JPS58187189A - 球状の微生物細胞凝集物の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は球形のバクテリヤ−座嵯染吻の製造法に関する
。

特異的な化学的変換を行なうために、微生物の＃１胞に
白米する酵素を用いることは良く知られている。そのよ
うな変換を何なう＠台、細胞を含まない酵素−製智、破
壊した細胞又は全細胞は生物触媒の起源として便用する
ことができる。生物触媒の起源として使用する時［Ｆｉ
、遊離の＃素又は細胞はパッチ式１ｆＩにおいて有効に
使用できるが。

連続式の工業的規模の工程にはなじまない、この峻点は
固定化された生物触媒の種々の形態を製造することへ、
興味を移行石せた。０＃某反応に対する連続式の工業的
規模の工程は、典型的にＦｉ固定化された生物触媒床を
含む塔反応器を用い、これに生り触媒的転換反応を期待
する物質の溶液を通流することからなる。

ダルコースのフルクトースへの生物触媒的転換において
は、ダルコースを含有する溶液を、生物触媒含有床に通
流させ、ダルコース部分をフルクトースに転換する。典
型的ＫＦｉ、生物触媒をカチオン性又はアニオン性凝集
剤での凝集によって固定化する。この凝集剤は適轟１に
架１１薊の反応媒体に添加して架橋することができる。

生物触媒、凝集剤及び架倫剤の反応生成物は、その強靭
性によって測定されるように高い＃ＩＩａｉ的強度を示
し、従って使用中に軟化せず且つ崩壊せず、それ故に液
体の床中の流れを制限してはならない、固足化生吻触媒
の固体球形のペレット化された粒子Ｆｉ、単にふるい板
を通して押し出され、乾燥したときにヌードル様の粒子
となるものよりもある種の利点を有する０例えばそのよ
うな球状粒子は自由に流動し、材料の取ル扱い間ＩＩＩ
を縦減する。更に球状粒子は不均一形な乾燥した＠責よ
りも醜い活性物質密度で充填塔反応器を充填するために
用いることができる。

ＣＯ５４％−ら＃ｉ、１９７０年４月のＤｒｕｇ　ａｎ
ｄＣａａｍａｔｉａ　Ｉｎ４％５ｔｒｙにおいて、商品
名Ｍａｒｕｔｎａ−デｔｚｇデとして市販されている造
球装置を用いることによる小さい固体羨楽球状庫の製造
法を報告している。この文献Ｆｉ、装置［を、水平の回
転板を静置シリンダー内に含んでなるものとして記述し
ている。この板はＺル加工され、衣Ｉ［Ｉｒ−に＊＊を
生じさせる粗い表面を生じさせ、物を球状化する。

この装置は更に１９７０年６月のＭα引げαｅｔ髄ｒｉ
ｆＣｋａｔｎｉａｇ　ａｖ４　Ａｐｒｏｎ・ｊ　Ｎｔｔ
ｗａに記述されておシ。

押し出し機からの生成物を回転板上に供給し、そこで櫃
状蓋の壁に対して配直ちせることが指摘されている、押
し出し物ストランドは蚊初、この動きによって短い長さ
に、理想的にはその直径に等しい長さに破砕される。

独国特許公報第２１３７０４２号には、酵素組成物、特
に合成洗剤工業に有用であるものの造球法を開示してい
る。この造球すべき組成物は酵素を含む固体粉末７５〜
９７−の、水２５〜３ｇ６との混合豐として記述されて
いる。粉末は酵素安定剤、潤滑剤、充填剤及び／又は結
合剤を含有していてもよい、上記文献は、充填剤として
無機塩。

セルロース粉末％ポリビニルアルコール及びポリビニル
ビ四リドンを挙げている。なお最後の２種の物質は結合
剤としても役立ち、一方ポリエチレンダリコールは適当
潤滑剤として記述されていみ。

ゼラチン、澱粉分解生成物及び他の酵素に対する代替物
は適当な安定剤として記述されている１ｗｔ素組成瞼は
、これを前述した種類の造球装置の一１１１８ｅ年ｉ月
１ｓ日付は米国軸杵４４２１λ＠４３号は、Ａクチリヤ
細胞吻買を、（１）ダルタルアルデヒド、シアヌルヒバ
ライド又はこれらの組合せ物及び（２）エピハシヒドリ
ン及びアルキレン４リアンンの重合によって得られる特
別なカチオン往事合体の架橋反応生成物と接触させるこ
とによって製造される硬度の増大したバクテリヤ細胞凝
集物を開示している。改良された硬度特性を有するこの
機のバクテリヤ細胞凝集物は米国特許第４２！５Ｌ６３
２号に開示されている。この縦果物は。

最初に細胞−架橋剤−カチオン注車合体組成物を生成さ
せ、これを予じめ製造し且つ乾燥した同様の組成の縦果
物の粒子と一緒にし１組ｂｙ、＃ＩＪを口金を通して押
出し、押し出し物ｔ−乾燥し、この乾燥゛した押し出し
物を所望の粒径まで粉砕するととくよって製造される。

得られる粒子は不均一系であ夛、粉砕工種のために破砕
したぎざぎざの端と不規則な表面とを有している。この
種の形ｍけ、ｒルコースシ四ツデでの水利中に！２気泡
を樟行し１％にシ寵ツデの濃度が乾燥固体基準におｈて
４５９１以上の場合に浮遊問題を引き起こす傾向がある
。この構造的特徴は、輸送中に望ましからぬ破砕物を生
成するという脆い性質も示す、生成した破砕物は反応器
中における固定化酵素の仕込み及び水和中に洗い出され
、この破砕物の洗い出しによる損失は酵素反応器の全生
産性に致命的に影響する。

本発明は球形のバクテリヤ細胞凝集物の製造法に関する
。

本方法Ｆｉａ）＠素を生産する微生物の生活細胞を含む
水性媒体を与え寥 ｈ）　工１／　ＡｍｌヒＶｖン／ボリア電ン共重會体で
ある長鎖ぼりア建ンのカナオン性凝集剤と該凝集剤に対
する架橋剤との反応生成物を水性媒体に導入して細胞を
凝集させ且つＩＩｔ１１胞／架倫ポリアミン凝集物を生
成し寥 Ｃ）　含水［６８〜７６貞傾予の濾過ケークを生成させ
るのに十分なｒ過によって縦果物を水性媒体から除去し
罫 ｄ）　　濾過ケークを６０メツシユより大きくない板子
に粉砕し募 ６）　濾過ケークを、製造すべき球形の成形細胞凝集物
の凡その直径であるオリスイスを通して。

シリンダーが回転板を自由に回転させつつ１回転板に幻
して静置した側壁となるようにシリンダー内に配置する
ミル加工された回転体として含んでなる造球装置の咳板
上に押し出し寥 ｆ）　回転板を、押し出された縦果物がシリンダー内に
対して配列され且っ細Ｊ＠凝來物の分離し友球状板子に
成形されるのｒ（十分な期間、４．５〜１１ｍ／秒の接
線速度で回転させ菖及びｇ）　球状粒子を造粒装置から
回収する。

工程を含んでなる。

本発明の方法によって強靭な球状の凝集物形で固定化で
きる値生物の代表例は、グルコース・イソメラーゼの生
産に有用なものである。グルコース拳イソメラーゼＩＩ
′ｉ、グルコース（デキストロース）のフルクトース（
レツロース）への転化を接触するために１更用できる酵
素である。ある樵の微生物？ｌＪ、ｔばストレプトマイ
シス・フラがイレンメ（Ｓｔｒｍｐｔｏｍｙｃａａ　ｆ
ｌａｗｏｉｒａｎａ）、　Ｓ、エチナツル（ｍｃｈｉｎ
ａｔｍｒ）、Ｓ、アクロモｒ　Ｘ　ｘ　（ａａｈｒａ−
ｍｏｇａｎｕａ）、白色ストレプトマイセス（Ｓ、ａｌ
−ｂｓａ）、Ｓ、オリハセウＡ　Ｃａ１ｉｖａｅａｕａ
）　、７クチノプラネス・きズーリエンシス（Ａｅｔｔ
ｎｏｐｌａ引Ｉｒｎ１ａａｏｕｒｉａ％８ｉ８）及びバ
チルス・コアグランス（ＢａａｉＬｌｕａ　ｃｏａｇ％
１ａｎａ）を栄養媒体中で発酵させると、グルコース・
イソメラーゼが生産されることは公知である０本明細ｊ
＊　ｖｃ　ｂ−ける詳細なｍＱ述はグルコース・イソメ
ラーゼを生産するＩｌｌ＋１廁の固定化に関するけれど
、本方法は他のバクテリヤ細胞を含む種々の酵素に関し
て１史用することができる。

凝集工程で愛用される好虜なポリアミンのカチオン性凝
巣剤はＢａｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｇｓ社（’Ｉ’ｒｇ
ｖｏｓａ。

Ｐｇｎ＊５ｙｌｖａｎｉａ）から部品名Ｂｂ；ｒｚ１１
８ｏとして市販されている。Ｂａ１ｇ１１８０は１００
万より小さい分子量を有し、浴液ｇ当りアミノ基約０．
２８８ミリモルにンヒドリン分析［よる）を含有し、そ
して全溶液電電に端づいて固体３０重ｔＳを含む溶液と
して市販されている。この物質は、更にエビハロヒドリ
ンと式Ｎ、ｉｔ、ＮＲＮＨ，Ｃ式中。

ＲＦｉ炭１数２ないし約６の低級アルキレンであり。

及びＲ，反びＭ、けそれぞれ灰系数約１ないし約６の低
級アルキルである）のアルキレンボリアンンとの車台に
よって得られる水溶性のカチオン性貞合体であり、但し
エビハロヒドリン対ｌリア電ンのモル比が約０．４ｉ０
１１ないし約１７１１であり、咳車台させるべきエビハ
ロヒドリンの菫の約５０ないし約９０パーセントのアル
キレンボリアきンと反応させ、この反応を１反応媒体が
実質的に均一な粘度になるまで継続させ１次いでエビハ
ロヒドリンＯ残プの部分を増量的に反応させてカチオン
往事合体を製造することを含んでなり、なお重合温度が
約６０℃ないし約１２０℃である。

該重合体として米国特許第八９１４９０４号に記述され
ている。

ポリアミン凝楽剤に対する架橋剤は代表的にはグルタル
アルデヒド、シアヌル酸ハライド又は仁れらの組合せ物
である。総合的に成分（１）として同定されるグルタル
アルデヒド及び／又はシアヌル酸ハライドを、ｐＨ約６
ないしｌＯ及び温度約０６ないし３Ｇ＠Ｃにおいて約０
．５ないし４５時間、成分（２）としてここに同定され
るポリアミン寮来剤と反応させる。全架橋反応生成物は
、成分（１）及び（２）の活性成分の全重置に基づい１
成分子ｌ）を約１２な／ いし約τｉ重量優及び成分（２）を約２３ないし約８８
′ｌｌｔチ含有する０反応生成物の、血祉基年において
グルタルアルデヒド言論゛ニ約０ないし７７ノーーセン
ト及びシアヌル酸ハライドは約０ないし２２パーセント
である。

バクテリヤ細胞凝集体は、好ましくはバクテリヤ細胞を
、架橋されたポリアミンの水性媒体中においてｐＨ約８
ないし９及び温度約０１１ないし３０℃で約α５ないし
１５時間汝触させることによって製造される。この架檎
反フロ／Ｅ成物は、バクテリヤ１ｊＡＪＩＩｌが細胞の
乾燥電電に基づいて約４５ないし約ｇｏａｔｓの反応生
成物と接触するような量で１史川される。

上述の如くバクテリヤ細胞凝集物のスラリーを生成した
後、簡便にはこれを濾過袋を例えば回転真空フイ、ルタ
ーの上流にある保持又はサージタンクに入れる０次いで
スラリーをＦＪして湿ったバクテリヤ細胞凝集物の濾過
ケークを得る。この濾過は造球工程を適当に運転するた
めに、含水菫６８ないし７８重賞優の濾過ケークが得ら
れるように注意深く調節しなければならない、濾過ケー
クの含水被が尚すぎると、濾過ケークは滑って。

押し出し磯の濾過ケークへの所望の圧縮幼果が失なわれ
るために押し出し機中、を移動させるのが困峻となる。

このようにしヤ得られる押し出し智は造球中に汚れや塊
りになる間組を生じさせる。全含水蓋は先に行なった造
球工程から得られる固定化した生物触媒の破砕物を添加
することによって減することができる。しかしながら７
６７＃−センされる如く多すぎる破砕物の融加は取終う
１造体を弱くする。逆にケーク中の言水電が低すきると
。

押し出し中の＃！俸熱が多くなりすきる傾向があり、酵
素の不活化や口金の閉塞をもたらす、史に得られる押し
出し智は可塑剤として役立つ水に欠けるため［、造球中
に雇われ易くなる。押し出し吻は押し田し機から回転す
るミル処理板上に供給さｔ″Ｌ。

そこでシリンダー壁に対し勾配のある断面を肩して根状
又はドーナツ形に配列される。押し出し物は取初にミル
処理板上でのｌ＃憚カにより、また移動物体の相互の衝
突及び摩擦により、理想的にはその直径に等しい短い小
片に破砕される。’Ｉ’１ｌ）４の誉倣釣な処理は板の
回転の遍心力に、そして物体とｉル処１表面との闇にお
ける依巌的摩擦カに基づく、半清な回転部ｔｈ］は押し
出し物を回転させずに、板の円周方向へ撹らせる。この
鯛さの待機は異なっており、従って＊体の最終形体は平
滑な表面を用いた場合期待する程均−でなく１球形でな
いであろう、造球機Ｆｉ、固定化されたバクテリヤ１、
細胞の押し出し物を、迅速に小さく、充填された。

在島に取り扱いうる球状物に転換する球体製造機である
。凝集物の回転する板上への押し出しＦｉ。

凝集物をシリンダー壁に対して、造球工程中に胴んだロ
ープのようにねじれているように見える環状形に配置さ
せる。このｔ！Ｉｌ徴的な物体の配置は板の円周方向へ
の遠心力及び襞奪力に基因するベクトルによる押し出し
物の移動に基づいている。また板の円周では残りのモー
メントが押し出しＣＷＪｔ−静置壁に隆起させ、モーメ
ントの消失について物体内に又は物体上に落下させる。

押し出し物のヌー「ルは最初ベレット状に壊われ、物体
内での加速及び減速ペレットが速度勾配の形を作υ％帖
果として編んだロープ様の形となる。短い長さのペレッ
）［壊わされた後、押し出し吻は細胞縦果物の濾過ケー
クを押し出したオリフィスの直径に理想的には等しい直
径を有する球座に成形される。

この球体の形成にミル加工板上でのｌｌｌ１擦力及び移
動する押し出し物の粒子間での摩擦に基づいている。恢
述する実７ｔｈ例で用いる漬球蝋け、商品名Ｍａｒｗｍ
ａｒｉｔａｒ　Ｑ　−２ａ　Ｏとして、大阪（ＤＦｕｊ
ｉＰａｄａＬ社から市販されている。この装［は直径２
３センチメートルの回転部を有する。力源している細胞
−集りの適当な球状化は４，５ないし１２゜好ましくは
５ないし９メ一トル／秒の接物速度（接［株］速度＝Ｒ
ＰＭ＋６０Ｘπ×叡の直径）を必景とするから、この特
別な板の回転速贋は５００ないし１０００回転／回転転
曲に之・るべきである。

Ｕ転速度が大きすぎる場合には板が率に物′ｉを激しく
且つ強く板からほうり出すように回転し、従って′Ｊａ
Ｊ座がシリンダー壁に叩きつけられる。一方して十分な
モーメントが与えられないから所望の造球が達成されな
い、造球後、細＠凝集物の粒子を、典型的には訛動床乾
燥機で乾燥する。

い、このことは造球工程が適当な生物触媒活性を有する
凝集物を与えることに関して有利であることを示してい
る０本来不規ｊ４Ｉｌな形のものよりも取り扱いが容易
である球状の粒子を与える仁ととけ別に１本方法によっ
て製造される凝集＠は大きい物理的強靭性と反応器にお
ける拡張された酵素生産性とを示す、これらは本発明の
重責的な利点である。乾燥した凝集物は続く酵素反応に
使用するために必要とされるまで貯蔵できるから、その
舛水和時の強ＩｇＪ注は］を豐な因子である。恢述する
実施９４４　Ｋ　ｋ　イテ、粒子の強靭１５３Ｈｔｄ　
１ｎｓｔｒｏｎ　Ｕｎｉｖｇｒ−ａａｌ　Ｔａｔｔｅｒ
　Ｍｅｄａ＆１１０２　ｑに裏って＋１ｌｌｌ　だされ
る如き耐圧縮性に関して表現妊ｔＬる６区隈慎で柑いる
試験細胞での負（ｔ’Ｊ　ｍ　Ｉｔｊ　、（ハ）径４．
３７α、外径６．４ｓ儂及び簡さ２１．８１を巾する透
明なアクリルプラスチックの円筒からなる。この低部分
は厚さ０．６３５儂のステップ（５ｔｅｒｐ’）　７！
ｒ３．８１　ｃＲの開口と共に有してずクロフィルター
に刈する支持座を形成する。簡便なミクロフィルターは
、各−口が約（１２０３！ｍである１　４．５００１１
１ｉＴの開口を有する載物の紡糸［２用される？ｖｊ糸
口金である。

＠＋　４３　ｅｘ及び長さ１１６６ｍの３０４型のステ
ンレスｍ製プランジャーを、上ｄビシリンダー中に共軸
的に駆動せしめるように設置する。試料の蓬さ１α１７
１を示すように凡その印が負荷量に沿って位置する。減
圧又Ｆｉ、ＪＩｃ窒を負荷量の下部に適用するための、
噴たンクロフィルター全通流する液体を捕集するための
手段も設置する。バクテリヤ細胞凝集物の試料を負＃意
中に入れ、プランジャーによって試料に圧力を適用する
協合、試料は圧動されるであろう、試料を与えられた変
位まで圧動するのに必要とされる仕事は試料の強靭性の
指標となる。この試験装置１ｔは本明細曹における例示
の目的で再水和肝価法に便用される。

再水和の強靭性の評価は次のように有なわれる翼グルコ
ースの３３電瀘Ｉダーセント水浴液をｐＨａ　Ｉ　Ｖｃ
ｌ１４４ＲＪする。乾燥したバクテリヤ細胞凝集物の１
６０１部分を、２４℃で１１時時間中かに攪拌しながら
ダルコース溶液１３００Ｍと混合する。

得られた混合物を約３０秒間米国標準ふるい２０メツシ
ユの網上で除水する０次いで１用体奮グルコース溶液の
新しい部分に再―濁させ、２４℃で６分間撹拌する。得
られたスラＩＪ−ｔＳ分間沈噂させ、次いで上述の如く
除水する。次すで固不ｔダルコース＃液の新しい部分り
こ沓葱陶きせ、２４℃　　　□で５分間攪拌する０次い
で得られたスラリーの凡そ半分を試験量中に簡さ１θ、
１７αまで圧入する。

試験室の紙部に水ｆｉ１１５４ｃｍの賦圧又は真空を３
分間適用し、液体をミクロフィルターを通して吸引し１
次いでプランゾャーが試榊の上部に丁度触れるまでそれ
を押し下げるａ　Ｉｔｔ　８ｔ　ｒＯ”７　＃のクロス
ヘッドをプランジャーに取りっレア、それが１．２７は
７分の速度で下方へ動き且つ２．５４ｃＩＬの挿入で自
動的に抜きとる工うに装置ｆ！ｒ：、反疋する。記録紙
の速度を１１７ｃｓ／分に設工する。酵素床のプランジ
ャーに対する抵抗性とプランゾャーが下方へ移動した距
離とを記録紙にし１録する。水和した酵素床の強靭性は
プランジャーが該床にＸ’Ｊｔ、て竹なった仕事を表わ
す、＃Ｊｔ、木の圧、ＮＨに対する耐性が大きければ大
きいほど、仕事１圓ｒ」大きく、結氷として凝集物の強
靭性は大きい。鍔果祷の畑靭性は。

グルコース・インメラーゼ酵素の原反Ｌ５器塔の一般的
な寿命期間が普通８０日より長いから、グルコースのフ
ルクトースへの固定床による転化において臀に１豐であ
る。この期間中、酵素粒子は上部の酵素床の層の電さ及
びシロップの冗下刃の如き力に耐乏なけれはならない、
舶来として、老化した酵素床は崩壊して反応器を閉基す
るか本しれず或いは破砕して流れのチャンネリングを生
じさせるかも知れない、いずれの場合においても、この
状ｒｌＩＡは反応器の経済圏な運転に＊命命である。

しかしながら１強靭な粒子を有する＃集尿は使用期間中
完全な形を保持し或いは僅かしか変形しないから反応器
の物理的構造及び生物化学的性能に負の影４を与えるこ
とがない。

球状債東体の強靭性は濾過後に、但しＦ虜ケークの押し
出し前に結合剤を組成物に冷加することによって増強で
きることが発見された。この組成物における結合剤とし
て有用な吻實Ｆｉｍ子内で相互を粘合する接着を与える
べきであるが、渭球中に塊りを生成せしめるような種子
−１をｆ、青金する接７７１Ｆを与えてはならない、望
ましい結合剤は、乾燥後に粒子内のＩｍ犀を互いに候７
ばさせ、征って粒子の５３Ｌ靭性を高める僧層剤として
役立つ、１角当な結合剤祷質の例はアルギンぼす）　Ｉ
Ｊウム、イナゴマメガム、キサンタンｆム、カルがキシ
メチルセルロース、カッＩ＃カラギーナン及びダブルガ
ムである。一般に、適当な結合剤は、障隼佃出（吻例え
ばアルギネート及びカラギーナン、種子のガム例えばダ
ブル及びイナゴマメガム易セルロース酵尋体例えばカル
メキシメチルセルロース、　９Ｊｍ晶セルロースｌ及び
値生物のガム例えはキサンタンを含めて天然ガムの範ち
ゅうに入る。これらは（、ＲＡＳでｔｂり、しばしば食
品の処理［使用される。

造球又は乾燥工程中、細胞萩果切の破砕物が生成する。

これらの破砕物は押し出し前に湿ったＶ過ケーク及び結
合剤と混合することによって栴循壌することができる。

６８ないし７６優の範囲の含水被である濾過ケークを１
００重被単位とすると、米国標準ふるいで６０メツシユ
より小さい。

好ましくは１０Ｇメツシユよシ小さい更なる破砕物の添
加ｔは２０ないしｃＬＯ単位であり、一方結合剤として
のガムの添加量はα２ないし０．６率位であるべきであ
る。破砕物の添加Ｆｉ濾過ケークの含水電を低下させる
ことができ、岸ＩＩｔ−もたらして、押し出し中の望ま
しからぬ熱の発生なしに造球工程を尚めることができる
。

押し出し前に及び使用する場合にはガム及び／又は循環
される破砕物の添加前に濾過ケークを粉砕することが必
要なことが発見された。この粉砕工程Ｆｉ濾過ケークの
形や構造を、巾広い１ｗｔい。

普通直角の物体から６０メツシ瓢より大きくない威儀の
粉砕喫へと変化させる。この工特に押し出し工ｔｉ！−
のガム及び傭ＩＪ＆さ′ｎ九破砕吻の均一な混合を尚め
る。循壌破砕吻及び船台創を添加しない場合でさえ、粉
砕は造球工程ｖＣνいて多すぎる破砕−の生成を防止し
、従って押し出し、造球及び乾旅工橿によって均一な生
成ＷＶ得ることができる。

次の実施例は本発明を実施する方法を例示する。

実施例中、すべてのメツシュによる寸法は米国標準ふる
いによるものとする。

実　施　例　Ｘ 突然変典庫ストレプトマイシスφオリバセウスＮＨＲＬ
：４９１＠の＠＊ｅ＝、米国特許第λ６２へ８２８号に
記述されている境邑な栄養媒体を官有する攪拌式ばつ気
発ｍ−中で生身させた。パクデリャ＃１１側を官有する
得られた発陣器汁ｒ屑当な緩鴫剤の添ガｕｒＣよってｐ
Ｈｔ〜９に調節した。

電合体２３？３＃を含む＃ｇｔｇｌ１８０溶液７９１０
Ｊ’を蒸留水で希釈してｐＨが９に調節された希釈９２
１１とすることによってボリア２ン重合体の溶液を製造
した。また活性＊質３０１７ｇを含有する２Ｂ、１）Ｔ
ｔ＊ダルタルアルデヒド１２０８０ｄを＃領水で希釈し
て布浴液２７ノとすることによってダルタルアルデヒ「
の溶液を製造した。次いで２檜の溶液を混合し、蒸留水
を添力口して全量を１９０ｊとした。ｐＨｔ−９に−節
し。

約２５℃の温度で約ａ、Ｓ時間反応させて反応生成物の
浴液を得た。この溶液を、乾燥細胞貞門１１当り１５１
１７の量で上述の発酵器汁に礪加し、バクテリヤ細胞縦
来＠を生成せしめた。２５℃及びｐＨ８〜９において反
応時間約３０分の彼、バクテリヤ細胞縦来＠を含有する
処理される液汁を保持タンク中に入れ１次いでこれを回
転式真空フィルターに通過させた。含水普７５貞瀘饅の
得られた湿った一過ケークｔ−５つの部分に分けた。

この５つの部分の１つｔ−、１ｉｏｂαｒｔのザイレン
ト・チＥｌ　ｙｉ奢−（ｓｉｌｅｎｔ　ｃｈｏｐｐｅｒ
）　“（モデル８４１４５型）で約１平方口の小片に切
断した。

次いでこれを、スクリューの１１１私運度１００８ＰＭ
の３１１ｆｆ＠押し出しスクリューｒ用いて、ｉｆ！使
Ｌ５９ｍ＋７）開口をＭする口金力・ら押し田した０次
いで得られた押し出しｖｌＪを６０℃で２〜４時間乾燥
し、１／８インチの開ロスクリーンケ有するＭａｒｎｅ
ｌｏｉｄ＠（Ｗ、　Ｊ、　　Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ社
からのモデル丁型）を通してミル処理し、１６メツシユ
より小さい寸法の粒子を得た。４初のミルがら得られる
ふるい上の粒子を！＋備虫し、すべての粉砕した粒子が
１６メツシユより小さくなるまでミル処理した０次いで
ミル処理した粒子をその粒径分布にｘｑして慣貴し、就
いて米ｈ１襟準ふるいで１６メツシユを通過するが２４
メツシユＶＣ＃′ｉ残こる望ましい粒径の１分ｔ−果め
た。２４メツシユのふるいを通過する破砕−を更にＩ！
相するために果めた。

このようにして得た一１６＋２４メツシュの一分をｌＡ
と、して示した。このダルコース・インメラーゼ活性を
米国特許第八７７亀８６９号に示される！１Ｆ価法で測
定したが、これは５００ダルコース・イソメラーゼ単位
ＣＧ、１．Ｕ／ｌ、又は酵素Ｉｇ当り１μモル／分のフ
ルクトースに相当）であった、！！に粒子のｇｉ靭性を
前述した再水和物の強靭性の評価法で測定した。

一方湿ったヂ過ケークの他ρ怖分を、果めた粒子が一１
ｇ’＋４ｇメツシュである以外対照と全く同一の方法で
処理した。この試料をｌＢとして示した。

濾過ケークの第３の部分を、直径＆１８簡の開口の口金
を超してＨｏｂａｒｔの内向き機で処理し、絞込て先の
パッチからの偏猿された破砕９１Ｊ（粒径１００メツシ
ユ以下）及びグアルゴムとＨｏｂａｒｔ混合慎中におい
て低速で３〜５分間混合した。この混合響の組成は濾過
ケーク１０００，９．儂壌された破砕Ｊ１７６０＃及び
グアルゴム２ｙであった。

次いで混合＃を、スクリューの１四転速度１１００ＫＰ
の３１１圧細押し出しスクリューを用いて。

直性ｌ簡の６０の開口を肩する口金から押し田した。こ
れらの、長さが２ないし１２インチの乾量にある得られ
た押し出し吻を、ピンチ２隨及び高さ１ｍの形態でｉル
加工された直径２３ｃＩＩＬのきル加工板を有する造球
磯に導入した。直径２３Ｃ１ｌＯ板ｕ’ｉｏＯＲＰＭの
速度で回転して＆４ｍ／分の微意速度を３分間に亘って
与え１球状化された押し出し吻を遠心力によって開孔ｋ
　曲して機械から取り出した。得られた球体の言水石は
７０６％であった。Ａｇｒｏｍａｔｔｃ　ＡＧからの訛
動床乾燥礪（Ｓｔｒｇａ　ｌ型）ｆ用いて生成ｗｔＪを
６８℃の入口空気温度で乾燥した。この乾燥した最終的
な球体は＆１％の含水量を有した。これを試料ｌＣと表
示した。Ｃ１１つたＦ４ケークの第４のｉｌ＞分を、混
合物を電極０．７　ｗｘの６０個の関口を有する口金を
通して押し出す以外試料ＩＣと全く同一の方法で処理し
、ｌＤとして表示した。−過ケークの５！４５の部分を
、がム又は循環された破砕ｖＩＢを添加しない以外実施
例ＩＣと同一の方法で処理した。この試料をＩＥとして
次示し九・ これらの５つの試料を前述した再水利の強靭性の評価法
に供し、結果を第！ａ衣に示す。

纂１ａ！ＩＫ示すデータは、粉砕しち並びに造球した粒
子の酵素活性が重大な相異を示さなかったことを示す、
しかしながら、これらの粒子の強靭性は広い範囲内に入
る。試料ＩＡ（−１６＋２４電ル処理）の＊＠性を基準
とすると、１ＢＣ−１６＋４８建ル処理）の強靭性は３
４．２１以下であり。

ＩＣ（−１４＋４８球状化）及びＬＤＣ−１ｇ＋４８球
状化）及びＩＡ’（−１６＋４８球状化）のそれは対照
物のそれよりそれぞれ３ａ、ｓ％、２５．２嚢及びＩＬ
？憾高かった０球状化した試料のすべては粉砕した試料
よりも為い懺を有し、これらの球状化した湿った試料粒
子が乾燥工程前に７０．６〜７１９１１の含水量を有し
たことが示されている。

これらの試料のふるい前の全４２子の粒径分布の様子を
％１６表に示す、このデータは、造球工程の独臀な物像
の１つが狭い粒径範囲に高割合で分布したものを擬造す
ることを示す、試料１ｃＦｉ−ｔｓ＋２４メツシエの範
１８に丁？、ＩｌＧ、試料ｌＤは一１４＋４８メツシ為
Ｏ範囲［９＆？係が存在した。

しかしながら、球状化試料ｌＪから＃ｉ、ふるい下の破
砕物が高割合であることが観察された。゛この試料Ｆｉ
結合剤も循環された破砕物も含ま・裔かった。

−２４＋４８メツシ工の如き粉砕した粒子から狭い粒径
範囲を期待する場合Ｉｌｃは、粉砕工程から再循環物が
必要であり、この結果破砕物の一分が望ましくなく多く
なり、工程に望ましい以上の熱が発生するということを
特記しなければならない。

実施倒置 この実施例は、天然ｔム及びセルロース酵導体を含む種
々の結合剤及び微結晶セルロース（ＦＭＣＣａｒｐ、か
らのＡｖ４ｃｇＪ）のような不活性な充填剤の。

球体凝集物の生成及び強靭性に及ぼす影響を例示する。

実施例Ｉで用いたケークと全く同一の方法で製造した含
水量７２９チの固定化したダルコース′・イソメラーゼ
沖過ケークを３つの部分に分け１次のように処理した１
試料２Ａはケーク１００４）ｊｌを小片に切断し１次い
でｐ過ケークの同一のパッチを用い且つ６０’Ｃで２時
間の乾燥工８に供し。

続いてｌＯＯメツシュよ）小さい粒径に粉砕することに
よって侍た再循環される破砕−１１ｇｊ及び水７Ｏｄと
Ｈｏｂａデを混合機中で混合して製造した。この混合物
を更に押し出し、乾燥し、粉砕し。

ふるいＫかけ、試料Ｉｔの製造に記述した方法により生
物学的に及び機械的に評価した。

試料２Ｂは再循環される４＆伜柳の半分（ｓ６．１をセ
ルロースでｔき換える以外試料２Ａと同一の方法で製造
した。

ｔｃｓ２ｃＦｉ、セルロース５６ｙ、アルギン酸ナトリ
ウム７１１．再循環された級砕吻５６．Ｐ及び水７０１
１ｊを、混合機中において粉砕したケークと混合する以
外試料ｌＣと同様に製造した。乾燥した生成物のメッシ
ユによる大きさは−１６＋２４であった。試料ｗＤ、ｚ
ｋ；、　２Ｆ及び２Ｂは、用いる結合剤がそれぞれイナ
ゴマメガム、キサンタンがム、カルがキシメチルセルロ
ース及びグアルガムである以外試料２Ｃと全＜１ｉ」−
の方法で製造した。に科２Ｇはカッ７＃カラギーナン８
ｇを用いて製造した。試料ＲＩＦｉイナゴマメガム７Ｉ
を用い。

直’４０．７　ｓｍの４ＩＯの関口を有する口金を通し
て押し出し、−１８＋４１１の寸法でふるい分けすると
とＫよって押し出した。試料２Ｃ〜２Ｉに対する造球条
件／Ｉｉ第１−６に示す通シである。

この場合、他の試料と比較するための対照として、試料
２Ａを１か用した。２Ａの方法で粉砕した試料２Ｂは対
照と殆んど同一の強靭性を示した。

これらの試料の乾燥前の水分及び乾燥した生ｈＸ、＠の
かさ密度は、試料２Ｂの酵素活性がセルロースによって
いくらか希釈されているという以外一様であった。結合
剤を添加し、続いて球状化した他の試料は２Ａ及び２Ｂ
と殆んど同一の言水皺を示した富しかしながらそのかさ
密１を対照２ＡＫ対する６表ｓｙ／ｉｏａｍと比べて７
１８ないしｙａ？＃／ｌｏｏｍの範囲であった。このか
さ密度は１００１のメスシリンダーで測定した１００−
の試料の重さである０球状化粒子はその球形のためにｉ
ル処連した粒子よりも嶋いかさ密度を示した。これＦｉ
球形が２ル処理した対応拗と四−量の物体を有するが表
面積が小さいことを意味する。

これらの試料の強靭性は少くとも２５チ増大し。

農大の増加Ｆｉｌ？４−である。造球は円板の回転速度
Ｉ　Ｓ　Ｏ〜９００　ＨＰＭＶＣオイテ２ないし１０分
間行なった０本笑施例で軸角したｉｆ：染物に対する試
験結果を第１６及びｌｂ次ＶＣ示す。

第１ａ表 ＡＣ−１１Ｂ＋１４）　　　１０００　　　　　−　　
　　−　　　　１１！　　　７０＃（−１６＋２４）　
　　１０００　　　　５６　　　　−　　　　５６　　
　ＴＯＣ（−１６＋２４）、１０００　　　　５６　　
　　７　　　　　５６　７０、Ｄ（−１６＋２４）　　
　１００Ｇ　　　　　１ｓ６　　　　　？　　　　　　
５６　　　ＴＯ１Ａ’（−１６＋ａ４）　　　１０００
　　　　５６　　　　７　　　　　５６　　　ＴＯ：Ｆ
（−１６＋２４）　　　１００Ｇ　　　　　５６　　　
　　？　　　　　　５１１　　　ＴＯｉＧ（−１６＋１
４）　　　１０００　　　　５６　　　　８　　　　　
　Ｓ＠　　　Ｔ０２Ｂ−ダア泥ガム ｃ＊　２１は直径α７■の孔６０個を肩する口金を遡し
て押し出した。

乾燥前　　生Ｉｉｙ、物　　　　　　　　　増加したの
水分　　かさ密度　　活　性　　　強靭性６＆５　　６
４．９　　　５７１　　　　　−６８．０　　６６．７
　　　５２０　　　　　　！ｌｌ６７．８　　７＆７　
　　　ｓｔｓ　　　　１’１４６７．８　　　？λ２　
　　５３４５　　　　　フロ６７．８　　７５．６　　
　５６８　　　　４８６７．８　　７４３　　　５１１
１　　　　　＠ｓ６８．６　　７４．１１　　　５８６
　　　　８０６７．８　　７２３　　　５２０　　　　
７５６７．８　　７１．８　　　５２！　　　　　！８
−イナゴマメガム。

カツノζカラギーナン。

第厘り＆ ｆｌｃ　　　　　　　７５０　　　　　　　　　！２、
Ｄ　　　　　　　Ｗ２Ｏ２ ２Ｅ　　　　　　マ５０　　　　　　　３雪Ｆ　　　　
　　　７５０　　　　　　　　ｍ２Ｇ　　　　　　　？
！ｓＯ！ ２Ｈマ１４ ！　Ｉ　　　　７５０　／　９０　＠　　　　５　／　
Ｓ本実施例は、天然ガム及びセルロース酵尋体を含む珈
々の結合剤が造球工程！−薦めるため眠セルロースのよ
うな充填剤と一緒に組成物の一部として絵加できること
を示す、更に結果はすべての球状化粒子の５ｆｉ靭性が
粉砕した対照試料のそれよりも大きいことを示す。

実施例鳳 一一−−施例は、再ｕｈ壊される破砕物を用いる及い凝
集物の強靭性に及ぼす結合剤の影ノーを調べることが意
図されている。含水麓７１ｓ１の固に化さ゛れた酵素の
ｐ過ケークを５つの部分に分けた。試料３Ａは試料２Ａ
の製造に用いたものとＩｂ１−の方法を用いて製造した
。試料１４Ｂ、３Ｃ。

３Ｄ及び３Ｅは試料ＩＣの製造に用いた方法を使用して
製造した。各試料の組成及びその＠理的−生物化学的性
質を造球条件と一緒に第１ａ及び第厘す表に示す。

纂厘み表 ｓＢ　　　　　　　丁ＳＯ４ ｓｃ　　　　　　　　ｙｉｏ　　　　　　ｓ３Ｄ　　　
　　　丁ＳＯＺ ｓｘ　　　　　　　　ｙｉｏ　　　　　　４すべての球
状化粒子の含水ｗＦｉｓｔｏないし７Ｌ８−の範囲にあ
つえ、これらの球状化粒子のかさ密度は７ＩＬ牟ないし
？？、ＩＪ’／１００−の範囲であった。すべての試料
の活性に、試料３Ａ’（４９２ＧＩＵ／ｌ）がセル胃−
スの添加によって希釈されているように見える以外同一
の凡そＩｓ　４０　ＧＩＵ／ｉｌであった０球体の試料
の強ＩｇＪ曲は対照物と比較したとき４１７１いし１３
９％の増大した蝋を示した。本実施例で用いた造球条件
は、第腸り表に示すように、　ｉ！ないし４分間の間’
１５０ＲＰＭに設定した０組成管中の結合剤の効米は循
環された破砕物を添加し々くても球体の生成及びその９
ＪＩｌｌＪ性を高めることであった。

実施例Ｖ この実施例でＦｉ、単一の及び混合した結合剤を用いる
ことの、生成物の強靭性に及ばず影響を検討する。７Ｌ
２９６の固定化されたｒＩＩ素を有する濾過ケークを６
つの部分に分けた。各試料の組成を第Ｗａｆｉに示す、
対照として用いる試料４Ａは試料２Ａと同一の方法を用
いて製造し、一方試料４Ｂ、４Ｃ，４Ｄ、４Ｅ及ｒＪ４
Ｆ（Ｄ製造法ｕＲｃＫ対する−のと同一であった。これ
らの粒子の活性及び強靭性を第Ｗ（１表に示す、試料４
Ｃ及び４Ｄの強靭性は対照物のそれよ）約１７５％大き
く。

一方４Ｂ、４Ｂ及び４Ｆのそれは対照＠ニジ約ｇ０１１
ｉｉ４；６・つた、試料４Ｃ及び４Ｄに対する強靭性の
結果は、率−系と比べて２８Ｉの結合剤を用いても累加
的及び相乗的幼果が得られることを示した。試料ａＢ　
、　４Ａ；’及び４Ｆの結果は、多分原料の起源及び化
学的構造における類似性のために。

ダアル及びイナｆｗメのガム間における相互変換を示し
ている。すべての試料の生物触媒活性は非常に似ていた
。対照物のかさ密厩は６＆８．９／１０Ｇ−であ）、一
方法状化試料け７＆８ないし８Ｌ２ｊｌ／１９Ｇ−の密
度範囲を示した。これらの試料に対する球状化条件を第
Ｗｂ衣に示す。

４Ａ（−１１１＋１４）　　１０９＠　　　　　　、　
　　　＠６４＃（−１８＋４８）　　１０００　　　　
　１　　　１６４ＣＣ−１６＋４１１）　　１０００　
　　　　４　　　１５４Ｄ（−１４１＋４ＪＩ）　　１
０００　　　　Ｋ！＋４　　　１５４ＥＣ−１ｇ４４８
）　　１００Ｇ　　　　　　！　　　　ｌ５４Ｊ’（−
１６＋４８）　　１０００　　　１４１　　　１ｓ＊　
各試料に対する結合剤ｔ４Ｅ−イナゴマメガム蓼・＋ア
ルギン酸ナトリウム 一表 ＠７．？　　　＠＆８　　　　４４５　　　　　　−？
ａｇ　　　　８１．２　　　　　４１！　　　　　　　
　７丁７α１　７４８　　　　４４０　　　　１丁４６
＆６　　　　ｓｏ、＋　　　　　　４４２　　　　　　
１７１７０　　　　７１５　　　　　４５０　　　　　
　　８０？（Ｌ！　　　　８α６　　　　４４９　　　
　　　　丁３４Ｃ−アルギン酸ナトリウム１４Ｄ−イナ
プマメｆム４Ｉ４１８４Ｅ−ダアルガムｔａＦ−ダアル
及びイナｆマメガム第Ｗｂ表 ４Ｂ　　　　　？・・　　　３ ４Ｃ−丁・・　　　　＆２ ４Ｄ　　　　　８００　　　４ ４Ｅ　　　　τ■３ ４Ｆ　　　　　７８＠　　　　８ 実施例マ この実施例は、改曳された固定化ダルコース・イソメラ
ーゼのカラム（ＭＩＧＩＣ＞での評価で表わされる全活
性１ｆｆｌＸ１ｊ当りのフルクトースのＩ数で表わさ九
る累加的生産性及びその半寿命に関して１球状化粒子が
ミル処理した対応中よ）利点のあることを示す、実験結
果を第Ｖ表に要約する。

粒子を製造するためＩ／ｃ、含水に７２！３チの固定化
された濾過ケークの１つのパッチを１選択した粒極が！
Ｓメツシ二より小さく％３ｓメツシュより大きい（−２
８＋ａｓ）ということを除いて試料ＩＡに対して記述し
たものと同一の方法で処理した。仁の試料を５Ａとして
表示した。ケークの１つの部分を、用いるガムがイナゴ
マメガムであり、儂壊される破砕−の■が３０ｇでめり
及びそのｓ！径範囲が一２８＋３Ｓであることを除いて
試料ＩＤと同一の方法で処理した。この試料を５Ｂとし
て表示し友、含水量７０．０　％の濾過ケークの他のパ
ッチもｓＡと同一の方法で処堆し、６Ａと表示した。こ
のケークのパッチ部分を、用いる破砕−の重が６・Ｉで
あること′Ｉｋ除いて５Ｂのように処理した。ＭＩＧＩ
Ｃ及び累加的生産性の評価を次のように行なった。

通論 この方法は、ストレプトマイシス・オリバセウス種に由
来する固定化されたグルコース・イソメラーゼを評価す
る丸めのものである。この評価は。

４２憾のフルクトース転化率におけるグルコース・イソ
メラーゼの平均累積速度を与えるように意図され−でい
る。評価Ｉｆｉ６０℃及びｐＨ７，８（２１℃で測定）
の定義された条件下のカラム中での反乙における定義さ
れたダルコース物質のフルクトースへの酵素的異性化に
基づいている。ｘＭＩＧＩｃ単位は評価条件下に１μモ
ル／分のフルクトースを生産する活性として定義される
。

ｉ’ｊ１区４白１１ 丁ＩｓのＩＩ！ｉｌＩ体を９５−のＤＢと共に含有する
重重の酵素デキストローＸシー２ｆをＲｏｙａｌ　Ｇ１
５ｅｏａａＣｏデｓ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓから購入した。

このシロップを３１−の固体まで希釈し、脱鉱物し、マ
グネシウムイオン５０　ｐｐｍ、サルファ・イト２５０
　ｐｐ購及びｐ−ヒＦロΦシ女息香緻プロピル１２５　
ｐｐｍを補充した。この液体を酵素の、Ａ製に及び酵素
糸九対する基質として使用した。乾珠した一寛化ダルフ
ース・イソメラーゼ２５Ｉを、予じめ調製したシａツブ
２００−を含有する５００１のビーカーに入れた。混合
ａＩ！Ｊを２時１ｔ４ｊ放置した。３０分毎に撹拌棒で
グルコース・イソメラーゼを再懸濁させ。

ｐ　Ｈ７，ｉｔ　Ｋ再調製した。２時１ｋｉ４後、再水
和したグルコース・イソメラーゼをホットプレート上に
おいて上方からの攪拌憬ＫＬって穏やかに攪拌し。

６０℃でゆつく〉平衡化させた。

ジャケット付きのカラム（１，５Ｘ１００ｃＩＩＬ。

Ｇｌａｎｃｅ　５ｇ１ａｓｔｉｆｉｅ、　Ｉｎｃ、（Ｈ
ｏｕｓｔｏｎ、　ＴＸ）製）を取りつけ、一定温度（６
０℃士α１℃）の水をＷ＊する浴に連結した。このカラ
ムの出口の上に。

れＩでの深さまでパイレックス扱カラスウールを入れた
。カラムの上部に、Ｐ斗を用いることによって平衡化さ
れたグルコース・イソメラーゼを冷加した。水和したグ
ルコース・イソメラーゼを電力によってカラム中に沈降
させた。Ｐ斗の内側に付着したインメラーゼ＃ｉ、更な
る平衡化されたダルコー子基質によ）カラム中に洗い出
す必要があった。

カラ人中のグルコース・イソメラーゼに関し。

基質の受器を、６０℃の水をジャッケトに流しているカ
ラムに連結した。６０℃のカラムの出口には、ぜん妨ポ
ンプを通して約３ノの捕集容器に連結した。

評価方法 出口のせん動ボンデを２ないし４−７分の速度に設定す
ることによって基質の流速を調節した。

流出液を、流速を調節するために最初の２４時間＃／ｃ
３回、続いて１２時間で確認した。試料を室温で１時間
放置した。試料の固体嬢度を屈折率で決Ｍした。グルコ
ースのフルクトースへの部分的な転化は、ダルー−ス基
質及びに出液の偏光による光学的旋光に基づいて計算さ
れ、数体クロマトグラフィーによって４２９６の目的を
＃１した。計算機のデ四ダラムを用いて、捕果嘔れた流
出液を４２饅フルクトースに、対応する乾燥固体／日／
酵＊ＩＫ規格化ＩＪ、ＭＩＧＩＣｆＢｆＳ日Ｕ以上に亘
って日傘以上合には、０時１…に外挿した乾燥固体／日
／酵嵩ｌを得ることができた。酵素ＩＩ蟲のＭＩＧＩＣ
単位は、０時間における乾燥固体／日／＃素ＩＫＬ６１
１の係数を乗じた値に等しい、この係数は（乾燥固体ｙ
／臼）×（８７２４時）×（時７６０分）×（フルクト
ース０．４２　、？／［％固ＫＮ）Ｘ（フルクトースの
モル／フルクトース１＄１１１８７１）Ｘ（１０・μモ
ル１モル）に等しい、全生産性は、ある期間に亘る累積
した乾燥固体Ｉ／＃素Ｉとして定義される。それはある
期間に亘る累積したフルクトース１１／酵素Ｉとしても
定義される。

第１表を参照すると、酵素反応器の半寿命は。

反応器の活性がその元の活性の半分まで低下するのに要
する時間として定義される。

第ｖ６のデーｖＦｉ、ｓＢがＧＩＵ／１１　（１［１−
高い）、ＭＩＧＩＣＣ５＆４＊尚い）及び半寿命（ａｓ
％長い）において５Ａよりも優れていることを示す、ま
た６Ｂが６Ａよりも、ＧＩＵ／ｌｌに関して１７チ、Ｍ
ＩＧＩＣに関してｌＬ２嚢及び半寿命に関して６０嚢だ
け優れていることを示す、試験を終了した４３日の終り
における反応器での５Ｂの累積的生産性は５Ａのそれよ
りもＳ亀１％＆好であり、５８日の終りにおける６Ｂの
それは６Ａよりも２８．７係良好であった０本実施例は
。

延長された累積的生産性において１球状化したｒにコー
ス・イソメラーゼ粒子が２つの別々の＃ｋｆｌｉにおい
てミル処理した対照物より有利であることを例示してい
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌａ）　酵本を産生ずる微生物の生活細胞を含む水性媒
   体を与え； ｂ）　エビハロヒＶリン／４リアきン共菖合体である長
   鎖ボリアきンのカチオン、性醒集剤と該凝果剤に対する
   架憤剤との反応生成智を水性媒体に導入して細胞を凝集
   させ且つ細胞／架倫／　ＩＪアｉンＭ果物を生成し嘉 Ｃ）　含水波６８〜７４！１ｉｆｉ−の濾過ケークを生
   成させるのに十分な濾過によって、凌果智を水性媒体か
   ら除去し募 ｄ）濾過ケークを６０．メツシュより大きくない粒子に
   粉砕し基 ＃）　濾過ケークを、製造すべき球形のＪＩＥ形細胞凝
   集物の凡その直径でちゃオリフイスケ器して、シリンダ
   ーが回転板を自由に回転させつつ。 回転板に対して静置した誦壁となるようにシリンダー内
   に配置されたミルカロエきれた所擦板を回転体として含
   んでケる造球装置の販似上に押し出い／）　　［ｇ１転
   板を２．押し田された鍛東吻がシリンダー壁に対して配
   列され且つ細胞銃果吻の分離した球状粒子に成形される
   のに十分な期間、４，５〜１２濡／妙の接線速度で回転
   させ蟇及びｇ）　球状粒子を造粒装置〃・ら回収する。 工程を含むことを特徴とする球形、に成形された・櫂り
   チリヤ細胞凌集物の製造法。 ２　＃素を産生ずる微生物がグルコース・イソメラーゼ
   を産生ずることができ否舟許請求の乾囲菖１項記載の方
   法。 ＆　微生物がストレグトマイシス・フラメイレンス、Ｓ
   、エチナツル、Ｓ、アクロモｒヌス、白色ストレプトマ
   イシス、Ｓ、オリパセウム、アクチノプラネス◆ミズー
   リエンシス及びバチルスφコアダランスの群から選択さ
   れる特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４　ポリアミン凝集剤がエピハロヒ「りンと式鵡へＮＲ
   ＮＨ，（式中、Ｒは炭素数２ないし約６の低級アルキレ
   ンであり、及びＲ１及びＲ，Ｆｉそれぞれ炭素数的ｌな
   いし約６の低級アルキルである）のアλキレンボリアば
   ンとの重合によって得られる水溶性のカチオン性１合体
   であり、但しエビハロヒドリン対ポリアミンのモル比が
   約０．６０１１ないし約２７！１であり、該重合が重合
   させるべきエビハロヒドリンの量の約５０ないし約ＳＯ
   −譬一セントのアルキレンボリアξンと反応させ、この
   反応を１反応媒体が実、質的に均一な粘度になるまで継
   続させ１次いでエビハロヒドリンの残プの部分を増量的
   に反応させてカチオン注亀合体を製造することを含んで
   なり、そして車台１晶叢が約６０℃ないし約１２０℃で
   ダる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ＆架橋剤がダルタルアルデヒド、シアヌル酸ハライド又
   はこれらの組合せ吻である工ｉｊ計請求の範囲第１項記
   載の方法。 ＆　　架橋Ｍがダルタルアルデヒドである彎許請求の範
   囲第５項記載の方法。 ７、反応生成物がポリアミン＃Ｊ２３ないし約８８曹量
   ノ曹−セント及び柴ｌｌ１１６剤約１２ないし約７７重
   賞パーセントを含んでなり、そして架欄剤Ｆｉ電量基準
   においてグルタルアルデヒド金波が約Ｏないし７７ノ臂
   −セント及びシアヌルＸノーライＶが約Ｏないし３２パ
   ーセントでめる袴許請求の範囲第１頂記−の方法。 ａ　細胞／架橋ポリアミン−乗りが、バクテリヤ細胞物
   体を、架橋されたポリアミンの水性媒体中においてｐＨ
   約８ないし９及び温度約０６ないし３０℃で約α５ない
   し１５時間優触させ、そして架橋されたポリアミンを細
   胞のｃｒｙ麓の約４、ｓないし約６０重童Ｉダーセント
   の飯で使用する府ｆｆ請求の範囲第１項記載の方法。 甑α）　酵素を産生ずる徴生智の生活細胞を含む水性媒
   体を与え寡 ｂ）　エビハロヒドリン／ボリア電ン共息合体である長
   鎖ポリアミンのカチオン性凝集剤と該凝集剤に対する架
   橋剤との反応生成物を水性ｗｋ陣に導入して細胞を凝集
   させ且つ細Ｊｉｍ／架橋４リアミン凝果智を生成し募 ａ）　含水量６８〜７６１に菫俤の濾過ケークを生成さ
   せるのに十分なＲ４によって榊果ｔ＋１！Ｊを水性媒体
   から除去し婁 ｄ）’Ｐｉケークを６０メツシユより大きくない粒子に
   粉砕し、この粉砕したＶ過ケークに天然ガム、セルロー
   ス−４捧又は微生物ガムを結合剤として添加し８ −）　粉砕した濾過ケークと天然かムの組合せ物を混合
   して均一な混合物とし、この混合物を製造すべき球形の
   成形細胞Ｃ灰果吻の凡その直往であるオリアイスを剋し
   て、シリンダーが回転位を自由ＫＩｇ１転させつつ、回
   転板すＣ刈して静置した仙ｊ壁となるよ゛うにシリンダ
   ー内に１−＋１’、１ｍするミル加工された摩運板を回
   転体として含んでなるｉｊｉ球装置の咳板上に押し出し
   菖 ｆ）　回転板を、押し出さ才また混合物がシリンダー壁
   に対して配列され且つ分隻した球状ｎｔ−子ｖＣ戚形さ
   れるのに十分な期間、４．５〜１２ｍ／妙の依巌速度で
   回転させ、及び ｇ）　球状粒子を造粒装置〃・ら回収する。 工程を含むことを脊髄とする陣形のバクテリヤ細Ｊ＠凝
   集物の製造法。 ｌａ　　結合剤がアルギネート、カラギーナン。 ／フルガム又はローカストビーンガムの群かう選択され
   る天然ガムである特許請求の範囲第９墳記載の方法。 ｌｔ　　結合剤がカルがキシメチルセルロース又は微結
   晶セルロースの群から選択されるセルロース酵導座であ
   る％ｆＦ−求の範囲第９項記載の方法。 １！　　結合剤が微生物ガムである狩肝請求の範囲第９
   項記載の方法。 １′＆　球状粒子を造球装置から取り出した後流動床乾
   燥機で乾燥し、この乾燥工種で生成した乾燥粒子の破砕
   物を押し出されてない粉砕した濾過ケークに添加し、完
   全に混合してからこれを押し出す特許請求の範囲＠Ｓ項
   記載の方法。 １４　含水ｔ６８〜７６重量係の濾過ケークを１００重
   量率位とし、粉砕し九濾過ケークに６０メツシユより小
   さい破砕物を２０ないしａＯ１量重ＩＩｋＪＩＬ位の量
   で添加する特許請求の範囲第１３項記載の方法。