JPS58134099A - アミノ配糖体抗生物質の精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はアミノ配糖体抗生物質の精製法に関するもので
ある。従来、この種の抗生物質の精製には、主としてカ
ルボン酸基の如き弱酸性基あるいはスルホン酸基の如き
強酸性基を有するイオン交換樹脂が用いられ、主として
アンモニア水、ピリジン水等の塩基性水で溶離する方法
が通常とられている。しかし、最近、水溶性の塩基性ア
ミノ配糖体抗生物質でろって、塩基性条件下では不安定
である抗生物質が見出され、これに前記の如き従来の精
製法を適用すると、必ずしもうまくいかない。

それで精製法について研究がされ１例え＃ｉ特開昭５６
−６４５９７号公報には、培養Ｐ液から抗生物質を合成
吸着剤やイオン交換樹脂などで吸着、溶出したのち、セ
ファデックス等のゲル濾過剤を用いて精製する方法が開
示しである。しかし、このように精製に七ファデックス
等のゲル濾過剤を用いる方法は、高価なゲル濾過剤が多
量に必要であ夛かつ作業性の面からも工業生産には不向
きである。を九その後の研究でこの種の抗生物質は合成
吸着剤への吸着力が必ずしも強くないことが判明した０
本発明者らは、これらの問題点を解決するため鋭意検討
し工業的に有利な精製法を見い出し本発明を完成させ友
。

本発明の要旨とするとζろ、は、アミノ配糖体抗生物質
を含有する培讐液或いｊＦ粗粗精液液一般式Ｒ−８０ｓ
ｌ（（式中乳はアルキル！・；アルケニル基、アリール
アルキル基、アルキル置換アリール基、アルケニル置換
アリール基又はアルコキシル基を示す）で表わされる水
溶性強酸性化合物又はその水溶性塩を添加してアミノ配
糖体抗生物質と反応させ、生成されたばアートイオン体
を含む溶液を非イオン型の吸着樹脂あるいは活性炭で処
理して該抗生物質と前記の強酸性化合物との塩を吸着さ
せ、次いでこれを水または含水溶剤にて溶離することを
特徴とするアミノ配糖体抗生物質の精製法にある。

本発明について更に説明すると、培養ｐ液又は粗製溶液
の形の、アミノ配糖体抗生物質の水溶液に一般式Ｒ−８
Ｏ，Ｈ（式中、Ｒはアルキル基１％に中級アルキル基・
、好ましくは炭素数６〜１４のアルキル基；アルケニル
基、特に中級アルケニル基、好ましくは炭素数′５〜１
４のアルケニル基；アリールアルキル基、好ましくはベ
ンジル基又はフェニルエチル基；アルキル置換アリール
基、特に炭素数１〜６のアルキル置換基をもつフェニル
基、ハ 好ましくは１１−／チルフェニル基：アルケニル置換ア
リール基、−・ｌ−炭素数１〜６のアルケニル置換基を
もつフェニル基、鼾ましくはビニルフェニル基；あるい
はアルコキシ基、％忙中級アルコキシ基、好ましくは炭
素数３〜１４のアルコキシル基である）で示される水溶
性のスルホン酸化合物又は硫酸化合物又はこれらの水溶
性塩、特にアルカリ金属塩、好ましくはナトリウム又は
力ｌ）ラム塩を添加する。このように添加され九前記一
般式の酸化合物（以下、単にキャリアと言うことがある
）は、それの酸基（−８０１Ｈ）が反応してアミノ配糖
体抗生物質のアミノ基との間にベアートイオンを形成す
る。またその酸化合物の基（２）は疎水性であって非イ
オン型吸着樹脂又は活性炭に吸着され易い性質を示す。

このように形成され九にアートイオンは全体として疎水
性が増し非イオン型吸着樹脂、あるいは活性炭によく吸
着するので、このことを利用して本発明の方法では、他
の不純物との分離が効率良く達成できる。

本発明の方法において使用される前記の一般式Ｒ−８０
ｓＨの酸化合物の好適な例には、１−プロ／センスルホ
ン酸、１−ブタンスルホン［１−Ｐ！”ンスルホン酸、
１−ヘプタンスルホン酸；メタリルスルホン酸（ＣＴｉ
５　＝Ｃ（ＣＨｓ　）　−ＣＨｓ　−８ＯｓＨ）　：ベ
ンジルスルホン酸；ｐ−トルエンスルホン酸；ｐ−スチ
レンスルホン酸；ドデシル硫酸 （ＣＨｓ（ＣＨｓ）ｔｅｃＨｔ−０−８０ｓＨ）又はこ
れらのナトリウム又はカリウム塩がある。

本発明の方法で用いるキャリア、即ち式Ｒ−８ＯｓＨの
酸化合物又はこれの塩の添ｍｔは、精製されるアミノ配
糖体抗生物質のアミノ基に対し等モルであれば良いが、
実施Ｋｆｉつては過剰量加えるのが好都合である。

本発明の方法においては、前記の一般式の酸化合物又は
これの塩（キャリア）をアミノ配糖体抗生物質と作用さ
せて形成され九ハアードイオン体は、次いで非イオン製
剤着剤樹脂あるいは活性炭に吸着され、その後、この吸
着したはアートイオン体は水、あるいは好ましくは含水
メタノール、含水アセトン等の含水有機溶媒によって溶
離される。この結果、抗生物質は一般式Ｒ−８Ｏ，Ｈの
酸化合物との塩の形で回収される。

本性に於ける吸着樹脂の選択、キャリアの選択は精製す
るアミノ配糖体抗生物質の種類によって異るし、また精
製の目的、程度によっても異るものである、精製対象と
なるアミノ配糖体抗生物質Ｋｔｉ例えばフオーチきシン
、ダクチミシン等に代表される。シューＶジサッカライ
ド抗生物質、並びにカナマイシン、ゲエンタミシン等に
代表されるシュードトリサツカライド抗生物質があるが
。

その他のアミノ配糖体抗生物質も利用できる。本法は、
塩基性条件下で不安定なアミノ配糖体抗生物質に好適に
応用できる。

又吸着樹脂としては、ダイヤイオンＨＰ−２０、）ＩＰ
−１０：６るいはアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−
４の如きスチレン−ジビニルベンゼン共重合体樹脂、Ｘ
丁−２トヨパール、活性炭等で代表される非イオン型の
吸着剤が全て使用可能である。

好ましくは、ＩＰ　−２０、Ｈ’Ｐ　−１０，ＸＡＤ−
２が好適である。

例えば、塩基性条件下で不安定であるダクチきシンを精
製するにあたっては□１６．従来の精製法による場合、
即ち弱酸性カチオン交換樹脂に吸着させ、希アンモニア
水で溶出する精製法による場合では、ダクチミシンの有
するＮ−ホルムイミドイル基め不適当であるが本発明の
方法によれば有利に精製できる。

本発明の方法においてダクチミシンを精製するに当って
は、特に１−Ａンタンスルホン酸ナトリウム又はｐ−）
ルエンスルホン酸ナトリウムをキャリアとして用いると
、吸着樹脂、活性炭への吸着がよく、さらに溶離は１０
〜ＳＯ４のメタノール水で効率よ〈実施することができ
るので、好適である。本法によれば通常のアミノ酸類と
ダクチミシンとは良好な分離を示す。

本発明の方法では、溶離工程の後には、アミノ配糖体抗
生物質はキャリアとして用いた酸化合物との塩として単
離される。この塩を別の所望の塩（例えば硫酸塩、ＲＣ
４塩など）に誘導するには。

通常の操作でダイヤイオンＷＫ−１０８（Ｎａ）や、ア
ンバーライトＣＧ−５０（Ｎａ”）などの樹脂に吸着さ
せた後に所望の酸で溶離すればよい。また脱塩が必要な
場合には公知の方法を適用すれば良い。

本発明は前述の如く安価で大量の精製が可能であシ、工
業的に有利な方法である。また１本発明の方法における
如くキャリアとして用いたスルホン酸化合物又は硫酸化
合物の付加（×アートイオンの形成）により、抗生物質
の合成吸着剤への吸着力が増し、不純物の分離が容易に
なることは予想外のことである。さらに従来の精製法で
必要とされた脱塩工程なども少くなるなどの利点が明ら
かになった。

本発明の方法で得られる精製収率はダクチミシン精製の
場合について先行技術（特開昭５５−６４５９７号）に
比し同等ないしはそれをうわまわる結果が得られた。

以丁に実施例により本発明を説明するが本発明は何らこ
れに限定されるものではない。

実施例１ 特開昭５５−６２０９９号公報の実施例に従って培養し
て得られたダクチミシンの培養Ｐ液をイオン交換樹脂、
アンバーライトＩＩＲＣ−５０（Ｎａ）で吸着処理し、
０．５規定の塩酸で溶離する。この溶離液を苛性ソーダ
液で−４，０に調斃した溶液（ダクチミシン約７００μ
ｇ／１１１含有）４．５ｊ！に４．５ｔの、−／！：ン
タンスルホン酸ナト１）ラムを加える。よく攪拌後、そ
の反応溶液を吸着樹脂夕゛イヤイオンＨＰ　−２０の４
５０ｄのカラムに通しダクチミシンの１−．２ンタンス
ルホン酸塩を吸着させる。このとき、共存する不純物と
しての大部分のアミノ酸は吸着されずに吸着残液中に残
存する。

ダイヤイオンＨＰ−２０のカラムをよく水洗したのち１
０％のメタノール水で展開、溶離し１０〇−分画で溶離
液を採取する。２０〜３５の画分にタフチミンの１−は
ンタンスルホン酸塩が溶出され、その収率は約７０％で
あった。

実施例２ 約１００μｇ／ａｄのダクチミシンを含有するアンバー
ライトＩ　ＲＣ−５０（Ｎａ”）の塩酸溶離液１ｊに対
しテ、　５．５Ｐｆ）ＩＩ　−）ルエンスルホン酸ナト
リウムを加えよく攪拌した。得られた反応液をダイヤイ
オンＨＰ−２０の１００−のカラムに通し水洗する１次
に５％メタノール水約７００１１１で予洗する。その後
、１０−メタノール本釣８５０−でダクチミシンのｐ−
）ルエンスルホン酸塩を溶離し、この溶離液を約ｓｏｏ
ｍｔで減圧濃縮しメタノールを除く、この濃縮液をダイ
ヤイオンＷＫ−１０８（Ｎａ”）の１０−のカラムにか
けダクチミシンを吸着させる。十分に水洗後、α５ＮＯ
硫酸で溶離し、硫酸塩とする。過剰の硫酸は、溶離液を
約１５Ｍに濃縮後、ダイヤイオンＷＡ　−１０（ＯＨ”
）で−を５．０に調整するこ＆によって除き、直ちに１
０ｊｌｌＪの活性炭カラムで脱塩を兼ねたクロマトグラ
フィーを行う。水で展開し活性部を集め凍結乾燥すると
１１６雫の高純変のダクチミシン硫酸塩が得られた。収
率約８０チ。

実施例３ カナマイシンＡ１５Ｐを含有する溶液ｚ５ｊを１０規定
塩酸にてＰＨ４，０に調整し、これに１２．８ｔｏｐ−
トルエンスルホン酸ナトリウムヲ加工、その反応溶液を
５０ローの一：着樹脂アンバーライ）　ＸＡＤ−２カラ
ムに通してカナマイシンＡｏｐ−トルエンスルホン酸塩
を吸着させる。水で展開するとｓｏｏｍから５ｊにかけ
て抗菌活性を有する物質が溶出されてくる。回収率は抗
菌活性比で８２−であった。

実施例４ 実施例３で述べた反応溶液をダイヤイオンＨＰ−２０の
５００１のカラムに通し吸着を行う、吸着後２５ｊの水
で洗い次いで１０チのメタノール水２！で溶離を行つ九
とζろ、抗菌活性比で８９−のカナマイシンＡを回収す
ることが出来た。

実施例５ 粗ダクチミシン硫酸塩１ｉＰを約５０（ｌｌｊの水に溶
離し、これＫｐ−）ルエンスルホン酸ナトリウム２０ｊ
’′ｅ加え低温で攪拌した。その反応溶液をダイヤイオ
ンＨＰ−２０の８０１１Ｊのカラムに通す。

これを約２５０−の水で洗った後、１５％のメタノール
水で溶離し１００−づつ分画すると４〜６番目の７ラク
シ！、ンにダクチミシンのｐ−トルエ・：：、：・： ンスルホン酸塩が溶出される。回収率は約７５−であっ
たが、組物質の着色は除かれ、純度も約２０％の上昇が
みられた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｔ　アミノ配糖体抗生物質を含有する培養液或いは粗精
   製液に一般式Ｒ−８ＯｓＨＣ式中８はアルキル基、アル
   ケニル基、アリールアルキル基、アルキル置換子り−ル
   基、アルケニル置換アリール基又はアルコキシル基を示
   す）で表わされる水溶性強酸性化合物又はその水溶性塩
   を添加してアミノ配糖体抗生物質と反応させ、生成され
   たベアートイオン体を含む溶液を非イオン型の吸着樹脂
   あるいは活性炭で処理して該抗生物質と前記の強酸性化
   合物との塩を吸着させ、次いでこれを水または含水溶剤
   にて溶離するととを特徴とするアミノ配糖体抗生物質の
   精製法。 ２　アミノ配糖体抗生物質はＮ−ホルムイミドイル基を
   含有するものである徴許請求の範囲第１項記載の方法。 五　強酸性水溶性化合物は１−はンタンスルホン酸、ｐ
   −トルエンスルホン酸、ｐ−スチレンスルホン酸又はメ
   タリルスルホン酸あるいはこれらの酸のアルカリ金属塩
   である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、強酸性水溶性化合物はドデシル硫酸アルカリ金属塩
   である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５、強酸性水溶性化合物は、精製すべきアミノ配糖体抗
   生物質のモル量とその１分子中のアミノ基の数との積の
   値に等しいモル量、又はこれよりやや過剰のモル量で添
   加される特許請求の範囲第１項記載の方法。