JPS5851759B2 - 抗生物質の微生物による製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明の新規抗生物質Ｕ−４４，５９０は、ストレプト
ミセス・プラテンシス・バラエティ・クラレンシス（Ｓ
ｔｐｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ ｖａ
ｒ 。

ｃｌａｒｅｎｓｉｓ ） Ｎ ＲＲＬ ８０３５号を好
気的条件下に水性栄養培地中で培養することによって得
られる。

下に明らかにされるように、Ｕ−４４５９０の種々の誘
導体類をつくることができる。

Ｕ４４．５９０およびその誘導体類は、ダラム陰性菌お
よびダラム陽性菌、例えばストレプトコッカス・ヘモリ
チクス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｈｅｍｏｌ
ｙｔｉｃｕｓ ）、クレブシェラ・ニューモニア（Ｋ
１ｅｂｓ ｉｅ ｌ １ａｐｎｅｕ ｍ ｏｎ ｉａ）
、サルモネラ種（Ｓ ａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｓｐ、 ）
、セラチア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍ ａｒ
ｃｅｓｃｅｎｓ ）、バスツーレラ°ムルトキダ（Ｐａ
５ｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ヘモフィ
ルス種（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ Ｓｐ、）、プロテウス
・モルガニ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｏｒｇａｎｉ）および
プロテウス・レトゲリ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅ
ｒｉ）の生育に悪影響を与える性質をもっている。

従ってＩＪ−４４，５９０とその誘導体類を単独で、又
はその他の抗生物質剤と組合わせて、種々の環境下にお
ける上記の細菌の生育を防止したり、その数を減少した
りするのに使用できる。

Ｕ−４４，５９０とその誘導体類は、ＤＮＡビールス類
、例えばヘルペスビールスに対しても活性があり、この
ためこのようなビールスの存在が望まれない場合にその
抑制のために使用できる。

Ｕ−４４，５９０の化学的および物理的性状元素分析
Ｃ９Ｈ１５Ｎ３０５ 計算値： Ｃ，４４，０８；Ｈ，６，１７，；Ｎ、１７
．１３ 測定値：Ｃ１４４，１４；Ｈ１６，０８；Ｎ、１７．３
６ 分子量：２４５（質量スペクトルで決定）融点範囲：１
４１〜１４２℃ 旋光度：（ロ）Ｙ−−５°（水中濃度０．９０３０）溶
解度：水と低級アルコール類、例えばメタノールとエタ
ノールに易溶。

Ｍｅ２ＣＯ１ＦｔＯＡｃ、炭化水素類、ＣＨ２Ｃｌ２お
よびＣＨＣｌ３に難溶。

赤外線吸収スペクトル：Ｕ−４４５９０は、鉱油フル中
に懸濁されると特徴的な赤外線吸収スペクトルをもって
いる。

ピークはセンナメートルの逆数で表わされた次の波長で
観察される。

吸収帯周波数（波数） ３４４０ ４００ ３４０ １９０ ０８０ ０００ ２９６０（Ｎ−ヌジョール） ２９３０（Ｎ） ２８６０ （Ｎ） １６９５ ｓｈ ６８３ ５１０ ５０３ ４８３ １４６３（Ｎ） ４４０ ４２１ ４０７ ３９６ １３７５（Ｎ） ３５０ ３１５ ３００ ２８０ ２７６ ２６２ ２４３ ２３０ｓｈ １９５ １６５ １３３ ０９３ 吸収帯周波数（波数） 強 度 １０８５ Ｗ １０６０ ５１０１１
５９８５
Ｍ９７１
Ｗ９４３
Ｍ８８５ Ｗ８７２
Ｗ８４９
Ｗ８２６
Ｗ７９２
Ｍ７５５ Ｍ７
３５ Ｗ注：ｓｈはシ
ョルダーの吸収帯を意 味する。

’［Ｊ−４４，５９０はＫＢｒディスク中に加圧された
時にも、特徴的な赤外線吸収スペクトルをもっている。

ピータは、センナメートルの逆数で表わされた次の波長
に観察される。

吸収帯周波数（波数） ４４０ ２００ ０８０ ０００ ９７０ ９６０ ９３５ ９２０ ８７０ １６９７ ｓｈ ６８５ ５１０ 吸収帯周波数（波数） １４８２ ４６１ ４３７ ４２０ ４０６ ３９６ ３４９ ３１０ ２９８ ２９０ ２７５ｓｈ ２６３ ２４３ １９５ １６５ １３３ ０９７ ０８５ ０６０ ０１０ ８５ ７１ ４２ ８３ ７０ ４７ ２７ ９１ 強度 吸収帯周波数（波数） 強 度 ５４ ３３ 注：ｓｈはショルダー吸収帯 を意味する。

本明細書を通じて赤外線吸収帯の強度は、それぞれＳ、
Ｍ、Ｗで表わされ、吸収帯近辺の背景に対して近似的に
示される。

Ｓ帯はスペクトルの最強と同じオーダーのものであり、
Ｍ帯は最強帯の１／３ないし２／３の強度であり、また
Ｗ帯は最強帯の１／３未満の強度のものである。

これらの推定は、透過パーセントの尺度に基づいて行な
われている。

次のものはＵ−４４，５９０の構造であると考えられる
。

このようにＵ−４４，５９Ｑは俗名の５・６−シヒドロ
ー５−アザチミジン、又はその化学名の１−（２−ｆオ
キシ−β−Ｄ−エリスローペントフラノシル）−５・６
−ジヒドｒ：ｌ−５−メチルーＳトリアジン−２・４（
ＩＨ・３Ｈ）−ジオンによって参照することができる。

Ｕ−４４，５９０の抗菌活性 上の抗菌スペクトルは次の培地および条件による標準寒
天希釈試験によって得られた。

Ｐ、ムルトシダおよびヘモフィルス種を５％脱フィブリ
ン化うさぎ血を加えたディフコ製血液寒天培地（Ｄｉｆ
ｃｏ Ｂｌｏｏｄ Ａｇａｒ Ｂａ５ｅ）に生育さ
せた以外は、すべての試験菌に対してディフコ製脳心浸
出培地（Ｄｉｆｃｏ Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉ
ｎｆｕｓｉｏｎＭｅｄｉｕｍ ）が使用された。

全部３７℃で１６〜 ＊１８時間好気的に生育させた（
但しヘモフィルス種は嫌気的に生育させた）。

接種菌は３７℃で一夜（１６〜１８時間）生育させ、１
０−３希釈液を０．０２５ｍ１という率（接種菌１滴当
り約２５００ないし２５０００の細菌数）で寒天培地の
接種に使用した。

選んだ微生物をはつかねずみに感染させたＵ４４．５９
０の生体内試験は以下のとおりである。

Ｕ−４４，５９０の抗ビールス活性 以下は抗生物質Ｕ−４４，５９０の抗ビールス活性の一
例である。

抗生物質をはつかねずみに皮下投与シ、コレニヘルペス
・シンプレックス（Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ 、
単純庖疹）ビールスを静脈内接種する。

ビールス感染の２時間前に処置を始め、その後−日４回
５日間処置を続ける。

材料、方法、および結果について詳細な記録は以下のと
おりである。

各々体重約２０？のオスはつかねずみを１群２０匹の４
群に分ける。

第１群は塩水で処置する。第２群は４００ｍ９／ｋｇ／
ｄｏｓｅ （ｍｋｄ ）のＵ４４５９０、第３群は２
００ｍｋｄのＵ ４４５９０、および第４群は１００ｍｋｄのＵ−４４５
９０で処置する。

抗生物質を塩水に溶解し、０．１．２．３および４の各
日の午前８時、正午１２時、午後４時、および午後８時
に首筋に皮下投与スる。

１０−１°５希釈のヘルペス・ビールスを、４０ＬＤ５
０のビールス量に等しい０．０５ ｍ１７１匹で第０日
の午前１０時に尾部静脈に接種する。

麻痺と死亡を毎日記録する。

後肢の麻痺は普通１〜２日後に死亡となる。

麻痺がきたはつかねずみはすべて死亡した。

添付図の曲線に示すように、４群の死亡パターンは、得
られた投与量応答を例示している。

第１１日に行なった結果の統計分析から、３処置群は全
部、対照群と著しく異なっていることがわかる。

微生物 Ｕ−４４，５９０の製造に使われる微生物はストレプト
ミセス・プラテンシス・バラエティ・クラレンシス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ ｖａ
ｒ 。

ｃｌａｒｅｎｓｉｓ ）ＮＲＲＬ ８０３５である。

この微生物の二次培養物は、米国イリノイ州ビオリアの
米国農務省北部地域研究所の永久保存株から得ることが
できる。

日本においては昭和５０年３月２４日に工業技術院微生
物工業技術研究所に保管委託を申請し受理された。

微生物受託番号は微工研菌寄第２９７２号であり本願の
出願公告後に分譲される。

本発明の微生物は、アップジョン研究所のアルマ・ダイ
エツツ（Ａｌｍａ Ｄｉｅｔｚ ）により研究され特徴
が記録されたものである。

新しい土壌単離物は吸湿性の胞子風をもつが、滑らかな
帽子型（三日月形）又はブラジルナツツ型（楕円形）の
胞子をもっており、ある特徴からストレプトミセス・プ
ラテンシスの典型培養基とは異なることがわかった。

新培養基の著しい差違は、抗生物質’［Ｊ−４４５９０
の産生である。

新単離物はその培養基、顕微鏡、および生化学特性によ
って、ストレプトミセス・プラテンシスの一変種と認め
ることができる。

従って、この新単離物をストレプトミセス・プラテンシ
ス・バラエティ・クラレンシス・ダイエッソ・バラエテ
ィ・ツバ（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎ
ｓｉｓ ｖａｒ 、 ｃｌａｒｅｎｓｉｓＤ １ｅｔｚ
ｖａｒ 、ｎｏｖａ ）と指定することが提案される
。

国際細菌命名規約（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃ
ｏｄｅ ｏｆＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ Ｂａｃ
ｔｅｒｉａ、 １９６６年、国際細菌命名委員会の司
法委員会編集局綿。

Ｉｎｔ、Ｊ。Ｓ ｙｓｔ 、 Ｂ ａｃｔｅｒｉｏｌ
、、１６巻４５９〜４９０頁〕の規則７が、変種の名称
指定に適用された。

ストレプトミセス・プラテンシス・バラエティ・クラレ
ンシスは、典型種のストレプトミセス・プラテンシス・
ビンテンジャーおよびゴツトリーブ（Ｓ ｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ
ａｎｄＧｏｔｔｌｉｅｂ Ｘシャーリング・イー・ビ
ー（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ、 Ｅ、 Ｂ、 ）およびディー
・ゴツトリーブ（Ｄ、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ ）、１９６８
年。

ストレプトミセスの典型培養基の協力記載■。

第一および第二研究からの追加菌種記載。

Ｉｎｔ、Ｊ、 ５ｙｏｔ。Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ １１８
巻２７９〜３９２頁〕〔トレスデー・エイチ・ディー（
Ｔｒｅｓｎｅｒ、 Ｈ，Ｄ、 ） 、イー・ジエー・バ
ッカス（Ｅ、 Ｊ 、 Ｂａｃｋｕｓ ）、およびジー
ン・エイ・ヘイズ（Ｊ ｅａｎ Ａ、Ｈａｙｅｓ ）１
９６７年。

ストレフトミセス・ハイグロスコピクス（Ｓｔｏｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ）様複
合体における形態的胞子型。

Ａ ｐｐｌ ８Ｍ １ｃｒｏｂｉｏｌ 、、１５巻６３
７〜６３９頁〕ＮＲＲＬ２３６９、および最近特性化さ
れた２菌種すなわちストレプトミセス・プラテンシスＮ
ＲＲＬ ３５９３ （エバンス、ラルフ・ヘンリー・シ
ュ＝ ７ （Ｅｖａｎｓ 。

Ｒａ１ｐｈ Ｈｅｎｒｙ Ｊｒ、）およびサムエル・オ
ーエン・トーマス（Ｓａｍｕｅｌ Ｏｗｅｎ Ｔｈｏ
ｍａｓ）、１９７１年。

抗生物質ＡＨ２７２α２とＡＨ２７２β２およびそれら
の製造法。

米国特許第３５９２９２５号〕およびストレプトミセス
・プラテンシスＮＲＲＬ３７６１ （オクダ・トモハル
およびアワタゴーチ・シゲミ。

１９７３年、抗生物質ＹＬ７０４とその製造。

米国特許第３７１８７４２号〕と比較されている。

色特性：気中生育は白色ないし黄色ないし灰色。

成る培地では湿った黒い吸湿性斑点。

メラニン陰性。

エフタフロームによる外観〔ダイエツツ・エイ（Ｄｉｅ
ｔｚ、 Ａ、 ） １９５４年。

放線菌分類の補助手段としてのエフタフローム透過度。

Ａｎｎ、Ｎ、Ｙ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ 、６０巻１５
２〜１５４頁〕を第１表に示す。

参考の色特性を第２．３表に示す。

新培養基をトレスデーおよびバッカスのホワイト（Ｗ）
、イエロー（Ｙ）およびグレー（ＧＹ）の色系統ＣＴ
ｒｅｓｎｅｒ 、Ｈ。

Ｄｏ、ａｎｄ Ｅ、 Ｊ、 Ｂａｃｋｕｓｏｌ ９６３
年。

ストレプトミセート分類法用のカラーホイール・システ
ム。

Ａｐｐｌ ０Ｍ１ｃｒｏｂｉｏ１．１１巻３３５〜３３
８〕に置いてもよい。

顕微鏡特性：胞子の連鎖はかたい（しまった）らせん状
、はどけたないしは長い開いたらせん状。

胞子の連鎖はプリドハム等の感覚ではらせん状（Ｓ）〔
プリドハム・ティー・ジー （Ｐｒｉｄｈａｍ、 Ｔ、Ｇ、 ）、シー・ダブリュー
・ヘラセルタイン（Ｃ，Ｗ、 Ｈｅ５ｓｅｌｔｉｎｅ
）、およびアール・ジー・ベネデイクト（ＲｏＧ。

Ｂｅｎｅｄｉｃｔ ）。

１９５８年。選ばれた群にヨルストレプトマイセーテス
の分類指針。

形態学的区分による菌株分類。

Ａｐｐｌ 、 Ｍ １ｃｒｏｂｉｏｌ 、、６巻５２〜
７９頁〕。

胞子は帽子形（三日月形）又はブラジルナツツ（楕円）
形。

胞子はトレスデーおよびバッカスのプラテンシス型であ
る〔トレスデー・エイチ・デー（Ｔｒｅｓｎｅｒ 、
Ｈ，Ｄ、 ）、イー・ジエー・バッカス（Ｅ、Ｊ、 Ｂ
ａｃｋｕｓ ）およびジーン・エイ・ヘイズ（Ｊｅａｎ
、 Ａ、 Ｈａｙｅｓ）。

１９５７年。

ストレプトミセス・ハイグロスコピクス（Ｓ ｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ）様の
複合体における形態学的胞子型。

Ａｐｐｌ。Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 １５巻６３７〜６３
９頁〕。

胞子の陰影は、電子顕微鏡による直接観察では滑らかで
ある。

胞子表面はダイエツツおよびマシューの炭素複製技術に
よると表面斑点がうね状にある（ Ｄｉｅｔｚ、 Ａ、
ａｎｄ Ｊ、Ｍａｔｈｅｗｓ、 １９６２年。

炭素複製による分類法。■、ストレプトミセス・ハイグ
ロスコピクスの検討。

Ａｐｐｌ。Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ 、、１０巻２５８〜２
６３頁〕。

培養基および生化学特性：下記の第４表を参照。

炭素利用：炭素化合物上における生育は、プリドハムお
よびボッ） ＩＪ−ブの合成培地（Ｐｒｉｄｈａｍ、Ｔ
、 Ｇ、ａｎｄ Ｄ、 Ｇｏｔｔｌｉｅｂ、１９４８年
、種決定の補助手段としてのある放線菌目 （Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ ）による炭素化合
類の利用。

Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ １５６巻１０７〜１１４頁〕
第５表、およびシャーリングとゴツトリーブの合成培地
（Ｓｈｉｒｌｉｎｇ、 Ｅ、Ｂ、ａｎｄ Ｄ。

Ｇｏｔｔｌｉｅｂ、１９６６年、ストレプトミセス種の
特性化方法。

Ｉｎｔ、 Ｊ、 ５ｙｓｔ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ 。
１６巻３１３〜３４０頁〕第６表、によって決定された
。

温度：培養基は１８〜３７℃でベネット、ツアペック蔗
糖、マルトース−トリプトン、およびヒツキー・トレス
ナー寒天上でよく生育した。

最適生育は２４〜３７℃であった。

新培養基および典型培養基は４５〜５５℃で生育しなか
った。

ＮＲＲＬ３５９３およびＮＲＲＬ３７９１と指定された
培養基は４５℃で生育したが、５５℃ではしなかった。

抗生物質生産性：下記第７表を参照。

出所：土壌。

型培養基：ストレプトミセス・プラテンシス・ピッテン
ジャーおよびゴツトリーブ （Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ
Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ ａｎｄＧｏｔｔｌｉｅｂ ）、Ｎ
ＲＲＬ ２３６３゜型変種：ストレプトミセス・プラテ
ンシス・バラエティ・プラテンシス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓｐｌａｔｅｎｓｉｓ ｖａｒ、 ｐｌａｔｅ
ｎｓｉｓ ）、 ＮＲＲＬ２３６４゜ ・変種：ストレプトミセス・プラテンシス・バラエティ
・クラレンシス・ダイエッソ・バラエティ°ツバ（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ ｖａｒ
。

ｃｌａｒｅｎｓｉｓ Ｄ １ｅｔｚ ｖａｒ 、 ｎｏ
ｖａ ）。

本発明の新化合物類は、水中の好気的条件下に水性栄養
培地中で生産生物を生育させるときにつくられる。

また限定量の製造には表面培養基およびびん類を使用で
きることも理解されるところである。

生物は炭素源、例えば同化できる炭水化物、および窒素
源、例えば同化できる窒素化合物又は蛋白質材料を含有
する栄養培地中で生育させる。

好ましい炭素源は、ぶどう糖、黒砂糖、蔗糖、グリセロ
ール、殿粉、とうもろこし殿粉、乳糖、デキストリン、
糖みつ、等を包含する。

好ましい窒素源はコーンスチープリカー、酵母、固形乳
を加えた自己消化ビール酵母、大豆粉、綿実粉、とうも
ろこし粉、固形乳、カゼインの膵液消化物、魚粉、デイ
スチラーズ・ソリッド、動物ペプトン液、肉および骨の
砕片等を包含する。

これらの炭素源と窒素源の組合せを利用するのが有利で
ある。

痕跡の金属類、例えば亜鉛、マグネシウム、マンガン、
コバルト、鉄分等は、発酵培地に加える必要がない。

というのは培地の滅菌に先立って、水道水および未精製
成分を培地成分として使うためである。

本発明の化合物の製造は、微生物の満足な生育を促す温
度、例えば約１８°と４０℃の間、および好ましくは約
２０°と３２℃の間で実施できる。

化合物の最適製造は、普通には約５ないし１５日間で得
られる。

培地は通常、発酵中に中性に止っている。

最終ｐＨは部分的には緩衝液がある場合にはそれに、ま
た部分的には培養基培地の初期ｐＨに左右される。

生育を大形容器およびタンク内で実施する時には、新規
化合物の製造に際しての著しい遅れとそれに伴う設備利
用の非能率をさげるため、接種用微生物については胞子
型よりも増殖期のものを使うのが好ましい。

従って、土壌、液体Ｎ２寒天プラグ、又は斜面培養基か
らの−すくいを溶液培養基に接種することによって、増
殖期の接種菌を栄養液培養基中につくることが望ましい
。

こうして若く活発な増殖期の接種菌を確保したら、これ
を無菌的に大形容器又はタンクに移す。

増殖期の接種菌をつくる培地は、微生物の良好な生育が
得られる限り、新化合物の製造に利用されるものと同じ
、又は別のものでありうる。

本発明の化合物の単離と精製には種々の手順、例えば溶
媒抽出、バーチジョン・クロマトグラフィ、シリカゲル
クロマトグラフィ、フレイブ装置におげろ液−液分配、
樹脂上の吸収、および溶媒からの結晶化を使用できる。

好ましい回収法においては、本発明の化合物は、ろ過又
は遠心分離のような慣用の手段によって菌糸および未溶
解固形物を分離することによって、培養基培地から回収
される。

抗生物質は活性炭上の吸収により、ろ過又は遠心分離さ
れた培養液から回収される。

次に成る種の不純物類を除去するため、活性炭を水洗す
る。

次にアセトン：水の溶液で溶離して、抗生物質を活性炭
から除く。

溶離液中のアセトンを有利には蒸発によって除き、残る
水性残留物を凍結乾燥すると、抗生物質Ｕ４４．５９０
の粗調製剤が得られる。

好ましい精製手順は、上記のＵ−４４，５９０の粗調製
剤をシリカゲル上のクロマトグラフィにかげて、Ｕ−４
４，５９０を溶離することである。

標準寒天プレート試験によって細菌クレブシェラ・ニュ
ーモニアエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉ
ａｅ ）に対して活性を示すフラクションを集めて乾固
させると、比較的純粋なＵ−４４，５９０調製剤を生ず
る。

それ以上の精製は、Ｕ−４４，５９０の結晶性ジアセテ
ート誘導体へのアセチル化によって達成される。

ゼンブレンＣＧ、Ｚｅｍｐｌｅｎ およびイー・パク
ス（Ｅ、Ｐａｃｓｕ ）、Ｂｅｒ、６２巻１６１３頁（
１９２９年）〕によるメタノール中のナトリウムメトキ
シドによる脱エステル化（エステル転化）、および触媒
量の塩基の二酸化炭素による中和によって、遊離抗生物
質Ｕ−４４，５９０が得られ、これはメタノール−酢酸
エチルから容易に結晶化してＵ−４４，５９０の純粋な
調製剤を生ずる。

抗生物質Ｕ−４４，５９０はストレプトコッカス・ヘモ
リチクスに対して活性があり、このためこの微生物の不
活性化が望ましい場合には、この微生物で汚染された器
具、道具類又は表面の消毒に使用できる。

またＵ−４４，５９Ｑはエチェリキア・コリに対して活
性があり、この細菌に対する抗菌作用のため製紙系統に
おける粘液産生の減少、阻止、および／または撲滅のた
めに使用できる。

抗生物質Ｕ−４４，５９０はまた、エチェリキア・コリ
汚染から解放することによってトリコモナス・フイータ
ス（Ｔ ｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｆｏｅｔｕｓ ）、ト
リコモナス°ホミニス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｈｏ
ｍｉｎｉｓ ）およびトリコモナス・ウアギナリス（Ｔ
ｒｉｃｈｏｍｏｎａｓｖａｇｉｎａｌｉｓ ）の培養基
寿命を長くするのにも使用できる。

更にＥ、コリは病院の花びんの中にも存在し、病院の患
者に危険を与えることが報告されているＥ、コリ生育を
阻止するためにも使用できる。

クリニカル・メデイシン（ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃ
ｉｎｅ ）、１９７４年２月、９頁を参照。

本明細書に明らかにされているようにＵ ４４．５９０の新規アシル誘導体類は、化合物を脱アシ
ル化してＵ−４４，５９０にするような手段をもった環
境において、Ｕ−４４，５９０と同じ抗生物質目的に対
して使用できる。

このためＵ４４．５９０のアシル誘導体類は、本明細書
で明らかにされているダラム陰性菌、例えばＥ、コリに
感染された実験用はつかねずみの処置に使用できる。

更にＵ−４４，５９０のアシル誘導体類をＵ４４．５９
０の品質向上のために使用するのが有利である。

これは、Ｕ−４４，５９０をアシル化し、不純物を比較
内含まないアシル化された化合物を回収し、次にアシル
化されたＵ−４４，５９０を脱アシル化してより純粋な
形のＵ−４４，５９０を得ることによって達成される。

次の実施例は本発明の方法と生成物の例示であるが、限
定的に考えられてはならない。

他に注意がなげれば、百分率はすべて重量によるもので
あり、溶媒混合物の割合は容量による。

実施例 Ｉ Ａ部 発酵 各々が次の成分からなる無菌接種培地１００ｍｌを有す
る一連の５００ｒｒＬｌ三角フラスコを接種するのにス
トレプトミセス・プラテンシス・バラエティ・クラレン
シス、ＮＲＲＬ８０３５、の土壌保存株を使用する。

グルコースモノ水和物 １０ｆ／７バクトペ
プトン（ディフコ’） １０？／１（Ｂ ａｃｔ
ｏ Ｐ ｅｐｔｏｎｅ （Ｄ ｉｆ ｃｏ ） ）バク
ト酵母エキス（ディフコ） ２．５Ｐ／ｌ（Ｂａ
ｃｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｄｉｆｃｏ）） 脱イオン水 残りフラスコを
２５０ ｒｐｍで回転するガンプ回転振とう機上で、２
８℃で三日間生育させる。

上記の種菌接種菌を、各々が無菌発酵培地１００ｒｎｌ
を含有する一連の５００ｒｒＬｌ三角フラスコの接種に
使用する。

接種率は発酵培地１００ｒｒｌｌ当り種菌接種菌５ｒｆ
Ｌｌである。

発酵培地は次の成分からなる。

ブレア・ラビット（Ｂｒｅｒ Ｒａｂｂｉｔ） ２
ＱｒｒＬｌ糖みつ（ＲＪＲフーズ社、Ｎ、 Ｙｏ、 Ｎ、Ｙ、１００１７） 酵母エキス（ディフコ）デトロイト、 ミシガン １グ／ｌ グルコースモノ水和物 １０グ／ｌデキス
トリン（コーン・プロダクツ・ １０ ？／７３カンパ
ニー・インターナショナル Ｉｎｃ 、 、インターナショナル・プラザ、イングル
ウッド・クリ７、ニューシ ャーシー０７６３２） プロテオース・ペプトン＃３（ティ １０ ？／１フコ
） 水道水 残り 事前滅菌のｐＨは７．０である。

接種された発酵フラスコを２８℃の温度で、２５０ ｒ
ｐｍ、２．５インチの行程で運転されるガンプ回転振と
う機上で培養する。

必要により、ニーコン消泡剤（ユニオンカーバイド社、
Ｎ、Ｙ、、Ｎ、Ｙ、の供給による合成消泡剤）を使用す
る。

収穫は普通には５〜１２日間の発酵後である。

発酵液の抗生物質力価は、細菌クレブシェラ・ニューモ
ニアエを使用して、寒天プレートディスク検定により照
合される。

この細菌を次の組成の検定用寒天（ストレプトマイシン
検定寒天、ＢＢＬ、コツキースピル、メリーランド２１
０３０）に接種する。

牛肉エキス １．５ ？／ｌ
酵母エキス ３．０グ／ｌゲリ
セート・ペプトｙ（Ｇｅｌｙｓａｔｅ ６．０
？ ／ ｌ：Ｐｅｐｔｏｎｅ） （バルチモア生物学研
究所の供給） 寒天 １５．ｏグ／ｌ 脱イオン水 残りｐＨを７．９
に調整。

１２１℃（１５ポンド水蒸気圧）で１５分滅菌する。

燐酸緩衝液（０，Ｉ Ｎ ｐＨ６，０）を希釈剤とし
て使用する。

寒天プレートを３７℃で１６〜１８時間培養する。

抗生物質’［Ｊ−４４，５９０の存在は、あらかじめ発
酵試料を塗ったペーパーディスク周辺の阻止帯域によっ
て証拠立てられる。

阻止帯直径は抗生物質試料の効力を反映している。

このため、抗生物質試料０．０８ ｍｌを塗面した１２
．７間のペーパーディスクを使用する２０１１ｔｒＩＬ
の阻止帯は、ｒｕｌ当り１生物単位（Ｉ Ｂ Ｕ／ｒｄ
）と表わされる。

Ｂ部 回収 上記のとおりに得られる全発酵液（Ｋ、ニューモニアエ
に対して５ＢＵ／ｒＩＬｌを検定する液約１６００ｒｒ
Ｌ０を、フィルター助剤としてげいそう土を使用してろ
過する。

フィルターケーキな水洗する。

次に透明発酵液と洗浄液Ｃ１８００ｒｎｌ）を活性炭カ
ラムに通す。

カラムの寸法は２．８Ｘ４４□で、活性炭１２６グを含
有する。

炭素カラムを水１７５０ｒｎｌで洗い、洗浄液を捨てる
。

次にカラムを各１１の１％、２％および５％濃度のアセ
トン：水で洗う。

これらの溶離液も捨てる。次にカラムを各１１の１０％
、２５％および５０％濃度のアセトン：水で溶離する。

抗生物質Ｕ４４５９０を含有するこれらの溶離液を一緒
にして、３０℃／ １５ ｍｍＨｇの回転蒸発器上でア
セトンを除去する。

生ずるアセトンを含まない調製剤を水性残留物までシェ
ル凍結し、次いで凍結乾燥すると、Ｋ、ニューモニアエ
に対してＵ ４４．５９０ノ２ＢＵ／即ヲ検定す７：＋３．５５Ｓ”
＆生ずる。

便宜上ソリッドＡとラベルを付けたこの調製剤を、次の
ように更に回収手順にかける。

メタノール：クロロホルム（１： １ ｖ／ｖ ）中で
詰めたシリカゲル４２０ｖかもシリカゲル（メルクーダ
ルムシタット・カット７７３４）のカラムをつくる。

カラムの寸法は３．８Ｘ８８ｍｍである。上記のとおり
に得られるソリッドＡをカラム上部に加え、次いでカラ
ムをメタノール：クロロホルム（１：１ｖ／ｖ）で溶離
する。

上記のに、ニューモニアエ検定で決定された活性フラク
ションを一緒にし、３０℃／ １５ ｍｍＨｇで回転蒸
発器の使用によって一緒にしたフラクションから溶媒を
除去する。

収量は抗生物質Ｕ−４４，５９０の７．５ＢＵ／Ｉｖを
検定するもの８３０ｙｎｇ。

０部 精製その１ 上記のようにＢ部で得られる抗生物質Ｕ ４４．５９０の調製剤を、シリカゲル上で酢酸エチル：
メタノール（６：１ｖ／ｖ）の溶媒系を使用してクロマ
トグラフィにかげると、Ｕ −４４，５９０を含有する
より純粋な調製剤を生ずる。

この精製段階の手順は次のとおりである。

溶媒中におけるシリカのスラリーをカラム中へ詰めたあ
とに１０：１の高さ／直径比を与えるように詰めること
によって、酢酸エチル：メタノール（６：１ｖ／ｖ）中
のシリカゲル（クロマトグラフィ処理しようとするＵ−
４４，５９０調製剤１当り（メルクーダルムシュタット
、１ｉｓｙ）のカラムをつくる。

上記Ｂ部で記載したようにして得られたＵ−４４，５９
０調製剤をメタノール中に溶解し、シリカゲルを加え（
Ｕ−４４，５９０調製剤の使用量の３倍）、次に４００
／１５１！ＬＴＩＬＨｇの回転式蒸発器上で乾燥粉末と
する。

生ずる乾燥固体を酢酸エチル：メタノール（６：１ｖ／
ｖ）の少量溶媒の最上部を通してシリカカラムの上部へ
加える。

４１！の先部分のあと、５０ｍ１フラクシヨンを集め、
Ｋ、ニューモニアエに対する活性を検定した。

活性フラクションは固体含有量についても試験する。

５０ＢＵ／ｍ９より大きいフラクションを集め、４０℃
７７ｍｍＨｇの回転蒸発装置中で乾固させると、シロッ
プを生ずる。

フラクションおよびに、ニューモニアエ（Ｋ、ｐ）活性
、それに通常実験からの固体は次のとおりである。

フラクション１２０〜１８０を一緒にして４０°／７ｍ
ｍＨｇの回転蒸発器上で乾燥させると、５４ Ｋ、 ｐ
、 Ｂ Ｕ／ｍ９を検定するシロップ２．６６ｆを生ず
る（フラクション１８１〜２４０は３２ＢＵ／ｒｎ９の
シロップ８３０ｒｖを生じ、フラクション２４１〜３０
０は１１ＢＵ／ｒｖを検定するシロップ７１０■を生ず
る）。

標準は、この６ＢＵ／ηの標準に対する通常の検定に対
し、４ＢＵ／■を検定した。

Ｄ部 精製その２ Ｃ部に述べたとおりに得られるＵ−４４゜５９０の調製
剤は、今度はメタノール：塩化メチレン（ｉ ： ｓ
ｖ／ｖ）の溶媒系を使用する別のシリカゲルカラム上に
通すことによって、本質的に純粋なＵ −４４，５９０
の調製剤まで更に精製できる。

手順は次のとおりである。

Ｃ部で得られるＵ −４４，５９０調製剤２．２８′ｉ
Ｉをメタノールに溶解し、Ｃ部で述べたとおりにシリカ
ゲル７ｖを加える。

この混合物からの溶媒を４０℃／７ｍｍＨｇの回転蒸発
器上で除去する。

生ずる固体をシリカゲルカラムへ加える（７５０Ｐ、４
．８ Ｘ ９６ｃｒＩＬ１滞留容積１５００ｍｌ、、Ｍ
ｅＯＨＣＨ２Ｃ１２（１： ８ ｖ／ｖ）中でつくられ
た〕。

前部分（１１００ｒｒＬＪ）に続いて５０ｒｆＬｌフラ
クシヨンを集める。

フラクション１４１〜２００は、シロップの形に乾固さ
せた時に重さ３９０■である。

この材料は薄層クロマトグラフィ（ｔｌｃ ）によって
ほぼ純粋なＵ−４４，５９０であることが示されている
。

ｔｉｅはＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃ１２（１： ９ ｖ／ｖ）
の溶媒系を使用してシリカゲルプレート上で行なわれる
。

抗生物質帯域は、プレートにＩ ０４ ／４’ｌｎ０４
散布液および５０％Ｈ２ＳＯ４水溶液を散布し、続いて
１１０℃で約１０分加熱することによって検出される。

この溶媒系における活性材料のＲｆは０．１１である。

Ｅ部 精製その３ Ｄ部で得られる抗生物質Ｕ−４４，５９０の調製剤は、
調製剤のアセチル化とそれに続く脱アセチル化および結
晶化によって更に精製できる。

アセチル化手順は次のとおりである。

Ｄ部に述べるとおりにつくられ、１６０ ＢＵ／■を検定するＵ−４４，５９０調製剤の試料（約
２２ｉ）をピリジン３００ｒＩｌｌに溶解し、磁気でか
きまぜられたこの溶液に無水酢酸１５０ｒＩｌｌを４５
分にわたって加える。

一夜室温に放置後、揮発材料を４００／１５ｍｉＨｇお
よび終りには高い真空下に回転式蒸発器でできるだけ完
全に除去すると、淡褐色のシロップを生ずる。

このシロップをＣＨ２Ｃｌ２２００ｍ１と共にかきまぜ
、無色果状沈殿物をろ過によって除き、洗浄液が無色に
なるまでＣＨ２Ｃｌ□で洗う。

沈殿物を捨てる。

一緒にしたろ液と洗浄液をＨＣＩ 水溶液（Ｎ／２０．
１００ｍので２回洗う。

水層は第二回洗浄後酸性である。

水相を捨てる。有機相を次に水１００ｒａｌ、 ＮａＨ
ＣＯ３飽和水溶液１００ｒｒＬｌ、再び水１００ｍ１で
洗い、乾燥（Ｎａ ２ ＳＯ４） させる。

水層を捨てる。４０°′および１５ｍｉＨｇの回転式蒸
発器上で溶媒を除去すると、暗色のシロップ２１．１０
Ｐを生じ、これを水蒸気浴上で暖めることによってＥｔ
ＯＡｃ （５０ｍｌ！ ）中に溶解する。

冷却後、結晶化が起る。

固体をろ過によって除去し、ＥｔＯＡｃで洗い、６０°
／ １５ ｍ鳳Ｈｇで乾燥させると、本質的に純粋な３
′・５′−ジー〇−アセチル化Ｕ−４４，５９０（１２
，０ＩＰ、融点１２３〜１２４．５℃）を生ずる。

同じ溶媒から再結晶させると、融点１２４〜１２５℃の
Ｕ−４４，５９０ジアセテートを生ずる。

次にこの化合物をＵ−４４，４７４と呼ぶ。

Ｕ−４４４７４を次のようなゼンプレン手順によって脱
アセチル化すると、本質的に純粋なＵ４４．５９ Ｑを
与える。

結晶ジアセテートのＵ−４４，４７４（２４，９０１）
をメタノール４０ （ＭＩＡ’中で磁気的にかきまぜ、
メタノール性ナトリウムメトキシド（スト−ファー・ケ
ミカル社、２５％、５滴）を加える。

固体が溶解してしまうまでかきまぜを続け（ドライエラ
イト（Ｄｒｉｅｒｉｔｅ ）管）、溶液を室温で約２時
間放置する。

次に固体二酸化炭素の小片をかきまぜながら注意深く加
えてメトキシドを中和し、溶媒を４００および１５ｍｉ
Ｈｇの回転式蒸発器上で除去し、無色油を得る。

残留物を水蒸気浴上で暖めることによってメタノール５
０ｍ１中に溶解し、酢酸エチル５ｏｒｎｌで希釈する。

冷却すると結晶化が起る。固体１２．３９１をポンプで
焼結されたフィルターに集め、メタノールで洗い、６０
０／１５ｍｍＨｇの真空オブン中で乾燥する。

抗生物質’（Ｊ−４４，５９０は無色柱状針高として結
晶化する。

融点１４１〜１４２°。ろ液プラス洗浄液から溶媒を蒸
発器上で除去し、メタノール−４Ｅ酸エチルから結晶化
させると、追加材料（１，９１Ｐ、融点１４０．５〜１
４１．５°）を生ずる。

実施例 ２ アセチル化されたＵ−４４，５９０を得るために任意の
容易に入手できるアシル化剤でアシル化することによっ
て、実施例１のＥ部に述べたアシル化手順にかえること
ができる。

次にこのアシル化されたＵ−４４，５９０生成物をこの
技術によく知られた方法によって脱アシル化することが
でき、Ｕ−４４，５９０の精製された調製剤を生ずる。

Ｕ４４．５９０のアシル化に使用でき、かつ本発明の範
囲内にあるような、容易に入手できるアシル化剤は、米
国特許第３４２６０１２号、５および６欄に明らかにさ
れたとおりである。

実施例 ３ 実施例２に明らかにされたように、Ｕ− ４４，５９０の種々のアシレート類をつくることができ
、これらのアシレートはＵ−４４，５９０の品質向上に
有用である。

実施例１のＥ部の手順に従うことによって、Ｕ−４４，
５９０の３′・５′−ジエステル類がつくられる。

５′−モノ−エステル類は、標準手順により、最少量の
アシル化剤を使用してつくることができる。

３′−モノ−エステル類およびホスフェートは、Ｕ−４
４，５９０をトリチル化して５′−トリチル誘導体を得
て、この化合物を上に明らかにされたものから選ばれる
望むアシル化剤でアシル化すると、３′−モノ−エステ
ル５′−トリチル誘導体を生じ、次にこれをトリチル基
の除去によって３７−モラーエステルに転化できる。

米国特許第３４２６０１２号の４および５欄に明らかに
されたトリチル化手順、又はその他の標準トリチル化手
順を使用できる。

トリチル基は、米国特許第３４２６０１２号の６欄に明
らかにされた手順を使用して除去できる。

実施例 ４ Ｕ−４４，５９０の５７−ホスフェートは、Ｄ、ミツノ
ブ Ｋ、カド−１およびＪ、キムテ（Ｊ。

Ａｍｅｒ、 Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ、 、９１巻６５１０
頁（１９６９年）〕の研究に明らかにされた手順によつ
Ｃつくることができる。

この化合物はＵ４４．５９Ｑと同じ目的に使用できる。

上記の化合物類は本発明の範囲内に入るＵ−４４，５９
０の誘導体であるが、次の構造式によって示される。

式中ＲとＲ′は２〜１８個の炭素原子のカルボン酸アシ
ル基：又はハロー、ニトロ−ヒドロキシ−アミノ−、シ
アノ−、チオシアノ−１および低級アルコキシ−置換の
２〜１８個の炭素原子の炭化水素カルボン酸アシル基か
らなる群から選ばれ、Ｒが水素でＲ′が上の定義のとお
り又はホスフェートであるか；又はＲ′が水素でＲが２
〜１８個の炭素原子のカルボン酸アシル基；又はハロー
、ニトロヒドロキシ−、アミノ−、シアノ−、チオシア
ノ−１および低級アルコキシ−置換の２〜１８個の炭素
原子の炭化水素カルボン酸アシル基又はホスフェートで
ある。

実施例１のＥ部に明らかにされたとおりにつくられるＵ
−４４，４７４に対する追加の特性データは以下のとお
りである。

元素分析’ Ｃ１３Ｈ１９Ｎ３０７ 測定値： Ｃ，４７，４１；Ｎ１５．８２、Ｎ１１２．
７６ ；０１３４．０１ 分子量：３２９（質量スペクトルで決定）赤外線吸収ス
ペクトル：Ｕ−４４，４７４は鉱油フル中に懸濁された
時に特徴的な赤外線吸収スペクトルをもっている。

ピークはセンナメートルの逆数で表わされる次の波長に
おいて観察される。

Ｕ−４４，７４７はＫＢｒディスク中に加圧される時も
特徴的な赤外線吸収スペクトルをもっている。

ピークはセンナメートルの逆数で表わされる次の波長で
観察される。

本発明は特許請求の範囲に記載の方法であるが、以下の
態様を包含する。

１、構造 又は次の物理的および化学的変数を特徴とする抗生物質
［Ｊ−４４，５９０、すなわち元素分析： Ｃ，４４，
１４；Ｈ，６，０８；Ｎ１１７．３６ ” 分子量：２４５（質量スペクトルで決定）融点範囲：１
４１〜１４２℃ 比旋光度：（ロ）賃−−５°（水中濃度０．９０３０）
溶解度：水および低級アルコール、例えばメタノールと
エタノールに易溶。

Ｍｅ２ＣＯ１Ｅ ｔ ０ＡＣ１炭素水素、ＣＨ２Ｃｌ２
およびＣＨＣｌ３に比較的不溶。

赤外線吸収スペクトル：（センナメートルの逆数で表わ
したもの） 鉱油中 の化合物〔式中ＲおよびＲ′は２〜１８個の炭素分子の
カルボン酸のアシル基；又は）〜ロー ニトロ−、ヒド
ロキシ−、アミノ−、シアノ−、チオシアノ−１および
低級アルコキシ置換の２〜１８個の炭素原子の炭化水素
カルボン酸アシル基であり；Ｒは水素でＲ′が上に定義
されたとおり又はホスフェートであるが；又はＲ′が水
素でＲが２〜１８個の炭素原子のカルボン酸アシル基；
又はハロー ニトロ−、ヒドロキシ−、アミノ−、シア
ノ−、チオシアノ−１および低級アルコキシ置換の２〜
１８個の炭素原子の炭化水素カルボン酸アシル基、又は
ホスフェートである〕。

３、 ＲおよびＲ′がアセチルである場合の前記第２
項の式、又は以下の特性によって特徴づけられる化合物
’［Ｊ−４４，４７４、すなわち元素分析： Ｃ１３Ｈ
１９Ｎ３０７ 測定値：Ｃ１４７，４１；Ｈ２Ｓ、８２；Ｎ、１２．７
６ ；０，３４．０１ 分子量：３２９（質量スペクトルで決定）赤外線吸収ス
ペクトル： Ｕ−４４，４７４は鉱油フル中に懸濁され
た時に特徴的な赤外線吸収スペクトルをもっている。

ピークはセンナメートルの逆数で表わされる次の波長で
観察される。

Ｕ−４４，４７４はＫＢｒ ディスク中に加圧された時
にも特徴的な赤外線吸収スペクトルをもっている。

ピークはセンチメートルの逆数で表わされる次の波長で
観察される。

４、ＮＲＲＬ８０３５の確認特性をもつストレプトミセ
ス・プラテンシス・バラエティ・クラレンシス（Ｓ ｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ ｗａｒ
。

ｃｌａｒｅｎｓｉｓ ）を水性栄養培地中で、好気的条
件下に、抗生物質Ｕ−４４，５９０の存在によって培地
に実質量の抗生物質活性が付与されるまで培養すること
からなる、抗生物質Ｕ−４４，５９０の製法。

５、水性栄養培地が同化できる炭水化物源と同化できる
窒素源を含有する、前記第４項の方法。

６、抗生物質Ｕ−４４，５９０が発酵液から単離される
、前記第４項の方法。

７、式 の化合物を、炭化水素カルボン酸およびハロニトロ−、
ヒドロキシ−、アミノ−、シアノおよびチオシアノ基で
置換された炭化水素カルボン酸の低級アルコキシカルボ
ニルノ・ライド類および酸ハライド類および酸無水物類
からなる群から選ばれるアシル化剤でアシル化すること
からなる、 式 の化合物の製法〔式中Ｒと「は２〜１８個の炭素原子の
カルボン酸アシル基；又は７％ロー ニトロ−、ヒドロ
キシ−、アミノ−、シアノ−チオシアノ−１および低級
アルコキシ置換の、２〜１８個の炭素原子の炭化水素カ
ルボン酸アシル基であり；Ｒが水素でＫが上に定義され
たとおりであるか、 又はＲ／が水素で
Ｒが２〜１８個の炭素原子のカルボン酸アシル基；又は
ハロー ニトロ−、ヒドロキシ−アミノ−、シアノ−、
チオシアノ−１および低級アルコキシ置換の２〜１８個
の炭素原子の炭化水素カルボン酸アシル基である〕。

の化合物をアセチル化すると 式 のジアセチル化合物を生ずる、前記第７項の方法。

９、式 の化合物をトリチル化して５′−トリチル化された化合
物を得て、５′−トリチル化された化合物をホスホリル
化して５′−トリチル化−３′−ホスフェートを得て、
次にトリチル基を除去して望む３′ホスフエートを得る
ことからなる、〔式中Ｒはホスフェートであり、 る〕の化合物の製法。

１０、式 「は水素であ の化合物をホスホリル化することからなる、式 〔式中Ｒは水素又はホスフェートであり、Ｒ′はホスフ
ェートである〕の化合物の製法。

【図面の簡単な説明】

添付の図は実験動物としてはつかねずみを使用した場合
の、単純庖疹ビールスに対する抗生物質Ｕ−４４，５９
０の抗ビールス活性を示す。 縦軸ははつかねずみの死亡数、横軸はビールス接種後の
経過日数である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ストレフトミセス プラテンシス バラエティ−ク
   ラレンシス（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｐｌａｔｅｎ
   ｓｉｓ ｖａｒ ｃｌａｒｅｎｓｉｓ ）を培養し、培
   養物から抗生物質Ｕ−４４，５９０を採取することを特
   徴とする抗生物質Ｕ−４４，５９０の製造法。