JPS58754A - 粒子凝集判定用容器 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫学的凝集反応による凝集パターンの判定に
用いる粒子凝集判定用容器に関するものであシ、特に血
球粒子の凝集パター７から？！ｒ橿の血液型の判定や抗
体、抗原の検出を行なうための容器に関するものである
＠ 例えば、血液型の判定方法として、従来、第１図に示す
ように反応容器／として底面−がワインカップ状に彎曲
した本のを用い、この容６１に遠心分離して得られる被
検血球のλ〜ｒｌの浮遊液と特定の抗血清とを足看分注
し、両者を攪拌した後、靜蓋し、次に遠沈を行ない、沈
澱した血球を振りほどくように反応容器ｌを激しく振動
させた後、比較的ゆっくりと振動−せて凝集成分を容器
底面コの中心部に集めるようにして凝集パターンを形成
し、これを測光検出するものがある。この血液型判定方
法は、遠沈した後反応容器／を激しく振って沈渚した血
球を容器底面コから分離させるものであるため、凝集結
合力の強いλＢＯ式血液型の判定に利用されている０ しかし、Ｒ１１式血液ｍｔ−判定する場合とか、各種の
不規則抗体、抗原やＨＢｓ抗原等を検出する場合のよう
に結合力の弱い免疫学的凝集反応の場合には、上述した
ような判定方法は利用できない。その理由は、凝集結合
力が弱いと、反応容器ｌを振動させることにより一旦結
合した血球等の粒子が分離してしまい、容器底面コの中
心部に集まらないからである。

ｔた、Ｔ（ＢＳ抗原の検出法としては、円錐形の底面を
有する反応容器を多数個設けたマイクロプレートを用い
るものがある。この方法は、例えば１０　ｘ　／コ大の
マイクロプレートを使用し、以下に示す用手法でＨＢｓ
抗原を検出測定している。

１）　　Ｒ−ＰＨ人用緩衝液をマイクｎプレートの各穴
に１滴（０，０２ｊｔｔｌＬｌ）ずつ加える。

２）検体をダイリュータ−に採り倍々希釈全一系列ずつ
ＩＯ管まで行なう。

５）　検体の希釈列の第１列にＲ−Ｐ）ＩＡ靜衝液を、
第２列にｎ　−ＰＨＡｌａｈｌｂｉｔｌｏｎ溶液をそれ
ぞｒＬ１滴、（０，０２！　ｍｌ　ｌずつ加える。

４）　マイクロミキサーで１０秒間十分に振盪稜、３７
℃／時間インキュベートする０ ５）　　Ｒ−ＰＨＡ　ｃａｌｌを１滴（／チ浮遊液０．
０−！ｍｌ　ｌ各穴に加える。

６）！イクｃ２ｊキサーで１０秒間十分に振盪し、Ｒ−
ＰＨＡ　ｃａｔ鵞を均一に浮遊させる。

７）室温で振動を避け／時間静置後、凝集パターンを検
出する。

か＼る検出方法によれば、反応容器は検出直前には振動
を受けず十分靜着されるから、沈降した凝集体が分離さ
れることはない０ 更にＨＢｓ抗原以外の比較的凝集結合力の弱い免疫学的
凝集反応の検出法として、円錐形底面にすりガラス状に
凹凸を形成した反応容器を用いるものがある。しかし、
この方法では反応容器底面の凹凸の配列、大きさおよび
形状が不規則であるため、凝集体が円錐斜面の一部に集
まりすぎ念り、或いは滑って中央部に集まってしまい一
様な凝集パターンが得られＫくい欠点がある。

上述したような欠点を除去するため、本願人は既に特開
昭１４−０１２号公報において、ＡＢＯ式血液璽の判定
のように凝集結合力の強い場合は勿論のこと、Ｒｈ式血
液型やＨＢｓ抗原、その他各種の不規則抗体、抗原のよ
うに凝集結合力が極めて弱い場合においても、常に安定
した凝集パターンが形成できる粒子凝集判定用容器を提
案した＠第λ図Ａ、ＢおよびＣは上記特開昭１６−１３
１１号公報において提案し九粒子凝集判定用容器の３つ
の例の構成を示すものである０第一図人に示す容器≠は
底面を円錐形にすると共に、この円錐形の傾斜底面にそ
の最下部（頂点）！を中心として同心円状に連続して規
則的に複数の段差１を形成して、傾斜底面における傾斜
方向の断面形状を鋸歯波状にし虎ものである。第コ図Ｂ
に示す容器ｒは円錐形の底面にその最下部（頂点）デを
中心として同心円状に連続して規則的に複数の突起１０
を形成したものである。ｔた、第コ図Ｃに示す容器１２
は円錐形の底面にその最下部／Ｊを中心とする規則的な
同心円状の複数の円周に沿って間欠的に円または楕円状
の小孔ｌ参を規則的に穿設したものである・ 第一図ム、ＢおよびＣに示す粒子凝集判定用容器によれ
ば、血球等の沈降粒子は＠λ図λにおいては鋸歯波状の
段差６の凹部に、＠コ図Ｂにおいては隣接する突起７０
間の凹部に、また第一・図Ｃにおいては小孔ｌ参内にそ
れぞれ保持され、これにより傾斜底面上に沈降粒子の安
定な基Ｉｌｌが形成される。このように基層が形成され
ると、結合によプ凝集し念粒子はこの安定な基層上に有
効１こ堆積され、１＋沈降粒子が凝集しない場合には基
層上を滑り落ちて傾斜底面の最下部の部分に集まるから
、凝集結合力の強弱に拘らず常に安定した凝集パターン
を形成することができる。したがって、肉眼による判定
も容易かつ正確に行なうことができると共に、容器を光
透過性とすることにより底面からの反射光ま九は透過光
から凝集パターンを光電的に検出して正確な免疫学的分
析を行なうこと４できる◎ 一方、本願人はま九第λ図人、ＢおよびＣに示し九よう
な粒子凝集判定用容器を用いて免疫学的凝集度♂の検査
を自動的に行なう装置も開発している。第１図はその一
例の構成を示す線図で、第コ図人、Ｂま喪ＦｉＣに示す
構成の反応容器コ０を同一基板にマトリックス状に複数
個形成し九マイクロプレートＪノを用い、このマイクロ
プレートコｌを搬送ベルトココにより所定の方向Ｘに間
欠的に！ｌｌ送する。検体を収容する試験管コ３はラツ
クコ参に保持し、これを搬送ペルトコ！によｆｉＹ方向
に所定のピッチで移送する。マイクロプレートＪ／には
、これを移送方向Ｘでの反応容器−〇の配列ピッチに対
応して間欠的に順次移送しながら先ず、第１試薬分注位
ＩＩＩにおいて分注装置ムにより移送方向Ｘと直交する
方向に並ぶ複数個の反応容器１０に第１の試薬を選択的
に分注する０次に検体分注希釈位置夏において、試験管
コ３に収容されている検体を分注装置コアにより選択分
注すると共に、分注装置コｒにより希釈液を選択分注す
る。その後第−の試薬分注位置酊において分注装置コタ
により第一の試薬を選択分注して凝集反応を起こされる
。凝集反応を開妬してからマイクロプレートコｌを所定
時間移送した後、凝集パターン検出位置■において移送
方向Ｘと直交する方向に配列されている複数個の反応容
器、２０の底面の偉すなわち凝集パターンを光電的に同
時に検出する。

第３図に示すような凝集反応分析装置によれば、マイク
ロプレートコｌを移送方向Ｘでの反応容器−〇の配列ピ
ッチに対応して移送方向ＸＫ間欠的に移送しながら、凝
集反応による分析を自動的に行なうことができる。しか
し、本発明者らの種々の実験によれば、第３図のように
マイクロプレート、２／を間欠的に移送すると、間欠移
送の停止および発進時の慣性によりマイクロプレート２
ノが移送方向に振動し、これが沈降粒子に作中して凝集
パターンが崩れ正確な分析ができない不具合があること
がわかった。このような不具合を解決するには、凝集パ
ターンすなわち沈降粒子層が崩れない程度に慣性を抑え
てマイクロプレートコ／ｌ移送すればよいが、このよう
な移送装置は構成が複雑（なると共に高価となる問題が
ある０なお、上述し九慣性に基づく沈降粒子層の崩れは
、マイクロブＶ−）を連続的に移送する場合においても
、ま九分離された個々の反応容器すなわち第コ図人、Ｂ
ま喪はＣＫ示したような個々の容器を間欠的ま九は連続
的に所定の方向に移送する場合においても発生する◎ 本発明の目的は上述した不具合を解決し、容器が移送方
向ＫＷＲ動を受けても常に安定した沈降粒子層が形成で
きるよう適切に構成した粒子凝集判定用容器を提供しよ
うとするものである◇本発明は、底面の少〈共一部に傾
斜面を形成した容器内に粒子を含む検液を収容し、この
容器を所定の方向に移送しながら・前記検液の凝集反応
を行なわせ、この凝集反応に基いて粒子の自然沈降によ
り前記底面に形成される凝集パターンを判定すゐことＫ
より免疫学的分析を行なうたぬの粒子凝集判定用容器に
おいて、前記傾斜面を前記１器・の移送方向に形成する
と共に、この傾斜面に前記移送方向に延在して凸または
凹部を形成することによシ、前記容器がその移送方向に
振動を受けても前記傾斜面上に安定な沈降粒子層を形成
し得るよう構成し九ことを特徴とする龜のである・本発
明の好適実施例においては、前記傾斜面に移送方向に延
在して形成する凸または凹部の高さｔ九は深さは一〜！
Ｏｐｅｎとし、傾斜方向での凹部の幅ｉ九は隣接する凸
部の間隔はｔ〜１００μ鶏とする。すなわち、凹部ｔた
は凸部の深さま九は高さは、コμ惰未満とすると沈降粒
子が保持されず、安定な基層が形成されにくくなシ、特
に凝集結合力が弱い場合には、凝集し屑場合としない場
合とのパターンの区別がっきＫ〈ぐなｌｙ、ｊｏ＃隅よ
）吃大きくすると、この部分に結合しない沈降粒子も堆
積されてしまうために１明確なパターンが形成されない
場合があるからである・また傾斜方向の凹部の輻ま九は
隣接する凸部の間隔は、！μ隅未満とすると沈降粒子を
安定に保持することが困難となり、凝集結合力が翁い場
合には凝集の有無に拘らず傾斜面の最下部に集まシ易く
なってその区別がつきＫ＜＜なり、−００μｍよ）も大
きくすると、傾斜方向での基層が長くなって傾斜面に沿
ってずり落ち易くなり、安定な基層を形成することがで
きなくなシ、凝集パターンによる判定が困難に麿るから
である〇 以下図面を参照して本発明の詳細な説明する。

第一図は本発明の粒子凝集判定用容器の一例の構成を縮
図的に示す斜視図である。この粒子凝集判定用容＠＠Ｉ
は箱形でその底面−コを移送方向Ｘに延在するコつの傾
斜Ｎ−Ｊおよび≠参を有するように屋根を倒置し念よう
なＶ形に形成し、これら傾斜Ｎ−３およびｍ−に移送方
向Ｘと直交する方向での断面が水平面とこれと垂直な面
を有する鋸歯波状となるように移送方向ＸＫ延在して凹
を九は凸部よ構成る複数の段差４ｇｔをそれぞれ形成し
九ものである◇ここで容器参ｌの開口部４Ａ６は２０ｒ
ｒｖｎｓＸ／ａｔ職の長方形とし、傾斜１１ｉｉｊｌお
よび杯の水平面に対すゐ傾斜角度はそれぞれ約２７°と
したＯｌた、各段差量！の水平面の幅および垂直面の高
ざは、それぞれ１〜１００μｍおよび２〜１０μ鴨とし
、開口部参１から底面参コの最深部参７ｔでの距離すな
わち深さはコＱｍ％ｌした０この容器参／Ｆｉ耐薬品性
のプラスチック材料、例えばアクリル樹脂を用いて成型
することにより得ることができる。

か＼る粒子凝集判定用容器参／によれば、血球等の沈降
粒子は段差ａｔの部分に保持され傾斜面ダ３およびｍ−
上に安定な基層を形成し、結合により＃栗する粒子は、
この安定な基層上に有効に堆積され、を九沈降粒子が凝
集しない場合には、基層上を滑シ落ちて傾斜面の最深部
≠７の部分に集る。また、このようにして傾斜面一！お
よび≠≠上に形成された沈降粒子層は、段差グ！が移送
方向Ｘに延在して形成さｎているから、移送方向に蚕動
、ショックを受けても極めて崩れにくい。したがって、
常に安定したパターンが形成され、凝集の区別による正
確な免疫学的分析を行なうことかで゛きる。

なお、本発明は上述した例にのみ駆足されるのではなく
、幾多の変形ま友は変更が可能である。

例えば第一図においては、段差Ｌ＃１を水平面および垂
直面を有する鋸歯波状に形成したが、水平面一　および
／または垂直面を有しなｈ任意の鋸歯波状に形成するこ
ともできる＠また、移送方向に延在する傾斜面に移送方
向に延在する突起璽たけ窪み全形成し、辷れにより安定
表沈降粒子層を形成するよう構成することもできる。更
に第一図においては底面≠２の形状を移送方向Ｘと直交
する断面がＶ形となるようにしたが、第１図人に示すよ
うに鳳根形にしたり、第！図Ｂ、ＣおよびＤに示すよう
に円弧状に形成し、その傾斜面に移送方向Ｘに延在して
凹部または凸部を形成して、これにより安定な沈降粒子
層を形成するよう構成することもできる０また、第一図
および第！図Ａ−Ｄにおいては、底面の形状を移送方向
Ｘに関して対称な傾斜面を有するように形成したが、こ
の傾斜面は例えば１Ｍ！図に示すように片側のみであっ
て吃よい。更に移送方向Ｘに延在して形成する凹部また
は凸部は傾斜面のはソ全斌でもまたはその一部でもよい
０更にまた、傾斜面の水平面に対する角度、凹または凸
部の深さまたは高さ、隣接する凹部たは凸部の間隔は、
本発明者らの種々の実験によればそれぞれ３０°前後、
２〜１０　ｕｒｎ、　！　〜２００　μｍが好適である
が、これら角度、段差量、段差のピッチを適切に選ぶこ
とにより判定時間および凝集パターンの識別能を調整す
ることもできる。ま之、本発明の粒子凝集判定用容器は
従来のマイクロプレートのように一枚の基板に多数設け
ることもできる。

上述したように、本発明の粒子凝集判定用容器によれば
、その移送方向に振動を受けても沈降粒子層が崩れるこ
となく、傾斜面上に常に安定な沈降粒子層を形成するこ
とができるから、凝集結合力・、の強い粒子は勿論のこ
と、凝集結合力の弱い不規則抗体による血液型判定の場
合や、その池の免疫学的凝集反応による分析の場合でも
、明ａＴＩｉか凝集パターンを形成することができ、し
たがって免疫学的分析を正確に行なうことができる。捷
た、本発明に係る粒子凝集判定用容器を用いれば、凝集
反応による分析を自動的に行なう場合のｈａの構成を簡
単かつ安価にすることができる。

【図面の簡単な説明】

第７図は従来の粒子凝集判定用容器の構成を示す断面図
、第コ図Ａ、ＢおよびＣＦｉ本願人が既に提案し念粒子
凝集判定用容器の３つの例の構成、をそれぞれ示す断面
図、第３図は本発明に係る粒子凝集判定用容器が好適に
使用される免疫学的凝集反応分析装置の一例の構成を示
す線図、＠要因は本発明の粒子凝集判定用容器の一例の
構成を線図的に示す斜視図、第！図Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ
は本発明に係る粒子凝集判定用容器の底面形状の他の参
つの例を示す線図的断面図、第６図は同じく更に他の例
を示す線図的斜視図である。 参ｌ・・・粒子凝集判定用容器、Ｑや・・底面、＄１７
　、　ＩＬＩＣ−・・傾斜面、≠！・・・段差、４・・
・開口部、＃７・・・最深部、　Ｘ・・・移送方向。 特許出願人　　　　オリンパス光学工業株式会社第１図 第２図 第２図

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. Ｌ　底面の少く共一部に傾斜面を形成した容器内に粒子
   を含む検液を収容し、この容器を所定の方向に移送しな
   がら前記検液の凝集反応を行なわせ、この凝集反応に基
   いて粒子の自然沈降により前記底面に形成される凝集パ
   ターンを判定することにより免疫学的分析を行なうため
   の粒子凝集判定用容器において、前記傾斜面を前記容器
   の移送方向に形成すると共に、この傾斜面に前記移送方
   向に延在して凸または四部を形成することにより、前記
   容器がその移送方向に振動を受けても前記傾斜面上に安
   定な沈降粒子層を形成し得るよう構成したことを特徴と
   する粒子凝集判定用容器。