JPS59161355A - 新規なアミノ基標識試薬化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、アミン類を対象とする標識化試薬として用い
る新規化合物及び用途に関する。％に、本発明は筒速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析に供せられる試
料中のアミ／化合物の検出感度を向上するためにアミン
化合物に反応させることのできる新規なサクシンイミデ
ート化合物に関し、まだ標識化試薬としての応用に関す
る。さらに詳しくは、第一の本発明は新規化合物として
、次式（Ｉ） 〔式中、Ｒとｎ’　ｉ７１：互に同一でも異なってもよ
く、夫々に水素原子、ルーｉズ１〜６の直鎖又は分岐鎖
状アルキル基（ハロゲン置換基、例えばクロロ又はブロ
モ基を有することもできる）、炭素鶴６〜６　Ｌ７Ｊ　
ツクｏ　−ｆ　）ｖ　キル基、ｌ侍にシクロヘキン／Ｉ
／　４％、フェニル基、ハロフェニル基、特にブロモフ
ェニル基、又はフェニル低級アルキル基、特に−、ノジ
ル基を示す〕で表わされるサクシンイミデート化合物を
要旨とする。一般式（１）の本発明化合物にお出光、Ｍ
辿には２５０〜２７０ｎｍの波長の光に対して高い吸光
係数を示す基、特に発色団の基をイｊ４成していれはよ
い。

更に、第二の本発明は、前記の一般式（Ｉ）のサクシン
イミデート化合物から成ることを特徴とするアミノ基標
識（ラベル化）試薬を要旨とする。

本発明者らは各セ【！アミノ基含有化合物を？高速液体
クロマトグラフ＜　ＨＰＬＣ）装置で、低県耽でも容易
に検出できる化合物に転化させうる標識（ラベル化）試
薬、すなわちアミノ基標識試薬について研死を：＋１ふ
めた。そして、次式 ０式％（ と略称される）（テトラヘドロン・レター１９８０年１
４６７頁参照）を適肖な発色団を有するアミンと反応さ
せて得られる前記一般式（Ｉ）のサクシンイミデート化
合物ｃカルバモイル化合物とも言える）が極性有機溶媒
、例えばアセトニトリル中で緩和々反応条件下でも第１
アミン、第２アミンと選択的に且つ実質的に定量的に反
応して、前記第１アミン、第２アミンの対応する尿素誘
導体を与え得ること、さらにこの尿素誘導体は複数の類
縁尿素誘導体が混在していても高速液体クロマトグラフ
ィーで高い相互分離性を示すと共に、一般式（Ｉ）のサ
クシンイミデート化合物を介して該尿素誘導体中に導入
された発色団が良く紫外線波長範囲■光を吸収するので
該尿素誘導体が低濃匿で存在していても検出できること
、すなわち高感度で検出できることを知見した。従って
、一般式（Ｉ）の化合物がアミノ基標識試薬として極め
て秀れていることが本発明者により知見された。こうし
て本発明を児成した。

従来知られたアミン基標識化試薬としては、スルホン酸
あるいはカルボン酸のハロゲン化物訃よびイソシアナー
ト化合物があるが、これら公知の試薬はそれ自身が加水
分解を受けやすく、また刺激性の化合物である場合が多
い。ばらには、これら公知の試薬はアミン基以外の水酸
基やチオール基とも反応するだめ、標識化反応の選択性
又は特異性にも支障があった。本発明の一般式（Ｉ）の
化合物は通常の反応条件では水酸基やチオール基とは反
応しないから選択性がよく、試薬０冴も安定であるため
、検出すべきアミン基含有化合物を含む分析試料が水ま
たはアルコールを含むものにも適用可能である利点があ
る。

一般式（Ｉ）の本発明化合物と第１アミン又は第２アミ
ンとの反応（標識化反応）は次式の如く進む。

（Ｉ） ＼ Ｎ−Ｃｏ−ＮＨ−Ａ ／ Ｒ１（尿素誘導体） 又は （尿素誘導体） 一般式（Ｉ）の本発明化合物をアミノ基標識試薬として
使用する場合には、該化合物をアセトニトリルにとかし
て０．１％アセトニトリル溶液とし、これと、標識すべ
きアミノ基含有化合物又は各種アミノ基含有化合物の混
合物を含むアセトニトリル溶液よりなる試料液とを等容
量の比で混和し、標識化反応は行わせた後に、その混和
液の一部を直接に高速液体クロマトグラム（Ｉ（ＰＬＣ
）装置に注入する。該アミノ基含有化合物に対するザク
シンイミデート化合物（■）の標識化反応は室温で５分
間程度で完了する。こうして生成する尿素誘導体は、光
に対するモル吸収係数が比較的大きい（２５０〜２７０
ｎｍ波長の光でｌｏｇε〉４）ので、元のアミン基含有
化合物の濃度に換算して１般当りナノグラム（１０−’
＆　）程反壕で■ＩＰＴ、、Ｃで光の吸収ピークにより
検出、定量が可能である。またＨＰＬＣで上記の尿素誘
導体は複数が混在していでも相互に明確に分離された別
々の吸収曲線を与える、すなわち明確に別々の滞留時間
を与えるので、良好に分離できる結果が得られる。さら
に本発明化合物ＣＩ）は、これのＲ，Ｒ’部分を、ＨＰ
　Ｌ　Ｃ検出に実に有利な紫外部光或いは可視部光に吸
収ピークを有する他の発色団、さらには適白な蛍光発色
団と取換えることにより、広範な種類のアミノ基含有化
合物、すなわちアミン類を標識化できる。

本発明化合物（１）の製法には、次に示す通シ２イ重の
方法がある。第１の製法は、前記式（Ｕ）のＮ　、　Ｎ
’−ジサクシンイミジル・カーボネート（ＤＥＣ）で示
される第１級アミンあるいは第２級アミンをアセトニト
リル中で反応させ、ることがら成る。第１の製法ニおい
て、ＤＳＣとアミンのモル比は２対１が適当であり、温
度条件は室温が適当である。

その第２の製法は次式 で示されるＮ−ヒドロキシザクシンイミドを次式１Ｎ−
Ｎ＝Ｃ＝Ｏ（ＩＶ） （Ｒは前記（Ｉ）式のＲ又はＩ（１と同じ意味をもつが
、但し水素原子ではない）のイソシアン酸エステルとア
セトニトリル中で反応させて次式 〔式中、Ｒは式（ＩＶ）における前記と同じ意味をもつ
〕のザクシンイミデート化合物を生成させることから成
る。

第２の製法においてインシアナート化合物とＮ−ヒドロ
キシザクシンイミドの反応モル比は１対１が適当であり
、温度条件は室温が適当である。

なお、本発明者らは本発明化合物（Ｉ）がニトロン尿素
系制癌剤の合成に際して中間体としてきわめて有用であ
ることを見出した。すなわち、従来のニトロソ尿素誘導
体の製法では、尿素をＮ−二トロン化するので二坪のＮ
−ニトロソ体の混合物が得られるが、後記の参考例８に
示されたように本発明化合物を使用する方法では、目的
とするＮ−原子の与に、Ｎ−ニトロソ化したニトロソ尿
素誘導体かえられ、このため精製が簡略化され、高純度
の目的物が得られる。

次に実施例について本発明を説明する。

実施例１ Ｎ　−（Ｎ’−シクロへキシルカルバモイル）ザクシン
イミテートの製造（第１の製法による）グ ＤＳＣの５．１２ｇ（０，０２％ル）を２００ｗＬｌの
アセトニトリルに溶解し、攪拌下に５０ｍ１のアセトニ
トリルに溶解させたシクロヘキシルアミンのｏ、９９ｇ
（ｏ、ｏ１モル）の溶液を滴下漏斗で８〜１０時間かけ
て室温あるいはやや加温上滴下した。

更に２４時間攪拌後、反応液を減圧下に濃縮し、クロロ
ホルム又は酢酸エチルエステルを加え、１Ｎ−ＨＣ７、
水、４％重炭酸ナトリウム水溶液、飽和食塩水で次々洗
浄した。洗浄中、未反応のＤＳＣの結晶が析出した場合
は濾過で除き、その涙液について洗浄した。有機層を無
水硫酸ナトリウムで乾燥し濃縮すると、表題化合物の結
晶かえられた。

エーテル−アセトンよジ再結晶して収量１．５６　ｇ（
５６，６％）で目的物が得られた。

ｍｐ、　１４９　”−１５１°Ｃ ＩＲ：　　ｖＫＢｒ（ｒｘ５：　　３３００’（ＮＨ）
、　　１８００（イミド）、　１７４０（’７ａｘ レタン） 元素分析 理論値ＣＩＩＨ１１１０４Ｎ２：　Ｃ５４，９９，Ｈ（
Ｓ、７Ｌ　Ｎ　１１．６５多測定値　　　　：　Ｃ５４
，９９，Ｈ６，、！１８．　Ｎ　１１，４９チ笑施例２ Ｎ　−（Ｎ’−ヘキシルカルバモイル）ザクシンイミデ
ートの製造 ＤＳＣの０．０２モルとヘキシルアミンの０．０１モル
とを実施例１と同様な方法でアセトニトリル中で反応し
て表題化合物を得た。収量１．５５　ｇ（６４，０係） ｍｐ、　７５〜７７°Ｇ Ｔｉｔ、：　　ｖＫＢｒ（ｃｍ−１）：　　５２２５（
ＮＨ）、１８４０（イミド）＋　　１７５０（つａＸ レタン） 元素分析 」１１１論値Ｃ１１ＩＬａ０４Ｎ２　：　Ｃ５４，５３
，Ｈ７，／１９．　　Ｎ　１１．５６係測定値　　　　
　　：　　Ｃ５４，５１，Ｈ７，５０，Ｎ　１１．７／
Ｓ％実施例６ Ｎ　−（Ｎ’−フェニルカルバモイル）ザクシンイミデ
ートのａｊμ造 す ＤＳＣ（７）０．０２モルと７ニリンのｏ、ｏｉモルと
を実施例１と同様な方法でアセトニトリル中で反応させ
て表題化合物を得た。収量１．６３　！ｉ　（６９，７
％）。

ｍｐ、１５０〜１５１℃ ＩＲ：　ｖＫＢｒ（ｃｍ”）：　　３３００（ＮＨ）、
１７８０（イミド）、１７３［１ｔ’つａｘ レタン） 元素分析 理論値Ｃｌ１ＨＩ００４Ｎ２’　　Ｃ５６，４１，Ｈ４
，３０，Ｎ　１１．９６％測定値　　　　　　：　Ｃ５
６，０５，Ｈ４，２０，Ｎ　１１．８８係実施例４ Ｎ−（Ｎ’−ｐ−ブロモフェニルカルバモイル）ザクシ
ンイミデートの（製造 す ＤＳＣ，１７）０．０２２モルトルーブロモアニリン０
．０１モルとを実施例１と同様な方法でアセトニトリル
中で反応させて表題化合物を得だ。収率７６係。

ｍｐ、１６１〜１６６℃ 元素分析 理論（直ＣｎＨｏ０６Ｎ２Ｂｒ：　　Ｃ４２，２０，Ｈ
２，９［１，Ｎ　　８．９５％測定値　　　　　　　：
　Ｃ４１，９８，Ｈ２，８１，Ｎ　８．９８％実施例５ Ｎ　−（Ｎ’−メチルカルバモイル）ザクシンイミデー
トの製造 リ ＤＥＣの０．０２モルとメチルアミンの０．０１モルと
を実施例１と同様な方法でアセトニトリル中、で反応さ
せて表題化合物を得た。収量１．０９ｇ（６ろ、　１　
　係　　）　。

ｍｐ、１１５〜１１４℃ レタン） 元素分析 理論値ＣｅＨ８０４Ｎ２　：　Ｃ４１，８６，Ｈ４，６
８，Ｎ　１６．２７％測定値　　　　　：　　Ｃ４１，
８６，Ｈ４，７１，Ｎ　１６．３６％実施例６ Ｎ　−（Ｎ’−ベンジルカルバモイル）サクシンイＤＳ
Ｃの０．０２モルとベンジルアミンの０．０１モルとを
実施例１と同様な方法でアセトニトリル中で反応させて
表題化合物を得た。収ｉ　１．８０９（７２，６係）。

ｍｐ、１２９〜１５１　°Ｃ ＩＲ：　　ｖ’：’：ｒｃ（ｃｒｎ−”）：　　３３５
０（ＮＨ）、１８１０．　１７８０（イミｔ’）。

１７２０（ウレタン） 元素分析 理論値Ｃｔ＋Ｈ＋５０４Ｎ２：　Ｃ５８，０６，Ｈ４，
８７，Ｎ　１１．２９％測定値　　　　　　：　Ｃ５８
，０，５，Ｈ４，８５，Ｎ　１１，１８％実施例７ Ｎ〜（Ｎ’　、　Ｎ’−ジプロピルカルバモイル）ザク
シンイミデートの製造 す ＤＳＣの０．０２モルとジー（ｎ−プロピル）アミンの
０．０１モルとを実施例１と同様な方法でアセトニ）　
ＩＪル中で反応させて油状の表題化合物をィ（Ｊ　た　
。　　収　らト　２．　１　　８　１　　　（９ｒＪＪ
　　係　　）（ウレタン） 元素分析 Ｊ’）！　、；ａ　Ｉ直Ｃ１１１１１８０ｑＮ２：　　
Ｃ５４，５３，Ｈ７，４８，Ｎ　　１１．５６％Ｊ＋１
ｊ定値　　　　　　　Ｃ５４，２３，Ｈ７，４９，Ｎ　
１１．３３チ実、ゲｉｉｌをＩＩ　８ Ｎ　−（Ｎ’−イソゾロビルカルバモイル）ザクシンイ
ミデートの便造 ＤＳＣの０．０２モルとイソゾロビルアミンの０．０１
モルとを実施例１と同様な方法でアセトニトリル中で反
応させて表題化合物を得た。収）葎０、　Ｊ　Ａ　＆　
（２２係）。

ｒｎｐ、　　１３６〜１３９℃ 、　　　　■ぐＢｒ　　　　　−１ １ＩＬ、　　ν（ｃｍ　　）：　　１８４０（イミド）
、　　１７３０（＋；ｙレタン）元素分析 理論値Ｃｓ１−ＩＩ２０ｋＮ２’　　Ｃ４７，９９，Ｈ
６，０４，Ｎ　１３．９９係測定値　　　　　　：　Ｃ
４７，７２，Ｈ５，８６，Ｎ　１３．６３係実施例９ Ｎ−（Ｎ’−２−り０ロエチル力ルパモイル）ザクシン
イミデートの製造 ＤＳＣの３．９（０，（１１１７モル）と２−クロロエ
チルアミン塩酸塩の１１５９ｇ（０，０１モル）をアセ
トニトリル１００ａ中でトリエチルアミン１、０１９　
（０，０１モル）の存在下に室温にて２４時間セ１工拌
下に反応させた。反応後、反応液をｔλ縮しｍ）ｋ塩酸
３　ｍｌを加え、更に水のｉｏｏ、ｒｒＬｌを加え、ク
ロロホルムで抽出する。有機層を無水硫酸ナトリウムで
乾燥後、減圧留去すると結晶として表題化合物かえられ
た。エーテルより再結晶して収量１．３５．９（６１，
５係）で目的物を得た。

ｍｐ、８５〜８７℃ レタン） 元素分析 理論値Ｃ７１（Ｑ　０４　Ｎ２　ｃｌ：　Ｃろ８．１１
．　Ｉ−１、ｉ、１１．　Ｎ　１２．７０％」Ｉ］定値
　　　　　　：　Ｃろ８，３１．　Ｈ４，４１，Ｎ　１
２．７０％実施例１Ｏ Ｎ　−（Ｎ’　、　Ｎ’−ジー２−クロロエチルカルバ
モイル）ザクシンイミデートの製造 ＤＳＣの約０．０２モルとジー（２−クロロエチル）ア
ミンの０．０１モルとを実施例１と同様な方法でアセト
ニトリル中で反応させて表題化合物を得た。収＠　１．
６８　＆　（！５９．５係）。

ｍｐ、６７〜７０℃ ＩＲ：　　ｖＫＢｒ（ｃｍ”）：　　２９３０（ＣＨ）
、１８２０（イミ）’）、１７５０（’７レクン） 元素分析 理論値Ｃ０Ｈ＋２０４Ｎ２Ｃｌ：Ｃ３８，１８，Ｈ４，
２７，Ｎ　９．８９係測定値　　　　　　　：　Ｃろ８
．１８．　Ｉ−Ｉ　４．２４．　　Ｎ　９，８Ｓ係実施
例１１ Ｎ　−（Ｎ’−シクロヘキシルカルバモイル）ザクシン
イミデートの製造（第２の方法による）シクロヘキシル
・イソシアネートの１−２５ｇ（０，０１モル）とＮ−
ヒドロキシザクシンイミドの１、１５　ｇ（０，０１モ
ル）をアセトニトリル中（１００ｍ、Ｊ）で室温にて２
４時間撹拌下に反応させた。その後、反応液から溶媒を
留去すると、結晶として表題化合物かえられた。エーテ
ル−アセトンより再結晶させると、目的物が収量２．１
６ｇ（９０％　）で得られた。

この目的生成物の物性は実施例１のものと同じであった
。

実施例１２ Ｎ−（Ｎ′−２−クロロエチルカルバモイルクシンイミ
デートのネ゛Ｊ造 Ｎ−ヒドロキシザクシンイミドのｏ，ｏｉモルと２−ク
ロロエチル・イソシアネートの０．０１モルとを実施ｆ
ａｌｌ　１　１と同様な方法でアセトニトリル中で反応
させて表題化合物を得た。

得られた化合物は実施例９のそれと同じ物性を示した。

実施例１３ Ｎ　−　（　Ｎ’−メチルカルバモイル）ザクシンイミ
デートの製造 Ｎ−ヒドロキシせクシンイミドの０．０１モルとメチル
イソシアネートの０．０１モルとを実７４例１１と同様
な方法でアセトニトリル中で反応させて表題化合物を得
た。得られた化合物は実施例５のそれど同じ物性を示し
た。

試験例１ 高速液体クロマトグラフ（１．ＩＰＬＣ）でのアミノ基
含有化合物の標識化と分θ［ 実ｍ　例３で得られたＮ　−　（　Ｎ’−フェニルカル
バモイル）ザクシンイミデートをアセトニトリルにとか
して０．１係アセトニトリル溶液囚を調−棲した。

下記のアミノ基含有化合物６絆を下記の濃度でア七トニ
）　ＩＪルにとかした試料溶Ｆ．ＨＴ３）を調製した。

（１）　　ｎ−プロピルアミン　　　１　０　０　ｔｔ
　ｇ／ｒｒ：１（２）ｎ−ブチルアミン　　　　　　　
〃（３）ローアミルアミン　　　　　　　〃（４）ｎ−
ヘキシルアミン　　　　　　〃（５）ｎ−ヘプチルアミ
ン　　　　　　〃（６）ｎ−オクチルアミン　　　　　
　〃前記サクシンイミデート溶Ｐ囚と試料溶液（Ｂ）と
を等容量比で混和し、混和液を室温で５分間放置して標
識化反応を起させ、その反応液の５μｌ　を直接に高速
液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）装置に注入する。Ｈ　
Ｐ　Ｌ　Ｃの条件は下記の通りである。

カラＡ　　：　　Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ　　ＯＤＳ　　シ
リカケ゛ルカラム（　４，　６　ｙｖｍ内径Ｘ１５ｃｍ
長さ）移動相ニアセトニトリル：水（６：４）流　速：
　　１，Ｏｒｄ１分 ４ｊ＝出光：２５０ｎｍ カラム０１度　室１ｒＡ 得られたクロマトグラムには、ｎ−プロピルアミン、ｎ
−ブチルアミン、ｎ−アミルアミン、ｎ−ヘキシルアミ
ン、ｎ−へブチルアミン、ｎ−オクチルアミンの夫々か
ら誘導された尿素誘導体ならびに過剰量の実ＪＷｔｉ例
乙の化合物（及びＮ−ヒドロキシザクシンイミド）各々
の吸収曲線、計７本が滞留時間０．５分〜８分間の範囲
内で相互に明確に分離して現われ、上記６種のアミン化
合物に対応する夫々の致収曲線６本の最大ＵＶ吸光度値
は５５％〜９０係の範囲であった。１ナノグラム（１０
Ｅｌ）／ｍｌ程度の濃度の上記アミン化合物が本ＨＰ　
Ｔ、　Ｃで検出、定量できることが判る。

試験例２ 下記のアミノ基含有化合物３種を下記の濃度でアセトニ
トリルにとかした試料溶ｇ（Ｃ）を調製した。

アミン基含有化合物　　　　　　崇　度（１）ジエチル
アミ／　　　　　　１００μｊｉ／ｒｕｌ（２）ジ−ｎ
−プロピルアミン　　　　〃（３）　　ジー１ｓｏ−ブ
チルアミ：ｙ　　　１００μｇ７ｍ、ｅこの試料溶液（
Ｃ）を、試験例１で用いたザクシンイミデート溶液（Ａ
）と等容量比で混和し、以後、試験例１と同様に標識化
反応を行い、さらに反応液をＨＰＬＣ分析にかけた。

得られたクロマトグラムには、過剰な実施例６の化合物
（及びＮ−ヒドロキシザクシンイミド）の各々の吸収曲
線、計４本が滞留時間０−５分〜６分間の範囲内で相互
に明確に分離して現われ、上記６種のアミン化合物に対
応する夫々の吸収曲線ろ本の最大ＵＶ吸光度値は約１５
φ〜８５係の範囲内であった。従って、１ナノグラム（
１０ｇＶｍｌ程度の濃度の上記アミン化合物が本ＨＰＬ
Ｃで検出、定量できることが判る。

以下の参考例はｆＩ１式の本発明化合物がアミン化合物
を尿素誘導体に転化させる試薬として利用できることを
示しく参考例１〜７）、丑だＮ′−ニトロソ−Ｎ′−置
換尿素誘導体の合成に中間体として利用できることを示
す（参考例８）。

参考例１ Ｎ−フェニル−Ｎ′−シクロヘキシル尿素ノ％　造実ノ
泡例１で製造したＮ　−（Ｎ’−シクロヘキシルカル／
２モイル）サクシンイミデートノ０．１１７（０，５ミ
リモル）をアセトニトリル５　ｒｒＬｅに溶５・Ｊ〒し
、アニリンの０．０５　ｇ（’　０．５５ミリモル）を
加え、室温にて２４時間攪拌下に反応する。反応後、ｈ
＋縮し、酢；伎エチルエステルを加え、Ｉ　Ｎ−ＨＣｌ
、水、４受ＮａＨＣＯ１水、飽和食塩水で次々に洗浄後
、無水（Ｖｆｊ　酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を留去
すると結晶として表題化合物が析出する。

エーテル−石油ベンジンより再結晶すると、数計８３　
ＭＶ　（７６゜０％）で目的物が得られた。

ル） 元素分析 Ｊ’Ｊ掩隨値Ｃｌ５Ｔ（ｌＲＮ２０：　　Ｃ７１，５ろ
、　　Ｈ８，３１，Ｎ　　１２．Ｅ３１５％測定値　　
　　　：　Ｃ７１，４２，Ｈ８，４０，Ｎ　１２．７９
係参考例′２ Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ’、Ｎ’−）ｉロビル尿素の製
造 実施例１のＮ　−（Ｎ’−シクロヘキシルカル／２モイ
ル）ザクシンイミデートの０．５ミリモルとジプロピル
アミンの０．５５ミリモルをアセトニトリル中で参考例
１と同様に反応させた。収率４８．７受。

ｍｐ、　９２°Ｃ 元素分析 理論値ＣｔｉＨ２ｎＮ２０：　　Ｃ６８，９７，Ｈ１１
，５７，Ｎ　１２，３７％測定値　　　　　　：　　Ｃ
６Ｂ、２５．　Ｈ１１Ｊ５．　Ｎ　１２．３６％参考例
３ Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ′−２−デオキシグリコジル尿
素の製造 実ａ　例１のＮ　−（Ｎ’−シクロへキシルカルバモイ
ル）ザクシンイミデートの０．５ミリモルと２−デオキ
シグルコシルアミンのｏ、５５ミリモルをアセトニトリ
ル中で参考例１と同様に反応させた。

収率４９．３係。

ｍｐ、　　１９２〜１９４℃ ＩＲ：　ｖＫ］３ｒ（ｃｘ−１）：　３３３０（ＯＨ，
ＮＨ）、　２９１ｏ（ＣＨ）、　１６２０ａＸ （ＣＯ） 元素分析 理論値Ｃｌ５Ｈ２４０２Ｎ６：Ｃ５１ｊ４．　Ｈ７，９
５，Ｎ　９．２０％測定値　　　　　　：　Ｃ５１，６
８，Ｈ８，１３，Ｎ　９．１８係参考例４ Ｎ−シクロヘキシル−Ｎ′−２−クロロエチル尿素の製
造 実ｍ例Ｉ　ＧＤ　Ｎ　＝（Ｎ’−シクロへキシルカルバ
モイル）ザクシンイミデートの０６５ミリモルと２−ク
ロロエチルアミンの０．５５ミリモルをアセトニトリル
中で参考例１と同様に反応させた。収率６８．６係。

ｍｐ、　１１３〜１１６°Ｃ ■Ｒ：　νＫＩＢｒ（Ｉ−’）：　５５２［１（ＮＨ）
、　２９０（］（ＣＩ（）、　１６２０（Ｃｏ）ａｘ 元素分析 理論値ＣｏＨ＋７Ｎ２０Ｃｌ：　Ｃ５２，８０，Ｈ８，
５７，Ｎ　１３．６８％測定値　　　　　　：　Ｃ５２
，１６，Ｈ８，２０，Ｎ　１５．３９係参考例５ １〜シクロへキシル−カルバモイル−５−フルオロウラ
シルの製造 ’ＪＪＮＭ　１　ＯＮ　−（Ｎ’−シクロヘキシルカル
バモイル）ザクシンイミデートの０．５ミリモルと５＝
フルオロウラシルの０．５５ミリモルをアセトニトリル
中で参考例１と同様に反応させた。収率４１．６係。

ｍｐ、　１２５〜１２８℃ Ｉｎ、：　ｖＫＪ３ｒ（ｃｒｎ　’）：　２８４０（Ｃ
Ｈ）、　１７３０．１７６０（ＣＯ）ａｘ 元素分析 理論値Ｃ１１Ｈ１，Ｎ３０．ｌＦ：　Ｃ５１，７６、Ｈ
５，５２１Ｎ　１６．４６％測定値　　　　　　　：　
Ｃ５１，８８，Ｈ５，４９，Ｎ　１６．５５％参考例６ Ｎ−シクロへキシル−Ｎ′−ベンジル尿素の製造実ＭＬ
例１　ノＮ　−（Ｎ’−シクロヘキシルカルバモイル）
ザクシンイミデートの０．５ミリモルとベンジルアミン
の０．５５ミリモルをアセトニトリル中で参考例１と同
様に反応させた。収率５１．７％。

ｍｐ、１５８〜１５９°Ｃ ＴＲ：　　ν１（Ｂｒ（ｍ”）：　　５３２ｏ（Ｎｒｉ
）、　　２９３０（ＣＨ）、　　１６２ｏ（ｃｏ）。

１５８０（フェニル） 元素分析 理論ｊ１ｉｃ＋Ｊ（２ｏＮ２０：　Ｃ７２，３８，Ｈ８
，６８，Ｎ　１２．０６％測定値　　　　　　：　Ｃ７
２，５１，Ｈ８，６５，Ｎ　１１．８＆係参考例７ ジフェニル尿素の製造 実ｍ例５　（７）　Ｎ　−（Ｎ’−フェニルカルバモイ
ル）ザクシンイミデートの０．５ミリモルとフェニルア
ミンの０．５５ミリモルをアセトニトリル中で参考例１
と同様に反応させた。収率７６．８乃。

ｍｐ、１６４〜１６６°Ｃ ル） 元素分析 理論値Ｃ１４ＨＩ４　Ｎ２０　：　Ｃ７４、ろ１．　）
Ｉ　６．２４．　Ｎ　１２．３８％測定値　　　　　　
：　　Ｃ７４，１，！Ｉ、　Ｈ６，１４，Ｎ　１２．３
５チ参考例８ （イ）　　Ｎ　−（Ｎ’　−２−クロロエチルカルバモ
イル）サクシノイミデートのＮ′−二トロン化Ｎ２Ｏ４
の９．２ｄ（０，１５モル）を２００Ｍの四塩化炭素に
溶）、′（さぜ、０℃で無水酢酸ナトリウムの２５　ｇ
　（０，５モル）を加え攪拌下に実施例１２ＯＮ−（Ｎ
’−２−クロロエチルカルバモイル）サクシノイミデー
トの２２　ｇ（０，１モル）を加える。

１時間後、クロロホルムを加え、水、食塩水で洗浄、無
水硫酸ナトリウムで乾繰後クロロホルムを留去し結晶を
得る。クロロホルム−イソプロピルエーテルより再結晶
して次式 で示されるＮ　−（Ｎ’−二トロン−Ｎ′−２−クロロ
エチルカルバモイル）サクシノイミデートが得られた。

収量１８．７　ｇ（７５，０係）工Ｒ：　νＫＢｒ（Ｃ
ＴＬ−１）＝　１８１０（イミド）、　１７４０（ウレ
タン）元素分析 理論値ＣｑＨ８０ｓ−Ｎ３Ｃ１ｌ：　　Ｃ３３，６８，
Ｈ３，２ろ、　Ｎ　１６．８３係、則定イ１り　　　　
　　　　　°　Ｃ３１３９，Ｈ５，０９，Ｎ　　１６．
９９％（ロ）Ｎ−（Ｎ’−二トロン−Ｎ’−クロロエチ
ルカルバモイル）サクシノイミデートとシクロヘキシル
アミンの反応＋′ＣＣＮ　Ｕの合成）前項（イ）で得た
Ｎ−ＣＮ’−二トロン−Ｎ′−クロロエチルカルバモイ
ル）サクシノイミデートの０．２．５ｇ（１ミリモル）
トシクロヘキシルアミンの０．１．９　（１ミリモル）
をアセトニトリル１０ｍ１中室温８時間（ｄ拌して反応
する。反応後、溶媒を留去し、クロロホルムを加え、１
　Ｎ、−ＨＯ２、水、４チＮａＨＣＯ３水、飽和食塩水
で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾”操後留去し、結晶
として次式（ で示されるＮ−シクロヘキシル−マーニトロン＝Ｎ′−
２−クロロエテルウレア、すなわちＣＣＮＵとして知ら
れる制癌性化合物が得られた。収率１　８９　ｍり　（
８１％　　）　。

ｍｐ、８７〜８９℃ 、　　　ＫＢｒ　　　−１ １Ｌ　　ｖ　　　（ａｍ　　）：　　３３４０（ＮＨ）
、１７００（Ｃｏ）。

元素分析 理扉ｎ（直ＣＪＩ＋ｅＯ□Ｎ３Ｃｌ：　Ｃ４６，３３，
Ｈ６，９１，Ｎ　　１８．０２％測定値　　　　　　　
：　Ｃ４６，３３，Ｈ６，８０，Ｎ　１８．２２％手続
補正書（自発） 昭和５８年　４月１４日 特許庁長官殿 ■、小事件表示 昭和　５８年特許願第３５２５１号 ２、発明の名称 新規なアミン基標識、試薬化合物 ３、補正をする者 事件との関係　　　　　特許出願人 ４、代理人 〒１０５　　住所　東京都港区西新橋１丁目１番１５号
物産ビル別館　電話（５９１）　０２６１５、ネ：：ｊ
正の対隊 明色、１沓の元りＪの詳却１な説明の（薗６．７ｉｉｊ
止の内容 （１）１↓’Ｉ、（ｉ菖ヲ：第４頁５〜６行の「１９８
０年］４６７頁」を削除して「１９７９年４７４５頁」
をター人する。

手続補正書（自発） 昭和５８年　９月２０日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和　５８　年特許願第３５２ｂ１号 ２、発明の名称 新規なアミノ基標識試薬化合物 ３、補正をする者 事件との関係　　　　　特５′［出願人住所　　　千楯
県松戸市常盤平陣屋前５−５氏　名　　　　小　　倉　
　治　　夫 ４、代理人 〒１０５　　住所　東京都港区西新橋１丁目１番１５号
物産ビル別館　電話（５９１）　０２６１５÷：ｌＩ正
の）］）ξ ＩＪＩ　、、・ｊ、：；のユしく３”」の詳＋’□　！
ＩＩな１況ゆＪ　Ｕ　１ｉｒａ６ぞ１１１Ｆの内容 （１）　１１ノ」Ｌ、１計第１／竪頁↓工行の１−１ｂ
：ｉ〜１６３℃」′イ二削１１；？Ｅして「１９５〜１
９９℃」を挿入する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　次式（Ｉ） 〔式中、■（、とＲ１は互に同一でも異なってもよく、
   夫々に水素原子、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖状アル
   キル基（ハロゲン置換基を有することかできる）、炭素
   数３〜乙のシクロアルキル基、フェニル基、ハロフェニ
   ル基又はフェニル低級アルキル基を示す〕で表わされる
   サクシンイミデート化合物。 〔式中、Ｒと几１は互に同一でも異なってもよく、夫々
   に水素原子、炭素数１〜６の直鎖又は分岐鎖状アルキル
   基（ハロゲン置換基を有することかできる）、炭素数３
   〜乙のシクロアルキル基、フェニル基、ハロフェニル基
   又はフェニル低級アルキル基を示す〕で表わされるウー
   クシンイミデート化合物から成ることを特徴とするアミ
   ン基標黛試薬。