JPS5881781A - 動物細胞の培養方法 - Google Patents
動物細胞の培養方法Info
- Publication number
- JPS5881781A JPS5881781A JP56180882A JP18088281A JPS5881781A JP S5881781 A JPS5881781 A JP S5881781A JP 56180882 A JP56180882 A JP 56180882A JP 18088281 A JP18088281 A JP 18088281A JP S5881781 A JPS5881781 A JP S5881781A
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- JP
- Japan
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- culture
- carbon dioxide
- cells
- cultivation tank
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- Pending
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は動物細胞の培養方法１こ関する。
動物細胞にはガラス面等ｔこ付着して生育し単層培養さ
れる細胞と浮遊状態で生育し浮遊培養される細胞がある
。前者には上皮性細胞、線維芽細胞等が含まれ、後者に
はリンパ芽球様細胞、赤芽球様細胞、腹水ガン細胞等が
含まれる（「組織培養」、中井準之助他編、朝食書店、
１９７０年）。近年インターフェロン等の生産にこれら
そのうち、培養中のｐＨ制御會こ関しては、■ Ｎ ａ
ＨＣＯＢを添加した培地に適当量の炭酸ガスを吹き込
みｐｌ（７，０付近ｔこ調製した後、密栓状態で培養を
続ける、 ■ 適当量のＮ ａ １（ＣＯｓを含む培地に細胞を接
種後、炭酸ガス濃度５％１こ調製した空気気流下１こ培
養を続ける、 等の方法がとられている。
れる細胞と浮遊状態で生育し浮遊培養される細胞がある
。前者には上皮性細胞、線維芽細胞等が含まれ、後者に
はリンパ芽球様細胞、赤芽球様細胞、腹水ガン細胞等が
含まれる（「組織培養」、中井準之助他編、朝食書店、
１９７０年）。近年インターフェロン等の生産にこれら
そのうち、培養中のｐＨ制御會こ関しては、■ Ｎ ａ
ＨＣＯＢを添加した培地に適当量の炭酸ガスを吹き込
みｐｌ（７，０付近ｔこ調製した後、密栓状態で培養を
続ける、 ■ 適当量のＮ ａ １（ＣＯｓを含む培地に細胞を接
種後、炭酸ガス濃度５％１こ調製した空気気流下１こ培
養を続ける、 等の方法がとられている。
ところが、上記■及び■の方法では、培養液のｐＨは、
特１こ細胞の生育が盛んｔこなると所望の値に維持でき
ないという問題があった。
特１こ細胞の生育が盛んｔこなると所望の値に維持でき
ないという問題があった。
そこで本発明者らは、動物細胞の培養により適した培養
液ｐｔｉの調節方法を開発すべく研究し、つい１こ培養
槽内の気相炭酸ガス濃度を調節することＶこより、動物
細胞に損傷等を与えることな゛く、しかも極吟て簡易な
方法で培養液のｐＨを調節できることを知った。
液ｐｔｉの調節方法を開発すべく研究し、つい１こ培養
槽内の気相炭酸ガス濃度を調節することＶこより、動物
細胞に損傷等を与えることな゛く、しかも極吟て簡易な
方法で培養液のｐＨを調節できることを知った。
即ち、本発明は、培養液のｐＨが所定の値より低いとき
１こは培養槽内気相の炭酸ガス濃度を低くし、培養液の
ｐＨが所定の値より高いときには培養槽内気相の炭酸ガ
ス濃度を高くすることを特徴とする動物細胞の培養方法
である。
１こは培養槽内気相の炭酸ガス濃度を低くし、培養液の
ｐＨが所定の値より高いときには培養槽内気相の炭酸ガ
ス濃度を高くすることを特徴とする動物細胞の培養方法
である。
本発明の培養方法ｔこよって培養される動物細胞は浮遊
培養系、単層培養系の両者が含まれる。特ｔこ本発明の
培養方法は、種々の白血病細胞（リンパ芽球様細胞１．
赤芽球様細胞等）、腹水ガン細胞等の浮遊性細胞の大量
培養１こ適している。
培養系、単層培養系の両者が含まれる。特ｔこ本発明の
培養方法は、種々の白血病細胞（リンパ芽球様細胞１．
赤芽球様細胞等）、腹水ガン細胞等の浮遊性細胞の大量
培養１こ適している。
培養液のｐＨは、ｐＨ電極會こより測定するが、場合１
こよっては、培地１こｐＨ指示薬を添加して、ｐＨ指示
薬により測定してもよい。
こよっては、培地１こｐＨ指示薬を添加して、ｐＨ指示
薬により測定してもよい。
培養槽としては、攪拌装置がついたもの、ガラス製の培
養器等、いずれでもよい。
養器等、いずれでもよい。
培養槽内気相炭酸ガス濃度は、夢は培養液のｐＨを調節
するために増減すればよいので、必らずしも測定する必
要はないが、通常の方法により適宜測定しておくのがよ
り好ましい。
するために増減すればよいので、必らずしも測定する必
要はないが、通常の方法により適宜測定しておくのがよ
り好ましい。
培養槽内気相の炭酸ガス濃度を増減することによる培養
液のｐＴ（の調節は、オン−オフ制御でよいが、ＰＩＤ
制御でもよい。
液のｐＴ（の調節は、オン−オフ制御でよいが、ＰＩＤ
制御でもよい。
培養槽内炭酸ガス濃度を変化せしめるンこは空気、炭酸
ガス、酸素ガス、窒素ガス等を単独又は適宜混合して培
養槽内？こ導入すればよい。気相中の炭酸ガス濃度を変
化させることにより培養液の溶存酸素分圧が変化し細胞
増殖が影響を受ける場合は別に酸素を培養槽内に導入す
る。
ガス、酸素ガス、窒素ガス等を単独又は適宜混合して培
養槽内？こ導入すればよい。気相中の炭酸ガス濃度を変
化させることにより培養液の溶存酸素分圧が変化し細胞
増殖が影響を受ける場合は別に酸素を培養槽内に導入す
る。
動物細胞を培養する培地は、通常の培地に適当量の血清
およびＮａＨＣＯ３を添加した培地で良い。
およびＮａＨＣＯ３を添加した培地で良い。
例えば、Ｅ−ＭＥＭ （ＥａｇｌｅＫ ｍｉｎｉｍｕｍ
ｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｄｉｕｍ ）＋ Ｄ−’ＭＥ
Ｍ （Ｄｕｌｂｅｃｃｏ ｍｏｄｉｔ［ｅｄＥａｇｌｅ
ｔ ｍｉｎｉｍｕｍ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕ
ｍ ） ＋ ＲＰＭ １１６４０（Ｒｏｓｗｅｌｌ−
ＰａｒｋＭｅｍｏｒｉａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ１６４０
）Ｄ−ＭＥＭを改変し無血清状態で細胞生育を可能に
したＲＩ’ｒｃ５ｓ−９（日本免疫学会網、免疫実験操
作法■、３０５８頁、１９８０）等である。
ｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｄｉｕｍ ）＋ Ｄ−’ＭＥ
Ｍ （Ｄｕｌｂｅｃｃｏ ｍｏｄｉｔ［ｅｄＥａｇｌｅ
ｔ ｍｉｎｉｍｕｍ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕ
ｍ ） ＋ ＲＰＭ １１６４０（Ｒｏｓｗｅｌｌ−
ＰａｒｋＭｅｍｏｒｉａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅ１６４０
）Ｄ−ＭＥＭを改変し無血清状態で細胞生育を可能に
したＲＩ’ｒｃ５ｓ−９（日本免疫学会網、免疫実験操
作法■、３０５８頁、１９８０）等である。
培養方法は通常の静置培養、回転培養、攬、袢培養、旋
回培養のいずれの方法でも良い。
回培養のいずれの方法でも良い。
培養液のｐＨは、特１こ培養される動物細胞により異な
るが、通常６．５〜７．５の範囲内である。
るが、通常６．５〜７．５の範囲内である。
培養温度は通常−編〜−Ｃの範囲が好ましい。
７
実施例１
ヒ）ｔｉｌｌ帯血リンパ球由来リンパ芽球様細胞を、Ｒ
ＩＴＣ５５−９培地７００＊／ｌこ細胞数１４〜５Ｘ１
０６個／ＩＩ＋／になるようｔこけん濁した。これを１
００−容のガラス製スゼンナーボトル（ＧＩＢＣＯ製）
（培養槽）で攪拌速度１５０ ｒｐｍ、 ３’７ Ｃ恒
温で培養を行なった。
ＩＴＣ５５−９培地７００＊／ｌこ細胞数１４〜５Ｘ１
０６個／ＩＩ＋／になるようｔこけん濁した。これを１
００−容のガラス製スゼンナーボトル（ＧＩＢＣＯ製）
（培養槽）で攪拌速度１５０ ｒｐｍ、 ３’７ Ｃ恒
温で培養を行なった。
ｐＨの測定は、あらかじめスピンナーボトル１こ設置し
たｐＨ電極により行った。スピンナーボトル内気相には
炭酸ガスボンベより炭酸ガスが導入できるようにし、導
入管にはｐＨ電極からの信号？こより開閉する電磁弁を
設け、ｐＨ変化が生じた場合一定時間電磁弁が開き、一
定時間放置後ｐＨ調節が不充分ならばさらに同じ操作を
繰返すようタイマーでセットした。
たｐＨ電極により行った。スピンナーボトル内気相には
炭酸ガスボンベより炭酸ガスが導入できるようにし、導
入管にはｐＨ電極からの信号？こより開閉する電磁弁を
設け、ｐＨ変化が生じた場合一定時間電磁弁が開き、一
定時間放置後ｐＨ調節が不充分ならばさらに同じ操作を
繰返すようタイマーでセットした。
即ち、ｐＨが７．２より−Ｌ昇すると炭酸ガスが３０１
１＊／／分で５秒間培養槽ｔこ送られ、さらに２０秒後
ｐＴ（’が７．２以下にならない場合、再度向の細胞生
育ｔこ及ぼす影響を第１表ｔこ示した。この結果よりｐ
Ｈ調節１こよる効果は明らかである。なお、通常区は培
養開始時５チの炭酸ガスを含む空気で気相を置換した後
密閉状態で培養した。
１＊／／分で５秒間培養槽ｔこ送られ、さらに２０秒後
ｐＴ（’が７．２以下にならない場合、再度向の細胞生
育ｔこ及ぼす影響を第１表ｔこ示した。この結果よりｐ
Ｈ調節１こよる効果は明らかである。なお、通常区は培
養開始時５チの炭酸ガスを含む空気で気相を置換した後
密閉状態で培養した。
第 １ 表
ｐＨ調節区（ｐＨ７，２） ６Ｘ１０６
１８Ｘ１０Ｂ通常区６×ｌＯｒ′１２×１０Ｉｌ′ 実施例２ ヒ） ’ｌ’ ｃｅｌｌ 型白血病患者より分離した
ヒ）Ｔｃｅｌｌ ！ｊンパ芽球様細胞を用いて実施例
１と同様の方法ｔこより細胞培養を行った。結果を第２
表に示す。
１８Ｘ１０Ｂ通常区６×ｌＯｒ′１２×１０Ｉｌ′ 実施例２ ヒ） ’ｌ’ ｃｅｌｌ 型白血病患者より分離した
ヒ）Ｔｃｅｌｌ ！ｊンパ芽球様細胞を用いて実施例
１と同様の方法ｔこより細胞培養を行った。結果を第２
表に示す。
第 ２ 表
培養開始時 培養４１目
細胞数（個／ｄ） 細胞数（個／肩１）ｐＨ調節
区（ＰＨ７，２） １３Ｘ１０５ １３３Ｘ１
０５通常区 １３Ｘ１０’ ７５Ｘ１０５特許
出願人 味の素株式会社
区（ＰＨ７，２） １３Ｘ１０５ １３３Ｘ１
０５通常区 １３Ｘ１０’ ７５Ｘ１０５特許
出願人 味の素株式会社
Claims (1)
- 培養液のｐＨが所定の値より低いときには培養槽内気相
の炭酸ガス濃度を低くシ、培養液のｐｉ（が所定の値よ
り高いときには培養槽内気相の炭酸ガス濃度を高くする
ことを特徴とする動物細胞の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56180882A JPS5881781A (ja) | 1981-11-11 | 1981-11-11 | 動物細胞の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56180882A JPS5881781A (ja) | 1981-11-11 | 1981-11-11 | 動物細胞の培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5881781A true JPS5881781A (ja) | 1983-05-17 |
Family
ID=16090980
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56180882A Pending JPS5881781A (ja) | 1981-11-11 | 1981-11-11 | 動物細胞の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5881781A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4963489A (en) * | 1987-04-14 | 1990-10-16 | Marrow-Tech, Inc. | Three-dimensional cell and tissue culture system |
| US5032508A (en) * | 1988-09-08 | 1991-07-16 | Marrow-Tech, Inc. | Three-dimensional cell and tissue culture system |
| US5160490A (en) * | 1986-04-18 | 1992-11-03 | Marrow-Tech Incorporated | Three-dimensional cell and tissue culture apparatus |
| US5266480A (en) * | 1986-04-18 | 1993-11-30 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional skin culture system |
| US5510254A (en) * | 1986-04-18 | 1996-04-23 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three dimensional cell and tissue culture system |
| US6140039A (en) * | 1986-04-18 | 2000-10-31 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional filamentous tissue having tendon or ligament function |
| CN108251352A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-07-06 | 伯仕利生物科技发展（盐城）有限公司 | 一种血管内皮干细胞的培养方法 |
-
1981
- 1981-11-11 JP JP56180882A patent/JPS5881781A/ja active Pending
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5518915A (en) * | 1986-04-18 | 1996-05-21 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-Dimensional mucosal cell and tissue culture system |
| US5580781A (en) * | 1986-04-18 | 1996-12-03 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional tumor cell and tissue culture system |
| US5160490A (en) * | 1986-04-18 | 1992-11-03 | Marrow-Tech Incorporated | Three-dimensional cell and tissue culture apparatus |
| US5266480A (en) * | 1986-04-18 | 1993-11-30 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional skin culture system |
| US6140039A (en) * | 1986-04-18 | 2000-10-31 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional filamentous tissue having tendon or ligament function |
| US5512475A (en) * | 1986-04-18 | 1996-04-30 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional skin cell and tissue culture system |
| US5849588A (en) * | 1986-04-18 | 1998-12-15 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Methods of use of a three-dimensional liver cell and tissue culture system |
| US5516680A (en) * | 1986-04-18 | 1996-05-14 | Advanced Tissue Sciences, Inc. Formerly Marrow-Tech | Three-dimensional kidney cell and tissue culture system |
| US5510254A (en) * | 1986-04-18 | 1996-04-23 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three dimensional cell and tissue culture system |
| US5541107A (en) * | 1986-04-18 | 1996-07-30 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional bone marrow cell and tissue culture system |
| US5516681A (en) * | 1986-04-18 | 1996-05-14 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Three-dimensional pancreatic cell and tissue culture system |
| US5624840A (en) * | 1986-04-18 | 1997-04-29 | Advanced Tissue Sciences Inc. | Three-dimensional liver cell and tissue culture system |
| US4963489A (en) * | 1987-04-14 | 1990-10-16 | Marrow-Tech, Inc. | Three-dimensional cell and tissue culture system |
| US5032508A (en) * | 1988-09-08 | 1991-07-16 | Marrow-Tech, Inc. | Three-dimensional cell and tissue culture system |
| CN108251352A (zh) * | 2018-02-01 | 2018-07-06 | 伯仕利生物科技发展（盐城）有限公司 | 一种血管内皮干细胞的培养方法 |
| CN108251352B (zh) * | 2018-02-01 | 2021-07-06 | 伯仕利生物科技发展（盐城）有限公司 | 一种血管内皮干细胞的培养方法 |
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