JPS59227828A - 抗腫瘍性修飾免疫グロブリン及びその製造方法 - Google Patents
抗腫瘍性修飾免疫グロブリン及びその製造方法Info
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- JPS59227828A JPS59227828A JP10180383A JP10180383A JPS59227828A JP S59227828 A JPS59227828 A JP S59227828A JP 10180383 A JP10180383 A JP 10180383A JP 10180383 A JP10180383 A JP 10180383A JP S59227828 A JPS59227828 A JP S59227828A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な抗腫瘍性修飾免疫グロブリンとその製造
方法に関する。更に詳しくは、抗α−フエトブ［Ｉティ
ン免疫グロブリンあるいはその抗原結合部位を含むフラ
グメント中のアミノ基妊マイトマイシンＣ誘導体を結合
せしめて成る新規な抗腫瘍性免疫グロブリンとその製造
方法に関する。
方法に関する。更に詳しくは、抗α−フエトブ［Ｉティ
ン免疫グロブリンあるいはその抗原結合部位を含むフラ
グメント中のアミノ基妊マイトマイシンＣ誘導体を結合
せしめて成る新規な抗腫瘍性免疫グロブリンとその製造
方法に関する。
１ｋｉｉ瘍関連抗原については多くの研究があるが、特
に肝ガン細胞によろα−フェトプロティンの産生は詳細
に研究されている（蛋白質・核酸・酵素、第２３巻、第
５７９〜５９３頁、１９７８年）。
に肝ガン細胞によろα−フェトプロティンの産生は詳細
に研究されている（蛋白質・核酸・酵素、第２３巻、第
５７９〜５９３頁、１９７８年）。
α−フェトプロティンは正常人では胎児期に産生される
が、出生後にはほとんど検出されなくなる。しかるに肝
ガンが発生すると合成が再開され【、その血中濃度は正
常値の１０００倍にも達する。α−フェトプロティンは
肝ガン患者の腹水より生化学的および免疫化学的方法に
よって精製されろ。その性状は血清アルブミンに類似し
ており、分子量７０１０００１等電点４．５〜５．０の
タノバク質であるが、その抗原性は血清アルブミンと全
く異なる。従って精製α−フェトプロディンをウマ、ウ
シ、ヤギ、ヒツジ、ザルまたはウサギ等の動物に免疫す
ることによって、α−フェトフロティンとのみ結合しう
る免疫グロブリン（抗α−フェトプロティン免疫グ・Ｊ
プリン）を得ることができる。又は、８Ｗ製α−フェト
プロティンで免疫したマウスの牌細胞を骨髄肝細胞等と
細胞融合させて得られた融合細胞（・〜イアす１゛−マ
）から選別されたクローンに抗α−フエトブ【１ナイン
免疫グロブリンを産生せしめろこともできる。
が、出生後にはほとんど検出されなくなる。しかるに肝
ガンが発生すると合成が再開され【、その血中濃度は正
常値の１０００倍にも達する。α−フェトプロティンは
肝ガン患者の腹水より生化学的および免疫化学的方法に
よって精製されろ。その性状は血清アルブミンに類似し
ており、分子量７０１０００１等電点４．５〜５．０の
タノバク質であるが、その抗原性は血清アルブミンと全
く異なる。従って精製α−フェトプロディンをウマ、ウ
シ、ヤギ、ヒツジ、ザルまたはウサギ等の動物に免疫す
ることによって、α−フェトフロティンとのみ結合しう
る免疫グロブリン（抗α−フェトプロティン免疫グ・Ｊ
プリン）を得ることができる。又は、８Ｗ製α−フェト
プロティンで免疫したマウスの牌細胞を骨髄肝細胞等と
細胞融合させて得られた融合細胞（・〜イアす１゛−マ
）から選別されたクローンに抗α−フエトブ【１ナイン
免疫グロブリンを産生せしめろこともできる。
かくして得られた抗α−フェトプロティン免疫グロブリ
ンはα−フェトプロティンを産生ずるガン細胞に、結合
するが、この特異的結合は肝ガン細胞に対して微弱な細
胞傷害活性しか示しえない。そこで、本発明者らは、抗
α−７エトプロテイン免疫グロ７′リンに制癌剤である
マイトマイシンＣを結合せしめたならば、肝ガン細胞に
特異的かつ強力な細胞傷害活性をもつ新規な抗腫瘍性修
飾免疫グロブリンを得ることができるのではないかとい
う着想をもつに至った。
ンはα−フェトプロティンを産生ずるガン細胞に、結合
するが、この特異的結合は肝ガン細胞に対して微弱な細
胞傷害活性しか示しえない。そこで、本発明者らは、抗
α−７エトプロテイン免疫グロ７′リンに制癌剤である
マイトマイシンＣを結合せしめたならば、肝ガン細胞に
特異的かつ強力な細胞傷害活性をもつ新規な抗腫瘍性修
飾免疫グロブリンを得ることができるのではないかとい
う着想をもつに至った。
抗体蛋白質に、水溶性カルボジイミドの存在下、大量の
マイトマイシンＣを作用させて抗体のカルボキシル基に
マイトマイシンＣを直接結合せしめることは公知である
（特開昭５５−９２３２５ ）。本公知方法のとと（、
アミ７基とカルボキシル基の間にアミド結合を形成せし
める縮合剤ｌ−エチル−３−（３−２メチルアミノプロ
ピル）−力ルポジイミドを用いる方法においては、抗体
蛋白質分子内の７ミノ基とカルボキシル基の間での分子
内反応や、抗体分子間での同様な反応が起こり、そのた
め、抗体の抗原ｕ識活性を低下せしめたり、治療剤とし
て不適当な高分子アグリグートを形成したりする。
マイトマイシンＣを作用させて抗体のカルボキシル基に
マイトマイシンＣを直接結合せしめることは公知である
（特開昭５５−９２３２５ ）。本公知方法のとと（、
アミ７基とカルボキシル基の間にアミド結合を形成せし
める縮合剤ｌ−エチル−３−（３−２メチルアミノプロ
ピル）−力ルポジイミドを用いる方法においては、抗体
蛋白質分子内の７ミノ基とカルボキシル基の間での分子
内反応や、抗体分子間での同様な反応が起こり、そのた
め、抗体の抗原ｕ識活性を低下せしめたり、治療剤とし
て不適当な高分子アグリグートを形成したりする。
その様な不都合を極力さげるためには、上記の方法で用
いるアミノ成分であるマイトマイシンＣを、大過剰に反
応させる必要があり、工簗的Ｋｌａ当な方法とは１い錐
い。
いるアミノ成分であるマイトマイシンＣを、大過剰に反
応させる必要があり、工簗的Ｋｌａ当な方法とは１い錐
い。
抗体蛋白質をシア／ゲン７ａマイトで処理し、とも公知
である（特開昭５６−１３５４２１号）。
である（特開昭５６−１３５４２１号）。
しかし、本方法によって得られる結合体トチおいては、
抗体蛋白ｒＨ分子に結合したマイＩ・マイシンＣは１分
子であり、工業的に適した方法とは言い難い。
抗体蛋白ｒＨ分子に結合したマイＩ・マイシンＣは１分
子であり、工業的に適した方法とは言い難い。
本発明者らは、鋭意研究の結果活性エステル基をその構
造中に含むマイトマイシンｃ Ｈ６導体を抗α−フェト
プロティン免疫グロブリンに作用させ、免疫グロブリン
がもつアミ７基に結合させて得られる修飾免疫グロブ１
１ンは、すぐれた選択的殺細胞能を有することおよび工
業的に極めて有利に製造し得る修飾免疫グロブリンであ
ることを知見し、本発明に到達した。
造中に含むマイトマイシンｃ Ｈ６導体を抗α−フェト
プロティン免疫グロブリンに作用させ、免疫グロブリン
がもつアミ７基に結合させて得られる修飾免疫グロブ１
１ンは、すぐれた選択的殺細胞能を有することおよび工
業的に極めて有利に製造し得る修飾免疫グロブリンであ
ることを知見し、本発明に到達した。
即ち、本発明は一般弐ｒＩ）
で表わされる抗）■癌性修飾免疫グロブリン、及び一般
式〔ＩＩ〕 で表わさねるマイトマイシンＣ誘導体を、抗α−フェト
プロティン免疫グロブリンまたはそのフラグメントと反
応せしめることを特徴とするその製造方法である。
式〔ＩＩ〕 で表わさねるマイトマイシンＣ誘導体を、抗α−フェト
プロティン免疫グロブリンまたはそのフラグメントと反
応せしめることを特徴とするその製造方法である。
一般式（１１および〔■〕において、■（ば２価の有機
基な表わすが、好ましくは炭素数２〜７個のアルキレン
基であり、エチンン基、トリメチレノ基、テトラメチ／
ン基、ペンタメチレン基。
基な表わすが、好ましくは炭素数２〜７個のアルキレン
基であり、エチンン基、トリメチレノ基、テトラメチ／
ン基、ペンタメチレン基。
２−メチル） リメチレン基等を挙げることができる。
特に好ましいのはトリメチレン凋である。
また一般式〔ＩＪ〕において、Ｘで表わされる活性ニス
デルのアルコール残基としては、サクシンイミンル基、
５−ノルボルネン−２＋３−ジカルボキシイミジル基、
ブタルイミジル基、ｐ−二トロフェニル基、ｚ、ａ−２
ニトロフーＬニル基。
デルのアルコール残基としては、サクシンイミンル基、
５−ノルボルネン−２＋３−ジカルボキシイミジル基、
ブタルイミジル基、ｐ−二トロフェニル基、ｚ、ａ−２
ニトロフーＬニル基。
２．４．５−ト１）９０口フェニル基、ペンタフミロフ
ェニル基等を挙げることができる。
ェニル基等を挙げることができる。
本発明において、抗α−フニトプロテイン免疫グロブリ
ンとは、α−フエトプロテ・インと選択的に結合しうる
免疫グロブリンをいう。かかる免疫グロブリンとしては
、例えば、次の様なものがある。α−フェトプロティン
で免疫されたヒト、ザル、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、
ウサギ、モルモット、ハムスター、ラット、マウス等の
動物から分離された抗血清より、エタノール分画、硫安
分画、イオン交換あるいは分子節カラムクロマトグラフ
ィー等の公知の手段によってｔＪ４ｇされるグロブリン
（抗体）、あるいはα−フェトプロティンで免疫した動
物より採取された抗体産生細胞を発癌性のある物質で癌
化させて得られる細胞の培養液、あるいは抗体産生細胞
を骨髄腫細胞等と細胞融合させて得られた融合細胞（ハ
イブリドーマ）から選別された抗α−フェトプロティン
抗体産生性のクローンの培養液からまたはこれを動物に
接種してその血清または腹腔液からも本発明に使用され
る免疫グロブＩＩンを得ることができる。免疫グロブリ
ンには、ＩｇＧ ＋ ＩｇＡ ＋ ＩｇＭ ＋ ＩｇＤ
ｒ ＩｇＥの５種類があることが知られているが、そ
のどれでも本発明に用いることができる。
ンとは、α−フエトプロテ・インと選択的に結合しうる
免疫グロブリンをいう。かかる免疫グロブリンとしては
、例えば、次の様なものがある。α−フェトプロティン
で免疫されたヒト、ザル、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、
ウサギ、モルモット、ハムスター、ラット、マウス等の
動物から分離された抗血清より、エタノール分画、硫安
分画、イオン交換あるいは分子節カラムクロマトグラフ
ィー等の公知の手段によってｔＪ４ｇされるグロブリン
（抗体）、あるいはα−フェトプロティンで免疫した動
物より採取された抗体産生細胞を発癌性のある物質で癌
化させて得られる細胞の培養液、あるいは抗体産生細胞
を骨髄腫細胞等と細胞融合させて得られた融合細胞（ハ
イブリドーマ）から選別された抗α−フェトプロティン
抗体産生性のクローンの培養液からまたはこれを動物に
接種してその血清または腹腔液からも本発明に使用され
る免疫グロブＩＩンを得ることができる。免疫グロブリ
ンには、ＩｇＧ ＋ ＩｇＡ ＋ ＩｇＭ ＋ ＩｇＤ
ｒ ＩｇＥの５種類があることが知られているが、そ
のどれでも本発明に用いることができる。
本発明に於いて抗α−フエトブａティン免疫グロブリン
はそのま〜でも、或いは抗原と結合し得る部分を含む限
りにおいては、そのフラグメント（例えば、Ｆａｂ ＋
Ｆａｂ’ 、 、Ｆａｂ’の２量体Ｆ（ａｂ’）ｔ
）でも用いることができる。
はそのま〜でも、或いは抗原と結合し得る部分を含む限
りにおいては、そのフラグメント（例えば、Ｆａｂ ＋
Ｆａｂ’ 、 、Ｆａｂ’の２量体Ｆ（ａｂ’）ｔ
）でも用いることができる。
本発明において用℃・る一般式（ＩＩ）で表わされるマ
イトマイシンＣ誘導体は、例えば、次に示す合成ルート
によりマイトマイシンＣと二塩基性カルボン酸の酸無水
物を出発原料として合成することができる。好適に用い
得る酸無水物としては、コハク酸無水物、グルタル酸無
水物。
イトマイシンＣ誘導体は、例えば、次に示す合成ルート
によりマイトマイシンＣと二塩基性カルボン酸の酸無水
物を出発原料として合成することができる。好適に用い
得る酸無水物としては、コハク酸無水物、グルタル酸無
水物。
３−メチルグルタル酸無水物等を挙げることができる。
マイトマイシンＣテトラヒドロフラン
ＣＨ，ＣＮ
（ｎ）
活性ニスｊ″ルのアルコール部に由来する残基とし７て
は、例えば、 す 免疫グし７プリンまたはそのフラグメントは、分子中に
末端アミン基や構成アミノ酸のリジンに由来する１ミノ
基を複数個有しているので、かかるアミン基を利用して
本発明の抗腫瘍性修飾免疫グロブリンが製造される。利
用されるアミノ基の個数は１〜２０個が好ましい。即ち
、不発ヴｊの一般式（１，）で表わされる抗腫瘍性修飾
免役グロブリンは、一般式〔■〕で表わされるマイトマ
イシンＣ誘導体を抗α−フェトプロチン免疫クロッリン
またはそのフラグメントと反応せしめることにより製造
される。本反応は、免疫グロブリンまたはそのフラグメ
ントのｐＨ５〜８の緩衝液の浴液（蛋白濃度は好ましく
は０，５〜１００ ｍｙ／ｍｌに調製する）Ｋ、０〜４
０℃で攪拌しながら、少量の溶媒、例えば、Ｎ、Ｎ−ジ
ノチルホルムアミド、メタノール、エク／−ル。
は、例えば、 す 免疫グし７プリンまたはそのフラグメントは、分子中に
末端アミン基や構成アミノ酸のリジンに由来する１ミノ
基を複数個有しているので、かかるアミン基を利用して
本発明の抗腫瘍性修飾免疫グロブリンが製造される。利
用されるアミノ基の個数は１〜２０個が好ましい。即ち
、不発ヴｊの一般式（１，）で表わされる抗腫瘍性修飾
免役グロブリンは、一般式〔■〕で表わされるマイトマ
イシンＣ誘導体を抗α−フェトプロチン免疫クロッリン
またはそのフラグメントと反応せしめることにより製造
される。本反応は、免疫グロブリンまたはそのフラグメ
ントのｐＨ５〜８の緩衝液の浴液（蛋白濃度は好ましく
は０，５〜１００ ｍｙ／ｍｌに調製する）Ｋ、０〜４
０℃で攪拌しながら、少量の溶媒、例えば、Ｎ、Ｎ−ジ
ノチルホルムアミド、メタノール、エク／−ル。
７セトン等に溶かした一般式ＣＩｌ、）で表わされるマ
イトマイシンＣ誘導体（好ましくは前者１モルに対し１
〜５０モル）を添加し、１５分〜１２時間何われる。そ
の後、反応混合物をグルｉｔ’ Ｍ＠あるいは透析する
ことによって未反応の−ｌイトマイシンＣｐ ４体と低
分子反応生成物を除き、抗）重湯性修飾免疫グロブリン
を精製することができる。
イトマイシンＣ誘導体（好ましくは前者１モルに対し１
〜５０モル）を添加し、１５分〜１２時間何われる。そ
の後、反応混合物をグルｉｔ’ Ｍ＠あるいは透析する
ことによって未反応の−ｌイトマイシンＣｐ ４体と低
分子反応生成物を除き、抗）重湯性修飾免疫グロブリン
を精製することができる。
本発明において得られた抗腫瘍性修飾免疫グロブｌｌン
は、１ル筋細胞に対し特異的増殖抑制活性を有し、優れ
た治療効果を示す。
は、１ル筋細胞に対し特異的増殖抑制活性を有し、優れ
た治療効果を示す。
以−「、参考例、実施１り１により本発明を詳述する。
参考例１ ラットのα−フェトプロティンに特異的な免
疫グロブリンの調製 精製したラットのα−フェトプロティン（以下ＡＦＰと
省略する）１ダを、７ａインド完全アジユバントとのエ
マルジョンとし、馬に週１回皮下注射して、過免疫とし
た。この馬から採面し７、面消を分離した。血清を硫安
分画し、ラットＡ ｌｒ ｐを結合したセファロース６
Ｂカラムを使用するアフイニテイクａマドグラフィー、
およびセファテックスＧ−２００を使用するゲル濾過等
により精製し、純粋な抗うツ）ＡＦＰ馬免疫グロブリン
を得た。
疫グロブリンの調製 精製したラットのα−フェトプロティン（以下ＡＦＰと
省略する）１ダを、７ａインド完全アジユバントとのエ
マルジョンとし、馬に週１回皮下注射して、過免疫とし
た。この馬から採面し７、面消を分離した。血清を硫安
分画し、ラットＡ ｌｒ ｐを結合したセファロース６
Ｂカラムを使用するアフイニテイクａマドグラフィー、
およびセファテックスＧ−２００を使用するゲル濾過等
により精製し、純粋な抗うツ）ＡＦＰ馬免疫グロブリン
を得た。
参考例２１ａ−（４−（Ｎ−ザクシンイミジルオキシカ
ルボニル）ブチリル：ｌ−７−ア３ノー９ａ−メトキシ
マイトザクの製造。
ルボニル）ブチリル：ｌ−７−ア３ノー９ａ−メトキシ
マイトザクの製造。
１ａ−（４−カルボキシブチリル）−７−７ミノー９ａ
−メトキシマイトザク２５０■を乾燥したアセトニトリ
ル１５ｍｅに溶解し、これにＮ−ヒドロギシザクシンイ
ミ ドロア、４ｍ１９を加え、さらに水冷下ジシクロへ
キシルカルボ２イミド（縮合剤） ６０３ ｍ９を加え
、４℃で２日間攪拌した。反応液に氷水５μを加え、６
分間攪拌した。生じた沈澱を濾別し、濾液に水５０ｍ１
を加えりｏｏホルムで抽出した。抽出１夜を無水硫酸マ
グネシウムで乾燥ｌまた後、溶媒を減圧留去してイ４）
た残渣をｎ−ヘギザンと酢酸エチルの混液で処理して、
目的物である］ ａ −（４−（Ｎ−ザクシンイミジル
オキシカルボニル）ブチリル〕＝７−７ミノー９ａ−メ
トキシマイトサン１７５即を得たく収率５６．３係）。
−メトキシマイトザク２５０■を乾燥したアセトニトリ
ル１５ｍｅに溶解し、これにＮ−ヒドロギシザクシンイ
ミ ドロア、４ｍ１９を加え、さらに水冷下ジシクロへ
キシルカルボ２イミド（縮合剤） ６０３ ｍ９を加え
、４℃で２日間攪拌した。反応液に氷水５μを加え、６
分間攪拌した。生じた沈澱を濾別し、濾液に水５０ｍ１
を加えりｏｏホルムで抽出した。抽出１夜を無水硫酸マ
グネシウムで乾燥ｌまた後、溶媒を減圧留去してイ４）
た残渣をｎ−ヘギザンと酢酸エチルの混液で処理して、
目的物である］ ａ −（４−（Ｎ−ザクシンイミジル
オキシカルボニル）ブチリル〕＝７−７ミノー９ａ−メ
トキシマイトサン１７５即を得たく収率５６．３係）。
物理性状
ｍ、ｐ、 １９４．０−１ ’＋ ５．０ＩＲ（ＫＢｒ
） ３４９０（ｓｌ、３３３０（ｓ）、２９５０（ｍ）、１
８］６（ｉ。
） ３４９０（ｓｌ、３３３０（ｓ）、２９５０（ｍ）、１
８］６（ｉ。
１７８５ｈ＋、＋７２２（ｓ）、１６．００（Ｓ）、１
５４５（Ｓ）。
５４５（Ｓ）。
ｔ３４（１（ｍ）、＋２１５（ｍ）、 １０６７（＋
ｎ１ｃｍ 。
ｎ１ｃｍ 。
ＮＭＲ（１）ＭＳＯｄ６中ＴＭＳよりのδ値、咽）。
＋、７２（３Ｈ，ｓ） Ｃ６位−ＣＨ，）２．８６（
４Ｈ，３） Ｃサクシンイミジル基〕３、ｚｏ（３Ｈ
＋ｓ） （９ａ位−０ＣＲ３）６．５３ （２１１，
ｂｒｓ） （１０位−〇Ｃ０ＮＩＩ、 ）７．００（
２１！＋ｂｒｓ） （７位−ＮＨ，：］実施例１ ｌ−１） 抗＋ｙ＋Ｉ瘍性修飾免疫グロブリンの製造抗
うットＡＦＰ馬１ｇＧｉＯＯｍｐを溶解した。、＋Ｍリ
ン酸緩衝液１０ ｍｌ （ｐｉ４７．０ ）に１ａ−（
４−（Ｎ−サクシンイミンルオキシカルボニル）ブチリ
ル〕−７−アミノー９ａ−メトキシマイトサン（以下Ｍ
ＭＣと称す） ｓ、ｘ ７ｍ９０） Ｄ Ｍ Ｆ溶液２
００ ａｌｌ ヲ加え、４℃に１夜放置して反応させた
。遠心してわずかの固体（沈澱）を除き（１０４咽×２
０分、４℃）、セファデックスＧ−２５］α×４０αＣ
Ｏ，０１Ｍ １７７酸緩衝液−０，１４Ｍ ＮａＣ／
、 （ｐＨ７，０） ）を通して低分子物質を除き、目
的物であるＭＭＣを結合した抗体の溶液２１．５ｍｌを
得た。
４Ｈ，３） Ｃサクシンイミジル基〕３、ｚｏ（３Ｈ
＋ｓ） （９ａ位−０ＣＲ３）６．５３ （２１１，
ｂｒｓ） （１０位−〇Ｃ０ＮＩＩ、 ）７．００（
２１！＋ｂｒｓ） （７位−ＮＨ，：］実施例１ ｌ−１） 抗＋ｙ＋Ｉ瘍性修飾免疫グロブリンの製造抗
うットＡＦＰ馬１ｇＧｉＯＯｍｐを溶解した。、＋Ｍリ
ン酸緩衝液１０ ｍｌ （ｐｉ４７．０ ）に１ａ−（
４−（Ｎ−サクシンイミンルオキシカルボニル）ブチリ
ル〕−７−アミノー９ａ−メトキシマイトサン（以下Ｍ
ＭＣと称す） ｓ、ｘ ７ｍ９０） Ｄ Ｍ Ｆ溶液２
００ ａｌｌ ヲ加え、４℃に１夜放置して反応させた
。遠心してわずかの固体（沈澱）を除き（１０４咽×２
０分、４℃）、セファデックスＧ−２５］α×４０αＣ
Ｏ，０１Ｍ １７７酸緩衝液−０，１４Ｍ ＮａＣ／
、 （ｐＨ７，０） ）を通して低分子物質を除き、目
的物であるＭＭＣを結合した抗体の溶液２１．５ｍｌを
得た。
Ｍ Ｍ Ｃ精舎抗体は、２７９ ｎｍと３６３ ｎｍに
それぞれタンパク質とマイトマイシンＣのクロモホアに
由来する吸収極大を示したが、２つの波長の吸光度より
、タンパク？ｆ ｉとマイトマ・１７７１片を定量した
。ただしマイトマイシンの分子吸光係数を２３０００と
し、２７９ｎｍに−けるマイトマイシンＣの吸光度は、
３６３ ｎｒｎでの極太値の４．０係としてタンパク質
の吸光度を補正した。その結果、タンパク質とマイ］・
マイノンＣの濃度はそれぞれ、３．９５ ｗｒ９／ｍｌ
、 ７０．１ ｌｉｄ／ｍｌであり、ｒｇｃｌ、０モ
ルに結合したＭＭＣは８．０モルであった。ＩｇＧの回
収量は８５ｍ？であったっ１−２） 修飾免疫グロブリ
ンのラット肝癌ＡＨ６６細胞に対−４−る増殖阻止宿生
上記＋−＋）のごとく【２て得られた修ｆｔ：ｐ免疫グ
ロ７リンの、標的細胞ＡＨ６６に対する細胞毒性を倹Ｓ
すした。５Ｘ１０３個のＡＨ６６細胞を含む、ｌｏ％馬
血清を添加したイーグルＭＥＭ培ｔｌｊｌ （ｐＨ７，
４）に被検サンプルを加えて全敏を１．０ｍｌとし、３
７℃で４８時間焙羞後、トリバンプルー染色法により生
細胞数を測定した。培養は３系列行ない、値はその平均
イーで示し、た。結果を第１表に示した。
それぞれタンパク質とマイトマイシンＣのクロモホアに
由来する吸収極大を示したが、２つの波長の吸光度より
、タンパク？ｆ ｉとマイトマ・１７７１片を定量した
。ただしマイトマイシンの分子吸光係数を２３０００と
し、２７９ｎｍに−けるマイトマイシンＣの吸光度は、
３６３ ｎｒｎでの極太値の４．０係としてタンパク質
の吸光度を補正した。その結果、タンパク質とマイ］・
マイノンＣの濃度はそれぞれ、３．９５ ｗｒ９／ｍｌ
、 ７０．１ ｌｉｄ／ｍｌであり、ｒｇｃｌ、０モ
ルに結合したＭＭＣは８．０モルであった。ＩｇＧの回
収量は８５ｍ？であったっ１−２） 修飾免疫グロブリ
ンのラット肝癌ＡＨ６６細胞に対−４−る増殖阻止宿生
上記＋−＋）のごとく【２て得られた修ｆｔ：ｐ免疫グ
ロ７リンの、標的細胞ＡＨ６６に対する細胞毒性を倹Ｓ
すした。５Ｘ１０３個のＡＨ６６細胞を含む、ｌｏ％馬
血清を添加したイーグルＭＥＭ培ｔｌｊｌ （ｐＨ７，
４）に被検サンプルを加えて全敏を１．０ｍｌとし、３
７℃で４８時間焙羞後、トリバンプルー染色法により生
細胞数を測定した。培養は３系列行ない、値はその平均
イーで示し、た。結果を第１表に示した。
第１表
第１表（つづぎ）
第１表から、本発明の修飾免疫グロフリン（４７）は、
ラント肝癌ＡＨ６６細胞に対し著しいｎ！１胞毒性を示
して（・ろことがわかる。
ラント肝癌ＡＨ６６細胞に対し著しいｎ！１胞毒性を示
して（・ろことがわかる。
１−３） 修飾免疫グロブリンのラット肝癌ＡＨ６６移
植ラットに対する治療効果 Ｄｏｎｒｙｕｒａｔ （２００１／ 、 ３＝ ５
）の腹腔内にｌＸｌ０’個のＡＨ６６細胞を移植し、３
，５゜７．９．１１日月に被験薬剤（免疫グロブリン及
びマイトマイシンＣ＋＋ｔでそれぞれ２■及び３ ！ｌ
７１ｇ）を腹腔内投与した。ラットの平均生存【）数
、延命率を第２表に示す。
植ラットに対する治療効果 Ｄｏｎｒｙｕｒａｔ （２００１／ 、 ３＝ ５
）の腹腔内にｌＸｌ０’個のＡＨ６６細胞を移植し、３
，５゜７．９．１１日月に被験薬剤（免疫グロブリン及
びマイトマイシンＣ＋＋ｔでそれぞれ２■及び３ ！ｌ
７１ｇ）を腹腔内投与した。ラットの平均生存【）数
、延命率を第２表に示す。
第２表から、本発明の修飾免疫グロブリン（／１ｇＢ）
は、ラット肝癌Ａ Ｈ６６７Ｊｌ胞移植う゛ントに対し
て著しい治療効果を示していること力２わかる。
は、ラット肝癌Ａ Ｈ６６７Ｊｌ胞移植う゛ントに対し
て著しい治療効果を示していること力２わかる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １一般式（ＩＩ で表わされる抗腫瘍性修飾免疫グロブリン。 ２ 式（１〕において、Ｒが炭素数２〜７のフルキンン
基を表わす特許請求の範囲第１項記載の抗１１１１ｉ瘍
性修飾免疫グロブリン。 ３ 式（Ｉ）において、Ｒがトリメチレン基を表わす、
特許請求の範囲第１項または第２項記載の抗腫瘍性修飾
免疫グロブリン。 ４一般式（ＩＴ） で表わされるマイトマイシンＣ誘導体を、免疫グロブリ
ンまたはそのフラグメントと反応せしめることを特徴と
する、一般式ＣＩ）ｌｌ−２０の整数を表わす。
１で表わされる抗腫瘍性修飾免疫グロブリンの
製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10180383A JPS59227828A (ja) | 1983-06-09 | 1983-06-09 | 抗腫瘍性修飾免疫グロブリン及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10180383A JPS59227828A (ja) | 1983-06-09 | 1983-06-09 | 抗腫瘍性修飾免疫グロブリン及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59227828A true JPS59227828A (ja) | 1984-12-21 |
Family
ID=14310294
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10180383A Pending JPS59227828A (ja) | 1983-06-09 | 1983-06-09 | 抗腫瘍性修飾免疫グロブリン及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59227828A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6067434A (ja) * | 1983-09-24 | 1985-04-17 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 抗腫瘍剤 |
-
1983
- 1983-06-09 JP JP10180383A patent/JPS59227828A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6067434A (ja) * | 1983-09-24 | 1985-04-17 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 抗腫瘍剤 |
| JPH0585532B2 (ja) * | 1983-09-24 | 1993-12-07 | Mitsubishi Chem Ind |
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