JPS5829781A - 抗生物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質及びその製造法に関する。

本発明者らは先に、土壌から分離されたＫＣ−６６０６
株がダラム陽性菌、ダラム陰性菌及び抗酸菌に対して抗
菌力を示し、抗生物質として有用な新規化合物を生産す
ることを見い出し。

その培養液から各化合物ＫＡ−６６０６１〜■をそれぞ
れ単離した（特開昭５３−１２７４０１号、同５４−６
６６０５号、同５５−１１１４９７号、特願昭５５−９
５６０２号及び同５５−１８５０８７号各明細書参照）
。

先に単離されたＫＡ−６６０６１−ＸＩ動物質、一般式 （式中ＲはＨ、Ｃ０Ｃ）１．ＮＨ，、Ｃｏ　ＣＨ，ＮＨ
ＣＯＮＨ，又はＣ０ＣＨ，ＮＨｃＨＯ、ｉはＨ又はＣＨ
ａを意味する）で表わされるアミノ配糖体であり、その
シクロヘキサンの環の立体構造はそれぞれ下記のとおり
である。ＫＡ−６６０６１，Ｖ、Ｖｌ、■及び■は、そ
れぞれ１位、４位及び５位における立体異性体である。

ＫＡ−６６０６１ＫＡ−６６０６１１ ＫＡ−６６０６１ＫＡ−６６０６！Ｖ ＫＡ−６６０６Ｖ　　　　　　　　　　　　　　ＫＡ−
６６０６ＶＩＲ＝ＨＲ＝Ｈ ＫＡ−６６０６■　　　　　　　　　　　　ＫＡ−６６
０６■ＫＡ−６６０６］Ｘ　　　　　　　　　　　　　
ＫＡ−６６０６ＸＫＡ−６６０６ＸＩ ＪＩ−１ Ｒ＝Ｈ ＫＡ−６６０６ＸＡは次式で表わされる。

不発明者らは更に研究を続けた結果、ＫＣ−６６０６株
の培養液中に、前記の１２種の化合物のほかに更に５種
の新規な化合物が存在することを見い出し、単離するこ
とに成功した。

本発明は、新規な抗生物質ＫＡ−６６０６ＸＩ、ＫＡ−
６６０６ＸＩＶ、ＫＡ−６６０６ＸＶ、　ＫＡ−６６０
６ＸＶＩ及びＫＡ−６６０６肩、ならびにサツカロポリ
スボラ属に属するＫＡ−６６０６物質生産菌を培養し、
培養液よりＫＡ−６６０６ＸＩ〜■を単離するどとを特
徴とする、前記の抗生物質の製造法である。

本発明により得られる化合物はその物理化学的性質及び
生物学的性質が、先に培養物から単離された前記のＫＡ
−６６０６１〜■物質と異なることから、ＫＡ−６６０
６群の新成分であることが認められ、それぞれＫＡ−６
６０６ＸＩ物質、ＫＡ−６６０６ＸＩＶ物質、ＫＡ−６
６０６ＸＶ物質、ＫＡ−６６０６ＸＶＩ物質及びＫＡ−
６６０６”Ｕ物質と命名された。これらの化合物は、後
記の種々の測定データから下記の構造を有するものと考
えられる。

ＫＡ−６６０６ＸＩ ＮＨ訛　　　　　　ＮＨＣＨ。

ＫＡ−６６０６ＸＩＶ ＫＡ−６６０６ＸＶ ＫＡ−６６０６ＸＶＩ ＣＨ為 ０ＮＨ２ ＫＡ−６６０４■ ＣＨ。

本発明の新規化合物を製造するために使用される菌は、
ＫＣ−６６０６株（微工研菌寄第３９１２号）ならびに
その変異株で、その菌学的性質は先の出願である特開昭
５３−１２７４０１号明細書に詳記されている。ＫＣ−
６６０６株は該明細書で説明したように、炭素源の資化
性においてはサツカロポリスボラ魯ヒルスタと相違する
が、形態学的性質、各種培地上の性質、生理的性質等の
基本性状がよく一致したことから。

サツカロポリスボラ・ヒルスタの自然変異株と考えられ
、サツカロポリスボラ・ヒルスタＫＣ−６６０６株と命
名された。

本発明で用いるサツカロポリスポラ・ヒルスタに属する
菌株は、その性状が変化しやすく、例えば紫外線、エッ
クス線、薬品などを用いる人工変異手段で容易に変異し
得るものであり、このような変異株であっても抗生物質
ＫＡ−６６０６の生産能を有するものはすべて本発明に
使用することができる。

本菌株の培養には通常の放線菌の培養方法が用いられる
。培養基の炭素源としては種々のものが用いられるが、
殿粉、ぶどう糖、グリセリン、マルトース、デキストリ
ン、蔗糖、果糖、糖蜜などを単独で又は組み合わせて用
いることが好ましい。さらに菌の資化性によっては炭化
水素、有機酸、植物油なども用いられる。窒素源として
は大豆粉、酵母エキス、乾燥酵母、ペフトン、肉エキス
、コーンステイープリカー、カザミノ酸、デイステイラ
ーズノリュプル、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム
、尿素、硝酸ナトリウムなどが単独で又は組み合わせて
用いられる。

その他必要に応じ１食塩、燐酸カリウム、硫酸マグネシ
ウム、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、水酸化カルシ
ウム、塩化コバルト、硫酸亜鉛、塩化鉄、硫酸鉄などの
無機塩、並びに微量の重金属を添加することができる。

更に菌の発育を助け、ＫＡ−６６０６物質（ＫＡ−６６
０６Ｉ−■の総称）の生産を促進する有機及び無機物質
を適宜に添加することができる。通気培養法を用いる場
合には、更に脂肪油、シリコーン油、パ°ラフインなと
の消泡剤が用いられる。

培養方法としては、固体培地上での培養も可能であるが
、一般抗生物質生産の方法と同様に液体培養法１％に深
部培養法を用いることが好ＫＡ−６６０６物質の生産は
、振盪培養又はタンク培養のいずれの場合も２〜９日間
培養を行なうと、活性物質が培養液中に生産蓄積される
。

培養液中の生産量が最大に達した時点で培養を停止し、
培養液中より目的の抗生物質を単離精製する。

培養ｒ液から本物質を単離精製するには、ＫＡ−６６０
６物質が水に可溶で一般の有機溶媒に難溶の水溶性塩基
性物質であるため、通常の水溶性塩基性抗生物質の単離
、精製法を利用することができる。イオン交換樹脂、活
性炭、セルｏ−ス、シＩＪ力ゲル、アルミナ等による吸
脱着法、補助剤として高級脂肪酸を加えてブタノール、
アミルアルコール等で抽出する方法などを適宜に組み合
わせて用いることができる。

培養ｒ液を弱酸性陽イオン交換樹脂の層に通すと、ＫＡ
　−６６０６物質が吸着される。これを０．１〜６．０
規定のアルカリ、酸又は各種塩の溶液で溶出し、活性成
分を凍結乾燥すると、ＫＡ−６６０６物質の粗粉末が得
られる。このとき用いられる弱酸性陽イオン交換樹脂と
して（マ。

アンバーライトＩＲＣ−５０、又はＣＧ−５０（ローム
・アンド・〕〕１−ス社製、ダイヤイオンＷＫ−１０又
はＷＫ−２０（三菱化成社製）などカーあげられる。ま
たアルカリとしてはアンモニア水、水酸化す）　ＩＪウ
ム水溶液などが、酸としては養醸、塩酸、硫酸などが、
塩溶液としては炭酸アンモニウム、義酸アンモニウム溶
液などがあげられる。

培養Ｐ液をｐＨ７〜９に調整し、目的物質を活性炭に吸
着させ、酸性の水又は塩酸−メタノールで溶出させる方
法も利用できる。

こうして得られる粗粉末は、弱酸性陽イオン　−交換樹
脂、　ＣＭ−セファデックス、ＣＭ−セルロースなどに
吸着さ′せ、アルカリ性水溶液、例えばアンモニア水、
炭酸アンモニウム、義酸アンモニウムの水溶液などを用
い、濃度勾配法又は濃度段階法で溶出することにより、
遊離塩基としてＫＡ−６６０６１〜罵の各成分に分離す
ることができる。

例えばＫＡ−６６０６物質の粗粉末をＣＭ−セファデッ
クスＣ−２５に吸着させ、水と０．５規定アンモニア水
との間で濃度勾配法によって溶出すると下記の順序で各
成分が分離されて溶出してくる。先ず最初にに八−６６
０６刈、次いでＫＡ−６６０６１Ｖ、ｌ及びｌの混合物
が溶出する。

引き続いてＫＡ−６６０６■が溶出した後に、　Ｋｋ−
６６Ｇ６Ｖｌ及びＫＡ−６６０６ＸＩ−ＸＭＩの混合物
が溶出する。その後、ＫＡ７６６０６■及び■の混合物
、ＫＡ−６６０６１［及び■の混合物、更にＫＡ−６６
０６Ｘ及びＫＡ−６６０６℃が順次溶出する。

ＫＡ−６６０６Ｖｌ及びｘｉ−■の混合物より各成分を
分離するには例えば、粗粉末をシリカゲルを充填したカ
ラムに吸着させ、例えばクロロホゝルムーメタノールー
１７％アンモニア水（２：１：１）の下層を用いて展開
することにより分離することができる。

こうして得られるＫＡ−６６０６Ｘｌ−詞は、それぞれ
セルロース、シリカゲル、セファデックスなどを用いる
クロマトグラフィーな適宜に組み合せて精製することが
でする。

ＫＡ−６６０６Ｘｌ−ＸＷの遊離塩基はそれぞれ常法に
より酸付加塩に導（ことができる。酸としては、無機酸
例えば硫酸、塩酸、臭化水素酸、沃化水素酸、燐酸、炭
酸、硝酸等ならびに有機酸例えば酢酸、フマル酸、りん
ご酸、くえん酸、マンデル酸、こはく酸等が用いられる
。

Ｋ、Ａ−６６０６ＸＩ−ＸＷ！物質はいずれも塩基性水
溶性の白色物質で、主としてダラム陽性菌及び陰性菌に
対して抗菌性を示す有用な新規抗生物質である。

ＫＡ−６６０６ＸＩ−■物質のディスクプレート法によ
る各種微生物に対する抗菌スペクトルを、ＫＡ−６６０
６１１物質と比較して第１表に示す。薬剤は直径８１Ｉ
Ｉｍノヘーパーディスクに１ｍｇ／ｍｌ（ただし店の場
合は１０■／ｍｌ）の溶液を浸透させて用いた。

このようにＫＡ−６６０６ＸＩ〜■物質は広範囲の優れ
た抗菌スペクトラムを有することがら、抗菌性物質とし
て医薬、動物薬などとして有用である。さらに本物質は
種々の誘導体を合成するための出発物質としても有用で
ある。

実施例 殿粉４％、大豆粉１，８％、酵母エキス０．１％、コー
ンステイープリカー０．４％、食塩０．３％、硫酸マグ
ネシウム・七水塩り、０５％、塩化カルシウム０．０６
％、塩化＝＝コバルト・六水塩０゜００５％の組成を有
し、ｐＨ７２に調整し滅菌した培地にＫＣ−６６０６株
を接種し、３０℃で２日間培養したものを第一種菌とす
る。２０−ｅ容のジャーファーメンタ−に第一種菌培地
と同一じ培地に綿実油２．０％を添加した培地１０−ｅ
を仕込み、第一種菌２００　ｍｌを接種し、６０℃で２
日間通気攪拌方式（２４０ｒｐｍ、通気量１０．８！分
）によって培養して第二種菌とする。５０００２容のフ
ァーメンタ−に第二種菌培地と同じ組成の培地２５００
−ｅを仕込み、第二種菌１０ｎを接種し、３０℃で７日
間通気攪拌方式（１２０ｒｐｍ、通気量２５００［７分
）により培養する。

培養終了後、培養液に硫酸を添加してｐｏ２．０に調整
したのち、濾過助剤としてセライト（ジョーン・マンビ
ル社製）を加えて菌体をｊｉ別する。沢液に４８％水酸
化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ７，０に調整し、陽イ
オン交換樹脂ア／パーライトＩＲＣ−５０（Ｎ）１４型
）のカラム（２０Ｘ１５０ｃｒｎ）Ｉｃ通し、活性物質
を吸着させ、水洗したのち１規定アンモニア水で溶出す
る。活性部分を集め、減圧下で濃縮したのち凍結乾燥す
ると、ＫＡ−６６０６物質の粗粉末２００夕が得られる
。

この粗粉末２００ｇを蒸留水２０！に溶解し、希硫酸で
ｐＩ（を１０に調整し、陽イオン交換樹脂ＣＭ−セファ
デックスＣ−２５（ＮＨ，型）のカラム（１０×４００
ｃｒｎ）に通し、水洗したのち水２５０−ｅと０．５規
定アンモニア水２５０１の間で濃縮勾配法を用いて溶出
する。溶出液を５！ずつ分画し、各両分をバチルス−ズ
ブチリスの寒天平板を用いてペーパーディスク法により
活性を測定し、更に薄層クロマトグラフィーにより組成
を検討する。

初めにＫＡ−６６０６ＸＩｌを含む両分が得られ。

次いでＫＡ−６６０６１Ｖ、同Ｉ及び向夏を各々含む画
分、ＫＡ−６６０６■を含む画分が順次得られる。更に
溶出を続けると、ＫＡ−６６０６ＶＩ、及びＸ１〜層の
混合物を含む画分、ＫＡ−６６０６■及び■の混合物を
含む画分、ＫＡ−６６０６Ｍを含む画分、ＫＡ−６６０
６Ｖを含む両分が順次得られ、更１ｃＫＡ−６６Ｄ６Ｘ
次いでＫＡ−６６０６Ｉを含む画分が得られる。ＫＡ−
６６０６ＶＩ及びＫＡ−６６０６ＸＩ〜窺を含む画分な
凍結乾燥すると、７００ｒｎ９の粗粉末が得られる。こ
の粉末を、シリカゲルを充填したカラム（３×１００ｃ
ｒｎ）上に均一な層となるように充填し、クロロホルム
−メタノール−１７％アンモニア水（２：１：１）の下
層部を用いてクロマトグラフィーで精製する。最初にＫ
Ａ−６６０６ＶＩが溶出され、次いでＫＡ−６６０６Ｘ
■とＫＡ−６６０６Ｘ［Ｖの混合物、ＫＡ−６６０６Ｘ
Ｖが順次溶出される。

更に溶出を続けるとＫＡ−６６０６ＸＶｌと謂の混合物
が溶出される。それぞれの画分を減圧下で濃縮したのち
、再び水に溶解し、弱酸性陽イオン交換樹脂ＣＭ−セフ
ァデックスＣ−２５（ＮＨ，”型）のカラム（ＩＸ４０
ｃｒｎ）に吸着させ、水洗後、水５００　ｍｌと０．４
規定アンモニア水３００ｍ１の間で濃度勾配法により溶
出し、目的物を含む両分を凍結乾燥する。ＫＡ−６６Ｄ
６ＸｌとＫＡ−６６０６ＸＩＶの混合画分より、ＫＡ−
６６０６ＸＩＶが先に溶出され１次いでＫＡ−６６０６
ＸＩが溶出される。各々を凍結乾燥すると、無色固体の
ＫＡ−６６０６ＸＩＶ遊離塩基１１Ｆｎ９及び無色固体
（７）ＫＡ−６６０６ＸＩ遊離塩基５０■が得られる。

ＫＡ　−６６０６ＩＶ画分より、無色固体の遊離塩基１
２■が得うレル。ＫＡ−６６０６ＸＶＩとＫＡ−６６０
６唐の混合画分から、先に無色固体のＫＡ−６６０６唐
遊雛塩基１９ｍｇ、次いで無色固体のＫＡ　−６６０６
Ｉ％！Ｉ遊離塩基１５０ダが得られる。

こうして製造されたＫＡ−６６０６ＸＩ〜罵物質の物理
化学的性状は第２表に示すとおりであり、先に示した構
造式を支持した。従って本発明化合物は、既知抗生物質
とは異なる構造を有する新規抗生物質と認められた。

◆ヘーパークロマトグラフィー ｐ紙二ワットマンＡ１ 溶媒：クロロホルム−メタノール−１７％アンモニア水
（２：１：１）の下層 ◆◆薄層クロマトグラフィー プレー）　：　ＴＬＣアルミニウムシート・シリカゲル
６０Ｆ２．　Ｑ、　’ｌ　ｍａ　（メ／ｌ／り社製）溶
媒：（ａ）ブタノール−エタノール−クロロホルム−１
７％アンモニア水（４：５ ：２：５） （ｂ）クロロホルム−メタノール−１７％アンモニア水
（１：８：３）

【図面の簡単な説明】

第１図ないし第５図は、それぞれＫＡ６６０６−Ｘｌ、
■、ＸＶ、Ｘｖｌヶ及び罵の赤外線吸収スペクトル（Ｋ
Ｂｒ中）を示すグラフである。 出願人興和株式会社 代理人　弁理士　小　　林　正　　雄

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 式　　。 ＣＨ。 ０ＮＨ２ 又は式 で表わされる化合物（ＫＡ−６６０６ＸＩ　、　ＸＩＶ
   　。 ＸＶ、ＸＶＩ又は■）。 ２、　サツカロポリスポラ属に属するＫＡ　−６６０６
   物質生産菌を培養し、培養液よりＫＡ　−６６０６物質
   を採取し、これからＫＡ−６６Ｄ６ＸＩ、　ＫＡ−６６
   ０６ＸＩＶ％ＫＡ−６６０６ＸＶ、ＫＡ−６６０６ＸＶ
   Ｉ及び／又はＫＡ−６６０６ＸＶ１１の各物質を単離す
   ることを特徴とする、ＫＡ−６６Ｄ６Ｘｌ、ＫＡ７６６
   ０６ＸＩＶ、ＫＡ−６６０６ＸＶ、ＫＡ−６６０６ＸＶ
   Ｉ及びＫＡ−６６０６ＸＶＩｌの製造法。