JPS59214766A - 体液中にあるレクチン親和性物質検出用試薬 - Google Patents
体液中にあるレクチン親和性物質検出用試薬Info
- Publication number
- JPS59214766A JPS59214766A JP8906883A JP8906883A JPS59214766A JP S59214766 A JPS59214766 A JP S59214766A JP 8906883 A JP8906883 A JP 8906883A JP 8906883 A JP8906883 A JP 8906883A JP S59214766 A JPS59214766 A JP S59214766A
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- Japan
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- lectin
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- red blood
- blood cells
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- Pending
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
- G01N33/555—Red blood cell
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は２種々の疾患特に気道閉塞性障害の有無、病態
の把握に有益な試薬に関する。
の把握に有益な試薬に関する。
レクチンは赤血球凝集素、植物凝集素などとよばれてい
たものであって、細胞表面の糖残基に親和性を示すもの
である。そのために赤血球や細胞を凝集させたり、細胞
分裂を誘導させる作用などが知らされている。従来は植
物由来のレクチンが主であったが動物由来のものも知ら
れるに至り疾患との関連も注目されるようになってきた
。
たものであって、細胞表面の糖残基に親和性を示すもの
である。そのために赤血球や細胞を凝集させたり、細胞
分裂を誘導させる作用などが知らされている。従来は植
物由来のレクチンが主であったが動物由来のものも知ら
れるに至り疾患との関連も注目されるようになってきた
。
生体内に侵入した病原性微生物をはじめとする種々な異
物（レクチン類と総称する）は、生体内の標的組織に直
行して定着するものではなく、それらのレクチン類と親
和性を示す物質がその生体の体液内に存在する時は、そ
の体液物質と相互作用をおこない、標的組織との親和性
が阻害され、生体は防御される。すなわち、病態によっ
て体液内のレクチン親和性物質の量的、質的変化が認め
られる。
物（レクチン類と総称する）は、生体内の標的組織に直
行して定着するものではなく、それらのレクチン類と親
和性を示す物質がその生体の体液内に存在する時は、そ
の体液物質と相互作用をおこない、標的組織との親和性
が阻害され、生体は防御される。すなわち、病態によっ
て体液内のレクチン親和性物質の量的、質的変化が認め
られる。
本発明は、上記の知見に基づき９体液内にあるレクチン
と親和性を示す物質を検出することにより種々の疾患の
有無、病態の把握をすることが可能である。
と親和性を示す物質を検出することにより種々の疾患の
有無、病態の把握をすることが可能である。
種々の疾患のうち、具体例の一つを述べれば喘息に代表
される気道閉塞性障害をあげることができる。この場合
、ミヤコグサ凝集素（Ｌｏｔｕｓ Ａ）やハリエニシダ
凝集ｉ （ＵＥＡ−１，）などの缶ミＬ−フコースに反
応特異性を示すレクチンに親和性をもつ物質が体液中に
存在するか否かにより、気道閉塞性障害の有無、その病
態の把握、予後の診断などをすることが可能となる。上
記のメカニズムは必ずしも明らかではないが２体液中に
、Ｌ−フコースあるいは、Ｌ−フコースを作用族とする
多糖体が体液中にどの程度存在するかによって気道閉塞
性障害の有無、その病態の把握、予後の診断などが可能
となるものと考えられる。
される気道閉塞性障害をあげることができる。この場合
、ミヤコグサ凝集素（Ｌｏｔｕｓ Ａ）やハリエニシダ
凝集ｉ （ＵＥＡ−１，）などの缶ミＬ−フコースに反
応特異性を示すレクチンに親和性をもつ物質が体液中に
存在するか否かにより、気道閉塞性障害の有無、その病
態の把握、予後の診断などをすることが可能となる。上
記のメカニズムは必ずしも明らかではないが２体液中に
、Ｌ−フコースあるいは、Ｌ−フコースを作用族とする
多糖体が体液中にどの程度存在するかによって気道閉塞
性障害の有無、その病態の把握、予後の診断などが可能
となるものと考えられる。
本発明において、検出試薬とはレクチンを担体粒子に結
合させたものである。
合させたものである。
本発明において使用される担体粒子としては。
例えば、ひつじ赤血球、ヒトＯ型赤血球などの動物の赤
血球、またはポリスチレンラテックス粒子があげられる
。使用する際は赤血球は、ホルムアルデヒドのようなア
ルデヒド水溶液で処理し、保存性を向」−させる。次に
血球をよく洗い、アルデヒドを除去してから、一般によ
（知られている如くタンニン酸水溶液で処理して、再び
血球をよく洗いタンニン酸を除去する。このように処理
した赤血球にレクチン水溶液を加え、レクチンを血球に
結合さぜる。またポリスチレンラテックスの場合は２例
えばｐＨ７，５〜９．０の緩衝液にポリスチレン粒子を
懸濁さぜ、適当量のレクチンを加えよく混和させ数時間
反応させるとレクチンはポリスチレン粒子と結合する。
血球、またはポリスチレンラテックス粒子があげられる
。使用する際は赤血球は、ホルムアルデヒドのようなア
ルデヒド水溶液で処理し、保存性を向」−させる。次に
血球をよく洗い、アルデヒドを除去してから、一般によ
（知られている如くタンニン酸水溶液で処理して、再び
血球をよく洗いタンニン酸を除去する。このように処理
した赤血球にレクチン水溶液を加え、レクチンを血球に
結合さぜる。またポリスチレンラテックスの場合は２例
えばｐＨ７，５〜９．０の緩衝液にポリスチレン粒子を
懸濁さぜ、適当量のレクチンを加えよく混和させ数時間
反応させるとレクチンはポリスチレン粒子と結合する。
本発明においてレクチンの代表的な例を掲げると、小麦
胚芽凝集素（ＷＧＡ）、ハリエニシダ凝集素（ＵＥＡ−
１）、タチナタ豆凝集素（ＣｏｎＡ）、 およびミヤ
コグサ凝集素（Ｌｏｔｕｓ Ａ）などをあげることがで
きる。
胚芽凝集素（ＷＧＡ）、ハリエニシダ凝集素（ＵＥＡ−
１）、タチナタ豆凝集素（ＣｏｎＡ）、 およびミヤ
コグサ凝集素（Ｌｏｔｕｓ Ａ）などをあげることがで
きる。
本発明を実際に実施する際は、上記のレクチンを担体粒
子に結合させたものの懸濁液に、ヒトの血清などの体液
を混合せしめ、凝集反応をおこすか否かで疾患の有無、
病態の程度を把握することが可能となる。
子に結合させたものの懸濁液に、ヒトの血清などの体液
を混合せしめ、凝集反応をおこすか否かで疾患の有無、
病態の程度を把握することが可能となる。
すなわち９体液中にレクチン親和性物質があれば担体粒
子と結合したレクチンと反応して担体粒子を凝集させる
。
子と結合したレクチンと反応して担体粒子を凝集させる
。
以下に本発明を更に詳しく説明するために実施例を掲げ
るが９本発明がそれらのみに限定されることがないこと
はいうまでもない。
るが９本発明がそれらのみに限定されることがないこと
はいうまでもない。
実施例１
０８５％食塩水で洗浄したヒトＯ型赤血球を、０８５％
食塩水で１０％赤血球）び濁液とする。その１容に対し
てｐＨ７，５〜８．５に調製した３９６ホルマリン食塩
水１容を加え、ときどき撹拌しながら、３７℃で１８〜
２４時間反応させる。反応後赤血球を水洗した後。
食塩水で１０％赤血球）び濁液とする。その１容に対し
てｐＨ７，５〜８．５に調製した３９６ホルマリン食塩
水１容を加え、ときどき撹拌しながら、３７℃で１８〜
２４時間反応させる。反応後赤血球を水洗した後。
０．８５％食塩水で１０％赤血球懸濁液に調製し９等容
量の５０１／１７ｈａＬタンニン酸食塩水を加え、３７
℃で１２０分間反応させる。その後赤血球を食塩水で数
回洗い、 ｐＨ７，６リン酸緩衝食塩水で１０％赤血球
懸濁液に調製する。それに等容量の２Ｎ／ｍｌ小麦胚芽
呵集素（ＷＧＡ） ＋７ン酸緩衝食塩水を加え、３７℃
で５０分間反応させる。反応後赤血球をリン酸ＰＷｉ食
塩水で洗い、レクチン結合赤血球すなわちＷＧＡ感作赤
而球面調製する。
量の５０１／１７ｈａＬタンニン酸食塩水を加え、３７
℃で１２０分間反応させる。その後赤血球を食塩水で数
回洗い、 ｐＨ７，６リン酸緩衝食塩水で１０％赤血球
懸濁液に調製する。それに等容量の２Ｎ／ｍｌ小麦胚芽
呵集素（ＷＧＡ） ＋７ン酸緩衝食塩水を加え、３７℃
で５０分間反応させる。反応後赤血球をリン酸ＰＷｉ食
塩水で洗い、レクチン結合赤血球すなわちＷＧＡ感作赤
而球面調製する。
実施例２
ひつじ赤血球を実施例１と同様にタンニン酸処理までお
こない、１０％赤血球リン酸緩衝食塩水懸澗とする。こ
れに５μｇ／ｍｌハリエニシダ’Ｊ＋４０ ”？−（Ｕ
ＥＡ−１，） ！ｊン酸緩衝食塩水を等容量混和し、３
７℃で３０分間反応させる。反応後、リン酸緩衝食塩水
で赤血球を洗い、 ＵＥＡ−１感作赤血球を調製する。
こない、１０％赤血球リン酸緩衝食塩水懸澗とする。こ
れに５μｇ／ｍｌハリエニシダ’Ｊ＋４０ ”？−（Ｕ
ＥＡ−１，） ！ｊン酸緩衝食塩水を等容量混和し、３
７℃で３０分間反応させる。反応後、リン酸緩衝食塩水
で赤血球を洗い、 ＵＥＡ−１感作赤血球を調製する。
実施例３
ボリスチＬ／７ラテツクス（Ｂａｃｔｏ−１ａｔｅｘ
Ｑ、８］Ｄｉｆｃｏ社製・米国〕を蒸留水で５倍に稀
釈する。
Ｑ、８］Ｄｉｆｃｏ社製・米国〕を蒸留水で５倍に稀
釈する。
これを２容にｐＨ８，２硼酸緩衝液１０容と２００ｕ、
ｇ／ｍｌタチナタ豆凝集素（ＣｏｎＡ） １容を加え、
室温で２０時間反応させ、 ＣｏｎＡ結合ラテックスを
調製する。
ｇ／ｍｌタチナタ豆凝集素（ＣｏｎＡ） １容を加え、
室温で２０時間反応させ、 ＣｏｎＡ結合ラテックスを
調製する。
次に病態の検査のために体液中のレクチン反応性物質の
検出試験法を以下の実験例にて示す。
検出試験法を以下の実験例にて示す。
実施例
反応に使用する稀釈液はｐＨ７，５リン酸緩衝食塩水に
１％の割合で健常家兎血清を加えたものである。レクチ
ン感作赤血球は稀釈液で０．５％赤血球懸濁液に調製す
る。一方患者血清である検査用検体は稀釈液で１０倍に
稀釈する。マイクロプレートに稀釈液２５μＬずつ加え
ておき、１０倍稀釈検査用検体の倍々稀釈系列を作る。
１％の割合で健常家兎血清を加えたものである。レクチ
ン感作赤血球は稀釈液で０．５％赤血球懸濁液に調製す
る。一方患者血清である検査用検体は稀釈液で１０倍に
稀釈する。マイクロプレートに稀釈液２５μＬずつ加え
ておき、１０倍稀釈検査用検体の倍々稀釈系列を作る。
それにレクチン感作赤血球０．５９６懸濁液２５μｌを
加え、混和させて２０時間静置してから凝集の有無を判
定する。反覆性閉塞性気管支炎などでの症例を表１に示
す。表１の数値は最大稀釈倍数である。
加え、混和させて２０時間静置してから凝集の有無を判
定する。反覆性閉塞性気管支炎などでの症例を表１に示
す。表１の数値は最大稀釈倍数である。
表１゜
実施例
ｐＨ８，２’ ｆｉｌｌ酸Ｅ、Ｑ ？Ｉ！ｊ液を反応用
稀釈液として用いた。
稀釈液として用いた。
反応用稀釈液を０−５ｍ１．ずつ各試験管に分注し、１
：１０に稀釈した検査検体を０．５ｍｌ加え倍々稀釈系
列をつくる。それらにレクチン結合ラテックス液０．１
５ｍ１ずつ加え、５６°Ｃで３０分加温した後、 ２０
時間室温にて放置する。次いで２ ＋５０Ｏｒｐｍ ５
分遠心後凝集の有蓋を判定する。反覆性閉塞性気管支炎
の１９症例についての成績を表２に示す。
：１０に稀釈した検査検体を０．５ｍｌ加え倍々稀釈系
列をつくる。それらにレクチン結合ラテックス液０．１
５ｍ１ずつ加え、５６°Ｃで３０分加温した後、 ２０
時間室温にて放置する。次いで２ ＋５０Ｏｒｐｍ ５
分遠心後凝集の有蓋を判定する。反覆性閉塞性気管支炎
の１９症例についての成績を表２に示す。
表２゜
上記の実験例により明らかな如く１本発明による試薬を
用いることにより、病態の把握、予後の診断などが可能
であり、したがって本発明の価値は極めて高いものであ
る。
用いることにより、病態の把握、予後の診断などが可能
であり、したがって本発明の価値は極めて高いものであ
る。
特許出願人
工一ザイオ取式会才土
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 け） レクチンを担体粒子に結合させた体液中にあるレ
クチン親和性物質検出用試薬。 （２）担体粒子が、ヒトを含む動物の赤血球またはポリ
スチレンラテックス粒子である特許請求の範囲第１項記
載の体液中にあるレクチン親和性物質検出用試薬。 （３） レクチンを担体粒子に結合させたものに。 体液を混和せしめることを特徴とする体液中のレクチン
と親和性のある物質の検出方法。 （４）担体粒子が、ヒトを含む動物の赤血球またはポリ
スチレンラテックス粒子である特許請求の範囲第１項記
載の体液中にあるレクチン親和性物質の検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8906883A JPS59214766A (ja) | 1983-05-23 | 1983-05-23 | 体液中にあるレクチン親和性物質検出用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8906883A JPS59214766A (ja) | 1983-05-23 | 1983-05-23 | 体液中にあるレクチン親和性物質検出用試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59214766A true JPS59214766A (ja) | 1984-12-04 |
Family
ID=13960533
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8906883A Pending JPS59214766A (ja) | 1983-05-23 | 1983-05-23 | 体液中にあるレクチン親和性物質検出用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59214766A (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5386016A (en) * | 1976-10-08 | 1978-07-29 | Reid Robert Harry | Identification * diagnostic and immunological method for surface protein of cancer cell |
| US4298689A (en) * | 1978-09-25 | 1981-11-03 | Research Corporation | Gonorrhea diagnostic test |
| JPS5862563A (ja) * | 1981-09-16 | 1983-04-14 | テバ・フア−マシユ−テイカル・インダストリ−ズ・リミテツド | 妊娠検出用試薬 |
-
1983
- 1983-05-23 JP JP8906883A patent/JPS59214766A/ja active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5386016A (en) * | 1976-10-08 | 1978-07-29 | Reid Robert Harry | Identification * diagnostic and immunological method for surface protein of cancer cell |
| US4298689A (en) * | 1978-09-25 | 1981-11-03 | Research Corporation | Gonorrhea diagnostic test |
| JPS5862563A (ja) * | 1981-09-16 | 1983-04-14 | テバ・フア−マシユ−テイカル・インダストリ−ズ・リミテツド | 妊娠検出用試薬 |
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