JPS58212796A - ウリジン二燐酸−ｎ−アセチルガラクトサミンの製造法 - Google Patents
ウリジン二燐酸−ｎ−アセチルガラクトサミンの製造法Info
- Publication number
- JPS58212796A JPS58212796A JP57095987A JP9598782A JPS58212796A JP S58212796 A JPS58212796 A JP S58212796A JP 57095987 A JP57095987 A JP 57095987A JP 9598782 A JP9598782 A JP 9598782A JP S58212796 A JPS58212796 A JP S58212796A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- uridine diphosphate
- acetylglucosamine
- reaction solution
- acetylgalactosamine
- diphosphate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
造法番こ関する。さらに詳しくはウリジン二燐ｍ−Ｎ−
アセチルグルコサミン（以Ｆ’ ＵＤＰＧ Ｉ！ｃＮＡ
ｃとＶ−る） を原料としてこれをエピメラーゼ昏こ
よりＵＤＰＧａｌＮＡｃへ転換した反応液中をこ残存す
る未反応のＵｌ）ＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃをスタフィロコ
ッカス、アウレウスやパン酵母の菌体から１製したＵＤ
ＰＧ／ｃＮＡｃピロホスホリラーゼ（こよって分解除去
するＧこ際し。
アセチルグルコサミン（以Ｆ’ ＵＤＰＧ Ｉ！ｃＮＡ
ｃとＶ−る） を原料としてこれをエピメラーゼ昏こ
よりＵＤＰＧａｌＮＡｃへ転換した反応液中をこ残存す
る未反応のＵｌ）ＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃをスタフィロコ
ッカス、アウレウスやパン酵母の菌体から１製したＵＤ
ＰＧ／ｃＮＡｃピロホスホリラーゼ（こよって分解除去
するＧこ際し。
を直接作用せしめてこれを分解することによってＵＤＰ
Ｇ ａ ＩＮ Ａ ｃを効率よく調製する方法に関す
るものであるう ＵＤＰＧ ａ ｌＮｋ ｃは糖蛋白質や糖脂質など複合
糖質の生合成Ｇこおいてその重要な糖成分であるＮ−ア
セチルガラクトサミノの供与体となる化合物であ）、各
種の糖転移酵素の基質とＬ〔重要な役割をはたしている
。一方、生体外（こおいても人のＡＢ９式血液型物質の
うちＡ型物質の生合成蚤こ関与す−る糖転移酵素（Ａ−
）ランスフェラーゼ）の活性を測定するための基質とし
て判定の困難な変異血液型の検索や同定◆こ利用されて
いるっ従来ＵＤＰＧａｆＮＡｃの製造法としては各棟の
有機合成法の他をこ０１）ＰＵｌｃＮＡｃを細菌の酵素
を用いてＵＤＰＧａ／ＮＡｃへ転換する方法が知られ〔
いる。
Ｇ ａ ＩＮ Ａ ｃを効率よく調製する方法に関す
るものであるう ＵＤＰＧ ａ ｌＮｋ ｃは糖蛋白質や糖脂質など複合
糖質の生合成Ｇこおいてその重要な糖成分であるＮ−ア
セチルガラクトサミノの供与体となる化合物であ）、各
種の糖転移酵素の基質とＬ〔重要な役割をはたしている
。一方、生体外（こおいても人のＡＢ９式血液型物質の
うちＡ型物質の生合成蚤こ関与す−る糖転移酵素（Ａ−
）ランスフェラーゼ）の活性を測定するための基質とし
て判定の困難な変異血液型の検索や同定◆こ利用されて
いるっ従来ＵＤＰＧａｆＮＡｃの製造法としては各棟の
有機合成法の他をこ０１）ＰＵｌｃＮＡｃを細菌の酵素
を用いてＵＤＰＧａ／ＮＡｃへ転換する方法が知られ〔
いる。
（Ａｇｙｉｃ、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ４７．１７４１−
１７４３ （１９７３）。
１７４３ （１９７３）。
ＡｐｐｌＪｎｖｉｒｏｎ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ４１
．３９２−３９５ （１９８１））この方法をこオイて
はＵＤＰＧａｚＮＡｃをＵＤＰＧ ｌ ｃ ＮＡ ｃよ
り分離する方法として反応液中に残イチする未反応のＵ
ＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃを、スタフィロコッカス・アウ
レウスやパン酵母の菌体から調製したＵＬ）ＰＧ ｌ
ｃＮＡｃピロホスホリラーゼで分解゛する操作が必要で
ある。
．３９２−３９５ （１９８１））この方法をこオイて
はＵＤＰＧａｚＮＡｃをＵＤＰＧ ｌ ｃ ＮＡ ｃよ
り分離する方法として反応液中に残イチする未反応のＵ
ＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃを、スタフィロコッカス・アウ
レウスやパン酵母の菌体から調製したＵＬ）ＰＧ ｌ
ｃＮＡｃピロホスホリラーゼで分解゛する操作が必要で
ある。
従来この操作はＵＤＰＧｌｃＮＡｃ ４こ細菌のエピメ
ラーゼを作用させた反応液から糖ヌクレオチド化合物を
活性ＲＧこより吸着、分離した後このもの番こＵｌ）Ｐ
Ｇｌ ｃＮＡ ｃ ピロホスホリラーゼを作用させる
方法で行なわれてきた。
ラーゼを作用させた反応液から糖ヌクレオチド化合物を
活性ＲＧこより吸着、分離した後このもの番こＵｌ）Ｐ
Ｇｌ ｃＮＡ ｃ ピロホスホリラーゼを作用させる
方法で行なわれてきた。
しかしながら、糖ヌクレオチドを活性炭◆こ吸着させた
後、アンモニア性エタノールｍ液等で溶出させる方法は
、操作が煩雑であり、しかも２０〜３０″Ｘ）の糖ヌク
レオチドの損失が避けられないなど間粗点が多いもので
ある。本発明者らは、これらの難点を解決すべく鋭意検
討を加えた結果、ＵＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃをエピメラ
ーゼ（こより酵素的昏こＵＤＰＧａ／ＮＡｃへ変換した
反応液から活性炭（こよって糖ヌクレオチド成分を分離
することなく該反応液（こＵＬ）Ｐ Ｇ ｌ ｃＮＡ
ｃピロホスホリラーゼを直接作用させることにより該反
応液中に残存するＵＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃを分解する
ことができることを見出し本発明（こ到達した。
後、アンモニア性エタノールｍ液等で溶出させる方法は
、操作が煩雑であり、しかも２０〜３０″Ｘ）の糖ヌク
レオチドの損失が避けられないなど間粗点が多いもので
ある。本発明者らは、これらの難点を解決すべく鋭意検
討を加えた結果、ＵＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃをエピメラ
ーゼ（こより酵素的昏こＵＤＰＧａ／ＮＡｃへ変換した
反応液から活性炭（こよって糖ヌクレオチド成分を分離
することなく該反応液（こＵＬ）Ｐ Ｇ ｌ ｃＮＡ
ｃピロホスホリラーゼを直接作用させることにより該反
応液中に残存するＵＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃを分解する
ことができることを見出し本発明（こ到達した。
即ち本発明の目的はＵＤＰＧ ａ ｌＮＡ Ｃの効率よ
い製造法を提供するものであり、その要旨はＵＤＰＧＪ
ｃＮＡｃ をエピメラーゼにより酵素的をこＵＩＪＰ
Ｇａ ＩＮＡ ｃＮＡｃを分解することを特徴とするＬ
ＩＤＰＧａ／ＮＡｃの製造法である。本発明の方法によ
りＵＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃ転換反応液より糖ヌクレオ
チドを分離することな’、’１． ””ｌ’１ く次の反応（こ移ることができるので操作が簡略化され
るのみならず、収率も２０％〜３０％向上するなど、そ
の効果は大きいものがある。
い製造法を提供するものであり、その要旨はＵＤＰＧＪ
ｃＮＡｃ をエピメラーゼにより酵素的をこＵＩＪＰ
Ｇａ ＩＮＡ ｃＮＡｃを分解することを特徴とするＬ
ＩＤＰＧａ／ＮＡｃの製造法である。本発明の方法によ
りＵＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃ転換反応液より糖ヌクレオ
チドを分離することな’、’１． ””ｌ’１ く次の反応（こ移ることができるので操作が簡略化され
るのみならず、収率も２０％〜３０％向上するなど、そ
の効果は大きいものがある。
本発明の実施態様を簡単をこ述べると基質ｌ−１１）Ｐ
ＧｌｃＮＡ ｃにトリス塩酸−塩化マダイ・シウムーエ
チレンジアミンテトラ酢酸緩衝液とバチルス・ズブチリ
スからｇｌ＃製したＵＤＰＧＩ ｃＮＡｃ −４−エピ
メラーゼを加え酵素的舎こＵＤＰＧｌｃＮＡｃをＵＤＰ
Ｇ ａ ＩＮＡ ｃ ヘ変換させる。煮沸番こより反応
を停止させ沈澱物を遠心分離によって除去するり 得られた上澄液にピロリン酸ナトリウムを加えスタフィ
ロコッカス・アウレウスまたはパン酵母菌体から常法に
従って調製したＵＤＰＧ ｐｃ ＮＡ ｃピロホスホリ
ラーゼを添加し、反応液中裔こ残存するＵＤＰＧｌｃＮ
ＡｃをＵＴＰとＮ−アセチルグルコサミＪノ ンー燐酸に分解する。その憤、分解反応液ηオン交侠ク
ロマトグラフィー等を用いる常法）こよっ目的たるＵＤ
ＰＧａ ｌＮＡ ｃを分離、１青製する。
ＧｌｃＮＡ ｃにトリス塩酸−塩化マダイ・シウムーエ
チレンジアミンテトラ酢酸緩衝液とバチルス・ズブチリ
スからｇｌ＃製したＵＤＰＧＩ ｃＮＡｃ −４−エピ
メラーゼを加え酵素的舎こＵＤＰＧｌｃＮＡｃをＵＤＰ
Ｇ ａ ＩＮＡ ｃ ヘ変換させる。煮沸番こより反応
を停止させ沈澱物を遠心分離によって除去するり 得られた上澄液にピロリン酸ナトリウムを加えスタフィ
ロコッカス・アウレウスまたはパン酵母菌体から常法に
従って調製したＵＤＰＧ ｐｃ ＮＡ ｃピロホスホリ
ラーゼを添加し、反応液中裔こ残存するＵＤＰＧｌｃＮ
ＡｃをＵＴＰとＮ−アセチルグルコサミＪノ ンー燐酸に分解する。その憤、分解反応液ηオン交侠ク
ロマトグラフィー等を用いる常法）こよっ目的たるＵＤ
ＰＧａ ｌＮＡ ｃを分離、１青製する。
本発明で実施されるＵＤＰＧＩ ｃＮＡｃのピロポスポ
リシス反応（分解反応）におけるＵＤＰＧ ／ ｃＮＡ
ｃの濃度は１ ｍＭ 〜４０ｍＭ、好ましくは５〜２０
ｍＭであり、ピロリン酸ナトリウムの済度は１０ｍＭ−
２ｎＯｍＭ好ましくは５０ｍＭ〜１００ｍＭである。本
発明（こ用いるＵｌ）ＰＧｌｃＮＡｃピロホスホリラー
ゼはスタフィロコッカス・アウレウスあるいはパン酵母
から公知の方法により調製したものでよい。反応液のＰ
Ｈは６．（１〜９．０好まＬ ＜ ｊｉＰ）Ｉ ７．０
〜８．０テアリ、反応温度は２０〜４０℃、好ましくは
２８〜３２℃の範囲が適当である。反応時間は１ないし
２０時間程度、好ましくは２〜６時間である。
リシス反応（分解反応）におけるＵＤＰＧ ／ ｃＮＡ
ｃの濃度は１ ｍＭ 〜４０ｍＭ、好ましくは５〜２０
ｍＭであり、ピロリン酸ナトリウムの済度は１０ｍＭ−
２ｎＯｍＭ好ましくは５０ｍＭ〜１００ｍＭである。本
発明（こ用いるＵｌ）ＰＧｌｃＮＡｃピロホスホリラー
ゼはスタフィロコッカス・アウレウスあるいはパン酵母
から公知の方法により調製したものでよい。反応液のＰ
Ｈは６．（１〜９．０好まＬ ＜ ｊｉＰ）Ｉ ７．０
〜８．０テアリ、反応温度は２０〜４０℃、好ましくは
２８〜３２℃の範囲が適当である。反応時間は１ないし
２０時間程度、好ましくは２〜６時間である。
以下実施例および比較例をこより本発明をさら（こ詳細
に説明する。
に説明する。
実施例
０１）ＰＧｊｃＮＡｃ １ｍモル、トリス塩酸緩衝ｆｆ
ｆｌ（ＰＨＬＯ）１０ｍモル、塩化マグネシウム１ｍモ
ル。
ｆｌ（ＰＨＬＯ）１０ｍモル、塩化マグネシウム１ｍモ
ル。
エチレンジアミンテトラ酢ＩＶ０．１ｍモルを含む反応
液をこバチルス・ズブチリスより調製したＵＤＰＧｌｃ
ＮＡｃ−４−エピメラーゼを加え３７℃で９０分間反応
を行なった。沸騰湯浴中で数分間加熱して反応を停止し
、遠心分離（こより沈澱を除いた。得られた上澄にピロ
リン酸ナトリウム７ｍモルを添加し、パン酵母菌体から
ｗ４製したＵＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃピロホスホリラー
ゼを加え３０℃にて６時間反応を行ない残存するｔＪＤ
ＰＧ ｌ ｃＮＡｃをＵＴＰとＧＪＣＮＡｅ−１−燐酸
に分解した。その後目的物であるＥＪＤＰＵ ａＩＮＡ
ｃを枯性炭蚤こよる吸脱着処理および１オン交挨＠脂
によるクロマトグラフィー等の操作を用いて反応液中の
他成分より分離、精製した。生成したＵＩＪＰＧａ Ｊ
ＮＡ Ｑ の鍬は１５４μモルであり、エピメリ化反応
液からの回収率は６０．２％であったー比較例 ；２ 転換した。反応停止後従来法昏こ従ってヌクレオチ下実
施例と同様に操作を行なった結果、エビメリ化反応液か
ら回収率４７％で１２０μモルのｕＩＪｐ＜；ｔｖＮＡ
ｃ を得た。
液をこバチルス・ズブチリスより調製したＵＤＰＧｌｃ
ＮＡｃ−４−エピメラーゼを加え３７℃で９０分間反応
を行なった。沸騰湯浴中で数分間加熱して反応を停止し
、遠心分離（こより沈澱を除いた。得られた上澄にピロ
リン酸ナトリウム７ｍモルを添加し、パン酵母菌体から
ｗ４製したＵＤＰＧ ｌ ｃＮＡ ｃピロホスホリラー
ゼを加え３０℃にて６時間反応を行ない残存するｔＪＤ
ＰＧ ｌ ｃＮＡｃをＵＴＰとＧＪＣＮＡｅ−１−燐酸
に分解した。その後目的物であるＥＪＤＰＵ ａＩＮＡ
ｃを枯性炭蚤こよる吸脱着処理および１オン交挨＠脂
によるクロマトグラフィー等の操作を用いて反応液中の
他成分より分離、精製した。生成したＵＩＪＰＧａ Ｊ
ＮＡ Ｑ の鍬は１５４μモルであり、エピメリ化反応
液からの回収率は６０．２％であったー比較例 ；２ 転換した。反応停止後従来法昏こ従ってヌクレオチ下実
施例と同様に操作を行なった結果、エビメリ化反応液か
ら回収率４７％で１２０μモルのｕＩＪｐ＜；ｔｖＮＡ
ｃ を得た。
Claims (1)
- （１） ウリジンニ燐酸−Ｎ−アセチルグルコサミン
をエピメラーゼ・こより酵素的にウリジンニ燐酸−Ｎ−
アセチルガラクトサミンに転換させた反応液に直接ウリ
ジン二燐酸−Ｎ−１セチルグルコサミンピロホスホリラ
ーゼを作用させて、該反応液中の残存ウリジンニ燐酸−
Ｎ−アセチルグルコサミンを分解することを特徴とする
ウリジンニ燐酸−Ｎ−７セチルガラクトサミンの製造法
。
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57095987A JPS58212796A (ja) | 1982-06-03 | 1982-06-03 | ウリジン二燐酸−ｎ−アセチルガラクトサミンの製造法 |
| US06/499,919 US4569909A (en) | 1982-06-03 | 1983-06-01 | Process for preparing uridine diphosphate-N-acetylgalactosamine |
| DE8686116536T DE3381140D1 (de) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | Verfahren zum messen der aktivitaet von glycosyl-transferase. |
| EP86116537A EP0220750B1 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | A process for preparing uridine diphosphate-n-acetylgalactosamine |
| EP86116535A EP0223263A3 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | A process for purifying uridine diphosphate-n-acetylgalactosamine |
| DE8686116537T DE3381203D1 (de) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | Verfahren zur herstellung von uridindiphosphat-n-acetylgalactosamin. |
| EP83303192A EP0096547B1 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | Process for preparing uridine diphosphate-n-acetylgalactosamine |
| EP86116536A EP0223264B1 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | A method for measuring the activity of glycosyl transferase |
| DE8383303192T DE3376020D1 (en) | 1982-06-03 | 1983-06-02 | Process for preparing uridine diphosphate-n-acetylgalactosamine |
| US06/705,217 US4604349A (en) | 1982-06-03 | 1985-02-25 | Process for preparing uridine diphosphate-N-acetylgalactosamine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57095987A JPS58212796A (ja) | 1982-06-03 | 1982-06-03 | ウリジン二燐酸−ｎ−アセチルガラクトサミンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58212796A true JPS58212796A (ja) | 1983-12-10 |
Family
ID=14152480
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57095987A Pending JPS58212796A (ja) | 1982-06-03 | 1982-06-03 | ウリジン二燐酸−ｎ−アセチルガラクトサミンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58212796A (ja) |
-
1982
- 1982-06-03 JP JP57095987A patent/JPS58212796A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| APPL.ENVIRON.MICROBIOL=1980 * |
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