JPS5813389A - 細胞培養用培地 - Google Patents
細胞培養用培地Info
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- JPS5813389A JPS5813389A JP56111296A JP11129681A JPS5813389A JP S5813389 A JPS5813389 A JP S5813389A JP 56111296 A JP56111296 A JP 56111296A JP 11129681 A JP11129681 A JP 11129681A JP S5813389 A JPS5813389 A JP S5813389A
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- JP
- Japan
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- phospholipid
- medium
- cells
- cell
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はエタノールアミンおよび/またはホスホリピド
を含有する細胞培養用培地に関する。
を含有する細胞培養用培地に関する。
さらに本発明は該培地を用いる動物細胞または動物由来
の細胞および生理活性物質の製造法に関する。
の細胞および生理活性物質の製造法に関する。
従来、動物細胞たとえば白血球、線維芽細胞、リンパ芽
球様細胞、ハイブリドーマならびにバイブリド細胞など
を培養して、インシュリン、インターフェロン、成長ホ
ルモン、抗体などの生理活性物質を生産する暉みがなさ
れており、これら細胞の大量培養が種□々試みられてい
る。
球様細胞、ハイブリドーマならびにバイブリド細胞など
を培養して、インシュリン、インターフェロン、成長ホ
ルモン、抗体などの生理活性物質を生産する暉みがなさ
れており、これら細胞の大量培養が種□々試みられてい
る。
動物細胞などの培養にφ、1卆っては、はとんどの場合
培地に血清を添加することが必要である。
培地に血清を添加することが必要である。
血清は子牛あるいは牛胎児などから得られるものが使用
されているが、これらの供給には制限があり、細胞の大
量培養を困難にしている。
されているが、これらの供給には制限があり、細胞の大
量培養を困難にしている。
従って、血清を添加しなくとも細胞の増殖を行なうこと
ができる培地の開発が強く望まれている。
ができる培地の開発が強く望まれている。
本発明者らは、かかる無血清培地を得る目的で研究を重
ねた結果、通常の動物細胞の培養に用いられている基礎
培地(血清を含まない)にエタノールアミンを添加した
培地を用いれば血清を添加した培地と同等またはそれ以
上の増殖効果が得られること、さらにエタノールアミン
にホスホリピドを添加すれは液体回転培養においても同
様な効果が得られることを見出し本発明を完成するに至
った。
ねた結果、通常の動物細胞の培養に用いられている基礎
培地(血清を含まない)にエタノールアミンを添加した
培地を用いれば血清を添加した培地と同等またはそれ以
上の増殖効果が得られること、さらにエタノールアミン
にホスホリピドを添加すれは液体回転培養においても同
様な効果が得られることを見出し本発明を完成するに至
った。
以1本発明の詳細な説明する。
本発明においては、エタノールアミンおよび/またはホ
スホ、1す、ビドを含有する細胞培養用培地を提供する
。””+1.発明の細胞培養用培地は通常の動物細胞の
培養に用いられる基礎培地にエタノールアミンおよび/
またはホスホリピドを添加した培地である。
スホ、1す、ビドを含有する細胞培養用培地を提供する
。””+1.発明の細胞培養用培地は通常の動物細胞の
培養に用いられる基礎培地にエタノールアミンおよび/
またはホスホリピドを添加した培地である。
本発明培地の基礎培地としては、一般の動物細胞の培養
に用いられるものであればいかなるものも用いることが
できる。具体的に好適な基礎培地の例としては、])u
lbeccoβyodified Eaglemedi
um (D M 112と略記する)、F−/2、RP
M I−/ t III、Eagle培地などの合成培
地〔これらは「組織培養」、朝食書店(lりj/第!刷
)、中井準之助ら編集、7〜−2≠頁に目ピ戟されてい
セレニウム(16−11〜/にl−”M)、ピルビン酸
(O,t−jmM)、チミジン(/X10−’〜/x1
0−”M)、ヒボキサンチン(/X /F’ 〜/X
io−’M)なとを添加した培地も基礎培地として用い
ることができる。さらにDME/F−/λ/RPMI−
#≠Oとピルビン酸、チミジンおよびヒポキサンチンの
混合物(/:/ニー2)の培地も用いることができる。
に用いられるものであればいかなるものも用いることが
できる。具体的に好適な基礎培地の例としては、])u
lbeccoβyodified Eaglemedi
um (D M 112と略記する)、F−/2、RP
M I−/ t III、Eagle培地などの合成培
地〔これらは「組織培養」、朝食書店(lりj/第!刷
)、中井準之助ら編集、7〜−2≠頁に目ピ戟されてい
セレニウム(16−11〜/にl−”M)、ピルビン酸
(O,t−jmM)、チミジン(/X10−’〜/x1
0−”M)、ヒボキサンチン(/X /F’ 〜/X
io−’M)なとを添加した培地も基礎培地として用い
ることができる。さらにDME/F−/λ/RPMI−
#≠Oとピルビン酸、チミジンおよびヒポキサンチンの
混合物(/:/ニー2)の培地も用いることができる。
エタノールアミンおよび/lたはホスホリピドを基礎培
地に添加して本発明培地を製造する(j) ことができる。
地に添加して本発明培地を製造する(j) ことができる。
本発明の培地に添加するエタノールアミンの濃度は1〜
3071Mが好適である。
3071Mが好適である。
また本発明の培地に添加するホスホリピドとしてはレシ
チン、ホスファチジル・エタノールアミン、ホスファチ
ジル・イノシトール、ホスファチジン酸、リゾレシチン
などを単独または組合わせて用いる。実用的にはこれら
の混合物である市販の大豆ホスホリパーゼ、卵黄ホスホ
リパーゼなどを用いることができる。
チン、ホスファチジル・エタノールアミン、ホスファチ
ジル・イノシトール、ホスファチジン酸、リゾレシチン
などを単独または組合わせて用いる。実用的にはこれら
の混合物である市販の大豆ホスホリパーゼ、卵黄ホスホ
リパーゼなどを用いることができる。
好適な一例として市販の゛” Boy beanp
hospholipid ” (牛丼化学社製)をクロ
ロホルムに溶解し、アセトン沈殿を3(ロ)繰返して中
性脂肪酸および遊離脂肪酸を除去した下記組成を有する
11%大豆ホスホリピドがあげられる。
hospholipid ” (牛丼化学社製)をクロ
ロホルムに溶解し、アセトン沈殿を3(ロ)繰返して中
性脂肪酸および遊離脂肪酸を除去した下記組成を有する
11%大豆ホスホリピドがあげられる。
(j)
第1表 精製ホスホリピドの成分
使用するホスホリピドの濃度は、適用する細胞の種類、
基礎培地、培養条件などによって変るが、通常は全ホス
ホリピドとして1o−io。
基礎培地、培養条件などによって変るが、通常は全ホス
ホリピドとして1o−io。
扉/ rxl程度でよい。
本発明の培地は、白血球、線維芽細胞、リンパ芽球細胞
、He:ta細胞、Chinesa namater
0vary(CHO)細胞、Baby Hamster
Kidney(BHK)細胞などの動物細胞のみなら
ず、Co1on carcinom&などのヒト由来の
腫瘍細胞ヤ1声養に用いることができる。本発明の培地
は種々のミエローマと正常牌細1(B−IJンパ球なと
)が融合して生成するハイブリドーマ細胞ならびに二種
のミニ(7) ローマが融合して生成するハイブリッド細胞の培養に最
も好適に用いられる。
、He:ta細胞、Chinesa namater
0vary(CHO)細胞、Baby Hamster
Kidney(BHK)細胞などの動物細胞のみなら
ず、Co1on carcinom&などのヒト由来の
腫瘍細胞ヤ1声養に用いることができる。本発明の培地
は種々のミエローマと正常牌細1(B−IJンパ球なと
)が融合して生成するハイブリドーマ細胞ならびに二種
のミニ(7) ローマが融合して生成するハイブリッド細胞の培養に最
も好適に用いられる。
ハイブリドーマの例としては次のものが例示される。
MPC//XBL、 RDP 4tJ/20. SF3
.7+MC’B/、MCB弘、MCBj、MCB/7゜
MC’B/J’、MB4’、MBr、N−8,/、N−
8,3゜j3−7.3/3.T//D7c、2.ROB
j7..2./。
.7+MC’B/、MCB弘、MCBj、MCB/7゜
MC’B/J’、MB4’、MBr、N−8,/、N−
8,3゜j3−7.3/3.T//D7c、2.ROB
j7..2./。
ABMλOコj
ハイブリッド細胞の例としては次のものが例示される。
MPC//XW、27P/、MPC//XW、271゜
MP C/ / XW−2j /、 / a + M
P CX W−27/−2これらハイプリドーマおよび
ハイブリッド細胞は繊紙培養7(21,36−jり、/
りざlに記載の方法で製造するどとができ、またそれら
は、11:仙 ソーク・インスチッ7 ト(8alk In5titu
te(La JOlla 、 Ca1ifornia、
) ] に保存されている。
MP C/ / XW−2j /、 / a + M
P CX W−27/−2これらハイプリドーマおよび
ハイブリッド細胞は繊紙培養7(21,36−jり、/
りざlに記載の方法で製造するどとができ、またそれら
は、11:仙 ソーク・インスチッ7 ト(8alk In5titu
te(La JOlla 、 Ca1ifornia、
) ] に保存されている。
エタノールアミンを添加した本発明培地は固体培養に用
いた場合は従来の血清添加培地と同(r> 等またはそれ以上の増殖促進効果を示すが、液体回転培
養に用いた場合はその効果がかなシ劣る。しかるにエタ
ノールアミンにホスホリパーゼを添加した本発明培地は
液体回転培養に用いた場合も優れた効果を示す。従って
、エタノールアミンとホスホリパーゼを含む本発明培地
は動物細胞の大量培養に特に適している。
いた場合は従来の血清添加培地と同(r> 等またはそれ以上の増殖促進効果を示すが、液体回転培
養に用いた場合はその効果がかなシ劣る。しかるにエタ
ノールアミンにホスホリパーゼを添加した本発明培地は
液体回転培養に用いた場合も優れた効果を示す。従って
、エタノールアミンとホスホリパーゼを含む本発明培地
は動物細胞の大量培養に特に適している。
本発明培地は動物細胞などの培養に通常用いられる培地
と同様に使用し、生理活性物質の生産に利用することが
できる。
と同様に使用し、生理活性物質の生産に利用することが
できる。
以下に実施例をあげて本発明の詳細な説明する。
実施例t
マウスのミエローマ(MPC//)(!:マウスB−リ
ンパ球(BALB/c)が融合して生成したハイプリド
ーマ(MPC//XBL)(製造法は組織培養Vo17
(21e p j j ” jり、/りri。
ンパ球(BALB/c)が融合して生成したハイプリド
ーマ(MPC//XBL)(製造法は組織培養Vo17
(21e p j j ” jり、/りri。
ニューサイエンス社参照)の≠X / 0 ’ 個/
mlを(A)ITES培地(インシュリン/ pfAi
+ )ランスフェリン−Opf/lug 、エタノ
ールアミン(り) 一〇pM+セレニウム/ 0−” Mいずれも最終濃度
)を合成培地DME/F/2(/:/)に添加した培地
(pHA、t ) j Omg、および(B)工TES
培地にt o ny7&J (最終濃度)の前記精製ホ
スホリピドを添加した培地(以下PITESjQ地とい
う)をDME/F/J(/ : / )に象加した培地
jOTdに植え込む。
mlを(A)ITES培地(インシュリン/ pfAi
+ )ランスフェリン−Opf/lug 、エタノ
ールアミン(り) 一〇pM+セレニウム/ 0−” Mいずれも最終濃度
)を合成培地DME/F/2(/:/)に添加した培地
(pHA、t ) j Omg、および(B)工TES
培地にt o ny7&J (最終濃度)の前記精製ホ
スホリピドを添加した培地(以下PITESjQ地とい
う)をDME/F/J(/ : / )に象加した培地
jOTdに植え込む。
t Orpm で培地を攪拌し、j%co□−灯係空気
を301/時間の割合で通気しつつ37℃でグ日間培養
を行なう。
を301/時間の割合で通気しつつ37℃でグ日間培養
を行なう。
対照としてDME/F/、2(i : i )に小ウシ
の血清/θ係を硲加した培地を用いる以外は上記と同様
に培養を行なう。
の血清/θ係を硲加した培地を用いる以外は上記と同様
に培養を行なう。
得られる結果は給コ表に示すとおシである。
紀λ表
(to)
PITES培地中での細胞の増殖速度は培養λ口重まで
は血清培地のそれと比べてやや低いが以後の速度はむし
ろ血清培地のそれよりも高い。このことは細胞の生理状
態がいったんPITES培地に順応したならば、この培
地は血清培地よりも優れていることを示している。
は血清培地のそれと比べてやや低いが以後の速度はむし
ろ血清培地のそれよりも高い。このことは細胞の生理状
態がいったんPITES培地に順応したならば、この培
地は血清培地よりも優れていることを示している。
なおPITES培地で30日間以以上式(約20世代)
培養しても増殖速度に変化がなかった。
培養しても増殖速度に変化がなかった。
このことはハイプリドーマ細胞をPITES培地で永続
的に継代培養することが可能であることを示している。
的に継代培養することが可能であることを示している。
実施例λ
大豆ホスホリピドに替えて、卵黄ホスホリピド〔卵黄リ
ン脂質(卵黄)(牛丼化学社製)をクロロホルムに溶解
し、アセトンを添加しアセトン沈殿を集める操作を3回
操返し、中性脂肪。
ン脂質(卵黄)(牛丼化学社製)をクロロホルムに溶解
し、アセトンを添加しアセトン沈殿を集める操作を3回
操返し、中性脂肪。
脂肪酸、ステロイドなどe、、除いたもの〕j (1)
n totalを用いる以外は実施例/と同様にハイプ
リドーマ細胞の培養を行なう。その結果<1X/(7S
(li値のハイプリドーマ細胞が得られた。
n totalを用いる以外は実施例/と同様にハイプ
リドーマ細胞の培養を行なう。その結果<1X/(7S
(li値のハイプリドーマ細胞が得られた。
実施例3
精製大豆ホスホリピドの濃度を変えて実施例1と同様に
培養を行なった結果第3表に示す結果が得られた。
培養を行なった結果第3表に示す結果が得られた。
第3表
※植込細胞数λ×/θ’/ml
実施例仏
DME/F/2(/ :/)培地にインシュリン/ p
y/nrb 、 )ランスフェリy 20 pffil
、 エタノールアミン−2’ OpM +セレニウ
ム10−8Mf加1・1゜ えて本発明培1m1..とする。
y/nrb 、 )ランスフェリy 20 pffil
、 エタノールアミン−2’ OpM +セレニウ
ム10−8Mf加1・1゜ えて本発明培1m1..とする。
実施例j
DME/F/、2(/ : / )培地にインシュリン
/μyAl + )ランスフェリンコ’ P f/rn
i rエタノールアミン、20 pM 、セレニウム/
θ Mおよび前記精製大豆ホスホリピド、t Ont/
mlを添加し本発明培地とする。
/μyAl + )ランスフェリンコ’ P f/rn
i rエタノールアミン、20 pM 、セレニウム/
θ Mおよび前記精製大豆ホスホリピド、t Ont/
mlを添加し本発明培地とする。
実施例t。
DME/F/、2(/ :/)培地にインシュリン/
pf’/lnl 、 )ランスフェリンλθμS’z
もエタノールアミン、277pMI セレニウム10
Mおよび前記卵黄ホスホリピドjOnfAlを添加し
て本発明培地とする。
pf’/lnl 、 )ランスフェリンλθμS’z
もエタノールアミン、277pMI セレニウム10
Mおよび前記卵黄ホスホリピドjOnfAlを添加し
て本発明培地とする。
実施例2
RPMI−/A4Ao培地にインシュリy / py/
ml+トランスフェリン、20 /’ ?/ml 、エ
タノールアミンコOpM、セレニウノ、10−8Mを加
えて本発明培地とする。
ml+トランスフェリン、20 /’ ?/ml 、エ
タノールアミンコOpM、セレニウノ、10−8Mを加
えて本発明培地とする。
実施例r
PPMI−/6110培地にインシュリフ / pf/
ral 。
ral 。
トランスフェリン、2 o pyAt 、エタノールア
ミン−20p M rセレニウム10−”Mおよび前記
精製大豆ホスホリピドj OnfAlを添加して本発明
培地とする。
ミン−20p M rセレニウム10−”Mおよび前記
精製大豆ホスホリピドj OnfAlを添加して本発明
培地とする。
(13)
実施例乞
RPMI−#≠0培地にインシュリン/μθfni。
トランスフエリンコμ―、エタノールアミン、20 P
M、セレニウム10−8M および前記卵黄ホスホリピ
ドj OnV/lnlを添加して本発明培地とする。
M、セレニウム10−8M および前記卵黄ホスホリピ
ドj OnV/lnlを添加して本発明培地とする。
(ハリ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 (1) エタノールアミンおよび/また龜ホスホリピ
ドを含有する細胞培養用培地。 (2)該ホスホリピドがレシチン、ホスファチジル・エ
タノールアミン、ホスファチジル・イノシトール、ホス
ファチジン酸およびリゾレシチンから選ばれるl釉また
は、21i以上のホスホリピドであることを特徴とする
特許請求の範囲第1項記載の細胞培養用培地。 (3)該ホスホリピドが大豆ホスホリピドまたは卵黄ホ
スホリピドであることを特徴とする特許請求の範囲第1
項記載の細胞培養用培地。 (4)動物細胞ならびに動物細胞由来の細胞を培地に培
養し、細胞増殖ならびに生理活性物質生産を行なわせる
に際し、培地中にエタノールアミンおよび/またはホス
ホリピドを添加することを特徴とする細胞ならひに生理
活性物質の製造法。 (5)該動物細胞が、Heta細施、CHO細瓶、白血
球、線維芽細胞、リンパ芽球様M7JiM、BHK細胞
から選ばれることを特徴とする特Pt!F請求の範囲第
グ項記載の製造法。 (6) 該動物細胞由来の細胞がヒトのミエローマ細
胞とB−リンパ球とが融合したハイプリドーマまたは二
種のミエローマ細胞の融合したバイブリド細力包である
特許請求の範囲第V項記載の製造法。 (力 該ホスホリピドがレシチン、ホスファチジル・エ
タノールアミン、ホスファチジル、イノシトール、ホス
ファチジン酸およびリゾレシチンから選ばれる7種また
は2種以上のホスホリピドであることを特徴とする特許
請求の範囲第V項記載の製造法。 (8)該ホスホリピドが大豆ホスホリピドまたは卵黄ホ
スホリピドであることを特徴とする特許請求の範囲第1
項記載の製造法。 (9)該生理活性物質がモノクローナル抗体、インター
フェロン、インシュリン、成長ホルモンから選ばれるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第11ピ載の製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP56111296A JPS5813389A (ja) | 1981-07-16 | 1981-07-16 | 細胞培養用培地 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP56111296A JPS5813389A (ja) | 1981-07-16 | 1981-07-16 | 細胞培養用培地 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS5813389A true JPS5813389A (ja) | 1983-01-25 |
JPS6318463B2 JPS6318463B2 (ja) | 1988-04-19 |
Family
ID=14557618
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP56111296A Granted JPS5813389A (ja) | 1981-07-16 | 1981-07-16 | 細胞培養用培地 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS5813389A (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1987004187A1 (en) * | 1986-01-03 | 1987-07-16 | Genetics Institute, Inc. | METHOD FOR PRODUCING FACTOR VIII:c-TYPE PROTEINS |
WO1988008035A1 (en) * | 1987-04-06 | 1988-10-20 | Genetics Institute, Inc. | IMPROVED METHOD FOR PRODUCING FACTOR VIII:c-TYPE PROTEINS |
JPH01222793A (ja) * | 1988-02-29 | 1989-09-06 | Morinaga & Co Ltd | モノクローナル抗体生産増強法 |
US5198349A (en) * | 1986-01-03 | 1993-03-30 | Genetics Institute, Inc. | Method for producing factor VIII:C and analogs |
US5250421A (en) * | 1986-01-03 | 1993-10-05 | Genetics Institute, Inc. | Method for producing factor VIII:C-type proteins |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0948567A (ja) * | 1995-08-04 | 1997-02-18 | Bunso Rin | エレベータのカゴに付随する非常はしご装置 |
-
1981
- 1981-07-16 JP JP56111296A patent/JPS5813389A/ja active Granted
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1987004187A1 (en) * | 1986-01-03 | 1987-07-16 | Genetics Institute, Inc. | METHOD FOR PRODUCING FACTOR VIII:c-TYPE PROTEINS |
JPS63502318A (ja) * | 1986-01-03 | 1988-09-08 | ジェネティックス・インスチチュ−ト・インコ−ポレ−テッド | 8:c因子型タンパク質の改良生産方法 |
US5198349A (en) * | 1986-01-03 | 1993-03-30 | Genetics Institute, Inc. | Method for producing factor VIII:C and analogs |
US5250421A (en) * | 1986-01-03 | 1993-10-05 | Genetics Institute, Inc. | Method for producing factor VIII:C-type proteins |
WO1988008035A1 (en) * | 1987-04-06 | 1988-10-20 | Genetics Institute, Inc. | IMPROVED METHOD FOR PRODUCING FACTOR VIII:c-TYPE PROTEINS |
JPH01222793A (ja) * | 1988-02-29 | 1989-09-06 | Morinaga & Co Ltd | モノクローナル抗体生産増強法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS6318463B2 (ja) | 1988-04-19 |
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