JPS5843796A - 微生物によるアンドロスタン系化合物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は微生物の変換能力を使用して、発酵法によりス
テロール類または、その誘導体からアントロスタン系化
合物を製造する方法に関するものである。

従来からブレステ鴛−ル、スチグマステロール、エルゴ
ステ四−ル、カンペステロール、シトステロール等のス
テロール類およびそれらのＡ環における脱水素化合物（
以下ステロール類と略記する）を原料として発酵法によ
り、アンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオン
（以下ＡＤＤと略記する）、アンドロスト−４−エン−
３，１７−ジオン（以下４ＡＤと略記する）、１７β−
ヒドロキシアンドロスタ−１，４−ジエン−３−オン　
（デヒドロテストステロン）（以下ＤＨＴと略記する）
あるいは、１７β−ヒドキキシアンドロストー４−エン
−３−オン（テストステロン）（以下ＴＳＮと略記する
）等のＡ環が脱水素化されたアントロスタン系化合物（
以下アントロスタン系化合物と略記する）を得ることは
既に知られている。ステロール類を分解することのでき
る微生物を用い、ステロール類を原料として酸化を行わ
せると、完全分解に至るまでの代謝中間体としてアント
ロスタン系化合物が産出される。しかしながら、このよ
うな中間代謝物として生成するアントロスタン系化合観
更に酸化を受は易く１．５培地中に高濃度に蓄積させる
ことは実質的に不可能であ１□るーそこで生成したアン
トロスタン系化合物の酸化を阻害する方法としては、ニ
ッケル、カドミウム、コバルト等の重金属イオンの存在
下に変換を行わせる方法（特公昭４６−１７９５１号公
報）や、鉄または鋼とキレート化合物を形成し得る化合
物の存在下に培養を行う方法（４Ｉ公昭４２−１０８６
２号公報）などが知られている。又、他の方法としては
、野生株の有するアントロスタン系化合物の分解酵素の
いずれかを欠失または低活性化させた突然変異株を用い
る方法（特開昭５２−１０５２８９号公報）が知られて
いる。

本発明の目的は、ステロイド変換反応に従来まったく利
用されなかったシュードノカルディア（Ｐｓ＊ｕｄｏｎ
ｏｅａｒｄｉａ）属に属する放線菌を新たな変換菌とし
て提供すると、とＫある。

従来、ステロール類よりアントロスタン系化合物を生産
：： する能力を有する微生物としては、アルスロバクタ−（
ムｒｔｈｒｅｂａｅｔ＠ｒ　）属、バシルス（Ｂａｅｌ
ｌｌｍｓ　）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒ・マｉｂａ
ｅｔｅｒｉｎｍ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎ
＊ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、ミクロバクテリウム（Ｍｉ
ｃｒｏｂａｅｔｓｒｉｕｍ）属、ミコバクテリウム（Ｍ
ｙｅｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ）属、ノカルディア（Ｎｏｃ
ａｒｄｌｍ）属、グロタミノバクター（Ｐｒｏｔａｍｉ
ｎｏｂａｃｔ＠ｒ　）属、セラチア（Ｓ＠ｒａｔｉｍ）
属及びストレプトミセス（Ｓｔ　ｒｅｐｔｏｍｙｅ＊ｓ
　）属などの存在が知られているが、シュードノカルデ
ィア属に属する放線菌についてはその存在は全く知られ
ていない。

本発明者等は、メタノールを主たる炭素源として放線菌
を培養する方法について種々の研究を行った結果、メタ
ノールを好んで資化するとともに、メタノールに対する
菌体収率も良好であり、且つ、高い活性でステロール類
をアントロスタン系化合物に変換する能力を有する放線
菌を自然界より見出し、本発明を完成するに至った。

メタノール資化性を有するシュードノカルディア属の放
線菌については既にシュードノカルディア・メタノリグ
ニカ【Ｐｓ＠ｔＩｄｅｍｏｃａｒｄ１ａ　ｍｅｔｈａｎ
ｏ　−１１ｇｎｉｃｍ）及びシュードノカルディア・ニ
ーコテイス（Ｐｓ＠ｕｄｏｎｏｃａｒｄｉｍｙｔｒｋｏ
ｔｅｓ　）が知られている（特開昭５５−９６０９１号
公報）。

これら、メタノールを好んで資化することのできるシュ
ードノカルディア属は、形態学的、生理学的性質におい
て極めて特徴ある性質を有している。本発明は、この様
な技術的背景のもとに成されたものである。

本発明者等は、これらシュードノカルディア属を広く自
然界に求め分離方法の確立を行い数多くの菌株の分離に
成功し旭 本発明に用いる放線菌はシュードノカルディア・メタノ
リブエカに極めて類似した菌学的性質を有するシュード
ノカルディア・メタノリグニカ・バラエティ・ＬＭ−１
４５（Ｐｓ＠ｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ　ｍ＠ｔｈａｎｏ
ｌｉｇｎｉｃａ　ｖａｒｉｅｔｙ　ＬＭ　−１４５）（
微工研菌寄第６０５７号）およびシュートソカルディア
・メタノリグニカ・バラエティＬＭ−１２５８（Ｐｓｅ
ｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ　　ｍｅｔｈａｎｏｌｉｇｎｌ
ｃａ　　ｖａｒｉｅｔｙ　　ＬＭ−１２５８）（微工研
菌寄第６０５８号）Ｋよって代表されるシュートソカル
ディア属である。

次Ｋ、本発明者等が分離、採集して本発明方法に於いて
用いるシュートソヵルディア・メタノリグニカ・バラエ
ティ・ＬＭ−１４５（以下率ＫＬＭ−１４５と略して記
載する場合がある）、シュートゾヵルディア・メタノリ
グニカ・バラエティ・ＬＭ−１２５８（以下率ＫＬＭ−
１２５８と略して記載する場合がある）の２菌株の菌学
的性質を述べる。尚、菌学的性質のうち特ｃｇｓ別に記
載しないものは各菌種共通の性質及び生育状態である。

Ａ、形態学的特徴　　　　　　　　、、：：：：１栄養
菌糸は合成培地および天然培地においてともによく発達
し、グルコース・アスパラギン寒天平板培地で、白色の
気菌糸を豊富に着生する。顕微鏡で観察すると、気菌糸
は１０個以上の長い胞子鎖が不規則に分岐し、時にジグ
ザグ状に伸長し、その先端は直線状である。走査屋電子
顕微鐘による観察の結果、胞子はα４〜α６×ｔＯ〜ｔ
８ミクワンの円柱状ないし長楕円形である。また、いわ
ゆるプラストスボアを形成する過程で、求頂的取長が認
められる。

胞子の表面は平滑である。菌核、胞子のうおよび遊走子
は見出されない。

Ｂ、各種培地上に於ける性状 各種培地上に於ける性状は％に記載しない限り３７℃で
１４日培養後の観察である。

（１１シュークロース・−酸塩寒天培地：・：：：・。

生育良好、白色気−一を着生する。裏面は淡黄色を示し
可溶性色素は生成しない。ＬＭ−１４５菌株は若干生育
が劣る０ （２）アスパラギン・グルコース寒天培地：生育豊富、
厚いカバー周辺に微弱な白色気菌糸を着生する。裏面は
うすい淡黄色を示し、可溶性色素は生成しない。

（３）　　グリセリン・アスパラギン寒天培地：生育豊
富、厚いカバー状となる。ＬＭ−１２５８菌株は盛り上
ってシワを生ずる。周辺部に微弱な白色気菌糸を着生し
、裏面は濃い淡黄色を示し、可溶性色素は生成しない。

（４）澱粉・無機塩寒天培地： 生育中程度、−面に粉状の白色気菌糸を着生、裏面は象
牙色を示し、可溶性色素は生成しない。

（５）チロシン寒天培地： 生育豊富、カバー状となり盛り上ってシワを生じ割れ目
ができる。−面に白色気菌糸を着生し、裏面は淡黄色を
示す。ＬＭ−１２５８菌株は、褐色がかった淡黄色を示
している。可溶性色素は共に生成しない。

（６）−栄養寒天培地： 生育豊富、微弱な白色気菌糸を形成。裏面は黄色で可溶
性色素は生成しない。

（７）イースト・麦芽寒天培地： 生育豊富、コロニー表面に割れ目を生じ、−面に白色の
気菌糸を着生する。裏面は淡黄色で可溶性色素を生成し
な〜１゜ （８）　　オートミール寒天培地： 生育中程度、白色気菌糸を豊富に着生する。裏面は象牙
色から黄色を示し、可溶性色素は生成しない。

＋９３　　グルコース９ペプトン・ゼラチン培地（２８
℃）：生育豊富、盛り上ってシワを生ずる。気菌糸は着
生しない。可溶性色素は生成しない。

α呻　プリドハム・ゴドリープ寒天培地：生育中程度、
−面に白色気菌糸を着生する。裏面は象牙色から、うす
い淡黄色を示す。可溶性色素は生成しない。

ａυ　ペプトン・イースト・鉄寒天培地：生育豊富、盛
り上った生育を示し、シワ状とな９割れ目を生ずる。気
菌糸の着生はなく、裏面は淡黄色となり、可溶性色素は
生成しない。

Ｃ０生理的性質 （１）生育温度範囲： ２５〜４７℃（ＬＭ−１４５菌株） ２５〜４５℃（ＬＭ−１２５８菌株） （２）　　最適生育温度： ６７〜４４℃（ＬＭ−１４５菌株） ３５〜４３℃（ＬＭ−１２５８，Ｉｆ株）：。

両菌株共に４５℃にても３７℃と同程度またはそれ以上
に□１１ 良好な生育を示す。

（３）ゼラチンの液化：　陽性 （４澱粉の加水分解：　陰性 （５）脱脂乳の凝固：　陰性 （６）　　脱脂乳のペグトン化：　陽性（７）　　メラ
ニン様色素の生成 チルシン寒天培地：　陰性 ペプトン・イースト・鉄寒天培地：　陰性（Ｂ）　　硝
酸塩の還元能：　陽性 （９１′炭素源の資化性：（プリト５・ム・ゴドリーブ
寒天培地）（ａｌ　　資化するもの：Ｌ−アラビノース
、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−７ラクトース
、イノシトール、ｔ、−２ムノース、Ｄ−マンニトール
、メタノール、エタノール、ｎ−バーフィン （１）資化、ヶいも、ｌ）：ｙ−−ｚ。−ユ１．フイ、
−８（Ｌ呻　　細胞壁の化学組成〔リッチバリアらの方
法（Ｉｎｔ・ｒ−ｎａｔｉｓｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ　８ｙｍｔ＠ｍａｔｉｃ　Ｂａｅｔｅｒ１ｏ１ｏｇ
ｙＶｏ１２０．４５ｓ−ａ４ｓ　　（１９７０）によっ
た。〕（ａｔ　　細胞壁の主要成分ニジアミノピメリン
酸はメン型でグリシンを有せず、アラビノース、ガラク
トースを有する。

（ｂ）細胞壁のタイプ： 細胞壁組成（Ｃｅｌｌ　ｗａｌｌ　ｔｙｐｅ）　：■型
糖組成（Ｗｈｏｌｅ　ｃａｌｌ　ｓ＋ｕｇａｒ　ｐａｔ
＠ｒｎ）　：　Ａ型り０分離源　：　土　壌 以上、上記２菌株は細胞壁組成と糖組成が■型及びＡ型
であることから、ミコバクテリウム（Ｍｙｅｏｂａｃｒ
ｉｕｍ　）属、ノカルディア（Ｎｏｃ轟ｒｄｉａ）属、
ミクロポリスポーラ（Ｍｉｅｒｏ−ｐｏｌｙｓｐｏｒａ
）属、シェードノカルディア（Ｐａ＠ｕｄｏｎｏｃａｒ
−ｄｌｌ）属、サーモモノスポラ（Ｔｈ＠ｒｍｏｍｏｎ
ｏｓｐｏｒａ　）属のいずれか忙属するものと考えられ
る。しかしながら、その形態において１０個以上の長い
胞子鎖が不規則に分岐し。

胞子は円柱状ないしは長楕円形であり、その先端は直線
状である。その胞子はプラストスボアを形成することを
特徴とすることから、シュードノカルディア（Ｐｓ＠ｕ
ｄｏｎｏｅａｒ−ａｓａ）Ｍとするのが妥当である（Ａ
ｒｅｈ、　Ｆｕｒ　Ｍｌｃｒｏｂｌｏｌｏ−ｇｙＶｏｌ
、２６，５７５〜４１４（１９５７）参照）。シュード
ノカルディア属の既知菌種としてはシュードノカルディ
ア・サーモフイラＡＴＣＣ−１９２８５（Ｐｓｅｕｄｏ
ｎｏｃａｒｄｉａｔｈ＠ｒｍｏｐｈｌｌａ　ＡＴＣＣ−
１９２８５）　　、シェードノカルディア・スビノサＡ
ＴＣＣ−２５９２４−（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ
Ｓｐｉｎｏｓａ　ＡＴＣＣ−２５９２４）、シェードノ
カルディア・７アスチジオサＡＴ　ＣＣ−３１１８１（
Ｐｓ＊ｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａＦａａｔｉｄｉｏｓａ　
　ＡＴＣＣ−３１１８１）、シェードノカルディア・メ
タノリグニカムＴＣＣ−５１５９６（Ｐｓｅｕｄｏｎｏ
ｃａｒｄｉａｍ＊ｔｋａｎｏｌｉｇｎｉｅａ　　ＡＴＣ
Ｃ−！１１５９６）　　、シュートツカルティア・ユウ
コテイスムＴＣＣ−５１５９７（Ｐｓ＠ｕｄｏｎｏ−ｃ
ａｒｄｉａ　ｙｔｉｋｏｔ＠ｓ　　ＡＴＣＣ３１５９７
）ｓシュートソカルディ７・エスピーＡＭ−３６９６（
Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｌａ　ＳＰ　。

ＡＭ−３６９６）（特開昭５５−１１５８９４）　　が
知られている。本発明に使用している菌株は生育温度範
囲が２５〜４７℃であ不こと、メタノール及びｎ−パラ
フィンを単一炭素源として生育することが出来ること、
ゼラチンの液化及び脱脂乳のペプトン化が共に陽性であ
ることなどから、シュードノカルディア・メタノリグニ
カ（特開昭５５−９６．０９１参照）と極めて類似した
菌学的性質を有している。しかしながら、コレステロー
ル分解活性及びＡＤＤ。

４ＡＤ生成において大きな差が認められることなどから
。

シュードノカルディア・メタノリグニカの変種と認め、
シュードノカルディア・メタノリグ−Ｌ漬・バラエティ
ＬＭ−１４５（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｅａｒｄｉａ　　ｔｎ
＠ｔｈｊ−ヤ１１ｇｎ５ｅａ　　ｖａｒｉｅｔｙＩ、Ｍ
−１４５）、シュードノカルディア・メタノリグニカ・
バラエティＬＭ−１２５８（Ｐａｅｕｄｏｎｏｃａｒｄ
ｉａ　ｍｅｔｈａｎｏ−１１ｇｎｌｅｓ　ｖａｒｉ＠ｔ
ｙ　ＬＭ　　１２５８）と命名した。なお本菌株は工業
技術院微生物工業技術研究所に微生物受託番号微工研菌
寄第６０５７号（ＬＭ−１４５）第６０５８号（ＬＭ−
１２５８）として寄託されている。

本発明において使用する菌株としては、上記２菌株を好
適な例として挙げることができるが、シュートソカルデ
ィア属でアントロスタン系化合物を蓄積する菌であれば
すべて用いることができる。

使用培地組成としては、実施例忙示す如き炭素源、窒素
源、無機塩その他、使用菌の必要とする栄養源を含む培
地ならば使用可能である。

炭素源としては、ｎ−パラフィン、α−オレフィン、キ
１゜ シレン等の炭化水素、）−ノール、エタノール、グリセ
リン、高級アルコール等のアルコール類、コハク酸、酢
酸。

高級脂肪酸等の有機酸およびその塩、澱粉、麦芽糖、シ
ョ糖、ブドウ糖、ラムノース等の糖類があげられる。炭
素源、窒素源およびその他の栄養物質を含む天然栄養源
としては、各種糖蜜、コーンステイーグリカー、味液、
魚粉、肉エキス、酵母、酵母エキス、ポテトエキス、麦
芽エキスなどがあげられる。無機物としては、リン酸二
カリ、リン酸−ナトリウム、硫酸マグネシウムなどが使
用できる。その他、必要に応じてビタミン類を添加する
こともできる。

培地の組成は用いる菌株の種類に応じて選ばれるが、炭
素源、窒素源、カリウム、リンおよびマグネシウムは培
地成分として不可欠である。

消泡剤が必要な場合には周知のものを添加すればよい。

界面活性剤はステロール類の乳化剤として有効であり、
培地中に添加されることが望ましい。界面活性剤として
は、具体的にはたとえばポリオキシエチレンソルビタン
モノステプレート、ンルビタンモノノくルミテート、ポ
リエチレングリコールモノステアレートなどを挙げるこ
とができる。

培養温度は通常２５〜５０℃であるが、培養温度は３７
〜４３℃１近が最適である。

培地のｐＨは通常５〜９に調整されるが６５〜ｚ５が好
ましい。

本発明で原料として用いられるステロール類とはコレス
テロール、スチクマステロール、カンペステロール、シ
トステロール、エルゴステロール、フラッジカスチロー
ル、７コ２チロール、ラノステロール、アグノスｆｃ１
−ル、シヒドロラノステロール、ジヒドロアグノステロ
ール等カ挙ケラレル。好ましいステロールはコレステロ
ール、カンペステロールおよびシトステロールである。

また魚油やイカ油からのアルカリ洗浄ダーク油、さらに
植物油の脱臭スカム、脱Ａスラッジ、トール油などのス
テロール含有天然物および加工物も同様に本発明方法の
原料として使用される。

さらに各種ステロールの酸化中間体も本発明の原料とし
て使用される。このような酸化中間体としては各種ステ
ロールの４−エン−３−オン又は１，４−ジエン−３−
オン誘導体等が挙げられるが、具体的には、たとえばコ
レスト−４−エン−３−オン、コレスタ−１，４−ジエ
ン−３−オン、コレスタ−４，２２−ジエン−６−オン
、２２．２３−ビスノルコラ−５−コレニックアシッド
−６β−オール、２２．２３−ビスノルコラ−１，４−
ジエン−３−オン−２２−オイックアシッド、プレグネ
ノロン、グロゲステロン等である。

本発明でアントロスタン系化合物を培地中に高濃度に蓄
積させる為Ｋ、アントロスタン系化合物の酸化阻害剤を
添加することが好ましい。このような酸化阻害剤として
＋１゜″ニー 例工ばニッケル、コバルト、カドミウム等の塩類又＆１
キレート化剤が用いられる。キレート化剤としては、例
えＩＩｉ′２．２′−ジピリジル、１ｔ１ｏ−７エナン
ト四リン、８−ヒドロキシキノリン、クベｐン、イソニ
コチン酸ヒドラジトン、オルソフェニレンジアミン、Ｎ
、Ｎ−ジエチルジチオカルバずド酸ナトリウム等を挙げ
ることができる。これ等やキレート化剤は２種以上を併
用して用いることも可能である。

原料としてのステロール類または、その４−エン−３−
オンもしくは１，４−ジエン−３＝オン誘導体の添加は
菌体生育後に行さ、その添加濃度は通常培地量に対し、
α５〜５９／Ｉであり１〜３１１／Ｉの範囲が好ましい
。

組成によって選択さ６ｔが１通常培地量に対してｌＸ１
０−’〜ｌＸ１０””モルが適当である。培養は好気的
条件下で行い１６〜１２０時間継続する。

変換反応終了後、培養液から目的物であるアントロスタ
ン系化合物の採取は一般の既知の方法が用いられる。例
えば、反応終了後の液を酢酸エチル、クロ田ホルム、ｎ
−ヘキサン等の有機溶媒で抽出し、抽出液から溶媒を除
去したのち、シリカゲル、アルミナ等の吸着剤を充填し
たカラムに吸着させ、石油エーテル、ベンゼン、クロル
ホルム、酢酸エチル、エーテル、メタノール、エタノー
ル等の溶媒を用いて溶出分取する。この様にして溶出さ
れたアントロスタン系化合物は溶出液を濃縮し、溶媒を
留去したのち酢酸エチル、ベンゼン等の有機溶媒から結
晶化させて得られる。

また抽出物を適当に濃縮し、ｎ−へキサン等で不純物の
一部を沈澱させ除去したのち、再結晶を繰返すととによ
っても得られる。

以下の実施例で、本発明をざらに詳１１８に説明するが
、本発明は、その要旨を超えないかぎり、以下の実施例
に限定されない。

なお以下の実施例において、ステロール類およびその誘
導体、Ｉアントロスタン系化合物の定性と定量は薄層、
クロマトグラフィ、赤外吸収、核磁気共鳴、質量分析、
ガスクワマドグラフィーおよび高速液体クロマトグラフ
ィーにより分析確認された。

実施例１ グルコース１０．９．ポリヘフトン５１％酵ｆｆｉエキ
ス３Ｊｉ’、麦芽エキス３１　水１ノよりなる種培地（
ｐＨ７，０）１０Ｑｍｌを５０ロー肩付きフラスコに分
注し、１２１℃、１５分殺菌後、シェードノカルディア
・メタノリグニカバラエティＬＭ−１４５を１白金耳接
種した。４０℃で約１６時間通気下に振盪し、種培養を
行った。

グルコース１０．ｆ、ａｌ化アンモニウム４１、リン酸
二カリ７Ｌリン酸−ナトリウム・２水塩３ｇ、硫酸マグ
ネシラムα５１１、塩化第二鉄・６水塩１ｊ９、硫酸銅
・５水塩０．１ダ、硫酸亜鉛・７水塩α１１１１．硫酸
マンガン・７水塩α１ダ、塩化コバルト・６水塩１ダ、
酵母エキス０．０５１、ポリベグトン１１、水１１を有
し、１２１℃で１５分間殺菌された本培養培地１ｏｏａ
／（ｐａｌｏ、）を含む５００ｄの肩付會フラスコに上
記のよ５＆Ｃして得られた種培養液２ｄを接種する。本
培養は４０℃で行い、培養開始後１８時時間和、水２１
１１１７に懸濁したステロール類１００ダを添加し、更
に培養開始から２４時間後に（ＬｉＭＩのメタノールに
溶解させた２、２′−ジピリジル１５，６２ダを添加し
た。２．２’−ジピリジル添加から４２時間後に培養を
停止し、培養液を酢酸エチルで抽出し、ガスクロマトグ
ラフィー及び高速液体クロマトグラフィーによりＡＤＤ
と４ＡＤの生成量を測１・一 定した。ステルール類として、コレステロール、スチグ
マステロール、β−シトステロールとカンペステロール
の、２　：　１’ＷＪｓ合物、コレストー４−エン−３
−オンおよびコレスタ−１，４−ジエン−３−オンを用
いたときの結果を第１表に示す。

第　　１　　表 実施例２ 実施例１と同じよう圧して種培養したシュートソヵルデ
ィア・メタノリグニカバラエティＬＭ−１４５の培養液
２ｄを実施例１に示した本培養培地のグルコースなメタ
ノール１％に置き換えた培地１００１１Ｅ＃に接種する
。

４０℃で培養が行われ、培養開始４１ｋ４８時間目にコ
レステロール２００ダを、培養間、始後５４時間目Ｋ　
２　、２’−ジピリジル１５．６２ｍｇを添加した。２
，２′−ジピリジル添加から１６時間６１に培養を停止
した。その後実施例１と同じようにしてＡＤＤと４ＡＤ
の生成量を測定したところ、ＡＤＤが１８ｍｇ、４ＡＤ
が９５キ生成していた。

実施例３ シュートソカルディア・メタノリグニカ・バラエティＬ
Ｍ−１２５８を実施例１に示した方法により、種培養及
び本培養を行ない、培養開始後１８時時間和コレステ四
＝ル１００１１１Ｊを添加し、さらに２４時時間和２．
２’−ジピリジル１５．６２ｑを添加した。２．２′−
ジピリジル添加から７２時間後に培養を停止し、酢酸エ
チル抽出物のアントロスタン系化合物の測定を行ったと
ころ、ＡＤＤが１５．８ダ、４ムＤが１＆４叩、ＤＨＴ
が４４ダ及びＴＳＮが工９ダ生成していた。

特許出願人 大日本インキ化学工業株式会社 財団法人　川村理化学研究所

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｔ　ステロール類又はその人環における脱水素化誘導体
   をアントロスタン系化合物に変換する能力を有するシュ
   ートソカルディア属の微生物を培養し、該微生物により
   ステロール類又はその人環における脱水素化誘導体をア
   ントロスタン系化合物に変換し、採取することを特徴と
   する微生物によるアントロスタン系化合物の製造方法。 λ　微生物がシュードノカルディア・メタノリグニカ・
   ノ（ラエテイ・ＬＭ−１４５またはシュードノカルディ
   ア・メタノリグニカ・バラエティ・ＬＭ−１２５８であ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。 五　アントロスタン系化合物が、アンドロスタ−１，４
   −ジエン−３，１７−ジオン、アンドロスト−４−エン
   −３，１７−ジオン、１７．β−ヒドロキシアンドロス
   タ−１，４−ジエン−３−オン、１７．β−ヒドロキシ
   アンドロスト−４−ニンー３−オンであることを特徴と
   する特許請求の範囲第１項または第２項記載の方法。