JPS58187862A - 免疫測定改良剤および改良方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は免疫測定改良剤および改良方法に関寸るもので
ある。さ１，に訂しくは免疫反紀；に関’ｉ　Ｌない物
質の影響を除き，生理活性物質をより市確に測定するこ
とかで３＼る免疫測定改良剤Ｊ５よひ改良ｆＪ法に関す
るもの一Ｃある。

従来，血・ｒ’ｊ　、尿ｌＬとの生体議事゛１中の微ｔ
，ｌ　（／）　ｔ１理活性物’＜！Ｊ’　（例えば・・
ノクィドホルモ／類，ス゛ｊ　ＩＩイ１・ホル〔゛／類
，蛋ｉｉ゜Ｃ１類ｌＬと）の測定は，放射免疫測定法、
したは酵素免疫測定ｔＪ、ｔｊどの免疫測定θ、に１−
）で行なわれでいる。しかしこ１１らの生理／＋’ｒ　
ＰＩ物質の茹疫はＪ１常に低いため，免役測定にはｌ＋
’＋ｌい測定｛感度か１枝求されてきたか，生体試ネ１
中；こは免疫反応に関り．シｌＬい抽々物質か含（Ｊ−
されており、４りの物質にＩ゛ろ．、Ｉ１持異的吸着等
の影響に１、リ。

特に低ベグ度頃域での測定値に人きｊＬ′誤差を生じ。

大月１１問題か，多ノー）た。

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一人　一「（『、　色　） ２５才。７」 、１ミリオキシアルキし・レスチレン化アリールエーテ
ル： 単環フェノール（炭素数８〜１２のアルキル基を１個ま
たは複数個有するフェノールなど）もしくは多環フェノ
ール（芳香環を２側辺Ｌ（ｆするフェノールたとえばフ
ェニルフェノール、クミルフェノール、アルキルナフト
ールなど）とスチレン１〜２０モルとの反応生成物（ス
チレン化フェノール類という）のＡ　Ｏ付加物（ＡＯの
付加モル数は通常２〜１００．好ましくは５〜５０．た
とえばスチレン化（２モル）フェノールＥ　Ｏ（ＩＩ、
スチレン化（４モル）　７　：ｒ−／−ルト：０６ｒ９
Ｐ　Ｏ（１１ナト。（注・スチレン化（２モル）フェノ
ールＩ＞　００［）はフェノールとスチレンとをモル比
１：２で反応させて得られたスチレン化フェノールにＥ
　０１Ｑモルを付加した構造を有する化合物である。） （２）　　ポリオキシアルキレンアルキルエーテル：脂
肪族アルコール（炭素数６〜２０．好ましくは炭素数８
〜１８で、直鎮、または分岐の天然又は合は通常２〜１
００．好ましくは５〜５０）たとえば。

オクチルアルコールＥ　Ｏθｌ、ラウリルアルコール１
’　ＯＱＱ　、ラウリルアルコールＥ　Ｏ］　、ヤシ油
還元アルコールＥＯＱ■、　炭素数ＬＬ１３．１５の合
成混合アルコールＥ　Ｏ（５）　Ｐ　Ｏθυ、オレイル
アルコールＥ　０（６）などｌ注・炭素数１１．１８．
１５の合成混合アルコールＥ　Ｏ（５）　Ｐ　Ｏθυは
該アルコールにＥＯ５モルＰ０１１モルを順に付加した
ものである〕（３）　　ポリオキシアルキレン多価アル
コール脂肪酸エステル： 多価アルコールまたはその分子内無水物（グリセリン、
トリメチロールプロパン、ペンタエリスリトール、ソル
ビタン、ソルビトール、しよ糖など）と脂肪酸（炭素数
１０〜２０の脂肪酸）とのエステルのＡＯ付加物（ＡＯ
の付加モル数は通常２〜１００．好ましくは５〜５０た
とえばソルヒタ゛／モノラウレートＥ　ＯＱＯ、ソルビ
タンモノオレエート〔ＥＯ（７）／　Ｐ　ＯＱＯ〕、ソ
ルビタンモノステアレートＥＯ（７）、ソルビタントリ
オレエートＥＯ（ト）、オレイン酸モノクリセライト１
′〇四９人’＃　Ｍｌｌ　ｌｅｔ　ＩＩ／ｊ酸モノベ／
タエリスリト−ルエステルｒ）＜ｉ　ｔ：ｏ　、　　ｌ
　ｆｌ−・ツル１ニタンモノオレエ−１・［−ト；（）
（イ）／　Ｉ’　ＯＱ（Ｊｌはソルビタンモノオレエー
トにＥ　０２０モル、Ｊ’０１０モルをラノタムに付加
したものである。

（４１ポリオキシエチレンポリオキンプロピレンポリオ
ール： ゾルロニソクタイプの非イオン系界面活性剤たとえば、
ポリプロピレングリコール（以下円′（１という。）（
平均分子１１ｋ　（）　９００〜２９００　）の１・：
０Ｍ〜Ｖ 付加物（ＥＯが分子中に９通常１０〜８０重垣％。

２．０５０）のＥ　０８９重ＩＡ％付加物、テトロニッ
クタイプの非イオン界＋ｒｔｒ　活性剤たとえばポリオ
キシ−ノロピレンアルキレンジアミンのト：　Ｏ付加物
１テトロニック３０４　、７０４．７０７（ワイアンド
ソト製）など１ （５）　　ポリオキノアルキレン脂肪酸エステル：脂肪
酸（炭素数１０〜２０の脂肪酸）とポリアルキレングリ
コールとのエステル化物、あるいは脂肪酸のＡＯ付加物
、たとえばオレイン酸とポリエチレングリコール（分子
Ｊｉ６００）とのモノまたはジエステル、ステアリン酸
Ｅ　Ｏ（４）　ナト（６）　　ポリオキシアルキレンア
ルキルアミン：炭素数１０〜２０のアルキルアミンのＡ
Ｏ付加物。

たとえばステアリルアミンＥ　Ｏ（３）（７）アルキロ
ールアミド１ヤイオゾ４１１５ｔ４ｔｌ’１炭素数が通
常６〜２５の脂肪酸とアルカノールアミンとの反応生成
物およびそのアルキレンオキシド（０２〜４）付加物：
脂肪酸としては飽和脂肪酸（ラウリン酸、パルミチン酸
、ステアリン酸など）不飽和脂肪酸（オレイン酸、リノ
ール酸、リルくはラウリン酸、ステアリン酸およびヤシ
油脂肪酸ｊアルカノールアミンとしてはエタノールアミ
ン（モノ−、ジー）プロパツールアミン（イソ−）オヨ
ヒシクロヘキシルエタノールアミン好ましくはエフノー
ルアミン（とくにジェタノールアミン）酸と７２ノのモ
ル比は１：１〜３好ましくは１：１〜２　ｉ　具体的な
化合物としてはラウリン酸千ノーわ５１びジ−エタノー
ルアミド（１：１〜２型）ステアリ／酸モノ−およびシ
ーエタノールアミド（１：１〜２型）；ヤシ油脂肪酸モ
ノ−およびシーエタノールアミド（１：１〜２型）お、
上びそのａｔ　合物ｉヤノ油脂肪酸ンクロヘキンルエタ
ノールアミド（１：３型）、す／レン酸ジェタノールア
２ド（１二２型）、　　リンルン酸ジェクノールア２ド
（に２型）および上記化合物のアルキレ／オキノド（０
２〜Ｃ：）伺加物ｉｆど。

（８）　　ポリオキンアルキルメルカプタン：炭素１１
０〜２０のアルキル基を有するアルキル／　１１／　カ
ー）’　タンのＡ　Ｏ付加物たとえばセヂルメルヵツタ
ンＩ’：　０　（５） （Ｎ−２）多価アルコール系非イオン界１ｆ訂活性剤多
価アルコール脂１１／ｊ　酸エステル：多価アルコール
またはその分子内無水物（グリセリン、ペンクエリスリ
トール、ソルヒト−ル。

チルたとえばラウリン酸モノグリセライド、ソルヒタノ
ステアリン酸（モノ、セスキ、またはトリ）エステル、
ソルヒタンオレイノ酸（モノ、セソ、キまたはトす）エ
ステル、ショ糖ステアリン酸（モ非イオン界面活性剤の
うちで好ましいものはホリオキシアルキレン糸非イオン
界面活性剤であり。

とくに好ましいものはポリオキシアルキレ゛／アルキル
アリールエーテル、およびポリオキノアルキレンアルキ
ルエーテルである。

アニオン界面活性剤としては、カルボン酸塩。

スルホン酸塩（アルキルベ゛ノセンスルポン酸塩。

アルカンスルホン酸塩、スルホコハク酸エステル塩、ナ
フタリンまたはアルキルナフタリンスルフｔ−ン酸塩の
ホルマリン縮合物など）、硫酸エステル塩（アルキル硫
酸、・エステル塩、ポリオキンアルキレンアルキルエー
テル硫酸エステル塩、：ｊ′リオキシアルキレンアルキ
ルアリールエーテル硫酸−■ステル塩ｊ（ど）、および
り゛／酸エステル塩（アルキルリン酸エステル塩、：＋
：リオキシアルキレンアルキルエーテルー＝中中ソリン
酸エステル塩１オリオキノアルキレンアルキルアリール
エーテルリン酸エステル塩ど）などがあげられる。

カチオン界面活性剤としては第四級アンモニウＪ−Ｎ　
型界面活性剤（アルキルトリメチルアンモニウム塩、ア
ルキルジメチルベンジルア゛ノモニウム塩なと）および
アε゛／塩があげられる。また両性界面活性剤としては
カルホン酸塩型両性界面活性剤（ヘタイン型）およびス
ルホ゛ノ酸塩型両性界＋ｆ＋ｉ活性剤かＪ）けられる。

またに記界１■活性剤を組合せたものたとえば（非イオ
ン界面活性剤）と（アニオン界面活性剤もしくはカチオ
ン界１酊ン占性斉１］）および／または（両性界面活性
剤）を組合わせたもの、ならびに（−）′ニオン界面活
性剤またはカチオン界面活性剤）と（両性界面活性剤）
とを組合オ）せなものも便用てきる。

これＣ２のアニオン、カチオン、両性界面活性剤の詳細
については特開昭５６−１２２８９２　＋）公報、特開
昭５６−１２５４８６号公報、特公昭４２−２２２８２
シＪ公報および新・界面活性剤入門（咳本武彦若、：ｒ
’ｒ；化成工業、昭和４８年発行）に記載されている。

界面活性剤のうちで好ましいものは非イオン界面活性剤
である。、ｆｒ：、７１ζ住ｉの←アζ★）＄Ｕ−。

本発明において測定の対象とされる生理活性物質として
は、血清、尿などの生体試ネ）中に含：Ｆ、ｔ＋でおり
、各種疫病の診断の指標となりうる物質。

例えばインシュリン、ゴナドトロビ゛／　、　　１７−
ケドステロイド、成長ホルモ゛／、サイロキノン、１・
１Ｂ　−トサイロニン、甲状線刺激ホルモノなどのポ疾
患に関連した細菌、ウィルス、または原虫などの抗原性
成分類；おまびそれらに対−おる抗体類などがあげられ
る。

この生理活性物質を測定するための免疫測定法とｔ７て
は１通常の放射免疫測定ｎ、（標識成分　パイノＩ・−
ゾ）、したは酵素免疫測定法（標識成分；酵素）かあげ
られる。また測定ノステムによって１抗体固相法、２抗
体θ二、廿ンドウイソチ法ｔ（ど）測定ノステノ・か選
ばれる。

これらの免疫測定法に使用される成分としては（１）　
１ｉｌｌｌ定す−＼き生理活性物質を含有する試料例え
ば１ｆｌｌ　ｒＩ’ｊ−尿／（どの生体試料、（２）こ
れら生理活性物質と免疫反応を生１ッる特異的免疫成分
例えば測定す−・き生理活性物質かホルモン、蛋［′１
質等の抗原の場合にはその特異抗体テした抗体の場合に
はその持異抗ＩＩ；］または相体（カラス、ポリスチレ
ン、セルｒ１−スなど）に固定化した特異的免疫成分、
（３）生理活性物質を酵素免疫測定法の場合は酵素でま
た放射免疫測定法の場合はアイソ！・−ゾて標識した標
識成分（１抗体１．’ｉｌ相法、２抗体法）または特異
的免疫成分を酵素ｒＦ、たはアイソト−プて標８犠した
標識成分（サントウイ・フチ法）、（４）試料の希釈液
を兼用した免役反応媒体例えば０．１５　Ｍ　ＮａＣｌ
　、　０．１％Ｎ　＋ＩＮ３，０．２ｏｏ牛血清アルフ
ミン含有０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）　（５
）さらに２抗体法では、特異的免（第２抗体）、からな
る各成分かあげられろ。

免疫測定ノステムとしては次の方法をとることがてきる
。すｊ（わち、１抗体固口１法ては免疫反応孤 媒体中に試料　標識成分および相体に固定化した特異的
免疫成分を加えて通常１〜２４時間、４〜３７°Ｃにて
免疫反応を行なわせる方法をとることができる。サンド
ウィッチ法では免疫反応媒体中に試料および担体に固定
化した特異的免疫成分を加えて通常１〜２４時間、４〜
３７°Ｃにて第１免疫反応を行なわせ次いで特異的免疫
成分を標識した授１識成分を加えて通常１〜２４時間、
４〜３１′ｃにて第２免疫反応を行なわせる方法をとる
ことがてきる。２抗体法ては、免疫反応媒体中に試料、
標識成分。

および特異的免疫成分を加えて通常１〜２４時間。

４〜３γＣにて第１免疫反応を行なわせ次いて第２抗体
を加えて通常１〜２４時間、４〜３７’（：にて第２免
疫反応を行なオ）せる方法をとること力計Ｃきる。

次いて特異的免疫成分（または担体に回正化１゜１また
特異的免疫成分）に結合した標識成分と未結合の標識成
分の分離を行ｊ：　Ｑだ後で、結合または未結合の標識
成分；Ｘｉをアイソトープを標識としｔコ場合は放射能
で（放射免疫測定法）、酵素を標識とした場合は、酵素
活性より測定（酵素免疫測定法）し、これによって試料
中の生理活性物質の測定を行なうものである。

この様な免疫測定法としては「新版ラジオイノ・ノアノ
セイ」（鎮日和火、態原雉−編集、昭和５２年９月２８
　Ｅ＋　、朝食−十店発行）、「酵素免疫測定法θ、も
適用できる。

本発明は免疫測定法にわいて、その免疫反応系に合成界
１７ｊ７’ｌｌｉ性削からなる免疫反応改良剤を添加・
ｔ／Ｉことを特徴とするものてＪ）す、界面活性剤をそ
の免疫反応系に入れる以外は通常の免疫測定法と同して
よい。

界面活性剤の添加ｉ１１は免疫反応系中の濃度で。

通常０．０１〜１０Ｗ／〜■％、好まし、くは００５〜
２．０−％である。添加臓がＯＯ］　Ｗ／Ｗ％未満では
、［１的とする免役反応の際の非特異的吸着に対して効
果を奏さず低濃度領域での測定感度の向１ユ効果を示さ
ない。またｌ　Ｑ　Ｗ／Ｗ％　より多くなると免疫反応
や。

標識成分の酵素活性などを阻害することになり。

非特異的吸着に対しては効果を奏するものの、実質的に
は測定感度が低下してしまう。

界面活性剤の添加時期は、少なくとも免疫反応の際にそ
の系内に存在すれば特に制限されない。

例えば予め免疫反応媒体、標識成分、特異的免疫成分、
試料等に添加しておいてもよく、また免疫反応時に、試
料、標識成分、特異的免役成分を加検出試験ｊにおいて
、免疫反応媒体として用いられている。１％牛血清アル
ブε）含（Ｊ′１市７３゜０．０２ＭＩＪン酸緩衝生理
食塩水に添加することに１つて行なうことができる。

本発明の免疫測定改良剤および免疫測定改良方法は免疫
測定にわける免疫反応系に合成界面活性剤を添加せしめ
ろことにより、低濃度領域までも極めてｉＦ確に感度よ
く試料中の生理活性物質の測定を／Ｃシ得ろという効果
を奏する。また免疫反応に関ｐ、　シ１．．い物質によ
る非特異的吸着等の影響が除去されるため、特異的免疫
成分（または担体に固定化した特異的免疫成分）に結合
した標簾成分と未結合の標識成分の分離（Ｂ／Ｆ分ａ）
時に２行ｌ〔われる洗浄工程において、洗浄操作が大幅
に簡便化される〔たとえば洗浄回数の低減（従来３〜４
回洗いを必要とするが、１回洗い程度で七分である）や
、洗浄液は脱イオン水でよく、特殊な洗ｒｆ＋液（０９
％Ｎｌｌ　ＣＩ　含有リン酸緩衝液ρＥたは０．０５％
牛Ｉｆｌｌ　ｉ’ｉ！ｆ　７１１／　）；　：／　、　
　ｏ、９％　Ｎ；ｔｃｌ　含（ｆ’Ｊ　ンｆｙｇｇｌ　
液等）を必要としない７ｃど１゜その４］−測定値のバ
ラ゛ツキｖ）ｈ’、を因のひと′つてあった洗浄工程が
安定化される為に、１１１現性の良いテーク−が得られ
るなどの測定法の安定性を増加せしめることが出来ると
いう効果も併せ有している。

次に本発明を実施例により長体的に説明するが。

本発明は以下の実施例によつ−Ｃ限定されるものではな
い。（５車にを晟わ１外１１電ｔ　％　２−為３．）実
施例１ 各種界面活性剤を免疫反応媒体に加え、す／ドウイノチ
法によるイノツユリンの酵素免疫法を行ないその効果を
調へｔこ。

免疫反応媒体として、免疫反応用緩衝液（０８５％Ｎａ
（１、旧％牛血清アルブミン、含有り／酸すｌ−リウム
緩衝液■市７．３）に界面活性剤を添加しｌ：。

下記４種類の免疫反応媒体を調製し１コ。

免疫反応媒体Ａ１０１％ポリオキンエチレン（付加モル
数ｌＯ）オクチＩレフェニルＴ− −チル含有免疫反＋、ｉ＝：用緩衝液 免疫反応媒体Ｂ　ｉ　Ｏ，１％ポリオキノエチレン（付
加モル数２０）ノルビタンラｔ’）す７ 酸工ステルｆηＮ免疫反応用緩衝 液 免疫反応媒体Ｃ；　ｏ１％ポリオキノエチレノ（付加モ
ル数４）ラウリル丁−ｉル硫 酸エステルトリエフノールアε ノ塩含有免疫反応用緩衝液 免疫反応媒ｈ　Ｉ）　；　０．１％レステアリルジメチ
ルアノモニウノ・クロライド含有免疫反 応用緩衝液 →ナツトウィッチ法によるイ／ノユリ゛ノの酵素免疫測
定法ニーに記の免疫反応媒体（Ａ、Ｄ　）　０．４５ｍ
ｌにイノツユリン含イエ液（イ゛７シユリン１％　度Ｏ
ｐ　ＩＪＡ／　。

１０／’　”／ｍｌ　、　３２０　Ｉｔ　ＩＩ／Ｈ（の
３種類）５０ｔｚ（？を加え。

史にガラスピーズ−抗イ゛／シュリン抗体結合物（φ６
６問）を１ヶ加えて、３γＣて１時間振とうし免疫反応
を行な−）だ。（各イ゛／シュリン濃度に−〕いて、　
１０回多屯測定を行ｊＬ′う。）振とう終了後、脱イオ
ン水にてガラスピーズを２回洗浄し２次いて各免疫反応
媒体（Ａ〜Ｉ））で希釈した抗イノツユリン抗体−ベル
オキンターゼ複合体０．５ｍｌを加えて。

３７°（′：’（’１１時間振うし免疫反応を行なった
。反応路ｒ後、ガラスヒースを脱イオン水で２同洗浄し
。

次いで力うスし−スに結合したベルオキシタ−セ活ＰＩ
を過酸化水素−〇フエニレンレアミン系のブこ度のイン
ツユリン含有液の１０回の多重測定値の中駒、変動係数
及び七口比（ＯｐＵ／ｍ／の測定（■°！に対する１　
０　Ｉｔ　Ｕ／Ｈ１の測定値の比）を比較した。

結果を表−１に示す。なお、界面活性剤加療ｊＪＩｌ　
ｕ）免疫反応媒体の系を対照として小−ｔ。

表−１から明らか１丁如く、免疫反応媒Ｉ　Ａ〜１）の
様に、界面活性剤を免疫反応系に添加することによって
、−各インシュリン濃度での変動係数が小さくなり、ま
たセロ比も無添加の対照に比・・・で大きくなった。こ
のことは低濃度領域でのｌ’１ｌｌｌ定＋７度。

定電７度が向ヒしたことを小している。

実施例２ 一抗体同相法によるインシュリ／の放射免疫ｉ＋１１定
法：界面活性剤の添加効果を調−＼るために一ノアルマ
ノア社製インシュリン測定キット（１’ｔｍ＋Ｉ＋゛ｂ
＋＋　５ｌｎ８ｕｌｉ＋＋　Ｔ＋４８１）を用いて検討
した。

標準インシュリン液（インシュリ゛／濃度Ｏｐ　Ｎ、ｙ
ｇＨｌ。

１０μＵ／ｍｅ　）　０１ｍ１に、ヨウ化インシュリ゛
ノ（”’Ｍ液０．ＩＨｅを加え、更にポリオキノエチレ
ン（付加モル数２３　）　５−９、−’）ル、エーニテ
、ノ？をｏ５％濃度に／朱°る襟に添加したイノンユリ
ン抗体結合セファテックス懸濁液を１　ｍｌ加え４°Ｃ
て１６時間振とうし免疫反応を行なった。対照系として
、界面活性剤無添加系でも同様に測定を行ｔｃっだ。

各インシュリン濃度についての１０１ｕＪ多小測定し百
汐射能の平均値、変動係数について界面活性剤無添加系
と比較ｔノだ。

結末２表−２に示す。

表　　−２ Ａ、２セロ％・・・ｇ　ｐ　Ｕ／ｍｔの放射能に対する
１０μＩＩ／１／の放射能の比（％） 表−２から明らかな如く、界面活性剤を添加した系の方
が変動係数も小さくまたセロ％も小さく低濃度領域での
測定感度が向−１−シたことを示している。

実施例３ −１）　’／トドウィッチ法、ｌ：るα−フエ１−プロ
ティ／の酵素免疫測定法： 免疫反応用緩衝液（０，８５Ｌ？ＯＮ＋Ｌ（’Ｉ　、　
０．Ｌｏｏ’Ｉ　ｌｌｎ清γルブεン含有リン酸すトリ
ウノ、緩衝液ｚ山７３　）にポリオキシエチレン（付加
モル数３０）ノニルツボニルエーテルを１％濃度になる
ように添加し、界面活性剤入りの免疫反応媒体を調製し
た。この免疫反応媒体０．５ｍｌに、α−フエトゾ「Ｊ
ティン含（」−液１　　１　　１　　　ツ ｑ／屑ｌ　、　２０ｍ！／ｍｌ　、　４０岬／肩ｔ、８
０啼／ｍｌ　ｃＪ）　８種類）、５０１１ｅを加え、更
にポリスチレンホール−抗α−−−−’／　−７トフロ
テイノ抗体結合物（φ６朋）を１ヶ加えて。

３０°Ｃで３時間振とうし免疫反応を行ｔｃすだ。反応
終了後、脱イオン水にてポリスチレンホールを１回洗浄
し９次いて上記免疫反応媒体で希釈した抗α−フェトプ
ロティン抗体−ベルオキ〜ターセ複合体０．５ｍｌを加
えて、４°Ｃにて一夜免疫反応を行・′１つだ。反応終
了後、ボリスチレ′ノボールヲ脱イｉン水テ１１１１１
ｆｆｔ浄Ｌ　ｌ　＆いてオリスチレノヒース；二結合し
たベルオキシターセ活ｔ’ｌを過酸化水素　０ｏ）Ｈ及
先度にて４１１１定しｊこ。

各必度のα−フェトプロティン含有液の１０回ノ多市測
定値の平均（吸乞度）及びその時の変動係数を求めた。

対照系として界面活性剤無添加の免ある。

表　　−２ １〜プロティン濃度での平均値の圧 加添加系に比へて界ｍ１活性剤を用いた系では変動係数
が小さくまたセロ比が大きく、低濃度領域での測定感度
、測定精度が大幅に向１−シで′、することは明らかで
ある。

界面活性剤無添加系のものである。

特許出願人　　三洋化成■二道株式会？１丁　　続　　
補　　市　　書 ２　発明の名称 免疫１１１１定改良剤および改良方法 ３　補正をする苔 自　　発 ５　補正により増力口する発明の数 ６、補正の対象 明細、１（の発明の詳細な説明の欄 ７　補正の内容 別紙の通りタイプ浄書した明細ｔ！ｊ（４）　　１　、
　（４）　−２゜（１）３百を補充いたします。（内容
に変更なし）免疫測定法による生体中、？ｉ　ｉ＋ｌ’
、　＃’ｊ質（響１のｔ）４定の際セラチン分解物叉は
ケラチン分解物と塩類と４・共存させて測定を行う方法
か知ら４１ている（特開昭５６　４２１４２ｑ　）　カ
、コｕ）　ｊｉ　法テｊ、ｔ　＋Ｌシ＜　４１１　’＋
Ｌするという効果は期待できても、測定感度し）向上の
効果はほとんどなく、低温ｊλ領域での測定感度は不満
足なものであった。

本光明各らは低濃度会ｆＪ域まで、より感度よく■確に
生理活性物質を測定する方法をμ出す−＼く検討した結
果、合成界１ｎｉ活性剤か免疫＋ｉｌ’！　、ヒ改良（
こＭ効に作用することを艶出し、本発明に到達しｆコ。

すなわち本発明は、合成？：　＋ｆ＋ｉ活性剤からなる
ことを特徴とする免疫イ則定改良剤（第−発明）および
免疫測定法による生理活性物’ｆｌυ・）測定において
、その免疫反応系に合成界面活性剤を２．恣舶すること
を特徴とする免疫測定における改良ｊｊ′θ、（第二ヅ
ζ明）である。

本発明に用いら第１る合成界面活性剤としては、非イオ
ン、アニオン、カチオンおよび両１／ｌニア１！面活非
イオン界面活性剤としては、ポリオキシアルキレン系非
イオン界面活性剤（アルキロールアミド、ポリオキシア
ルキレンアルキルまたはアルキルアリールエーテル、ポ
リオキシアルキレン多価アルコール脂肪酸エステル、ポ
リオキシエチレンポリオキシプロピレンポリオール、ポ
リオキシアルキレン脂肪酸エステル、ポリオキシアルキ
レンアルキルアミンなど）、および多価アルコール系非
イオン界面活性剤（多価アルコール脂肪酸エステルなど
）があげられる。具体的には下記のとおりである。

（Ｎ　１）ポリオキシアルキレン系非イオン界面活性剤 （１）　　ポリオキシアルキレンアルキルアリールエー
テル： 炭素数通常８〜１２のアルキル基を少なくとも１個イＪ
“するアルキルフェノールもしくはアルキルナフトール
のＡ　Ｏ付加物（ＡＯ付加モル数は通常２〜１００、好
ましくは５〜５０）たとえばオクチルフェノールＥ　０
０Ｇ　、ノニルフェノール叩）、ドデシルど〔上記およ
び以下においてＡ　Ｉはアルキレノオキサイド、ＥＯは
エチレンオキサイド、Ｉ’０はプロピレンオキサイドを
示す、また０内はモル数を（以Ｆ余白） １、事件の表示 昭和５７年特許頼第　７２００９　　　号２、発明の６
称 免疫側７ぢ改良削り→よび改良方法 ３、補正をする者 ４、補正命令の日付 自　　　鉋 ５、補正により増加する発明の数 別紙の過′） （１）明細占、第２５〜２６頁０）表−２を１・記ｌＪ
）通り訂正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｌ　合成界面活性剤か１２なることを特徴と、１６免役
   測定改良剤３゜ ２　合成界１ｆ１１／ｌＴ′ｌ性剤か）１イオン界而活
   性剤、アー４−ン界面活性剤　わまひカチオン界面盾Ｐ
   １剤か＋；　’Ｃ７１ｍより選は才する化合物−Ｑ　ａ
   ｒる特許請求の範囲第１項記載の改良剤。 」ン界面活性剤から／Ｌ゛るＩＦＴより選ばれる化合物
   Ｃ１シブる￥、’ｊ　、Ｆ’ｌ請求の範囲蕃曇嗅４−−
   第２項記載の改良剤、。 ４、　　（ｊ、す４）゛−−冒′ル）し゛／系、ノ１イ
   オン界＋ｆ＋ｉ　／＋’＋　ｌ’１ｆｆｌｌ　カ、Ｉす
   ４八、ノーノ′ルへＬ／ノア　＋し＼’−ルアリ−ルコ
   ＝−−記載の改良剤。 ５　免疫測定θじ二よる生理病Ｐ１物′ｄの測定Ｈ二ｊ
   ・いて、その免疫反応系に合成界面活ｔＩｌ剤を除ＩＪ
   ＩＩ　、ｒることを特徴とする免疫測定にわける改良わ
   ｆＪｌ、。 ６　合成界１ｆｎ活性剤か非イオン界面活性剤、アニオ
   ン界１ｆＩ！　／＋！’ｉ性剤　およびカチオン界１ｆ
   １１活件剤からなる１洋より選ばれる化合物てＪ）ろ特
   １ｒ１請求の範囲第５項記載の方法。 オノ界１ｆ１１活性剤からなる群より選ばれる化合物で
   ある特許請求の範囲抽キ墳キキ搭第６項記載の／Ｊ法。 ８、（・１、す）オキノアルキレ゛／姶非イ（゛）界面
   活Ｖ１剤カホＩＪオキンアルキレンアルキルアリ−ルゴ
   　−チル°および／またはポリオキノアルＶレンアＩＬ
   〜ルエ−チルである特許請求の範囲隼六匁二第７１ム゛
   ４記載の方法。 ９　合成界面活性剤の添加Ｈ，ｌ、が、免疫反応系中−
   ｃｏ、ｏ　ｌ−ｌｏ　Ｗ／′ｗ％　でｈ　７）　特１．
   ′ｌ請求０）　範囲第５　項〜第８項のいずれかに記載
   の１ノ法４、１０　　免疫測定法か放射免役測定法二し
   たは酵素免疫ホ１１定法てゐる特１ｒ１′請求の範囲第
   ５項〜第９項のい゛・ｒイ１かに記載のｈだ、。