JPS5847256A - 抗原抗体反応の測定法 - Google Patents
抗原抗体反応の測定法Info
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- JPS5847256A JPS5847256A JP14503981A JP14503981A JPS5847256A JP S5847256 A JPS5847256 A JP S5847256A JP 14503981 A JP14503981 A JP 14503981A JP 14503981 A JP14503981 A JP 14503981A JP S5847256 A JPS5847256 A JP S5847256A
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗原抗体反応の測定法に関するものである。特
に本発明は、抗原又は抗体を担持1゜た不溶性微粒子を
用いる抗原抗体反応の測定法に関するものである。
に本発明は、抗原又は抗体を担持1゜た不溶性微粒子を
用いる抗原抗体反応の測定法に関するものである。
不溶性微粒子に抗原又は抗体を担持させたものと、抗体
および/又は抗原を含む試料とを溶液中に混合し、抗原
−抗体反応により生起する不溶性微粒子の凝集の程度を
、反応混合液に照射した光の透過光や散乱光の強度を測
定することにより測定して、試料中の抗原または抗体の
定量を行なうことは公知である。この方法で高感度かつ
高精度で定量を行なうには、抗原−抗体間の反応をすみ
やかに進行させ、透過光や散乱光の強度の変化速度を大
きくすることが望ましい。
および/又は抗原を含む試料とを溶液中に混合し、抗原
−抗体反応により生起する不溶性微粒子の凝集の程度を
、反応混合液に照射した光の透過光や散乱光の強度を測
定することにより測定して、試料中の抗原または抗体の
定量を行なうことは公知である。この方法で高感度かつ
高精度で定量を行なうには、抗原−抗体間の反応をすみ
やかに進行させ、透過光や散乱光の強度の変化速度を大
きくすることが望ましい。
本発明によれば、抗原又は抗体を担持した不溶性微粒子
と、抗体および/又は抗原とを溶液中で反応させ、反応
混合物に光を照射して反応の進行度を光学的に測定する
抗原抗体反応の測定法において、溶液中にポリエチレン
グリコールな共存させることによシ、高感度かつ高精度
で抗体または抗原を定量することができる。
と、抗体および/又は抗原とを溶液中で反応させ、反応
混合物に光を照射して反応の進行度を光学的に測定する
抗原抗体反応の測定法において、溶液中にポリエチレン
グリコールな共存させることによシ、高感度かつ高精度
で抗体または抗原を定量することができる。
本発明について更に詳細に駁明すると、本発明は特開昭
第3−.24tθ/!、特願昭3−3−/!θ/2、同
J−3−/jθ/♂、同j j −/ ! 3 、rと
。
第3−.24tθ/!、特願昭3−3−/!θ/2、同
J−3−/jθ/♂、同j j −/ ! 3 、rと
。
同33−/17.f7%で提案されている、不溶性微粒
子に抗原もしくけ抗体またはこれらの断片を担持させた
ものと、抗体または抗原とを溶液中で凝集反応させる方
法の改良に関するものである。不溶性微粒子としては公
知の種々のも′のを用いることができる。通常はポリス
チレン、スチレン−ブタジェン共重合体のような合成高
分子の微粒子が用いられる。微粒子は7.6きクロン以
下、特に0./〜/、θきクロンの均一な粒径のものが
好ましい。
子に抗原もしくけ抗体またはこれらの断片を担持させた
ものと、抗体または抗原とを溶液中で凝集反応させる方
法の改良に関するものである。不溶性微粒子としては公
知の種々のも′のを用いることができる。通常はポリス
チレン、スチレン−ブタジェン共重合体のような合成高
分子の微粒子が用いられる。微粒子は7.6きクロン以
下、特に0./〜/、θきクロンの均一な粒径のものが
好ましい。
不溶性微粒子に抗原もL <は抗体またはこれらの断片
、例えばF(ab’)、を担持させる(感作する)のは
、物理吸着、化学結合など公知の任童の方法で行々うこ
とかできる。
、例えばF(ab’)、を担持させる(感作する)のは
、物理吸着、化学結合など公知の任童の方法で行々うこ
とかできる。
本発明ではこのような感作微粒子と抗体または抗原との
反応を、ポリエチレングリコールを含む水溶液中で行々
う。水溶液と[7ては通常、緩衝液が用いられる。好適
かのはpH7〜/θのトリス−塩酸緩衝液、グリシン緩
衝液、燐酸緩衝液等である。溶液中の感作粒子の濃度は
連着るしく低くても鞘度よ〈測定を行なうことができる
。
反応を、ポリエチレングリコールを含む水溶液中で行々
う。水溶液と[7ては通常、緩衝液が用いられる。好適
かのはpH7〜/θのトリス−塩酸緩衝液、グリシン緩
衝液、燐酸緩衝液等である。溶液中の感作粒子の濃度は
連着るしく低くても鞘度よ〈測定を行なうことができる
。
溶液中のポリエチレングリコールの濃度は通常、2(重
it)%以下である。ポリエチレングリコールの濃度が
高すぎると、微粒子の非特異的凝集を引きおこすことが
ある。ポリエチレングリコールの好適な濃度はθ、02
f−、2(重量)%である。ポリエチレンクリコールと
しては通常、平均分子量/、000以上のものが用いら
れる。
it)%以下である。ポリエチレングリコールの濃度が
高すぎると、微粒子の非特異的凝集を引きおこすことが
ある。ポリエチレングリコールの好適な濃度はθ、02
f−、2(重量)%である。ポリエチレンクリコールと
しては通常、平均分子量/、000以上のものが用いら
れる。
一般にポリエチレングリコールの平均分子量が増大する
につれて、不溶性微粒子の凝集により 3− 生ずる透過光や散乱光の強度の変化速度が太きくなる。
につれて、不溶性微粒子の凝集により 3− 生ずる透過光や散乱光の強度の変化速度が太きくなる。
ポリエチし・ングリコールは予じめ感作ラテツクス中に
添加しておいてもよく、また感作ラテツクスと抗体また
は抗原を含む試料とを凝集反応させる際に溶液中に添加
してもよい。
添加しておいてもよく、また感作ラテツクスと抗体また
は抗原を含む試料とを凝集反応させる際に溶液中に添加
してもよい。
凝集反応の光学的演1j定は常法によ)行なわわる。照
射する光線の波長はθ、Z−コ、yミクロンの範囲から
選ばれる。測定は、凝集反応開始から一定時間経過後の
透過光や散乱光の強度、透過光や散乱光が一定の強度に
達するまでの時間、または凝集反応の初期で透過光や散
乱光の強度が定常的に変化するときの変化速度など公知
の種々の指標について行なうことができる。
射する光線の波長はθ、Z−コ、yミクロンの範囲から
選ばれる。測定は、凝集反応開始から一定時間経過後の
透過光や散乱光の強度、透過光や散乱光が一定の強度に
達するまでの時間、または凝集反応の初期で透過光や散
乱光の強度が定常的に変化するときの変化速度など公知
の種々の指標について行なうことができる。
以下に実施例をあげて本発明をさらに詳細に曲間するが
、本発明はその要旨をこえない限シ以下の実施例に限定
されるものではない。
、本発明はその要旨をこえない限シ以下の実施例に限定
されるものではない。
実施例/ hCGの測定
(1)抗hCG抗体感作ラテックスの製造抗ヒト胎盤性
性腺刺激ホルモン(hOG; 4− human chorionic gonadotro
pin )抗体(ウサギ)のグリシン緩衝溶液(濃度θ
j !/MtlV)10−に、平均粒径θ、23ダμの
ポリスチレンラテックス(ダウケミカル社製、固型分濃
度101!Lf!:%)/−を加え、室温で7θ分間攪
拌した。ついでi、to℃に加温してさらに30分間攪
拌したのち、−〜&℃に冷却して、この温度を保ちつつ
SO分間遠心分離を行なった(/、2θOOrpm)。
性腺刺激ホルモン(hOG; 4− human chorionic gonadotro
pin )抗体(ウサギ)のグリシン緩衝溶液(濃度θ
j !/MtlV)10−に、平均粒径θ、23ダμの
ポリスチレンラテックス(ダウケミカル社製、固型分濃
度101!Lf!:%)/−を加え、室温で7θ分間攪
拌した。ついでi、to℃に加温してさらに30分間攪
拌したのち、−〜&℃に冷却して、この温度を保ちつつ
SO分間遠心分離を行なった(/、2θOOrpm)。
沈殿を傾斜し、分離した抗hOG抗体感作ラテックス粒
子を牛血清アルブミン(以下:BSAと略す)溶液(′
a度θ、y%)に懸濁させ、ラテックス濃度7重量%の
抗hOG抗体感作ラテックス試薬を製造した。
子を牛血清アルブミン(以下:BSAと略す)溶液(′
a度θ、y%)に懸濁させ、ラテックス濃度7重量%の
抗hOG抗体感作ラテックス試薬を製造した。
(2)抗原−抗体反応
上記の/%ラテックス試薬/容に平均分子量6θθθの
ポリエチレンクリコール(PII!G6θθO)を含有
するグリシン緩衝液3容を加えて、下記の表/に示す濃
度のラテックス試薬A、B、及びC′Ir調整した。
ポリエチレンクリコール(PII!G6θθO)を含有
するグリシン緩衝液3容を加えて、下記の表/に示す濃
度のラテックス試薬A、B、及びC′Ir調整した。
表/
上記ラテックス試薬A、B、又はOO,/mlに、表コ
に示した濃度の標準hOG溶液(精製したhOGをθ、
2%BSA添加生理食塩水に溶解した溶液)θ、2rn
lを加え、3秒間撹拌してよく混合したのち、光路長4
tmy+の光学セルに入れ、攪拌下にθ、タダμの波長
の光を照射して、その透過率の変化速度を測定し、だ。
に示した濃度の標準hOG溶液(精製したhOGをθ、
2%BSA添加生理食塩水に溶解した溶液)θ、2rn
lを加え、3秒間撹拌してよく混合したのち、光路長4
tmy+の光学セルに入れ、攪拌下にθ、タダμの波長
の光を照射して、その透過率の変化速度を測定し、だ。
結果を表−に示す。
表、2 hOG標準溶液と抗he()抗体感作ラ
テックス試薬の反応 実施例4 工g’liiの測定 (1)抗IgE抗体感作ラテックスの製造抗b OG抗
体のかわりに抗IgE(イミノクロプリンE)抗体(ヤ
ギ)を用いたこと以外は、実施例/−(11と全く同様
の方法で抗工gE抗体感作うテックス試楽(ラテックス
濃度/重量%)を製造した。
テックス試薬の反応 実施例4 工g’liiの測定 (1)抗IgE抗体感作ラテックスの製造抗b OG抗
体のかわりに抗IgE(イミノクロプリンE)抗体(ヤ
ギ)を用いたこと以外は、実施例/−(11と全く同様
の方法で抗工gE抗体感作うテックス試楽(ラテックス
濃度/重量%)を製造した。
(2)抗原−抗体反応
上記のラテックス試薬/容に対[7て、PEG6θθθ
を2.λよ%の濃度で含有するグリシ 1− ン緩衝液a容を加えて、ポリエチレングリコール/、!
%を含有するラテックス試薬(ラテックヌ両度0.33
%)を調整した。
を2.λよ%の濃度で含有するグリシ 1− ン緩衝液a容を加えて、ポリエチレングリコール/、!
%を含有するラテックス試薬(ラテックヌ両度0.33
%)を調整した。
標準溶液として軸゛木工gTfiを下記表3に示す濃度
で含弔するθ0.2%BSA添加生理食塩水溶液を用い
たこと以外は実加入例/−(2+と全く同様にして、上
記のポリエチレングリコール含有抗xgw抗体感作ラテ
ックス試薬と標準溶液とを反応させ、光の吸光度の変化
速度を測定した。結果を表3に示す。
で含弔するθ0.2%BSA添加生理食塩水溶液を用い
たこと以外は実加入例/−(2+と全く同様にして、上
記のポリエチレングリコール含有抗xgw抗体感作ラテ
ックス試薬と標準溶液とを反応させ、光の吸光度の変化
速度を測定した。結果を表3に示す。
表3 IgE標準溶液と抗IgE抗体感作ラテックス
試薬との反応 8 一 実施例3 インシュリンの測定 (1)抗インシュリン抗体感作ラテックスの製造抗hO
G抗体の代りに抗インシュリン抗体(モルモット)を用
いた以外は、実施例/−(1)と全く同様にして抗イン
シュリン抗体感作ラテックス試薬(ラテックス濃度7重
t%)を製造した。
試薬との反応 8 一 実施例3 インシュリンの測定 (1)抗インシュリン抗体感作ラテックスの製造抗hO
G抗体の代りに抗インシュリン抗体(モルモット)を用
いた以外は、実施例/−(1)と全く同様にして抗イン
シュリン抗体感作ラテックス試薬(ラテックス濃度7重
t%)を製造した。
(2)抗原−抗体反応
上記で得たラテックス試薬/容に、ポリエチレングリコ
ール(平均分子妬6θθθ)を含有するグリシン緩価液
3容を加えた。このポリエチレンクリコール含有感作ラ
テツクス試薬θ、/−とブタインシュリン標準溶液(濃
度//、/μy7mt、θ、2%BSA含有生理食塩水
溶液)0.2rnlとを、実施例/−f2)と全く同様
にして反応させた。結果を表グに示す。
ール(平均分子妬6θθθ)を含有するグリシン緩価液
3容を加えた。このポリエチレンクリコール含有感作ラ
テツクス試薬θ、/−とブタインシュリン標準溶液(濃
度//、/μy7mt、θ、2%BSA含有生理食塩水
溶液)0.2rnlとを、実施例/−f2)と全く同様
にして反応させた。結果を表グに示す。
表ダ インシュリンと抗インシュリン感作ラテックス
試薬との反応に対するポリエチレングリコールの添加効
果 実施例ダ ヒトxgaの測定 (1) 抗ヒトエgG抗体感作ラテックスの製造抗h
OG抗体のかわシに抗工gG(イきノグロプリンG)抗
体(ヤギ)を用いること以外は、実施例/−(1)と全
く同様の方法で、抗IgG抗体感作ラテックス試薬(ラ
テックス7%)を製造した。
試薬との反応に対するポリエチレングリコールの添加効
果 実施例ダ ヒトxgaの測定 (1) 抗ヒトエgG抗体感作ラテックスの製造抗h
OG抗体のかわシに抗工gG(イきノグロプリンG)抗
体(ヤギ)を用いること以外は、実施例/−(1)と全
く同様の方法で、抗IgG抗体感作ラテックス試薬(ラ
テックス7%)を製造した。
(2) 抗原−抗体反応
上記の/%ラテックス試薬/容に、そ若ぞれ平均分子t
【が/!りθ、グθθθ、6θθθ及び10θθのポリ
エチレングリコール(PFiG /6410゜PEG
eooo 、PEG 6000.PEG 7000 )
を含有するグリシン緩衝液/容を加えて、ポリエチレン
グリコール含有感作ラテツクス試薬とした。このラテッ
クス試薬θ、2ydと、標準ヒトエg()溶液(h製し
たIeGをθ0.2%BSA添加生理食塩水に溶解した
溶液)θ、−2−とを、光路長2闘の光学セルに入ね、
攪拌下にθ、タダμの波長の光を照射して、その吸光度
の変化速度を枳1j足した。結呆を表、を及び表6に示
す。
【が/!りθ、グθθθ、6θθθ及び10θθのポリ
エチレングリコール(PFiG /6410゜PEG
eooo 、PEG 6000.PEG 7000 )
を含有するグリシン緩衝液/容を加えて、ポリエチレン
グリコール含有感作ラテツクス試薬とした。このラテッ
クス試薬θ、2ydと、標準ヒトエg()溶液(h製し
たIeGをθ0.2%BSA添加生理食塩水に溶解した
溶液)θ、−2−とを、光路長2闘の光学セルに入ね、
攪拌下にθ、タダμの波長の光を照射して、その吸光度
の変化速度を枳1j足した。結呆を表、を及び表6に示
す。
11−
表j ヒト標準工gGと抗ヒトIgG感作ラテツクス
との反応に対するポリエチレングリコール(PFiG4
θθθ)の添加効果 12− 表6 ヒト標準工gGと抗ヒトIgG感作ラテツクス
との反応に対する共存ポリエチレングリコールの平均分
子量の影響(ラテックス試薬中のポリエチレングリコー
ルの含有量/%) * PFiG無添加のラテックス試薬実施例! ヒト
α−胎児性蛋白の測定 (1)抗ヒトα−胎児性蛋白抗体跡作ラテックスの製造 抗hOG抗体の代りに、抗ヒトα−胎児性蛋白抗体(ウ
サギ)を用いること以外は、実施例/−(11と全く同
様の方法で抗ヒトα−胎光性蛋白抗体感作ラテックス試
薬(ラテックス濃度/%)を製造した。
との反応に対するポリエチレングリコール(PFiG4
θθθ)の添加効果 12− 表6 ヒト標準工gGと抗ヒトIgG感作ラテツクス
との反応に対する共存ポリエチレングリコールの平均分
子量の影響(ラテックス試薬中のポリエチレングリコー
ルの含有量/%) * PFiG無添加のラテックス試薬実施例! ヒト
α−胎児性蛋白の測定 (1)抗ヒトα−胎児性蛋白抗体跡作ラテックスの製造 抗hOG抗体の代りに、抗ヒトα−胎児性蛋白抗体(ウ
サギ)を用いること以外は、実施例/−(11と全く同
様の方法で抗ヒトα−胎光性蛋白抗体感作ラテックス試
薬(ラテックス濃度/%)を製造した。
(2)抗原−抗体反応
上記の7%ラテックス試薬に、ポリエチレングリコール
(PEG4θθθ)を含むグリシドα−胎児性蛋白jj
jnf/−を含む標準溶液0.2−とを、光路長2順の
光学セルに人ね、攪拌下にθ、タダμ波長の光を照射し
て、その吸光度の変化速度を測定した。結果を表7に示
す。
(PEG4θθθ)を含むグリシドα−胎児性蛋白jj
jnf/−を含む標準溶液0.2−とを、光路長2順の
光学セルに人ね、攪拌下にθ、タダμ波長の光を照射し
て、その吸光度の変化速度を測定した。結果を表7に示
す。
表2 ヒトα−胎児性蛋白と抗ヒトα−胎児性蛋白感
作ラテツクス試薬との反応におけるポリエチレングリコ
ールの影響 出 願 人 三菱化成工業株式会社 ほか/名
作ラテツクス試薬との反応におけるポリエチレングリコ
ールの影響 出 願 人 三菱化成工業株式会社 ほか/名
Claims (4)
- (1)抗原又は抗体を担持した不溶性微粒子と、抗体お
よび/又は抗原とを溶液中で反応させ、反応混合物に光
を照射して反応の進行度を光学的に測定する抗原抗体反
応の測定法において、溶液中にポリエチレングリコール
を共存させることを特徴とする方法。 - (2) ポリエチレングリコールの平均分子量が10
00以上であることを特徴とする特許請求の範囲第7項
記載の抗原抗体反応の測定法。 - (3)溶液中のポリエチレングリコールの濃度がθ、θ
s−,2(重量)%であることを特徴とする特許請求の
範囲第1項又は亀コ項記載の抗原抗体反応の測定法。 - (4)溶液中の不溶性微粒子の濃度がθ、θ/〜/、0
(重量)%であることを特徴とする特許請求の範囲第1
項〜第3項のいずれか一つに記載の抗原抗体反応の測定
法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP14503981A JPS5847256A (ja) | 1981-09-14 | 1981-09-14 | 抗原抗体反応の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP14503981A JPS5847256A (ja) | 1981-09-14 | 1981-09-14 | 抗原抗体反応の測定法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5847256A true JPS5847256A (ja) | 1983-03-18 |
Family
ID=15375975
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP14503981A Pending JPS5847256A (ja) | 1981-09-14 | 1981-09-14 | 抗原抗体反応の測定法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5847256A (ja) |
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---|---|---|---|---|
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JPS62220866A (ja) * | 1986-03-24 | 1987-09-29 | Hitachi Chem Co Ltd | リウマチ因子定量用試薬 |
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WO2010001619A1 (ja) | 2008-07-04 | 2010-01-07 | 積水メディカル株式会社 | 免疫学的測定における感度増強方法又はヘモグロビンの影響回避方法 |
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-
1981
- 1981-09-14 JP JP14503981A patent/JPS5847256A/ja active Pending
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WO2012169453A1 (ja) * | 2011-06-07 | 2012-12-13 | 和光純薬工業株式会社 | 凝集促進剤 |
CN103597352A (zh) * | 2011-06-07 | 2014-02-19 | 和光纯药工业株式会社 | 凝集促进剂 |
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