JPS58126782A - 細胞破壊法 - Google Patents
細胞破壊法Info
- Publication number
- JPS58126782A JPS58126782A JP587382A JP587382A JPS58126782A JP S58126782 A JPS58126782 A JP S58126782A JP 587382 A JP587382 A JP 587382A JP 587382 A JP587382 A JP 587382A JP S58126782 A JPS58126782 A JP S58126782A
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- Japan
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- cells
- pressure
- carbon dioxide
- dioxide gas
- cell
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は細胞破壊法に関し、詳しくは微生物や動植物ｏ
ｉａ＋ａを破壊する方法に関する。
ｉａ＋ａを破壊する方法に関する。
微生物細胞や或種Ｏ植物組織、動物組織などは強固な外
部構造を有しているため、これら生物細胞を温和な条件
で破壊することは極めて困難である。
部構造を有しているため、これら生物細胞を温和な条件
で破壊することは極めて困難である。
従来、細胞破壊法としてホモジナイザー法、ブレンダー
法、音波処理法、フレンチプレス等を用いる加圧法、ｌ
−ルミル等による描潰法などの物理的９機械的方法や酵
素処理法、アセトン処理法。
法、音波処理法、フレンチプレス等を用いる加圧法、ｌ
−ルミル等による描潰法などの物理的９機械的方法や酵
素処理法、アセトン処理法。
凍結融解法などの方法、さらにはこれらを適当に組合せ
九方法などが知られている。しかし、これらの方法は大
量処理に不適当であったシ、特殊な装置を必要としたシ
、あるい社処理に長時間を要し九り、不快な騒音を発生
する等の欠点があった。
九方法などが知られている。しかし、これらの方法は大
量処理に不適当であったシ、特殊な装置を必要としたシ
、あるい社処理に長時間を要し九り、不快な騒音を発生
する等の欠点があった。
さらに、これらの方法では生物細胞が空気と接触し九や
、温度が一時的もしく社局所的に高くなったり、高速で
叩きつけられたシ、異物と混和される等のために破壊処
理によって細胞内容物が変化を受けることがあった。
、温度が一時的もしく社局所的に高くなったり、高速で
叩きつけられたシ、異物と混和される等のために破壊処
理によって細胞内容物が変化を受けることがあった。
本発明の目的は、上記のような欠点を解消した生物細胞
の破壊法を提供することである。
の破壊法を提供することである。
本発明は、生物細胞に炭酸ガスを加圧下に吸収せしめた
のち、急速に減圧することｔｔ特徴とする細胞破壊法で
ある。
のち、急速に減圧することｔｔ特徴とする細胞破壊法で
ある。
本発明を適用できる生物細胞には制限はなく、たとえば
細菌、酵母、カビ等の微生物や藻類などのほか高等動植
物の細胞がある。細胞はペースシ状もしくは粉末状とし
た方が取扱いが容易である。
細菌、酵母、カビ等の微生物や藻類などのほか高等動植
物の細胞がある。細胞はペースシ状もしくは粉末状とし
た方が取扱いが容易である。
生＃ｌＢａ１飽に炭酸ガスを吸収させる場合、加圧すべ
き圧力は対象とする細胞の細胞ｍｏｗ固さを考慮すべき
ことは当然であるが、本発明者の実験結果によるとＳ〜
１ｓ ｏ ｋａ／ｃｄ Ｏ範囲内で適当な圧力を選定す
ればよく、上限については使用する容器の耐圧性を考慮
しなければならない。好適な圧力については、九とえば
酵母の場合はｓＯ〜５０１−、カビの場合は４０〜４０
ｋ＃／ｊ、 ＩＩ類の場合上５Ｑ〜１０ Ｑ ｋｌ／
ｍ、みかん果皮の場合はＳ−ｎ。
き圧力は対象とする細胞の細胞ｍｏｗ固さを考慮すべき
ことは当然であるが、本発明者の実験結果によるとＳ〜
１ｓ ｏ ｋａ／ｃｄ Ｏ範囲内で適当な圧力を選定す
ればよく、上限については使用する容器の耐圧性を考慮
しなければならない。好適な圧力については、九とえば
酵母の場合はｓＯ〜５０１−、カビの場合は４０〜４０
ｋ＃／ｊ、 ＩＩ類の場合上５Ｑ〜１０ Ｑ ｋｌ／
ｍ、みかん果皮の場合はＳ−ｎ。
ものを選定すればよいが、攪拌手段のついたものが好ま
しい。攪拌をすると、細胞への炭酸ガスの拡散、浸透、
溶解を促進し、かつＩｓｗ！Ａが固化あるいは塊化する
ことを防止することができる。攪拌はゆるやかに行なえ
ばよい。
しい。攪拌をすると、細胞への炭酸ガスの拡散、浸透、
溶解を促進し、かつＩｓｗ！Ａが固化あるいは塊化する
ことを防止することができる。攪拌はゆるやかに行なえ
ばよい。
生愉脳飽に炭酸ガスを吸収させる際の温度は一般に一り
０℃〜十ｓｏ’ｃ心゛適当で、好ましくは０°Ｃ以下で
ある。この４６１Ｉ！によって炭酸ガスは生物細胞内に
溶解するが、炭酸ガスとしてドライアイスを用いること
が簡便である。すなわち、加圧すべき圧力から計算した
量Ｏドライアイスを生物細胞と混和し、容器に入れて密
閉することにより、細胞の冷却と炭酸ガスの溶解が同時
に達成される。
０℃〜十ｓｏ’ｃ心゛適当で、好ましくは０°Ｃ以下で
ある。この４６１Ｉ！によって炭酸ガスは生物細胞内に
溶解するが、炭酸ガスとしてドライアイスを用いること
が簡便である。すなわち、加圧すべき圧力から計算した
量Ｏドライアイスを生物細胞と混和し、容器に入れて密
閉することにより、細胞の冷却と炭酸ガスの溶解が同時
に達成される。
次に、耐圧性容器の放出弁を開いて急速に減圧する。一
般に、常圧になるのに要する時間は２０秒〜１０分程度
である。このようにして急速に減圧すると生物細胞内の
炭酸ガスは気化膨張し、生物ＩＩ胞の細胞−を破壊する
。
般に、常圧になるのに要する時間は２０秒〜１０分程度
である。このようにして急速に減圧すると生物細胞内の
炭酸ガスは気化膨張し、生物ＩＩ胞の細胞−を破壊する
。
本発明の方法によれば、生物細胞を空気と接触させるこ
となく、シかも低温で処理して温度変化も少ないため、
得られる細胞内容物の性宣はほとんど変化しない。また
、１ｉＪＡＩｉ＠内容物を俊性させないためには、破壊
処理に際して細胞を可及的に動かさないことが必要であ
るが、本発明の方法では細胞を移動させないので、この
条件を満足している。さらに、大量の細胞を簡便な処理
で破壊できることも本発明の特色の１つである。
となく、シかも低温で処理して温度変化も少ないため、
得られる細胞内容物の性宣はほとんど変化しない。また
、１ｉＪＡＩｉ＠内容物を俊性させないためには、破壊
処理に際して細胞を可及的に動かさないことが必要であ
るが、本発明の方法では細胞を移動させないので、この
条件を満足している。さらに、大量の細胞を簡便な処理
で破壊できることも本発明の特色の１つである。
次に、本発明を実施例により説明する。
実施例１
圧搾したビール酵母（サツカロミセス・ウバルム）４０
ｔに水４０）を加えてベース）吠にした０ち、ドライア
イス片１００〜１７００ＰＩＩ１合し、こＯａ合物を２
Ｌ容の耐圧容器（ステンレス製）に入れた。混合物をゆ
るやかに攪拌しながら１時間保持すると内圧社次第に上
昇し、第１麦に示した圧力に到達し九。
ｔに水４０）を加えてベース）吠にした０ち、ドライア
イス片１００〜１７００ＰＩＩ１合し、こＯａ合物を２
Ｌ容の耐圧容器（ステンレス製）に入れた。混合物をゆ
るやかに攪拌しながら１時間保持すると内圧社次第に上
昇し、第１麦に示した圧力に到達し九。
次いで、容器の放出弁を開くと内圧は２０〜３０秒で低
下し、常圧となった。この処理による細胞破壊の程度は
、処理酵母を遠心分−（ｉｏｏ。
下し、常圧となった。この処理による細胞破壊の程度は
、処理酵母を遠心分−（ｉｏｏ。
ｒ、島ｍ、、１０分）して得た上澄液の固形分を測定す
ることにより求め九結果を第１表に示す。
ることにより求め九結果を第１表に示す。
第 １ 表
・（可溶性固形分Ｏ量）÷（全菌体固形分の量）ＸＩＯ
Ｇ上記の結果から明らかなように、３０ ’ｑ／ｃｄ以
上に加圧して酵母菌体内に炭酸ガスを吸収せしめたのち
急速に放圧することによって、該菌体内から取出し得る
可溶性固形分を全量回収することができる。なお、得ら
れた可溶性固形分はグルコースを添加すると炭酸ガスを
発生することから、酵素系が完全に保たれていることが
確かめられた。
Ｇ上記の結果から明らかなように、３０ ’ｑ／ｃｄ以
上に加圧して酵母菌体内に炭酸ガスを吸収せしめたのち
急速に放圧することによって、該菌体内から取出し得る
可溶性固形分を全量回収することができる。なお、得ら
れた可溶性固形分はグルコースを添加すると炭酸ガスを
発生することから、酵素系が完全に保たれていることが
確かめられた。
実施例２
アカパンカビ（上田工ユＱｒ＆８ａ＆ ）を液体培養し
て得九菌糸体を濾過して得た。この菌糸体１ｔにドライ
アイス片２００？を加えて混合し、２１容の耐圧容９１
． （ステンレス製）に入れた。混合物をゆるやかに攪
拌しながら２時間保持すると内圧が４５ ｋｇ／ｄ Ｊ
ｐ−到達した。
て得九菌糸体を濾過して得た。この菌糸体１ｔにドライ
アイス片２００？を加えて混合し、２１容の耐圧容９１
． （ステンレス製）に入れた。混合物をゆるやかに攪
拌しながら２時間保持すると内圧が４５ ｋｇ／ｄ Ｊ
ｐ−到達した。
次いで１容器の放出弁を開いて減圧して細胞を破壊しえ
。得られた菌糸体内容物について分析したところ、繭糸
体１？あたシ可溶性蛋白質５００暗が含まれていた。
。得られた菌糸体内容物について分析したところ、繭糸
体１？あたシ可溶性蛋白質５００暗が含まれていた。
実施例Ｓ
クロレラ（０ｈｌｏｒｓｌｌａ 匹史四匪） １０ Ｆ
に水２５Ｂ１を加え九のち、ドライアイス５ｏｏｙを混
合しえ。混合物を２１容耐圧容器（ステンレス製［に入
れ、攪拌を続けて圧力が７２１−に達してから１時間放
置した。
に水２５Ｂ１を加え九のち、ドライアイス５ｏｏｙを混
合しえ。混合物を２１容耐圧容器（ステンレス製［に入
れ、攪拌を続けて圧力が７２１−に達してから１時間放
置した。
次いで、容ＩＩＯ放出弁を開いて急速に減圧し細胞を破
壊し丸。得られ九処理物について検鏡したところ、藻体
はｓａｇ以上が変色し、色素が流出していることが認め
られえ。
壊し丸。得られ九処理物について検鏡したところ、藻体
はｓａｇ以上が変色し、色素が流出していることが認め
られえ。
実施例４
温州みかん果皮１５）を５ｔｓ角の大きさに切り、これ
にドライアイス５０ ｆｔｔ加えて混合し、混合物を２
を容の耐圧容ＩＩ（ステンレス製）に入れた。
にドライアイス５０ ｆｔｔ加えて混合し、混合物を２
を容の耐圧容ＩＩ（ステンレス製）に入れた。
２時間後、圧力が５ψ−に適したところで放圧して細胞
破壊を行なっ九。得られえ処理物について肉ａ観察を行
なったところ、表皮に散在すゐ油粒は全数破裂して精油
分は飛散していた。この事実は植物組織の選択的破壊が
可能であることを示すものである。
破壊を行なっ九。得られえ処理物について肉ａ観察を行
なったところ、表皮に散在すゐ油粒は全数破裂して精油
分は飛散していた。この事実は植物組織の選択的破壊が
可能であることを示すものである。
手続補正書 （自発）
Ｉ 昭和５７年２月１５日特許
庁長官 島 １）響 ＊ 験 を事件の表示 勢願＠５７−５１１７５ １発＠０４称 細胞破壊法 五補正をする者 事件との闘件 特許出願人 （２１９） サラポロビール株式会社４補正の対象 明細書０発ＩＩＡの詳細なｌＩ！明の―表補正の内容 スＯ拡散、１！！透、溶解」を［炭酸ガスの均一な拡散
、浸透、溶解」に訂正する。
庁長官 島 １）響 ＊ 験 を事件の表示 勢願＠５７−５１１７５ １発＠０４称 細胞破壊法 五補正をする者 事件との闘件 特許出願人 （２１９） サラポロビール株式会社４補正の対象 明細書０発ＩＩＡの詳細なｌＩ！明の―表補正の内容 スＯ拡散、１！！透、溶解」を［炭酸ガスの均一な拡散
、浸透、溶解」に訂正する。
（２） 同第５頁下から４行目の［・・・行なえばよ
い。」の後に「また、容器ごと振とうしてもよい。」を
加入する。
い。」の後に「また、容器ごと振とうしてもよい。」を
加入する。
（５） 同第５頁下からＳ〜２行目の「一般に」と［
−１０℃〜＋５０℃］との間に［−８０℃以上の温度で
可能であり、］を加入する。
−１０℃〜＋５０℃］との間に［−８０℃以上の温度で
可能であり、］を加入する。
（以上）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 を生物細胞に炭酸ガスを加圧下に吸収せしめたのち、急
速に減圧することを特徴とする細胞破壊法。 ｉ生物細胞に炭酸ガスを吸収せしめるにあたシ、攪拌し
ながら行なう特許請求の範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP587382A JPS58126782A (ja) | 1982-01-20 | 1982-01-20 | 細胞破壊法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP587382A JPS58126782A (ja) | 1982-01-20 | 1982-01-20 | 細胞破壊法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58126782A true JPS58126782A (ja) | 1983-07-28 |
| JPH0126671B2 JPH0126671B2 (ja) | 1989-05-24 |
Family
ID=11623038
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP587382A Granted JPS58126782A (ja) | 1982-01-20 | 1982-01-20 | 細胞破壊法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58126782A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4639264A (en) * | 1983-08-26 | 1987-01-27 | Ciga-Geigy Corporation | Herbicidal N-arylsulfonyl-N'-(4-mercaptomethylpyrimdinyl)-ureas |
| US5330913A (en) * | 1991-09-11 | 1994-07-19 | Hideo Nakayama | Method of disrupting the chlorella cell wall by cell rupture |
| US5620730A (en) * | 1993-09-09 | 1997-04-15 | Van Noort; Gerard | Method of enhancing shelf-stability of an edible biological product |
| JP2001506866A (ja) * | 1996-12-20 | 2001-05-29 | イーストマン ケミカル カンパニー | 微小藻類細胞の破裂方法 |
-
1982
- 1982-01-20 JP JP587382A patent/JPS58126782A/ja active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4639264A (en) * | 1983-08-26 | 1987-01-27 | Ciga-Geigy Corporation | Herbicidal N-arylsulfonyl-N'-(4-mercaptomethylpyrimdinyl)-ureas |
| US5330913A (en) * | 1991-09-11 | 1994-07-19 | Hideo Nakayama | Method of disrupting the chlorella cell wall by cell rupture |
| US5620730A (en) * | 1993-09-09 | 1997-04-15 | Van Noort; Gerard | Method of enhancing shelf-stability of an edible biological product |
| JP2001506866A (ja) * | 1996-12-20 | 2001-05-29 | イーストマン ケミカル カンパニー | 微小藻類細胞の破裂方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0126671B2 (ja) | 1989-05-24 |
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