JPS58143261A - 電気泳動ゲル材料としてのアクリルアミドと多糖類樹脂との共重合体 - Google Patents
電気泳動ゲル材料としてのアクリルアミドと多糖類樹脂との共重合体Info
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- JPS58143261A JPS58143261A JP58008853A JP885383A JPS58143261A JP S58143261 A JPS58143261 A JP S58143261A JP 58008853 A JP58008853 A JP 58008853A JP 885383 A JP885383 A JP 885383A JP S58143261 A JPS58143261 A JP S58143261A
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- G01N27/447—Systems using electrophoresis
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- B01D57/02—Separation, other than separation of solids, not fully covered by a single other group or subclass, e.g. B03C by electrophoresis
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
電気泳動け、電場の影響下に電解質分散媒中で行なわれ
る荷電粒子の移動に一般に適用される用語である。荷電
粒子の撰８る電気性状のため、さまざまな部類の荷電粒
子は分散媒中を貨なる速度で移動する。同じ電気性状を
もつ粒子は、特異的な同定出来るゾーン中で一緒に移動
する。電気泳動け、酵素や血清、炭水化物、アルブミン
やグロブリンを含めた蛋白質等のような複雑な生体物質
の分割と単離に非常に役立つ手法であることがわかって
いる。
る荷電粒子の移動に一般に適用される用語である。荷電
粒子の撰８る電気性状のため、さまざまな部類の荷電粒
子は分散媒中を貨なる速度で移動する。同じ電気性状を
もつ粒子は、特異的な同定出来るゾーン中で一緒に移動
する。電気泳動け、酵素や血清、炭水化物、アルブミン
やグロブリンを含めた蛋白質等のような複雑な生体物質
の分割と単離に非常に役立つ手法であることがわかって
いる。
電気泳動を行ｔ「うのに、遊離溶液、紛種Ｉ液で飽和さ
せた紙片、アガロースや寒天のようなゲルを含めた多く
の型式の分散蝉が使用された。数年前に、慣用の電気泳
動枕体よりはるかに多くのフラクションを分割できるポ
リアクリルアミドゲルが導入され、急速に広く受は入れ
られた。一つの典型的な商業用応用例では、ゲルはアク
リルアミドとＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドと
の混合物をその場で重合させることによって、その場で
つくられる。生ずるゲルは、安定で、強力であり、透明
であって、水に全く不溶であり、はとんどの化学物質に
対して不活性であって、非イオン性である。ポリアクリ
ルアミドゲルのもう一つの利点は、一旦つくられそして
電気泳動パターンが発現されると、水和又は脱水された
いずれの状態でも無限に保存できることである。二つの
単砥体の相対的割合を調節することによって、ゲル中の
孔径と、従ってそのふるい作用とが調節できる。
せた紙片、アガロースや寒天のようなゲルを含めた多く
の型式の分散蝉が使用された。数年前に、慣用の電気泳
動枕体よりはるかに多くのフラクションを分割できるポ
リアクリルアミドゲルが導入され、急速に広く受は入れ
られた。一つの典型的な商業用応用例では、ゲルはアク
リルアミドとＮ、Ｎ’−メチレンビスアクリルアミドと
の混合物をその場で重合させることによって、その場で
つくられる。生ずるゲルは、安定で、強力であり、透明
であって、水に全く不溶であり、はとんどの化学物質に
対して不活性であって、非イオン性である。ポリアクリ
ルアミドゲルのもう一つの利点は、一旦つくられそして
電気泳動パターンが発現されると、水和又は脱水された
いずれの状態でも無限に保存できることである。二つの
単砥体の相対的割合を調節することによって、ゲル中の
孔径と、従ってそのふるい作用とが調節できる。
ポリアクリルアミドゲルの性状は、アクリルアミドの重
合可能な組成物の組成を変えることによって、゛ある程
７（＋修飾又は変更できる。例えばＮ、Ｎ’−メチレン
ビスアクリルアミドは、エチレンジアクリレ−Ｉ・、Ｎ
、Ｎ’ （１１２−ジヒドロギシエチレン）−ビス−
アクリルアミド、Ｎ、Ｎ’−シアリル酒石酸ジイミド、
Ｎ＋Ｎ′、Ｎ” Ｆシアリルくえん酸トリアミド、ポ
リ （エチレングリコール）ジアクリレート２００ 、
Ｎ、Ｎ’−ビスアクリリルシスタミン、及びポリ （エ
チレングリコール）ジアクリレート４００を例とする他
の架橋剤で代替えすることができる。
合可能な組成物の組成を変えることによって、゛ある程
７（＋修飾又は変更できる。例えばＮ、Ｎ’−メチレン
ビスアクリルアミドは、エチレンジアクリレ−Ｉ・、Ｎ
、Ｎ’ （１１２−ジヒドロギシエチレン）−ビス−
アクリルアミド、Ｎ、Ｎ’−シアリル酒石酸ジイミド、
Ｎ＋Ｎ′、Ｎ” Ｆシアリルくえん酸トリアミド、ポ
リ （エチレングリコール）ジアクリレート２００ 、
Ｎ、Ｎ’−ビスアクリリルシスタミン、及びポリ （エ
チレングリコール）ジアクリレート４００を例とする他
の架橋剤で代替えすることができる。
他の方法は、置換アクリルアミドを使うものである。例
えばボシエツテイ （Ｂｏｓｃｈθ１１１）への合衆国
特許第４，１８９，３７０号では、二官能性アリル又は
アクリル単母体によるＮ−メチロールアクリルアミドの
ラジカル重合によってつくられるゲル爪合体が記載され
ている。ゲルは、血清リボ蛋白の段階的勾配分離を行な
う手段として開発された。０ＯＯＨ基を含有する陰イオ
ン性多糖類は、リボ蛋白の移動を促進するために添加で
きる。更に別の方法では、ポリアクリルアミドはアガロ
ース又は寒天−寒天のような他のゲルと混合して使用さ
れる。こわらの混合ゲルはユリエル（Ｕｒｉｅｌ ）へ
の合２Ｒ国特許第３ 、５７：：ｌ 、 ６０４号で明
らかにされている。
えばボシエツテイ （Ｂｏｓｃｈθ１１１）への合衆国
特許第４，１８９，３７０号では、二官能性アリル又は
アクリル単母体によるＮ−メチロールアクリルアミドの
ラジカル重合によってつくられるゲル爪合体が記載され
ている。ゲルは、血清リボ蛋白の段階的勾配分離を行な
う手段として開発された。０ＯＯＨ基を含有する陰イオ
ン性多糖類は、リボ蛋白の移動を促進するために添加で
きる。更に別の方法では、ポリアクリルアミドはアガロ
ース又は寒天−寒天のような他のゲルと混合して使用さ
れる。こわらの混合ゲルはユリエル（Ｕｒｉｅｌ ）へ
の合２Ｒ国特許第３ 、５７：：ｌ 、 ６０４号で明
らかにされている。
電気泳動技術に決定的な進歩があったが、ポリアクリル
アミドゲルに全く問題がないというわけではない。特に
厄介な性質は、例えば脱水な受ける間に支持基材からは
がれる傾向が見られることである。確かに、特殊な乾燥
上の注意を守らないと、ゲル自体はどうしようもないほ
ど縮んでしわが寄る。この注意としては、一定の制御さ
ｔまた熱を出せる商用真空乾燥器でゲルを注意ぶかく乾
燥することである。こうした条件下でも、乾燥フィルム
のひび割れと収縮が生ずることがある。前記ユリエルの
ポリアクリルアミド／アガロース混合物により、乾燥特
性に幾分の改善が見られるが、但しポリアクリルアミド
ゲルの組成物が約１２％までにＷ４． Ｖされることを
条件としている。このゲル水準を越える場合には、収縮
とひび割れが再び生ずる。脱水するのがもつと困儲なの
は、低分子量物質を分離するのに使用する制限された孔
径を有する高度に濃縮されたポリアクリルアミドゲル、
即ち５０％才で又はそれ以上のものである。
アミドゲルに全く問題がないというわけではない。特に
厄介な性質は、例えば脱水な受ける間に支持基材からは
がれる傾向が見られることである。確かに、特殊な乾燥
上の注意を守らないと、ゲル自体はどうしようもないほ
ど縮んでしわが寄る。この注意としては、一定の制御さ
ｔまた熱を出せる商用真空乾燥器でゲルを注意ぶかく乾
燥することである。こうした条件下でも、乾燥フィルム
のひび割れと収縮が生ずることがある。前記ユリエルの
ポリアクリルアミド／アガロース混合物により、乾燥特
性に幾分の改善が見られるが、但しポリアクリルアミド
ゲルの組成物が約１２％までにＷ４． Ｖされることを
条件としている。このゲル水準を越える場合には、収縮
とひび割れが再び生ずる。脱水するのがもつと困儲なの
は、低分子量物質を分離するのに使用する制限された孔
径を有する高度に濃縮されたポリアクリルアミドゲル、
即ち５０％才で又はそれ以上のものである。
従って、本発明の一つの利点は、電気泳動パターンを支
持するポリアクリルアミドゲルフィルムの改良された乾
燥及び保存法を提供することである。本発明のもう一つ
の利点は、電気泳動パターンを支持する電気泳動ゲルフ
ィルムの形で、改良された乾燥特性をもつポリアクリル
アミドゲル組成物を提供することである。本発明の更に
もう一つの利点は、ポリアクリルアミドゲルをつくる方
法と電気泳動での用途を提供することである。その他の
利点と目的は以下の説明で明らかになろう。
持するポリアクリルアミドゲルフィルムの改良された乾
燥及び保存法を提供することである。本発明のもう一つ
の利点は、電気泳動パターンを支持する電気泳動ゲルフ
ィルムの形で、改良された乾燥特性をもつポリアクリル
アミドゲル組成物を提供することである。本発明の更に
もう一つの利点は、ポリアクリルアミドゲルをつくる方
法と電気泳動での用途を提供することである。その他の
利点と目的は以下の説明で明らかになろう。
本発明に従って、上記の利点は、アクリルアミドと多糖
類樹脂との共重合から電気泳動ゲルフィルムをつくるこ
とによって実現できる。この樹脂においては、少なくと
もヒドロキシル水素のいくらかは、２〜１２個の炭素原
子のエチレン不飽和基で置き換えられている。一般に多
糖類樹脂の分子は範囲は約５ 、０００ないし約１０’
ダルトン、好ましくは約１００ 、０００ないし約５０
０ 、０００ダルトンの範囲内に入る。エチレン不飽和
基とは、触媒の存在下に付加重合又は共重合を受けるよ
うな隔離された炭素−炭素二重結合を含有する炭化水素
基のことである。
類樹脂との共重合から電気泳動ゲルフィルムをつくるこ
とによって実現できる。この樹脂においては、少なくと
もヒドロキシル水素のいくらかは、２〜１２個の炭素原
子のエチレン不飽和基で置き換えられている。一般に多
糖類樹脂の分子は範囲は約５ 、０００ないし約１０’
ダルトン、好ましくは約１００ 、０００ないし約５０
０ 、０００ダルトンの範囲内に入る。エチレン不飽和
基とは、触媒の存在下に付加重合又は共重合を受けるよ
うな隔離された炭素−炭素二重結合を含有する炭化水素
基のことである。
本発明の実施に使用されるエチレン不飽和多糖類樹脂は
、ガイス’Ｊ −（Ｇｕｉｓｅｌｅｙ ）へｏ 合ｐ
国特許第３ 、９５６ 、２７３号に記載された修飾さ
れたアガロース及び寒天の調製のような既知合成手順に
従って得られる。この特許によると、親水性樹脂アガロ
ース及び寒天中のＯＨ基を、エチレン不飽和のものを含
めたアシル及びアルキル化試薬と反応させて、種々の樹
脂誘導体を提供する。これらの反応を実施するには、樹
脂を初めに強力なアルカリ水溶液、すなわち約０．５な
いし１．５モルのアルカリ金属水醸化物中に溶解し、こ
のあとエチレン不飽和エーテル化又はアシル化試薬を加
える。エーテル化試薬の例はアルケニルハライド、例え
ば３−ブロモプロペン、３−ブロモ」１２−ブテン、４
−フロモー２−ヘキセン、６−ブロモ−３−ヘプテン等
、更にアリル、グリシジルエーテルを包含する。アシル
化剤は塩化アクリロイル、塩化クロトニル、塩化メタク
リロイル、３−ブテノイル等を包含する。子↓横」ノ沫
−ｉ＄ＪＬ４＋兵胃りし呻噂末七、４冶１−１ｕｉ匂り
じ一反応をアルカリ性水溶液で行うと反応の間に変色や
溶液の色が暗くなりがちで、他の点では全く満足ながら
変色した生成物を生じるので、アガロースのアルデヒド
末端基を、アルカリ水溶液に寒天又はアガロースを接触
させる前に例えば還元などで封鎖してアルデヒド基の関
与する色形成反応の起こるのを防ぐことも好ましい。選
択される良好な封鎖剤は硼水素化物、特に水素化硼素ナ
トリウムのようなアルカリ金属硼水素化物であって、こ
れがアルデヒド末端基をアルコール（ヒドロキシ）基に
還元する。
、ガイス’Ｊ −（Ｇｕｉｓｅｌｅｙ ）へｏ 合ｐ
国特許第３ 、９５６ 、２７３号に記載された修飾さ
れたアガロース及び寒天の調製のような既知合成手順に
従って得られる。この特許によると、親水性樹脂アガロ
ース及び寒天中のＯＨ基を、エチレン不飽和のものを含
めたアシル及びアルキル化試薬と反応させて、種々の樹
脂誘導体を提供する。これらの反応を実施するには、樹
脂を初めに強力なアルカリ水溶液、すなわち約０．５な
いし１．５モルのアルカリ金属水醸化物中に溶解し、こ
のあとエチレン不飽和エーテル化又はアシル化試薬を加
える。エーテル化試薬の例はアルケニルハライド、例え
ば３−ブロモプロペン、３−ブロモ」１２−ブテン、４
−フロモー２−ヘキセン、６−ブロモ−３−ヘプテン等
、更にアリル、グリシジルエーテルを包含する。アシル
化剤は塩化アクリロイル、塩化クロトニル、塩化メタク
リロイル、３−ブテノイル等を包含する。子↓横」ノ沫
−ｉ＄ＪＬ４＋兵胃りし呻噂末七、４冶１−１ｕｉ匂り
じ一反応をアルカリ性水溶液で行うと反応の間に変色や
溶液の色が暗くなりがちで、他の点では全く満足ながら
変色した生成物を生じるので、アガロースのアルデヒド
末端基を、アルカリ水溶液に寒天又はアガロースを接触
させる前に例えば還元などで封鎖してアルデヒド基の関
与する色形成反応の起こるのを防ぐことも好ましい。選
択される良好な封鎖剤は硼水素化物、特に水素化硼素ナ
トリウムのようなアルカリ金属硼水素化物であって、こ
れがアルデヒド末端基をアルコール（ヒドロキシ）基に
還元する。
反応を約７０℃ないし１００℃以上の高温で実施するの
が好ましいが、アルデヒド末端基を封鎖しない場合に変
色を最少限にするためと、比較的揮発性の試薬を使う詩
に損失を減らすためには、低目の湿度を使用できる。低
目の温度では反応が遅く、場合によっては選んだ試薬が
、アガロースとの望んでいる程度の反応を達成できる前
に水との反応によって分解される。
が好ましいが、アルデヒド末端基を封鎖しない場合に変
色を最少限にするためと、比較的揮発性の試薬を使う詩
に損失を減らすためには、低目の湿度を使用できる。低
目の温度では反応が遅く、場合によっては選んだ試薬が
、アガロースとの望んでいる程度の反応を達成できる前
に水との反応によって分解される。
反応終了後、混合物を５０〜６０℃（高目の温度の場合
）に冷却し、アルカリを酸で中和するか、又は透析その
他の筒用手順によって除去し、生成物を信用手順によっ
て精製する。例えば溶液を冷却によってゲル化し、凍結
、解凍させ、次に洗浄、乾燥するか、又はメタノール、
エタノール、プ四パノール、アセトン等のような、生成
物にとって非溶媒の水と混ざる有機液体との混合によっ
て、生成物を反応溶液から沈殿させ、このあと沈殿物を
ろ過し、非溶媒で洗い、乾燥させる。
）に冷却し、アルカリを酸で中和するか、又は透析その
他の筒用手順によって除去し、生成物を信用手順によっ
て精製する。例えば溶液を冷却によってゲル化し、凍結
、解凍させ、次に洗浄、乾燥するか、又はメタノール、
エタノール、プ四パノール、アセトン等のような、生成
物にとって非溶媒の水と混ざる有機液体との混合によっ
て、生成物を反応溶液から沈殿させ、このあと沈殿物を
ろ過し、非溶媒で洗い、乾燥させる。
こわらの調製は、特にアシル化用にはＮ、Ｎ−ジメチル
ホルムアミド、ピリジン等のような有機溶媒中でも実施
できる。こわらの条件下に、アルデヒド末端基の封鎖は
、普通には不要であり、反応中に変色はほとんど又は全
く起きない。そのほか、所望により、アシルハライド類
の代わりに酸無水物をアシル化用に使用できる。
ホルムアミド、ピリジン等のような有機溶媒中でも実施
できる。こわらの条件下に、アルデヒド末端基の封鎖は
、普通には不要であり、反応中に変色はほとんど又は全
く起きない。そのほか、所望により、アシルハライド類
の代わりに酸無水物をアシル化用に使用できる。
使用されるアルケニル什剤又はアシル化剤の正確な駁は
、反応条件と望んでいる置換度（Ｄ、Ｓ、）によって変
わる。水がある時に試薬がある程度の水と反応する傾向
があるため、理論的に必要な量より大過剰が普通には用
いられる。
、反応条件と望んでいる置換度（Ｄ、Ｓ、）によって変
わる。水がある時に試薬がある程度の水と反応する傾向
があるため、理論的に必要な量より大過剰が普通には用
いられる。
エチレン不飽和誘導体に転化できる、本発明の実施に適
したその他の多糖類樹脂の例は、デキストラン、シトサ
ン、カラジーナン、アルギン、ファーセララン、ラミナ
ｐン、イナゴ豆ゴム、グワーゴム、メチルセルロース、
ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル
ロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース等を包
含スる。
したその他の多糖類樹脂の例は、デキストラン、シトサ
ン、カラジーナン、アルギン、ファーセララン、ラミナ
ｐン、イナゴ豆ゴム、グワーゴム、メチルセルロース、
ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル
ロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース等を包
含スる。
概して、上記のようにエーテル化又はアシル化できる遊
離ヒドロキシル基をもつ任意の多糖類樹脂が、本明細書
の電気泳動用組成物をつくるのに適した候補である。電
気的に中性の媒体を求めてい”る場合は、−０００Ｈ及
び−Ｈ３Ｏ４ラジカルのようなイオン基を含まない多糖
類樹脂を選択すべきである。
離ヒドロキシル基をもつ任意の多糖類樹脂が、本明細書
の電気泳動用組成物をつくるのに適した候補である。電
気的に中性の媒体を求めてい”る場合は、−０００Ｈ及
び−Ｈ３Ｏ４ラジカルのようなイオン基を含まない多糖
類樹脂を選択すべきである。
本発明の電気泳動組成物は、架橋されたポリアクリルア
ミドゲルマトリックスを形成する既知手順に一般的に従
ってつくられる。従って本明細書のエチレン不飽和多糖
類樹脂とアクリルアミドとの混合物ｕ 、Ｎ 、Ｎ 、
Ｎ’Ｉ Ｎ’−テトラメチルエチレンジ７ ミ〉（Ｔ
ＥＭＥＤ）のような重合触媒と、過硫酸アンモニウム、
硫酸アンモニウムのような開始剤を含有する緩衝液に溶
解される。次にその必要逼が、ゲルの接着を促進する活
性化表面をもつポリエステルフィルムのような適当な支
持シートを備えた戚”形層カセットに移される。重合が
完成したら、ゲルＮ ｍｌは電気泳動ゲル峠を実施する
のに用いられ、次に通常の方法で処理される。収縮やひ
び割わの形跡なく、そして優れた電気泳動パターンを保
存しつつ出来たゲルを炉内で直接乾燥出来る。
ミドゲルマトリックスを形成する既知手順に一般的に従
ってつくられる。従って本明細書のエチレン不飽和多糖
類樹脂とアクリルアミドとの混合物ｕ 、Ｎ 、Ｎ 、
Ｎ’Ｉ Ｎ’−テトラメチルエチレンジ７ ミ〉（Ｔ
ＥＭＥＤ）のような重合触媒と、過硫酸アンモニウム、
硫酸アンモニウムのような開始剤を含有する緩衝液に溶
解される。次にその必要逼が、ゲルの接着を促進する活
性化表面をもつポリエステルフィルムのような適当な支
持シートを備えた戚”形層カセットに移される。重合が
完成したら、ゲルＮ ｍｌは電気泳動ゲル峠を実施する
のに用いられ、次に通常の方法で処理される。収縮やひ
び割わの形跡なく、そして優れた電気泳動パターンを保
存しつつ出来たゲルを炉内で直接乾燥出来る。
−・般的ニ言って、重合混合物中のアクリルアミドの量
は、エチレン不飽和多糖類樹脂の鳳をかなり上回ってい
る。しかし、不飽和樹脂に対するアクリルアミドの比は
、分子量のわりに高率の不飽和を含有するこれまでの簡
単ケ、、・架橋剤、例えばＮ。
は、エチレン不飽和多糖類樹脂の鳳をかなり上回ってい
る。しかし、不飽和樹脂に対するアクリルアミドの比は
、分子量のわりに高率の不飽和を含有するこれまでの簡
単ケ、、・架橋剤、例えばＮ。
Ｎ′−メチレンビスアクリルアミド又はメチレンビス了
クリレートの重合より詳通には低い。エヂレン不飽和樹
脂が高い置換度（Ｄ、Ｓ、）をもつ場合には、すなわち
多くのヒドロキシル水素が不飽和基と置換されている場
合には、低い置換度の同じ樹脂標本より少な目の敞が用
いられよう。たくさんのヒドロキシル位置をもつ多糖類
は、ヒドロキシルの少ない高度にＩＮ換された樹脂より
、比較的低い置換度で高率の不飽和を含有しうる。樹脂
の置換度がどのようであろうと、満足な重合混合物は、
アクリルアミド／ビスアクリルアミドの比を調整するこ
とによって慣用のポリアクリルアミドゲルの孔径を調節
するのと同様に、樹脂に対するアクリルアミドの比を調
整することによって通常処方される。普通は、アクリル
アミドのエチレン不飽和多糖類誘導体に対する重を比が
、約１５対ｌだと、ひび割れや収縮が起きずに脱水でき
る電気泳動ゲルが得らハる。
クリレートの重合より詳通には低い。エヂレン不飽和樹
脂が高い置換度（Ｄ、Ｓ、）をもつ場合には、すなわち
多くのヒドロキシル水素が不飽和基と置換されている場
合には、低い置換度の同じ樹脂標本より少な目の敞が用
いられよう。たくさんのヒドロキシル位置をもつ多糖類
は、ヒドロキシルの少ない高度にＩＮ換された樹脂より
、比較的低い置換度で高率の不飽和を含有しうる。樹脂
の置換度がどのようであろうと、満足な重合混合物は、
アクリルアミド／ビスアクリルアミドの比を調整するこ
とによって慣用のポリアクリルアミドゲルの孔径を調節
するのと同様に、樹脂に対するアクリルアミドの比を調
整することによって通常処方される。普通は、アクリル
アミドのエチレン不飽和多糖類誘導体に対する重を比が
、約１５対ｌだと、ひび割れや収縮が起きずに脱水でき
る電気泳動ゲルが得らハる。
ここで以下の実施例を参照する。
誘導体化ポリオールの）墓
実施例１ アリルグリシジルアガロースアガロース１０
９を沸とう水４９０ ｔｎｔに溶解する。
９を沸とう水４９０ ｔｎｔに溶解する。
溶、７Ｉ＋（を８０ｔ′に保ち、たえずかきまぜながら
１４Ｍ水酸化ナトリウム中の４．４Ｍ水素化硼素ナトリ
ウム１０−を加える。１０分後、１０％水酸化ナトリウ
ム溶Ｈ１００ｍｌを加え、続いてアリルグリシジルエー
テル２５ ｒｎｌを１５分にわたって滴加する。１時間
後、アリルグリシジルエーテルの追加２５ｒｎｌを前と
同様に加え、更に１時間反応させる。反応混合物を６０
℃に冷却し、次にフェノールフタレインで指示されると
おりに４Ｍ酢酸の添加によって中和する。溶液を３倍量
のイソプロパツールに徐々に加えると、白色沈殿物が生
じ、これをダク四ン布に通してろ過することによって回
収する。６０％インプロパツール２／中で２回洗浄後、
沈殿物を６０℃で一夜炉乾燥し、微粉末へ粉砕する。誘
導体化アガロースは、その初期ゲル化温度（４２℃）が
１６℃に低下していた。。
１４Ｍ水酸化ナトリウム中の４．４Ｍ水素化硼素ナトリ
ウム１０−を加える。１０分後、１０％水酸化ナトリウ
ム溶Ｈ１００ｍｌを加え、続いてアリルグリシジルエー
テル２５ ｒｎｌを１５分にわたって滴加する。１時間
後、アリルグリシジルエーテルの追加２５ｒｎｌを前と
同様に加え、更に１時間反応させる。反応混合物を６０
℃に冷却し、次にフェノールフタレインで指示されると
おりに４Ｍ酢酸の添加によって中和する。溶液を３倍量
のイソプロパツールに徐々に加えると、白色沈殿物が生
じ、これをダク四ン布に通してろ過することによって回
収する。６０％インプロパツール２／中で２回洗浄後、
沈殿物を６０℃で一夜炉乾燥し、微粉末へ粉砕する。誘
導体化アガロースは、その初期ゲル化温度（４２℃）が
１６℃に低下していた。。
実施例２ アリルグリシジルデキストランデキストラン
（分子量〜２５０，０００） ５０りを水５００ｍ／に
溶解し、一定木浴中で８０℃に加熱する。
（分子量〜２５０，０００） ５０りを水５００ｍ／に
溶解し、一定木浴中で８０℃に加熱する。
溶液を８０℃に保ち、たえずかきまぜながら１４Ｍ水酔
ルナト１１ウム中の４．４Ｍ水素化硼素ナトリウム１５
−を加える。１０分後、２５％水酸化ナトリウム溶液１
００ｍ１！を加え、続いてアリルグリシジルエーテル５
０ ｍｅ ＠ ３０分間にわたり滴加する。２時間後、
アリルグリシジルエーテルの追加２５．、／を加え、反
応を更に２時間続ける。反応混合物を６０℃に冷却し、
次にフェノール７々レインで指示されるとおりに４Ｍ酢
酸添加によって中和する。溶液を３倍量のイソプロパツ
ールに徐々に加えると白色ゲル状沈殿物が生ずる。これ
を０℃に冷却し、アルコールを傾斜して除く。凝固した
沈殿物を６０℃で水５００ｍ／に再溶解し、再び３倍量
のイソプロパツールに加え、０℃に冷却する。固化した
沈殿物を傾斜後に回収し、６０℃で一夜炉乾燥し、微粉
末まで粉砕する。
ルナト１１ウム中の４．４Ｍ水素化硼素ナトリウム１５
−を加える。１０分後、２５％水酸化ナトリウム溶液１
００ｍ１！を加え、続いてアリルグリシジルエーテル５
０ ｍｅ ＠ ３０分間にわたり滴加する。２時間後、
アリルグリシジルエーテルの追加２５．、／を加え、反
応を更に２時間続ける。反応混合物を６０℃に冷却し、
次にフェノール７々レインで指示されるとおりに４Ｍ酢
酸添加によって中和する。溶液を３倍量のイソプロパツ
ールに徐々に加えると白色ゲル状沈殿物が生ずる。これ
を０℃に冷却し、アルコールを傾斜して除く。凝固した
沈殿物を６０℃で水５００ｍ／に再溶解し、再び３倍量
のイソプロパツールに加え、０℃に冷却する。固化した
沈殿物を傾斜後に回収し、６０℃で一夜炉乾燥し、微粉
末まで粉砕する。
実施例３ ポリアクリルアミド／アリルグリシジルアガ
ロースゲルを使用する電気泳動 ３０％（重量／容量）アクリルアミド溶液を蒸留水でつ
くった。アリルグリシジルアガロース２りを沸とうする
まで加熱し、次に室温まで冷却することによって最終合
量５０ｍ／の蒸留水中に溶解４−る。１．５Ｍ ）リス
−ｕａｚ （ｐＨ８，８） 、０．４％ドデシル硫
酸ナトリウム、０．１％テトラメチルエチレンジアミン
からなる溶液５０−をアリルグリシジルアガロース溶液
に加えると、誘導体化アガロースの２％（Ｗ／Ｖ ）
溶液を生ずる。最後に、３０％アクリルアミド溶液１ｏ
−を２％アリルグリシジルアカロース溶液と過硫酸アン
モニウム１４〜とを一緒にしたもの１０−に加える。次
にこのアクリルアミド／アリルグリシジルアガロース溶
液ヲ共重合体ゲル形成用の流延装置に入れる。流延装置
は、アクエボーグ・マシン・アンド・リペア・ショップ
にューヨーク什１０ングアイランド、アクエボーグ）か
ら供給された長方形ガラス板（１５，９ｃｍ Ｘ １４
ｃｍ ）及び切込み付きガラス板からなるものであっ
た。アガロースの薄層で被覆したポリエステルフィルム
（ゲルボンド■ＦＡＧ）１枚を、親水性の側が外向きに
なるように長方形ガラス板の上に置いた。厚さ１．２麿
のプラスチック・スペーサー３個を、ガラスに支持され
たプラスチックの端にＵ字形に置き、切込み付きガラス
板をスペーサーの上に置き、ばねクランプ６個でその場
に固定した。アクリルアミド／アリルグリシジルアガロ
ース溶液の重合とゲル形成後、前のゲルの上に３％アク
リルアミド、２．６％Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアクリル
アミド、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．０２５
％テトラメチルエチレンジアミン及び過硫酸アンモニウ
ムを含有する０、１２５Ｍ ）リス−Ｈ０Ｉ！（ｐＨ６
，８）溶液１０−を成層させることによって積重ねゲル
をつくった。テフロンのクーム（ｃｏｏｎｆ）を使用し
て試料用スロットをつくり、積重ねゲルの重合後、アク
エポーク・マシン・アンド・リペア・ショップ製の電気
泳動室へガラス・カセットを入れる。分子ｉ １７，０
００ないし２００ 、０００ダルトンの範囲の蛋白質試
料を、２％ドデシル硫酸ナトリウム、１０％グリセロー
ル、５％２−メルカプトエタノール及び０．００１％ブ
ロモフェノールブルー含有の０．６２５Ｍ ）リス−Ｍ
ＣＩ／ （ｐａ ６．８ ）中で、−当り１ｒｎｙの濃
度に調製した。試料溜めに５μｌずつの試料を加えた。
ロースゲルを使用する電気泳動 ３０％（重量／容量）アクリルアミド溶液を蒸留水でつ
くった。アリルグリシジルアガロース２りを沸とうする
まで加熱し、次に室温まで冷却することによって最終合
量５０ｍ／の蒸留水中に溶解４−る。１．５Ｍ ）リス
−ｕａｚ （ｐＨ８，８） 、０．４％ドデシル硫
酸ナトリウム、０．１％テトラメチルエチレンジアミン
からなる溶液５０−をアリルグリシジルアガロース溶液
に加えると、誘導体化アガロースの２％（Ｗ／Ｖ ）
溶液を生ずる。最後に、３０％アクリルアミド溶液１ｏ
−を２％アリルグリシジルアカロース溶液と過硫酸アン
モニウム１４〜とを一緒にしたもの１０−に加える。次
にこのアクリルアミド／アリルグリシジルアガロース溶
液ヲ共重合体ゲル形成用の流延装置に入れる。流延装置
は、アクエボーグ・マシン・アンド・リペア・ショップ
にューヨーク什１０ングアイランド、アクエボーグ）か
ら供給された長方形ガラス板（１５，９ｃｍ Ｘ １４
ｃｍ ）及び切込み付きガラス板からなるものであっ
た。アガロースの薄層で被覆したポリエステルフィルム
（ゲルボンド■ＦＡＧ）１枚を、親水性の側が外向きに
なるように長方形ガラス板の上に置いた。厚さ１．２麿
のプラスチック・スペーサー３個を、ガラスに支持され
たプラスチックの端にＵ字形に置き、切込み付きガラス
板をスペーサーの上に置き、ばねクランプ６個でその場
に固定した。アクリルアミド／アリルグリシジルアガロ
ース溶液の重合とゲル形成後、前のゲルの上に３％アク
リルアミド、２．６％Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアクリル
アミド、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．０２５
％テトラメチルエチレンジアミン及び過硫酸アンモニウ
ムを含有する０、１２５Ｍ ）リス−Ｈ０Ｉ！（ｐＨ６
，８）溶液１０−を成層させることによって積重ねゲル
をつくった。テフロンのクーム（ｃｏｏｎｆ）を使用し
て試料用スロットをつくり、積重ねゲルの重合後、アク
エポーク・マシン・アンド・リペア・ショップ製の電気
泳動室へガラス・カセットを入れる。分子ｉ １７，０
００ないし２００ 、０００ダルトンの範囲の蛋白質試
料を、２％ドデシル硫酸ナトリウム、１０％グリセロー
ル、５％２−メルカプトエタノール及び０．００１％ブ
ロモフェノールブルー含有の０．６２５Ｍ ）リス−Ｍ
ＣＩ／ （ｐａ ６．８ ）中で、−当り１ｒｎｙの濃
度に調製した。試料溜めに５μｌずつの試料を加えた。
上下の貯槽は０．０２５Ｍ ） ＋）ス、０．１９２Ｍ
グリシン及び０．１％ドデシル硫酸ナトリウム（１）Ｈ
８，３）を含有した。電気泳動を２５ ｍＡｍｐｓで２
．５時間実施した。ポリアクリルアミド／アリルグリシ
ジルアガロースゲルを、ゲルボンド■ＰＡＧ ７’ ５
スチック支持体に固く結びついたガラス板の間から除
いた。これを２５％イソプロパツールを４５％メタノー
ル、４５％酢酸の溶液中で８時ＭＭ染し、次に７％酢酸
、５％グリセロ〜ルノ溶液に更に２時間入れた。このあ
と、蛋白質帯は見えるようになり柔軟な乾燥フィルムが
形成されるまでゲルを直接に炉に６５℃で入れた。この
乾燥ゲルは収縮も歪みもせずに明確な蛋白質帯のパター
ンを保ち、永久記録として実験ノート中に保たれた。
グリシン及び０．１％ドデシル硫酸ナトリウム（１）Ｈ
８，３）を含有した。電気泳動を２５ ｍＡｍｐｓで２
．５時間実施した。ポリアクリルアミド／アリルグリシ
ジルアガロースゲルを、ゲルボンド■ＰＡＧ ７’ ５
スチック支持体に固く結びついたガラス板の間から除
いた。これを２５％イソプロパツールを４５％メタノー
ル、４５％酢酸の溶液中で８時ＭＭ染し、次に７％酢酸
、５％グリセロ〜ルノ溶液に更に２時間入れた。このあ
と、蛋白質帯は見えるようになり柔軟な乾燥フィルムが
形成されるまでゲルを直接に炉に６５℃で入れた。この
乾燥ゲルは収縮も歪みもせずに明確な蛋白質帯のパター
ンを保ち、永久記録として実験ノート中に保たれた。
実施例４ ポリアクリルアミド／アリルグリシジルデキ
ストランを使用する電気泳動 実施例３に記載のとおりに電気泳動を行なうが、但しポ
リアクリルアミド／アリルグリシジルアガロースゲルを
ポリアクリルアミド／アリルグリシジルデキストランゲ
ルで置き代える。このゲルは１５％アクリルアミ ド、
０．３７５Ｍ ）リス−Ｈａｅ（ｐＨ８，８）中の（実
施例２からの）５％アリルグリシジルデキストラン、０
．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．０２５％テトラメ
チルエチレンジアミン及び過硫酸アンモニウムからなっ
ていた。電気泳動、染色、除染後、６５℃で直接の炉乾
燥によってゲルボンド■ＦＡＧ支持体上の薄いフィルム
までゲルを乾燥した。
ストランを使用する電気泳動 実施例３に記載のとおりに電気泳動を行なうが、但しポ
リアクリルアミド／アリルグリシジルアガロースゲルを
ポリアクリルアミド／アリルグリシジルデキストランゲ
ルで置き代える。このゲルは１５％アクリルアミ ド、
０．３７５Ｍ ）リス−Ｈａｅ（ｐＨ８，８）中の（実
施例２からの）５％アリルグリシジルデキストラン、０
．１％ドデシル硫酸ナトリウム、０．０２５％テトラメ
チルエチレンジアミン及び過硫酸アンモニウムからなっ
ていた。電気泳動、染色、除染後、６５℃で直接の炉乾
燥によってゲルボンド■ＦＡＧ支持体上の薄いフィルム
までゲルを乾燥した。
出願人 エフ エム シー コーポレーション代理
人 弁理士 佐々井弥太部 （ほか１名）
人 弁理士 佐々井弥太部 （ほか１名）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 分子量５ 、０００ないし１０６ダルトンをもつ
アクリルアミドと多糖類樹脂との共重合体により特徴づ
けられ、上記樹脂中の少なくともヒドロキシル水素のい
くらかは共重合体を形成するために触媒の存在下にアク
リルアミドと共重合できる２〜１２個の炭素原子のエチ
レン不飽和基で置き換えられている、電気泳動ゲル組成
物。 ２、 エチレン不飽和基が脂肪族炭化水素及びアシル基
からなる群から選ばれることを特徴とする特許請求の範
囲第１項の組成物。 ３、 多糖類がアガロースであることを特徴とする特許
請求の範ＦＲＪ第１項の組成物。 ４、 多糖類がデキストランであることを特徴とする特
許請求の範囲第１項の組成物。 ５、 共重合体がアクリルアミドとアリルグリシジルア
ガロースとの共重合体であることを特徴とする特許請求
の範囲第１項の電気泳動ゲル組成物。 ６、 共重合体がアクリルアミドとアリルグリシジ物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US35044682A | 1982-02-19 | 1982-02-19 | |
| US350446 | 1994-12-06 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58143261A true JPS58143261A (ja) | 1983-08-25 |
| JPH0127383B2 JPH0127383B2 (ja) | 1989-05-29 |
Family
ID=23376761
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58008853A Granted JPS58143261A (ja) | 1982-02-19 | 1983-01-24 | 電気泳動ゲル材料としてのアクリルアミドと多糖類樹脂との共重合体 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0087995B1 (ja) |
| JP (1) | JPS58143261A (ja) |
| CA (1) | CA1206666A (ja) |
| DE (1) | DE3380450D1 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60235819A (ja) * | 1984-04-27 | 1985-11-22 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | 電気泳動ゲル材料の放射線による製法 |
| JPS6128512A (ja) * | 1984-06-28 | 1986-02-08 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | 多孔性電気泳動ゲル生成物およびその製造方法 |
| JPH087187B2 (ja) * | 1989-08-03 | 1996-01-29 | エフ エム シー コーポレーション | 低電気浸透アガロース |
| JP2004501994A (ja) * | 2000-06-30 | 2004-01-22 | アンスティテュ キュリィ | 吸着及び／又は電気浸透現象を最小限化する表面処理溶液 |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4746551A (en) * | 1985-11-20 | 1988-05-24 | Micro-Map, Inc. | Rehydratable polyacrylamide gels |
| US5578180A (en) * | 1994-03-31 | 1996-11-26 | Novel Experimental Technology | System for PH-neutral longlife precast electrophoresis gel |
| US6143154A (en) * | 1994-03-31 | 2000-11-07 | Novex | System for PH-neutral stable electrophoresis gel |
| US6783651B1 (en) | 1994-03-31 | 2004-08-31 | Invitrogen Corporation | System for pH-neutral stable electrophoresis gel |
| US6228998B1 (en) | 1994-07-22 | 2001-05-08 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Amino spacered glycosaminoglycan derivatives and their use in copolymerization with acrylamide |
| US5618876A (en) * | 1995-06-05 | 1997-04-08 | National Starch And Chemical Investment Holding Corporation | Latex binders and coatings containing polymers derived from polymerizable saccharide monomers |
| US5789578A (en) * | 1996-01-11 | 1998-08-04 | Massey University | Methods for the preparation of resins with ligands attached thereto through a linking group comprising sulfide, sulfoxide or sulfone functionality |
| FR2794758A1 (fr) * | 1999-06-11 | 2000-12-15 | Roussy Inst Gustave | Gels de polyacrylamide contenant en outre un polymere hydrophile |
| SE9903748D0 (sv) * | 1999-10-19 | 1999-10-19 | Amersham Pharm Biotech Ab | Method and kit for the manufacture of separation gels |
| US8975328B2 (en) | 2000-06-30 | 2015-03-10 | Institute Curie | Non-thermosensitive medium for analyzing species in a channel and for minimizing adsorption and/or electroosomosic phenomena |
| FR2811083B1 (fr) | 2000-06-30 | 2002-11-22 | Inst Curie | Milieu liquide non-thermosensible pour l'analyse d'especes au sein d'un canal |
| US7622028B2 (en) | 2003-05-09 | 2009-11-24 | Life Technologies Corporation | Solution phase electrophoresis device, components, and methods |
| US7781173B2 (en) | 2003-09-25 | 2010-08-24 | Life Technologies Corporation | Homogeneous populations of molecules |
| KR100797779B1 (ko) * | 2006-11-22 | 2008-01-24 | 주식회사 삼안 | 조력발전소 수차구조물 및 수문구조물의 어도 |
| WO2022243533A1 (en) | 2021-05-20 | 2022-11-24 | Nouryon Chemicals International B.V. | Manufactured polymers having altered oligosaccharide or polysaccharide functionality or narrowed oligosaccharide distribution, processes for preparing them, compositions containing them, and methods of using them |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2297879A1 (fr) * | 1975-01-14 | 1976-08-13 | Sogeras | Procede de preparation de plaques sechees rehydratables contenant de l'agarose ou de la gelose |
| SE420838B (sv) * | 1975-12-12 | 1981-11-02 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Dextranderivatgel i partikelform for separationsendamal |
| DE2826895A1 (de) * | 1978-06-19 | 1980-01-03 | Sebia Sa | Platten fuer die elektrophoretische trennung von lipoproteinen und verfahren zu ihrer herstellung |
| US4319975A (en) * | 1980-10-20 | 1982-03-16 | Fmc Corporation | Derivatized agarose and method of making and using same |
-
1983
- 1983-01-05 CA CA000418925A patent/CA1206666A/en not_active Expired
- 1983-01-24 JP JP58008853A patent/JPS58143261A/ja active Granted
- 1983-02-14 DE DE8383400311T patent/DE3380450D1/de not_active Expired
- 1983-02-14 EP EP19830400311 patent/EP0087995B1/en not_active Expired
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60235819A (ja) * | 1984-04-27 | 1985-11-22 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | 電気泳動ゲル材料の放射線による製法 |
| JPS6128512A (ja) * | 1984-06-28 | 1986-02-08 | イー・アイ・デュポン・ドゥ・ヌムール・アンド・カンパニー | 多孔性電気泳動ゲル生成物およびその製造方法 |
| JPH087187B2 (ja) * | 1989-08-03 | 1996-01-29 | エフ エム シー コーポレーション | 低電気浸透アガロース |
| JP2004501994A (ja) * | 2000-06-30 | 2004-01-22 | アンスティテュ キュリィ | 吸着及び／又は電気浸透現象を最小限化する表面処理溶液 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0127383B2 (ja) | 1989-05-29 |
| EP0087995B1 (en) | 1989-08-23 |
| EP0087995A1 (en) | 1983-09-07 |
| CA1206666A (en) | 1986-06-24 |
| DE3380450D1 (en) | 1989-09-28 |
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