JPS5874695A - マクロライド抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質及びそれらの発酵法による制御法
に−する。

本発明Ｘは、ある種のストレプトばセス属に属する微生
物の培ｇ！液中に式（Ｉ）の化合物が蓄積され、これを
容易に回翳し得ると“う知舅に基“ている・本発明の目
的は、新規抗生物質及びその製造法を提伊することにあ
る。本発明により提供される□ 化合物は下記の一般式（Ｉ）で示される。

１：中、Ｒ＃ｉホルミル基又はヒドロキシメチル基を示
す） 式（すの化合物＃ｉ１ｇ員環マクロライドとして知られ
る骨格に属するが、ロイコマイシン１．スピラマイシン
等の１６負環マクロライドとは９位に結合する糖をＪ！
にする新規化合物である。

本発明による化合物は、グラム陽性菌に対し強い抗菌活
性を示し、医薬品として、又これらの化合物を原料とし
た新たな化合物を作る中間体として有用であることが期
待される。

式（Ｉ）においてＲがホルイル基である化合物（以下、
化合物１−ａという）をスピラマイシン−Ｕと命名し、
式（Ｉ）において８がヒドロキシメチル基である化合物
（以下、化合物ｘ−ｂという）をスピラマイシン−８と
命名し九〇 本発明による化合物の各種細菌に対する発育最小阻止ａ
ＩＩｉＩＬは第１表に示す通シである。庫天希釈法（ｐ
Ｈ１７，０）Ｋより、対照化合物としてスピラマイシン
−■を用い喪。

第　１　表 発育最小阻止濃度（声１１７ｄ） 本発明による式（１）の化合物は、ストレプトイセス属
Ｋ１１Ｌ、式（１）の化合物を生産する靜力を有する微
生物を培地に培養し、培養液中に式（Ｔ）の化合物を生
成蓄積させ、培養物から罪離回収することによ抄得られ
る。

次に本発明による化合物の製造法を詳しく観明する。本
抗生物質の生産に用いられる微生物としては・ストレプ
）１セス属に属し、式（Ｉ）で示される化合物を生産す
る能力を有する微生物であれば何でもよいが、好適な微
生物の例はストレプトミセス−アンボッフシ：ｔ、ｙｘ
　（８ｔｒｓｐｔｍｙｅａｓ　ａｍｂｏ−ｆａ＠ｌ・ｎ
ｓ）に属し式（Ｉ）の化合物生産能を有する微生物であ
り、とくにλトレグトイセス・アンボファシエンスＮＲ
ＲＬ　　２４２Ｇがあげられる。本菌は特公昭３４−４
９９号公報に記載され喪公知菌で容易に入手することが
できる。又、本菌を変異処した株も用いることができる
。

本発明の培養に＃ｉ通常の放線菌の培養法が用いられる
。使用する培地としてｉ炭−源、窒素源、無機物、必要
に応じてその他の栄養物を程よく含有する培地であれば
合成培地又は天然物使用培地のいずれでも用いることが
できる。

培地に使用される炭素源の例は、九とえはグルコース、
クリセロール、！ルトース、デキストロース、ショ糖、
ガラクトース、デ命ストリン、デンプン又はその加水分
解液、動物油及び植物油のような脂質、種々の炭水化物
、炭化水素等で、これらを単独又は組み合わせて用いら
れる。

実用的な窒素源の例祉、アンモニア鳳塩化アンモニウム
、リン酸アン七ニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム、酢酸アンモニウム尋の各種の無機及び有機アン
モニウム塩類、アミノ酸、Ｍｊｌｌ！、ヘフ）ン、ＮＺ
−アミン、肉エキス、レバーケーキ、乾燥酵母、酵母エ
キス、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、フ
イシン：Ｌｉ　−ルあるいはその消化物、大豆油あるい
はその消化物等の含窒素有接化合物質である。

実用的な無機物の例は、ある釉の必須無機成分すなわち
塩化物、リン酸塩及び炭酸塩からの各神陰イオン、なら
びにナトリウム、マグネシウム、亜鉛及びコバルトなど
の各種陽イオンを含有するものである。所望により、さ
らに微量の重金属塩を用いることができるが、天然物を
含む培地を用いる場合、天然物に含まれていて必ずしも
添加を必要としない。

又、栄養要求を示す変異株を用いる場合には、その栄養
要求を満足させる物質を培地に加先なけれにならない。

発酵は振盪培養あるいは深部攪拌培養など好気的条件下
で行なう。培養温度は通常２４〜３０℃であり、好まし
くは２８℃の温度である。培養中の培地のｐＨはたとえ
ｄ６〜８とする・通気条件は広範囲に変化でき、たとえ
ば１分間につきプロスのｌＩ轟り０．５〜２ｊとする。

培養菌の発育はあま抄急速ではなく、通常５〜７日で培
、地中に多量の目的化合物が生成蓄積され、培養が完了
する。

培養液からの目的物の採取は抗生物質の精製に一般に使
用される方法によって行なうことができる。次に精製法
の一例を概略的に示す。

培養終了液にｒ過助剤を加え死後、ｒ過により菌体を除
く。ｒ液のｐＨを８〜１１、好適にはｐＨ９とし、水不
混和性溶剤で溶剤抽出をくりかえす。

溶剤をＰＨが５〜８、好適にはｐＨ６，７の水層で再抽
出し、水層はポーラスポリマー樹脂や活性炭などの吸着
剤で処理して抗生物質を吸着させた後、溶出剤で溶出す
る。溶出液を濃縮して抗生物質をクロロホルムなどで抽
出する。抽出液を脱水乾燥し、濃縮してシリカゲル、ア
ルｉナなどのカラムクロマトグラフィーで処理し、クロ
ロホルムとメタノールや酢酸エチルトメタノールとアン
モニア水等の混合溶剤などで溶出する一目的物を含有す
る溶出液を乾固し、ヘキサン、アセトン、石油エーテル
などから再結晶して目的物を得る。

本発明による化合物を常法により酸付加塩とすることが
できる。代表的な酸付加塩の例として、塩酸塩、臭化水
素酸塩、硫酸塩、酢酸塩、シェラ酸塩、ホウ酸塩、乳酸
塩、リン酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、
酒石酸塩などがあげられる。

以下に実施例をあげて本発明を説明する。ただ［７、本
発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。

実施例１ スピラマイシンーＵ（化合物Ｉ−龜） （１）ｘ）レプ）ｔセス・アンボファシエンスＮＲＲＬ
２４２０の培養 １１の三角７ラスコに下記種培地１０Ｇ−を入れ、水酸
化ナトリウムでｐＨを７．４とし丸後、１２０℃で２０
分間殺１する。冷却後ストレグトイセス・アンボファシ
エンスＮＲＲＬ　　２４２０の菌株を１白金耳接種し、
２５℃で２日間振盪培養する。

種培地 コーンスチーグリカ−４０１／　ｌ　１グルコース２２
１７１１塩化ナトリウム５１　／　ｌ−硫酸　−マグネ
シウム１７７　／　ｊ　、炭酸カルシウム５１７Ｉ、大
豆油Ｌ４Ｍ／ｊｅ この種培養液のすべてを３ｊジャーファーメンタ−中の
１．５１の下肥発酵培地に加える。培養は２８℃で６日
間（回転数６００　ｒｐｍｓ通気量２１／ｍ１ｎ）行な
う。培養中ｐ）Ｉの調整は行なわない。

発酵培地 可溶性デンプン５ｏｉｌ／Ｉ、乾燥酵母２１ｊＦ／ｌ、
塩化ナトリウム２０７７／Ｉ、リンＩ？第一カリウム５
ｅｌｌ、硫酸第二鉄ｏ、ｚｓ　Ｉｌｌ　１研酸亜鉛０．
４１１／Ｉ、炭酸コバルト６水和物０．１１／Ｉ、　炭
酸ｔｙルＶｆ）ＡＳＰ／１１大豆油４ｄ／ｊ（殺菌前ｐ
Ｈ６，１１，１２０℃２０分間殺菌）。

（２）　　スピラマイシン−Ｕ（化合物１−ａ）の単一
培養終了後、培養液にホルマリン７−、ラジオライトφ
６００〔商品名、昭和化学工業１株）製〕を加え、フィ
ルタープレスでｒ遇する。菌体を水洗し、洗液はＰ液に
加え、ｒ液を希水酸化ナトリウムでｐＨ９に調整し、メ
チル・イソブチル・ケトン８００−で抽出する。溶媒を
分−し、ｐＨ６，７のリン酸緩衝液４００ａｊで再抽出
する。

水層をハイマツク０８ｐ（ＮＨ４り、イブ・マクロポー
ラス型強酸性陽イオン交換樹脂、アクソ社製）１＄Ｏ＠
ｊＫ通塔する。１００１１ｊの脱イオン水で洗浄後、０
．００２Ｎアンモニア水１５０ｄで溶出する。

目的物を含有する溶出画分を活性炭で処理した後、ｐＨ
を９とし、塩化メチレン１００ｍで抽出する。塩化メチ
レン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧下濃縮
する。濃縮物をシリカゲル５０ｇを充填したカラムに通
し、酢酸エチル−メタノール（１００１１〜１０）で溶
出する。

目的化合物を含む画分を合わせ濃縮した後、酢酸エチル
−メタノール−アンモニア（１０００ｓ２０２１）の溶
媒系を用いたシリカゲルクロマトグラフィーで精製する
。溶出液を濃縮乾固しアセトン−ヘキサンより結晶化す
ると白色粉末状目的化合物４６０＃が得られる。

この化合物の物性値祉次の通すである。

■　白色微塩基性物質である。　　　−■　元素分析値
（０４２Ｈ７１ＮＯ１６として）ＨＯＮ 実測値＠）　　８．３１　５９．７９　１．４３理論値
（チ）　　８．４６　５９．６３　１．６６■　分子量
（マススペクトルによる） ４５ ■　融点　　　　１３８〜１４１℃ ■　比旋光度 （（Ｗ）２３−１１５°（０１，０メタノール）■　電
子スペクトル（メタノール） ２３３　ｎｍ　（＃　２！Ｓ　、ｙｏｏ）■　ＩＨ−Ｎ
ＭＲスペクトル（ＯＤ・Ｑｊｇ中）７０．８６〜Ｊ１．
４０に多くの吸収を認める。

Ｊｌ、５０〜Ｊ４．１５に多くの吸収を認め、とりわけ
１２　、４９（１）、Ｊ　ｓ　、　ｉ　ｏ　（ｓ）がａ
Ｓである。７４．４８（ｄ、７．８Ｈｚ）、Ｊ４．９２
（ｄ。

２．５１（Ｓ）、ａ５．ｏフ（ｄＪ、４Ｈｚ）を認める
。

Ｊｓ、ｏｓ　〜Ｊ６．４Ｇ及びＪ　９　、８１　（ｍｌ
にも吸収を認める。

■　１３０−ＮＭＲスペクトル（Ｏｌｌ（、’／３　中
）１１５．０．１７．６．１８．３．１９．１．２Ｇ、
１゜２５．４．２５．６．３０．１．３１．１．３１．
３．３７．７゜４Ｇ、９．４１．２．４２．ＯＸ３．４
３．２．６１．８゜６６、ＯＸ２．６８．２．６８．８
．６９．１．６９．！ｉ。

６９．９．７１．７．７３．１．７５．０．７ｇ、５Ｘ
２゜７８．４．７９．２．８１Ｓ、３．９６．３Ｘ２．
１０３．８゜１２８．６．１３２．２．１３２．４．１
３５．７．１７４．８゜２０２．４　ＰＰＴ’ａ ■　赤外線吸収スペクトル（Ｋ　Ｂｒ　錠剤中）第１図
に示す。

［Ｆ］　薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値第２表 シリカゲル（ａｒｆ　　５７１４　メルク社シ）による
ＴＬＯ■　高速液体クロマトグラフィーにおける保持時
間 第３表 リクロゾルブＢＰ−８（メルク社製４＝ＯφＸ２ＳＯＩ
Ｉ１ｍ）。

流量１　ｄ／　ｍ　ｔ　！１ 上記物性値よりこの化合物は、化合物ト１であることが
決定される。

実施例２ スピラマイシン−８（化合物Ｉ−ｂ） （１）ストレプトミセス・アンボファシエンスＮＲＲＬ
２４２０の培養 実施例１と同機の条件下、種培養及び発酵を行なう・ （２）スピラマイシン−８（化合物Ｉ−ｂ　）の単離実
施例１と同様に溶媒抽出外を行ない、シリカゲルクロマ
トグラフィー溶出画分を得る。この両分を、濃縮した後
、酢酸エチル−メタノール−アンモニア（１０００１２
（１１）の溶媒系を用いたシリカゲルクロマトグラフィ
ー１酢酸エチル−メタノール−アンモニア（１０００１
５０：ｌ）の展開溶媒系を用いたシリカゲル分取薄層ク
ロマトグラフィーによ抄精製する。目的物を含む溶・出
液を乾固し、ヘキサン−アセトンから結晶化して目的化
合物！ｓ５Ｑが得られるＯこの化合物の物性値は次の通
抄である。

■　白色微塩基性物質である。

■　元素分析値”（０４ｔＨ７３ＮＯ１６として）ＨＯ
Ｎ 実測値（＠　　８　、８１　５９　、７１　１　、　！
Ｉ　＠）理論値＜＠　　８．６８　５９．４９　１．６
８■　分子量（マススペクトルによる） ４７ ■　融点　　　　１４１〜１４３℃ ０　比旋光度 ２３ 〔α〕Ｄ　−１１０°（０１，０メタノール）■　電子
スペクトル（メタノール） ２Ｂ２　　ｎｍ　　（ｌ　２５，２００　）■　ＩＨ−
ＮＭＲスペクトル（ＯＤＯｊ３　　中）Ｊｏ、８５〜δ
１．４０に多くの吸収を關める。

Ｊｌ、ｌＳＯ〜−４，２０に多くの吸収を認め、とりわ
けＪ２．５１（ａ）、　Ｊ３．！＄１（ｍ）が顕著であ
る。

Ｊ４．！＄０（ｄ、　７．１１（り、　　Ｊ４．９ｇ（
ｄ、　２．５Ｈｚ　）　、　Ｊ５−０８　（ｄｏ　２−
５Ｈｌ　）を認める。

ａＢ、１０−７６．４０にも吸収ｔｇめる。

■　”Ｏ−ＮＭＲスペクトル（ＯＤＯｊａ　中）１５．
０．１７．６．１８．３．１９．１．２０．１゜２５．
４．２５．６．２．９．９．３Ｇ、５．３Ｇ、９．３７
．６゜４０．９Ｘ２．４１．２．４２．ＩＸ３．　！ｉ
９．ｌＩ、　６１．７゜６６．０．６６．１．６８．９
Ｘ２．６９．２．６９．６゜６Ｇ、９．７１．７．７Ｂ
、０．７４．６．７６．５Ｘ２゜７８．２．７ｇ、７．
８５．５．９ｇ、３Ｘ２．１０４．２゜１１７．１．１
３Ｌ１．１３２．５．１３２．７．１７４．２ｐｍ ■　赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠剤中）第２図に示
す。

０　薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ値第２表記載
のとおりである。

Ｏ高速液体クロマトグラフィーにおける保持時間 第３表記載のとおりである。

上記物性値よシ、この化合物は化合物Ｉ−ｂであること
が決定される。

【図面の簡単な説明】

第１図はスビラｉイシンー〇（化合物Ｉ−ａ）の赤外線
吸収スペクトルを示す。 第２図はスビラ１イシンーＳ（化合物Ｉ−ｂ）の赤外線
吸収スペクトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （リ　一般式（す １式中、Ｒはホルミル基又はヒドロキシメチル基な表わ
   す）で表わされるマクロライド抗生物質及びその酸付加
   塩。 （２）　　ストレプトはセス属に属し、一般式（Ｉ）（
   式中、Ｒはホルミル基又はヒドロキシメチル基を表わす
   ）で表わされるマクロライド抗生物質、を生産する能力
   を有する微生物を培地に培養し、ｔ＠養物中に核化合物
   を生成蓄積−しめ１．骸培養物から該化合物を採取する
   ことを特徴とする発酵法による核化合物の製造法。