JPS59113899A - 単細胞生物の濃度測定方法 - Google Patents
単細胞生物の濃度測定方法Info
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- JPS59113899A JPS59113899A JP13423183A JP13423183A JPS59113899A JP S59113899 A JPS59113899 A JP S59113899A JP 13423183 A JP13423183 A JP 13423183A JP 13423183 A JP13423183 A JP 13423183A JP S59113899 A JPS59113899 A JP S59113899A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
- C12Q1/06—Quantitative determination
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、分析方法に係り、更に詳細には単細胞生物の
１Ｉｉｌ！度の測定方法に係る。
１Ｉｉｌ！度の測定方法に係る。
バクテリアやイースト＠細胞の如き単細胞生物の存在を
定量的に測定することは多くの分野に於て重要である。
定量的に測定することは多くの分野に於て重要である。
例えばペンキ、食肉、水冷式クーリングタワーなどに於
けるバクテリアの存在はこれらの製品を有益に使用する
十で極めて重要である。バクテリアのレベルが成る最大
値以上である場合には、経済的な打撃が発生することが
ある。
けるバクテリアの存在はこれらの製品を有益に使用する
十で極めて重要である。バクテリアのレベルが成る最大
値以上である場合には、経済的な打撃が発生することが
ある。
特定の領域に上述の如き細胞が存在すること及び／又は
その吊を検出する従来の方法は、一般に長時間を要ψる
ものぐあり、退屈なものであり、また細胞の濃度が１１
当り約１Ｘ１０５個以下であるＳ合には正確な測定を行
うことが回外なものである。
その吊を検出する従来の方法は、一般に長時間を要ψる
ものぐあり、退屈なものであり、また細胞の濃度が１１
当り約１Ｘ１０５個以下であるＳ合には正確な測定を行
うことが回外なものである。
木光明の目的は、単細胞生物のｍ度が比較的小さい場合
にも単細胞生物を簡単に検出することのできる方法を提
供することである。
にも単細胞生物を簡単に検出することのできる方法を提
供することである。
本発明はＱ！細胞生物のｍｅが小さいサンプルを含む種
々のリンプルに存在する単細胞生物を測定づる簡単な方
法に関するものである。本発明の方法は、単細胞生物に
対し不透過性を有するフィルタ薄膜にサンプルを通りこ
とによりサンプルの単細胞生物（劃１のｍ度を増大させ
ることを含んでいる。細胞がフィルタ簿膜上に存在する
場合には、フィルタ薄膜は溶解剤及び発光試薬にて順次
処理される。溶解剤はｍ除膜を溶解して細胞中に存在す
るアデノシン・トリホスフェート＜ＡＴＰ＞を解放する
。次いでＡ Ｔ ＋）は発光試薬と反応せしめられ、ル
ミノメータ゛にて測定される発光応答（冷光）を発生す
る。かかる本発明の方法は一つのリーンプル中に５個又
はそれ以下の細胞しか存在しない場合にも細胞を正確に
測定することができるものである。
々のリンプルに存在する単細胞生物を測定づる簡単な方
法に関するものである。本発明の方法は、単細胞生物に
対し不透過性を有するフィルタ薄膜にサンプルを通りこ
とによりサンプルの単細胞生物（劃１のｍ度を増大させ
ることを含んでいる。細胞がフィルタ簿膜上に存在する
場合には、フィルタ薄膜は溶解剤及び発光試薬にて順次
処理される。溶解剤はｍ除膜を溶解して細胞中に存在す
るアデノシン・トリホスフェート＜ＡＴＰ＞を解放する
。次いでＡ Ｔ ＋）は発光試薬と反応せしめられ、ル
ミノメータ゛にて測定される発光応答（冷光）を発生す
る。かかる本発明の方法は一つのリーンプル中に５個又
はそれ以下の細胞しか存在しない場合にも細胞を正確に
測定することができるものである。
以下に添イ」の図を参照しつつ、本発明を実施例につい
て詳細に説明する。
て詳細に説明する。
セルロースの混合エステル、［ルロース・アセテート、
ｚ）にｌン（Ｉ録商標） （（、ＩＩ ｐｏｎｔ
（ｌｅＮｅｍｏｕｒｓ ＆ Ｇｏ、、 Ｉ ｒ＋
ｃ、 ） 薄膜の如く、単細胞生物（細胞）を捕捉し収
集するに充分な有孔度を有する従来より使用されている
任意の重合体フィルタＮ膜上に発光応答を発生させるこ
とができる。微生物の８１度を増大さぼるためには、ア
メリカ合衆国イリノイ州、シカゴ所在の３ａｒすｅｎｔ
−Ｗｅｌｃｈより販売されているＮ ｕｃｌｅｏｐｏｒ
ｅ （登録商標）薄膜の如きポリカーボネート薄膜が
取扱い容易であり旦耐久性に優れているという点に於て
好ましい。一般に直径が１３ｍｍ又は２５ｍｍである薄
膜が直径１２＋ａｍ、、長さ５５ Ｌ！１１１１のポリ
スチレン管との関連で使用される。
ｚ）にｌン（Ｉ録商標） （（、ＩＩ ｐｏｎｔ
（ｌｅＮｅｍｏｕｒｓ ＆ Ｇｏ、、 Ｉ ｒ＋
ｃ、 ） 薄膜の如く、単細胞生物（細胞）を捕捉し収
集するに充分な有孔度を有する従来より使用されている
任意の重合体フィルタＮ膜上に発光応答を発生させるこ
とができる。微生物の８１度を増大さぼるためには、ア
メリカ合衆国イリノイ州、シカゴ所在の３ａｒすｅｎｔ
−Ｗｅｌｃｈより販売されているＮ ｕｃｌｅｏｐｏｒ
ｅ （登録商標）薄膜の如きポリカーボネート薄膜が
取扱い容易であり旦耐久性に優れているという点に於て
好ましい。一般に直径が１３ｍｍ又は２５ｍｍである薄
膜が直径１２＋ａｍ、、長さ５５ Ｌ！１１１１のポリ
スチレン管との関連で使用される。
使用に際しては、単細胞生物に関し試験されるべきサン
プルが液体である場合には、サンプルが直接通常の濾過
装置にて濾過され、ナンプルが固体である場合には緩衝
溶液又は水などにて細胞が通常の要領に（抽出される。
プルが液体である場合には、サンプルが直接通常の濾過
装置にて濾過され、ナンプルが固体である場合には緩衝
溶液又は水などにて細胞が通常の要領に（抽出される。
本明１書に於ては本発明が細胞との関連で説明されるが
、実際の測定は実質的に細胞と等価である］［に一形成
ユニットについて行われる。
、実際の測定は実質的に細胞と等価である］［に一形成
ユニットについて行われる。
一般に使用される濾過装置としては、殺菌処理された１
〜５Ｑｃｃの使い捨ての注射器にリュール（１ｕｅｒ）
にて固定された１３ｍｍの３Ｗｉｎｌｌｅｙフイルタや
、２５０１の真空フラスコ上に配置され手持ち型の真空
ポンプ（又はインライン負圧）により濾過が行われる２
００１のＧｅ１ｌｌｌａｎロートフイルタ（２５１１１
１ｍに目盛が付されている）などがある。
〜５Ｑｃｃの使い捨ての注射器にリュール（１ｕｅｒ）
にて固定された１３ｍｍの３Ｗｉｎｌｌｅｙフイルタや
、２５０１の真空フラスコ上に配置され手持ち型の真空
ポンプ（又はインライン負圧）により濾過が行われる２
００１のＧｅ１ｌｌｌａｎロートフイルタ（２５１１１
１ｍに目盛が付されている）などがある。
試験されるサンプル中に存在する細胞のずべてを溶解す
るに充分な吊の溶解剤が使用されなければならない。沸
騰トリス（Ｉｒｉｓ） （トリス（ハイドロオキシ・
メチル）アミノメタン・ハイドロクロライド）の如き最
も一般的な生物細胞溶解材料を用いて細胞が溶解され細
胞中のＡ ’Ｔ’ ｌ）が解放されてよいが、本発明に
於てはアメリカ会衆１１イリノイ州、ダウンブース・グ
［１−ヴ所在のＰ ａｃｋａｒｄｌ ｎｓｌｒｕｍｅｎ
ｔ ＣＯ，より販売されテい７．） ４ 元素Ｌｋりな
るアンモニウム塩をベースとするＰ Ｉ Ｃ０ＥＸ（登
録商標）Ｂが使用されることが好ましい。
るに充分な吊の溶解剤が使用されなければならない。沸
騰トリス（Ｉｒｉｓ） （トリス（ハイドロオキシ・
メチル）アミノメタン・ハイドロクロライド）の如き最
も一般的な生物細胞溶解材料を用いて細胞が溶解され細
胞中のＡ ’Ｔ’ ｌ）が解放されてよいが、本発明に
於てはアメリカ会衆１１イリノイ州、ダウンブース・グ
［１−ヴ所在のＰ ａｃｋａｒｄｌ ｎｓｌｒｕｍｅｎ
ｔ ＣＯ，より販売されテい７．） ４ 元素Ｌｋりな
るアンモニウム塩をベースとするＰ Ｉ Ｃ０ＥＸ（登
録商標）Ｂが使用されることが好ましい。
直径１３ｍｍ又は２５ｍｍ（１））４ルタ博膜に約１０
０μｍのＰＩＣＯＥＸ Ｂが使用されるごどが多くの
場合には最適であることが解っている。沸騰トリス法が
使用される場合には、サンプルの完全な溶解を行・うべ
（、す゛ンプルは５分以上に亙り１゜０℃以上の温瓜に
て沸騰される。
０μｍのＰＩＣＯＥＸ Ｂが使用されるごどが多くの
場合には最適であることが解っている。沸騰トリス法が
使用される場合には、サンプルの完全な溶解を行・うべ
（、す゛ンプルは５分以上に亙り１゜０℃以上の温瓜に
て沸騰される。
細胞が溶解され△１” Ｐが解放されると、発光試薬が
添加される。△Ｔ１〕の存在下に於て光を発生する任意
の発光試薬が使用されてよいが、本発明に於てはＰａｃ
ｋａｒｄ ｌ ｎｓｔｒｕｍｅｎＬ Ｃｏ、より販売
されている螢ルシノル−ズールシフ［リンをベースとづ
るＰＩＣＣ）ＺＹＭＥ（登録商標）Ｆが使用されること
が好ましい。上述の如く、フィルタ薄膜上に収集された
＠胞より解放されたすべてのＡＴＰと反応するに充分な
発光試薬が添加される。
添加される。△Ｔ１〕の存在下に於て光を発生する任意
の発光試薬が使用されてよいが、本発明に於てはＰａｃ
ｋａｒｄ ｌ ｎｓｔｒｕｍｅｎＬ Ｃｏ、より販売
されている螢ルシノル−ズールシフ［リンをベースとづ
るＰＩＣＣ）ＺＹＭＥ（登録商標）Ｆが使用されること
が好ましい。上述の如く、フィルタ薄膜上に収集された
＠胞より解放されたすべてのＡＴＰと反応するに充分な
発光試薬が添加される。
例えば直径１３ｍｍ又は２５Ｉ１１１＋１１のフィルタ
Ｓ膜につイテハ、約１６０μｌのＰＩｃＯＺＹＭＥ
Ｆが最適であることが解っている。
Ｓ膜につイテハ、約１６０μｌのＰＩｃＯＺＹＭＥ
Ｆが最適であることが解っている。
濃縮化された細胞を含む薄膜が一般に管内に挿入される
。例えば直径１２ｍｍ、長さ５５ｍｍのポリスチレン管
が特に適していることが解っている。
。例えば直径１２ｍｍ、長さ５５ｍｍのポリスチレン管
が特に適していることが解っている。
またたとえフィルタＳ膜が管の壁に沿って湾曲し又は折
り重なっても、前述の如く発光試薬が添加されれ、ば、
ルミノメータにて光を正確に測定することができること
が解っている。
り重なっても、前述の如く発光試薬が添加されれ、ば、
ルミノメータにて光を正確に測定することができること
が解っている。
本発明に於ては任意のルミノメータが使用されてよいが
、Ｐａｃｋａｒｄ ｌ ｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＣＯ，
より販売されているＰ Ｉｃ０Ｌ ＩＴＥ （登録商標
）モデル６１１２が特に適していることが解っている。
、Ｐａｃｋａｒｄ ｌ ｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＣＯ，
より販売されているＰ Ｉｃ０Ｌ ＩＴＥ （登録商標
）モデル６１１２が特に適していることが解っている。
ＰＩｃＯＺＹＭＥ Ｆ及びＰ Ｉ ＣＯ１，、Ｉ Ｔ
’ Ｉ三ルミノメータを使用りれば、理論的には反応す
る△ＴＰ１分子毎分子光了の光が発生される。
’ Ｉ三ルミノメータを使用りれば、理論的には反応す
る△ＴＰ１分子毎分子光了の光が発生される。
例 １
直径１３ｍｍ及び２５１１１ｍの［ルロース・トリアレ
テート製の薄膜、直径１３ｍｍ及び２５＋ｎｍのセル１
］−スの混合ニスデル製の薄膜、及び直径１３１Ｉ１ｍ
のテフ［ｌンフＣルタの三種類の市販の薄膜〈これらの
薄膜の小孔寸法はすべて０．４５μである）が試験され
た。直径１３ｍｒｎのフィルタ薄膜上には濃度１×１Ｏ
−Ｉ０〜１×１０ モルの４０μｍのＡ ’Ｔ−Ｐが配
置され、直径２５１＋１１１１のフィルタ薄膜上には同
一濃度の８０μｍのΔ１１）が配置され、−でれらのフ
ィルタ薄膜はＰＩＣＯＬＩ’ｒＥ ６１１２ルミノメ
ータ内にて分析リベく、直往１２ｍｍ、長さ５５ｍｍの
ポリスチレン管内に配置された。次いで発光さけるべく
、直径１３ｍｍ及び２５１１１１１１のフィルタ薄膜に
イれぞれ１６０μｍ、３２０μｍのＰＩＣＯＺＹＭＥ
Ｆが添加されに０その結果が第１図に示されている。
テート製の薄膜、直径１３ｍｍ及び２５＋ｎｍのセル１
］−スの混合ニスデル製の薄膜、及び直径１３１Ｉ１ｍ
のテフ［ｌンフＣルタの三種類の市販の薄膜〈これらの
薄膜の小孔寸法はすべて０．４５μである）が試験され
た。直径１３ｍｒｎのフィルタ薄膜上には濃度１×１Ｏ
−Ｉ０〜１×１０ モルの４０μｍのＡ ’Ｔ−Ｐが配
置され、直径２５１＋１１１１のフィルタ薄膜上には同
一濃度の８０μｍのΔ１１）が配置され、−でれらのフ
ィルタ薄膜はＰＩＣＯＬＩ’ｒＥ ６１１２ルミノメ
ータ内にて分析リベく、直往１２ｍｍ、長さ５５ｍｍの
ポリスチレン管内に配置された。次いで発光さけるべく
、直径１３ｍｍ及び２５１１１１１１のフィルタ薄膜に
イれぞれ１６０μｍ、３２０μｍのＰＩＣＯＺＹＭＥ
Ｆが添加されに０その結果が第１図に示されている。
この９１１図より、フィルタ薄膜の種類がＡ Ｔ Ｐの
検出に影響を与えることはなく、またフィルタ薄膜がポ
リスチレン管内に物理的に存在することが反応により発
生する光を検出するＰＩＣＯＬ、ＩＩ［Ｅ ６１１２
の能力に悪影響を及はづものでＧ：ｌＬないことが解る
。
検出に影響を与えることはなく、またフィルタ薄膜がポ
リスチレン管内に物理的に存在することが反応により発
生する光を検出するＰＩＣＯＬ、ＩＩ［Ｅ ６１１２
の能力に悪影響を及はづものでＧ：ｌＬないことが解る
。
例 ２
細胞の数が１ｍｌ当り１．２７Ｘ１０”個である濃度に
て２４ｖ１間培養されたＥＤす（Ｅ ５ｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ ）が殺菌処理された等張の塩類中に希
釈された。三つのフィルタ薄膜、即ち直径４３ｍｍのセ
ルロース製のフィルタ薄膜、直径ｉ３ＩＩ１ｍのセルロ
ースの混合１スプル製のフィルタ薄膜、及び直径１３＋
１１１１１のｉノ［１ン製のフィルタｎ９ ＩＱのそれ
ぞれの］−に４０μｍのＥＤり溶液が添加された。次い
で各フィルタ薄膜が例１の場合と同様管内に配置され、
管内に配置されたフィルタａ膜に４０μｍのＰＩＣＯＥ
Ｘ Ｂが添加された。２分間の培養の後、１６０μｍ
のＰＩＣＯＺＹＭＥ Ｆが添加され、ＰＩＣＯＬＩＴ
Ｅ ６１１２ ルミノメータにて３０秒間に亙り光
の測定が行われた。成る与えられたサンプルに於番ノる
急冷及び：「渉的影響を補正すべく内部基準として４０
μｍの△ＴＰ（１０−７モル）が使用された。第２図に
示された測定結果は内部基準及びブランクに従って補正
された値である。ＩＩは図示の通りであり、グラフ上の
点は三つのフィルタ薄膜についての測定結果の平均値を
示している。
て２４ｖ１間培養されたＥＤす（Ｅ ５ｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ ）が殺菌処理された等張の塩類中に希
釈された。三つのフィルタ薄膜、即ち直径４３ｍｍのセ
ルロース製のフィルタ薄膜、直径ｉ３ＩＩ１ｍのセルロ
ースの混合１スプル製のフィルタ薄膜、及び直径１３＋
１１１１１のｉノ［１ン製のフィルタｎ９ ＩＱのそれ
ぞれの］−に４０μｍのＥＤり溶液が添加された。次い
で各フィルタ薄膜が例１の場合と同様管内に配置され、
管内に配置されたフィルタａ膜に４０μｍのＰＩＣＯＥ
Ｘ Ｂが添加された。２分間の培養の後、１６０μｍ
のＰＩＣＯＺＹＭＥ Ｆが添加され、ＰＩＣＯＬＩＴ
Ｅ ６１１２ ルミノメータにて３０秒間に亙り光
の測定が行われた。成る与えられたサンプルに於番ノる
急冷及び：「渉的影響を補正すべく内部基準として４０
μｍの△ＴＰ（１０−７モル）が使用された。第２図に
示された測定結果は内部基準及びブランクに従って補正
された値である。ＩＩは図示の通りであり、グラフ上の
点は三つのフィルタ薄膜についての測定結果の平均値を
示している。
例 ３
直径１３ ｍｍのポリカーボネートフィルタ薄膜が５ｗ
１ｎｎｅｙノＣルタボールダ内に配置された。次いでフ
ィルタ薄膜がホールダごと圧力釜により殺菌された。ル
アーを先端に取付（プられた殺菌処理された注射器（容
積１〜５００Ｃ）が３ｗ１ｎｎｅｙフイルタホールダに
接続された。プランジャが注射器より引き抜かれ、所望
の体積（０，１〜５Ｑｃｃ）のり′ンブルが注射器内に
導入された。次いでプランジャが注射器に挿入され、溶
液を加圧しつつゆっくりと３ｗ１ｎｎｅｙフイルタに強
制的に通し、これによりフィルタ薄膜上に細胞を濃縮化
さけた。次いでフィルタ薄膜が回収され、細胞が付着し
た側が凹状をなりよう、直径１２ｍｍ、長さ５５ＩＩｌ
ｌＩｌの管内に配置された。フィルタ薄膜上の細胞のカ
ラン１−数が最終的に８．４Ｘ１０’の一定値になるよ
う、特定量のＥコリの希釈液が使用された。次いで１０
０μ！の溶解剤ＰＩＣＯＥＸ Ｂがフィルタ薄膜に添
加された。フィルタ薄膜が室温にて５分間培養された後
、該フィルタ薄膜に１６０μｍのＰＩ ＣＯＺ Ｙ Ｍ
Ｅ ｆ＝が添加サレタ。Ｐ Ｉ ＣＯＺＹＭＥ
Ｆが添加された直後に、管がその内部にフィルタ薄膜が
配置された状態のままルミノメータの検出ヂトンバ内に
配置され、３０秒間にｎり発光応答が測定された。その
結果が二つの測定値の平均値として表１に示されている
。
１ｎｎｅｙノＣルタボールダ内に配置された。次いでフ
ィルタ薄膜がホールダごと圧力釜により殺菌された。ル
アーを先端に取付（プられた殺菌処理された注射器（容
積１〜５００Ｃ）が３ｗ１ｎｎｅｙフイルタホールダに
接続された。プランジャが注射器より引き抜かれ、所望
の体積（０，１〜５Ｑｃｃ）のり′ンブルが注射器内に
導入された。次いでプランジャが注射器に挿入され、溶
液を加圧しつつゆっくりと３ｗ１ｎｎｅｙフイルタに強
制的に通し、これによりフィルタ薄膜上に細胞を濃縮化
さけた。次いでフィルタ薄膜が回収され、細胞が付着し
た側が凹状をなりよう、直径１２ｍｍ、長さ５５ＩＩｌ
ｌＩｌの管内に配置された。フィルタ薄膜上の細胞のカ
ラン１−数が最終的に８．４Ｘ１０’の一定値になるよ
う、特定量のＥコリの希釈液が使用された。次いで１０
０μ！の溶解剤ＰＩＣＯＥＸ Ｂがフィルタ薄膜に添
加された。フィルタ薄膜が室温にて５分間培養された後
、該フィルタ薄膜に１６０μｍのＰＩ ＣＯＺ Ｙ Ｍ
Ｅ ｆ＝が添加サレタ。Ｐ Ｉ ＣＯＺＹＭＥ
Ｆが添加された直後に、管がその内部にフィルタ薄膜が
配置された状態のままルミノメータの検出ヂトンバ内に
配置され、３０秒間にｎり発光応答が測定された。その
結果が二つの測定値の平均値として表１に示されている
。
表 １
８．４Ｘ １０’個の細胞を 発光応答含むサン
プルの体積 土拉ント、′３０秒）４０μｍ
２５０．５１１３ｍｌ ２５４
．９７ｂ１０ ｍｌ、 ２５５．０４３５
０ ｍｌ ２ ／１．０．５１４例
４ 直径２５’ｍｎｌのポリカーボネートフィルタ薄膜がポ
リスルホン製のツイスト［ｌツク型のフィルタロートの
支持スクリーン上に配置された、フィルタロートの十部
部材はそのベースに捩りにより固定された。フィルタ簿
膜が［１−トごとｆｆ力釜により殺菌され、真空フラス
コ上に配置された。所望の体積（２００ｍｌまｒ）の−
ナンブルが１＝１−１〜内に導入された。す′ンブルが
フィルタ薄膜により一過されるようフラスニ１内が減圧
された。濾過液がフラスコ内に収集され、頼１胞がフィ
ルタ薄膜上に捕捉された。フィルタローＥ−の上部部材
がフィルタロートのベースより分解され、フィルタ薄膜
が回収され、細胞が付着した側が凹状をなすよう上述の
例３の場合と同様直径１２ｍｍ、長さ５５＋＋＋ｍのポ
リスｆ−レン管内に配置された。次いで例３の場合と同
様溶解剤及び発光試薬が添加された。次いで例３の場合
と同様、フーｆルタＮｌ１９上の細胞のカウント数が最
終的に約８．／１．ｘ１ｏ４の値となるよう、濾過され
た特定量の［］り希釈液が使用された。
プルの体積 土拉ント、′３０秒）４０μｍ
２５０．５１１３ｍｌ ２５４
．９７ｂ１０ ｍｌ、 ２５５．０４３５
０ ｍｌ ２ ／１．０．５１４例
４ 直径２５’ｍｎｌのポリカーボネートフィルタ薄膜がポ
リスルホン製のツイスト［ｌツク型のフィルタロートの
支持スクリーン上に配置された、フィルタロートの十部
部材はそのベースに捩りにより固定された。フィルタ簿
膜が［１−トごとｆｆ力釜により殺菌され、真空フラス
コ上に配置された。所望の体積（２００ｍｌまｒ）の−
ナンブルが１＝１−１〜内に導入された。す′ンブルが
フィルタ薄膜により一過されるようフラスニ１内が減圧
された。濾過液がフラスコ内に収集され、頼１胞がフィ
ルタ薄膜上に捕捉された。フィルタローＥ−の上部部材
がフィルタロートのベースより分解され、フィルタ薄膜
が回収され、細胞が付着した側が凹状をなすよう上述の
例３の場合と同様直径１２ｍｍ、長さ５５＋＋＋ｍのポ
リスｆ−レン管内に配置された。次いで例３の場合と同
様溶解剤及び発光試薬が添加された。次いで例３の場合
と同様、フーｆルタＮｌ１９上の細胞のカウント数が最
終的に約８．／１．ｘ１ｏ４の値となるよう、濾過され
た特定量の［］り希釈液が使用された。
その結果が表２に示されている。
表 ２
８．４ｘ １０’個の細胞を 発光応答含むリー
ンプルのｌＡ槓 （カウント、’３０秒）４０μ＋
２９８．６８８２５ ｍｌ
２７７．３０１５０ ｍｌ ３４
６．６６０１００ ｍｌ ２１８．４２
９２００ ｍｌ ２３５．２７０表１及
び表２に於ける結果は種々の体積のサンプルより種々の
線通装置を用いてバクテリアの濃度を増大させ得ること
を示している。表１及び表２の１へてのｊ′−夕より得
られる発光応答の変動の相関は約１６％である。
ンプルのｌＡ槓 （カウント、’３０秒）４０μ＋
２９８．６８８２５ ｍｌ
２７７．３０１５０ ｍｌ ３４
６．６６０１００ ｍｌ ２１８．４２
９２００ ｍｌ ２３５．２７０表１及
び表２に於ける結果は種々の体積のサンプルより種々の
線通装置を用いてバクテリアの濃度を増大させ得ること
を示している。表１及び表２の１へてのｊ′−夕より得
られる発光応答の変動の相関は約１６％である。
例 ５
２Ｘ１０’〜２Ｘ１０６のＥコリ細胞を含む４０μ）の
サンプル溶液が直径１３１１１１１１のポリカーボネー
トフィルタ薄膜に一通されることにより一過された。細
胞は１００μｍのＰＩＣＯＥＸ Ｂにて溶解され、こ
れににり解放されたＡ［Ｐが１６０μｍのＰＩＣｏ７Ｙ
Ｍ［Ｅ Ｆど反応ｕしめられた。
サンプル溶液が直径１３１１１１１１のポリカーボネー
トフィルタ薄膜に一通されることにより一過された。細
胞は１００μｍのＰＩＣＯＥＸ Ｂにて溶解され、こ
れににり解放されたＡ［Ｐが１６０μｍのＰＩＣｏ７Ｙ
Ｍ［Ｅ Ｆど反応ｕしめられた。
２．５Ｘ１０ｂ〜２．５Ｘ１０８の［コリ細胞を含むＱ
、５１ＩｌｌのＩＪンプル溶液が４．５１の１〜リス−
ＥＤＴ△（エヂレ゛・・ジアミン・デトラ・酢！Ｓりを
含イｑ−４る溶液を混合され、１００℃にて少なくとも
５分間沸騰された。次いで４０μｍのこの混合液が直径
１３ｍｍのポリカーボネート薄膜上に配置され、該簿膜
上にて１６０μｍのＰ Ｉ ＣＯＺＹＭＩＥＦと反応Ｖ
しめられた。これらのナンプルについてルミノメータに
て３０秒間カウントされた結果の比較が第３図に示され
ている。
、５１ＩｌｌのＩＪンプル溶液が４．５１の１〜リス−
ＥＤＴ△（エヂレ゛・・ジアミン・デトラ・酢！Ｓりを
含イｑ−４る溶液を混合され、１００℃にて少なくとも
５分間沸騰された。次いで４０μｍのこの混合液が直径
１３ｍｍのポリカーボネート薄膜上に配置され、該簿膜
上にて１６０μｍのＰ Ｉ ＣＯＺＹＭＩＥＦと反応Ｖ
しめられた。これらのナンプルについてルミノメータに
て３０秒間カウントされた結果の比較が第３図に示され
ている。
例 ６
発光応答を最適化づべく、８．４ｘ１０’のＥコリを含
４５するサンプルに対し、種々の但のＰＩＣＯＺＹＭＥ
Ｆが添加された。この試験の結果が第４図に示され
ている。
４５するサンプルに対し、種々の但のＰＩＣＯＺＹＭＥ
Ｆが添加された。この試験の結果が第４図に示され
ている。
例 ７
８．４ｘ１０’のＥコリを含有するサンプルについて、
フィルタハリ膜を用いて種々の時間に亙り培養ずべく
Ｉ） Ｉ ＣＯＥ Ｘ Ｂ溶解剤が添加された。
フィルタハリ膜を用いて種々の時間に亙り培養ずべく
Ｉ） Ｉ ＣＯＥ Ｘ Ｂ溶解剤が添加された。
その結果が第５図に示されている。
例 ８
三種類のレベル（Δ−２Ｘ１０４ 、 Ｂ＝２Ｘ１０”
、Ｃ＝２Ｘ１０” ）の［コリを含有りるサンプルに
ついて、種々の吊のＰＩＣＯＥＸ Ｂがフィルタ薄膜
に添加された。その結果が第６図及び第７図に示されて
いる。
、Ｃ＝２Ｘ１０” ）の［コリを含有りるサンプルに
ついて、種々の吊のＰＩＣＯＥＸ Ｂがフィルタ薄膜
に添加された。その結果が第６図及び第７図に示されて
いる。
例 ９
フィルタ薄膜」−のＥコリの旬を変化させて、ＰＩＣＯ
ＺＹＭＥ Ｆが添加された後に於ける時間と発光応答
の関係が測定された。その結果が第８図に示され−（い
る。
ＺＹＭＥ Ｆが添加された後に於ける時間と発光応答
の関係が測定された。その結果が第８図に示され−（い
る。
上述の６例の結果より、約１００μｍの溶解剤（ＰＩＣ
ＯＥＸ Ｂ）にｒ細胞を約５〜３０分間培養し、しか
る後約１６０μｌの発光試薬＜ｐ＋ＣＯＺ Ｙ Ｍ Ｆ
Ｅ Ｆ ＞にて処理し、ルミノメータにで５〜３０秒
間発光応答を測定することが最も好ましいことが解る（
（Ｈｔ、これに限定されるものではない）。
ＯＥＸ Ｂ）にｒ細胞を約５〜３０分間培養し、しか
る後約１６０μｌの発光試薬＜ｐ＋ＣＯＺ Ｙ Ｍ Ｆ
Ｅ Ｆ ＞にて処理し、ルミノメータにで５〜３０秒
間発光応答を測定することが最も好ましいことが解る（
（Ｈｔ、これに限定されるものではない）。
上）本の方法と同様の方法がイースト菌専白血球の検出
に対し適用されてよい。
に対し適用されてよい。
例 １０
種々（ＤｌｖＳ（５〜５００００） （７）−ｉ’−ス
ｔ−ｉｎ （ＳａＣＣ１ｌａｌ’０ｎ１１７ＣＯＳｉ
ｃｅｌ’ｅＶｉＳｉａＯ）細胞を含イｊりる１０μｍ
の溶液が直ｉ￥１３ｍｍのポリカーボネー１〜薄膜に添
加され、１０μｍのＰ Ｉ ＣＯＥ Ｘ ｎに−（５
分間処理されＩ、二接、その薄膜に５０μＩのＰＩＣＯ
Ｚ Ｙ Ｍ Ｅ Ｆが添加されることにＪ、り発光せ
しめられた。その結果が第９図に示されている。
ｔ−ｉｎ （ＳａＣＣ１ｌａｌ’０ｎ１１７ＣＯＳｉ
ｃｅｌ’ｅＶｉＳｉａＯ）細胞を含イｊりる１０μｍ
の溶液が直ｉ￥１３ｍｍのポリカーボネー１〜薄膜に添
加され、１０μｍのＰ Ｉ ＣＯＥ Ｘ ｎに−（５
分間処理されＩ、二接、その薄膜に５０μＩのＰＩＣＯ
Ｚ Ｙ Ｍ Ｅ Ｆが添加されることにＪ、り発光せ
しめられた。その結果が第９図に示されている。
例 １１
成る一定用のイースト菌を含有覆る徐々に増大りる吊の
溶液（イースト菌細胞の量が１１当り５０００個Ｃある
１ｍｌの溶液からイースト菌細胞の量が１ｍｌ当り２５
個である２００１の溶液まで〉が直径１３ｍｍ又は２５
ｍｍのポリカーボネート薄膜に通されることによって濾
過された。薄膜上に捕捉された細胞が１００μｍのＰＩ
ＣＯＦＸ Ｂにて５分間溶解され、同様の発光応答を
生ずるよ・う１６０１のｐｒＣＯＺＹＭＦ Ｆが添加
サレタ。
溶液（イースト菌細胞の量が１１当り５０００個Ｃある
１ｍｌの溶液からイースト菌細胞の量が１ｍｌ当り２５
個である２００１の溶液まで〉が直径１３ｍｍ又は２５
ｍｍのポリカーボネート薄膜に通されることによって濾
過された。薄膜上に捕捉された細胞が１００μｍのＰＩ
ＣＯＦＸ Ｂにて５分間溶解され、同様の発光応答を
生ずるよ・う１６０１のｐｒＣＯＺＹＭＦ Ｆが添加
サレタ。
その結果が−１・記の表３３に示されている。
表 ３
発光応答
リンプルの体積 （カウントｘｌＯ’、／３０秒）
１μｍ菱 １．８０ ５ｎ１１簀 １．４３ １０ｍ１蒼 ０．９２ ５０ ｔｉｌｌ １１” １．６９２０
０ｍ１蒼憂 １，３３’ ５ｗ１ｎｎｅｙ
−ノイルタ、直径１３ｎｍの薄股蒼’ Ｇ ｅｌｍａｎ
ａ −トフＣルタ、直径２５ｎ＋ｍの薄膜例 １２ Ｆ １ｃｏｌｌ Ｒｅｎｏｇｒａｐｂｉｎ成分遠心分離
法にて人の白液より分げｔされたサンプルの白血球細胞
＜ＷＢＣ）の全成分は、１０μｍのサポニンをベースと
するＰ［Ｃ０ＥＸ（Ｑ録商標） Ｓ （Ｐ ａｃｋａｒ
ｄ １１１Ｓｔｌ’ＬｌｌＩ１０１１ｔ ＣＯｏ）に
て５分間分解した後直径１３ｍｍの薄膜にて濾過された
細胞に５０μｍのＰＩＣＯＺ Ｙ Ｍ Ｅ Ｆを添加
づることによって発光させることにより、Ｐ Ｉ ＣＯ
Ｌ Ｉ ｌ−Ｅ、のモデル６′１１２ルミノメータにて
分析され得る。リーアな検出範囲は１回の分析当り５０
〜５００００個の生存細胞の範囲である。この点に関し
第１０図を参照されたい。
１μｍ菱 １．８０ ５ｎ１１簀 １．４３ １０ｍ１蒼 ０．９２ ５０ ｔｉｌｌ １１” １．６９２０
０ｍ１蒼憂 １，３３’ ５ｗ１ｎｎｅｙ
−ノイルタ、直径１３ｎｍの薄股蒼’ Ｇ ｅｌｍａｎ
ａ −トフＣルタ、直径２５ｎ＋ｍの薄膜例 １２ Ｆ １ｃｏｌｌ Ｒｅｎｏｇｒａｐｂｉｎ成分遠心分離
法にて人の白液より分げｔされたサンプルの白血球細胞
＜ＷＢＣ）の全成分は、１０μｍのサポニンをベースと
するＰ［Ｃ０ＥＸ（Ｑ録商標） Ｓ （Ｐ ａｃｋａｒ
ｄ １１１Ｓｔｌ’ＬｌｌＩ１０１１ｔ ＣＯｏ）に
て５分間分解した後直径１３ｍｍの薄膜にて濾過された
細胞に５０μｍのＰＩＣＯＺ Ｙ Ｍ Ｅ Ｆを添加
づることによって発光させることにより、Ｐ Ｉ ＣＯ
Ｌ Ｉ ｌ−Ｅ、のモデル６′１１２ルミノメータにて
分析され得る。リーアな検出範囲は１回の分析当り５０
〜５００００個の生存細胞の範囲である。この点に関し
第１０図を参照されたい。
例 １ こ〉
既知１ｆｔ（２，５Ｘ１０３＞の白血球細胞を含有する
溶液が直径１３ｍｍ又は２５ｍｍのポリカーボネート薄
膜に通されることによって濾過され、前述の実施例１１
の場合と同様の要領にで分析された。
溶液が直径１３ｍｍ又は２５ｍｍのポリカーボネート薄
膜に通されることによって濾過され、前述の実施例１１
の場合と同様の要領にで分析された。
濃縮化方法（３ｗｔｎｎｅｙ〕ｒルタホールダ又はロー
トフィルタ）及びリンプルの体積（１〜２００ｍ１）に
拘らず、薄膜Ｊ−に収集された細胞が発光せしめられる
場合には同−吊の発光応答が得１うれる。この点に関し
下記の表４を参照されたい。
トフィルタ）及びリンプルの体積（１〜２００ｍ１）に
拘らず、薄膜Ｊ−に収集された細胞が発光せしめられる
場合には同−吊の発光応答が得１うれる。この点に関し
下記の表４を参照されたい。
表 ４
発光応答
サンプルの体積 （カウントＸ１０６／３０秒）１
μｍ蒼 ０．３５ ５ ｍ１畳 ０．３６ １０ｎ＋ｌ菱 ０．３３ ５０１簀畳 ０．３４ ２００ ｍｌ 菱簀ｏ、 ４２ 畳３ｗｉ＋＋＋＋ｅｙフィルタ、直径１３１ＮＩｌｌの
Ｍ膜チ蒼Ｑ ｅｌｍａｌｌ ｌ：Ｉ −１−フィルタ、
直径２５ｍｍ以上の説明より、本発明によれば細胞を検
出する比較的簡単で迅速な方法が得られるだけでなく、
微小量の細胞しか舎イｉしないサンプルを迅速に濃縮化
して正確な測定を実施づることができる。例えば本発明
によれば１ｍｌ当りｌＸ１０５個以下の細胞しか含有し
ないサンプルについても測定が可能である。更に、５０
０個以下の細胞しか含有しでいないリンプル（［コリの
場合）及び更には約１０個程麿の細胞しか含有していな
いサンプル（イースｔ〜閑の場合）についても本発明に
よれば検出が可能である。本発明にＪ、れば非常に簡便
な分析方法であるという追加の利点が得られる。本発明
は飲料水やワーｒンイースト含有液の如き液体内のバク
テリア、クーリングタワーの水内の生物、油田の濡出溶
液中の生物、ジェット燃料や潤滑油の如き石油製品中の
生物（これらの何れに於てもその効率的な使用のための
微生物に関４る成る一定の限度がある）を測定りるに４
１用な方法ぐある（但しこれらに限定されるものではな
い）。
μｍ蒼 ０．３５ ５ ｍ１畳 ０．３６ １０ｎ＋ｌ菱 ０．３３ ５０１簀畳 ０．３４ ２００ ｍｌ 菱簀ｏ、 ４２ 畳３ｗｉ＋＋＋＋ｅｙフィルタ、直径１３１ＮＩｌｌの
Ｍ膜チ蒼Ｑ ｅｌｍａｌｌ ｌ：Ｉ −１−フィルタ、
直径２５ｍｍ以上の説明より、本発明によれば細胞を検
出する比較的簡単で迅速な方法が得られるだけでなく、
微小量の細胞しか舎イｉしないサンプルを迅速に濃縮化
して正確な測定を実施づることができる。例えば本発明
によれば１ｍｌ当りｌＸ１０５個以下の細胞しか含有し
ないサンプルについても測定が可能である。更に、５０
０個以下の細胞しか含有しでいないリンプル（［コリの
場合）及び更には約１０個程麿の細胞しか含有していな
いサンプル（イースｔ〜閑の場合）についても本発明に
よれば検出が可能である。本発明にＪ、れば非常に簡便
な分析方法であるという追加の利点が得られる。本発明
は飲料水やワーｒンイースト含有液の如き液体内のバク
テリア、クーリングタワーの水内の生物、油田の濡出溶
液中の生物、ジェット燃料や潤滑油の如き石油製品中の
生物（これらの何れに於てもその効率的な使用のための
微生物に関４る成る一定の限度がある）を測定りるに４
１用な方法ぐある（但しこれらに限定されるものではな
い）。
以上に於ては本発明を秤々の実施例についてｉ１細に説
明したが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はなく、本発明の範囲内にて種々の実施例が可能である
ことは当業名にとって明らかであろう。
明したが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はなく、本発明の範囲内にて種々の実施例が可能である
ことは当業名にとって明らかであろう。
第１図は種々の薄膜月利上に−（発生し検出された発光
応答を示りグラフである。 第２図はバクテリアのＵ」と発光ｍｌどの相関関係を示
すグラフである。 第３図は分解り法による発光応答の相違を比較して承り
グラフである。 第４図は発光応答に与える発光試薬のｍの影響を示寸グ
ラノである。 第５図は発光応答に与えるサンプルの溶解剤添加後の培
養時間の影響を承りグラフである。 １６図及び第７図は発光応答にｊ）える溶解剤の吊の影
響を示すグラフである。 第８図はバクテリアの量の相違による発光応答の相違を
承りグラフである。 第９図はイースト菌の量と発光応答との相関関係を示づ
グラフである。 第１０図は人体の白血球の但ど発光応答との相関関係を
示寸グラフである。 特許出願人 二［： ｌ？ラックスグループ・インコ
ーホレイデッド 代 即 人 弁 理 士 明
石 昌 毅Ａ ７ Ｐｃ；す２ｐ−ＪＩ８ ；メ艮
、？萱ヨ （（＋すＩＧｉ フィルタ４ｆｉＬ上の［コ゛ハ釈田Ｒ乙の４文、ＦＩＧ
、５ ＦＩＧ、 ６ ＰＬＣＯＥＸ Ｂ（ｙ、ｌ＞ ＦＩＧ、７ フィルり１用しＬめａコツ−ｆｉ已○牧ＦＩＧ、θ 吋 閏 （ネ′））
応答を示りグラフである。 第２図はバクテリアのＵ」と発光ｍｌどの相関関係を示
すグラフである。 第３図は分解り法による発光応答の相違を比較して承り
グラフである。 第４図は発光応答に与える発光試薬のｍの影響を示寸グ
ラノである。 第５図は発光応答に与えるサンプルの溶解剤添加後の培
養時間の影響を承りグラフである。 １６図及び第７図は発光応答にｊ）える溶解剤の吊の影
響を示すグラフである。 第８図はバクテリアの量の相違による発光応答の相違を
承りグラフである。 第９図はイースト菌の量と発光応答との相関関係を示づ
グラフである。 第１０図は人体の白血球の但ど発光応答との相関関係を
示寸グラフである。 特許出願人 二［： ｌ？ラックスグループ・インコ
ーホレイデッド 代 即 人 弁 理 士 明
石 昌 毅Ａ ７ Ｐｃ；す２ｐ−ＪＩ８ ；メ艮
、？萱ヨ （（＋すＩＧｉ フィルタ４ｆｉＬ上の［コ゛ハ釈田Ｒ乙の４文、ＦＩＧ
、５ ＦＩＧ、 ６ ＰＬＣＯＥＸ Ｂ（ｙ、ｌ＞ ＦＩＧ、７ フィルり１用しＬめａコツ−ｆｉ已○牧ＦＩＧ、θ 吋 閏 （ネ′））
Claims (1)
- サンプル中の７デノシン・トリ１１−スフ■−トを含む
単５ｔｕ１生物の濃度を測定する方法にして、前記生物
に対する不透過性を右４るフィルタ薄膜に前記サンプル
を通づことにより前記生物を濃縮化し、濃縮化された生
物を含む前記フィルタ薄膜を溶解剤にて処理して前記生
物より前記アデノシン・トリホスフ［−トを解放さけ、
発光試薬を添加して前記解放されＩ、：アデノシン・ト
リホスフェートと反応させ、これにより前記フィルタ薄
膜上に直接発光応答を発生させ、ルミノメータにて前記
発光応答を測定づることを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US40055682A | 1982-07-21 | 1982-07-21 | |
| US400556 | 1999-09-21 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59113899A true JPS59113899A (ja) | 1984-06-30 |
Family
ID=23584076
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13423183A Pending JPS59113899A (ja) | 1982-07-21 | 1983-07-21 | 単細胞生物の濃度測定方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0101398B1 (ja) |
| JP (1) | JPS59113899A (ja) |
| AU (1) | AU1712383A (ja) |
| CA (1) | CA1201963A (ja) |
| DE (1) | DE3364184D1 (ja) |
| FI (1) | FI832641A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPS62121331A (ja) * | 1985-11-21 | 1987-06-02 | Johoku Ika Kiki Seisakusho:Kk | 顕微鏡観察用標本及びその作成器具 |
| JPH0257197A (ja) * | 1988-02-03 | 1990-02-26 | Japan Organo Co Ltd | 生菌の定量法 |
| JPH0430798A (ja) * | 1990-05-28 | 1992-02-03 | Fuji Electric Co Ltd | 生菌計数方法およびその装置 |
| USRE38863E1 (en) | 1995-02-03 | 2005-11-01 | Ruy Tchao | Chemotaxis assay procedure |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE439927B (sv) * | 1984-02-10 | 1985-07-08 | Sangtec Medical Ab | Apparat och forfarande for registrering av bakterieforekomst, speciellt under feltmessiga forhallanden |
| GB8513001D0 (en) * | 1985-05-22 | 1985-06-26 | Wales University Of College Of | Bacterial cell extractant |
| IL85948A0 (en) * | 1987-04-08 | 1988-09-30 | Cambridge Bioscience Corp | Method and kit for detecting bacteria or fungi |
| DK258787D0 (da) * | 1987-05-21 | 1987-05-21 | Foss Electric As N | Fremgangsmaade til bestemmelse af bakteriekoncentration i en proeve |
| SE8703675L (sv) * | 1987-09-23 | 1989-03-24 | Life Science International Ab | Luminometrisk analys paa cellulaert atp |
| GB9026538D0 (en) * | 1990-12-06 | 1991-01-23 | Knight Scient Ltd | Filtration arrangement |
| FI93742C (fi) * | 1992-10-23 | 1995-05-26 | Elias Hakalehto | Menetelmä ja laite solujen osoittamiseksi |
| GB9405392D0 (en) * | 1994-03-18 | 1994-05-04 | Secr Defence | Microorganism detection apparatus and method |
| GB2293878A (en) * | 1994-10-06 | 1996-04-10 | Stephen John Shore | Monitoring biocide content of industrial waters |
| GB9420486D0 (en) * | 1994-10-11 | 1994-11-23 | Whitlock Hughes Ltd | Method of and apparatus for measuring contamination |
| EP0841403A3 (en) * | 1996-11-08 | 1998-07-29 | Idemitsu Kosan Company Limited | Coloring composition for microorganisms, filter tool for entrapping bacteria, and kit for measuring the number of bacteria |
| DE19841588A1 (de) * | 1998-09-11 | 2000-03-23 | Nitzsche Frank | Verfahren zum Nachweis von Zellen in einer Probe |
| FR2877070B1 (fr) * | 2004-10-22 | 2007-01-26 | Saint Gobain Pam Sa | Jonc de verrouillage segmente, assemblage et procede de montage correspondants |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2172041A1 (en) * | 1972-02-18 | 1973-09-28 | Kronenbourg Brasseries | Detecting live microorganisms in beer etc - by radio assay |
| US4283490A (en) * | 1978-07-28 | 1981-08-11 | Plakas Chris J | Method for detection of low level bacterial concentration by luminescence |
| US4336337A (en) * | 1978-09-25 | 1982-06-22 | Baylor College Of Medicine | Detection of bacteria |
-
1983
- 1983-07-15 DE DE8383630116T patent/DE3364184D1/de not_active Expired
- 1983-07-15 EP EP83630116A patent/EP0101398B1/en not_active Expired
- 1983-07-20 AU AU17123/83A patent/AU1712383A/en not_active Abandoned
- 1983-07-20 FI FI832641A patent/FI832641A/fi not_active Application Discontinuation
- 1983-07-21 JP JP13423183A patent/JPS59113899A/ja active Pending
- 1983-07-21 CA CA000432916A patent/CA1201963A/en not_active Expired
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62121331A (ja) * | 1985-11-21 | 1987-06-02 | Johoku Ika Kiki Seisakusho:Kk | 顕微鏡観察用標本及びその作成器具 |
| JPH0257197A (ja) * | 1988-02-03 | 1990-02-26 | Japan Organo Co Ltd | 生菌の定量法 |
| JPH0430798A (ja) * | 1990-05-28 | 1992-02-03 | Fuji Electric Co Ltd | 生菌計数方法およびその装置 |
| USRE38863E1 (en) | 1995-02-03 | 2005-11-01 | Ruy Tchao | Chemotaxis assay procedure |
| USRE40747E1 (en) | 1995-02-03 | 2009-06-16 | Ruy Tchao | Chemotaxis assay procedure |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU1712383A (en) | 1984-01-26 |
| EP0101398A1 (en) | 1984-02-22 |
| FI832641A0 (fi) | 1983-07-20 |
| EP0101398B1 (en) | 1986-06-18 |
| DE3364184D1 (en) | 1986-07-24 |
| CA1201963A (en) | 1986-03-18 |
| FI832641A (fi) | 1984-01-22 |
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