JPS59196899A - インタ−フエロンの安定化方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、インターフェロンの安定化方法および安定な
インターフェロン含有組成物に関する。

インターフェロンは、抗ウィルス、抗ガン等の生物学的
活性のゆえに、医薬としての用途が期待されている生理
活性物質であｐ１生理学丙を理化学的性質ならびに起源
によシα型、β型。

γ型などの分類がなされている。従来、インターフェロ
ンは動物、とくにヒトの細胞を培養することによって製
造されてきたが、供給量に限シがあるため、組換えＤＮ
Ａ技術によシ、インターフェロン遺伝子をクローン化し
、微生物、たとえば大腸菌に導入して、その微生物を培
養することによシインターフェロンを生産する方法が開
発された。

インター７エロ／は、蛋白質または糖蛋白質であるが、
不安定であシ、使用中に生物学的活性が低下する。安定
化のために、ｐＨ調節、血清アルブミンの添加、可溶性
ランタニド添加Ｃ特開昭５６−６５８２２）、ポリエチ
レン系非イオン界面活性剤、抗生物質、キレート剤、ア
ミノ酸などの添加（特開昭５５−１０２５１９）などが
知られている。まだ満足すべき安定化法は見出されてお
らず、優れた安定化方法が望まれている。

本発明者らは、塩化ナトリウム、塩化カリウムなどの無
機塩類を単独に、あるいは血清アルブミンなどと併用す
ることによシ、インターフェロンの安定性が著しく増大
することを見出し本発明を完成した。これらの無機塩類
は、生体に無害な物質であシ、インターフェロン製剤に
もそのま＼利用できるので非常に有利である。

以下本発明の詳細な説明する。

本発明は、インターフェロンを無機塩類を用いて安定化
する方法を提供する。

インターフェロンとしては、天然のインターフェロン、
動物細胞の培養によって製造されるインターフェロン、
組換えＤＮＡ技術によって得られる微生物の培養によっ
て製造されるインターフェロンなどが含まれる。まだα
、β、γのいずれの型のインターフェロンも含まれる。

本発明ではとくに、組換えＤＮＡ技術によって得られる
インターフェロン−β（以下”（）−β−ＩＦＮ”と略
記する）において優れた効果が得られる。

無機塩類としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩
化カルシウムを塩化マグネシウムなどが用いられるが、
とくに塩化ナトリウムを塩化カリウムは安定化効果が著
しい。

インターフェロンを安定化するためには、インターフェ
ロン１単位（国際単位：最新インターフェロン、岸田綱
太部編著、朝日サイエンス１９８１）当り、１×１０〜
１０−Ｘ　１０−”モルの割で添加すればよいが、好ま
しくは３×ｓ　ｏ−Ｉｆ〜　５　Ｘ　１０−１１モルで
効果が著しい。

無機塩類は単独でも安定化に著しい効果を示すが、さら
に他の安定化剤、たとえば血清アルブミン、界面活性剤
、抗生物質、キレート剤。

アミノ酸などと併用することにより、さらに効果を増大
することができる。

従来の血清アルブミンを安定化剤として用いｆｃ（）−
β−ＩＦＮ凍結乾録製剤では、７０℃。

７日間または１４日間で水に対して不溶化し、その生物
活性は、５０％〜数％まで消失するが、血清アルブミン
と塩化ナトリウムを加えた（）−β−ＩＰ’Ｎ凍結乾燥
製剤は、同様な期間経過後も、速やかに水に溶解し、生
物活性も９０％程度残存している。

と塩化ナトリウムを用いた場合、Ｇ−β−ＩＦＮ活性は
６時間で４０％残存している。

本発明は、また安定化剤として無機塩類を含むインター
フェロン含有組成物を提供する。

組成物中のインター７　ｘ　Ｈンおよび無機塩類、なら
びに無機塩類の添加量などについては上記安定化方法の
場合と同様である。該組成物中には医薬品として許容さ
れる、一般的保存剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤
、湿潤剤、滑沢チック界面活性剤などを含ませることが
できる。

以下本発明の実施例を示す。

実施例１ （１）Ｇ−β−Ｉ　Ｆ　Ｎの調製： 特開昭５７−７７６５４に記載の方法でＧ−β−ＩＦＮ
を製造し、Ｇ−β−ＩＦＮ約５μ２に血清アルブミン（
ＨＳ　Ａ　：　ＣＲＹＯ８Ａ社製、ＢＡＡ：生化学工業
社製）約２００μ２を加え、これをＧ−β−Ｉ　Ｆ　Ｎ
とする。

（２）試料の調Ｍ： 上記Ｇ−β−ＩＦＮに血清アルブミンおよび、塩化す）
　ＩＪウムなどの無機塩類を安定化剤として加え、凍結
乾燥した。Ｇ−β−ＩＦＮ３　Ｘ　１０６単位に対し、
血清アルブミン１０１ｉｆｔ塩化ナトリウム５　Ｎｇを
用い、対照として血清アルブミンのみ添加したものを用
いた。

凍結乾燥品に蒸留水１１を加え、水溶液の試料とした。

（３）　　インターフェロン活性の測定：Ｇ−β−ＩＦ
Ｈの力価は、ＷＩ　ＳＨ細胞、または？Ｌ細胞を用いた
ＶＳＶウィルスによる細胞変性阻止、色素取シ込み法〔
別冊、蛋究の進歩、３５５−３６３．（１９８１）・〕
を用い、標準Ｇ−β−ＩＦＮを同時に測定して相対力価
を求めた。

（４）　　安定性試験 （ａ）　　凍結乾燥品 第１表に示した組成で、恒温＠（７０℃）中、７日およ
び１４日間保存安定性試験を行った。

結果を第１表に示す。

第１表 （ｂ）　　水溶液 第１表の組成の凍結乾燥品を、１ｄの蒸留水に溶解し、
４０１℃の恒温槽に入れ、６時間および２４時間後の力
価を測定した。

結果を第２表に示す。

第２表 １　　　　　　　１８　　　　　　　　　　　　１６２
　　　　　　　２３　　　　　　　　　　　１５３　　
　　　　　２２　　　　　　　　　　　１４４　　　　
　　　４４　　　　　　　　　　　　１７５　　　　　
　　４５　　　　　　　　　　　２０６　　　　　　　
４３　　　　　　　　　　　１９７　　　　　　　４０
　　　　　　　　　　　１８８　　　　　　　　３９　
　　　　　　　　　　　２０実施例２ 無依塩頬の量を変えて実施例１と同様にＧ−β−ＩＦＮ
凍結乾燥品の保存安定性を検討した。

結果を第３表に示す。

第３表 ２　　　　−　　　　　　　　　　　５２　　　　　　
３９　　　１　　（Ｎａ（Ｖ）　　　　　６０　　　　
３１１０　　　３．５　（Ｎａα→　　　　７８５７１
１　　　１０（ＮａＣ７）　　　　　８１　　　　５５
１２　　１１（ＫＣＡ）　　　　　８６　　　　８３１
３　　　９　０＃Ｃ７２）　　　　７９　　　　７６１
４　　　１３　　（ＣａＣＶ２）　　　　７８　　　　
８０実施例３ ＭｆｆＧ−β−１ＦＮ６ｘｔｏ’単位を用い、安定剤と
して、Ｄ−マンニトール、無機塩ｔ［いて、実施例１と
同様に７０’Ｃにおける凍結乾燥品の保存安定性を測定
した。結果を第４表に示す。

１３　　　５０　　　　−　　　　７　　　０１４　　
　５０　　　．１０（ＮａＣｊり　２６　　　１９１５
　　　５０　　　　１０（ＫＣＩｌ）　　２７　　　１
８１６　　　５０　　　　１０（ＣａｃＡ、）２３　　
　１４実施例４ 精製Ｇ−β−ＩＦＮ１．８Ｘ１０’単位を用い、安定剤
としてＮａＣ１、ＫＣＡ！を３０１９用い、４０℃にお
ける水溶液中での保存安定性を測定した。

結果を第５表に示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１安定化剤として無機塩類を共存せしめることを特
   徴とするインターフェロンの安定化方法。 （２）　　無機塩類が塩化ナトリウム、塩化カリウム。 塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムから選ばれるこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 （３）インターフェロン１単位に対し、無機塩類をＩＸ
   Ｉσ１１〜１０　Ｘ　１０−”″Ｅ−ル用いることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 （４）　　インターフェロンがインターフェロン−α。 インターフェロン−βおよびインターフェロン−γから
   選ばれることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
   方法。 （５）安定化剤として無機塩類を含むインターフェロン
   含有組成物。 （６）無機塩類が塩化ナトリウム、塩化カリウム。 塩化カルシウム、計よび塩化マグネシウムから選ばれる
   ことを特徴とする特許請求の範囲第５項記載の組成物。 （７）インターフェロン１単位に対し、無機塩類をｌＸ
   ｌ０”〜１０　Ｘ　１０−”モル含むことを特徴とする
   特許請求の範囲第５項記載の組成物。 （８１インターフェロンカインターフェロンーα。 インターフェロン−βおよびインターフェロン−γから
   選ばれることを特徴とする特許請求の範囲第５項記載の
   組成物。