JPS59225196A - 組織蛋白質およびその単離法 - Google Patents
組織蛋白質およびその単離法Info
- Publication number
- JPS59225196A JPS59225196A JP59082120A JP8212084A JPS59225196A JP S59225196 A JPS59225196 A JP S59225196A JP 59082120 A JP59082120 A JP 59082120A JP 8212084 A JP8212084 A JP 8212084A JP S59225196 A JPS59225196 A JP S59225196A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- solution
- molecular weight
- globulins
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4721—Lipocortins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/834—Urine; urinary system
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/834—Urine; urinary system
- Y10S530/835—Kidney
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/838—Marrow; spleen
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/842—Skin; hair; nails; sebaceous glands; cerumen
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/843—Digestive system
- Y10S530/844—Stomach; intestine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/85—Reproductive organs or embryos
- Y10S530/851—Placenta; amniotic fluid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＰＰ４と呼ばれる組織蛋白質ならびにその単離
法に関する。
法に関する。
ＰＰ４は特定の器官の疾患を識別するために、疾患経過
監視用または治療制御用「マーカー」として体液中のＰ
Ｐ４の検出および測定に役立てられうる抗血清の調製に
使用されうる。
監視用または治療制御用「マーカー」として体液中のＰ
Ｐ４の検出および測定に役立てられうる抗血清の調製に
使用されうる。
本発明は下記ａ）〜ｇ）すなわち
ａ）α１およびα２グロブリンの範囲内にある電気泳動
移動度、 ｂ）等電点４．８５±０．１５、 Ｃ）沈降係数８２０．Ｗ ３．３十〇、２８゜ｄ） ド
デシル硫酸ナトリウム（Ｓ：ＯＳ）含有ポリアクリルア
ミドゲルにおいて測定された分子量５５、Ｃｌ０Ｇ±５
，０００、 θ）吸光率ＥＬ （２８０ｎｍ ） ５．９±０．６、
ｆ）炭水化物畜；ｊ合２．４±０．９４％ （ｒ／１０
０ Ｆ ）（−ｒンノース０．３±０．２チ、ガラクト
ース０．４±０．２チ、キシロース０．１±０．０４％
、グルコース０．２±０．１チ、グルコサミン１．０±
０．２％、ノイラミン酸０，４±０．２％）および ｇ）下記アミノ酸組成すなわち リジン ６．９５
１．１４ヒスチジン ０
．９７ １７．４アルギニン
５．４４ １．７７、アスパラギ
ン酸 １１．４１ １．６８
スレオニン ６．７Ｂ
２．４０セリン ６．
２１ ２．２６ダルタミン酸
１２．２５ ０．４３プロリン
１．９６
６．２０グリシン ６．６
８ ３．８３アラニン
７．９２ １．６７シスチン慶
０．７７ １９．５バ
リン ５．１ ３．８
０メチオニン １．９８
６．００イソロイシン ５．２１
２．２３０イン／１１．５０
０．４５チロシン ３
．５５ ４．２１フエニルアラニン
４．０７ ３．７７トリプトフ
アン ０．９３ ２３．９
を特徴とする蛋白質ＰＰ４に関する。
移動度、 ｂ）等電点４．８５±０．１５、 Ｃ）沈降係数８２０．Ｗ ３．３十〇、２８゜ｄ） ド
デシル硫酸ナトリウム（Ｓ：ＯＳ）含有ポリアクリルア
ミドゲルにおいて測定された分子量５５、Ｃｌ０Ｇ±５
，０００、 θ）吸光率ＥＬ （２８０ｎｍ ） ５．９±０．６、
ｆ）炭水化物畜；ｊ合２．４±０．９４％ （ｒ／１０
０ Ｆ ）（−ｒンノース０．３±０．２チ、ガラクト
ース０．４±０．２チ、キシロース０．１±０．０４％
、グルコース０．２±０．１チ、グルコサミン１．０±
０．２％、ノイラミン酸０，４±０．２％）および ｇ）下記アミノ酸組成すなわち リジン ６．９５
１．１４ヒスチジン ０
．９７ １７．４アルギニン
５．４４ １．７７、アスパラギ
ン酸 １１．４１ １．６８
スレオニン ６．７Ｂ
２．４０セリン ６．
２１ ２．２６ダルタミン酸
１２．２５ ０．４３プロリン
１．９６
６．２０グリシン ６．６
８ ３．８３アラニン
７．９２ １．６７シスチン慶
０．７７ １９．５バ
リン ５．１ ３．８
０メチオニン １．９８
６．００イソロイシン ５．２１
２．２３０イン／１１．５０
０．４５チロシン ３
．５５ ４．２１フエニルアラニン
４．０７ ３．７７トリプトフ
アン ０．９３ ２３．９
を特徴とする蛋白質ＰＰ４に関する。
組織蛋白質の特徴的指標を以下に詳細に説明する。
電気泳動移動度はベックマン・インスツルメント（Ｂｅ
ｃｋｕ＋ａｎ工ｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）社製のミクロン
９−ン（Ｍｉｃｒｏｚｏｎｅ） Ｒ２００型装置を用い
アセチルセルロース箔（Ｅｌａｒｔｏｒｉｕｓ社製品）
上ｐＨ８，６のジエチルバルビッールｔ’＋１ナトリウ
ム緩衝液を使用して微修正で測定された。
ｃｋｕ＋ａｎ工ｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）社製のミクロン
９−ン（Ｍｉｃｒｏｚｏｎｅ） Ｒ２００型装置を用い
アセチルセルロース箔（Ｅｌａｒｔｏｒｉｕｓ社製品）
上ｐＨ８，６のジエチルバルビッールｔ’＋１ナトリウ
ム緩衝液を使用して微修正で測定された。
等電点はスレツクホルムのエル・グー４ビー（ＬＫＢ）
社製のカラム（４４０ｍ／）を用いて測定された。アム
フオリン（ＡｍｐｈＯｌｌＰ）混合物は４．０〜６．０
のｐＨ範囲を有した。
社製のカラム（４４０ｍ／）を用いて測定された。アム
フオリン（ＡｍｐｈＯｌｌＰ）混合物は４．０〜６．０
のｐＨ範囲を有した。
沈降係数はベックマン社製の分析用超遠心器〔スピンコ
（Ｓｐｉｎｅり装置Ｅ型〕中においてダブルセクターセ
ル中６０，０００ ｔｐｍ ＩｃてＵＶ、１．キャンナ
ー技術を用いて２８０ ｎｍで測定された。溶媒として
は０．２モル／λのＮａＯ１１，を含有するｐＨ６，８
の０．０５モル／Ｒ，燐酸塩緩衝液が用いられた。
（Ｓｐｉｎｅり装置Ｅ型〕中においてダブルセクターセ
ル中６０，０００ ｔｐｍ ＩｃてＵＶ、１．キャンナ
ー技術を用いて２８０ ｎｍで測定された。溶媒として
は０．２モル／λのＮａＯ１１，を含有するｐＨ６，８
の０．０５モル／Ｒ，燐酸塩緩衝液が用いられた。
蛋白質濃度は光学濃度約５に調整された。沈降係数は２
０℃の水に基いて換算された。
０℃の水に基いて換算された。
ＳＤＳを含有するポリアクリルアミドゲル中における分
子量の測定には０．１ ｆ ／ １００ ｍｌのドデシ
ル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含有する７、 ５ ｆ／
１００−のポリアクリルアミド（ＦＡＡ）を有するゲル
が使用された。比較物質としてヒト胎盤ラクトジエン（
ＨＰＬ）およびヒトアルブミンおよびその集合物が用い
られた。
子量の測定には０．１ ｆ ／ １００ ｍｌのドデシ
ル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含有する７、 ５ ｆ／
１００−のポリアクリルアミド（ＦＡＡ）を有するゲル
が使用された。比較物質としてヒト胎盤ラクトジエン（
ＨＰＬ）およびヒトアルブミンおよびその集合物が用い
られた。
吸光率の測定には物質１■を蒸留水中に溶解させて１ｒ
ｎｌの溶液とした。
ｎｌの溶液とした。
炭水化物は下記のようにして測定された。すなわち配糖
体結合を加水分解後遊離された中性糖をボレート複合体
として陰イオン交換体カラムで分離し〔ｒＡｎａｌＢｉ
ｏｃｈｅｍ、Ｊ第２７巻第５６７頁（１９６９年）参照
〕、溶出液中にビシンコニン酸第１銅試薬を混合するこ
とにより着色させ（１” Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ
、 Ｊ 第５６巻第４４０頁（１９７３年）参照〕そし
て内部標準としてラムノースを使用して定量的に測定し
た。アミン糖はニンヒドリンとのその反応により検出さ
れそして測定された。ノイラミン酸含量はウオレン（Ｗ
ａｒｒｅｎ）氏による方法［ｒＭｓｔｈＯｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙｊ第■巻第４６５〜４６５頁（１
９６３年）参照〕を用アミノ酸分析はムーブ（ｓ、 Ｍ
ｏ０ｒｅ）氏等の［Ａｎａｌ。
体結合を加水分解後遊離された中性糖をボレート複合体
として陰イオン交換体カラムで分離し〔ｒＡｎａｌＢｉ
ｏｃｈｅｍ、Ｊ第２７巻第５６７頁（１９６９年）参照
〕、溶出液中にビシンコニン酸第１銅試薬を混合するこ
とにより着色させ（１” Ａｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ
、 Ｊ 第５６巻第４４０頁（１９７３年）参照〕そし
て内部標準としてラムノースを使用して定量的に測定し
た。アミン糖はニンヒドリンとのその反応により検出さ
れそして測定された。ノイラミン酸含量はウオレン（Ｗ
ａｒｒｅｎ）氏による方法［ｒＭｓｔｈＯｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙｊ第■巻第４６５〜４６５頁（１
９６３年）参照〕を用アミノ酸分析はムーブ（ｓ、 Ｍ
ｏ０ｒｅ）氏等の［Ａｎａｌ。
Ｏｈｅｍ、 ｊ第６０巻第１１８５頁（１９５８年）に
記載された方法に従い、ベックマン社製の液体クロマト
グラフィー用マルチ〉ローム（Ｍｕｌｔｌｃｈｒｏｍ
）Ｂを使用して実施された。シスチンは蛋白質を過蟻酸
を用いて酸化しＣｒＡｎａｌ、 Ｏｈｅｍ、 Ｊ第６０
巻第１１８５頁（１９５８年）参照〕そして次にクロマ
トグラフィーＣｒＪ、 Ｂｉｏｌ、（！ｈｅｍ、 Ｊ第
２６８巻第２３５頁（１９６３年）参照〕した後システ
ィン酸として測定された。トリプトファン含量はエーデ
ルホ７ （Ｈ，Ｅｄｅｌｈｏｃｈ）氏のｒ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｔｓｔｒｙＪ第６巻第１９４８頁（１９６７年）記
載の方法により直接測光測定された。
記載された方法に従い、ベックマン社製の液体クロマト
グラフィー用マルチ〉ローム（Ｍｕｌｔｌｃｈｒｏｍ
）Ｂを使用して実施された。シスチンは蛋白質を過蟻酸
を用いて酸化しＣｒＡｎａｌ、 Ｏｈｅｍ、 Ｊ第６０
巻第１１８５頁（１９５８年）参照〕そして次にクロマ
トグラフィーＣｒＪ、 Ｂｉｏｌ、（！ｈｅｍ、 Ｊ第
２６８巻第２３５頁（１９６３年）参照〕した後システ
ィン酸として測定された。トリプトファン含量はエーデ
ルホ７ （Ｈ，Ｅｄｅｌｈｏｃｈ）氏のｒ Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｔｓｔｒｙＪ第６巻第１９４８頁（１９６７年）記
載の方法により直接測光測定された。
種々の人間の器官からの抽出物を調査するとＰＰ４は胎
盤、胃、膀胱、腎臓、副腎、皮膚および牌臓中において
免疫化学的方法を用いて比較的高濃度に検出された。心
臓、肺、肝臓、結腸、直腸および子宮のような人間の他
の器官からの抽出物はこの蛋白質を含有しないかまたは
相当微量にしか含有しなかった。ＰＰ４は人間の赤血球
からの溶解質中に低葭度にしか存在しなかった（緻密な
洗浄された赤血球１００ｍ７！当りＰＰ４約０．６ｎり
）。ＰＰ４と免疫化学的に同一のまたは本質的に関連す
る蛋白質は猿ならびに牛および羊の胎盤からの抽出物中
にも検出できた。
盤、胃、膀胱、腎臓、副腎、皮膚および牌臓中において
免疫化学的方法を用いて比較的高濃度に検出された。心
臓、肺、肝臓、結腸、直腸および子宮のような人間の他
の器官からの抽出物はこの蛋白質を含有しないかまたは
相当微量にしか含有しなかった。ＰＰ４は人間の赤血球
からの溶解質中に低葭度にしか存在しなかった（緻密な
洗浄された赤血球１００ｍ７！当りＰＰ４約０．６ｎり
）。ＰＰ４と免疫化学的に同一のまたは本質的に関連す
る蛋白質は猿ならびに牛および羊の胎盤からの抽出物中
にも検出できた。
従ってＰＰ４を単離するにはこの蛋白質が存在する人間
または動物の器官および細胞が使用されうる。これには
特に充分量得られセしてこの蛋白質を充分に高濃度に含
有する成熟した人間の胎盤が辿当である。
または動物の器官および細胞が使用されうる。これには
特に充分量得られセしてこの蛋白質を充分に高濃度に含
有する成熟した人間の胎盤が辿当である。
成熟した人間の胎盤は平均して約５０■のＰＰ４ ｋ含
有する。胎盤中に含有されるｐｒ＋４はその器官を稀塩
溶液または緩衝溶液、例えば生理食塩溶液で抽出すると
一部分しか溶液に移行しない（胎盤１個当り約２〜５ｍ
Ｖ）。しかしながらこの蛋白質の主要量は組織中におい
て膜と連合していると思われぞして可溶化剤例えばポリ
エチレングリコール−ｐ−インオクチルフェニルエーテ
ル［トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ’）Ｘ −１００］ ノよ
うな非イオン系洗浄剤を使用してはじめて溶液中に移行
する。従ってＰＰ４を単離するには胎盤から稀塩溶液を
用いて得られた蛋白抽出物のみならず溶−性成分を洗い
出したのちに組織残留物からトリトンｘ −１００を用
いてｏＪ溶化することにより得られる胎盤の蛋白抽出物
も使用されうる。こめ２種の抽出法により得られ、た蛋
白質はそれらの物理化学的および免疫化学的性質におい
て同一である。
有する。胎盤中に含有されるｐｒ＋４はその器官を稀塩
溶液または緩衝溶液、例えば生理食塩溶液で抽出すると
一部分しか溶液に移行しない（胎盤１個当り約２〜５ｍ
Ｖ）。しかしながらこの蛋白質の主要量は組織中におい
て膜と連合していると思われぞして可溶化剤例えばポリ
エチレングリコール−ｐ−インオクチルフェニルエーテ
ル［トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ’）Ｘ −１００］ ノよ
うな非イオン系洗浄剤を使用してはじめて溶液中に移行
する。従ってＰＰ４を単離するには胎盤から稀塩溶液を
用いて得られた蛋白抽出物のみならず溶−性成分を洗い
出したのちに組織残留物からトリトンｘ −１００を用
いてｏＪ溶化することにより得られる胎盤の蛋白抽出物
も使用されうる。こめ２種の抽出法により得られ、た蛋
白質はそれらの物理化学的および免疫化学的性質におい
て同一である。
ＰＰ４はこれらの性質に相当する措置をとることにより
その単離法において使用されうる下記の性質を有する。
その単離法において使用されうる下記の性質を有する。
１）硫酸アンモニウムを用いてｐＨ７，０および４０〜
７０修飽和で水溶液から沈殿する。
７０修飽和で水溶液から沈殿する。
２）水溶性アクリジン塩基例えば２−エトキシ−６，９
−ジアミノアクリジンラクテートしりパノール（Ｒ１ｖ
ａｎｏｌ■）〕を用いてｐＨ４〜９および塩基濃度０．
２〜０．８９／ １０ＵＪｍｅて沈殿する。
−ジアミノアクリジンラクテートしりパノール（Ｒ１ｖ
ａｎｏｌ■）〕を用いてｐＨ４〜９および塩基濃度０．
２〜０．８９／ １０ＵＪｍｅて沈殿する。
ｐＨ６，０およびリバノール濃度０．４ ｆ／１０ Ｍ
−Ｃ’一部分沈殿する。
−Ｃ’一部分沈殿する。
３）電気泳動による分離においてｐＨ８，６でα１とα
２グロブリンの間にみられる。
２グロブリンの間にみられる。
４）等電焦束においてｐＨ４，７〜５．０に見られる。
５）セファデックス（ＳｅｐｈａｄθＸ＠））でのゲル
渥過において分子量２０．ＯＤＤ〜５０，０ＯＯＱ有す
る蛋白質と同様に皐動する。
渥過において分子量２０．ＯＤＤ〜５０，０ＯＯＱ有す
る蛋白質と同様に皐動する。
６）稀塩溶液中約０〜２ｍＳの伝導度でカオリン、例え
ばメルク社製ボラスアルバ（ｂｏｌｕｓ ａｌｂａ）に
吸着されそしてそこからより濃度の高い塩溶液例えばｐ
Ｈ６，８の０１モル／β燐酸塩緩衝液で再び溶離されう
る。
ばメルク社製ボラスアルバ（ｂｏｌｕｓ ａｌｂａ）に
吸着されそしてそこからより濃度の高い塩溶液例えばｐ
Ｈ６，８の０１モル／β燐酸塩緩衝液で再び溶離されう
る。
７）弱塩基性イオン交換体例えばＤＦｉＡＥセルロース
またはＤＥＡＦ＋セファデックスに伝導度約０〜２ｍＳ
およびｐＨ約７〜９で結合しそしてより濃度の高い塩溶
液（Ｎａｃｎ １−５ｒ／Ｉ ＤＯ−溶液）で溶離され
うる。） ８）水溶液から免疫吸着により富化されそして単離され
うる。
またはＤＥＡＦ＋セファデックスに伝導度約０〜２ｍＳ
およびｐＨ約７〜９で結合しそしてより濃度の高い塩溶
液（Ｎａｃｎ １−５ｒ／Ｉ ＤＯ−溶液）で溶離され
うる。） ８）水溶液から免疫吸着により富化されそして単離され
うる。
従って本発明はまたこの蛋白質を含有する器官から稀塩
溶液または緩衝溶液を用いて得られた抽出物を下記ａ）
〜ｇ）の操作すなわちａ） ｐＨ５〜Ｂおよび４０〜
７０％の飽和における硫酸アンモニウムを用いる蛋白質
ＰＰ４の沈殿、ｂ）ｐＨ４〜９および塩の濃度０．２〜
０．８ ｒ／１ ｏｏｒｎｔにおける水溶性アクリジン
塩基を用いる蛋白質ＰＰ４の沈殿、 Ｃ）α１およびα２グロブリンの間の蛋白クラクション
が単卵１される調製用ゾーン電気泳動、ｄ）分子）ｊ中
２０．０００〜５０，０００を有する蛋白質が単離され
るゲル沖過または限外濾過、 ｅ）カオリンへの吸着および蛋白質ＰＰ４の溶離、ｆ）
弱塩基性イオン交換体への吸着および蛋白質ＰＰ４の溶
Ｐ！ｌ １ の 免疫吸着的富化 の一つまたはそれ以上に付することを特徴とするＰＰ４
の単離または富化法にも関する。
溶液または緩衝溶液を用いて得られた抽出物を下記ａ）
〜ｇ）の操作すなわちａ） ｐＨ５〜Ｂおよび４０〜
７０％の飽和における硫酸アンモニウムを用いる蛋白質
ＰＰ４の沈殿、ｂ）ｐＨ４〜９および塩の濃度０．２〜
０．８ ｒ／１ ｏｏｒｎｔにおける水溶性アクリジン
塩基を用いる蛋白質ＰＰ４の沈殿、 Ｃ）α１およびα２グロブリンの間の蛋白クラクション
が単卵１される調製用ゾーン電気泳動、ｄ）分子）ｊ中
２０．０００〜５０，０００を有する蛋白質が単離され
るゲル沖過または限外濾過、 ｅ）カオリンへの吸着および蛋白質ＰＰ４の溶離、ｆ）
弱塩基性イオン交換体への吸着および蛋白質ＰＰ４の溶
Ｐ！ｌ １ の 免疫吸着的富化 の一つまたはそれ以上に付することを特徴とするＰＰ４
の単離または富化法にも関する。
硫酸アンモニウムと並んで他の調製的生化学に慣用され
る中性塩もＰＰ４の沈殿に使用されうる。アクリジン塩
基の他に蛋白質分別に知られているようなキノリン塩基
の水溶性誘導体も本発明による方法の範囲内で使用され
うる。それらの’！）ｊ気詠動挙動、および分子量のよ
うな負荷に相描して、指示された性質を有する蛋白質を
他の蛋白質から分離するのに適する他の操作も蛋白質の
単離に使用されうる。
る中性塩もＰＰ４の沈殿に使用されうる。アクリジン塩
基の他に蛋白質分別に知られているようなキノリン塩基
の水溶性誘導体も本発明による方法の範囲内で使用され
うる。それらの’！）ｊ気詠動挙動、および分子量のよ
うな負荷に相描して、指示された性質を有する蛋白質を
他の蛋白質から分離するのに適する他の操作も蛋白質の
単離に使用されうる。
この目的には調製的電気泳動１等電焦束、ケ゛ル濾過ま
たは限外濾過なる抽々の方法あるいけまた弱塩基性イオ
ン交換体に結合されそしてそこから再び溶離されうるＰ
Ｐ４の性質も用いられうる。
たは限外濾過なる抽々の方法あるいけまた弱塩基性イオ
ン交換体に結合されそしてそこから再び溶離されうるＰ
Ｐ４の性質も用いられうる。
しかしながら特に稀緩衝溶液中でカオリンに吸着されそ
してそこから再び強緩衝溶液で溶離されうるＰＰ４の特
殊な性質がこの蛋白質の単離に抜群に適する。
してそこから再び強緩衝溶液で溶離されうるＰＰ４の特
殊な性質がこの蛋白質の単離に抜群に適する。
ＰＰ４の富化または他の蛋白質からのこの蛋白質の分離
をもたらす前記した操作の好都合な組み合せによりＰＰ
４が単離されうる。
をもたらす前記した操作の好都合な組み合せによりＰＰ
４が単離されうる。
それゆえ本発明はさらにこの蛋白質を含有する器官を粉
砕しそして生理的塩溶液を用いてすべての溶性成分が除
去されるまで洗い、組織残留物ヲ町溶化剤例えばポリエ
チレングリコール−ｐ−インオクチルフェニルエーテル
のような非イオン系洗浄剤の溶液を用いて抽出しそして
得られた抽出液を兄分に透析したのち前記したａ）〜ｇ
）の操作の１種またはそれ以上に付することを特徴とす
るＰＰ４の単離または富化法にも関する。
砕しそして生理的塩溶液を用いてすべての溶性成分が除
去されるまで洗い、組織残留物ヲ町溶化剤例えばポリエ
チレングリコール−ｐ−インオクチルフェニルエーテル
のような非イオン系洗浄剤の溶液を用いて抽出しそして
得られた抽出液を兄分に透析したのち前記したａ）〜ｇ
）の操作の１種またはそれ以上に付することを特徴とす
るＰＰ４の単離または富化法にも関する。
非イオン系洗浄剤の代シに例えば６モル／２ノｘｓｃＮ
ｊＪ液１ ＊は６モル／Ｕの尿素溶液もＰＰ４の可溶化
に使用されうる。
ｊＪ液１ ＊は６モル／Ｕの尿素溶液もＰＰ４の可溶化
に使用されうる。
ＰＰ４の富化および単離のために指示された前記操作は
すべて決して強制的なものではなくそしてまた前記され
た順序で実施されねばならぬものでもない。
すべて決して強制的なものではなくそしてまた前記され
た順序で実施されねばならぬものでもない。
人間の胎盤の稀塩抽出物からＰＰ４を単離するには、抽
出物中の蛋白質をはじめに水溶性のアクリジン塩基およ
び硫酸アンモニウムを用いて分別しそして次にカオリン
に吸着させる前にゲル濾過によりさらに富化させること
が好都合であることが証明された（後記例１参照）。
出物中の蛋白質をはじめに水溶性のアクリジン塩基およ
び硫酸アンモニウムを用いて分別しそして次にカオリン
に吸着させる前にゲル濾過によりさらに富化させること
が好都合であることが証明された（後記例１参照）。
胎盤組織を洗浄剤で抽出することにより得られた蛋白フ
ラクションからＰＰ４を単離する場合、ＰＰ４をはじめ
に免疫吸着工程により富化させそしてさらに精製するた
めに続いてゲル濾過をすることが好ましいことが証明さ
れた（例２参照）。
ラクションからＰＰ４を単離する場合、ＰＰ４をはじめ
に免疫吸着工程により富化させそしてさらに精製するた
めに続いてゲル濾過をすることが好ましいことが証明さ
れた（例２参照）。
例えば分離操作からのフラクション中においてＰＰ４を
検出および測定するには、指示されたパラメーターと並
んでまた免疫化学的方法も役立てられうる。何故ならＰ
Ｐ４は抗原性質を有するからである。
検出および測定するには、指示されたパラメーターと並
んでまた免疫化学的方法も役立てられうる。何故ならＰ
Ｐ４は抗原性質を有するからである。
この目的に使用されうる抗血清は下記の方法で取得され
うるすなわち洗浄剤で可溶化された胎盤組織蛋白７ラク
シヨンを用いて家兎に免疫賦与することによりなかんず
くＰＰ４に対する抗体をも含有する多価抗血清が得られ
る。
うるすなわち洗浄剤で可溶化された胎盤組織蛋白７ラク
シヨンを用いて家兎に免疫賦与することによりなかんず
くＰＰ４に対する抗体をも含有する多価抗血清が得られ
る。
この抗血清は一方ではＰＰ４の免疫学的検出に、もう一
方ではＰＰ４の富化および単離に使用されうる免疫吸着
剤の調製に役立てられうる。
方ではＰＰ４の富化および単離に使用されうる免疫吸着
剤の調製に役立てられうる。
本明細書の例１記載の方法により得られる精製されたＰ
Ｐａを用いて既知方法により動物に免疫賦与することに
より単一特異的な抗血清が調製されうる。
Ｐａを用いて既知方法により動物に免疫賦与することに
より単一特異的な抗血清が調製されうる。
ＰＰ４を免疫学的に検出するにはオウヒターロニイ（Ｏ
ｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）によるゲル拡散技法［５ｃｈｕ
ｌｔｚｅおよびＨｅｒｅｍａｎｓ両氏１”Ｍｏ１ｅｃｕ
１ａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆＨｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎｓＪ第１巻第１３４頁参照〕または必要な場合は、
放射線免疫検定または酵素免疫検定のようなより感度の
良い方法も用いられうる。
ｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）によるゲル拡散技法［５ｃｈｕ
ｌｔｚｅおよびＨｅｒｅｍａｎｓ両氏１”Ｍｏ１ｅｃｕ
１ａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆＨｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎｓＪ第１巻第１３４頁参照〕または必要な場合は、
放射線免疫検定または酵素免疫検定のようなより感度の
良い方法も用いられうる。
ＰＰ４の検出および測定は診断上重要である。
ＰＰ４はある種の器官中にのみ比較的高濃度に存在する
組織蛋白質である。これらの器官の疾患に際しては細胞
破壊の増大により患者の血清または他の体液、例えば尿
中におけるｆ（１織蛋白ＦＰ４の濃度が正常値以上に上
昇しうる。それゆえ体液中におけるＰＰ４の検出および
測定はとれらの器官の疾患を識別するためあるいはまた
疾患経過の監視および治療の制御のだめのマーカーとし
て使用されうる。
組織蛋白質である。これらの器官の疾患に際しては細胞
破壊の増大により患者の血清または他の体液、例えば尿
中におけるｆ（１織蛋白ＦＰ４の濃度が正常値以上に上
昇しうる。それゆえ体液中におけるＰＰ４の検出および
測定はとれらの器官の疾患を識別するためあるいはまた
疾患経過の監視および治療の制御のだめのマーカーとし
て使用されうる。
ＰＰ４はまたＰＰ４の検出および測定に役立てられうる
抗血清の調製にも使用されうる。
抗血清の調製にも使用されうる。
下記の例により本発明を説明する。
例 １
Ａ）胎盤の抽出およびアクリジン塩基および硫酸アンモ
ニウムを用いる抽出物の分別 冷凍された人間の胎盤１，０００Ｋｒを切断混合機中で
粉砕しそして０．４％（ｆ／１ｏａｍｇ）の食塩官液ｉ
、ｏｏｏｚを用いて抽出した。この抽出液から遠心分熱
により組織残留物を分離したのち２０ｑ５（ｆ／１００
ｍｅ）酢酸を用いてｐＨ６，０に調整しそして攪拌下に
２−エトキシ−６，９−ジアミノアクリジン−ラクテー
ト（リバノール、■（０θｃｈｓｔ社製品）の３チ（ｔ
／ １００ ｍｅ ）溶液２００βを加えた。
ニウムを用いる抽出物の分別 冷凍された人間の胎盤１，０００Ｋｒを切断混合機中で
粉砕しそして０．４％（ｆ／１ｏａｍｇ）の食塩官液ｉ
、ｏｏｏｚを用いて抽出した。この抽出液から遠心分熱
により組織残留物を分離したのち２０ｑ５（ｆ／１００
ｍｅ）酢酸を用いてｐＨ６，０に調整しそして攪拌下に
２−エトキシ−６，９−ジアミノアクリジン−ラクテー
ト（リバノール、■（０θｃｈｓｔ社製品）の３チ（ｔ
／ １００ ｍｅ ）溶液２００βを加えた。
沈殿を遠心分離により分１６ Ｌ、２．５％（グ／ １
００ｍ１）のＮａａｌ溶液５００Ｊ２を加えそして４時
間攪拌した。
００ｍ１）のＮａａｌ溶液５００Ｊ２を加えそして４時
間攪拌した。
分離してきた２−エトキシ−６，９−：）アミノアクリ
ジンクロライドを遠心分離除去した。上澄−み液から２
５％（？／１００ｍｅ）硫酸アンモニウムの添加により
随伴蛋白質の一部分を沈殿させた。
ジンクロライドを遠心分離除去した。上澄−み液から２
５％（？／１００ｍｅ）硫酸アンモニウムの添加により
随伴蛋白質の一部分を沈殿させた。
蛋白質ＰＰ４は主に溶液中に残存した。これは硫酸アン
モニウム（２０ｆ’≠ することによりそこから沈殿されそして遠心分離により
とり出された。それにより以下にフラクションＡとして
表示される湿った彎スースト約３ Ｋｐが得られた。
モニウム（２０ｆ’≠ することによりそこから沈殿されそして遠心分離により
とり出された。それにより以下にフラクションＡとして
表示される湿った彎スースト約３ Ｋｐが得られた。
Ｂ）セファデックス（）−１５０でのゲルｐ過フラクシ
ョンＡ ５００ｆ’を水に溶解させ、まだ存在するＩＪ
ハノールを除去するためにベントナイトＡ （Ｆｌｉ
ｒＭＩＯｅｈ ＆ ｃｏ社製品）約２．５ ？ ｆ加え
そして遠心分離したのち０．０５係（ｙ７１ｏｏτｔｌ
）のＮａＮ３を含有する０、０１モル／λのトリ、ｙ、
（Ｔｒｉｓ）Ｈｅｎ緩衝液（ｐＨ８，０）（緩衝溶液ｌ
）で透析した。
ョンＡ ５００ｆ’を水に溶解させ、まだ存在するＩＪ
ハノールを除去するためにベントナイトＡ （Ｆｌｉ
ｒＭＩＯｅｈ ＆ ｃｏ社製品）約２．５ ？ ｆ加え
そして遠心分離したのち０．０５係（ｙ７１ｏｏτｔｌ
）のＮａＮ３を含有する０、０１モル／λのトリ、ｙ、
（Ｔｒｉｓ）Ｈｅｎ緩衝液（ｐＨ８，０）（緩衝溶液ｌ
）で透析した。
残留する溶液をセファデックスＧ−１５０を充填したカ
ラム（２０Ｘ１００Ｃ７１１）に適用しそして緩衝溶液
■を用いて溶離した。低分子蛋白質（分子量ｉｏ、ｏｏ
ｏ〜６０．ｏｃｉｏ）を含有する溶出液を合しそして蛋
白質を沈殿させるために４５％（ｆ／１０１００ｒＰの
硫酸アンモニウムを加えた。沈殿を遠心分離にとり出し
た（フラクションＢ）。
ラム（２０Ｘ１００Ｃ７１１）に適用しそして緩衝溶液
■を用いて溶離した。低分子蛋白質（分子量ｉｏ、ｏｏ
ｏ〜６０．ｏｃｉｏ）を含有する溶出液を合しそして蛋
白質を沈殿させるために４５％（ｆ／１０１００ｒＰの
硫酸アンモニウムを加えた。沈殿を遠心分離にとり出し
た（フラクションＢ）。
Ｃ）カオリンへの吸着および溶離
フラクションＢを水約１００ｍ１中に溶解させそして緩
ｆＩ！ｉｉ ｍ液！で透析した。この溶液１５０ｍ１に
つきカオリン〔メルク社製ボラスアルバ〕１５２を加え
そして２０℃で１時間撹拌した。それによりｐｐ４はカ
オリンに結合され、一方他の蛋白質は大部分溶液中に残
留した。遠心分離したのちカオリンを緩衝溶液Ｉを用い
て２回短時間洗浄しそして終りにｐＨ６，８の０．１モ
ル／λ燐酸す） ＩＪウム緩衝液１５０ｍ１ずつを用い
て続けて２回溶熱するとＰＰ４が再び溶液中に移行した
。遠心分譲によシカオリンを分離したのち溶出液を合し
そして限外沖過器を用いて１０〜２０ｒｄまで濃縮した
。
ｆＩ！ｉｉ ｍ液！で透析した。この溶液１５０ｍ１に
つきカオリン〔メルク社製ボラスアルバ〕１５２を加え
そして２０℃で１時間撹拌した。それによりｐｐ４はカ
オリンに結合され、一方他の蛋白質は大部分溶液中に残
留した。遠心分離したのちカオリンを緩衝溶液Ｉを用い
て２回短時間洗浄しそして終りにｐＨ６，８の０．１モ
ル／λ燐酸す） ＩＪウム緩衝液１５０ｍ１ずつを用い
て続けて２回溶熱するとＰＰ４が再び溶液中に移行した
。遠心分譲によシカオリンを分離したのち溶出液を合し
そして限外沖過器を用いて１０〜２０ｒｄまで濃縮した
。
Ｄ）高度精製
カオリンへの吸着により得られた生成物は純度約９０係
を有していた。まだ存在する不純物の主要量は１モル／
２のＮａＯλおよび０．１ ％ （１７１００ｍ１．）
のナトリウムアジドを含有するｐＨ８の０，１モル／λ
のトリス−ＨＣμ緩衝溶液（緩衝溶液■）を使用してウ
ルトｏゲル（Ｕｌｔｒｏｇｅｌ）ＡｃＡ−４４カラム（
４，５Ｘ １００Ｃｒｎ）でゲル漣遇することにより分
離できた。まだ痕跡量で残存する血清蛋白質は逆のまた
は負め免疫吸着により、すなわち人間の血清の蛋白質に
対する家兎の担体と結合した抗体を用いて除去された。
を有していた。まだ存在する不純物の主要量は１モル／
２のＮａＯλおよび０．１ ％ （１７１００ｍ１．）
のナトリウムアジドを含有するｐＨ８の０，１モル／λ
のトリス−ＨＣμ緩衝溶液（緩衝溶液■）を使用してウ
ルトｏゲル（Ｕｌｔｒｏｇｅｌ）ＡｃＡ−４４カラム（
４，５Ｘ １００Ｃｒｎ）でゲル漣遇することにより分
離できた。まだ痕跡量で残存する血清蛋白質は逆のまた
は負め免疫吸着により、すなわち人間の血清の蛋白質に
対する家兎の担体と結合した抗体を用いて除去された。
この方法で得られたＰＰ４は９９−以上の純度を有した
。
。
このＰＰ４溶液を水で透析しそして次に凍結乾燥した。
フラクションＡのペースト５００１かす理４約３０〜が
得られた。
得られた。
例 ２
Ａ）胎盤の粉砕および洗浄
ＰＰ４の膜と会合した部分を単離するために分娩に際し
て得られるような成熟した人間の胎盤を冷凍された状態
で切断混合機を用いて粉砕しそして使用までこの形態で
一２０℃で貯蔵した。
て得られるような成熟した人間の胎盤を冷凍された状態
で切断混合機を用いて粉砕しそして使用までこの形態で
一２０℃で貯蔵した。
次に生理食塩溶液で洗浄することによりすべての溶性組
織蛋白質を除去した。そのためには粉砕された胎盤組織
５００ｆに食塩溶液７００ ｍｌを加え、短時間均質化
させ、次に４℃で数時間攪拌しそして終りに遠心分離し
た。上澄み液を捨て、残留物を新たに食塩溶液７００ｍ
（！と数時間撹拌しそして再び遠心分ｎした。この洗浄
操作を合計６回反復した。この方法で胎盤組織から溶性
成分を実質的に除去した。
織蛋白質を除去した。そのためには粉砕された胎盤組織
５００ｆに食塩溶液７００ ｍｌを加え、短時間均質化
させ、次に４℃で数時間攪拌しそして終りに遠心分離し
た。上澄み液を捨て、残留物を新たに食塩溶液７００ｍ
（！と数時間撹拌しそして再び遠心分ｎした。この洗浄
操作を合計６回反復した。この方法で胎盤組織から溶性
成分を実質的に除去した。
Ｂ）洗浄剤を用いる胎盤組織の抽出
膜と会合した抗原を可溶化させるために組織残留物全洗
浄後水中のトリトンＸ−１００の２チ溶液各７００ｒｎ
ｌずつを用いて続けて５回抽出し、その際４℃でそれぞ
れ２０時間攪拌しそして次に遠心分離した。この抽出液
をはじめ水で、そシテ次ニ１モル／Ｉ！、ノＮａＣ℃オ
ヨび０．１％（ｒ／１００ｍｅ ）のナトリウムアジド
を含有するＯ１１モル／λＣＤ ） ！Ｊ 、＜ −Ｈ
ＣＡ−緩衝液（ｐＨ８、Ｄ）（緩衝溶液Ｕ）で透析した
。透析後この溶液を限外沖過器（Ａｍｉｃｏｎ社製品）
上ＰＭ−１０膜を使用してそれぞれ約ＺＯＯｍｅまで濃
縮した。胎盤組織５ＤＯｒの残留物からの抽出物は平均
して合計約２’５ｍｑのＰＰＪを含有していた（フラク
ション２Ａ ）。
浄後水中のトリトンＸ−１００の２チ溶液各７００ｒｎ
ｌずつを用いて続けて５回抽出し、その際４℃でそれぞ
れ２０時間攪拌しそして次に遠心分離した。この抽出液
をはじめ水で、そシテ次ニ１モル／Ｉ！、ノＮａＣ℃オ
ヨび０．１％（ｒ／１００ｍｅ ）のナトリウムアジド
を含有するＯ１１モル／λＣＤ ） ！Ｊ 、＜ −Ｈ
ＣＡ−緩衝液（ｐＨ８、Ｄ）（緩衝溶液Ｕ）で透析した
。透析後この溶液を限外沖過器（Ａｍｉｃｏｎ社製品）
上ＰＭ−１０膜を使用してそれぞれ約ＺＯＯｍｅまで濃
縮した。胎盤組織５ＤＯｒの残留物からの抽出物は平均
して合計約２’５ｍｑのＰＰＪを含有していた（フラク
ション２Ａ ）。
Ｃ）免疫吸着によるＰＰ４の富化
１）免疫吸着剤の調製
家兎を可溶化された胎盤蛋白質（フラクション２Ａ）を
用いて免疫賦与することにより多価抗血清を調製した。
用いて免疫賦与することにより多価抗血清を調製した。
このものはＰＰ４に対する抗体もそしてまた洗浄剤で溶
解する他の抗原に対する抗体をも含有した。かかる抗血
清プール３５０−を０．０２モル／℃の燐酸塩緩衝液（
ｐＨ７，０）で透析しそして免疫グロブリンを分離する
ために同じ緩衝液を用いｎＫＡＥセルロースでクロマト
グラフィーした。通過液（蛋白質３．６３Ｆ）中の免疫
クロブリンフラクンヨンをブロムシアン４５．６９を用
いて活性化した球形の特別に精製されたアガロースＣＰ
ｆｉａｒｍａｃｉａ社製品、セファロース（Ｓｅｐｈａ
ｒｏｅｅ＠）） ） ３６３ ｆ！と反応させそして担
体に共有結合させた。この方法ＶｉＡｘθｎ氏他にょシ
ｒＮａｔｕｒｅ Ｊ第２１４巻第１３ｏ２頁（１９６７
年）に記載されている。この方法で調製された免疫吸着
剤を用いてＰＰＪを他の可溶化された抗原と共に胎盤フ
ラクション２Ａからさらに富化できた。
解する他の抗原に対する抗体をも含有した。かかる抗血
清プール３５０−を０．０２モル／℃の燐酸塩緩衝液（
ｐＨ７，０）で透析しそして免疫グロブリンを分離する
ために同じ緩衝液を用いｎＫＡＥセルロースでクロマト
グラフィーした。通過液（蛋白質３．６３Ｆ）中の免疫
クロブリンフラクンヨンをブロムシアン４５．６９を用
いて活性化した球形の特別に精製されたアガロースＣＰ
ｆｉａｒｍａｃｉａ社製品、セファロース（Ｓｅｐｈａ
ｒｏｅｅ＠）） ） ３６３ ｆ！と反応させそして担
体に共有結合させた。この方法ＶｉＡｘθｎ氏他にょシ
ｒＮａｔｕｒｅ Ｊ第２１４巻第１３ｏ２頁（１９６７
年）に記載されている。この方法で調製された免疫吸着
剤を用いてＰＰＪを他の可溶化された抗原と共に胎盤フ
ラクション２Ａからさらに富化できた。
２）免疫吸着の実施
免疫吸着剤を緩衝溶液ＵＫ懸濁させ、りａマドグラフィ
ー用カラム（５，ＯＸ ２０ｃｒｎ）に充填しそして緩
衝溶液■で洗った。次にフへクション２八をカラムに適
用するとその際ＰＰ４および他の可溶化された抗原が免
疫吸着的に結合された。次にとのカラムを緩衝液■で充
分に洗浄した。次に吸着された蛋白質を６モル／ｆ！、
の尿素溶液的６００ｍｊ！を用いてカラムから溶離させ
た。ＰＰＪを含有する溶出液を緩衝溶液■で透析しそし
て限外沖過器を用いて約２０ｍｅまで濃縮した。カラム
中の吸着剤を蛋白質の溶離後直ちに緩衝溶液ＩＩを用い
て再び中和しそしそ充分に洗浄した。
ー用カラム（５，ＯＸ ２０ｃｒｎ）に充填しそして緩
衝溶液■で洗った。次にフへクション２八をカラムに適
用するとその際ＰＰ４および他の可溶化された抗原が免
疫吸着的に結合された。次にとのカラムを緩衝液■で充
分に洗浄した。次に吸着された蛋白質を６モル／ｆ！、
の尿素溶液的６００ｍｊ！を用いてカラムから溶離させ
た。ＰＰＪを含有する溶出液を緩衝溶液■で透析しそし
て限外沖過器を用いて約２０ｍｅまで濃縮した。カラム
中の吸着剤を蛋白質の溶離後直ちに緩衝溶液ＩＩを用い
て再び中和しそしそ充分に洗浄した。
これは可溶化された抗原の免疫吸着的結合にあらためて
使用される。
使用される。
Ｄ）ゲル濾過によるＰＰ４の分離
免疫吸着的に結合された他の抗原からのＰＰ４の分離は
アクリルアミドアガロースＡｃΔ−３４（ＬＫＢ社製品
）でのゾル濾過によシ実施された。
アクリルアミドアガロースＡｃΔ−３４（ＬＫＢ社製品
）でのゾル濾過によシ実施された。
このためには免疫吸着により得られたフラクションを合
し、６０ｔｎｌまで濃縮しそして緩術溶液■全使用して
ＡｃＡ −３４カラム（５Ｘ １ ’ｌ Ｏｚ）でクロ
マトグラフィーした。その際ＰＰ４は大抵より高い分子
量（１ｏｏ、ｏｏｏ以上）を有しそしてそれゆえＰＰ４
より速かにカラムを移動する他の可溶化された膜抗原か
ら明瞭に分離された。ＰＰ４の主要量’／ｒ含有するフ
シク′／：７ンｆ：合し、そして限外濾過器中で１０〜
２０−まで濃縮し／ζ。
し、６０ｔｎｌまで濃縮しそして緩術溶液■全使用して
ＡｃＡ −３４カラム（５Ｘ １ ’ｌ Ｏｚ）でクロ
マトグラフィーした。その際ＰＰ４は大抵より高い分子
量（１ｏｏ、ｏｏｏ以上）を有しそしてそれゆえＰＰ４
より速かにカラムを移動する他の可溶化された膜抗原か
ら明瞭に分離された。ＰＰ４の主要量’／ｒ含有するフ
シク′／：７ンｆ：合し、そして限外濾過器中で１０〜
２０−まで濃縮し／ζ。
Ｅ）高度精製
ゲル濾過により得られた生成物はまだ微片の血清蛋白質
特にアルブミンにより汚染されていた。これは逆の免疫
吸着、すなわちなお随伴蛋白質として存在する血清蛋白
質に対する担体と結合した抗体を用いて除去できた。
特にアルブミンにより汚染されていた。これは逆の免疫
吸着、すなわちなお随伴蛋白質として存在する血清蛋白
質に対する担体と結合した抗体を用いて除去できた。
第１ａ図は寒天含有ゲル中の電界での分離後におけるＰ
Ｐ４と家兎の特異的な抗血清（Ａｎｔｉ −ＰＰ４ ）
との免疫学的反応を示す図であり、ぞして第１ｂ図はヒ
ト血清（Ｈ８）に対する臥兎の抗血ｉ （Ａｎｔ：Ｌ−
Ｈｅ ）とのその免疫反応により視認可能になされた血
清蛋白質の分離を示す図である。
Ｐ４と家兎の特異的な抗血清（Ａｎｔｉ −ＰＰ４ ）
との免疫学的反応を示す図であり、ぞして第１ｂ図はヒ
ト血清（Ｈ８）に対する臥兎の抗血ｉ （Ａｎｔ：Ｌ−
Ｈｅ ）とのその免疫反応により視認可能になされた血
清蛋白質の分離を示す図である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）下記ａ）〜ｇ）すなわち ａ）α１およびα２グロブリンの範囲内にある電気泳動
移動度、 ｂ）等電点４．８５±０．１５、 Ｃ）沈降係数８ ６．６±０．２８１ ２０、ｗ ｄ）ドデシル硫酸ナトリウム（ｓＤＳ）含有ポリアクリ
ルアミドゲルにおいて測定された分子量３５，０００±
５，０００、 ｅ）吸光率ＦＵ” （２８０ｎｍ ） ５．９±０．６
、ｃｒｎ ｆ）炭水（ｔ［１割合２．４±０．９４％（ｆ／１００
Ｆ）（マンノース０．６±０．２％、ガラクトース０．
４±０．２％、キシロース０，１±０．０４チ、グルコ
ース０．２±０．１％、グルコサミン１．０±０．２％
、ノイラミン酸０．４−ｆＯ，２％ ）およびｇ）下記
アミノ酸組成すなわち リジン ６．９５
１．１４ヒスチジン
０．９７ １７．４アルギニン
５．４４ １．７７アスパラギン
酸 １１．４１ １．６８ス
レオニン ６．７８
２．４０セリン ６．
２１ ２．２６グルタミン酸
１２．２５ ０．４３プロリ
ン １．９６
６．２０グリシン ６，６８
３．８３アラニン
７．９２ １．６７シスチン慶
０．７７ １９．５バリン
５．３４ ３．８０
メチオニン １．９８
６．００インロイシン ５，２１
２．２３０イシン
１１．５０ ０．４５チロシン
３．５５ ４．２
１フエニルアラニン ４．０７
３．７７トリプトフアン ０．９３
２３．９を特徴とする蛋白質ＰＰ４゜ ２）下記ａ）〜ｇ）すなわち ａ）α１およびα２グロブリンの範囲内にある電気泳動
移動度、 ｂ）等電点４．８５±０．１５、 Ｃ）沈降係数ｓ２ｏ、ｗ３．３±０．２８゜ｄ） ドデ
シル硫酸ナトリウム（ＳＪ）Ｓ）含有ポリアクリルアミ
ドゲルにおいて測定された分子量３５，０００±５，０
００． １チ θ）吸光率Ｅ、Ｌｙｎ（２８０ｎｍ ） ５．９±０．
６、ｆ）炭水化物割合２．４±０．９４％（’／１０ｏ
ｒ）（マンノース０．３±０．２％、カラクトース０．
４±０．２チ、キシロース０．１±０．０４チ、グルコ
ース０．２±０．１チ、グルコサミン１．０±０，２チ
、ノイラミン［０，４−１＝０．２係）およびｇ）下記
アミノ酸組成すなわち アミノ酸 基１００当りの基数（七４）変動係数リジ
ン ６．９５
１．１４ヒスチジン ０．
９７ １７．４アルギニン
５．４４ １．７７アスパラギン
酸 １１．４１ １．６８ス
レオニン ６．７８
２．４０セリン ６．２１
２．２６グルタミンＦＩＲ１２，２５［１，４
３プロリン １．９６
６．２０グリシン
６．６８ ３．８３アラニン
７９２ １．６７
シスチン慶 ０．７７
１９．５バリン ５．３４
３．８０メチオニン 、１．
９８ ６．００イソロインン
５．２１ ２．２３０イシン
１１．５０ ０．
４５チロシン ３．５５
４．２１フエニルアラニン
４．０７ ３．７７トリプトフアン
０．９３ ２３．９を有す
る蛋白質ＰＰ４を単離するに当り、この蛋白質を含有す
る器官から希塩溶液まだは緩衝溶液を用いて得られた抽
出物を下記ａ）−ｇ）の操作すなわち ａ） ｐＨ５〜８および４０〜７０チの飽和における
硫酸アンモニウムを用いる蛋白質ＰＰ４の沈殿、 ｂ） ｐＨ４〜９および塩基濃度０．２〜０．８２Δ
００ｍ７！における水溶性アクリジン塩基を用いる蛋白
質ＰＰ４の沈殿、 Ｃ）α１およびα２グロブリンの間の蛋白フラクション
が単離される調製用ゾーン電気泳動、 ｄ）分子量２０，０００〜ｓｏ、ｏｏｏを有する蛋白質
が単離されるゲル濾過または限外濾過、ｅ）カオリンへ
の吸着および蛋白質ＰＰ４の溶離、 ｆ）弱塩基性イオン交換体への吸着および蛋白質ＰＰ４
の溶離、および ｇ）免疫吸着的富化 の一つまたはそれ以上に付することを特徴とする方法。 ３）この蛋白質を含有する器官を粉砕しそして生理的塩
溶液を用いてすべての可溶性成分が除去されるまで洗い
、次に組織残留物を可溶化剤好ましくは非イオン系洗浄
剤の溶液を用いて抽出しそして得られた抽出液を透析後
に前記特許請求の範囲第２項の記載のようＫして処理す
ることを特徴とする特許 範囲第２項記載の方法。 ４）特定の器官の疾患を識別するために、疾患の経過を
監視または治療を制御するための「マーカー」として体
液中のＰＰ４を検出および測定するための抗血清の調製
における蛋白質ＰＰ４の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3315000.1 | 1983-04-26 | ||
| DE19833315000 DE3315000A1 (de) | 1983-04-26 | 1983-04-26 | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)4(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59225196A true JPS59225196A (ja) | 1984-12-18 |
| JPH0544478B2 JPH0544478B2 (ja) | 1993-07-06 |
Family
ID=6197344
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59082120A Granted JPS59225196A (ja) | 1983-04-26 | 1984-04-25 | 組織蛋白質およびその単離法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4507229A (ja) |
| EP (1) | EP0123307B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59225196A (ja) |
| AT (1) | ATE53298T1 (ja) |
| AU (1) | AU561211B2 (ja) |
| CA (1) | CA1224775A (ja) |
| DE (2) | DE3315000A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62169728A (ja) * | 1986-01-21 | 1987-07-25 | Kowa Co | トロンビン結合性物質およびその製法 |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3338480A1 (de) * | 1983-10-22 | 1985-05-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)0(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3404563A1 (de) * | 1984-02-09 | 1985-08-14 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)9(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3410694A1 (de) * | 1984-03-23 | 1985-10-03 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3533516A1 (de) * | 1984-09-21 | 1986-04-03 | Boehringer Ingelheim KG, 6507 Ingelheim | Blutgerinnungshemmende proteine, verfahren zur herstellung sowie deren verwendung |
| US5264550A (en) * | 1985-04-15 | 1993-11-23 | Scios Nova Inc. | Human anti-inflammatory phospholipase inhibitor protein |
| EP0208418B1 (en) * | 1985-06-12 | 1991-10-30 | Lubrizol Genetics Inc. | Modified zein |
| CA1265446A (en) * | 1985-09-30 | 1990-02-06 | Masahiro Maki | Anticoagulating substance, process for preparing same and anticoagulant comprising same as an effective component |
| EP0253331B1 (en) * | 1986-07-15 | 1994-10-19 | Kowa Co. Ltd. | Thrombin-binding substance and process for its preparation |
| JPH08840B2 (ja) * | 1986-11-14 | 1996-01-10 | 興和株式会社 | 抗ｐｃｉモノクローナル抗体、これを用いた抗ｐｃｉの精製法及び免疫学的測定法 |
| DE3643182A1 (de) * | 1986-12-18 | 1988-06-30 | Behringwerke Ag | Arzneimittel enthaltend das gewebeprotein pp4, verfahren zur herstellung von pp4 und zu seiner pasteurisierung sowie die verwendung von pp4 |
| EP0286830A3 (de) * | 1987-03-13 | 1990-01-24 | BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft | Verfahren zur Extraktion von Protein PP4 aus Geweben und die Verwendung von Citronensäure für diesen Zweck |
| DE3724726A1 (de) * | 1987-07-25 | 1989-02-02 | Behringwerke Ag | Verfahren zur reinigung des plazentaren gewebeproteins pp4 |
| DE3737239A1 (de) * | 1987-11-03 | 1989-10-12 | Behringwerke Ag | Gentechnische herstellung von anticoagulatorischem protein pp4 |
| DE3737237A1 (de) * | 1987-11-03 | 1989-05-18 | Behringwerke Ag | Anticoagulatorisches protein pp4-x, seine herstellung und verwendung |
| ES2045669T3 (es) * | 1989-07-15 | 1994-01-16 | Boehringer Ingelheim Int | Procedimiento para la purificacion de anexinas. |
| DE4022010A1 (de) * | 1989-07-15 | 1991-01-17 | Boehringer Ingelheim Int | Ein antikoagulanz enthaltendes mittel |
| DE4003773A1 (de) * | 1990-02-08 | 1991-08-14 | Behringwerke Ag | Verfahren zur reinigung von lipocortinen |
| US5322655A (en) * | 1993-02-19 | 1994-06-21 | Thomas Engineering, Inc. | Method for monitoring and controlling the weights of each layer of a multilayer tablet |
| US20030220233A1 (en) * | 1994-01-24 | 2003-11-27 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexins |
| US5968477A (en) | 1994-01-24 | 1999-10-19 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator |
| CA2190727C (en) * | 1994-05-19 | 2006-07-18 | Sudhakar Kasina | Aromatic amine substituted bridged nitrogen and sulfur donor atom ligands for imaging |
| US6005083A (en) | 1997-03-28 | 1999-12-21 | Neorx Corporation | Bridged aromatic substituted amine ligands with donor atoms |
| DE19734648A1 (de) | 1997-08-11 | 1999-02-18 | Dade Behring Marburg Gmbh | Verwendung von Annexinen als Lupus Antikoagulans Kontrolle oder Standard in Gerinnungstesten |
| US20090291086A1 (en) * | 2001-02-21 | 2009-11-26 | Alavita Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and Methods for Treating Cerebral Thrombosis and Global Cerebral Ischemia |
| US7635676B2 (en) * | 2001-02-21 | 2009-12-22 | Alavita Pharmaccuticals, Inc. | Modified annexin proteins and methods for their use in organ transplantation |
| US7635680B2 (en) * | 2001-02-21 | 2009-12-22 | Alavita Pharmaceuticals, Inc. | Attenuation of reperfusion injury |
| US7645739B2 (en) * | 2001-02-21 | 2010-01-12 | Alavita Pharmaceuticals, Inc. | Modified annexin compositions and methods of using same |
| EP1379266B1 (en) * | 2001-02-21 | 2007-04-18 | SurroMed, Inc. | Modified annexin proteins and prevention and treatment of thrombosis |
| US6982154B2 (en) * | 2002-02-21 | 2006-01-03 | Surromed, Inc. | Modified annexin proteins and methods for treating vaso-occlusive sickle-cell disease |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2221261A1 (de) * | 1972-04-29 | 1973-11-15 | Behringwerke Ag | Ap-glykoproteine und verfahren zu ihrer isolierung |
| DE2640387C3 (de) * | 1976-09-08 | 1981-01-22 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebespezifisches Protein und Verfahren zu dessen Herstellung |
| DE2720704C2 (de) * | 1977-05-07 | 1986-09-25 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues Glycoprotein, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung |
| DE2726886A1 (de) * | 1977-06-15 | 1979-01-18 | Behringwerke Ag | Neues glykoprotein und verfahren zu dessen herstellung |
| DE2745680A1 (de) * | 1977-10-11 | 1979-04-12 | Behringwerke Ag | Kontrazeptives mittel |
| DE2842467A1 (de) * | 1978-09-29 | 1980-04-10 | Behringwerke Ag | Neues ubiquitaeres gewebsprotein pp tief 8 |
| DE2854759A1 (de) * | 1978-12-19 | 1980-07-10 | Behringwerke Ag | Neues plazentaspezifisches gewebsprotein pp tief 10 |
| DE2946458A1 (de) * | 1979-11-17 | 1981-06-11 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein pp(pfeil abwaerts)11(pfeil abwaerts) |
| DE2952792A1 (de) * | 1979-12-31 | 1981-07-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein (pp(pfeil abwaerts)15(pfeil abwaerts)) mit immunsuppressiver wirkung |
| DE3013724A1 (de) * | 1980-04-10 | 1981-10-15 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein pp (pfeil abwaerts)9(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowieseine verwendung |
| DE3109629A1 (de) * | 1981-03-13 | 1982-09-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | "neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)6(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung" |
| DE3228503A1 (de) * | 1982-07-30 | 1984-02-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)7(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung |
-
1983
- 1983-04-26 DE DE19833315000 patent/DE3315000A1/de active Granted
-
1984
- 1984-04-21 EP EP84104546A patent/EP0123307B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-04-21 DE DE8484104546T patent/DE3482404D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1984-04-21 AT AT84104546T patent/ATE53298T1/de active
- 1984-04-24 US US06/603,346 patent/US4507229A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-04-24 AU AU27203/84A patent/AU561211B2/en not_active Ceased
- 1984-04-25 JP JP59082120A patent/JPS59225196A/ja active Granted
- 1984-04-25 CA CA000452691A patent/CA1224775A/en not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62169728A (ja) * | 1986-01-21 | 1987-07-25 | Kowa Co | トロンビン結合性物質およびその製法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3315000C2 (ja) | 1991-06-27 |
| EP0123307B1 (de) | 1990-06-06 |
| EP0123307A3 (en) | 1987-08-26 |
| US4507229A (en) | 1985-03-26 |
| DE3482404D1 (de) | 1990-07-12 |
| ATE53298T1 (de) | 1990-06-15 |
| AU2720384A (en) | 1984-11-01 |
| JPH0544478B2 (ja) | 1993-07-06 |
| DE3315000A1 (de) | 1984-10-31 |
| EP0123307A2 (de) | 1984-10-31 |
| AU561211B2 (en) | 1987-04-30 |
| CA1224775A (en) | 1987-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS59225196A (ja) | 組織蛋白質およびその単離法 | |
| US4217339A (en) | Glycoprotein and process for isolating it | |
| US4301064A (en) | Ubiquitary tissue protein PP8 | |
| FI61192B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett saosom diagnostiskt medel anvaendbart vaevnadsprotein | |
| US4302385A (en) | Placenta-specific tissue protein PP10 | |
| US4500451A (en) | New protein PP13 extracted from human placental tissues and use thereof | |
| JPS6361319B2 (ja) | ||
| US4468345A (en) | Protein (PP17), a process for concentrating and isolating it and its use | |
| US4746731A (en) | Isolated tissue protein PP18 | |
| US4368148A (en) | Protein PP9, process for its enrichment and its isolation and its use | |
| US4592863A (en) | Protein PP20, a process for obtaining it, and its use | |
| US4594328A (en) | Tissue protein PP21, a process for obtaining it and its use | |
| US4325866A (en) | Protein, PP11, a process for its preparation and its use | |
| CA1239872A (en) | Tissue protein pp in19' xxa process for obtaining it, and its use | |
| JPS601132A (ja) | 胎盤蛋白質およびその取得法 | |
| JPH0544479B2 (ja) | ||
| Bohn et al. | Tissue protein PP 21, a process for obtaining it and its use | |
| Bohn et al. | Tissue protein PP 4, a process for isolating it and its use | |
| Bohn et al. | Isolated tissue protein PP 18 | |
| Izumi et al. | Characterization of abnormal thyroglobulin in a transplantable rat thyroid tumor | |
| Bohn et al. | Protein PP 20, a process for obtaining it, and its use | |
| Bohn et al. | Placenta-specific tissue protein PP 10 | |
| Bohn et al. | Ubiquitary tissue protein PP 8 | |
| SE459372B (sv) | Humant pankreasspecifikt protein (hpasp), framstaellning av antikroppar mot proteinet och diagnostiskt foerfarande vid akut pankreatit |