JPS58101686A - 新規な有機第一鉄化合物含有補血剤組成物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な第−鉄化合物含有補血側組成物の製造方
法に関する。更に詳しくは、生体によく吸収され且つ化
学的に安定な第−鉄化合物含有補血側組成物を、鉄化合
物の存在下Ｇτ糖類含有栄養培地で酵母を培養すること
によって産生ずることを特徴とする新規な第−鉄化合物
含有補血側組成物の製造方法に関する。

鉄がヘモグロビンの主要構成要素であるところから、各
種の鉄化合物が補血剤として用いられている。これまで
胃腸から生体への鉄の吸収については非常して多くの研
究がなされて訃り、Ｆｅ＋＋は人体によく吸収されるが
Ｆｅ４−＋＋は吸収されないことが知られている。従っ
て、硫酸第一鉄のような二価の鉄化合物が最もしばしば
鉄剤として用いられている。しかし鉄剤として二価鉄化
合物を用いる場合は、二価鉄化合物は容易に酸化されて
三価鉄化合物になるため特殊な被覆等の薬剤上の特別な
技術が必要である。また有機酸、キレート剤、糖、アミ
ノ酸との鉄錯化合物等は無機鉄化合物に比べて生体内へ
の吸収が良いことも知られている。実際にフマル騒第−
鉄やコハク酸第−鉄等の二価法の有機酸塩又は二価法の
キレート化合物が貧血患者の治療に用いられている。し
かしこのような第一鉄化合物は貯蔵中や患者に投与した
後の人体中で酸化して対応する三価鉄化合物になりやす
いという欠点がある。

ところで、ブドウ酒は長い間貧血の治療に効果があると
言われていたが、ブドウ酒中の鉄分が、鉄剤として真に
有効であるか否か、また仮に有効である場合いかなる状
態で補血剤としての効果を発揮しているのかについては
明確にされていない。さらに、ブドウ酒中の鉄分の由来
も明確にされていす、市販のブドウ酒中の鉄分含量も全
くまちまちであり、ブドウ酒による鉄分摂取は確実なも
のとは言い難い。

本発明者はブドウ酒中の鉄分について鋭意研究を行なっ
た。具体的にはブドウ酒の原料（ブドウ果汁）中の鉄含
量を分析したところ、市販のブドウ酒中に含まれる鉄分
の原因となるべき量の鉄分は通常のブドウ酒原料には含
まれておらず、市販のブ、ドウ酒の鉄分の大部分１１醸
造過程におけるコンタミネーションに起因することがわ
かった。更に本発明者ｔよ、鉄剤としての使用に効果的
なブドウ酒中の鉄分の状態を研究した。これらの知見、
研究及び、それに続く補血剤開発の研究に基づいて本発
明に到達したものである。

従って本発明の一つの目的は、生体に効率よく吸収され
且つ化学的に安定な有機筒−鉄化合物含有補血剤組成物
の製造方法を提供することである。

本発明の他の目的は、上記の製造方法にして容易に且つ
経（ｆｉ的に実施できる有機第−鉄化合物含有補血剤組
成物の製造方法を提供することである。

前記及びその他の諸口的、諸特徴及び諸利益は、添付図
面に参照して行なう次の詳細な記述より明らかになろう
。

本発明によれば、鉄化合物の存在下で糖類含有栄養培地
にて酵母を培養することを特徴とする有機第−鉄化合物
含有補血剤組成物の製造方法が提供される。

酵母の種類は臨界的ではないが、発酵に通常用いられる
多種類の属の酵母を用いることができる。好ましく用い
られる属はサツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃ
ｅｓ）及びメチユニコライア（Ｍｅｔｓ−ｃｈｎｉｋｏ
ｗｉａ）である。好ましく用いることのできる酵母の種
類を第１表中に示す。

第　　１　　表 ：　　　　属　　　　　　　　　種　　　　　　株　　
　　□１ 荘：）第１表中の属及び種の酵母はすべて公昶のもので
ある。

上記酵母のうちサカロマイセスセレビシイエ（Ｓａｃｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を用いる
と腸からの吸収が優れた多量のＢ分画区分（後述する）
が製造できるので、サカロマイセスセレビシイエ（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）が最
も好ましい。

本発明に用いられる糖類含有栄養培地としては果汁、半
合成培地及び合成培地が含まれる。

果汁としてはブドウ果汁、リンコ゛果汁等が含まれる。

糖類のうち、ショ糖、グルコース、果糖等の糖がより好
ましく用いられる。

半合成培地及び合成培地で好ましく用いられるものを第
２表及び第３表にそれぞれ示す。

第　　２　　表 （半合成培地） 成分　　１ １ １　Ｄ−グルコース　　　ｔｏｏ、ｏｙｌ（ＮＨ４）２
Ｓｏ４５．Ｏ？ ＫＨ２ＰＯ４１，０！ｉ’ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５０Ｐ Ｎ＆Ｃ４Ｏ，１０Ｐ ＣａＣ４２’２Ｈ２００，１０Ｐ ：酵母エキス　　　　　１．０　　ｇ。

：蒸留水　１０００　ｍｇｊ □□□　　　　　〕 （初期ｐｉ−１６，０） ”　　　　　　　　　　−３９１− 第　　３　　表 （合成培地） １　組成　　　里 ＫＨ２ＰＯ４１０ｇ− Ｍｇ５０４・７１（２００，５Ｊ’ ＮａＣ６０，１０５１’ ＣａＣＡ２・２Ｈ２００，１’！’ Ｈ３ＢＯ３５００μＰ 、　ＣｕＳＯ４’５Ｈ２０４０μ２ ＫＩ　　　　　　１００μｙ・ □ ：　ＦｅＣ７，３・６Ｈ２０２４２ｎＱ　　’ＭｎＳＯ
４・Ｈ２Ｏ４００μ７ Ｍａ２Ｍｏ０４・２Ｈ２０２００μ２ ビオチン　　　　　　　２μｍ ’　Ｚ１１ＳＯ４−７Ｈ２０４００μＰ：塩酸チアミン
　　　　４００　　μＩ１０− 勿論、人工・半巻培地は上記のものに限定されず、糖類
含有栄養培地を用いた通常の発酵に用いることができる
人工栄養培地組成物であればどんなものでも使用できる
。

鉄化合物としては、鉄がイオン化し得る化合物であれば
どのような鉄化合物でも用いることができる。例えば、
塩化第二鉄、硫酸第一鉄及び硫酸第二鉄などのような鉄
の無機酸塩、そしてくえん酸鉄、酒石酸鉄のような鉄の
有機酸塩が挙げられる。鉄粉も又使えるが、培地への溶
解に時間がかかるので不利である。溶解度、有用性及び
無毒性の点から考えて上記の鉄化合物が好ましい。この
ような鉄化合物は、三価の鉄である場合、発酵の過程に
変換されて第一鉄イオンが生成する。添加する鉄化合物
の量は臨界的ではないが、たとえ鉄の添加量を増やして
も、製品中の鉄量は必ずしも比例関係で増加しない。

あ−！り多量の鉄化合物を加えると逆に発酵を抑制する
ので不利である。また一方、鉄化合物の使用量があ壕り
少ないと、目的とする効果が得られない。一般に、鉄化
合物は鉄として約１０〜約７０ｐｐｍ、好ましくは約３
０〜約５０　ｐｐｍの濃度で栄養培地に用いることがで
きる。

本発明を実施する場合、用いられる培地の種類、例えば
果汁、半合成培地、あるい（は合成培地のいずれを用い
る場合にも、酵母を培地１−当り約５×１０５〜約３×
１０６の濃度で使用することができる。

発酵のための更に他の条件を下記に述べる。

（１）培地が果汁である場合、酵母の発酵は、ワインを
製造する際の常法により行うことができる。例えば、果
汁、例えばブドウ果汁ないしにリンゴ果汁、をそのまま
、あるいは果汁にグルコース、果糖ないし１はショ糖を
加えて屈折糖度を約２０〜約２５度としたのち、少量の
殺菌剤、例えば約１００　ｐｐｍのメタ重亜・流酸カリ
ウムを添加処理し、野性雑酵母などの混入汚染微生物を
除去する。その後、通常室温〜３０℃の温度で１５日間
大気圧下で培養することができる。

（２）培地が半合成培地ないしは合成培地である場合、
約１８〜約３０℃で静置ないし１は嫌気性状態で培養す
ることができる。栄養培地中の糖の量は臨界的でＶ！な
いが、所望の発酵をよりよく行うための条件の提供とい
う観点から、一般に栄養培地に対して５〜２５重量係、
好壕しくは１０〜１５重量％の糖を栄養培地に含入せし
めることができる。

人工栄養培地のＰＨ値は最初約６〜７であるが、発酵開
始後３〜４時間でＰＨ値が急激に減少し３．６〜３．８
（その後ＰＨ値は変化しない）となり、そのあと発酵速
度が著しく増加する。

本発明によシ製造される補血剤組成物は、まず培養液の
形態で得られることができる。得られた培養液はその後
、例えば遠心分離などにより、沈殿物と上澄液とに分離
することができる。

得られた上澄液もまた本発明により製造される補血剤組
成物の一形態である。いずれの形態中にも、二価鉄の有
機錯体と推定さ九る水溶性有機第一鉄化合物が含有され
ている。この水溶性有機第一鉄化合物は、最初に添加さ
れた鉄化合物が培養あるいは発酵過程で化学変化を受け
て生成した発酵生成物であると信じられる。培養液およ
び上澄液の両方とも、そのまま服用できる。例えば、培
地がブドウ果汁である場合には、有機第一鉄含有フィン
として愛飲することができる。又、その代りに、上述の
培養液および上澄液のいずれも、３０℃以下の温度で約
１５〜２０　ｍｍＨｇの圧力下において減圧濃縮し、原
液の１０〜２０倍の濃度の濃縮物とすることができる。

得られた濃縮物は、例えば薬用アルコール性飲料（エリ
キシル）として提供されることができる。又濃縮物をさ
らに濃縮して乾固し、乾固物をそのまま、あるいは所望
によりビタミンＣなどの還元性添加物とともに経口投与
に適した形態、例えば錠剤、カプセル、粉末、顆粒ない
しは微細顆粒の形態に裂創できる。所望により、これら
の投与形態は従来技術に準じて容易に製造することがで
き、通常用いられる賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑剤など
の製薬剤から成っている。賦形剤、結合剤および／ない
し崩壊剤として、例えば微ヰ結晶セルロース、小麦デン
プン、糖ラクトース、アラビアゴム、トラガカントゴム
、カルボキシメチルセルロースなトラ用いることができ
る。滑剤として、例えばステアリン酸マグネシウムやタ
ルクなどが用いられることができる。又、錠剤を常法に
準じて被覆してもよい。被覆材として、例えばシェラツ
ク、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、
ポリビニルピロリーン、二酸化チタニウムなどが好まし
く用いられる。投与量は患者の年令、疾病の程度、体重
などによって異なるが、本発明の方法によって得られる
補血剤組成物は通常成人に対して１日当り約５　ｍ９〜
約１００ｍｇ（鉄分を基準として）を、もし必要ならば
分割して、投与することができる。

本発明の方法により製造される補血剤組成物の活性成分
は、化学分析の結果、分子量が約１０２〜５×１０３、
元素Ｆｅ　、　Ｃ＋　Ｈｒ　Ｏのみから構成される二価
鉄含有有機錯化合物であると推定される。後述する実験
例から明らかなように、本発明により製造される補血剤
組成物中の有機第一鉄は従来の鉄剤に比して、人間や人
間以外の動物の生体への吸収性及びヘモグロビンへの取
り込みにおいて顕著に優れていることが判明した。しか
も、本発明により製造される補血剤組成物は、塩化第一
鉄、硫酸第一鉄、フマル酸第−鉄、琥珀酸第−鉄、酒石
酸第一鉄などの二価鉄化合物に比して極めて安定である
ことも判明した。

上述した上澄液を、例えばアンバーライトＸＡＤ　−２
（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ　ＸＡＤ−２）　（米国ローム　
アンドハース社製）を用いてクロマトグラフ分別を行う
と、二つの分画区分すなわち分画区分Ａと分画区分Ｂに
分離される。この分画区分Ｂは比較的低分子量であるが
、分画区分Ａに比して、生体への吸収性が高い。

一方、酵母を鉄化合物の存在下で糖含有栄養培地で培養
することを特徴とする本発明により製造された有機第−
鉄含有補血剤組成物の適当量を患者に投与することによ
シ、血液中の鉄含有量を増加させることができる。

以下実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発
明の範囲は実施例に限定されるものではない。

実施例１ 甲州種ブドウ果汁に砂糖を加え、屈折糖度を２４度とし
たのち、メタ重亜硫酸カリウムを亜硫酸として１００　
ｐｐｍ添加した。次にＦ　ｅ　Ｃ１−３を鉄として５０
　ｐｐｒｎ添加し、酵母サツカロマイセスセレビシェ（
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
　ＯＣ−２を培養した酒母を果汁の３係（容量）加え、
約２０℃で１５日間発酵させた。これを濾過して得られ
たブドウ酒中の鉄含量は３１　ｐｐｍであった。

実験例 本発明に係るブドウ酒中の鉄分の有効性を動物実験によ
り示す。

１）投与液の調製 （イ）本発明ブドウ酒 甲州厘ブドウ果汁に砂糖を加え屈折糖度を２４度とした
後、メタ重亜硫酸カリウムを亜硫酸として１００　ｐｐ
ｍ添加した。次に　Ｆ　ｅ　ＣＬ３を塩化第二鉄のＯ，
ｌ　Ｎ塩酸溶液に比放射能が６．２５μＣ１１５０μ％
Ｆｅとなるように加え０．ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液
でｐＨ３とした後、上述の果汁に鉄として５０　ｐｐｍ
添加した。この果汁に酵母サツカロマイセスセレビシェ
（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
　ＱＣ−２を培養した酒母を果汁の３係（容量）加え、
約２０℃で発酵させた。主発酵終了後１０．００　Ｏｒ
ｐｍで１０分間遠心分離し、５９Ｆｅ標識鉄の溶存する
ブドウ酒を得た。これを３０℃で減圧濃縮してアルコー
ル分を除き、１０．４０．８０及び２５０　μｓ’Ｆｅ
／−の鉄濃度の投与液とした。

（ロ）硫酸第一鉄溶液（対照） ５９ＦｅＣｔＴ、溶液（比放射能：　１２．５　μＣｉ
／μｊｉ’Ｆｅ　）にアスコルビン酸を鉄１μｙあたり
０．０５μｍｏｌｅｓを加えて二価鉄とした復硫酸第−
鉄水溶液と混ぜて５　μｃｉ７１０，４０．８０及び２
５０　ｔｔｆＦｅ／ｍｌ　。

ｐＨ３の投与液とした。

（ハ）塩化第二鉄溶液（対照） ５９Ｆ　ｅ　ＣＡｓ溶液に塩化第二鉄水溶液を混ぜ水酸
化ナトリウム水溶液でＩ）Ｈ３とし、５μＣｉ／１０゜
４０．８０及び２５０μｆｆＦｅ／ｍｌの投与液とした
。

に）　ブドウ酒成分−硫酸第−鉄混合溶液（対照）Ｆ　
ｅ　Ｃ１３を添加しない以外は、実施例１と同じ方法で
調類したブドウ酒（果汁由来の鉄が約ｌｐｐｍ溶存する
）を１／４に濃縮し、上述の方法に従って調製した１０
μＣｉ　／８０１１７・Ｆｅ／ｍｌの硫酸第一鉄の投与
液に１：１の容量で混ぜて５μＣｉ／４０μｆＦｅ／−
の投与液とした。

２）投与 雄のスプラグ−トウリー（Ｓｐｒａｇｕｅ　−Ｄａｗｌ
ｙ　）系ラット（日本フレア）を５週令で入手し一週間
の予備飼育を行なった。

飼料：’−Ｊ、鉄を充分含むＣ３１，５Ｉｎ９／１００
　ｊｉｌ’　）　ＣＡ−１（日本フレア）を与え、水は
水道水を与えた。

予備飼育中、体重増加をチェックし６週令の時点で体重
が１６０ψ前後のラットを使用した。

動物は全実験期間を通じて代謝ケーク中で飼育し、投与
（（先立ち１８時間の絶食を行ない、水は蒸留水を与え
た。

このラットを一群５匹とし、上記の如く調製した投与液
を胃ゾンデを用いてラットの体重１６０１あたり１７！
を直接胃内に投与した。投与して６時間後から飼料ＣＡ
−１を与えた。

３）生体試料の放射能測定 投与後、糞及び尿を経時的に採取し放射能測定試料とし
た。血液はヘパリン処理したキャピラリを用いて経時的
に尾静脈より５０μＬを採血し、３．ＯＯＯｒｐｍで５
分間遠心分部して血漿と血球部に分けてそれぞれの放射
能を測定した。各鉄分の吸収率及びヘモグロビンへの取
り込み率を第４表に示す。

１９− 第４表　含鉄ブドウ酒成分と無機第一、第二鉄との吸収
性の比較 （イ）６９，４±１．４４８．０±１．８６９．２±１
．５１０　　　　　　６２．５　　　　　（ロ）　　　
　６７．４±３．６　　４７．５±１．８　７０．５±
２５（ハ）　５０１±４．２３２．０±６．２１６３．
９±２６（イ）　　　　５３．５±１．７　２８．５±
２．３　　５３．３±２５（イ）　３５．５±４．６　
１７．１±２．３４８．２±４５３０　　　　　　５０
０　　　　　　（ロ）　　　２００±４．０　　１０．
５±１．９　５２．５±１０．５０′９１６．５±３．
１　　７．２±２．０４３．６±３１゜１〜 庄）ＡＣ吸収率）＝１００（１−（排泄された５９Ｆｅ
量／総投与５９Ｆｅ量）） ２Ｏ− Ｂ（ヘモグロビンへの取込ミ率）： １６８時間後の全血液中の５９Ｆｅ含量各数値は平均上
Ｓ、Ｅである（　Ｓ、Ｅは標準誤差を表す）。

第４表から明らかなように、鉄濃度が低い場合にｉｄ　
（１ｍｙ／　Ａ程度またはそれ以下）、本発明（で係る
有機鉄と無機鉄との吸収率の差はあまり大きくないが、
これは、この程度の鉄濃度では体内の還元力の範囲内に
あるためと考えられる。しかし鉄濃度が大きくなると、
含鉄ブドウ酒成分からの鉄分の吸収率はＦｅＳＯ４＋　
ＦｅＣｔｓに比して抜群に高いことがわかる。また、二
価鉄である硫酸第一鉄とブドウ酒成分を混合したに過ぎ
ないもの（→の吸収率は硫酸第一鉄単味０−１の吸収率
と差がみられない。

実施例２ 第２表の半合成培地を栄養培地として用いた以外（は実
施例１と実質的（Ｃ同様の操作を行なった。培養混合物
を３０℃で１５日間発酵させた。

これを涙過して鉄含量３５　ｐｐｍの上澄液を得た〇得
られた有機第一鉄化合物含有の上澄液は極めて安定であ
り、貧血治療活性に秀れていた。

実施例３ 第３表の合成培地を栄養培地として用いた以外は実施例
１と実質的に同様の操作を行なった。

培養混合物を３０℃で１５日間発酵させた。これを沢過
して鉄含量３３　ｐｐｍの上澄液を得た。

得られた有機第一鉄化合物含有の上澄液は極めて安定で
あり、貧血治療活性に秀れていた。

第１図は、実施例２によ！ｌｌ得た上澄液から調製した
鉄含量２５０μｆＦｅ／ｍｌの投与液をラット体重１　
ｋｇあたシ２５０μｆＦｅ投与したラットについて、血
漿、骨髄、赤血球、小腸における鉄濃度の投与後の経時
変化を示す。第１図において、縦軸には全投与量に対す
る　Ｆｅ含有率（イ）を対数目盛で示し、横軸に（は投
与後の経過時間（ｈｒ）を対数目盛で示しである。Ｐは
血漿、Ｂは骨髄、Ｅは赤血球、Ｓは小腸を意味し、Ｆｅ
含有率の０１は検出限界である。本テストは前述の実験
方法と同様な方法で行い、血漿、骨髄、赤血球、小腸に
おける体内鉄濃度の膜力後経時変化は実験例中第２項、
第３項に従い測定した。第１図から明らかなように、ま
ず最初、血漿中の鉄濃度は急速に増大し、その後急速（
Ｃ減少して、投与後約１６８時間にはおよそゼロになる
。次に、血漿中の鉄濃度の減少とともに、骨髄中の鉄濃
度は増大し、投与後約２０時間で減少に転じる。ついで
、赤血球中の鉄濃度は徐々に増大しプラトー域に到る。

（この時の鉄濃度は血漿、骨髄中で見られる鉄濃度より
犬となる。）一度このプラトー域に達した赤血球中の鉄
含有率はおよそ５０日間変化せず一定値を示す。第１図
より、血漿中に吸収された鉄分は骨髄に移動し、さらに
赤血球中に吸収されることが推測される。また第１図か
ら、本願発明の方法によって得られる補血剤組成物中の
有機第一鉄化合物（ｄ極めて安定に生体中に吸収され、
鉄のヘモグロビン中への吸収が極めて大きいことが認識
できる。この結果、本願発明の方法によって得られる補
血剤組成物は投与回数の減少をもたらすことができて有
利である。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の方法によって得られる補血剤組成物を
ラットに投与した時の、血漿、骨髄、赤血球、小腸（で
おける鉄濃度の投与後の経時変化を示すグラフである。 特許出願人　　１）中　健太部 手続補正書（自発） 昭和５８年　１月２ｆ−日 特許庁長官若杉和夫殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１７８６８６号 ２発明の名称 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住所　山梨県甲府市美咲１丁目１の２６明細書の発明の
詳細な説明の欄 ５補正の内容 別紙の通υ 補　正　書（特願昭５６−１７８６８６号）明細書の発
明の詳細な説明の欄ヲ次のとおシ補正する。 （１）明細書第８頁第１表第１項、 「セレビシイエ」ヲ「セレビシェ」に訂正する。 （２）　　明細書第８頁下から４行目、「サカロマイセ
スセレビシイエ」を「サツカロマイセスセレビシェ」に
訂正スル。 （３）　　明細書第８頁最下行、 「サカロマイセスセレビシイエ」ヲ「サッカロマイセス
セレビシェｊＫ訂正ｆる。 （４）明細書第１０頁第３表第１２項、［Ｍａ２ＭｏＯ
４・２Ｈ２０Ｊをｒ　Ｎ　ａ　２ＭＯＯ４・２Ｈ２０Ｊ
に訂正する。 （５）　　明細書第１７頁１５行、 「実験例」を「実験例１」に訂正する。 （６）　　明細書第１７頁１６行、 「本発明に係るブドウ酒」ヲ「上記の方法で得られる本
発明に係るブドウ酒」に訂正する。 （７）　　明細書第２２頁１５行、 ［吸収率と差がみられ々い。］の後に ［実施例２ サツカロマイセスセレビシェ　ＱＣ−２の代すニメチュ
ニコウイアプルチェリマ　Ｋ−４’２７ｅ用いた以外は
実施例１と実質的に同様の操作を行なった。濾過して得
られたブドウ酒中の鉄含量は３５　ｐｐｍであった。 実験例２ 上記の方法で得られる本発明に係るブドウ酒中の鉄分の
有効性を動物実験により示す。 １）投与液の調製 （ホ）本発明ブドウ酒 甲州種ブドウ果汁に砂糖を加え屈折糖度を２４度とした
後、メタ重亜硫酸カリウムを亜硫酸として１００　ｐｐ
ｍ添加した。次に　ＦｅＣ１−５ｋ塩化第二鉄の０．　
Ｉ　Ｎ塩酸溶液に比放射能が６２５μＣ１１５０μ、％
Ｆｅとなるように加え０．　Ｉ　Ｎ水酸化ナトリウム水
溶液でｐＨ３とした後、上述の果汁に鉄として５０　ｐ
ｐｒｎ添加した。この果汁に酵母メチュニコウイアプル
チェリマ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａｐｕｌｃｈｅｒ
ｒｉｍａ　）　Ｋ　−４２７ｆ培養した酒母を果汁の３
係（容量）加え、約２０℃で発酵させた。主発酵終了後
１０．００Ｏｒｐｍで１０分間遠心分離し、５９Ｆｅ標
識鉄の溶存するブＰつ酒を得た。これを３０℃で減圧濃
縮してアルコール分金除き、４０μｊｉＬＦｅ／ｒｎｌ
の鉄濃度の投与液とした。 （へ）上記（ホ）よシ分離した有機性鉄複合体上記本発
明ブドウ酒（ホ）を、３０℃で減圧濃縮した後さらに減
圧下７０℃で蒸発乾固させ有機外鉄複合体を得た。 （ト）硫酸第一鉄溶液（対照） ５９Ｆ　ｅ　ＣＬ　３溶液（比放射能：　１２．５μｃ
ｉ／μｇ−Ｆｅ）に硫酸第一鉄水溶液を混ぜ水酸化す）
　ＩＪウム水溶液でｐＨ３とし、５　、ａｃｔ／４０　
μｇ−Ｆｅ／−の投与液とした。 （７）塩化第二鉄溶液（対照） 硫酸第一鉄水溶液の代りに塩化第二鉄水溶液を使用した
以外は、上記（ト）と同様の操作を行い塩化第二鉄投与
液を得た。 （す）アスコルビン酸鉄溶液（対照） 硫酸第一鉄水溶液の代υにアスコルビン酸鉄水溶液を使
用した以外は上記（ト）と同様の操作を行いアスコルビ
ン酸鉄投与液を得た。 し）　オロトン酸鉄溶液（対照） 硫酸第一鉄水溶液の代りにオロトン酸鉄水溶液を使用し
た以外は上記（ト）と同様の操作を行いオロトン酸鉄投
与液を得た。 Ｑリ　クエン酸第二鉄溶液（対照） 硫酸第一鉄水溶液の代りにクエン酸第二鉄水溶液を使用
した以外は上記（ト）と同様の操作を行いクエン酸第二
鉄投与液を得た。 ２）投与 実験例１と同様の操作を行った。 ３）生体試料の放射能測定 実験例１と同様の操作を行った。各鉄分の吸収率（Ａｌ
、ヘモグロビンへの取込率＜Ｂ）、吸収された鉄の利用
率（Ｂ／Ａ）、吸収鉄量、ヘモグロビン生成に使用され
た鉄量を第５表に示す。 ５− 第５表から明らかなように、本発明に係る鉄含有ブドウ
酒、これよシ分離した本発明に係る有機性法覆合体から
の鉄分の吸収率は、無機第一鉄、無機第二鉄、アスコル
ビン酸鉄、オロトン酸鉄、クエン酸第二鉄などの有機酸
鉄に比して抜群に高いことがわかる。」 を挿入する。 （８）明細書第２２頁１６行、 「実施例２」を「実施例３」に訂正する。 （９）明細書第２３頁３行、 「実施例３」を「実施例４」に訂正する。 （ｉ　　明細書第２３頁１０行、 「実施例２」を「実施例３」に訂正する。 （１１）明細書第２４頁１−２行、 「実験例中」を「実験例１中」に訂正する。 特許出願人　１）中　健太部 ６−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１〕　　鉄化合物の存在下に、糖類含有栄養培地中で
   酵母を培養することを特徴とする有機第−鉄化合物含有
   補血剤組成物の製造方法。 （２）該酵母がサツカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
   ｙｃｅｓ）属又はメチユニコライア（Ｍｅｔｓｃｈｎｉ
   ｋｏｗｉａ）属である特許請求の範囲第（１）項に記載
   の有機第−鉄化合物含有補血剤組成物の製造方法。 （３）　　該酵ｍがサラカミマイセスセレビシェ（Ｓａ
   ｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、メ
   チュニコウイアゾルチェリマ（Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗ
   ｉａ　ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｒｎａ）　Ｘサツカロマイセ
   ス　チェラリエリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｈｅ
   ｒａｌｉｅｒｉ）＼サツカロマイセス　バイアナス（Ｓ
   ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｂａｙａｎｕｓ）、サツ力
   ロマイセスイタリカス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　
   １ｔａｌｉｃｕｓ）Ｘ　サツカロマイセス　フェルメン
   タチ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｆｅｒｍｅｎｔａｔ
   ｉ）、サツカロマイ庵ス　。セイ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍ
   ｙｃｅｓ　ｒｏｓｅｉ）又はサツカロマイセスへテロソ
   エニカス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｈｅｔｅｒｏ
   ｇｅｒ＋１ｃｕｓ）である特許請求の範囲第（２）項に
   記載の有濃第−鉄化合物含有補血剤組成物の製造方法。 （４）該糖類含有栄養培地が、果汁、半合成培地又（は
   合成培地である特許請求の範囲第（１）頃に記載の有機
   第−鉄化合物含有補血剤組成物の製造方法。 （５）該果汁が、ブドウ果汁又１−１１．　ＩＪンゴ果
   汁である特許請求の範囲第（４）項に記載の有機第−鉄
   化合物含有補血剤組成物の製造方法。 （６）該培養が、酵＃濃度約５Ｘ１０〜約３×’　０６
   ／　ｍｌ　（栄養培地）の栄養培地で行なわれる特許請
   求の範囲第（１）項に記載の有機第−鉄化合物含有補血
   剤組成物の製造方法。 （７）該鉄化合物が、塩化第二鉄、硫酸第一鉄、硫酸第
   二鉄、くえん酸鉄又は酒石酸鉄である特許請求の範囲第
   （１）項（Ｃ記載の有機第−鉄化合物含有補血剤組成物
   の製造方法。 （８）該鉄化合物が、該栄養培地（Ｃ鉄として約１０〜
   約７０　ｐｐｍ含まれている特許請求の範囲第（１）項
   〜第（７）頃のいずれかに記載の有機筒−鉄化合物含有
   補血剤組成物の製造方法。 （９）該栄養培地７′ｌ；、半合成培地又（／ｊ：合成
   培地であり、該栄養培地の糖類含量が５〜２５重慣チで
   ある特許請求の範囲第（４）項に記載の有機筒−鉄化合
   物含有補血剤組成物の製造方法。 （１０該培養を約］８〜約３０℃の温度範囲で行なう特
   許請求の範囲第（１］項〜第（９）項のいずれか（Ｃ記
   載の有機筒−鉄化合物含有補血剤組成物の製造方法。 ０］）鉄化合物の存在下に、糖類含有栄養培地中で酵母
   を培養し、その結果得られる培養液を濃縮して容量で１
   ／ｌ　０−１７２０にするか又（・ス乾固することを特
   徴とする有磯第−鉄化合物含有補血剤組成物の製造方法
   。 （１の　鉄化合物の存在下に、糖類含有栄養培地中で酵
   母を培養し、その結朱得られる培養液を分離操作に付し
   、上澄液を分離することを特徴とする有機筒−鉄化合物
   含有補血剤組成物の製造方法。 （１３該上澄液を濃縮して容量で１７１０〜１／２０に
   するか又は乾固する特許請求の範囲第αつ項に記載の有
   機筒−鉄化合物含有補血剤組成物の製造方法。