JPS586465A - 溶離方法 - Google Patents
溶離方法Info
- Publication number
- JPS586465A JPS586465A JP56104751A JP10475181A JPS586465A JP S586465 A JPS586465 A JP S586465A JP 56104751 A JP56104751 A JP 56104751A JP 10475181 A JP10475181 A JP 10475181A JP S586465 A JPS586465 A JP S586465A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- separation
- solution
- kinds
- reopening
- solutions
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
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- Physics & Mathematics (AREA)
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は液体クロマトグツ７４による分離方法に関する
ものである。
ものである。
し
イオン交換樹脂が充填剤ときて用−られた液体クロマト
グラフィによる分離は水溶性物質の分離・精製に用いら
れており、とくに生体物質を簡便、迅速に測定出来ると
いう利点からして、臨床検査の分野にお−て多用されて
ｉる。この様な分離においては、例えば血清中の特定の
物質を検出する等同一物質の検出が連続的に繰り返され
ることが普通である。叉、−りの試料から複数の物質を
分離すること及びその際にイオン強度又はＰＨが興なる
２種類の溶離液ｔＰｌいて、切り譬え方式又はグラジェ
ント方式で分■を行うことも一般に行われて−る。
グラフィによる分離は水溶性物質の分離・精製に用いら
れており、とくに生体物質を簡便、迅速に測定出来ると
いう利点からして、臨床検査の分野にお−て多用されて
ｉる。この様な分離においては、例えば血清中の特定の
物質を検出する等同一物質の検出が連続的に繰り返され
ることが普通である。叉、−りの試料から複数の物質を
分離すること及びその際にイオン強度又はＰＨが興なる
２種類の溶離液ｔＰｌいて、切り譬え方式又はグラジェ
ント方式で分■を行うことも一般に行われて−る。
しかしながら、上記の様に、充填剤としてイオン樹ｆ１
を用１％溶離液として２１１類の溶液を用ｉて、ｊ！＃
！鈎に繰り返して分析を行う場合、同一０試粁ｔＪ１！
ｈても分離操作が中断されたのち再開された際、再廁後
の初期、と＜Ｋ、第１回目や第２回目の分析における分
析結果が正確に出なｉ場合が多い。この様な欠Ｊｌは、
例えば患者の血清分離を特定の項目について繰返し定常
的に行う臨床検査の分野におｈては重大である。
を用１％溶離液として２１１類の溶液を用ｉて、ｊ！＃
！鈎に繰り返して分析を行う場合、同一０試粁ｔＪ１！
ｈても分離操作が中断されたのち再開された際、再廁後
の初期、と＜Ｋ、第１回目や第２回目の分析における分
析結果が正確に出なｉ場合が多い。この様な欠Ｊｌは、
例えば患者の血清分離を特定の項目について繰返し定常
的に行う臨床検査の分野におｈては重大である。
本発明は上記の如き現状Ｋかんがみ％２種類の溶離液を
用−１特定の項目に′）−て繰返して分析を行うイオン
交換樹脂を充填剤とする液体クロマトグツ７４による分
＠において、分離中断後の再開時における分析結果の不
正確さを解消することを目的としてなされたものであり
、その要旨は、充填剤としてイオン交換樹＆を用い、溶
離液としてイオン強度又ＦｉＰＨが興なる２種類の溶液
を用いて切り替え方式又はグラジェント方式で液体クロ
マトグラフィによる分離を中断した期Ｗａをはさんで繰
多返し行５に際し、分離操作の停止時あるいは分離の再
開前に、上記２種類の溶液の混合液を送液することを特
徴とする溶離方決に存する。
用−１特定の項目に′）−て繰返して分析を行うイオン
交換樹脂を充填剤とする液体クロマトグツ７４による分
＠において、分離中断後の再開時における分析結果の不
正確さを解消することを目的としてなされたものであり
、その要旨は、充填剤としてイオン交換樹＆を用い、溶
離液としてイオン強度又ＦｉＰＨが興なる２種類の溶液
を用いて切り替え方式又はグラジェント方式で液体クロ
マトグラフィによる分離を中断した期Ｗａをはさんで繰
多返し行５に際し、分離操作の停止時あるいは分離の再
開前に、上記２種類の溶液の混合液を送液することを特
徴とする溶離方決に存する。
カ
上記イオン交換樹脂としては強■チオン基、弱カ
寵チオン基、弱アニオン基、強アニオン基などを有する
ものがあり、市販品としても入手することが出来るが、
液体クロマトグツ７にもとすく分離がイオン交換機構に
もとすくものである充填剤であるならば、本発明ではい
ずれも使用可能である。
ものがあり、市販品としても入手することが出来るが、
液体クロマトグツ７にもとすく分離がイオン交換機構に
もとすくものである充填剤であるならば、本発明ではい
ずれも使用可能である。
又、本発明では上記イオン交換樹ｆ１ｔ−充填剤として
用いると共に、溶離液としてはイオン強度又はＰＲが興
なる２種類の溶液が用−られるのであるが、仁の様な方
＆は従来よ）原液中から８種類以上の区分を能率よく分
離するために切多替え方式又はグラジェント方式として
採用されて来た手法であり、本発明はこの様な方法にお
ける欠点を解消し得たのである。
用いると共に、溶離液としてはイオン強度又はＰＲが興
なる２種類の溶液が用−られるのであるが、仁の様な方
＆は従来よ）原液中から８種類以上の区分を能率よく分
離するために切多替え方式又はグラジェント方式として
採用されて来た手法であり、本発明はこの様な方法にお
ける欠点を解消し得たのである。
すなわち、本発明においては、切り替え方式又はグラジ
ェント方式で液体クロマトグラフィによる分離を同−区
分について繰９返し行う場合において、例えばその日が
終業となった等の理由で中断する場合、該分離操作の停
止時或いは例えば翌日に分離操作を再開する時などの分
離の再ｌ＠＊に、分離に用いる２樵類の溶離液の混合液
を充填カクム内に送誕するのであ〉、それによって分離
再開時における分析精度の低下金防止し得たのである。
ェント方式で液体クロマトグラフィによる分離を同−区
分について繰９返し行う場合において、例えばその日が
終業となった等の理由で中断する場合、該分離操作の停
止時或いは例えば翌日に分離操作を再開する時などの分
離の再ｌ＠＊に、分離に用いる２樵類の溶離液の混合液
を充填カクム内に送誕するのであ〉、それによって分離
再開時における分析精度の低下金防止し得たのである。
そして該送液は、カラふの長１ｉにもよるが１０分〜３
０分同一行えば充分であり、叉、上記混合液の２種類の
溶液の混合比は１ Ｇ −１／１Ｇの範囲から適宜遍択
すればよいが通常は２種類の溶液ｔ−等量混合するのが
簡便である。
０分同一行えば充分であり、叉、上記混合液の２種類の
溶液の混合比は１ Ｇ −１／１Ｇの範囲から適宜遍択
すればよいが通常は２種類の溶液ｔ−等量混合するのが
簡便である。
本発明の溶離方法は上述の通りであり、とくに繰返して
行う分離操作を中断する際に、分離操作の停止時或は分
離の再開前に、溶離液として用−る２種類の溶液の混合
液を送液する方決であるので、分離再開時にお−てもそ
の分析結果がはらついたり、分離性能か低下するといっ
た不都合が生じることなく、常に安定した精度て多数の
検体についての繰返し分析が出来るのである。
行う分離操作を中断する際に、分離操作の停止時或は分
離の再開前に、溶離液として用−る２種類の溶液の混合
液を送液する方決であるので、分離再開時にお−てもそ
の分析結果がはらついたり、分離性能か低下するといっ
た不都合が生じることなく、常に安定した精度て多数の
検体についての繰返し分析が出来るのである。
以下本発明の実施例について説明する。
実施例１
高速液体クロマ−トゲラブ（島津社製ＬＣ−１）カ
・に弱曽チオン交換樹脂（商品名１１Ｃ！−６８０ＣＭ
、東洋曹達社製）ｔ−充填したスレンレスカラムＣ４ｗ
ｍ１．３０国）ｔ−！１１１１ｉ！ｔ、て以下の今析操
作を行った。
、東洋曹達社製）ｔ−充填したスレンレスカラムＣ４ｗ
ｍ１．３０国）ｔ−！１１１１ｉ！ｔ、て以下の今析操
作を行った。
溶離液として、リン酸ｌカリクム７０％、呼ン酸２ナト
リクム３０％の混合水溶液をＡ液とし％Ｂ液としては＾
液ＫＢ９６になるようにＮａｃｌｔ溶解させた水溶液を
用−九。試料として正常人の血液５０μｊ？１ｓｊのイ
オン交換水と混合して溶血させたものｔ １ｏｓｔ注入
り、４１Ｓ−の可視光検出横管用いてヘモグロビン管検
出した。この際の操作は中、 （ＩＩ）の２過）で行わ
れた。
リクム３０％の混合水溶液をＡ液とし％Ｂ液としては＾
液ＫＢ９６になるようにＮａｃｌｔ溶解させた水溶液を
用−九。試料として正常人の血液５０μｊ？１ｓｊのイ
オン交換水と混合して溶血させたものｔ １ｏｓｔ注入
り、４１Ｓ−の可視光検出横管用いてヘモグロビン管検
出した。この際の操作は中、 （ＩＩ）の２過）で行わ
れた。
中Ａ液！２０分陶カクムに送液し、装置ｌを停止した。
１時間後運転を再開し、１５分閤Ａ液を送液したのち、
上述の試料を注入した。注入１ｉ１０分間Ａｔ′に送液
し、次の５の試料管注入し、注入後１ｏ分ｍＡａｋ送液
し、次の５分閤Ｂ液を送液して第・２＠の分析を行った
。この様にして同じ条件で第３＠、第４回の分析を連続
して行った。流速は常ＫａＳｍｊ／―とした。上記にょ
シ得られた４つの連続したクロマドグツムは第１図の通
りてらった。（以上比較例）ＩＩＩ図においては、Ａｌ
ｍｂのピーク（ピークｌ）、Ａｌｃのピーク（ピーク２
）及びＡｏのピーク（ピーク３）のそれぞれが第１回〜
第３回の分析で変化し、第４回目では譬安定したことが
示されている。
上述の試料を注入した。注入１ｉ１０分間Ａｔ′に送液
し、次の５の試料管注入し、注入後１ｏ分ｍＡａｋ送液
し、次の５分閤Ｂ液を送液して第・２＠の分析を行った
。この様にして同じ条件で第３＠、第４回の分析を連続
して行った。流速は常ＫａＳｍｊ／―とした。上記にょ
シ得られた４つの連続したクロマドグツムは第１図の通
りてらった。（以上比較例）ＩＩＩ図においては、Ａｌ
ｍｂのピーク（ピークｌ）、Ａｌｃのピーク（ピーク２
）及びＡｏのピーク（ピーク３）のそれぞれが第１回〜
第３回の分析で変化し、第４回目では譬安定したことが
示されている。
（ｌｉ）Ａ液ｔｚｏ分聞カクムに送液し、装置を停止し
た。１時間後Ａ液とＢ液とを等量Ｋ１１合し九液ｔ２０
分聞送液したのち、１５分閤Ａｆ＆を送液し、上述の試
料を注入した。
た。１時間後Ａ液とＢ液とを等量Ｋ１１合し九液ｔ２０
分聞送液したのち、１５分閤Ａｆ＆を送液し、上述の試
料を注入した。
それ以後は（１）と全く同様にして連続的に４回の分析
を行った。かくして得られ九クロマトグラムは第２図の
通りであった。（以上実施例） 実施例２ 実施例１で用いたのと同じ液体クロマトグツ７に弱アニ
オン交換樹脂（商品名Ｎｕｃｌｅ・１１１Ｎ−３４、Ｎ
ａｇｅ１社製）を充填したステンレスカフＡ（６■夏、
Ｉ Ｓ ｅｘ ） を接続して以下の分析操作を行った
。溶離液として、ｑｚモに／ｌトリス塩酸緩衝液（ＰＨ
＝＆Ｏ）を用いこれｔＡ液とし、Ｂとして９５モル／／
）リス塩酸緩衝液（ＰＨ＝ｌＬＯ）Ｋへ１七ル／１Ｎｉ
ｃｌ水溶液管加えたものを用いた。そして試料として１
９６卯白アルブミン１００ｐｊｆ：注入し、検出＃１２
８０ｍｍの紫外光検出機ｔｔ用いた。
を行った。かくして得られ九クロマトグラムは第２図の
通りであった。（以上実施例） 実施例２ 実施例１で用いたのと同じ液体クロマトグツ７に弱アニ
オン交換樹脂（商品名Ｎｕｃｌｅ・１１１Ｎ−３４、Ｎ
ａｇｅ１社製）を充填したステンレスカフＡ（６■夏、
Ｉ Ｓ ｅｘ ） を接続して以下の分析操作を行った
。溶離液として、ｑｚモに／ｌトリス塩酸緩衝液（ＰＨ
＝＆Ｏ）を用いこれｔＡ液とし、Ｂとして９５モル／／
）リス塩酸緩衝液（ＰＨ＝ｌＬＯ）Ｋへ１七ル／１Ｎｉ
ｃｌ水溶液管加えたものを用いた。そして試料として１
９６卯白アルブミン１００ｐｊｆ：注入し、検出＃１２
８０ｍｍの紫外光検出機ｔｔ用いた。
この際の操作は中、（Ｍ）の２通シで行われた。
（１）１日送液を停止して−た後、送液を開始し２０分
閤Ａｃ！送液し、上述の試料を注入した。注入後１９６
７分の割合でＡ液からＢ液へ直線グラジェントで送液を
続け、注入後１００分で溶離液ＦｉＢ液のみとなった。
閤Ａｃ！送液し、上述の試料を注入した。注入後１９６
７分の割合でＡ液からＢ液へ直線グラジェントで送液を
続け、注入後１００分で溶離液ＦｉＢ液のみとなった。
Ｂ液を２０分送送液し、分離は終了した。
流量は常時ＬＯ馬１／−でありた。このクロマドグツム
は第３図に示す通りであった。
は第３図に示す通りであった。
（ｉ）１日送液を停止していた後、送液を開始し、Ａ液
とＢ液を等量に混合した溶液ｔ２Ｇ分閣送液し、次に２
０分１１Ａｆｉｔ−送液し、上述の試Ｆ）を注入した。
とＢ液を等量に混合した溶液ｔ２Ｇ分閣送液し、次に２
０分１１Ａｆｉｔ−送液し、上述の試Ｆ）を注入した。
以下の操作は巾の操作と同様に行ない分離を行なった。
このクロマトグラムは第４図に示す通りであった。
第１図Ｆｉ実施例１において比較のために１行った分離
操作によって得られたクロマトグツ＾、第２図は同実施
例によって得られたクロマドグツムであり、第３図は実
施例２におｈて比較のために行った分離操作によって得
られたクロマトグラム、第４図は同実施例によって得ら
れたクロマトグラムである。 １・・・Ａｌｍｂのピーク、 ２・・・Ａｌｃのピー
ク、３・・・Ａ・のピーク 特許出願人 槓水化学工ｌＩ！株式会社 代表者 藤沼基利
操作によって得られたクロマトグツ＾、第２図は同実施
例によって得られたクロマドグツムであり、第３図は実
施例２におｈて比較のために行った分離操作によって得
られたクロマトグラム、第４図は同実施例によって得ら
れたクロマトグラムである。 １・・・Ａｌｍｂのピーク、 ２・・・Ａｌｃのピー
ク、３・・・Ａ・のピーク 特許出願人 槓水化学工ｌＩ！株式会社 代表者 藤沼基利
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 Ｌ 充ｉＲ剤としてイオン交換樹脂を用い、溶離液とし
てイオン強度又ＦｉＰＩが興なる２種類の溶液を用−て
切り換え方式又はグラジェント方式で液体クロマトグツ
フィによる分離を中断した期間ｔＦｉさんで繰シ返し行
うに際し、分離操作の停止時あるいに分離の再開前に、
上記２種類の溶液Ｏａ合液を送液すること【特徴とする
溶離方法。 ２ 混合液における２種類の溶液の混合比か１０〜１／
１０である第１項記載の溶離方決。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56104751A JPS586465A (ja) | 1981-07-03 | 1981-07-03 | 溶離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56104751A JPS586465A (ja) | 1981-07-03 | 1981-07-03 | 溶離方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS586465A true JPS586465A (ja) | 1983-01-14 |
Family
ID=14389193
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56104751A Pending JPS586465A (ja) | 1981-07-03 | 1981-07-03 | 溶離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS586465A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62177448A (ja) * | 1986-01-31 | 1987-08-04 | Hitachi Ltd | 液体クロマトグラフイ−分析方法 |
| JP2007040857A (ja) * | 2005-08-04 | 2007-02-15 | Ajinomoto Co Inc | 液体クロマトグラフ分析方法，液体クロマトグラフ装置、及び分析用プログラム |
| JP2010112960A (ja) * | 2010-01-18 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | 液体クロマトグラフ装置、および分析用プログラム |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54127397A (en) * | 1978-03-25 | 1979-10-03 | Hitachi Ltd | Liquid chromatography |
-
1981
- 1981-07-03 JP JP56104751A patent/JPS586465A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54127397A (en) * | 1978-03-25 | 1979-10-03 | Hitachi Ltd | Liquid chromatography |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62177448A (ja) * | 1986-01-31 | 1987-08-04 | Hitachi Ltd | 液体クロマトグラフイ−分析方法 |
| JPH0464584B2 (ja) * | 1986-01-31 | 1992-10-15 | Hitachi Ltd | |
| JP2007040857A (ja) * | 2005-08-04 | 2007-02-15 | Ajinomoto Co Inc | 液体クロマトグラフ分析方法，液体クロマトグラフ装置、及び分析用プログラム |
| JP2010112960A (ja) * | 2010-01-18 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | 液体クロマトグラフ装置、および分析用プログラム |
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