JPS58149903A - ネオカルチノスタチン複合体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なネオカルチノスタチン複合体及びその製
造法に関する。更に詳しく（ま本発明は式（１） ％式％（１） 〔式中　０　はネオカルチノスタチン残基を意味し、６
■　は平均１分子当りＮ向以下の無水マレイン酸環を有
し、半アルキルエステル化された平均分子量１，０００
−１０，０００σ〕スチレ／マレイ／酸共重合体残基を
意味し、ｎは１〜３５の整数を意味する。〕 で示されるネオカルチノスタチン複合体及びその製造法
に関する。

ネオカルチノスタチンはストレプトミセス・カルチノス
タチカス・バリアントＦ−４１・クロヤ（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅａ　ｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｃｕｓ　ｖａ
ｒ、Ｆ　−４１Ｋｕｒｏｙａ　）の培養物中に産生され
る蛋白負性抗癌物質であり（特公昭４２−２１７５２号
、米国特許第３，３３４゜０２２号）、その−次構造は
本発明者の一人である前出によって、アミノ酸総残基数
が１０９の推定分子量１０，７００のもの°として報告
されている（　５ｃｉｅｎｃｅ、　１７８巻、８７５〜
８７６頁、　１９７２年及びＡｒｃｈ、Ｂｉｏｃｈｅｍ
、Ｂｉｏｐｈｙｓ、、　１６３巻、　３７９〜３８５頁
）。

癌の治療においては、癌細胞の転移が最も重要な問題で
あり、就中特にリンパ節転移が最大の問題である。先に
１本膚明者はネオカルチノスタチ／の毒性の軽減と薬効
の持続性を高め。

かつ薬物をリンパ系に特異的に移行せしめることにつ（
・て種々研究した結果、ネオカルチノスタチンの分子中
に存在する２個の遊離アミン基を水溶性ポリスチレンマ
レイン酸共重合体の部分氷解物と反応せしめて得られる
ネオカルチノスタチン誘導体が上記目的に合致すること
を見出し、特許出願した（特開昭５３−１１７０９５号
）。

しかし、制癌剤は癌の転移を抑制するための上記リンパ
系に移行する性質の必要性に加えて。

腫瘍親和性が高いことが望ましい。腫瘍親和性が高いと
腫瘍における制癌剤の濃度が選択的に高まり、その結果
副作用の発現が軽減し、制癌剤の効果を有効に発揮し得
るのである。

そこで１本発明者らはさらに種々研究した結果、スチレ
ン無水マレイン酸共重合体又はその部分氷解物とは異な
る。無水マレイン酸環を有し、半アルキルエステル化さ
れた平均分子量が１．００ｕ　−１０，０００のスチレ
ン無水マレイン酸共重合体とネオカルチノスタチンとを
反応させて得られる式（１）で示されるネオカルチノス
タチン複合体が意外にも上記目的を達成することを艶出
し９本発明を完成した。

すなわち９本発明の複合体（＋）は、先のネオカルチノ
スタチン誘導体と同様の有用な性質を有すると共に、脂
溶性に優れており、油性製剤としての適用が可能となる
。本発明の複合体（１）は油性製剤として投与すると薬
物を腫瘍部位に集中させることができる。そして本発明
複合体（１）は腫瘍に対する親和性にも優れており、腫
瘍部位に滞留して制癌効果を強力に発揮することができ
るのである。

一方１本発明の複合体（１）は脂溶性に加えて水溶性の
性質をも兼ね備えているので、水溶性製剤例えば静注等
により全身投与も可能である。

このような本発明の複合体（１）によるネオカルチノス
タチンの好ましい改質は、１個以下の無水マレイン酸環
な有し、半アルキルエステル化されたスチレン無水マレ
イン酸共重合体（以下ＳＭＡと略記する）を用も・たこ
とにより、ネオカルチノスタチ／（以下ＮＣ８と略記す
る）を水溶性の性質を保持しつつ、脂溶性の性質を兼ね
備えたものとしたことによると考えられる。

本発明の特に目的とするところは、制癌剤が静脈注射剤
として用いられた場合は制癌剤が毛細血管より組織に出
、さらにリンパ系に特異的に移行することであり、一方
制癌剤が油性製剤として用（・られた場合には制癌剤が
油性製剤より血液中９組織液中又はリンパ液中など必要
な部位に徐放される二とであり、またいずれの投与形態
の場合であっても制癌剤がそのまま又は分解を受けて腫
瘍組織（部位）にはよく集積し。

なおかつ体外（（安全に排出されることである。

この目的に対しては１本発明の複合体（＋）は毛細血管
より組織に漏出するため分子量は６万以下であることが
好ましく、油性基剤・＼の溶解性、リンパ系への特異的
な移行性のためには分子量は２万以−ヒであることが望
ましい。

本発明の複合体（１）は生体内で所定の部位に到達した
のち、そのままある℃・は一部は加水分解を受け、ネオ
カルチノスタチンが遊離し抗腫瘍性を発揮するものと推
定される。なお１本発明の複合体（１）はポリカチオ／
を形成し、生体内で免疫系を賦活化する効果も期待され
る。

本発明の複合体（１）はＮＣ８１分子当り１〜３５分子
通常は５〜１５分子のＳＭＡとの複合体である。

ＮＣ８とＳＭＡとの結合状態の詳細については不明であ
るが、単なる混合物ではな（・。ＮＣ８は分子置約１万
のポリペプチドであると考えられており１両末端Ｋ　１
級アミノ基を２個有する他に多数の２級アミノ基、水酸
基等の官能基があり。

これらの官能基がＳＭＡとの反応に関与するものと考え
られる。しかしながら、　ＮＣ８とＳＭＡとの反応は多
官能性の高分子（又はオリゴマー）同志の反応であるの
で１反応生成物個々の反応位置を明示したり１分子構造
を明示することは不可能である。但し１反応生成物の構
造は電気り動、ｙルバーミエーションクロマ）　クラ７
　（−、ゲルｒ過等の分子サイズに関する分析と。

赤外線吸収スペクトル、紫外線吸収スペクトル及び元素
分析等の構成成分に関する分析とによって平均的罠解析
することはできる。

本発明のネオカルチノスタチン複合体（１）はＮＣ８と
ＳＭＡとを反応させることによって製造される。反応は
通常９重炭酸ナトリウム水溶液Ｋ　ＮＣ８を溶解し、　
ＮＣ８１分子に対し１分子以−ＦのＳＭＡ好ましくは３
分子以上のＳＭＡの粉末を室温で攪拌下に添加して行な
われる。また、　ＳＭＡを有機溶媒に溶解し、これＫ　
ＮＣ８の重炭酸ナトリウムの水溶液を添加し１次いで溶
媒を減圧乾燥等により除去することによっても製造する
ことができる。本発明の複合体（１）はＳＭＡの無水マ
レイン酸環が開環し、　ＮＣ８の官能基と反応すること
によって生成するものと考えられ、　ＮＣ８１分子に対
し、１〜３５分子のＳＭＡが反応して複合体を生成しう
るが通常は５〜１５分子のＳＭＡが反応して複合体を生
成するものと考えられる。

本発明で用いられるＳＭＡは平均１分子当り１個以下好
ましくは０．１〜０８個の無水マレイン酸環な有し、残
りの無水マレイン酸は開環され半アルキルエステル化さ
れたものであって、平均分子量１，０００〜１０，００
０．好ましくは１，５００〜２，５００のスチレン無水
マレイン酸共重合体である。本発明で使用するＳＭＡは
、無水マレイン酸が１個以ドであり、且つ半アルキル化
エステル化されているため架橋反応による高分子量副生
成物の形成を避けることかでき、　ＮＣ８との反応をコ
ントロールすることが容易である。ここで、半アルキル
エステルとは無水マレイン酸が開環したマレイン酸の有
する２個のカルボン酸の半分のカルボン酸がアルキルエ
ステル化されていることを意味し、この半アルキルエス
テルは完全に半アルキルエステル化されていることが好
ましいが、一部は半アルキルニスデル化されていないマ
レイン酸であっても、大部分が半アルキルエステル化さ
れていれば差支えない。また、半アルキルエステルは通
常は低級アルキルエステルヲ意味し９例えばメチルエス
テル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエス
テル等ある（・はこれらの混合エステルが挙げられ、就
中半ブチルエステルが好ましｔ・。この他、ポリエチレ
ングリコールモノエーテルのエステルの如き多価アルコ
ールのエステルであってもよ＜。

本発明においては半アルキルエステルシでこれらの多価
アルコールエステルも包含される。

本発明のネオカルチノスタチン複合体（１）　ヲヒトに
投与するＫは、癌の原発部位１手術後の癌摘出部位等の
局所組織内投与法、皮肉、皮下。

筋肉内、静脈内、動脈内、経口等の投与法、及び局所へ
の塗布、噴霧、生薬、膀腔内注入の外用的投与法が好適
である。投与量は投与法と癌の悪性度、癌の種類、患者
の病状及び−膜状態。

癌の進行度等によって一定ではな（、また術後等のり７
７節転移予防等の目的か、あるいは治療目的かによって
異なるが１例えば１日１回０．１〜ｌＯ■／ｋｇを主と
して週１〜２回、あるいは連日投与するのが好ましい。

局所塗布、経口投与法では更に投与量を増量することも
可能である。

なお９本発明の複合体（１）はＸ線造影剤すピオドール
（仏画ラボラドワール・ゲルベ製、リピオトール　ウル
トラフルイド−ヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステル）
Ｋ溶解する。本発明複合体（１）１〜２ｒｌ１ｇ／リピ
オドール１　ｍｌの油性製剤な動脈内投与すると、腫瘍
血管内Ｋ　ＩＪビオドール及び当該薬物が長期にとどま
るので８強力に抗腫瘍効果を発揮する。また、リビオド
ールＶζ溶解することにより１本発明の複合体（１）が
局所に滞留する状態がＸ＠によって観察することができ
る。

このような油性製剤として用いることは本発明複合体（
１）の性質を生かした使用法の一つである。

また５本発明の複合体（１）は１〜９％重炭酸す）　Ｉ
Ｊウム水溶液に溶解する。この水溶液を一静脈内投与す
ると、当該薬物はリンパ管に多く分布するので強力に制
癌作用を発揮する。

このような塩類水溶液剤として用いることも本発明複合
体（１）の性質を生かして用（・る使用法の一つである
。

以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。

ａ）　　ｐ−シメ７１７６ｍ１を攪拌下Ｋ　１３２−１
３４　Ｕに加熱し、無水マレイ／酸２９．４　ｇ　、ス
チレン３０．９ｇ及びベンゾイルパーオキシド１ｇをｐ
−シメン２００ｒａｔに溶解した溶液を３時間にわたっ
て連続的に滴下した。滴下と同時に重合反応が起り、白
濁沈殿状のスチレン無水マレイン酸共重合体が続々と形
成された。重合反応終了後、沈殿物を１取し、洗滌。

乾燥して、白色粉末のスチレン無水マレイン酸共重合体
５８ｇを得た。

このスチレン無水マレイン酸共重合体は各モノマーの重
合性より１＝１交互共重合体と考えられ。

元素分析結果もこれを支持する。アセトニ）　ＩＪルを
溶媒として蒸気圧法によりＫＮＡＵＥＲ社ＶＰＯ装置を
用い数平均分子量を求めたところ１７６０であった。

ｂ）このスチレン無水マレイン酸共重合体２０ｇをジオ
キサ７４０ｍ１Ｋ溶解し、ｎ−ブタノール１２ｍ１及び
酢酸リチウム０．２　ｇを加え、封管して９０　Ｃで２
５時間反応させた。反応終了後、減圧乾燥により反応液
より溶媒を揮発除去し、得られた残渣をｎ−ヘキサノ−
アセト／混液（容量比９：１）で洗った後、減圧乾燥し
て淡黄色フレーク状の一部無水マレイ／イノを残した半
ブチルエステル化スチレ／マレイン酸共重合体を得た。

蒸気圧法により分子量を求めたところ２，２００であり
。

赤外線吸収スペクトルのＤｌ。ｓｏ／Ｄ１ｏ６より無水
マレインイノ含量は平均０．７５個／分子と計算された
。

元素分析値（実測値） Ｃ；　６７．２９％、Ｈ；６．８３％、Ｎ；０．１９％
実施例 ネオカルチノスタチン０．２　ｇを０．５　Ｍの重炭酸
ソーダ水溶液８０ａ＋ｔＩＣ溶解し、室温で攪拌、下に
、参考例で得られた数平均分子量２，２００．無水マレ
イン酸型含量平均０．７５個／分子の半ブチルエステル
化スチレン無水マレイン酸共重合体粉末０．９　ｇを２
０分間隔に４回に分割して添加した。半ブチルエステル
化スチレ／無水マレイ／酸共重合体粉末が全部溶解した
のち、さらＫ　４０分間攪拌した。反応液なセロハンチ
ューブ中に移し＋　　５ｍＭ重炭酸ソーダ水溶液水溶液
中で加圧下に透析した。５ｍＭ重炭酸ソーダ水溶液を数
回とりかえて４Ｃ１２日間透析したのち、４Ｃの５ｍＭ
重炭酸ア／モニウム水溶液中でさらに２日間透析し１次
に４Ｃの１．２５ｍＭ重炭酸アンモニウム水溶液中でさ
らに２日間透析した。透析精製した反応液を凍結乾燥し
たのち、純水中に懸濁、洗滌し、遠心分離機で不溶部を
集める操作を３度繰り返したのち、凍結乾燥し、白色わ
た状状の固形物としてネオカルチノスタチ／−半プチル
エステル化スチレンマレイン酸共重合体複合体（以下Ｎ
ｅｏ　ＳＭＡＮＣ８と略記する）０．１５ｇを得た。

上記Ｎｅｏ　ＳＭＡＮＣ８の元素分析値（実測値）は以
下の通りであった。

Ｃ；　６０．５２％、Ｈ；６．４８％、Ｎ；３．３３％
Ｎｅｏ　ＳＭＡＮＣ８の赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ
製剤法）を第１図（テ１反応に使用した半ブチルエステ
ル化スチレ／無水マレイノ酸共重合体及びネオカルチノ
スタチン（ＮＣ８）の赤外線吸収ソ、ベクトル（ＫＢｒ
錠剤法）をそれぞれ第２図、第３図に示す。

また、　Ｎｅｏ　ＳＭＡＮＣ８をアクリルアシドゲル、
ドデシル硫酸ナトリウム０．１％添加電気泳動法により
分子縁の測定を行なったところ約４．３万であった。

Ｎｅｏ　ＳＭＡＮＣ８は、２２０ｃテ僅かに軟化し、２
５０ｔｌ’で熱分解が始まる。

Ｎｅｏ　ＳＭＡＮＣ８の溶媒に対する溶解性を反応原料
として用いたネオカルチノスタチン（ＮＣ８）及び半ブ
チルエステル化スチレン無水マレイン酸共重合体と比較
して表ＩＪ示す。

表　１　（１ｍｇ／ｒｒｌ濃度） と半ブチルエステル化スチレン無水マレイノ酸共重合体
との単なる混合物でなく複合体を形成していることは明
らかである。

【図面の簡単な説明】

第１図はＮｅｏ　ＳＭＡＮＣ８の赤外線吸収スペクトル
を、第２図は半ブチルエステル化スチレ／無水マレイン
酸共重合体の赤外線吸収スペクトルを、第３図はＮＣＲ
の赤外線吸収スペクトルを示す。 代理人　佐々木　晃　− 手続婦＋Ｅ　＠ 特許庁長官　島　１）春　樹　殿 ２、　発明の名称 不Ａカルチ／スタチン複合体反びその製造法３　補正を
する６ 事件との関係　　　特許出願人 住所　　　岡山県倉敷市酒津１６２１番地名称　　　（
１０８）株式会社　クラレ代表者　岡林次男 住所　　　東京都中央区日本橋本町２丁目５番地１名称
　　　（６６７）山之内製薬株、式会社代表者　森岡戊
夫 住所　　　東京都板橋区小豆沢１１目１番８号５、補正
の対象 明細書全文及び図面並びに委任状 ６　補正の内容 （１）　　明細書及び図面の浄書（内容に変史なし）。 （２）　　委任状を４完する。 手続補正書 １、′ｆ許庁長官若杉和夫殿 １、＃ｓ件の表示 特願昭５７−５１５５５号 ２、発明の名称 ネオカルチノスタチン複合体及びその製造法１０８・株
式会社　り　ラ　し　　（ばか２名）身　　代ム囮１λ
岡林次男 ４、代　理　人 を話東京０３　（２７７２３１８２ ６補正の内容 （以Ｆの員数及び行数は昭和５７年４月１５日ス・オで
提出の明細書のタイプ浄書に基づく）（１）　　明細誉
ｔＡ６ｊ￥最ド行の°１カチオノ」を［７ニオンＪ　ｖ
ｃ、訂正する。 （２）　　明細ｌ１ｌＦ第７貝第７行目の［−末４４Ｃ
ｊをＩ’　Ｎ−末端と２０位のりジン残１ｃ］に訂正す
る。 （３）　　明細門弟７頁＃Ｉ８行目の１２級アミノ抵ｊ
を「インドール基、グアニジン基」に訂正する。 （４）　　明細書第８頁第１４行目と第１５竹１の間ｒ
ｃ以ドの文を挿入する。 ［従って本発明のネオカルチノスタチン複合体に含まれ
るｉＭム残基には、無水マレイン酸環は存在しない。」 （５）　　明細書第９貞ｔ４１８行目の［ポリＪを「（
ポリ）」に訂正する。 （６）明細書第１０ｊｊ′ｊ４７行目の「膀腔」を［膀
胱１に訂正する。 （７）　　明細書第１ｏ貞＃ｍ１８行目の［トールＪを
「ドール」に訂正する。− １ｇ＋　　明細−＄１４頁第２行目の「水溶液」全削除
する。 曲　明細書第１４貴第１０行目の［拮Ｉを削除する。 旧　明細書第１５頁第１行目の１アンド」を［アミドＪ
ＫＩＴ正する。 以　　ト

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式（１） ％式％（） を意味し、■　は平均１分子当り１個以下の無水マレイ
   ン酸環を有し、半アルキルエステル化された平均分子量
   １，０００〜１０，０００のスチレンマレイン酸共重合
   体残基を意味し、ｎは１〜３５の整数を意味する。〕 で示されるネオカルチノスタチン複合体。 ２、ネオカルチノスタチンと、平均１分子当り１個以下
   の無水マレイン酸環を有し、半アルキルエステル化され
   た平均分子量１，０００〜ｉｏ、ｏｏｏのスチレン無水
   マレイノ酸共重合体とを１反応させることを特徴とする
   式（１）％式％（１） 〔式中、■）　はネオカルチノスタチン残基を意味し、
   ■ψ　は平均１分子当り１１固以下の無水マレイノ酸環
   を有し、半アルキルエステル化された平均分子量１．ｏ
   ｏｏ〜１０，０００のスチレンマレイン酸共重合体残基
   を誉味し、ｎは１〜３５の整数を意味する。〕 で示されるネオカルチノスタチン複合体の製造法。