JPS59198975A - セルラ−ゼの製造方法 - Google Patents
セルラ−ゼの製造方法Info
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- JPS59198975A JPS59198975A JP7211783A JP7211783A JPS59198975A JP S59198975 A JPS59198975 A JP S59198975A JP 7211783 A JP7211783 A JP 7211783A JP 7211783 A JP7211783 A JP 7211783A JP S59198975 A JPS59198975 A JP S59198975A
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- JP
- Japan
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- cellulase
- glucose
- deoxy
- fluoro
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
方法に関するものである。
近年、セルロースを分解して飼料、発酵原料などに活用
する方法が注目され、このセルロースの分解手段として
セルラーゼを用いる方法が盛んに研究されている。この
方法の死命を制するものは安価なセルラーゼの供給であ
り、そのために、セルラーゼ産生能の高い微生物を取得
してセルラーゼを効率よく製造することが必要である。
する方法が注目され、このセルロースの分解手段として
セルラーゼを用いる方法が盛んに研究されている。この
方法の死命を制するものは安価なセルラーゼの供給であ
り、そのために、セルラーゼ産生能の高い微生物を取得
してセルラーゼを効率よく製造することが必要である。
セルラーゼは糸状菌、担子菌、放線菌、細菌など多種多
様の微生物によって産生されることが知られているが、
主にトリコデルマ属、アスペルギルス属、スポロトリク
ム属々どの糸状菌がセルラーゼの生産に利用されている
。
様の微生物によって産生されることが知られているが、
主にトリコデルマ属、アスペルギルス属、スポロトリク
ム属々どの糸状菌がセルラーゼの生産に利用されている
。
本発明者らはセルラーゼ産生能の高い微生物を取得する
べく種々研究の結果、デオキシフロロ−ローグルコース
耐性を有する変異株を誘導することによってセルラーゼ
産生能の高い糸状菌を取得しうろことを見出して本発明
を完成した。
べく種々研究の結果、デオキシフロロ−ローグルコース
耐性を有する変異株を誘導することによってセルラーゼ
産生能の高い糸状菌を取得しうろことを見出して本発明
を完成した。
グルコーヌアナログ耐性については、２−デオキシグル
コーヌ耐性あるいは３−０−メチルグルコース耐性を付
与すればセルラーゼ産生能が増すことは知られているが
（特願昭５６−４６３９６号）、フッ素を含有するグル
コース化合物については知られていない。
コーヌ耐性あるいは３−０−メチルグルコース耐性を付
与すればセルラーゼ産生能が増すことは知られているが
（特願昭５６−４６３９６号）、フッ素を含有するグル
コース化合物については知られていない。
すなわち本発明は、デオキシフロ日一Ｄーグルコース耐
性を有しセルラーゼを産生しうる糸状菌をセルロースを
含有する栄養培地に培養し、培養物からセルラーゼを採
取することを特徴とするセルラーゼの製造方法に関する
ものである。
性を有しセルラーゼを産生しうる糸状菌をセルロースを
含有する栄養培地に培養し、培養物からセルラーゼを採
取することを特徴とするセルラーゼの製造方法に関する
ものである。
デオキシフロロ−Ｄ−グルコースはデオキシ位置及びフ
ッ素の結合位置に２．３．４の３つの位置がありうるが
そのいずれであってもよい。例えば、２−デオキシ−２
−フロロ−Ｄ−グルコース、３−デオキシ−３−フロロ
−Ｄ−グルコース、４″デオキシ−４−フロロ−Ｄ−グ
ルコースなどを用いることができる。
ッ素の結合位置に２．３．４の３つの位置がありうるが
そのいずれであってもよい。例えば、２−デオキシ−２
−フロロ−Ｄ−グルコース、３−デオキシ−３−フロロ
−Ｄ−グルコース、４″デオキシ−４−フロロ−Ｄ−グ
ルコースなどを用いることができる。
本発明に用いる糸状菌はセルラーゼ産生能を有するもの
から誘導する。このセルラーゼ産生能を有する糸状菌は
種々のものが知られているが、例エバ、スポロトリクム
・セルロフィルムＡＴＣＣ２０４９３（ＡＪ６９８７）
、トリコデルマ・ リーセイＡＴＣＣ２６９２１（ＱＭ
９４１４）、アスペルデルヌ・アクレアータヌＡＪＩ
１７０７３ などがある。
から誘導する。このセルラーゼ産生能を有する糸状菌は
種々のものが知られているが、例エバ、スポロトリクム
・セルロフィルムＡＴＣＣ２０４９３（ＡＪ６９８７）
、トリコデルマ・ リーセイＡＴＣＣ２６９２１（ＱＭ
９４１４）、アスペルデルヌ・アクレアータヌＡＪＩ
１７０７３ などがある。
これらからデオキシフロロ−Ｄ−グルコース耐性を有し
セルラーゼを産生しうる糸状菌の取得方法は、通常の微
生物の変異方法に従って変異操作を行ない、耐性株の選
別方法に従って選別操作を行なえばよい。変異方法の例
としては、ＮＧ（Ｎ−メチル−ＩＮ−二トローＮ−ニト
ロ）ｆｌニジンフ、亜硝酸などの薬剤による処理、Ｘ線
、紫外線などの照射処理外どかある。
セルラーゼを産生しうる糸状菌の取得方法は、通常の微
生物の変異方法に従って変異操作を行ない、耐性株の選
別方法に従って選別操作を行なえばよい。変異方法の例
としては、ＮＧ（Ｎ−メチル−ＩＮ−二トローＮ−ニト
ロ）ｆｌニジンフ、亜硝酸などの薬剤による処理、Ｘ線
、紫外線などの照射処理外どかある。
このよう々糸状菌の取得例を次に示す。
取得例１
ｉ、 株トして、ス？ロトリクム・セルロフィルムＡＴ
ＣＣ２０４９３をポテトデキストロース寒天培地培地で
４５℃５日間培養し、胞子を充分形成せしめた。形成し
た胞子をｐＨ７，０の１／２０ Ｍリン酸緩衝液Ｋ １
０’ 〜ＩＱ９イ睨ΔａＫ ｕ濁り、、ＮＧ １ ｏｏ
ｐｙＡｎｌ （７） 存在下で４５℃６０分間処理した
。このＮＧ処理した胞子懸濁液を遠心して胞子を集め、
前記のリン酸緩衝液を用いて充分に洗浄した。この胞子
の適当数を０．２ｑ６の２−デオキシ−２−フロロ−Ｄ
−グルコースを含有するポテトデキストロース寒天培地
（ｐ）１６．５）に塗布し、４５℃で５日間培養した。
ＣＣ２０４９３をポテトデキストロース寒天培地培地で
４５℃５日間培養し、胞子を充分形成せしめた。形成し
た胞子をｐＨ７，０の１／２０ Ｍリン酸緩衝液Ｋ １
０’ 〜ＩＱ９イ睨ΔａＫ ｕ濁り、、ＮＧ １ ｏｏ
ｐｙＡｎｌ （７） 存在下で４５℃６０分間処理した
。このＮＧ処理した胞子懸濁液を遠心して胞子を集め、
前記のリン酸緩衝液を用いて充分に洗浄した。この胞子
の適当数を０．２ｑ６の２−デオキシ−２−フロロ−Ｄ
−グルコースを含有するポテトデキストロース寒天培地
（ｐ）１６．５）に塗布し、４５℃で５日間培養した。
良好に生育して来たコロニー１００株を釣菌し、３０ｍ
１容の試験管に入れて予め１１０℃で１０分加熱殺菌し
た５ ｍｌの下記組成の液体培地に接種して４５℃で４
日間振盪培養した。
１容の試験管に入れて予め１１０℃で１０分加熱殺菌し
た５ ｍｌの下記組成の液体培地に接種して４５℃で４
日間振盪培養した。
セルロースパウダー ４．０ ９７ＵＫＨ
２ＰＯ４０，２１ （ＮＨ４）２Ｓｏ４０．３ １ ペプトン １．０Ｉ ＭｇＳ０４・７Ｈ２００，０９１ ＣａＣノ２−２Ｈ２００，０３１ 尿 素 ０．０３ １Ｔ
ｗｅｅｎ−８００，２＃ 微量要素液” ０．１ ｍＶｄＶｄ
ノル６．０ ” ＺｎＳＯ４ｅ ７Ｈ２０１，５ｙ ＦａＳＯ４−７Ｈ２００，５Ｆ ＣｏＣノ２ＩＩ６Ｈ２０２０ノ■ ＭｎＳＯ４−４Ｈ２０１０７Ｖ を水１００ｍＩ！に溶解 このようにして試験管培養した２−デオキシ−２−フロ
ロ−Ｄ−グルコース耐性株の中で生育が親株と同程度以
上に良好なもの２０株について培養液のセルラーゼ活性
を測定したところ、いずれの耐性株の培養液も親株の１
．５〜３倍のセルラーゼ活性を示した。この耐性株のう
ち培養液のセルラーゼ活性の最も高い変異株スポロトリ
クム・セ（５） ル０７４ ルムＡＪ１１７１１６（ＦＥＲＭ−Ｐ４Ｏ１
０）を得た。
２ＰＯ４０，２１ （ＮＨ４）２Ｓｏ４０．３ １ ペプトン １．０Ｉ ＭｇＳ０４・７Ｈ２００，０９１ ＣａＣノ２−２Ｈ２００，０３１ 尿 素 ０．０３ １Ｔ
ｗｅｅｎ−８００，２＃ 微量要素液” ０．１ ｍＶｄＶｄ
ノル６．０ ” ＺｎＳＯ４ｅ ７Ｈ２０１，５ｙ ＦａＳＯ４−７Ｈ２００，５Ｆ ＣｏＣノ２ＩＩ６Ｈ２０２０ノ■ ＭｎＳＯ４−４Ｈ２０１０７Ｖ を水１００ｍＩ！に溶解 このようにして試験管培養した２−デオキシ−２−フロ
ロ−Ｄ−グルコース耐性株の中で生育が親株と同程度以
上に良好なもの２０株について培養液のセルラーゼ活性
を測定したところ、いずれの耐性株の培養液も親株の１
．５〜３倍のセルラーゼ活性を示した。この耐性株のう
ち培養液のセルラーゼ活性の最も高い変異株スポロトリ
クム・セ（５） ル０７４ ルムＡＪ１１７１１６（ＦＥＲＭ−Ｐ４Ｏ１
０）を得た。
取得例２
親株としてトリコデルマ・リーセイＡＴＣＣ２６９２１
を用い、取得例１と同様の方法によって２−デオキシ−
２−フロロ−Ｄ−グルコース耐性株１５０株を得た。こ
の各耐性株を前記の組成の液体培地に３０℃で１０日間
振染培養し、良好に生育した１５株について培養液のセ
ルラーゼ活性を測定したところ、いずれの耐性株の培養
液も親株の１，３〜２．５倍のセルラーゼ活性を示した
。この耐性株のうち培養液のセルラーゼ活性の最も高い
変異株トリコデルマ・リーセイＡＪ １１７１１７ （
ＦＥＲＭ−Ｐ４Ｏ１０）を得た。
を用い、取得例１と同様の方法によって２−デオキシ−
２−フロロ−Ｄ−グルコース耐性株１５０株を得た。こ
の各耐性株を前記の組成の液体培地に３０℃で１０日間
振染培養し、良好に生育した１５株について培養液のセ
ルラーゼ活性を測定したところ、いずれの耐性株の培養
液も親株の１，３〜２．５倍のセルラーゼ活性を示した
。この耐性株のうち培養液のセルラーゼ活性の最も高い
変異株トリコデルマ・リーセイＡＪ １１７１１７ （
ＦＥＲＭ−Ｐ４Ｏ１０）を得た。
本発明で実施される変異株の培養法は親株の場合と同様
の方法により実施され、固体培養法、液体培養法のいず
れでも生産される。培養はｐ）１４〜９．０、温度３０
〜５０℃で２〜１４日間行なう。
の方法により実施され、固体培養法、液体培養法のいず
れでも生産される。培養はｐ）１４〜９．０、温度３０
〜５０℃で２〜１４日間行なう。
この場合セルラーゼ生産に用いられる培地の炭素源とし
ては、親株の場合と同様に、濾紙、−紋紙類、オガクノ
、大豆粕、コーヒー粕等の植物繊維（６） 質およびその・含有物が用いられる。窒素源としては、
硫安等の無機アンモニー−ム塩、尿素、アミノ酸、肉エ
キス、ペプトン、下自分解物等の有機Ｑ素源が使用され
る。その他、ＫＨ２Ｐｏ４２ＭｇＳＯ４゜ＣａＣノ２
ＨＣｏＣノ２ ＋ Ｆ ｅ Ｓ Ｏ４＋ ＭｎＳＯ４＋
ＺｎＳＯ４等の無機塩類さらに必要に応じて有機微量
栄養源を含有する栄養培地が使用される。
ては、親株の場合と同様に、濾紙、−紋紙類、オガクノ
、大豆粕、コーヒー粕等の植物繊維（６） 質およびその・含有物が用いられる。窒素源としては、
硫安等の無機アンモニー−ム塩、尿素、アミノ酸、肉エ
キス、ペプトン、下自分解物等の有機Ｑ素源が使用され
る。その他、ＫＨ２Ｐｏ４２ＭｇＳＯ４゜ＣａＣノ２
ＨＣｏＣノ２ ＋ Ｆ ｅ Ｓ Ｏ４＋ ＭｎＳＯ４＋
ＺｎＳＯ４等の無機塩類さらに必要に応じて有機微量
栄養源を含有する栄養培地が使用される。
このよう々方法で培養して得られた培養液はそのまま酵
素源として使用できるが、得られた培養液から分離した
菌体および培養ｎ・υ液はいずれも粗酵素として使用す
ることもできる。また菌体を除去した培養液から、塩析
法、有機溶剤による沈澱法等公知の方法を用いることに
より、強力な活性を有する粗酵素剤を得ることが出来る
。
素源として使用できるが、得られた培養液から分離した
菌体および培養ｎ・υ液はいずれも粗酵素として使用す
ることもできる。また菌体を除去した培養液から、塩析
法、有機溶剤による沈澱法等公知の方法を用いることに
より、強力な活性を有する粗酵素剤を得ることが出来る
。
本明細書におけるセルラーゼ活性は以下の方法で測定し
た。すなわち、濾紙（ワットマンＡＩ）５０■を基質と
し、これに酵素源ｏ、 ｓ ｍｌと酢酸酸緩衝液（ｐＨ
４，９，０，０５Ｍ ） １．０ｍｌを加え、６０℃で
１．０時間酵素反応を行った後、１００℃で５．０分間
加熱し酵素反応を停止させ、これにジニトロサルチル酸
試薬３．０ ｍ／を加え、１００℃で５．０分間加熱し
発色させる。これに水１６ｒｎｌを加え５５０ｎｍの波
長で比色定量し、生成した遣元糖量を求めてフィルター
波−パー活性（ＦＰＡ）で表示した。なお、トリコデル
マ・リーセイ変異株のセルラーゼ活性の場合には５０℃
で反応を行なった。
た。すなわち、濾紙（ワットマンＡＩ）５０■を基質と
し、これに酵素源ｏ、 ｓ ｍｌと酢酸酸緩衝液（ｐＨ
４，９，０，０５Ｍ ） １．０ｍｌを加え、６０℃で
１．０時間酵素反応を行った後、１００℃で５．０分間
加熱し酵素反応を停止させ、これにジニトロサルチル酸
試薬３．０ ｍ／を加え、１００℃で５．０分間加熱し
発色させる。これに水１６ｒｎｌを加え５５０ｎｍの波
長で比色定量し、生成した遣元糖量を求めてフィルター
波−パー活性（ＦＰＡ）で表示した。なお、トリコデル
マ・リーセイ変異株のセルラーゼ活性の場合には５０℃
で反応を行なった。
以下、実施例を示す。
実施例１
スポロトリクム・セルロフィルムＡＴＣＣ２０４９３及
びその２−デオキシ−２−フロロ−Ｄ−グルコース耐性
株ＡＪ１１７１１６（ＦＥＲＭ−Ｐ４Ｏ１０）をポテト
デキストローヌ寒天培地−１６，０のスラントを用いて
４５℃で５日間培養した。
びその２−デオキシ−２−フロロ−Ｄ−グルコース耐性
株ＡＪ１１７１１６（ＦＥＲＭ−Ｐ４Ｏ１０）をポテト
デキストローヌ寒天培地−１６，０のスラントを用いて
４５℃で５日間培養した。
スラント上に生育した菌体な５００ｄ容のフラスコに入
れた前記取得例１と同じ組成の培地５（ｍ／に接種し、
４８℃で３日間振禰培養（振幅７．０ ｃｍ 。
れた前記取得例１と同じ組成の培地５（ｍ／に接種し、
４８℃で３日間振禰培養（振幅７．０ ｃｍ 。
１２０ ［Ｖ分）した。
培養終了後、培養液を３０００回転／分にて遠心して培
養ｐ液を分離し、この培養Ｐ液のセルラーゼ活性を測定
したところ下表に示すような結果が得られた。
養ｐ液を分離し、この培養Ｐ液のセルラーゼ活性を測定
したところ下表に示すような結果が得られた。
親 株（ＡＴＣＣ２０４９３） ３．５耐性株
（ＦＥＴ’（Ｍ−Ｐ４Ｏ１０） ６．８実施
例２ トリコデルマ・リーセイＡＴＣＣ２６９２１及びその２
−デオキシ−２−フロロ−Ｄ−グルコース耐性株ＡＪ
１１７１１７ （ＦＥＲＭ−Ｐ ７０３８）をポテトデ
キストローヌ寒天培地ｐｔ（６，０のスラントを用いて
３０℃で１５日間培養した。
（ＦＥＴ’（Ｍ−Ｐ４Ｏ１０） ６．８実施
例２ トリコデルマ・リーセイＡＴＣＣ２６９２１及びその２
−デオキシ−２−フロロ−Ｄ−グルコース耐性株ＡＪ
１１７１１７ （ＦＥＲＭ−Ｐ ７０３８）をポテトデ
キストローヌ寒天培地ｐｔ（６，０のスラントを用いて
３０℃で１５日間培養した。
スラント上に生育した菌体を５００ｍＡ！容のフラスコ
に入れた前記取得例１と同じ組成の培地５０ｍ１に接種
し、３０℃で１０日間振盪培養（振幅７．０ｃｍ。
に入れた前記取得例１と同じ組成の培地５０ｍ１に接種
し、３０℃で１０日間振盪培養（振幅７．０ｃｍ。
１２０回／分） した。
培養終了後、培養液のセルラーゼ活性を測定したところ
下表に示すような結果が得られた。
下表に示すような結果が得られた。
菌 株 セルラーゼ活性（ＦＰＡ）親
株（ＡＴＣＣ２６９２１） ３．８耐性株（Ｆ
ＥＲＭ−Ｐ ７０３８） ５．８（９）
株（ＡＴＣＣ２６９２１） ３．８耐性株（Ｆ
ＥＲＭ−Ｐ ７０３８） ５．８（９）
Claims (1)
- デオキシフロロ−Ｄ−グルコース耐性を有しセルラーゼ
を産生しうる糸状菌を、セルロースを含有する栄養培地
に培養し、培養物からセルラーゼを採取することを特徴
とするセルラーゼの製造方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7211783A JPS59198975A (ja) | 1983-04-26 | 1983-04-26 | セルラ−ゼの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7211783A JPS59198975A (ja) | 1983-04-26 | 1983-04-26 | セルラ−ゼの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59198975A true JPS59198975A (ja) | 1984-11-10 |
Family
ID=13480088
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7211783A Pending JPS59198975A (ja) | 1983-04-26 | 1983-04-26 | セルラ−ゼの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59198975A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63109770A (ja) * | 1986-10-29 | 1988-05-14 | Kao Corp | アルカリセルラーゼ生産培地 |
| US8845999B2 (en) * | 2005-05-23 | 2014-09-30 | The Regents Of The University Of California | Tracers for monitoring the activity of sodium/glucose cotransporters in health and disease |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52134090A (en) * | 1976-04-30 | 1977-11-09 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of cellulase |
| JPS57146578A (en) * | 1981-03-09 | 1982-09-10 | Agency Of Ind Science & Technol | Preparation of cellulase |
-
1983
- 1983-04-26 JP JP7211783A patent/JPS59198975A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52134090A (en) * | 1976-04-30 | 1977-11-09 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of cellulase |
| JPS57146578A (en) * | 1981-03-09 | 1982-09-10 | Agency Of Ind Science & Technol | Preparation of cellulase |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63109770A (ja) * | 1986-10-29 | 1988-05-14 | Kao Corp | アルカリセルラーゼ生産培地 |
| US8845999B2 (en) * | 2005-05-23 | 2014-09-30 | The Regents Of The University Of California | Tracers for monitoring the activity of sodium/glucose cotransporters in health and disease |
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