試験結果を示すことになる。

リポータ物質と１７で有用な反応系列の更に別の例とし
ては、フェノ−νしからプロトンが解離し、かくしてカ
ンプリング反応が開始されて着色生成物？形成するもの
かある。いわゆるキツブス（Ｇｉｂｂｓ）反応はこのよ
うな反応系列の典型的なもので、そこでは２，５−シク
ロヘキサジエン−１−オン−２，Ｂ−ジハロ−４−ハロ
イミン（■）かフェノール（Ｉｔ　）とカップリングし
て着色度Ｉ、Ｌ、生成物（ＩＩＩ）を生成する。

０ 一 この反応系列においては、Ｒは、全体にｉｊる反１イλ
、系列を妨害することのない２，３．５および／または
６−位の置換基のいずれであってもよい。従って、Ｒは
低級もしくは中級アルキルまたはアリールであり、また
はＲは２，３−または５，６−縮合理系を形成してもよ
い。Ｘはハロゲンまたは偽ハロゲンであり、ｎは０ない
し４である。この種のりボーク物質は、構造（Ｉ　）お
よび（ＩＩ　）を有する化合物を疎水性ビヒクルに包含
させることにより利用される。

キップス化学の更に別の利用においては、非イオン化型
の（ｍ）のような構造を有する化合物を用いる。イオン
／イオノフオア複合体が形成されると、リポータ物質が
それ自身におよびそれ自身の、観察Ｏｆ能な色を呈する
ような相互反応がおこる結果となる。この現象は次の反
応系列および共鳴構造に従って進行すると考えられる。

すなわぢ ｏａｒ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　。

０　　　　　　　　　　　　　　　　　０一式中、Ｒは
同一でも異なっていてもよく、低級もしくは中級アルキ
ル、アリール、または２．３−もしくは５，６−位の縮
合環系であり、■はＯないし４である。

特に好ましいものは構造： １−１ 式中、にはＨまたは低級アルキルであるを有する化合物
である。Ｒ′がメチルである場合が、本発明に特に適切
であることが判明している。

更に別の好ましいリポータ物質は構造：０１−．１ ０ 式中、Ｒ′は中級アルキル、すなわち、４〜１２個の炭
素原子を有する基であり、Ｒ′は先に定義したとおりで
ある を有する化合物である。これらのような化合物は、試験
試料中の血清アルブミンの存在によっておこりがちな妨
害に対して特に抵抗力があることが判明している。これ
らのタイプのりボーク物質の中で好ましいものはＷがｎ
−デシルでありＲ′がメチルのものである。

人望１ １−記試験手段を細長い支持部材の一端にし１定し、支
持体の他端は把手として役立たせてもよい。このような
試験具を把手端で保持し、試験手段を担持する他端は試
験試料と接触する。

支持部材用のために有用な材料としては、非常に多数の
プラスチックまたはポリマーのフィルムを挙げるごとが
できる。例としては酢酸セルロース、ポリエチレンテレ
フタレート、ポリカーボネート類およびポリスチレンの
ような高分子材料を挙げることができる。支持体は不透
明であってもよくまたは光もしくは他のエネルギーを透
過してもよい。好ましい支持体としては、約２００ナノ
メートル（ｎｍ）ないし　９００ｎｍの範囲内の波長の
電磁線を透過することができる成功材料が挙げられる。

分析結果の蛍光検出のためには、検出に用いる蛍光性物
質の吸収および発光スペクトルより広い、または少なく
とも等しいバンドに亘って、支持体が透明であることが
望ましいが、勿論、　２００−９００ｎｍの範囲全体に
亘って透過する必要はない。

また１またはそれ以上の狭い波長バンドを透過し、隣接
波長バンドに対しては不透明である支持体を有すること
も望ましい。これは、例えば、適切な吸収特性を有する
１又はそれ以−Ｌの顔料を支持体に含浸するかまたは塗
布することにより達成することができるであろう。

本発明の試験具を製造するために、小矩形状の試験手段
、すなわち、イオノフオア、リポータ物質、および、も
しあるならば他の成分を含有する疎水性ビヒクルの球体
を包含させた親木性担体マ］・リックスを、ポリスチレ
ンフィルムの長方形片のような、実質的に平坦な上面を
有する細長い支持部材に固着させる。試験手段片をポリ
スチレンの一端の平坦面に固着し、ポリスチレンの他端
を残して、便利な把手として役立てる。

試験手段は、意図する用途と両立するならばいずれの方
法によって固着されてもよい。１つの方法は、試験手段
の四角片と支持部材の間に両面接着テープを用いること
である。このようなテープの１つはダブル争ステイー／
り（Ｄｏｕｂｌｅ　５ｔｉｃｋ”　）として知られてお
り、スリーエム拳カンパニー（３ＭＣｏｍｐａｎｙ）よ
り入手できる。試験手段を固着させるだめの別の方法は
、水性高分子相（すなわち、親木性担体マトリックス）
、ならびにイオノフオアおよびリポータ物質を含有する
疎水性ビヒクルの乳剤フィルムを直接支持体に延展し次
いで乾燥する。

Ｌ見二皿遣 本発明の試験手段および試験具は、臨床化学の分野のみ
ならず化学研究室および化学反応制御研究室においても
、広汎な化学分析の実施に用いるために応用することが
できる。これらは、血液、血清および尿のような体液の
臨床検査において使用するのに十分適している。何故な
らこの作業では数多くの反復検査がしばしば行われ、し
かもその試験結果は試料採取後短時間で必要とされるこ
とが多い。血液分析の分野においては、例えば、本発明
を臨床上重要な数多くのイオン性血液成分の定量分析を
実施するのに用いるために応用することができる。

試験手段（および試験具）は、それを、十分な時間（例
えば数分間）試験試料と接触させて使用する。その後、
緩−やかな水流中で洗浄し、続いて吸取り紙で吸取るか
、または中にふき取ることによって、過剰の試料を除去
してもよい。または。

試ｔ”ｌを除去することは不必要であるかもり、れない
。

もし試験ドのイオシが試験試料山に存在するな１うば、
イオンフォアとイオンの複合体がりボーク物質と相−（
Ｉ反逆、し、次いで検出可能な応答が現われるであろう
。リポータ物質が、４色した、分析対象物の反対イオン
を生成する解離性物質である場合を丁は、４μ体でトリ
ックス試験手段中に観察可能な色が生成するであろう。

リポータ物質が、フルオｌ／セインのような蛍光団であ
る場合には、試験手段中の生しる検出可能な応答（ここ
では、蛍光の発現または変化）をＪ１１定するために蛍
光分光光度工１を利用してもよい。検出可能な応答を観
察するのに有用な他の手法とり、では、反射分光光度法
、吸光分光光１＆法および光透過測定が挙げられる。

試験試料が血清である場合、透過法を反応生成物の存在
を検出および定量するために用いることかでＳ、反応生
成物の生成が検出可能な応答として役立つ。この場合、
紫外、可視または赤外線のような放射エネルギーを試験
手段の一方の面に当て、反対面からのそのエネルギーの
出力を測定する。試験手段を透過し、かつ応答の発現ま
たは程度を示すことができるいずれの照射も使用できる
が、一般に、約２００から約９００ｎｍの範囲の電磁線
照射を用いることができる。

種々の検量手法を、分析用対照として応用することがで
きる。例えば、分析対象物標準溶液試料を比較として別
の試験手段に適用するか、または分析において示差測定
の使用を口ｆ能にするために適用してもよい。

実施例 次の実施例は、本発明の試験手段および試験具製造およ
び使用において読者を更に助けるために用意された。従
って、好ましい実施態様を実験的に詳細に述べ、その結
果を分析した。木実施例は、単に説明的なものであるこ
とを意味し、ここに叙述し特許請求した本発明の範囲を
制限することを全く意図していない。

本発明の試験手段および試験具中のりボーク物質として
用いるために、表題化合物（以下［７−ゾシルーＭＥＤ
ＰＩＮ　Ｊと呼ぶ）を製造した。反応経路は、次の系列
中に示されており、式中、Ｗはｎ−デシルである。

β−（ｐ−ｎ−デシルベンゾイル）−プロピオン　の・
８０文の出［１および機械的攪拌器を備えた５す・ン］
・ル（Ｌ）の３つ目フラスコ中に入れたフェニルデカン
２６．２グラム（ｇ）　（１，２モル）、無水コハク酸
１２０ｇ（１，２モル）およびニトロエタン３６０ミリ
リットル（ｍＬ）の混合物を水浴中でＯ′Ｃに冷却した
。

この混合物にＡｌＣ１，、３６０ｇ（２，７モル）を攪
拌しながら徐々に　１７２時間かけて添加した。ＡｌＣ
ｌ３の約半量を添加した時点でＨＣＩの発生が認められ
た。

ＡｌＣｌ３添加後、水浴を除去し、ついで反応混合物を
　５分間室温（ＲＴ）に放置した。混合物を次にｌｑ気
浴上で加熱した。＋［：ｕの激しい発生が止むまで　（
約３０分）、加熱および攪拌を続けた。反応混合物を水
浴中で冷却しながら、氷水２Ｌ、次いで濃塩酸６００ｎ
＋Ｌを添加した。これを、すべての暗褐色固体が加水分
解されるまで室温で２時間攪拌した。ろ過により不溶性
生成物を回収した。次に、この固体を酢酸を用いて２回
　（各回２５０ｍＬ）再結晶して生成物（ＫＯＨ上、真
空中で乾燥）約３２０ｇ（収率８５ｚ）を得た。

ＴＬＣ：（８層りＯマｌ−グラフ　イ）：　Ｒｆｏ、４
３（１：ｌ（ｖ／ｖＥｔＯＡｃ：　）ルエン　（シリカ
ゲルプレート））元素分析　Ｃ２０”　３００３として 計算イｌｌｌ１Ｃ，，？５．４２；Ｈ，９，５０゜実測
値Ｃ，７［１，０２；　Ｈ，９，８９゜４−−ｎ−デシ
ルーフェニルー醋酸の調製Ｐｄ／Ｃ（アルドリッチｅケ
ミカル・カンパニー（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　Ｃｏ、）から入手のパラジウム飽和炭素、カタログ
番号２０，５８９−９１２０グラムおよびβ−（ｐ−ｎ
−デシル−ベンゾイル）−プロピオン酩（１５０ｇ、０
．４７モル）を酢酸（３５０ｍＬ）と　ＩＬのバール（
Ｐａａｒ）ボンベ中テｆｆｉ合した。Ｈ２（７）圧力３
．５ｋｇ／ｃｍ’　（５０ｐｓｉ）および５０℃で反応
を開始した。水素φの減少に伴って温度が突然１−、Ｍ
することが認められた。反応混合物の０層クロマトグラ
フィは反応が完ｒしたことを示した。熱時にガラスフィ
ルターろ過により触媒を除去した。ろ靜を室温で結晶さ
せた。結晶性生成物をろ過により回収した。

ろ液を冷却した後に生成した第二収量の生成物もまた回
収した。ＫＯＨ上、真空下で乾燥後の全収量は　１００
ｇ（６８％）　テアツタ。融点＋８７−６９°Ｃ０ＴＬ
Ｃ：ＲｆＯ，１３８（１：ｌ（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ：　
　トルエン　（シリカゲルプレート）） 元素分析　Ｃ２ｏＩ（３２０２として 訓算値Ｃ，？８．９０；　Ｈ，１０，５０実測値Ｃ，７
８，３９，Ｈ，＋０．７０゜ｋＬＬシル−１−テトラロ
ンの調製 ｐ−デシル−フェニル酪酸（３０ｇ、９８．７ｍｍｏｌ
ｅ）およびポリリンＷａ　（＋５ｏｇ）の混合物を、す
べての固体が溶融するまで油浴」−で加熱した。　１５
０℃　（内部温度）まで加熱上Ｒさせ、混合物を３０分
激しく攪拌した。次に、反応物を室温まで冷却し、氷水
３００ｍＬおよびエチルエーテル１５０ｍＬで処理した
。

混合物を３０分間室温で攪拌後、水層を分離し、次いで
エチルエーテル１５０［ＤＩ、で２回洗浄した。合わせ
た有機相を飽和ＮａＣＫＬ水溶液１５０ｍＬで洗浄した
。エーテルを留去し、その残渣をクーゲルロール（１（
ｉｉｇｅｌｒｏｈｒ）蒸留装置（アルドリッチ・ケミカ
ル争カンパ＝　−（Ａｌｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ
　Ｃｏ、）ｌ　を用いて蒸留した。生成物は　１９０°
（！　−２００°Ｃ１０，１＋ｏｍＨｇの融点を有した
。淡黄色油状物の収部は１１ｇ（３９％）であった。

ＴＬＣ：Ｒｆ　Ｏ，３４（１−ルエン　（シリカケルプ
レート））元素分析　Ｃ２ｏ）１３ｏＯとして ；；（ｑ値Ｃ，８３，９０，１１，＋０．７０、実　４
ｊ１１　　イ直　　Ｃ，８５，ｆｉ３；　　Ｈ，１０，
８３ヒＬ上Ｐ土ｚメチレン−７−ｎ−元！ｔＬ＝−１−
テトラロ二Δ通］ すＩ・リウムメトキシｔ；’　（５、４ｇ　、　４０　
、５　ｖａ　ｍ　ｏ　ｌ　ｅ　ｓ　）、キ酸エチル（７
，４ｇ、　ｌｏＯｍｍｏｌｅｓ）および乾燥トルエン１
００ｍＬの混合物を水浴中、不活性雰囲気（Ｎ２または
アルゴン）下で冷却した。乾燥］・レニン　１００ｍＬ
に溶解した７−デシル−１−テ！・ラロン　（Ｉｌ、５
ｇ。

４０Ｉｌ１ｍｏｌｅｓ）の溶液を高速攪拌しなから添加
した。水浴を除去して、反応混合物を室温で４時間攪拌
した。反応混合物を水１００ｍＬおよび　６ＮＨＣ交１
００ｍＬで処理した。有機層を分離し、飽和ＮａＣｕ　
５０［ＯＬで２回洗浄し、無水Ｎａ２５Ｏ４−ｈで乾燥
し、ろ過し、ついで蒸発してすべてのトルエンを除去１
．た。油状残渣を、更に精製することなく次の反応のた
めに用いた。

ＴＬＣ：Ｒｆ＝　０．４３　（＋−ルエン　（シリカゲ
ルプレート））５χＦｅＣ文、溶液の噴霧後、スポット
は暗褐色に変化した。

先の反応Ｊ二程からの油状残渣を乾燥ピリジン（］、２
０ｍＬ）と混合した。この溶液を窒素下０°Ｃ（水浴）
で攪拌した。この溶液を塩化ベンゾイル３０　ｍ　Ｌで
処理した。塩化ベンゾイルの添加後、不溶性塩化ピリジ
ンが混合物中に認められた。反応物を室温で２時間攪拌
した。生成物を氷水（４００ｍＬ）中に激しく攪拌しな
がら注いだ。淡いクリーム色の固体をろ過により回収し
、冷水で十分に洗浄した。

僅かに湿った固体を熱無水エタノール（１２０ｍＬ）よ
り再結晶した。白色固体（１４ｇ、７−デシル−１−テ
トラロンに基づいた収率８７ｚ）を回収した。融点は８
４−６６°Ｃであった。

ＴＬＣ：Ｒｆ＝　０．４３　（１−Ｊレニン　（シリカ
ゲルプレート））元素分析　Ｃ２８Ｈ３４０３として 二１算値Ｃ，８０，３４，Ｈ，８，１９゜実測値Ｃ，８
０，０５，Ｈ，８，２７゜？−ｎ−デシルー２−メチル
ー１−ナフトールの調−１不活性雰囲気下の、２−ベン
ゾイルオキシメチレアー７−ｎ−デシル−１−テトラロ
ン（１４ｇ、３３．５ｍｍｏｌｅｓ）およびＰｄ／Ｃ（
３，５ｇ）の混合物にシクロヘキセン（１７５ｍ１．）
を添加した。不活性雰囲気を維持しながら、混合物を加
熱ρ流した。出発原料の生成物への転換を　３時間後Ｔ
ＬＣによりＪｕ１１定した。すべての出発原料が反応し
た後、混合物を冷却して室温までドげた。触媒をろ過に
より除去し、次いで熱トルエン５０ＩＩＩして　２回洗
浄した。合わせたろ液を少楢になるまで蒸発させた。生
成物をプレツブ（Ｐｒｅｐ）＝５００シリカゲルカラム
　（ウォーターズ゛・アソシエーション、ミルフォード
、エムニー　（ＷａｔｅｒｓＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、
　Ｍｉｌｆｏｒｄ、　ＭＡ）より人手した高圧シリカケ
ル調製用カラム）を用いて精製した。トリエノを移動相
として用いた。生成物画分をプールし、次いで、真空下
で一晩蒸発乾固した。乳白色の固体（９，０ｇ；収率９
ｏｚ）を回収した。融点は６５−６７°Ｃであった。

ＴＬＣ：Ｒｆ＝　０．Ｅ１５　（トルエン　（シリカケ
ルプレート））生成物スポットを短波長ＵＶ光で照射し
たところピンク色を呈した。

元素分析　Ｃ２□Ｈ３ｏＯとして 計算値Ｃ，８４，５１；　Ｈ，１０，１３゜実測値Ｃ，
８４，４９，Ｈ，１０，７２゜７−デシル−２−メチル
−１−ナフト−ル（４，５ｇ。

１５．１ｍｍｏｌｅｓ）および２，６−シクロロキノン
ー４−クロロイミド（３，０ｇ、１４．３ｍｍｏｌｅｓ
）をアセトン（１’５０ｍＬ）に溶解した。この溶液を
炭酸カリウム溶液７００ｍＬ（０，１Ｍ、ｐＨ＝１０．
０）で処理した。この溶液を室温で１０分間激しく攪拌
した。反応混合物のＴＩＨをＨｃ見（１，ＯＮ）で２．
８に調整した。混合物を１５分間攪拌した。ろ過により
赤色固体を回収し、次いで水で十分に洗浄した。この固
体をトルエンに溶解し、ガラス繊維紙でろ過して不溶物
質を除去した。ろ液を濃縮し、プレツブ（Ｐｒｅｐ）−
５００シリカゲルカラムで、移動相としてトルエンを用
いて精製した。生成物画分をプールし、ノΔ発乾固した
。ｎ−ヘキサン（１００ｍＬ）を用いて残渣を結晶化す
ると、生成物（３，９ｇ、収＋５８ｚ）が得られた。

ＴＬＣ：Ｒｆ＝　０．２６　（トノレニン　（シリカゲ
ルプレー１・））プｌ／−ト−１，テ０．　ｉＮ　Ｎａ
０ｔ（を用いて処理したところ褐色スボントは紫青色に
変った。

元素分析　Ｃ２７Ｈ３□Ｎ０２Ｇ交、としてｙ＋算値Ｃ
，Ｆｉ８．８４；　Ｈ，８，５７，Ｎ、　２．９７゜−
え二４（１イ直Ｃ，ｅａ、ｓａ；Ｈ，６８５，Ｎ、２．
９７２　、１ＪＪＪｊｌＪｔｖ　＠　−ｙ　ｈ　ＩＪ　
、　９　ｘ　ｔ　Ｌ　Ｙ　ｎセラ天ｚセラチンを親水性
１１１体マトリンクスとして用いた木発、明の試￥ｔ！
Ｌ段および試験具を製造し、かつ、ｉｉｆ価するために
、一連の実験を行った。

２．１　　シグマ・ケミカル会カンパニー（Ｓｉｇｕｍ
ａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）より込、−トしたパリノ
マイシン６８ミリグラム（ｍｇ）および？−ｎ−デシル
ーＭＥＤＰＩＮ　２９ｍｇを０−：ｌ−ロフェニルオク
チルエーテルに溶液が完成するまで暖めながら添加する
ことにより　イオノフオアおよびリポータ物質を含有す
る疎水性ビヒクルの溶液を調製した。イオン性不純物を
除去するため１０℃で透析を行ったタイプエゼラチン　
（シグマ・ケミカルやカンパニー　　（Ｓｉｇｍａ　Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌＧｏ、））　３．１３ｇおよび脱イオン
水２０．８ｇを使用して、緩衝化ゼラチン溶液を調製し
た。これ（こ、１にトリズマ塩へ（Ｔｒｉｚｍａ　ｂａ
ｓｅ）（シグマ中ケミカル＋１カンバー（Ｓｉｇｕａ＋
ａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｇｏ、））をＨＧｕ（ベーカ−
（Ｂａｋｅｒ））を用いてｐＨ８に、次ｌ／）で酢酸（
ベーカ−（Ｂａｋｅｒ）ｌを用い−ＵＰ１１５に調整す
ることにより調製した緩衝液０．２５ｍＬを添加した。

この油状およびゼラチン溶液を、ウオー１ノング・ブレ
ンター（Ｗａｒｉｎｇ　Ｂｌｅｎｄｅｒ）　（７イｙシ
ャー拳すイエンティフインク（Ｆｉｓｃｈｅｒ　５ｃｉ
ｅｎｔｉｆｉｃ））　川の１２−３７ｍＬのミニ試料容
器に混合注入し、次し）で２分間高速で混合した。

１５−３０分間４５℃で気泡を放出させた後、ゼラチン
を受入れるために前処理を施したポリニスアルフィルム
支持体（４０ＧＡＢ　２Ｓ、スリーエムＯカンノくニー
（３Ｍ　Ｇｏ、）ｌ　に厚さ１７．ＩＸ　１０−３ｃｍ
　（８，７５Ｘ　１０−３インチ）（ｌ＋？５　メイヤ
ー・口・ンド、アールディーニス９カンパニー、ウェブ
スター、ニューヨーク（Ｍｅｙｅｒ　Ｒｏｄ、　ＲＤＳ
　Ｃｏ、、　Ｗｅｂｓｔｅｒ　Ｎ、Ｙ、））にこの乳剤
を延展塗布した。フィル１、を空気乾燥し、次に、　０
．５Ｘ　１．Ｏｃｍ　（０，２Ｘ　Ｏ，４インチ）片を
、両面接着テープ　（タプルΦステインク、スリーニス
Ｑカンパ＝　−（ｔｒｏｕｂｌｅ　５ｔｉｃｋ、３Ｍ　
Ｇｏ、））を用いて、ポリスチレンフィルム支持体把手
に貼付して、試験Ｊ１を形成した。

０、０．２．０．４．０．６．０．８および］、１ｍＭ
　ＫＧ父、１００ｍＭ　）リス−Ｃす（ｐＨ８，５）を
含有する試験試料を調製した９これらの濃度は、　９倍
希釈の血漿中に見られる濃度に対応する。３０ｐＬ！；
Ｌ（マイクロリットル）の試料滴を試験具の試薬部分に
施し、セラライザー（Ｓｅｒａｌｙｚｅｒ＠）（エイム
ズ伊ディビジョン、マイスル・ラボラトリーズ、インコ
ーホレーテッド　（Ａｍｅｓ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、　Ｍ
ｉｌｅｓ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。

Ｉｎｃ、））反射分光光度計中で２．５分間３７℃で装
置し、この時点で６４０ｎｍ（ナノメートル）における
反射率を測定した。反射率のデータを下表に示す。

Ｋ＋（ｍＭ）　　　　　　　　（Ｋ／５）２０　　　　
　　　　　　　　　０、＋１４００・２　　　　　　　
　　　１．２８３９０．４　　　　　　　　　　　２．
２８２２０．６　　　　　　　　　　３．３９０９０．
８　　　　　　　　　　　４．８２５６１．１　　　　
　　　　　　　５．９２７１式中、Ｒは試験具からの反
射率の部分であり、Ｋは定数であり、Ｓは特定の反射媒
体の光散乱係数である として定義される。上記等式は周知のクベルカームンク
（Ｋｕｂｅｌｋａ−Ｈｕｎｋ）の等式　（クスタフ・コ
ルトウ　−ム（Ｇｕｓｔａｖ　　Ｋｏｒｔ’ｉｉｍ）　
　、”　　ＲｅｆｌｅｃｔａｎｃｅＳｐｅｃｔｒｏｓｃ
ｏｐｙ”、　１０６−１１１頁、スプｌノンカ゛−−７
ｘルラーグ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ）　、ニ
ューヨーク（１９８９）を参照されたい）の単純化され
た型のものでる。

上記データを第１図にプロ・ントしたが、カリウＪ−ｅ
度が　（Ｋ／Ｓ）２に直線的に対応することを示してい
る。更にこれらのデータは種・？の濃度が正確にＡ１１
ｌ定されうろことを示している。

２．２　　　リポータ物質として、ｎ−デシル置換分子
の代りに２−メチル−４−（３’、５°−ジクロロフェ
ン−４′−オン）インＩＣす一フト−ル（ＭＥｏｐｘＮ
）を用いて実施例２．１の実験を繰り返した。従って、
０−ニトロフェニルオクチル１−チル中に、パリノマイ
シン６．７ｍｇ／ｍＬおよびＭＥＤＰＩＮ　１．８７ｍ
ｇ／ｍＬを含有する溶液を調製しまた。水性ゼラチン乳
濁液を、乳ｌｉＡ液がエーテル溶液の１２χおよび７ｔ
ゼラチンを含むように、実施例２．１　と同様に調製し
た。０．５１ｃｍ（０，２０インチ）の湿潤厚さを有す
る乳濁液フィルムをドクターブレードを用いてポリエス
テルフィルム上に延展塗布し、乾帰し、次いでポリスチ
レンフィル１１ノ１に貼イ・１した。

ＫＣＵ−試料を調整し、試験具を実施例２．１のように
［７て評価した。ド表の反射率のデータは第２図にグラ
フとして示しである。

Ｋ＋　（ｍＭ）　　　　　　　　　（Ｋ／５）２０　　
　　　　　　　　　　　０．２０４８０．２　　　　　
　　　　　　　１．４９４５０．８　　　　　　　　　
　　　５．３０３８１．１　　　　　　　　　　　　８
．４１５８上記データとてのプロントはに＋濃度と　（
Ｋ／Ｓ）２の間に直線関係があることを示している。

２．３　　　リポータ物質としテ？−ｎ−デシル−ＭＥ
ＤＰＩＮの代りに、３−（ｎ−ペンタアルキル）−３’
、５−ジクロロフェン−４°−オン−インドフェノール
（ＤＩＲ）　ｌｆＪいた他は、実施例２．１の実験を繰
り返した。

ＤＩＲは３−ｎ−ペンタデシルフェノールおよび２，６
−シクロロキノンー４−クロロイミド（ＤＱＣＩ）から
調製した。こららの化合物の当量をアセトン中で化合さ
せて、それぞれ約１００ｍＭの理論的濃度を達成した。

溶液の各　１　ｍＬに緩衝液（ｐＨ１０）　ｅ　ｍＬを
添加した。緩衝液は水に溶解した　１００ｍＭ　３−（
シクロヘキシルアミノ）−プロパンスルホン酸であった
。得られた溶液を　ＩＮ　ＨＣｕを用いてｐＨ２，ｆ（
に調整した。混合物を遠心分離し、沈澱物を窒素雰囲気
下で乾燥した。

水性ゼラチン乳濁液を、」；記２．１　と同様にして調
製したが、９．６６重Ｂｚのゼラチンおよび１２．６重
品％のＮＰＯＥを含有した。パリノマイシン（１５ｍＭ
）およびＤＩＲ（２５ｍＭ）をこのオイルに溶解した。

試験具を評価することにより得られたデータはＦ表に示
してあり、かつ第３図にグラフとして図７１ζしである
。

Ｋ”　（ｍＭ）　　　　　　　（Ｋ／５）２０　　　　
　　　　０．８４０９ ０．２　　　　　　　１．０８５８ ０．８　　　　　　　１．５３０２ １．１　　　　　　　２．０７９４ 上記データとそのプロットはに＋濃度と　（Ｋ／Ｓ）　
２間に直線関係があることを示している。

山土−シ゛マトリックスとしてのアガロース一連の実験
が行われたが、そこでは、親木性担体７トリンクスとし
てアガロースを用いて、本発明の試験手段および試験具
が調製された。

３．１　　親木性担体マトリックスがアガロースであり
１、疎水性ビヒクルが２−二トロフェニルオクチルエー
テル（ＮＰＯＥ）である試験具を調製した。溶解するま
で暖めながら、パリノマイシン１８．８ｇおよび？−ｎ
−デシルーＭＥＤＰＩＮ　１０．４ｍｇを　ＮＰＯＥ　
１．５２ｍＬに溶解することによって溶液を調製した。

蒸留水４０ｍＬ中にアガロース　］、２ｇを含有する第
二溶液を６０℃テ調製した。この溶液に、カルビオヶム
ベーリンクーコーポレーション、ラホーラ、シーニー（
Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｅｈｒｉｎｇ　Ｃａｒｐ、　
ｏｆ　ＬａＪｏｌｌａ、　ＧＡ）より入手したツウィッ
テルジェント（Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ）３−１０の１
　ｍｇ／＋ｅＬ水溶液７８０ｊＬＬ（マイクロリットル
）を添加した。ツウ゛イッテルジェントは、Ｎ−デシル
−Ｎ、Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンス
ルホン酸の商品名である。

これらの溶液を１２ないし３７ｍＬ容量の容器中でウォ
ーリング・ブレンター（Ｗａｒｉｎｇ　Ｂｌｅｎｄｅｒ
）を用いて高速度で乳化した。得られた乳ＦＡ滴を５０
＋＋＋Ｌビーカーに注ぎ、トラップされた気泡を除去す
るため真空下に１５秒問おいた。次に、この乳濁液を、
ドクターブレードを用いてブルーニング・トラフティン
グ・フィルム　（Ｂｒｕｎｉｎｇ　ＤｒａｆｔｉｎｇＦ
ｉｌｍ）　Ｊ−にＱ、１２ｃｍ（０，０５０インチ）（
湿潤厚さ）のフィルム状に延展した。このフィルムを室
温で１６時間乾燥し、乾燥乳濁液を０．５Ｘ　１．Ｏｃ
ｍ　（０，２Ｘ　０．４インチ）の長方形に裁断し、実
施例２．１　と同様にポリスチレンフィルム片に貼伺し
た。

この試験具を評価するため、種々の濃度のＫ（４水溶液
を調製した。これらの溶液をトリス（Ｔｒｉｓ）・ＨＣ
文緩衝液を用いてｐＨ８，５に緩衝化した。

これらの溶液を、先の実施例と同様にセラライザー（Ｓ
ＥＲＡＬＹＺＥＲ）反射分光光度計を用いて試験した。

　（Ｋ／Ｓ）２値を次表に記録する。

Ｋ＋（ｍＭ）　　　　　　（Ｋ／５）２０　　　　　　
　　０．０６９Ｇ ０．０５　　　　　　０．５３１３ ０、１０　　　　　　０．７０２６ ０、１５　　　　　　１．０２４２ ０．２０　　　　　　１．４１４８ このデータをグラフとして第４図にプロットしであるが
、カリウム濃度と　（Ｋ／Ｓ）２の間に直線関係がある
ことを示している。この関係があるために、反射率測定
によって、種々の濃度のに＋レベルの差異を識別するこ
とが可能になる。

３．２　　パリノマイシン（１２，８ｍｇ）および？−
ｎ−デシルーＭＥＤＰＩＮ（５，４ｍｇ）を２−二トロ
フェニルブチル工一テル７６０ｐＬｕに暖めながら溶解
した。低ゲル化温度アガロース　（マリン・コロイズＱ
ディウ゛イジョン・才ブ・エフエムシー・コーポレーシ
ョン（Ｍａｒｉｎｅ　Ｃｌ１ｏｉｄｓ　Ｄｉｖｉｓｉｏ
ｎ　ｏｆ　ＦＭＣＣｏｒｐ、））８００ｍｇをノに留水
２０！ＩＩＬに添加することにより第二溶液を調製した
。この水性混合物に、ツウ゛エッテルジェント（Ｚｗｉ
ｔｔｅｒｇｅｎｔ）３−１６（カルビオケム・ベーリン
グ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅｈｒｉｎｇ）Ｎ−ヘキ
サデシル−Ｎ、Ｎ−ジメチル−３−アセニオ−１−プロ
パンスルホン酸）の１０１ｇ／ｍＬ水溶液３８ｐＬＬを
添加した。次に、アガロース溶液および２−ニトロフェ
ニルブチルエーテル溶液を１２ないし３７ｍＬの容器中
でウォーリングのラボラトリ−中ブレンダー（Ｗａｒｉ
ｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｂｌｅｎｄｅｒ）を用いて
５分間高速度で乳化した。ブレンドに続いて、この乳濁
液をトラップされた気泡を放出させるために　５分間放
置した。

この乳濁液を０．０Ｇｃｍ（０，０２５インチ）のドク
ターブレードを用いて、ゲル・ポンド（Ｇｅｌ　Ｂｏｎ
ｄ）ポリエステルフィルム　（マリン・コロイズ・ディ
ウ゛イジョノーオフーエフエムシー会コーレーション（
Ｍａｒｉｎｅ　Ｃｏ１１ｏｉｄｓ口１ｖｉｓｉｏｎ　ｏ
ｆ　ＦＭＧ　Ｃｏｒｐ、））上に延展した。　１時間室
温での空気乾燥に続いて、このフィルムを４０°Ｃの空
気炉中に１５分分間−た。このフィルムを次に０．５Ｘ
　１．Ｏｃｍ　（０，２Ｘ　Ｏ，４インチ）の長方形に
裁断し、実施例２．１　と同様にポリスチレンフィルム
」二に貼付し、次いで評価した。

反射率のデータはセラライザー（ＳＥＲＡＬＹＺＥＲ）
反射分光光度計を用いて１３４０ｎｍ（ナノメートル）
において集められ、このデータを　（Ｋ／Ｓ）２値に変
換した。結果は下表に示すとおりであり、第５図にグラ
フとしてプロットしである。これらはカリウムイオン濃
度と　（Ｋ／Ｓ）２の間に直線関係があることを示して
おり、このため正確な濃度試験が可能となる。

Ｋ”　　（ｍＭ）　　　　　　　　　　（Ｋ／５）２０
　　　　　　　　　　　　　　　０．０９＋５０．１０
　　　　　　　　　　　　　１．１３３０．１５　　　
　　　　　　　　　　１．７５００．２０　　　　　　
　　　　　　　２．１８９３．３　　パリノマイシン（
１２，８ｍｇ）および７−ｎ−デシル−ＭＥＤＰＩＮ（
５，４ｍｇ）をジエチルフタル酸エステル７８０１４−
Ｌに暖めながら溶解した。アガロース　６００ｍｇおよ
びツウ゛イッテルジェント　（Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ
）３−１６のＬｏｎｇ／ｍＬ水溶液３８ｇ１．を蒸留水
２０ｍＬに６０℃で添加することにより第二溶液を調製
した。これら２溶液を混合し乳化した。得られた乳濁液
を真空下に１５秒間装いてトラップされた気泡を除去し
た。

０、１ｃｍ（０，０５インチ）の湿潤厚さを有する乳濁
液フィルムをドクターブレードを用いてゲル・ポンＦ（
Ｇｅｔ　Ｂｏｎｄ）フィルム上に延展した。このフィル
ムを２時間室温に放置し、次に空気炉中４０℃で更に３
０分間乾燥した。次に、試験具を上記実施例と同様に調
製した。

この試験具を、　３−（シクロヘキシルアミノ）−プロ
パンスルホン酸およびＬｉＯＨの緩衝液（ｐＨ＝１０）
を含むＫＣｆｌ水溶液を用いて評価した。結果は次表に
示すとおりである。　　− に＋（ｍＭ）　　　　　　　（Ｋ／５）２０　　　　　
　　　０．０８８５ ０．５　　　　　　　０．３５６５ １．０　　　　　　　０．７９３７ １．５　　　　　　　１．２０３４ ２．０　　　　　　　２．０２０？ このデータはグラフとして第６図にプロットしである。

用量／応答カーブによれば種々のに＋レヘルの差異を容
易に識別することができる。

親木性担体マトリ、クスの分野について更に試験するた
めに実験を行った。次の実施例においては、イオノフオ
アおよびリポータ物質を含む疎水性ビヒクルの微細球体
は紙およびアガロースよりなる親木性マトリックス中に
トラップされてい４．１３つの貯蔵溶液を調製した。第
一溶液のために、？−ｎ−デシルーＭＥＤＰＩＮ　２８
．４ｍｇおよび　（２，３−す７ｌ−）−１５−クラウ
ン−５７１，８ｍｇを２−二トロア、Ｚニルオクチルエ
ーテル２ｍＬに添加し、うず巻混合器を用いて５秒間激
しく混合し、９０℃に設定しであるシブロンｅサーモリ
ンφドライパス　（ＳｙｂｒｏｎＴｈｅｒｍｏｌｙｎｅ
　ｌ１ｒｉ−Ｂａｔｈ）加熱器中に１０ないし２０分間
装いて、全試薬を溶解した。アガロース１ｇを水２０ｍ
Ｌに８０℃で溶解することによりアカロース溶液を調製
した。ツウ゛インテルジェント（Ｚｗ百ｔｅｒｇｅｎｔ
）３−１０の５０ｍｇを水２０ｍＬに溶解することによ
り両性イオン性界面活性剤溶液を調製した。第一溶液０
．８ｍＬ　、アガロース溶液１２．０ｍＬ、界面活性剤
溶液０．８＋ＩＩＬおよび蒸留水１．４ｍＬを合わせ、
ついでこの児合物を１２−３７ｍＬの容量のステンレス
スチールの容器中でウォーリング・ラボラトリ−（Ｗａ
ｒｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）ブレンダーを用いて
高速度で乳化することにより試薬乳濁液を調製した。こ
の橙色乳濁液を　５分間６０℃で空気を放出するために
放置してから、Ｎｏ、７５マイヤー・ロンド（Ｍｅｙｅ
ｒ　Ｒｏｄ）をＪｌｌいてワンドマン（Ｗｈａｔ＋５ａ
ｎ）３１　ＥＴ紙に塗布した。次に、この紙を６０℃の
炉中で２０分間乾燥した。両面アクリル接着テープ　（
ダブル・スティック（Ｄｏｕｂｌｅ　５ｔｉｃｋ））　
をこの紙の被覆されていない側に取り伺けた。この部品
を１ｃｍ　（０，４インチ）巾の細片に裁断し、ついで
、接着フィルムの第一の側面でポリスチレン支持体に固
着した。

次に　０．５ｃｍ（０，２インチ）、ＩＩＩ片に更に裁
断すると、それぞれ０．５Ｘ　１．Ｏｃｍ（０，２Ｘ　
Ｏ，４インチ）の試薬パッドがポリスチレン把手に固着
された試薬細月が得られ、これらがエイムズーセラライ
ザー（Ａｍｅｓ　５ＥＲＡＬＹＺＥＲ）反射分光九度謹
（で用いるのに適している。

細片の試験は、セラライザー（ＳＥＲＡＬＹＺＥＲ）計
器を用いて、反応した試薬バットの拡散反射率を６４０
ｎｍで測定することにより行った。１００ｍＭホウ酎塩
Ｍ衝原塩用いてｐＨ９，０に緩衝化した５つの塩化カリ
ウＪ、水溶液を試料として用いた。各濃度のカリウムに
ついて３枚の細片の反応性を測定して、その平均を算出
した。結果は次表のとおりである。

Ｋ＋（ｍＭ）　　　　　　　（Ｋ／５）２０．０８　　
　　　　　０．１８４６ ０、１２　　　　　　　０．２３２８ ０．１８　　　　　　　０．３（１１８０，２００，’
３５３２ ０．２４　　　　　　　０．４４４０ 上記データをプロットシた第７Ｆ４により示されるよう
に、この結果は種々のに１濃度について優れた試験結果
を示している。

５、担　マトリ・・クスの　分としてのＴｉ０７の使用 複合担体マトリックス中の更なる成分としてＴｌＯ２を
用いて、本発明の試験手段および試験旦を調製する実験
が行われた。その結果、試験試料中のイオンの測定性能
が改良されたことが示された。水に０−ニトロフェニル
オクチルエーテル（ＮＰＯＥ）　（１２，６重量り、！
−；Ｊ：びゼラチ７　（９，８重ｆｌりを程合した乳濁
液を調製した。乳化に先立ち、このＮ　Ｉ）ＯＥは７−
ゾシルーＭＥＩＩＰＩＮおよびパリノマイシンに溶解し
てそれぞれ１５ｍＭ濃度とした。このＮＰＯＥ／ゼラヂ
ンＩＮｒ合物をウォーリング・ラボラトリ−・ブｌｙ　
７ター（Ｗａｒｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｂｌｅ
ｎｄｅｒ）を用いて高速度で乳化した後、得られた乳濁
培を、ゼラチンを受は入れるために処理を施したポリエ
ステルフィルム（４００ＡＢ　２Ｓ、３Ｍ　Ｇｏ、）　
ｌ：に延展した。このフィルムを湿潤厚さ６．７５ミル
（０，０Ｉ７ｃｍ）（１７５マイヤ一口・ンド）、１５
ミル　（ドクターブレード）および３０ミル　（ドクタ
ーブレード）に延展した。

フィルムを室温で約３０分間乾燥した。

０．７５−ｉｌ＜　）Ｆ＜　％　（７）　Ｔｉ０７粉末
（０，５ｇ粒径、ＮＬインタスｉ・リーズ（ｉｎｄｕｓ
ｔｒｉｅｓ）から入手（７）ＮＬ　２０３０）を含有す
る他は上記と同様にして、第２組のフィルムを調製した
。このフィルムを４００ＡＢ　２Ｓポリエステルフイル
ム上に延展し、湿潤厚さを　３．６ミル（１１４０マイ
ヤーロツド）　、８．７５ミル（＃７５マイヤーロッド
）、１５ミル　（ドクターブレード）および３０ミル（
ドクターブレード）とした。

両組のフィルムから小さい長方形片（０，５Ｘ１．０ｃ
ｍ　（０，２Ｘ　Ｏ，４インチ））を裁断し、両面接着
テープ　（ダブル・スティック、スリーエム・カンバー
−−（Ｄｏｕｂｌｅ　５ｔｉｃｋ、　３ＭＣｏ、））を
用いて別々のポリスチレン細片の一端に貼付した。

１００ｍＭ　ｌ・リス−ヒドロキシメチルアミノメタン
緩衝液（ｐＨ８，０）中に０．２．０．８．１．１およ
び３．３ｍＭＭＣｌを含む試験試料を調製した。各試験
試料の一定量（３０ｇＬ）を別々のフィルムに施し、つ
いで１３０ないし　１５０秒間セラライザー（ＳＥＲＡ
ＬＹＺＥＲ）中で反射率の変化を監視した。反射率値は
実施例２と同様に（Ｋ／Ｓ）に変換した。得られた（Ｋ
／Ｓ）値（終点）は次表に記録したとおりである。

フィルムのカルラムに対する応答（Ｋ／Ｓ）０　　　６
．７５．６３００　１．１４８５　１．７８２５　２．
９７００　　　　＋５．０　．８４７０　１．５７８０
　２．ｌＨ５３，６０００３０，０＋、０２Ｂ５　１．
８５５５　２゜５４５　４．０２９＋、７５＄　　Ｔｉ
０２ ０．７５＄　　３．ＧＯ，］７８１　．２８３３　．３
５９６　．５４７４０．７５Ｘ　　８．７５．ｌ９８４
　．３２５９　．４１４４　　、ｆ１１６３０．７５＄
　　１５．０　．１９２４　．３１４７　．４０８４　
．１３０５２０．７５＄　　３０．０　．１９１０　．
２９１９　．３７９４　．５７９１Ｔｉ０７を含有する
フィルムは、フィルムの厚さか変化しても特定のに＋濃
度については（Ｋ／Ｓ）にほとんど影響を与えないが、
それに対し、配合に１１０２を含まないと比較的大きな
差異が認められることをこのデータは示している。

【図面の簡単な説明】

本発明の種々の実施態様の用量／応答測定を示す実施デ
ータを第１〜８図にグラフとして表わしである。 ０　　０．２　０，４　　０．６　０．８　　１．０　
　　＋、２［Ｋ”］　（ｍＭ） ＯＱ２　０．４　０．６　０．８　　　＋、０　　１．
２［Ｋ＋］（ｍＭ） ［Ｋ”ｌ　（ｍＭ） ＦＩＧ、　３ ３３３− ０　　　　０．０５　　０．１０　　　０，１５　　　
０．２０［Ｋ”ｌ　（ｍＭ） ＦＩＧ、４ ０　　　　０．０５　　　０．１０　　　０，１５　　
　０．２０［Ｋ・］　（ｍＭ） ［Ｋ＋］（ｍＭ） ［Ｋ＋］　　（ｍＭ） ＦＩＧ、７ ［Ｋ＋］　　（ｍＭ） ＦＩＧ、８ −ｒ、　　　続　　補　　正　　書 昭和５９年　７月　１８　８ 特許庁長官　　志　賀　　学　殿 １、事件の表示 昭和５９年特許願第　９３１３３号 ２、発明の名称（補正後） 水性試験試料中のイオンを測定するための試験手段およ
び試験具 ３、補正をする名 事件との関係　特許出願人 名称　　マイルス書ラボラドリース・ インコーポレーテット ４、代理　人 ５、補正命令の１」付　自発 ６、補正により増加する発明の数　なし７、補正の対象
　明細書の発明の名称及び特許請求の範囲の各欄 ８、補正の内容 １、明細書の発明の名称の欄を以下のとおり補正する。 「水性試験試料中のイオンを測定するだめの試験手段お
よび試験具」 ＩＩ　、明細書の特許請求の範囲の欄を別紙のとおり補
Ｉトする。 特許請求の範囲 １、水性試験試料中のイオンの存在を測定するための試
験手段であって、該試験手段が、該イオンと複合体を形
成することができるイオノフオア、および イオノフオアとイオンの複合体と相互反応して、検出可
能な応答をなすことができるリポータ物質、 を含有する疎水性ビヒクルの微細球体を包含した親木性
担体マトリックスからなることを特徴とする試験手段。 ２、該親木性担体マトリックスが親木性ポリマーである
特許請求の範囲第１項記載の試験手段。 ３、該親木性ポリマーがゼラチン、アガロース、ポリ（
ビニルアルコール）、ポリ（ポロピレンイミン）、カラ
ジーナンまたはアルキン酸である特許請求の範囲第２項
記載の試験手段。 ４、該親水性ポリマーがゼラチンである特許請求の範囲
第２項記載の試験手段。 ５、該親木性担体マトリックスが更に紙を含むものであ
る特許請求の範囲第２項記載の試験手段。 ６、該イオノフオアがコロナンド、クリプタンドまたは
ポタントである特許請求の範囲第１項ないし第５項のい
ずれかに記載の試験手段。 ７．１核親水性世体マトリンクスが更にＴｉＯ２を包含
するものである特許請求の範囲第１項記載の試験手段。 ８、該イオノフオアがパリノマイシン；　４，７゜１３
．１６．２１−ペンタオキサ−１，１０−ジアザビシク
ロ［８，８，５１）リコサン；４，７，１３．ｌｆｔ、
２１．２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザビシクロ
［８，８，８］へキサコサン、　４，７，１３．１８−
テトラオキサ−１，１０−ジアザビシクロ［８，８，５
］］エイコサン；１２−クラウンー４１５−クラウン−
５；１８−クラウン−６；ジベンゾ−１８−クラウン−
６：またはジシクロへキサン−１８−クラウン−６であ
る特許請求の範囲第１項ないし第５項のいずれかに記載
の試験手段。 ９、該イオノフオアがパリノマイシンである特許請求の
範囲第１項ないし第５項のいずれかに記載の試験手段。 １０．該リポータ物質が構造： 人中、Ｘはハロゲンまたは擬ｌ＼ロゲンであり：Ｒは低
級アルキルおよび中級アルキル、アリールならびに　２
，３位または５．６位の縮合環から選択された２−，３
−，５−および／または６−位の置換基であり；ｎはＯ
ないし４である、 を有する化合物である特許請求の範囲第１項ないし第５
項のいずれかに記載の試験手段。 １１、該リポータ物質が構造： ０■−１ 式中、Ｒ′はＨまたは低級アルキルであり：Ｒ′は■］
または中級アルキルであり、Ｘはハロゲンまたは擬ハロ
ゲンである、 を有する化合物である特許請求の範囲第１項ないし第５
項のいずれかに記載の試験手段。 ＋２．＊がメチルであり、Ｒ１がｎ−デシルである特許
請求の範囲第１１項記載の試験手段。 １３　、３１リポータ物質が、該イオノフオアおよびイ
オンの複合体の存在下で、蛍光の発現または変化を生じ
ることができる物質である特許請求の範囲第１項ないし
第５項のいずれかに記載の試験手段。 １４、該リポータ物質がフルオレセインまたはその１：
＾導体である特許請求の範囲第１３項記載の試験手段。 １５、水性試験試料中のイオンの存在を測定するための
試験具であって、該試験具が、 実質的に平坦な−に而を有する細長い支持部材、および 該支持体部材の平坦面に固着した試験手段であって、該
試験手段が、 該イオンと複合体を形成することができるイオノフオア
、および 該イオノフオアと該イオンの複合体と相−〃反応して、
検出可能な応答をなすことができるリポータ物質 を含む疎水性ビヒクルの微細球体を包含した親木性担体
マトリックスからなる試験手段からなることを特徴とす
る試験具。 １６、該親木性担体マトリックスが親水性ポリマーであ
る特許請求の範囲第１５項記載の試験具。 １７、該親水性ポリマーがゼラチン、アガロース、ポリ
（ビニルアルコール）、ポリ（ボロピレンイミン）、カ
ラジーナンまたはアルギン酸である特許請求の範囲第１
６項記載の試験具。 １８、該親木性ポリマーがゼラチンである特許請求の範
囲第１６項記載の試験具。 ＋　９　、　該親木性担体マトリックスが更に紙を含む
ものである特許請求の範囲第１６項記載の試験具。 ２０、該親木性担体マトリックスが更にＴｉ０７を包含
するものである特許請求の範囲第１５項記載の試験具。 ２１、該イオノフオアがコロナンド、クリプタンドまた
はボダンドである特許請求の範囲第１５項ないし第２０
項のいずれかに記載の試験具。 ２２　、３４イオノフオアがパリノマイシン、　４，７
゜＋３．１６．’２１−ペンタオキサー１，１ｏ−ジア
ザビシクロ［８，８，５］　）リコサン；　４，７，１
３．１６．２１．２４−へキサオキサ刊、１０−ジアザ
ビシクロ［８，８，８］ヘキサコサ７　；　４，７，１
３．１８−７トラｔキサ−１，１０−ジアザビシクロ［
８，５，５１エイコサン；１２−クラウン−４，１５−
りラウン−５；１８−クラウン−６；シベンツー１８−
クラウン−６：またはジシクロヘキサノ−１８−クラウ
ン：８である特許請求の範囲第１５項ないし第２０項の
いずれかに記載の試験具。 ２３、該イオノフオアがパリノマイシンである特許請求
の範囲第１５項ないし第２０項のいずれかに記載の試験
具。 ２４、該リポータ物質が構造： （つ１−１ 式中、Ｘはハロゲンまたは擬ハロゲンであり；Ｒは低級
または中級アルキル、アリールならびに２．３位または
５．６位の縮合環から選釈されｔ２−．３−．５−およ
び／または６−位の置換基であり；ｎはＯないし４であ
る、 を有する化合物である特許請求の範囲第１５項ないし第
２０項のいずれかに記載の試験具。 ２５、該リポータ物質が構造： 式中、Ｒ′はＨまたは低級アルギルであり；Ｒ″はＨま
たは中級アルキルであり、Ｘはハロゲンまたは擬ハロゲ
ンである、 を有する化合物である特許請求の範囲第１５項ないし第
２０項のいずれかに記載の試験具。 ２Ｇ、Ｒ’がメチルであり、Ｒ１がｎ−デシルである特
許請求の範囲第２５項記載の試験具。 ２７、該リポータ物質が、該イオノフオアおよびイオン
の複合体の存在下で、蛍光の発現また１オ変化を生しる
ことかできる物質である特許請求の範囲第１５項ないし
第１８項のいずれかに記載の試験μ、。 ２８、該リポータ物質がフルオレセインまたはその１誘
導体である特許請求の範囲第２７項記載の試験具。 −３３ン

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、水性試験試料中のイオンの存在を測定するための試
   験手段であって、該試験手段が、該イオンと複合体を形
   成することができるイオノフオア、および イオ・ノフォアとイオンの複合体と相互反応して、検出
   可能な応答をなすことができるリポータ物質、 を含有する疎水性ビヒクルの微細球体を包含した親木性
   担体マトリックスからなることを特徴とする試験手段。 ２、該親木性担体マトリックスが親水性ポリマーである
   特許請求の範囲第１項記載の試験手段。 ３、該親水性ポリで−がゼラチン、アガロース、ポリ（
   ビニルアルコール）、ポリ（ボロピレンイミン）、カラ
   ジーナンまたはアルギン酸である特許請求の範囲第２項
   記載の試験手段。 ４、該親木性ポリマーがゼラチンである特許請求の範囲
   第２項記載の試験手段。 ５、該親水性担体マド１ルンクスが更をこ紙を含むもの
   である特許請求の範囲第２項記載の試験手段。 ６、該イオノフオアがコロナンド、クリプタント゛また
   はポダンドである特許請求の範囲第１項なし）し第５項
   のいずれかに記載の試験手段。 ７、該親水性担体マトリ、２クスが更番こＴｉＯ２を包
   含するものである特許請求の範囲第１項記載の試験手段
   。 ８、該イオノフオアがノえリノマイシン；　４，７゜１
   ３．１８．２１−ペンタオキサ−１，１０−ジアザビ゛
   シクロ（８，８，５］　］１−リコサン；４，７，１３
   ．１Ｂ、２１．２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザ
   ビシクロｔ８．８．８　］へキサコサン、　４，７，１
   ３．１８−テトラオキサ−１，１０−ジアザビ゛シクロ
   （８，８，５］］エイコサン：１２−クラウンー４１５
   −クラウン−５；１８−クラウン−８；ジベンソ−１８
   −タラウノー６：またはジシクロへキサノー１８−クラ
   ウン−６である特許請求の範囲第１項ないし第５項のい
   ずれかに記載の試験手段。 ９該イオノフオアがノヘリノマイシンである特許請求の
   範囲第１項ないし第５頃のいずれかに記載の試験手段。 １０３．侯すボーク物質が構造： ｏｉ−＋ 式中、Ｘはハロゲンまたは擬ハロゲンであり；Ｒは低級
   アルキルおよび中級アルキル、アリールならひに　２，
   ３位または５，６位の縮合環から選択された２−，３−
   ，５−および／または６−位の置換基であり；ｎはＯな
   いし４である、 を有する化合物である特許請求の範囲第１項ないし第５
   項のいずれかに記載の試験手段。 １１、該リポータ物質が構造： ０　、Ｌ］ 式中、Ｒ゛はＨまたは低級アルキルであり；Ｒ１はＨま
   たは中級アルキルであり、Ｘはハロゲンまたは擬ハロゲ
   ンである、 を有する化合物である特許請求の範囲第１項ないし第５
   項のいずれかに記載の試験手段。 １２、ｗがメチルであり、Ｗがｎ−デシルである特許請
   求の範囲第１１項記載の試験手段。 １３、該リポータ物質が、該イオノフオアおよびイオン
   の複合体の存在下で、蛍光の発現または変化を生じるこ
   とができる物質である特許請求の範囲第１項ないし第５
   項のいずれかに記載の試験手段。 １４、該リポータ物質がフルオレセインまたはその１；
   秀導体である特許請求の範囲第１３項記載の試験手段。 ！５．水性試験試料中のイオンの存在を測定するための
   試験具であって、該試験具が、 実質的にｉＦ坦な」−面を有する細長い支持部材、およ
   び 該支持体部材の平坦面に固着した試験手段であって、該
   試験手段が、 該イオンと複合体を形成することができるイオノフオア
   、および １ｆｌｆｉイオノフオアと該イオンの複合体と相互反応
   して、検出可能な応答をなすことができるリポータ物質 を含む疎水性ビヒクルの微細球体を包含した親水性担体
   マトリックスからなる試験手段からなることを特徴とす
   る試験０．。 １８、該親木性担体マトリックスが親木性ポリマーであ
   る特許請求の範囲第１５項記載の試験具。 １７、該親水性ポリマーがゼラチン、アガロース、ポリ
   （ビニルアルコール）、ポリ（プロピレンイミン）、カ
   ラジーナンまたはアルギン酸である特許請求の範囲第１
   ６項記載の試験具。 １８、該親水性ポリマーがゼラチンである特許請求の範
   囲第１６項記載の試験具。 １９、該親木性担体マトリックスが更に紙を含むもので
   ある特許請求の範囲第１６項記載の試験具。 ２０、該親木性担体マトリックスが更に　ＴｉＯ＋を包
   含するものである特許請求の範囲第１５項記載の試験具
   。 ２１、該イオノフオアがコロナンド、クリプタンドまた
   はポダンドである特許請求の範囲第１５項ないし第２０
   項のいずれかに記載の試験具。 ２２　、　該イオノフオアがパリノマイシン、４．’？
   。 １３．１８．２１−ペンタオキサ−１，１０−ジアザビ
   シクロ［８，８，５］］１−リコサン　４，７，１３，
   １１３，２１．２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザ
   ビシクロ［８，８，８１へキサコサン；　４，７，１３
   ．１８−テトラオキサ−１，１０−ジアザビシクロ［１
   ３，５，５］］エイコサン：１２−クラウンー４１５−
   クラウン−５；１８−クラウン−６；ジベンソーＸ８−
   クラウン−６；またはジシクロへキサノー１８−クラウ
   ン−６である特許請求の範囲第１５項ないし第２０項の
   いずれかに記載の試験具。 ２３、該イオノフオアがパリノマイシンである特許請求
   の範囲第１５項ないし第２０ダ１のいずれかに記載の試
   験具。 ２４、該リポータ物質が構造： １１ 式中、Ｘはハロゲンまたは擬ハロゲンであり；Ｒは低級
   、または中級アルキル、アリールならびに２，３位また
   は５，６位の縮合環から選択された２−，３−，５−お
   よび／または６−位の置換基であり；ｎは０ないし４で
   ある、 を有する化合物である特許請求の範囲第１５項ないし第
   ２０項のいずれかに記載の試験具。 ２５、該リポータ物質が構造： １１ 式中、Ｒ′はＨまたは低級アルキルであり；「はＨまた
   は中級アルキルであり、Ｘはハロゲンまたは擬ハロゲン
   である、 を有する化合物である特許請求の範囲第１５頃ないし第
   ２０項のいずれかに記載の試験具。 ２Ｂ、Ｒ’がメチルであり、Ｒ′がｎ−デシルである特
   許＋４１’ｉ求の範囲第２５項記載の試験具。 ２７、該リポータ物質が、該イオノフオアおよびイオン
   の複合体の存在下で、蛍光の発現または変化を生しるこ
   とができる物質である特許請求の範囲第１５項ないし第
   １９項のいずれかに記載の試験具。 ２８、該リポータ物質がフルオレセインまたはその誘導
   体である特許請求の範囲第２７項記載の試験具。 ２９、水性試験試料中のイオンの存在を測定するための
   試験具の製造法であって、該方法が、水および親水性ポ
   リマーの第一混合物を調製する工程： 疎水性ビヒクル、該イオンと複合体を形成することがで
   きるイオノフオア、ならびに該イオノフオアおよびイオ
   ンの複合体と相互反応して検出７ｊ（能な応答をなすこ
   とができるリポータ物質の第二混合物を調製する工程； 第一混合物および第二混合物を合わせて、第一混合物中
   に第二混合物の微細球体の安定な乳濁液を調製する工程
   ； 実質的に平坦な上面を有する細長い支持体部材上に該乳
   濁液を塗布する工程；および 該乳濁液から水を蒸発させて、第二混合物の微細球体を
   包含した親木性担体マトリックスを形成し、それによっ
   て、該マトリックスが該支持体部材の該平坦面に固着さ
   れる］二程、からなることを特徴とする製造法。 ３０、水性試験試料中のイオンの存在の測定方法であっ
   て、該方法が該試験試料を特許請求の範囲第１項ないし
   第５項のいずれか１つに記載の試験手段と接触さぜ、次
   いで、検出可能な応答を観察することからなることを特
   徴とする測定方法。 ３１、水性試験試料中のイオンの存在の測定方法であっ
   て、該方法が該試験試料を特許請求の範囲第１５ないし
   第２０項のいずれか１つに記載の試験具と接触させ、次
   いで検出可能な応答を観察することからなることを特徴
   とする測定力法・