JPH1175846A - スリット様ポリペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 脳・神経系に発現する、新規細胞作用分子を
見出し、ポリペプチドとして提供することである。 【効果】 本発明により、脊髄および内分泌器官に発現
する新規スリット様ポリペプチド、およびその遺伝子、
およびその製造方法、および該ポリペプチドを特異的に
認識する抗体が提供され、あらゆる脊髄、甲状腺、卵
巣、前立腺、副腎、小腸、心臓、気管、胸腺、リンパ
節、筋肉系、結腸の疾患の診断、治療への使用が可能で
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト由来の新規ス
リット様ポリペプチド、および該ポリペプチドをコード
するＤＮＡ、該ポリペプチドの製造方法および該ポリペ
プチドを特異的に認識する抗体に関する。

【０００２】

【従来の技術】高等脊椎動物の脳・神経系の形成は胎生
期に完了し、その損傷に対する再生は極めて困難であ
る。脳・神経系の形成過程を理解し、これに関連する分
子の各種脳・神経疾患への臨床応用が検討されている。
近年、神経系の発生および神経回路形成に関わる多くの
細胞−細胞間相互作用分子、もしくは細胞−基質間相互
作用分子が見出されている。これらの分子は、細胞−細
胞間で情報を伝達する細胞膜結合型リセプター分子とそ
のリガンド分子（リセプター−リガンド分子）、細胞−
細胞間の基質物質である細胞外マトリックス分子、およ
び細胞−細胞間もしくは細胞−基質間の接着を担当する
細胞接着分子に大別されている。

【０００３】リガンド分子の例として液性因子の神経成
長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、
ニューロトロフィン３（ＮＴ−３）（特開平５−１６１
４９３）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮ
Ｆ）、毛様体由来神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、ネトリン
（Ｎｅｔｒｉｎ）（Ｓｅｒａｆｉｎｉら，Ｃｅｌｌ，７
８，４０９−４２４，１９９４）、コラプシン（Ｃｏｌ
ｌａｐｓｉｎ）（Ｌｕｏら，Ｃｅｌｌ，７５，２１７−
２２７，１９９３）、また膜結合型因子としてノッチ
（Ｎｏｔｃｈ）ファミリーのリガンド分子であるデルタ
（Ｄｅｌｔａ）およびセレイト（Ｓｅｒｒａｔｅ）、Ｅ
ｐｈファミリーのリガンド分子群などが知られている。
これらの分子のいくつかは医薬としての開発研究がなさ
れている。

【０００４】細胞外マトリックス分子は、特に神経系に
限定されないコラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン
のほか、主に中枢神経系に分泌されるリーリン（Ｒｅｅ
ｌｉｎ）（Ｄ’Ａｒｃｈａｎｇｅｌｏら，Ｎａｔｕｒ
ｅ，３７４，７１９−７２３，１９９５）や主に末梢神
経系に分泌されるアグリン（Ａｇｒｉｎ）（Ｒｕｐｐ
ら，Ｎｅｕｒｏｎ，６，８１１−８２３，１９９１）な
ど神経系に特異的な分子が知られている。また、細胞接
着分子の例としてＮ−カドヘリン、ＰＢ−カドヘリン、
Ｎ−ＣＡＭ、Ｌ１、インテグリン、ファシクリン（Ｆａ
ｓｃｉｃｌｉｎ）などが知られている（平野，蛋白質核
酸酵素，４０，７２４−７３５，１９９５）。

【０００５】ここでは分類上３つに大別したが、厳密な
意味で分類できるものではない。例えば、ここではリセ
プター−リガンド分子と分類したデルタは、ノッチに情
報を伝達する因子であると同時に、接着分子としての機
能を有することが知られている（Ａｒｔａｖａｎｉｓ−
Ｔｓａｋｏｎａｓら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６８，２２５
−２３２，１９９５およびＦｅｈｏｎら，Ｃｅｌｌ，６
１，５２３−５３４，１９９０）。また他の例では、接
着分子と分類したインテグリンは、細胞外マトリックス
のＲＧＤ（Arg Gly Asp）配列を認識し、細胞内に情報
を伝達しうるリセプター分子としての役割を果たす（原
著Ｗａｔｓｏｎら，監訳松原ら，細胞の分子生物学第３
版，教育社，９９５−１０００，１９９５）。したがっ
て、リセプター−リガンド分子、細胞外マトリックス分
子、細胞接着分子の分類は便宜上のものであり、これら
の分子の神経系の発生および神経回路形成に対する重要
性は、この分類によって区別されるものではない。そこ
で、本願ではこれらの分子を細胞作用分子と総称する。

【０００６】上記のような複数の細胞作用分子が多様に
作用することにより、神経細胞の発生、分化、組織構
築、局在化、神経繊維の伸長、神経軸索の束形成、神経
回路網の形成が連続的、同時並行して行われ、複雑でか
つ特異的な脳・神経系が構成されると考えられている。
しかしながら、多種の細胞作用分子が見出されているに
もかかわらず、神経系の発生および神経回路形成は不明
な点が多く、いまだ生物学的に最も未知な分野のひとつ
である。これは神経系の臓器が非均一な細胞群から構成
され、これらの細胞群を統合するために非常に多数の細
胞作用分子が存在し、さらにこれらの分子の濃度・密度
・親和性および時間・空間的発現が重要な働きをするた
めと考えられているが、現在理解されている細胞作用分
子の種類がまだ十分でなく、未同定の細胞作用分子が存
在し、これらが重要な働きを担っていると考えられる。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】脳・神経系に発現す
る、新規細胞作用分子を見出し、ポリペプチドとして提
供することである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】ＥＧＦ（ｅｐｉｄｅｒｍ
ａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，上皮増殖因子）モ
チーフは、脳・神経系の発生および神経回路形成に関わ
る重要な細胞作用分子のいくつかに見出されている分子
構造である。本発明者らはこの点に着目し、ＥＧＦモチ
ーフを有する細胞作用分子が既知分子以外にも脳・神経
系に存在し、これらが脳・神経系発生及び神経回路形成
にとって重要な細胞作用分子として機能しているのでは
ないかと考えた。そして、遺伝子データベースの検索を
行い、ＥＧＦモチーフをコードする遺伝子配列を有する
ＥＳＴ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔａ
ｇｓ）クローンを検索、選出し、これらの遺伝子情報を
基にＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅ
ａｃｔｉｏｎ）プライマーを作製し、ヒト胎児脳由来の
ｃＤＮＡをテンプレートとしてＰＣＲを行うことによ
り、ＥＳＴクローンと相同の遺伝子断片を得た。この遺
伝子断片をプローブとして用いて、ハイブリダイゼーシ
ョン法によるスクリーニングを行い、得られたクローン
の塩基配列を決定し、該遺伝子断片の塩基配列を含みア
ミノ酸全長をコードするｃＤＮＡのクローニングに成功
した。この遺伝子配列から推定されるアミノ酸配列は、
４つのユニットからなるＬＲＲ（ｌｅｕｃｉｎｅ ｒｉ
ｃｈ ｒｅｐｅａｔ）配列と９つのＥＧＦモチーフを有
する新規配列であることを明らかにした。この配列はシ
ョウジョウバエの中枢神経発生において重要な役割を担
うスリット（Ｓｌｉｔ）蛋白質（Ｒｏｔｈｂｅｒｇら，
Ｇｅｎｅ Ｄｅｖ，４，２１６９−２１８７，１９９０
およびＰＣＴ特許，ＷＯ ９２／１０５１８）と約４１
％のホモロジーを有していた。このため本発明者らは本
分子をヒトスリットと命名し、特許を出願した（出願番
号：平８−１８６２１９および平９−２０５３５１、参
考例１から３に取得方法を記載した）。

【０００９】本発明者らはさらに該ヒトスリットの塩基
配列にホモロジーを有するＥＳＴクローンを見いだし、
このＥＳＴの元となるｃＤＮＡ断片を入手し、この断片
の一部をプローブとして用いて、ハイブリダイゼーショ
ン法によるスクリーニングを行い、得られたクローンの
塩基配列を決定し、鋭意努力の結果、該遺伝子断片の塩
基配列を含みアミノ酸全長をコードするｃＤＮＡのクロ
ーニングに成功した。この遺伝子配列から推定されるア
ミノ酸配列は、先願のヒトスリットと約６０％のホモロ
ジーを有し、４つのユニットからなるＬＲＲ配列と９つ
のＥＧＦモチーフを有する先願のヒトスリットと同様の
ドメイン構造を有する新規配列であることを明らかにし
た。このため本発明者らは本願の新規ポリペプチドをヒ
トスリット３と命名した。新規ヒトスリット３をコード
するＤＮＡのアンチセンス核酸断片を用いてノザンブロ
ッティングを行った結果、ヒトスリット３はヒトの臓器
中で脊髄のみならず、甲状腺、卵巣、小腸、心臓、気
管、胸腺、前立腺、副腎、胎盤、リンパ節、結腸および
骨格筋に発現し、脳に発現せず、先願のヒトスリット
（本発明の新規ヒトスリット３と区別するため、以下ヒ
トスリット１と表記する）とは異なる臓器に発現するこ
とを明らかにした。さらに本発明者らは該ヒトスリット
３のポリペプチド全長をコードするＤＮＡを用いて、ヒ
トスリット３の発現系を作製し、本願ポリペプチドのリ
コンビナント標品を作製した。該ヒトスリット３のアミ
ノ酸配列及びそれをコードするｃＤＮＡの塩基配列は、
配列表の配列番号１から３に示した。更に、該リコンビ
ナント標品を免疫原として抗体を作製し、精製法を確立
し本発明が完成した。

【００１０】すなわち、本発明は、（１）配列表の配列
番号１に記載のアミノ酸配列を含有するポリペプチドま
たはその変異体であるポリペプチド、（２）前記（１）
に記載のポリペプチドをコードするＤＮＡ、（３）前記
（２）に記載のＤＮＡが配列表の配列番号２に記載の３
４５番から４８３２番の塩基配列を含有するＤＮＡ、
（４）前記（２）に記載のＤＮＡと、宿主細胞中で発現
可能なベクターＤＮＡとを連結してなる組換えＤＮＡ
体、（５）前記（４）に記載の組換えＤＮＡ体により形
質転換された細胞、（６）前記（４）に記載の組み換え
ＤＮＡ体を用いて作製された当該アミノ酸配列を含有す
るポリペプチドの生産方法、（７）前記（１）に記載の
ポリペプチドを特異的に認識する抗体に関する。

【００１１】以下、本発明を詳細に説明する。配列表に
おいて、配列番号１に示したアミノ酸配列は、本発明の
ヒトスリット３のシグナルペプチドを除いた成熟型蛋白
質のアミノ酸配列である。配列番号２に示した塩基配列
は、本発明のヒトスリット３の翻訳領域、５’非翻訳領
域及び３’非翻訳領域を含むｃＤＮＡの配列である。な
お該配列の３４５番から４８３２番は配列番号１記載の
アミノ酸配列をコードする塩基配列に相当する。配列番
号３に示したアミノ酸配列は本発明のヒトスリット３の
シグナルペプチドを含む全アミノ酸配列である。配列番
号４に示したアミノ酸配列は先願のヒトスリット１のシ
グナルペプチドを除いた成熟型蛋白質のアミノ酸配列で
ある。配列番号５に示した塩基配列は、先願のヒトスリ
ット１の５’非翻訳領域及び３’非翻訳領域を含むｃＤ
ＮＡの配列である。配列番号６に示したアミノ酸配列は
先願のヒトスリット１のシグナルペプチドを含む全アミ
ノ酸配列である。配列番号７に示した塩基配列はオルタ
ナティブスプライシングによって生じる配列番号２記載
の塩基配列に挿入しうるｃＤＮＡの配列である。配列番
号８記載のアミノ酸配列は配列番号７記載のｃＤＮＡ配
列から翻訳されうるポリペプチドの配列である。配列番
号９、１０、１２、１３、１５および１６はＰＣＲ（Ｐ
ｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）の
プライマーとして使用した合成ＤＮＡの配列である。配
列番号１１記載のアミノ酸配列は該ヒトスリット３のリ
コンビナント標品検出のために標識として付加したペプ
チドの配列である。配列番号１４記載の核酸配列はＰＣ
Ｒ産物の一部のＤＮＡの配列である。なお、配列表で示
した各アミノ酸配列は左端がアミノ基末端（Ｎ末）、右
端がカルボキシル基末端（Ｃ末）であり、各ＤＮＡの塩
基配列は左端が５’末端、右端が３’末端である。

【００１２】神経系の発生および神経回路形成に対す
る、細胞−細胞間および細胞−基質間相互作用分子の重
要性は先に述べた。神経系に限らず、細胞のこれらの相
互作用にかかわる分子の多くは構造上、接着・結合のた
めの保存されたドメイン構造を有する。このドメイン構
造には、イムノグロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、カドヘ
リンモチーフ、ＩＩＩ型フィブロネクチンリピート（Ｆ
ＮＩＩＩ型リピート）、ＬＲＲ（ｌｅｕｃｉｎｅ ｒｉ
ｃｈ ｒｅｐｅａｔ）配列、ＥＧＦ（ｅｐｉｄｅｒｍａ
ｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ）モチーフなどが知ら
れている。

【００１３】Ｉｇ様ドメインはイムノグロブリン・スー
パーファミリーに属する多数の分子に含まれ、神経細胞
を含む各種細胞に発現する細胞接着分子のＮ−ＣＡＭ、
Ｌ１、ＩＩ型ファシクリンは共に５つのＩｇ様ドメイン
を有する（前出，細胞の分子生物学第３版，９６８−９
６９）。カドヘリンモチーフは神経冠細胞に発現するＮ
カドヘリンをはじめ、カドヘリンファミリーに通常５つ
のドメイン構造で含まれる（前出，細胞の分子生物学第
３版，９６６−９６８）。

【００１４】ＦＮＩＩＩ型リピートはＩＩＩ型フィブロ
ネクチンやテネシンなどの細胞外マトリックス分子、Ｎ
−ＣＡＭやＬ１などの細胞接着分子に含まれる。（前
出，細胞の分子生物学第３版，９８６−９８８） ＬＲＲ配列は最近報告されたマウス神経系細胞に発現す
るＮＬＲＲ−１（Ｔａｇｕｃｈｉら，Ｍｏｌ Ｂｒａｉ
ｎ Ｒｅｓ，３５，３１−４０，１９９６）、ＮＬＲＲ
−３（Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら，Ｍｏｌ Ｂｒａｉｎ Ｒ
ｅｓ，３６，４５−５２，１９９６）に含まれ、結晶解
析により立体構造が明らかにされている（Ｋｏｂｅら，
Ｎａｔｕｒｅ，３７４，１８３−１８６，１９９５）。
またＬＲＲ配列を有するいくつかの分子において、ＬＲ
Ｒ配列のＮ末側、Ｃ末側にも保存領域が存在することが
報告されている（Ｒｏｔｈｂｅｒｇら，Ｇｅｎｅ Ｄｅ
ｖ，４，２１６９−２１８７，１９９０）。

【００１５】ＥＧＦモチーフは外胚葉のニューロブラス
トへの分化を抑制するノッチ、デルタなどのリセプター
−リガンド分子やテネシン、ラミニンなどの細胞外マト
リックス分子に含まれるモチーフであり、３ヶ所のジス
ルフィド結合と１ヶ所のＣａ ²⁺結合部位を有すると一般
に考えられている。ＥＧＦモチーフの立体構造は結晶解
析により明らかにされている（Ｒａｏら，Ｃｅｌｌ，８
２，１３１−１４１，１９９５）。これらの分子のいく
つかはＥＧＦモチーフがタンデムに並んだ構造を有し、
ノッチの例では３６個のＥＧＦモチーフがリピート構造
を取り、その１１番目と１２番目のＥＧＦモチーフがリ
ガンドとの結合に関与していることが明らかになってい
る（Ｆｅｈｏｎら，Ｃｅｌｌ，６１，５２３−５３４，
１９９０）。

【００１６】これらのドメイン構造を標的とする新規蛋
白質の遺伝子クローニングは、いくつかの方法が考え得
る。例えば、保存されたアミノ酸配列部分に対応する混
合ＰＣＲプライマーを作製し、ＰＣＲにより該当するア
ミノ酸配列に対応する遺伝子断片を取得する方法、ある
いは保存されたアミノ酸配列部分に対応するオリゴＤＮ
Ａプローブを作製し、ハイブリダイゼーション法により
スクリーニングを行う方法、あるいはファミリーを形成
している遺伝子群や異種に等価の遺伝子が知られている
場合には、既知遺伝子の保存領域に該当する核酸断片を
プローブとして特異性のやや低い条件でハイブリダイゼ
ーションを行う方法などが一般的に行われている。いず
れの場合もゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡをライブラリー
として使用することができる。

【００１７】近年、ＤＮＡシーケンス技術が向上し、ゲ
ノムＤＮＡやｃＤＮＡのライブラリをランダムにシーケ
ンスし、ヒト、線虫、シロイヌナズナなどの種の全ゲノ
ムＤＮＡおよび全ｃＤＮＡ配列の解明が試みられている
（Ｇｅｎｏｍｅ Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｎａｔｕｒｅ，
３７７，３Ｓ，１９９５）。ヒトのｃＤＮＡに関して、
ＴＩＧＲ（Ｔｈｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｇｅ
ｎｏｍｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）によるＥＳＴプロジェ
クト、ワシントン大学−メルクによるＥＳＴプロジェク
ト、コロラド大学によるＳＴＳプロジェクトなどがこの
事業に参入している。これらの機関から提出されたｃＤ
ＮＡの部分塩基配列はＧｅｎｂａｎｋおよびＥＭＢＬの
遺伝子データベースに登録されており、開示されてい
る。１９９７年４月１５日発行のＧｅｎｂａｎｋリリー
ス１００によれば、ＥＳＴクローンの累積登録数は約８
９万クローンで、平均長は３６８塩基対（ｂｐ）である
ことがわかる。したがって、ＥＳＴクローンの塩基配列
を基にハイブリダイゼーション法のプローブを作製する
ことにより、所望のドメイン構造を有する新規遺伝子を
クローニングする事が可能である（前述ＮＬＲＲ−１お
よびＮＬＲＲ−３）。

【００１８】本発明者らは先願のヒトスリット１遺伝子
のクローニングにあたり、前記の各種のドメイン構造を
有し、かつ神経系に発現する既知分子、約３０種類を選
出し、該当するドメイン構造をコードする塩基配列を雛
形として、遺伝子データベースのＧｅｎｂａｎｋリリー
ス９１（Ｇｅｎｅｔｙｘ−ＣＤ，ソフトウェア開発株式
会社）に登録されているＥＳＴクローンを対象にホモロ
ジー検索を行った。検索に用いたアルゴリズムはＧｅｎ
ｅｔｙｘ−ＣＤソフトウェア内蔵のプログラムを用い
た。この結果、およそ６０％以上の遺伝子配列のホモロ
ジーを有する約６００のＥＳＴクローンが候補となっ
た。これらのクローンの遺伝子配列は、相補的な配列と
共に１クローンにつき６通りのアミノ酸配列に翻訳し、
該当するアミノ酸配列を有するかどうかを調べた。この
とき、ＥＳＴクローンで報告されている塩基配列はしば
しば欠落や重複もしくはＮで示される不明配列があるた
め、アミノ酸フレームの変化を考慮して注意深くアミノ
酸配列を生成した。

【００１９】特に配列情報の両端の数十ｂｐは、見かけ
上の終止コドンの出現や不明配列のため、ほとんどのＥ
ＳＴクローンでアミノ酸フレームが全く組めず、両端合
わせて約１００ｂｐは実質上有用な配列情報でなかっ
た。また、およそ２００ｂｐ以下の短い断片情報しか有
さないＥＳＴクローンは、上記理由を考え合わせてスク
リーニングのためのハイブリダイゼーションのプローブ
として短すぎて適さないため、候補からはずした。最終
的に候補に残ったＥＳＴクローンのうち、Ｇｅｎｂａｎ
ｋ登録番号Ｈ１４２１６とＴ０８０４９の２つのクロー
ンは、ＥＧＦモチーフをコードする同一部分の塩基配列
情報を有することが判明し、本発明者らは参考例に示し
たごとく、該ＥＳＴクローンに相同の配列を有するＤＮ
Ａ断片を得、このＤＮＡ断片をプローブとしてヒトｃＤ
ＮＡライブラリのスクリーニングおよびＲＡＣＥ（ｒａ
ｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ
ｅｎｄｓ）法により、該ヒトスリット１のオープンリ
ーディングフレーム全長を含むＤＮＡを得、配列表の配
列番号５記載の塩基配列を決定した。該塩基配列から推
定された該ヒトスリット１の成熟蛋白質のアミノ酸配列
を配列表の配列番号４に、シグナル配列を含む全アミノ
酸配列を配列番号６に示した。該アミノ酸配列のドメイ
ン構造の解析により、該ヒトスリット１はＬＲＲ配列、
ＥＧＦモチーフの他に、ＡＬＰＳ領域（Ｒｏｔｈｂｅｒ
ｇら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７，３６７−３７
０，１９９２）、システイン豊富領域をドメイン構造と
して含有することが明らかになった。

【００２０】なお、ヒトスリット１をコードする塩基配
列を含有するプラスミドｐＢＳＳｌｉｔを大腸菌株ＤＨ
５（東洋紡社製）に遺伝子導入した菌株、Ｅ．ｃｏｌ
ｉ：ＤＨ５−ｐＢＳＳｌｉｔは日本国通産省工業技術院
生命工学工業技術研究所に受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５
９２０として平成８年１０月２８日に寄託されている。
本発明者らは、該ヒトスリット１の塩基配列をテンプレ
ートとして、遺伝子データベースのＧｅｎｂａｎｋリリ
ース９３（Ｇｅｎｅｔｙｘ−ＣＤ，ソフトウェア開発株
式会社）に登録されているＥＳＴクローンを対象にホモ
ロジー検索を行ない、類縁分子の発見に努めた。検索に
用いたアルゴリズムはＬｉｐｍａｎ−Ｐｅａｒｓｏｎ法
（Ｌｉｐｍａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２７，１４３５
−１４４１，１９８５）を用いた。この結果、Ｇｅｎｂ
ａｎｋ登録番号Ｔ６５５２１は、先願のヒトスリット１
のＬＲＲ配列にホモロジーを有するアミノ酸配列をコー
ドする塩基配列を有することが判明した。本発明者らは
実施例１のごとく、これらのＥＳＴのｃＤＮＡクローン
を入手し（クラボウより入手可能）、塩基配列を決定し
たが、本願のポリペプチドのアミノ酸全長をコードする
塩基配列は含まれていなかった。

【００２１】次に、これらのＤＮＡ断片を用いて、ヒト
のゲノム遺伝子ライブラリーあるいはｃＤＮＡライブラ
リーから目的遺伝子の全長を得ることは可能である。全
長のクローニングには、ＤＮＡ断片をアイソトープ標
識、及び各種非アイソトープ標識し、ライブラリーをハ
イブリダイゼーションなどの方法にてスクリーニングす
ることによって得ることができる。アイソトープの標識
法としては、たとえば［α³²Ｐ］ｄＣＴＰとクレノーＤ
ＮＡポリメラーゼを用いてラベルする方法や、他のニッ
クトランスレーション法またはプライマー伸長法などに
よる標識法が利用できる。

【００２２】本発明者らは実施例２に示したごとく、Ｄ
ＮＡ断片をラジオアイソトープでラベルし、ハイブリダ
イゼーションプローブとし、スクリーニングライブラリ
ーとしてヒト胎児肺由来ｃＤＮＡを用いてスクリーニン
グを行い、得られた複数のクローンのＤＮＡ配列を決定
したところ、これらは最終的に配列表の配列番号２に示
す塩基配列を有するｃＤＮＡであることがわかった。配
列表の配列番号２に示したＤＮＡの塩基配列には２６４
番に始まる開始コドン（ＡＴＧ）から４８３５番で終わ
る終止コドン（ＴＡＡ）まで、１５２３個のアミノ酸を
コードしうるオープンリーディングフレームが存在し
た。該オープンリーディングフレームから翻訳したアミ
ノ酸配列を配列番号３に示した。尚、該オープンリーデ
ィングフレームを含むプラスミドｐＨＳＬ３は大腸菌株
ＪＭ１０９（東洋紡社製）に遺伝子導入した。

【００２３】このＤＮＡの塩基配列（配列表の配列番号
２）を遺伝子データベース（Ｇｅｎｂａｎｋ、リリース
１００）で既知遺伝子の塩基配列と比較したところ、オ
ープンリーディングフレームを有する遺伝子に一致する
配列は見られず、したがって全体の配列に関しては全く
新規な配列である。また同様に該アミノ酸配列（配列表
の配列番号３）をＰＩＲ（リリース５０）およびＳｗｉ
ｓｓ−Ｐｒｏｔ（リリース３４）にて既知のアミノ酸配
列と比較したが、同一の配列は認められず、この配列は
全く新規な配列である。しかしながら、比較的高いホモ
ロジーを有する配列として、ショウジョウバエ（Ｄｒｏ
ｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）の神経発
生において重要な働きをするスリット（Ｓｌｉｔ）分子
が見出され、アミノ酸配列で約４１％の相同性を有する
ことが明らかになった。ショウジョウバエ・スリット分
子の脊椎動物のホモログの存在は本発明者らによる先願
のヒトスリット１で初めて明らかとし、配列表の配列番
号４に示したヒトスリット１のアミノ酸配列と配列番号
１に示した本発明のヒトスリット３との相同性は約６０
％である。すなわち本発明のヒトスリット３のアミノ酸
配列およびＤＮＡ配列は先願のヒトスリット１とは明ら
かに異なっていた。なお、ショウジョウバエスリットの
ＰＣＴ特許（ＷＯ ９２／１０５１８）には脊椎動物の
ホモログの存在を示唆する記載はない。

【００２４】配列表の配列番号３記載のアミノ酸配列を
Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの方法（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂ
ｉｏｌ．，１５７：１０５，１９８２）に従って、アミ
ノ酸配列から疎水性部分、親水性部分を解析した。その
結果、本発明のヒトスリット３はシグナルペプチドを有
し、細胞膜通過部分を有さない遊離型の分泌蛋白質であ
ることが推定された。つまりこの解析結果によれば、該
ヒトスリット３の分泌前駆体のアミノ酸配列は配列表の
配列番号３に示す１５２３アミノ酸残基からなるポリペ
プチドであり、シグナルペプチド領域は同配列表のアミ
ノ酸配列の−２７番のメチオニンから−１番のセリンに
あたる２７アミノ酸残基、分泌成熟体領域は同配列表の
１番のグリシンから１４９６番セリンにあたる１４９６
アミノ酸残基が該当することが推定された。ただし、こ
のシグナルペプチド切断部位は、あくまでもアミノ酸配
列から推定されたものであり、実際に生体中での切断部
位は、前後１０アミノ酸以内の範囲で異なることも十分
考えられる。

【００２５】またアミノ酸配列から予想されることとし
て、糖鎖が付加される部分はＮ−アセチル−Ｄ−グルコ
サミンがＮ−グリコシド結合可能な部分として、配列表
の配列番号１のアミノ酸配列の４５番、１６５番、５３
６番、５９５番、７５７番、７６５番、７７０番、９０
１番、９８１番、９９８番、１１５４番、１２２０番お
よび１３７９番の１３個のアスパラギン残基が挙げられ
る。一般に、糖鎖が付加された蛋白質の方がポリペプチ
ドそのものよりも生体内での分解に対して安定であり、
また強い生理活性を有していると考えられている。

【００２６】配列表の配列番号１に記載したアミノ酸配
列のドメイン構造の解析により、ヒトスリット３はポリ
ペプチドのほぼ全体が緻密なドメイン構造で構成されて
いることが明らかになった。すなわち、タンデムに並ん
だＬＲＲ配列とそれを挟むＬＲＲのＮ末保存領域（ＬＲ
Ｒ−ＮＲ）とＬＲＲのＣ末保存領域（ＬＲＲ−ＣＲ）を
１つのユニットとし、このユニットがＮ末から４つ連続
して並び、その直後にＥＧＦモチーフが６個タンデムに
並び、直後にＡＬＰＳドメイン（Ｒｏｔｈｂｅｒｇら，
Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７，１９９２に詳細）が
続き、その後再びＥＧＦモチーフが３個並び、システイ
ン豊富領域（Ｒｏｔｈｂｅｒｇら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．，２２７，１９９２に詳細）が続き、Ｃ末になる。

【００２７】さらに詳しく説明すれば、第１ユニットの
ＬＲＲ−ＮＲ（ＬＲＲ−ＮＲ１）は配列表の配列番号１
に記載のアミノ酸配列の７番のシステインから３８番の
アルギニン、第１ユニットのＬＲＲ配列（ＬＲＲ１）は
７回のリピート構造を有し、同配列表の３９番のロイシ
ンから１８８番のアスパラギン、第１ユニットのＬＲＲ
−ＣＲ（ＬＲＲ−ＣＲ１）は同配列表の１８９番のヒス
チジンから２５２番のセリン、第２ユニットのＬＲＲ−
ＮＲ（ＬＲＲ−ＮＲ２）は同配列表の２５３番システイ
ンから２８４番グルタミン酸、第２ユニットのＬＲＲ配
列（ＬＲＲ２）は６回のリピート構造を有し、同配列表
の２８５番イソロイシンから４１０番アスパラギン、第
２ユニットのＬＲＲ−ＣＲ（ＬＲＲ−ＣＲ２）は同配列
表の４１１番プロリンから４７７番バリン、第３ユニッ
トのＬＲＲ−ＮＲ（ＬＲＲ−ＮＲ３）は同配列表の４７
８番システインから５０９番アスパラギン酸、第３ユニ
ットのＬＲＲ配列（ＬＲＲ３）は６回のリピート構造を
有し、同配列表の５１０番ロイシンから６３６番のアス
パラギン、第３ユニットのＬＲＲ−ＣＲ（ＬＲＲ−ＣＲ
３）は同配列表の６３７番プロリンから６９７番アルギ
ニン、第４ユニットのＬＲＲ−ＮＲ（ＬＲＲ−ＮＲ４）
は同配列表の６９８番システインから７２９番グルタミ
ン酸、第４ユニットのＬＲＲ（ＬＲＲ４）は５回のリピ
ート構造を有し、同配列表の７３０番ロイシンから８３
０番アスパラギン、第４ユニットのＬＲＲ−ＣＲ（ＬＲ
Ｒ−ＣＲ４）は同配列表の８３１番プロリンから８９２
番アラニン、第１ＥＧＦモチーフは同配列表の８９３番
システインから９２５番システイン、第２ＥＧＦモチー
フは同配列表の９３２番システインから９６６番システ
イン、第３ＥＧＦモチーフは同配列表の９７３番システ
インから１００４番システイン、第４ＥＧＦモチーフは
同配列表の１０１１番システインから１０４４番システ
イン、第５ＥＧＦモチーフは同配列表の１０５１番シス
テインから１０８２番システイン、第６ＥＧＦモチーフ
は同配列表の１０９６番システインから１１２７番シス
テイン、ＡＬＰＳドメインは１１２８番グルタミン酸か
ら１３０５番システイン、第７ＥＧＦモチーフは同配列
表の１３０８番システインから１３３７番システイン、
第８ＥＧＦモチーフは同配列表の１３４５番システイン
から１３７５番システイン、第９ＥＧＦモチーフは同配
列表の１３８５番システインから１４１６番システイ
ン、システイン豊富領域は同配列表の１４２２番システ
インから１４９５番システインまでである。

【００２８】ヒトスリット１とヒトスリット３のドメイ
ン構造は、Ｎ末からＬＲＲ−ＮＲおよびＬＲＲ−ＣＲを
有するＬＲＲ構造が４つ連続して並び、その直後にＥＧ
Ｆモチーフが６個タンデムに並び、直後にＡＬＰＳドメ
インが続き、その後再びＥＧＦモチーフが３個並び、シ
ステイン豊富領域が続き、Ｃ末になるという共通の構成
からなる。また４つのユニットのＬＲＲのリピート数は
同一である。さらにドメイン構造内でのシステインの
数、位置ともに保存されており、極めて類似の立体構造
をとることが推定できる。一方、ショウジョウバエスリ
ットの構造（Ｒｏｔｈｂｅｒｇら，Ｇｅｎｅ Ｄｅｖ，
４，２１６９−２１８７，１９９０およびＰＣＴ特許，
ＷＯ ９２／１０５１８）は、ＬＲＲ−ＮＲ，ＬＲＲ，
ＬＲＲ−ＣＲからなるユニットが４つあることが示され
ているが、ＬＲＲの詳細な構造に関して、ＬＲＲ１はヒ
ト型が７回のＬＲＲの繰り返しに対してショウジョウバ
エは６回、ＬＲＲ３はヒト型が６回に対してショウジョ
ウバエが５回の違いが認められた。ＥＧＦモチーフに関
して、ヒト型が９つに対してショウジョウバエは７つで
あり、ヒト型の第７、第８、第９ＥＧＦモチーフが３連
のリピート構造をとるのに対して、ショウジョウバエは
１つのみである。なお、ショウジョウバエスリットに関
して、第７ＥＧＦモチーフの後にオルタナティブ・スプ
ライシングにより２種類の転写物が存在することが報告
されている。

【００２９】本発明者らが明らかにしたヒトスリット３
のアミノ酸配列をコードするｃＤＮＡの塩基配列に関し
てもオルタナティブ・スプライシングが見いだされた。
すなわち配列表の配列番号２記載の塩基配列の４５９８
番と４５９９番の間に配列表の配列番号７に記載の塩基
配列の１０１塩基対からなるＤＮＡが挿入されたクロー
ンが見出された。このクローンの塩基配列から推定され
るアミノ酸配列は、配列表の配列番号１記載のアミノ酸
配列の１番グリシンから１４１８番グルタミンまでは他
のクローンと同一のアミノ酸配列を有するが、その後に
配列表の配列番号８記載の２７残基からなるアミノ酸配
列が連結してなる１４４５残基のアミノ酸配列を有し、
この変異体クローンのドメイン構造は、システイン豊富
領域は消失しているが、Ｎ末から第９ＥＧＦモチーフま
では配列表の配列番号１記載のアミノ酸配列からなるポ
リペプチドと全く同一である。また別のクローンでは配
列表の配列番号２記載の塩基配列の３６１２番乃至３９
１１番の３００塩基が欠落しており、この欠落した塩基
配列に対応するアミノ酸配列は、配列表の配列番号１記
載のアミノ酸配列の１０９０番ロイシン乃至１１８９番
バリンの１００残基にあたる。この変異体クローンは、
配列表の配列番号１記載のアミノ酸配列からなるポリペ
プチドの第６ＥＧＦモチーフの全部とＡＬＰＳドメイン
の一部が欠失したドメイン構造の１３９６残基からなる
アミノ酸配列を有する。

【００３０】すなわち、本発明の新規ヒトスリット３
は、配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配列を含有す
るポリペプチドであるが、上記を例とするオルタナティ
ブ・スプライシングによって生じる一部のアミノ酸配列
の挿入、欠失および置換やポイントミューテーションに
よって生じるアミノ酸置換による該ポリペプチドの変異
体も本発明のポリペプチドに含まれる。これら自然界で
生じ得る変異体の他に、人為的な操作によって作製しう
る該ポリペプチドの変異体も本発明に含まれる。また、
そのアミノ酸配列のＮ末もしくはＣ末に多少のアミノ酸
残基、ペプチド残基が付加されることもあり得る。しか
るに本発明の配列表の配列番号１記載のポリペプチドの
性質を失わない該ポリペプチドの変異体は本発明に含ま
れる。配列表の配列番号１記載のポリペプチドと該ポリ
ペプチドの変異体のアミノ酸配列の相同性は７０％以上
であることが好ましく、更に９０％以上が好ましい。ま
た該ポリペプチドやその変異体にＮ−アセチル−Ｄ−グ
ルコサミンやＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンなどの
糖鎖が、Ｎ−グリコシドあるいはｏ−グリコシド結合し
てなるポリペプチドも本発明に含まれる。

【００３１】本発明者らが明らかにした塩基配列を用い
れば、ヒトスリット３の発現・機能に関して、近年の遺
伝子操作技術、発生工学技術を応用した詳細な解析が可
能である。すなわち、配列表の配列番号２の一部もしく
は全部の塩基配列を有する１２ｍｅｒから１６ｍｅｒ以
上、好ましくは１８ｍｅｒ以上の相補し得る核酸、つま
りアンチセンスＤＮＡ、ＲＮＡ、及びそれらがメチル
化、メチルフォスフェート化、脱アミノ化、またはチオ
フォスフェート化された誘導体によって、ハイブリダイ
ゼーション、ＰＣＲなどの手法を用いて行うことが出来
る。実施例４に示したように、同様な方法でマウス等、
他の脊椎動物の本ヒトスリット３のホモログの検出や遺
伝子クローニングができる。さらに、ヒトを含めたゲノ
ム上の遺伝子のクローニングも同様に可能である。

【００３２】本発明者らは、ヒトスリット３のｍＲＮＡ
の臓器発現分布を調べるために実施例３に示すごとく、
配列表の配列番号２記載の塩基配列の一部の配列を有す
る二本鎖ＤＮＡ断片を作製し、これをアイソトープラベ
ルしてヒト臓器由来のｍＲＮＡを固定したフィルターを
用いてノザンブロッティングを行った。その結果、胎児
では肺と腎臓に発現することが観察された。成体では甲
状腺に最も強く、脊髄、卵巣、小腸、心臓、気管、胸
腺、前立腺、副腎、胎盤、リンパ節、結腸および骨格筋
にも発現が観察された。参考例３に示したヒトスリット
１が発現する脳にはヒトスリット３の発現は観察されな
かった。これらの知見はヒトスリット３がヒトスリット
１と異なる発現分布を示し、異なった作用を有すること
が示される。

【００３３】また、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーシ
ョンやｉｎ ｓｉｔｕ ＰＣＲなどの方法により、上記
のノザンブロッティングで発現が観察された臓器におい
て、病理組織標本のヒトスリット３の発現を調べること
により、病気との関連をさらに詳細に調べることが可能
である。また実験動物のスリット３ホモログ遺伝子を使
用してハイブリダイズすることにより全長配列をクロー
ニングし、アンチセンスオリゴマーやドミナントネガテ
ィブによる発現制御、トランスジェニックマウス、ジー
ンターゲッティングマウス、本遺伝子と関連する遺伝子
を共に不活化したダブルノックアウトなどのあらゆる方
法を用いることにより、詳細に脊椎動物のスリット３ホ
モログの発現・機能を解析することが可能である。脊椎
動物のスリット３ホモログ遺伝子を用いることにより、
無脊椎動物のショウジョウバエのスリット遺伝子では得
られない、脊椎動物、特にほ乳類での作用解析が可能で
ある。これらのデータはヒトへの外挿が可能である。本
発明者らは先願のヒトスリット１において、ラット相同
遺伝子であるラットスリット１の遺伝子断片を用いて、
ラット脳内のスリット１の発現分布をｉｎ ｓｉｔｕハ
イブリダイゼーションにより観察し、該スリット１が大
脳皮質、海馬、扁桃体および嗅球の神経細胞に特異的に
発現していることを見いだしている。ヒトスリット３に
おいても各発現臓器における詳細な発現部位の特定およ
び発現細胞の同定が可能である。

【００３４】またヒトスリット３の塩基配列情報を用い
ることでゲノム上の染色体マッピングとゲノム配列決
定、それに引き続いてプロモータおよびエンハンサー領
域の解析、スプライシング構造の解析が可能である。ゲ
ノム上の異常があれば、遺伝子診断、遺伝子治療への応
用が可能である。近年、脳・神経細胞の遺伝子治療用ベ
クターに関して、アデノウィルスベクター、ヘルペス単
純ウィルスベクターをはじめ、アデノ関連ウィルスベク
ター、免疫不全ウィルスベクター、フォーミーウィルス
ベクター等のウィルスベクターや脂質試薬を使用した神
経細胞系への遺伝子導入が可能になっている。また、遺
伝子治療用ベクターのプロモータ領域の改良によって任
意に遺伝子発現を制御する技術が開発されている。こう
した周辺技術の進歩により、ゲノム上に異常がなくて
も、前記の神経細胞間もしくは神経細胞と筋系細胞間の
相互作用の改善の目的で積極的に遺伝子治療を行うこと
が可能となる。

【００３５】ショウジョウバエでの研究（Ｒｏｔｈｂｅ
ｒｇら，Ｇｅｎｅ Ｄｅｖ，４，２１６９−２１８７，
１９９０およびＰＣＴ特許，ＷＯ ９２／１０５１８）
では、スリットは神経発生期に中外胚葉から分化した正
中線グリア細胞に特異的に発現される蛋白質で、交連軸
索に沿って分泌運搬され、はしご状神経の形態形成に作
用する。また成長円錐が筋および心筋に接続する部位に
も局在する。これらのことからスリットは神経細胞間お
よび神経細胞と筋系の細胞との相互作用を媒介すると考
えられている。またスリットの欠損変異株のショウジョ
ウバエ胚は、中枢神経の形成が崩壊し、発生途上で死滅
することが報告されている。なお成体についてのスリッ
トの発現は不明である。

【００３６】昆虫類のはしご状神経と脊椎動物の脊髄は
発生学的に共通性が高く、ショウジョウバエでの研究結
果が、ヒトスリット３の機能推定に有用である。すなわ
ち、ヒトスリット３の生理機能は脊髄での神経細胞間お
よび神経細胞と筋肉系の細胞との相互作用を媒介してい
ること、脊髄の形態形成、維持、再生に関与しているこ
とが考えられる。この作用から類推されるヒトスリット
３の医薬への応用として、脊髄損傷や神経切断、各種自
己免疫疾患、骨粗鬆症、脊椎変性症など、脊髄、末梢神
経や筋肉系に関与するあらゆる疾患において、脊髄での
神経細胞間および神経細胞と筋肉系の細胞との相互作用
の障害で引き起こされる機能障害の治療や症状緩和に有
用である。症状として例を挙げれば、痛み、しびれ、麻
痺、震え、ひきつり、筋力の衰えなどに用いることが可
能である。

【００３７】ヒトスリット３は神経系だけでなく、甲状
腺、卵巣、前立腺、副腎、小腸、胎盤などの内分泌器官
に発現される。甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体化
ホルモン（ＬＨ）、絨毛性ゴナドトロピン（ＣＧ）およ
び卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）などの糖蛋白ホルモンは
上記の内分泌器官を標的臓器もしくは産生臓器とし、そ
れらリセプターはＧ蛋白質共役型リセプターファミリー
を形成している。これら糖蛋白ホルモンリセプターファ
ミリーの共通点として、細胞外部分のホルモン結合部位
にＬＲＲ構造を有することにある（Ｍ．Ｔｏｎａｃｃｈ
ｅｒａら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｎｄｃｒｉｎｏｌｏｇ
ｙ，４４，６２１−６３３，１９９６）。上記標的臓器
に発現し、４つものＬＲＲ構造を有するヒトスリット３
は、ＬＲＲを介してこれら糖蛋白ホルモンと相互作用
し、対応するホルモンリセプターへの結合性の調節やＥ
ＧＦモチーフを介する異なったリセプターへの結合を仲
介することが可能性として挙げられる。バセドウ病やＩ
ＤＤＭ型糖尿病などの内分泌疾患は、各種ホルモンリセ
プターに対するアゴニスト作用もしくはアンタゴニスト
作用を有する自己抗体の出現がその大きな要因となって
いることが近年の研究により明らかにされている。した
がって、糖蛋白ホルモンとそのリセプターの結合調節は
内分泌領域における疾患の標的として極めて重要であ
り、ヒトスリット３の医薬への応用として、糖蛋白ホル
モンもしくはそのリセプターの異常による疾患や原因不
明の内分泌器官の異常による疾患であるバセドウ病（グ
レーブス病）、橋本病、甲状腺腫、甲状腺機能低下症、
甲状腺機能亢進症、半陰陽、不妊症、糖尿病、血糖異常
症、肥満症、骨形成障害、骨粗鬆症、高血圧、性腺機能
低下症、高脂血症などの治療や症状緩和に用いることが
可能である。

【００３８】ショウジョウバエスリットは正中線グリア
細胞に発現するが、これと同様な表現系を示す分子にｓ
ｉｎｇｌｅ−ｍｉｎｄｅｄ（ｓｉｍ）が知られている
（Ｋｌａｍｂｔら、Ｃｅｌｌ、６４、８０１−８１５、
１９９１）。ｓｉｍは塩基性ヘリックス・ループ・ヘリ
ックス（ｂＨＬＨ）型の転写調節因子であることから、
スリットとｓｉｍはシグナル伝達上の何らかの関連が存
在する可能性がある。ヒトのｓｉｍホモログ遺伝子であ
るｈＳＩＭは第２１番染色体上のダウン症候群領域に位
置することが報告され、ｈＳＩＭとダウン症候群の関連
性が指摘されている（Ｄａｈｍａｎｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９２、９１９１−
９１９５、１９９５）。またＥＧＦモチーフを有する蛋
白質のうち、４８個のＥＧＦモチーフを有するフィブリ
リンの欠損は、先天性疾患のマルファン症候群を引き起
こすことが知られている（Ｐｅｒｅｉｒａら、Ｈｕｍ．
Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．、２、９６１−９６８、１９９
３）。ヒトスリット３に関しても、ショウジョウバエス
リットの単一遺伝子欠損が致死的な影響を与えることか
ら、ヒトスリット３の欠損もしくは変異は、致死的もし
くは先天性の障害、後天的な疾患の原因になることが推
定される。

【００３９】クローン化された本発明のヒトスリット３
をコードするＤＮＡは、目的によりそのまま、あるいは
所望により制限酵素で消化して使用することができる。
クローン化されたＤＮＡから発現させたい領域を切り出
し、発現に適したベクター中のプロモータの下流に連結
して組換えＤＮＡ体を得ることができる。また、更にそ
の形態としては単独のポリペプチドでもかまわないが、
複合体の形態を有するポリペプチドでも可能である。本
発明で使用する「複合体」は２種類以上の物質を単に混
ぜ合わせた混合物ではなく、１種類もしくは２種類以上
のポリペプチドが共有結合を含む何らかの結合様式を有
してなる化合物、コンジュゲート、またはコンプレック
スの総称を意味する。そのような例としては、イムノグ
ロブリンとのキメラ蛋白質のジスルフィド結合による共
有結合を介した複合体、または実施例５で作製されたＦ
ＬＡＧ配列を有するポリペプチドと抗ＦＬＡＧ抗体によ
る抗原抗体反応を介した複合体などの形態が挙げられ
る。

【００４０】さらにヒトＩｇＧのＦｃ部分とのキメラ蛋
白質として発現させて、抗体のヒンジ部分によりジスル
フィド結合を介した多量体として発現させる方法、ま
た、抗体認識部位をＣ末もしくはＮ末に発現するキメラ
蛋白質として発現させ、発現させた該ポリペプチドのＣ
末もしくはＮ末の抗体認識部位を特異的に認識する抗体
と反応させることにより、多量体を形成させる方法が挙
げられる。したがって、遺伝子工学的な技術により２量
体もしくはそれ以上の形態を有する配列表の配列番号１
記載のアミノ酸配列を有するポリペプチドに関しても本
発明に含まれる。

【００４１】該ヒトスリット３の発現ベクターとして
は、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミ
ド、酵母由来プラスミド、あるいはλファージなどのバ
クテリオファージ、およびレトロウィルス、ワクシニア
ウィルスなどの動物ウィルスなどが挙げられる。プロモ
ータとしては、遺伝子発現に用いる宿主に対応していて
適切なプロモータであればいかなるものでもよい。

【００４２】こうして得られる組換えＤＮＡ体は、動物
細胞、昆虫細胞、酵母、カビなどの真核細胞や、バクテ
リア、放線菌などの原核細胞を宿主として形質転換され
た細胞を得ることができる。形質転換されうる細胞の例
としては、真核細胞としてサル細胞であるＣＯＳ−１、
Ｖｅｒｏ、チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ、カイコ
細胞ＳＦ９等が挙げられ、原核細胞としてエシェリヒア
属菌、バチルス属菌等が挙げられる。これらの形質転換
された細胞を用いて、リコンビナントの当該ヒトスリッ
ト３を生産、精製させることが可能である。これらの操
作に関して、多数の方法が成書によって知られている
（Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａ
ｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ − Ａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓ，
１９９０および横田ら, バイオマニュアルシリーズ４,
遺伝子導入と発現・解析法, 羊土社, １９９４）。

【００４３】かくして得られた該ヒトスリット３を用い
れば、ヒトスリット３の生理活性探索が可能である。ヒ
トスリット３は脊髄、甲状腺、卵巣、心臓、前立腺、小
腸、副腎、気管、骨格筋、胎盤、結腸、胸腺、リンパ節
に発現する。また、ショウジョウバエでは発生時の正中
線に特異的に発現するが、脊椎動物でこれに相当する部
位は底板および蓋板にあたる。実験動物よりこれらの臓
器の組織、あるいは各種細胞株を培養し、該ヒトスリッ
ト３を作用させることにより、インビトロの生理活性探
索のアッセイ系を構築しうる。さらにこのアッセイ系を
応用すれば、該ポリペプチドの作用を阻害する化合物の
スクリーニングが可能である。

【００４４】本発明のヒトスリット３を医薬品として用
いるならば、上記に示した形態を有する本発明のヒトス
リット３を適当な安定化剤、例えばヒト血清アルブミン
などと共に凍結乾燥品を作製し、用時注射用蒸留水にて
溶解もしくは懸濁して使用し得る形状が望ましい。例え
ば１乃至１０００μｇ／ｍｌの濃度に調製した注射剤、
点滴剤として提供することができる。本発明者らは本発
明のヒトスリット３を１ｍｇ／ｍｌ、ヒト血清アルブミ
ン１ｍｇ／ｍｌとなるようにバイアルに小分けし、長期
にわたって該ポリペプチドの物理的、化学的性状は保持
された。また、該ヒトスリット３の毒性については、マ
ウスに対して１０ｍｇ／Ｋｇを腹腔内投与したがマウス
の死亡例は確認されなかった。

【００４５】また、本発明のポリペプチドのインビボに
おける生理活性は、あらゆる疾患モデルマウス、または
それらに準ずる疾患に似た症状を呈するラット、サル等
の動物をモデルとして投与を行い、その身体的、生理的
な機能の回復、異常を調べることにより可能となる。勿
論、これらの結果が人にも外挿できるため、該ヒトスリ
ット３の薬効としての評価として有効なデータを得るこ
とが出来る。

【００４６】本発明のヒトスリット３を医薬品として利
用する場合、その適応分野として、脊髄、甲状腺、卵
巣、前立腺、副腎、小腸、心臓、気管、胸腺、リンパ
節、結腸、筋肉系の異常に起因する疾患、好ましくは甲
状腺の機能不全に起因する疾患が対象となる。その際の
投与量としてはその形態などにもよるが、具体的には１
０μｇ／Ｋｇから１０ｍｇ／Ｋｇ程度投与すればよい。

【００４７】該ヒトスリット３を特異的に認識する抗体
は実施例７に示したように作製することができる。また
成書（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙｍａｎｕａｌ，Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ）に示された各種の方法ならびに遺伝子クローニ
ング法などにより分離されたイムノグロブリン遺伝子を
用いて、細胞に発現させた遺伝子組換え体抗体によって
も作製することができる。このように作製された抗体は
該ヒトスリット３の精製に利用できる。すなわち、実施
例７に示したごとく、該ヒトスリット３を特異的に認識
する抗体を用いれば、ヒトスリット３の検出、測定が可
能であり、上記に示した疾患などの診断薬として使用で
き得る。

【００４８】尚、本明細書に記載されているｃＤＮＡの
作製、ノーザンブロットによる発現の検討、ハイブリダ
イゼーションによるスクリーニング、組換えＤＮＡの作
製、ＤＮＡの塩基配列の決定、ｃＤＮＡライブラリーの
作製等の操作は、当業者間で通常行われているものであ
り、実験書としては、たとえば、Ｍａｎｉａｔｉｓらの
編集したＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙｍａｎｕａｌ，１９８９，Ｅｄ
ｓ．，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．
Ｆ．，ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．，Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌｏｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐ
ｒｅｓｓに従えば容易に実施できる。使用する酵素、試
薬類も全て市販の製品を用いることができ、特に断らな
い限り、製品で指定されている使用条件に従えば、完全
にそれらの目的を達成することができる。なお使用する
制限酵素は宝酒造、東洋紡、ニューイングランドバイオ
ラボの各社等より適宜入手することが出来る。

【００４９】

【発明の実施の形態】以下に発明を実施する形態につい
て例を示すが、必ずしもこれらに限定されるものではな
い。

【００５０】

【参考例１】 ヒトスリット１クローニングのためのＰＣＲプライマー
の作製およびＰＣＲ Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｔ０８０４９のクローンに対応
するＰＣＲプライマーとして、配列表の配列番号９記載
の塩基配列のセンスプライマーＴ０８０４９Ｓ、および
配列番号１０記載の塩基配列のアンチセンスプライマー
Ｔ０８０４９Ａの合成オリゴＤＮＡを作製した。

【００５１】合成オリゴヌクレオチドは固相法を原理と
する全自動ＤＮＡ合成機を使用して作製した。全自動Ｄ
ＮＡ合成機としてはアプライドバイオシステム社３９１
ＰＣＲ−ＭＡＴＥを使用した。ヌクレオチド、３'-ヌク
レオチドを固定した担体、溶液、および試薬は同社の指
示に従って使用した。所定のカップリング反応を終了
し、トリクロロ酢酸で５’末端の保護基を除去したオリ
ゴヌクレオチド担体を濃アンモニア中にて室温で１時間
放置することにより担体からオリゴヌクレオチドを遊離
させた。次に、核酸及びりん酸の保護基を遊離させるた
めに、核酸を含む反応液を、封をしたバイアル内におい
て濃アンモニア溶液中で５５℃にて１４時間以上放置し
た。担体及び保護基を遊離した各々のオリゴヌクレオチ
ドの精製をアプライドバイオシステム社のＯＰＣカート
リッジを使用して行い、２％トリフルオロ酢酸で脱トリ
チル化した。精製後のプライマーは最終濃度が１００ｐ
ｍｏｌ／μｌとなるように脱イオン水に溶解してＰＣＲ
に使用した。

【００５２】ＰＣＲによる増幅は以下のように行った。
ヒト胎児脳由来ｃＤＮＡ混合溶液（ＱＵＩＣＫ−Ｃｌｏ
ｎｅ ｃＤＮＡ、ＣＬＯＮＴＥＣＨ社）１μｌを使用
し、１０×緩衝液（５００ｍＭ ＫＣｌ、１００ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、１５ｍＭ ＭｇＣｌ
₂ 、０．０１％ゼラチン）５μｌ、ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔ
ｕｒｅ（宝酒造社製）４μｌ、前述のセンスプライマー
Ｔ０８０４９Ｓ（１００ｐｍｏｌ／μｌ）およびアンチ
センスプライマーＴ０８０４９Ａ（１００ｐｍｏｌ／μ
ｌ）を各０．２５μｌ、及びＴａｑＤＮＡポリメラーゼ
（ＡｍｐｌｉＴａｑ：宝酒造社製、５Ｕ／μｌ）０．２
μｌを加え、最後に蒸留水を加えて全量を５０μｌとし
て、９５℃で４５秒間、５５℃で４５秒間、７２℃を２
分間からなる行程を１サイクルとして、この行程を３５
サイクル行い最後に７２℃にて７分間放置してＰＣＲを
行った。このＰＣＲ産物の一部を２％アガロースゲル電
気泳動を行い、エチジウムブロマイド（日本ジーン社
製）にて染色後、紫外線下で観察し、約２５０ｂｐのｃ
ＤＮＡが増幅されていることを確認した。

【００５３】こうして得られたＴ０８０４９に対応する
ＰＣＲプライマーによるＰＣＲ産物の全量は、低融点ア
ガロース（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製）にて作製した２％
アガロースゲルにて電気泳動し、エチジウムブロマイド
にて染色後、紫外線照射下にて約２５０ｂｐのバンドを
切り出し、ゲルと同体積の蒸留水を加え、６５℃にて１
０分間加熱し、ゲルを完全に溶かしたのち、等量のＴＥ
飽和フェノール（日本ジーン社製）を加えて、１５００
０ｒｐｍ５分間遠心分離後上清を分離し、さらに同様な
分離作業をＴＥ飽和フェノール：クロロフォルム（１：
１）溶液、さらにクロロフォルムにて行った。最終的に
得られた溶液からＤＮＡをエタノール沈澱して回収し
た。

【００５４】プラスミドベクターとしてｐＣＲＩＩ Ｖ
ｅｃｔｏｒ（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ社製、以下ｐＣＲ
ＩＩと示す）を用い、このプラスミドベクターと先のＤ
ＮＡのモル比が１：３となるように混ぜ合わせて、Ｔ４
ＤＮＡリガーゼ（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ社製）にて
プラスミドベクターにＤＮＡを組み込んだ。ＤＮＡが組
み込まれたｐＣＲＩＩを大腸菌Ｏｎｅ Ｓｈｏｔ Ｃｏ
ｍｐｅｔｅｎｔ Ｃｅｌｌｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
社）に遺伝子導入し、アンピシリン（Ｓｉｇｍａ社製）
を５０μｇ／ｍｌ含むＬ−Ｂｒｏｔｈ（宝酒造社製）半
固型培地のプレートに蒔き、１２時間程度３７℃に放置
し、現れてきたコロニーを無作為選択し、同濃度のアン
ピシリンを含むＬ−Ｂｒｏｔｈ液体培地２ｍｌに植え付
け、１８時間程度３７℃で振盪培養し、菌体を回収し、
ウィザードミニプレップ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用い
て添付の説明書に従ってプラスミドベクターを分離し、
このプラスミドベクターを制限酵素ＥｃｏＲＩにて消化
して、約２５０ｂｐのＤＮＡが切り出されてくることで
該ＰＣＲ産物が組み込まれていることを確認し、確認さ
れたプラスミドベクタークローンについて、組み込まれ
ているＤＮＡの塩基配列を螢光ＤＮＡシークエンサー
（アプライドバイオシステム社、モデル３７３Ｓ）にて
調べ、上記プライマーによって挟まれるＴ０８０４９の
塩基配列と相同であることを確認した。このクローンを
￥９／ｐＣＲＩＩと名付けた。

【００５５】

【参考例２】 新規ヒトスリット１遺伝子の全長クローニングおよび塩
基配列の決定 ヒト胎児脳由来のｃＤＮＡライブラリー（ラムダファー
ジベクターλｇｔ−１０にｃＤＮＡが挿入されたもの、
ＣＬＯＮＴＥＣＨ社製）からプラークハイブリダイゼ−
ションにて全長ｃＤＮＡを持ったクローンの検索を１×
１０⁶ 相当のプラークから行った。出現したプラークを
ナイロンフィルター（Ｈｙｂｏｎｄ Ｎ＋：Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ社製）に転写し、転写したナイロンフィルターを
アルカリ処理（１．５Ｍ ＮａＣｌ、０．５Ｍ ＮａＯ
Ｈを染み込ませたろ紙上に７分間放置）し、次いで中和
処理（１．５Ｍ ＮａＣｌ、０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ７．２）、１ｍＭ ＥＤＴＡを染み込ませたろ
紙上に３分間放置）を２回行い、次にＳＳＰＥ溶液
（０．３６Ｍ ＮａＣｌ、０．０２Ｍ りん酸ナトリウ
ム（ｐＨ７．７）、２ｍＭ ＥＤＴＡ）の２倍溶液中で
５分間振とう後洗浄し、風乾した。その後、０．４Ｍ
ＮａＯＨを染み込ませたろ紙上に２０分間放置し、５倍
濃度のＳＳＰＥ溶液で５分間振とう後洗浄し、再度風乾
した。このフィルターを用いて放射性同位元素³²Ｐにて
標識された参考例１記載の約２５０ｂｐのＤＮＡ断片を
プローブとしてスクリーニングを行った。

【００５６】放射性同位元素³²Ｐにて標識された先のＤ
ＮＡプローブは以下のように作成した。すなわち、参考
例１記載の￥９／ｐＣＲＩＩは制限酵素ＥｃｏＲＩにて
消化し、低融点アガロースゲルにて電気泳動し、約２５
０ｂｐのＤＮＡ断片を精製回収した。得られたＤＮＡ断
片をＤＮＡラベリングキット（ＭｅｇａｐｒｉｍｅＤＮ
Ａ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ：Ａｍｅｒｓｈａ
ｍ社製）を用いて標識した。すなわち、ＤＮＡ２５ｎｇ
にプライマー液５μｌ及び脱イオン水を加えて全量を３
３μｌとして沸騰水浴を５分間行い、その後、ｄＮＴＰ
を含む反応緩衝液１０μｌ、α−³²Ｐ−ｄＣＴＰ５μ
ｌ、及びＴ４ＤＮＡポリヌクレオチドキナーゼ溶液２μ
ｌを加えて、３７℃で１０分間水浴し、更にその後、セ
ファデックスカラム（Ｑｕｉｃｋ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕ
ｍｎ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０：ベーリンガーマン
ハイム社製）で精製し、５分間沸騰水浴をしたのち、２
分間氷冷後使用した。

【００５７】前述の方法にて作成したフィルターを、各
々の成分の最終濃度が５倍濃度のＳＳＰＥ溶液、５倍濃
度のデンハルト液（和光純薬社製）、０．５％ＳＤＳ
（ドデシル硫酸ナトリウム）、及び１０μｇ／ｍｌの沸
騰水浴により変性したサケ精子ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ社
製）であるプレハイブリダイゼーション液中に浸し、６
５℃にて２時間振とうしたのち、前述の方法で³²Ｐ標識
されたプローブを含むプレハイブリダイゼーション液と
同一組成のハイブリダイゼーション液に浸し、５５℃に
て１６時間振盪し、ハイブリダイゼーションを行った。

【００５８】次に、フィルターを０．１％ＳＤＳを含む
ＳＳＰＥ溶液に浸し、５５℃にて振盪し２回洗浄後、さ
らに０．１％ＳＤＳを含む１０倍希釈したＳＳＰＥ溶液
に浸し、５５℃にて４回洗浄した。洗浄を終了したフィ
ルターを増感スクリーンを使用して、オートラジオグラ
フィーを行った。その結果、強く露光された部分のクロ
ーンを拾い、再度プラークを蒔き直し前述の方法にてス
クリーニングを行い、完全に単独のクローンを分離し
た。

【００５９】単離されたファージクローンは２７クロー
ンであった。成書の方法に従い、これらのすべてのクロ
ーンのファージを約１×１０⁹ ｐｆｕ調製し、ファージ
ＤＮＡを精製し、制限酵素ＥｃｏＲＩにて消化し、同様
にＥｃｏＲＩで消化したｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩ
ＫＳ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製、以下ｐＢｌｕｅｓ
ｃｒｉｐｔと示す）ファージミドベクターに組み込ん
だ。これらのクローンの両端の塩基配列をＭ１３リバー
サルプライマーおよびＭ１３ユニバーサルプライマーを
用いてＤＮＡシークエンサーにより解析したところ、＃
５１クローンは配列表の配列番号５のＤＮＡ配列の３１
０７番から５０９４番、＃９クローンは同配列表の１６
８４番から３８５３番、＃４３クローンは同配列表の２
０９２番から４６６３番に相当する配列を含むクローン
であった。このほか、塩基配列の一部を解析した＃１０
および＃１７のクローンを含め、これらのクローンをキ
ロシークエンス用デリションキット（宝酒造社製）を用
いて添付の説明書に従ってデリションミュータントを作
製し、ＤＮＡシークエンサーを用いて５’方向、３’方
向の両方向から、ｃＤＮＡ塩基配列を解析した。その結
果、同配列表の１６８４番から５０９４番に相当する塩
基配列を確定した。

【００６０】しかし、同配列表の４８３５番に相当する
部分に終止コドンを見いだしたが、５’側には開始コド
ンと判断しうる配列を見いだせなかったため、５’ＲＡ
ＣＥシステム（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ社製）を用いて添付
の説明書に従い５’ＲＡＣＥ（ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉ
ｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ）を試
み、得られたＤＮＡ断片をｐＣＲＩＩベクターに組み込
み、ＤＮＡシークエンサーでこのＤＮＡ断片の塩基配列
を調べたところ、配列表の配列番号５記載の塩基配列の
１２５１番から１７０２番に相当するクローンＲＡＣＥ
１を見いだし、このクローンの塩基配列を決定した。

【００６１】さらに同様の方法で５’ＲＡＣＥを繰り返
し、同配列表の２５７番から１３０８番に相当するクロ
ーンＲＡＣＥ２を見いだし、塩基配列を決定した。そこ
でなお開始コドンと判断しうる配列を見いだせなかった
ため、同配列表の２８０番から６６１番に相当するＤＮ
Ａ断片ｓｌｉ６をクローンＲＡＣＥ２をテンプレートと
してＰＣＲにて作製し、上記のプラークハイブリダイゼ
ーションと同様の方法で、ヒト胎児脳由来ｃＤＮＡライ
ブラリーのスクリーニングを行った。その結果、４６個
の陽性のファージクローンを得、これらのいくつかのフ
ァージクローンからファージＤＮＡを精製し、制限酵素
ＥｃｏＲＩにて消化し、同様にＥｃｏＲＩで消化したｐ
ＵＣ１８プラスミドベクター（東洋紡社販売）に組み込
んだ後、両端をＤＮＡシークエンサーによって塩基配列
の解析をしたところ、＃２．１クローンは同配列表の１
番から１２７０番、＃２．８クローンは同配列表の１番
から７８６番、＃２．２０クローンは同配列表の３５５
番から２６７９番、＃２．２２クローンは同配列表の２
９３番から２１８７番に相当する塩基配列を含むクロー
ンであり、＃２．１および＃２．８クローンの同配列表
の１番から２５７番に相当する塩基配列を確定し、同配
列表の２３３番から２３５番に相当するアミノ酸フレー
ムに合致する開始コドンを見いだし、この周辺の塩基配
列をＫｏｚａｋらの報告（Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，
１１５，８８７−９０３，１９９１）と照らし合わせ、
開始コドンに相違ないことを確認した。

【００６２】次に該ヒトスリット１のオープンリーディ
ングフレーム全長を含むプラスミドベクターを作製し
た。すなわち、クローン＃９を制限酵素ＡｆｌＩＩとＳ
ｐｈＩで消化し、これを電気泳動することによって得ら
れる約０．８ｋｂのＤＮＡ断片を、同様に処理したクロ
ーン＃２．２０の約５ｋｂのＤＮＡ断片につなぎ、これ
をクローン（３５５−３４４４）／ｐＵＣ１８とし、さ
らにクローン（３５５−３４４４）／ｐＵＣ１８を制限
酵素ＨｉｎｄＩＩＩとＳｐｈＩで消化して得られる約
２．８ｋｂのＤＮＡ断片を、同様に処理したクローン＃
５１の約４．７ｋｂのＤＮＡ断片につなぎ、これをクロ
ーン（６８６−５０９４）／ｐＢＳとし、クローン＃
２．１を制限酵素ＳａｌＩとＨｉｎｄＩＩＩで消化して
得られる約０．７ｋｂのＤＮＡ断片を、同様に処理した
クローン（６８６−５０９４）／ｐＢＳの７．４ｋｂの
ＤＮＡ断片につなぎ、配列表の配列番号５に記載の全て
のＤＮＡ配列を有するＤＮＡ断片を含むプラスミドｐＨ
ＳＬを作製した。プラスミドｐＨＳＬは大腸菌株ＪＭ１
０９に遺伝子導入した。さらにプラスミドｐＨＳＬに含
まれるヒトスリット１のＤＮＡ配列より３’非転写領域
を除いた塩基配列を有するプラスミドｐＢＳＳｌｉｔを
作製し、大腸菌株ＤＨ５（東洋紡社製）に遺伝子導入し
た。この菌株、Ｅ．ｃｏｌｉ：ＤＨ５−ｐＢＳＳｌｉｔ
は日本国通産省工業技術院生命工学工業技術研究所に受
託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５９２０として平成８年１０月
２８日に寄託されている。

【００６３】

【参考例３】 ノザンブロッティングによる新規ヒトスリット１のｍＲ
ＮＡ発現部位の特定 新規ヒトスリット１のｍＲＮＡの発現を調べるため、あ
らかじめｍＲＮＡが転写されているフィルターである、
Ｈｕｍａｎ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ＴｉｓｓｕｅＮｏｒｔ
ｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ 、Ｈｕｍａｎ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ
Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ ＩＩ、
Ｈｕｍａｎ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒ
ｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ ＩＩＩ、Ｈｕｍａｎ Ｆｅｔａ
ｌ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒ
ｎ Ｂｌｏｔ、Ｈｕｍａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ
Ｌｉｎｅ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔ
ｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ、Ｈｕｍａｎ Ｂｒａｉｎ Ｍｕｌ
ｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏ
ｔ、Ｈｕｍａｎ Ｂｒａｉｎ ＭｕｌｔｉｐｌｅＴｉｓ
ｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ ＩＩ、Ｈｕｍａ
ｎ ＢｒａｉｎＭｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏ
ｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ ＩＩＩ（すべてＣｌｏｎｔｅ
ｃｈ社）を用い、参考例２に記載の配列表の配列番号５
の２８０番から６６１番に相当するＤＮＡ断片ｓｌｉ６
を前掲のＤＮＡラベリングキット（ＭｅｇａＰｒｉｍｅ
ＤＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ：Ａｍｅｒ
ｓｈａｍ社製）にて前述の方法で³²Ｐ標識し発現を調べ
た。

【００６４】その結果、ヒト成人組織のうち脳のみに発
現が認められた。しかしながら、心臓、胎盤、肺、肝
臓、骨格筋、腎臓、すい臓、脾臓、前立腺、卵巣、胸
腺、精巣、小腸、大腸、末梢血リンパ球、胃、甲状腺、
脊髄、リンパ節、気管、副腎、骨髄においては発現が認
められなかった。またヒト胎児組織では脳に強く、肺、
腎臓に弱い発現が認められたが、肝臓においては発現が
認められなかった。癌細胞ではリンパ芽球白血病株ＭＯ
ＬＴ−４と結腸直腸上皮癌株ＳＷ４８０に発現が認めら
れたが、前骨髄球白血病株ＨＬ−６０、ＨｅＬａ細胞Ｓ
３株、慢性骨髄腫白血病株Ｋ５６２、バーキットリンパ
腫Ｒａｊｉ株、肺癌株Ａ５４９、黒色腫Ｇ３６１には発
現が認められなかった。脳組織では、大脳皮質のうち特
に前頭葉で強い発現が認められ、視床下部扁桃体、ｃａ
ｕｄａｔｅ ｎｕｃｌｅｕｓ、海馬、視床下部、ｓｕｂ
ｔｈａｌａｍｉｃ ｎｕｃｌｅｕｓ、ｐｕｔａｍｅｎに
発現が認められ、ｃｏｒｐｕｓ ｃａｌｌｏｓｕｍ、ｓ
ｕｂｔｈａｌａｍｉｃ ｎｉｇｒａに弱い発現が認めら
れ、視床、小脳、延髄、脊髄には発現が認められなかっ
た。

【００６５】発現の認められた臓器では、約８．４ｋｂ
のメインバンドのほか、約５．９ｋｂの発現の弱いバン
ドが観察された。

【００６６】

【実施例１】 ヒトスリット１の塩基配列にホモロジーを有するＥＳＴ
のｃＤＮＡクローンの塩基配列決定 Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｔ６５５２１のｃＤＮＡクロー
ン２１６５１（このｃＤＮＡクローンはゲノムシステム
ズ社が販売、日本国内ではクラボウより入手可能）は、
蛍光ＤＮＡシークエンサー（アプライドバイオシステム
社、モデル３７３Ｓ）にて塩基配列を調べた。ｃＤＮＡ
クローン２１６５１は約２．８ｋｂのＤＮＡ断片の大き
さを有し、配列表の配列番号２記載の塩基配列の１９８
２番から３６１１番および３９１２番から５０１５番に
相当する塩基配列を有しており、同塩基配列から翻訳さ
れうるアミノ酸配列は、先願のヒトスリット１のＬＲＲ
４から第５ＥＧＦモチーフまでのアミノ酸配列、および
ＡＬＰＳドメインからＣ末までのアミノ酸配列とホモロ
ジーを有していた。

【００６７】

【実施例２】 新規ヒトスリット３をコードするＤＮＡの全長クローニ
ングおよび塩基配列の決定 （１）ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング ヒト胎児肺由来のｃＤＮＡライブラリー（ラムダファー
ジベクターλｇｔ−１０にｃＤＮＡが挿入されたもの、
ＣＬＯＮＴＥＣＨ社製）からプラークハイブリダイゼ−
ションにて全長ｃＤＮＡを持ったクローンの検索を１×
１０⁶ 相当のプラークから行った。出現したプラークを
ナイロンフィルター（Ｈｙｂｏｎｄ Ｎ＋：Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ社製）に転写し、転写したナイロンフィルターを
アルカリ処理（１．５Ｍ ＮａＣｌ、０．５Ｍ ＮａＯ
Ｈを染み込ませたろ紙上に７分間放置）し、次いで中和
処理（１．５Ｍ ＮａＣｌ、０．５Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ７．２）、１ｍＭ ＥＤＴＡを染み込ませたろ
紙上に３分間放置）を２回行い、次にＳＳＰＥ溶液
（０．３６Ｍ ＮａＣｌ、０．０２Ｍ りん酸ナトリウ
ム（ｐＨ７．７）、２ｍＭ ＥＤＴＡ）の２倍溶液中で
５分間振とう後洗浄し、風乾した。その後、０．４Ｍ
ＮａＯＨを染み込ませたろ紙上に２０分間放置し、５倍
濃度のＳＳＰＥ溶液で５分間振とう後洗浄し、再度風乾
した。このフィルターを用いて放射性同位元素³²Ｐにて
標識された実施例１記載のＤＮＡ断片の一部をプローブ
としてスクリーニングを行った。

【００６８】放射性同位元素³²Ｐにて標識された先のＤ
ＮＡプローブは以下のように作製した。すなわち、実施
例１記載のｃＤＮＡクローン２１６５１をテンプレート
にＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａ
ｃｔｉｏｎ）を行い、配列表の配列番号２の塩基配列の
１９８２番から２４７０番に該当する約４９０ｂｐの遺
伝子断片を得、このＤＮＡ断片をＤＮＡラベリングキッ
ト（Ｍｅｇａｐｒｉｍｅ ＤＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ
ｓｙｓｔｅｍ ＲＰＮ１６０７：Ａｍｅｒｓｈａｍ社
製）を用いて標識した。すなわち、ＤＮＡ１００ｎｇに
プライマー液５μｌ及び脱イオン水を加えて全量を３３
μｌとして沸騰水浴を５分間行い、ｄＮＴＰを含む反応
緩衝液１０μｌ、Ｒｅｄｉｖｕｅ［α−³²Ｐ］ｄＣＴＰ
（アマシャム社）５μｌ、及びクレノーＤＮＡポリメラ
ーゼ溶液２μｌを加えて、３７℃で１０分間水浴し、ゲ
ルろ過カラム（Ｍｉｃｒｏ Ｓｐｉｎ ＨＲ−２００
Ｃｏｌｕｍｎｓ：ファルマシア社製）で精製し、５分間
沸騰水浴をしたのち、２分間氷冷後使用した。

【００６９】前述の方法にて作製したフィルターを、各
々の成分の最終濃度が５倍濃度のＳＳＰＥ溶液、５倍濃
度のデンハルト液（和光純薬社製）、０．５％ＳＤＳ
（ドデシル硫酸ナトリウム）、及び１０μｇ／ｍｌの沸
騰水浴により変性したサケ精子ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ社
製）であるプレハイブリダイゼーション液中に浸し、６
５℃にて２時間振とうしたのち、前述の方法で³²Ｐ標識
されたプローブを含むプレハイブリダイゼーション液と
同一組成のハイブリダイゼーション液に浸し、６５℃に
て１６時間振盪し、ハイブリダイゼーションを行った。

【００７０】次に、フィルターを０．１％ＳＤＳを含む
２倍濃度のＳＳＣ溶液に浸し、６５℃にて１０分間洗浄
し、さらに０．１％ＳＤＳを含む２倍希釈したＳＳＣ溶
液に浸し、６５℃にて１５分間洗浄し、さらに０．１％
ＳＤＳを含む１０倍希釈したＳＳＣ溶液に浸し、６５℃
にて１０分間洗浄した。洗浄を終了したフィルターをオ
ートラジオグラフィーを行った。その結果、露光された
部分のクローンを拾い、再度プラークを蒔き直し前述の
方法にてスクリーニングを行い、完全に単独のクローン
を分離した。

【００７１】単離されたファージクローンはクローン＃
４１を一例とする９クローンであった。成書の方法に従
い、これらのすべてのクローンのファージを約１×１０
⁹ ｐｆｕ調製し、ファージＤＮＡを精製し、制限酵素Ｅ
ｃｏＲＩにて消化した。ファージベクターに挿入されて
いたｃＤＮＡ断片は、ＥｃｏＲＩで消化した後に大腸菌
アルカリホスファターゼ処理したｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐ
ｔ ＩＩ ＫＳ＋（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製、以下ｐ
Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔと示す）プラスミドベクターに組
み込んだ。

【００７２】これらのｃＤＮＡ断片の両端の塩基配列を
蛍光シークエンサーにより調べたところ、３’側のポリ
Ａ配列を有するクローンは２クローン得られたが、先願
のヒトスリット１のＮ末とホモロジーを有するアミノ酸
配列をコードする５’側の塩基配列を有するクローンが
得られていなかった。そこでクローン＃４１のｃＤＮＡ
断片をテンプレートとしてＰＣＲを行うことにより、配
列表の配列番号２の塩基配列の１１１７番から１６０６
番に相当する約４９０ｂｐのＤＮＡ断片を得、これをプ
ローブとして上記と同様な方法でｃＤＮＡライブラリー
の再スクリーニングを行った。その結果、あらたに３ク
ローンが得られ、そのうちクローン＃８７のＤＮＡ断片
は先願のヒトスリット１のＮ末にホモロジーを有するア
ミノ酸配列をコードする塩基配列を含み、さらに配列表
の配列番号２の塩基配列の１番から２６３番までの５’
側の非翻訳領域に相当する配列を含んでいた。 （２）塩基配列の決定 新規ヒトスリット３の塩基配列の決定にあたり、上記の
１２クローンのファージクローンから得られたｃＤＮＡ
断片の塩基配列を解析し、これらのクローンの共通配列
部分をつなぎ合わせて該ヒトスリット３のオープンリー
ディングフレーム全長を含む５０１５塩基からなる塩基
配列を決定した。配列決定に使用したクローンの＃１
０、＃２２、＃４１、＃４７、＃４８、＃４９、＃５
２、＃６４、＃６７、＃８５、＃８７は配列表の配列番
号２記載の塩基配列の１２０９番から３６０１番、１３
９７番から２４４７番、１０９５番から５０１５番、１
５３２番から３５９８番、８４６番から２４５２番、１
５３２番から３５９８番、２１９２番から５０１５番、
１３６５番から３３９９番、１２４５番から３８９９
番、４４８番から１８６９番、１番から１０５３番に相
当するＤＮＡ断片を含んでいた。クローン＃８６は同配
列表の５３７番から始まる約３ｋｂのｃＤＮＡ断片を含
んでいたが、３’側の配列は他のクローンと全く異なっ
た配列を有していたため、このクローンは塩基配列の解
析からは除外した。クローン＃８７の塩基配列の解析の
結果、配列表の配列番号２記載の塩基配列の２６４番か
ら始まるアミノ酸フレームに合致する開始コドンを見い
だし、この周辺の塩基配列をＫｏｚａｋらの報告（Ｊ．
Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１５，８８７−９０３，１９
９１）と照らし合わせ、開始コドンに相違ないことを確
認した。また同配列表の４８３３番に終止コドンを見い
だし、該ＤＮＡ配列は配列表の配列番号３記載の１５２
３残基からなるアミノ酸配列をコードすることを見いだ
した。さらに該アミノ酸配列をＫｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔ
ｔｌｅの方法（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０
５，１９８２）に従ってアミノ酸配列の疎水性部分を解
析し、またＨｅｉｊｎｅの報告（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１４，４６８３−４６９０，
１９８６）を参考にして、同配列表の−２７番メチオニ
ンから−１番セリンにあたる２７残基のシグナルペプチ
ドの存在を推定した。シグナルペプチドを除いた成熟体
型ポリペプチドのアミノ酸配列を配列表の配列番号１に
示した。但し、配列表の配列番号２記載の塩基配列には
３’非翻訳領域の一部は本発明に不要との理由で削除し
てある。

【００７３】複数クローンの塩基配列の比較の結果、オ
ルタナティブスプライシングおよびポイントミューテー
ションにより生じたと考えられる一部配列の不一致が見
出された。すなわち、クローン＃４１では配列表の配列
番号２記載の塩基配列の４５９８番と４５９９番の間に
配列表の配列番号７記載の１０１塩基対が挿入されてお
り、実施例１で塩基配列を解析したクローン２１６５１
は配列表の配列番号２記載の塩基配列の３６１２番から
３９１１番にあたる３００塩基対が欠落していた。上記
クローン＃４１の塩基配列から推定されるアミノ酸配列
は、配列表の配列番号１記載のアミノ酸配列の１番グリ
シンから１４１８番グルタミンまでは他クローンと同一
の配列を有するが、その後に配列表の配列番号８記載の
２７残基のアミノ酸配列が続いて終止コドンが現れる。
またポイントミューテーションの例では、配列表の配列
番号２記載の塩基配列の２３６０番ＴがＣに、３７０７
番ＴがＣに、４７７２番ＣがＴに変異したクローンが見
出された。 （３）新規ヒトスリット３全長配列をコードするＤＮＡ
を含むベクター作製 次に該ヒトスリット３のオープンリーディングフレーム
全長のＤＮＡを含むプラスミドベクターを作製した。ク
ローン＃５２のＤＮＡ断片を含むプラスミドを制限酵素
ＡｖｒＩＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化して得られる約
５．９ｋｂのＤＮＡ断片とクローン＃４８のＤＮＡ断片
を含むプラスミドを同様に制限酵素処理して得られる約
１．５ｋｂのＤＮＡ断片をつなぎ、これをｐ（８４６−
ｐｏｌｙＡ）とした。次にクローン＃８７をテンプレー
トとして配列表の配列番号１５記載のプライマーＮＥＫ
ＰＮおよび配列番号１６記載のプライマーＳＬ３１２Ａ
を用いてＰＣＲを行い、得られたＰＣＲ産物を２％アガ
ロースゲル電気泳動を行い、エチジウムブロマイドで染
色後、紫外線照射下で約６５０ｂｐのバンドを形成する
ＤＮＡ断片が観察され、このＤＮＡ断片を含むゲルをメ
スで切り出して、ジーンクリーン（Ｂｉｏ１０１社）を
用いて添付の説明書に従い、ＤＮＡを精製した。このＤ
ＮＡ断片をプラスミドベクターｐＣＲ２．１（Ｉｎｖｉ
ｔｒｏｇｅｎ社）のクローニングサイトに挿入し、この
挿入ＤＮＡの塩基配列をＤＮＡシークエンサーにより解
析し、挿入ＤＮＡが配列表の配列番号２記載の塩基配列
の２５４番から８９７番と同一の塩基配列を有し、さら
にその５’側に制限酵素ＫｐｎＩの認識部位が付加され
た配列を有することを確認し、このプラスミドをｐＮＥ
ＫＰＮと命名した。次にｐ（８４６−ｐｏｌｙＡ）を制
限酵素ＫｐｎＩおよびＢｓｔＥＩＩで消化して得られる
約７．４ｋｂのＤＮＡ断片とプラスミドｐＮＥＫＰＮを
同様に制限酵素処理して得られる約０．６ｋｂのＤＮＡ
断片をつなぎ、これをｐＨＳＬ３とした。ｐＨＳＬ３は
ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔのＫｐｎＩサイトとＥｃｏＲＩ
サイトの間に当該ヒトスリット３のオープンリーディン
グフレーム全長を含むｃＤＮＡを含有する。ｐＨＳＬ３
は大腸菌株ＪＭ１０９に遺伝子導入した。

【００７４】

【実施例３】 ノザンブロッティングによる新規ヒトスリット３のｍＲ
ＮＡ発現部位の特定 本新規ヒトスリット３のｍＲＮＡの発現を調べるため、
あらかじめｍＲＮＡが転写されているフィルターであ
る、Ｈｕｍａｎ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎ
ｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ 、Ｈｕｍａｎ Ｍｕｌｔｉ
ｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ
ＩＩ、Ｈｕｍａｎ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ
Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ ＩＩＩ、Ｈｕｍａｎ Ｆ
ｅｔａｌＭｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈ
ｅｒｎ Ｂｌｏｔ（すべてＣｌｏｎｔｅｃｈ社）を用
い、配列表の配列番号２記載の塩基配列の４６３１番か
ら４９２５番に相当するＤＮＡ断片をＰＣＲにより得、
ＤＮＡラベリングキット（ＭｅｇａＰｒｉｍｅ ＤＮＡ
ｌａｂｅｌｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ：Ａｍｅｒｓｈａｍ
社製）にて³²Ｐ標識し実施例２（１）記載の方法と同様
なハイブリダイゼーションを行い、発現を調べた。

【００７５】その結果、ヒト成人組織のうち甲状腺に最
も強い発現が認められた。次いで卵巣、小腸、心臓に強
い発現が、脊髄、気管、副腎、胸腺、前立腺、胎盤、リ
ンパ節、骨格筋、結腸にも発現が認められた。しかしな
がら脳、肺、肝臓、腎臓、膵臓、脾臓、精巣、末梢血リ
ンパ球、胃、骨髄には発現が認められなかった。またヒ
ト胎児組織では肺、腎臓に発現が認められたが、脳、肝
臓においては発現が認められなかった。発現の認められ
た臓器での転写物のサイズは約５．５ｋのメインバンド
の他に約９．５ｋのバンドも観察された。

【００７６】

【実施例４】 新規ヒトスリット３発現ベクターの作製 実施例２で作製したプラスミドベクターｐＨＳＬ３を用
いて、当該ヒトスリット３のタグ付き蛋白質およびタグ
なし蛋白質の発現ベクターを作製した。該タグ付き蛋白
質の発現ベクターのデザインとして、配列表の配列番号
３記載のアミノ酸配列のポリペプチドの−２７番メチオ
ニンから１４１８番グルタミンまでの１４４５アミノ酸
残基からなるポリペプチドの後に配列表の配列番号１１
記載のアミノ酸配列を有する８アミノ酸残基からなるペ
プチド（以下ＦＬＡＧ配列と表記）を連結してなるポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを、サイトメガロウィルス
プロモーターとネオマイシン耐性遺伝子を有する発現ベ
クターｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）につな
いだ。一方、該タグなし蛋白質の発現ベクターのデザイ
ンとして、配列表の配列番号３記載のアミノ酸配列全長
からなるポリペプチドをコードするＤＮＡをｐｃＤＮＡ
３につないだ。

【００７７】上記タグ付き蛋白質の発現ベクター作製に
あたって、実施例２で作製した新規ヒトスリット３のア
ミノ酸配列全長をコードするＤＮＡを含むベクターｐＨ
ＳＬ３をテンプレートとして配列表の配列番号１２記載
の塩基配列のプライマーＳＬ３１９Ｓおよび配列番号１
３記載の塩基配列のプライマーＨＳＬ３ＦＬＡＧにてＰ
ＣＲを行い、得られたＰＣＲ産物を２％アガロースゲル
電気泳動を行い、エチジウムブロマイドで染色後、紫外
線照射下で約７２０ｂｐのバンドを形成するＤＮＡ断片
が観察され、このＤＮＡ断片を含むゲルをメスで切り出
して、ジーンクリーンを用いてＤＮＡ断片を精製した。
このＤＮＡ断片をプラスミドベクターｐＣＲ２．１のク
ローニングサイトに挿入し、このＤＮＡ断片の塩基配列
をＤＮＡシークエンサーにより解析し、該挿入ＤＮＡが
配列表の配列番号２記載の塩基配列の３９１１番から４
５９８番の６８８ｂｐの塩基配列の後に配列表の配列番
号１４記載の３３ｂｐの塩基配列が連結した塩基配列を
有することを確認し、このプラスミドをｐＣＲ／ＦＬＡ
ＧＸＢＡと命名した。この３３ｂｐの塩基配列は、ＦＬ
ＡＧ配列をコードする塩基配列と終止コドンのＴＧＡと
ＸｂａＩの認識配列であるＴＣＴＡＧＡが連結した配列
を意味する。次にプラスミドｐＣＲ／ＦＬＡＧＸＢＡを
制限酵素ＲｓｒＩＩおよびＸｂａＩで消化して得られる
約４８０ｂｐのＤＮＡ断片をプラスミドｐＨＳＬを同様
に制限酵素で消化して得られる約６．８ｋｂのＤＮＡ断
片につなぎ、このプラスミドをｐＢＳ／ＨＳＬ３ＦＬＡ
Ｇと命名した。さらにプラスミドｐＢＳ／ＨＳＬ３ＦＬ
ＡＧを制限酵素ＫｐｎＩおよびＸｂａＩで消化して得ら
れる約４．４ｋｂのＤＮＡ断片を発現ベクターｐｃＤＮ
Ａ３を同様に制限酵素で消化して得られる約５．４ｋｂ
のＤＮＡ断片につなぎ、得られたプラスミドをｐｃＤＮ
Ａ３／ＨＳＬ３ＦＬＡＧと命名し、当該ヒトスリット３
のタグ付き蛋白質の発現ベクターが完成した。

【００７８】また、当該ヒトスリット３のタグなしの発
現ベクター作製にあたって、実施例２で作製したｐＨＳ
Ｌ３を制限酵素ＫｐｎＩ及びＥｃｏＲＩで消化して得ら
れる約５．０ｋｂのＤＮＡ断片をｐｃＤＮＡ３を同様に
消化して得られる約５．４ｋｂのＤＮＡ断片につなぎ、
得られたプラスミドをｐｃＤＮＡ３／ＨＳＬ３と命名
し、配列表の配列番号３記載の当該ヒトスリット３のシ
グナルペプチドを含むアミノ酸配列全長を発現するベク
ターが完成した。

【００７９】

【実施例５】 ヒトスリット３発現ベクターの細胞への遺伝子導入と発
現 実施例４で作製した発現ベクターはＣＯＳ−７細胞（理
化学研究所、細胞開発銀行から入手可能、ＲＣＢ０５３
９）に遺伝子導入した。遺伝子導入前の細胞の培養はＤ
−ＭＥＭ（ダルベッコ改変ＭＥＭ培地、ＧＩＢＣＯ−Ｂ
ＲＬ社製）１０％ＦＣＳにて培養した。遺伝子導入の前
日に細胞の培地を交換し、細胞数を５×１０⁵ ｃｅｌｌ
ｓ／ｍｌにして一晩培養した。遺伝子導入の当日、遠心
分離にて細胞を沈澱させ、ＰＢＳ（−）にて２回遠心洗
浄後、１ｍＭ ＭｇＣｌ₂ 、ＰＢＳ（−）に１×１０⁷
ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるようにして細胞を調製した。遺
伝子導入はＢｉｏ−Ｒａｄ社製遺伝子導入装置ジーンパ
ルサーを用いたエレクトロポレーション法で行った。上
記の細胞懸濁液を５００μｌエレクトロポレーション専
用セル（０．４ｍｍ）に取り、発現ベクターｐｃＤＮＡ
３／ＨＳＬ３ＦＬＡＧを２０μｇ加え、氷中で５分間放
置した。その後、１回目は２５μＦ，６００Ｖの条件で
電圧をかけ、１分間室温で放置後、更に２回目は９６０
μＦ、２５０Ｖの条件で電圧をかけた。その後、氷中で
５分間放置後、上記の培地１０ｍｌをあらかじめ分注し
た直径１０ｃｍ細胞培養用ディシュに細胞を播種し、３
７℃、５％炭酸ガスインキュベーターで培養した。

【００８０】その翌日、培養上清を除去し、ディッシュ
に付着した細胞をＰＢＳ（−）１０ｍｌで２回洗浄し、
無血清のＤ−ＭＥＭ１０ｍｌを加えてさらに７日間培養
し、培養上清を回収し、セントリコン３０（アミコン社
製）にてバッファーをＰＢＳ（−）に置換すると同時に
１０倍濃縮を行った。こうして得られたサンプルを用い
てウェスタンブロッティング法にてヒトスリット３ＦＬ
ＡＧタグ付き蛋白質の発現を確認した。すなわち、濃縮
した培養上清をＡＣＩジャパン社製のＳＤＳ−ＰＡＧＥ
用電気泳動槽及びＳＤＳ−ＰＡＧＥ用ポリアクリルアミ
ドゲル（グラジエントゲル５−１５％）を用い、添付の
取扱い説明書に従ってＳＤＳ−ＰＡＧＥをおこなった。
サンプルは２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）を加
えて５分間の沸騰水浴加熱処理により還元処理を行な
い、マーカーとしてはアマシャム社製レインボーマーカ
ーを用い、サンプルバッファー、泳動バッファーについ
ては添付の取扱い説明書に従って作製した。ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ終了後、アクリルアミドゲルをＰＶＤＦメンブラ
ンフィルター（ＢｉｏＲａｄ社製）にＢｉｏＲａｄ社製
ミニトランスブロットセルにより転写した。

【００８１】このように作製されたフィルターをブロッ
クエース、ＴＢＳ−Ｔ（２０ｍＭＴｒｉｓ、１３７ｍＭ
ＮａＣｌ（ｐＨ７．６）、０．１％ Ｔｗｅｅｎ ２
０）に４℃一晩振盪してブロッキングした。ＥＣＬウェ
スタンブロッティング検出システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ
社）に添付の説明書に従い、一次抗体としてマウスモノ
クローナル抗体Ａｎｔｉ−ＦＬＡＧ Ｍ２（コダック社
製）、二次抗体としてペルオキシダーゼ標識抗マウスＩ
ｇ羊抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）を反応させた。抗体
の反応時間は各々室温で一時間反応させ、各反応間はＴ
ＢＳ−Ｔにて１０分間室温で振盪洗浄する操作を３回ず
つ繰り返した。最後の洗浄後、フィルターをＥＣＬウエ
スタンブロッティング検出システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ
社製）の反応液に５分間浸し、ポリ塩化ビニリデンラッ
プに包んでＸ線フィルムに感光させた。

【００８２】その結果、当該サンプルは約１９０ｋダル
トンの抗ＦＬＡＧ抗体に反応するバンドを呈することが
観察され、当該ヒトスリット３のタグ付き蛋白質が発現
された。対照としてｐｃＤＮＡ３を導入したＣＯＳ−７
細胞の培養上清を同様に試験したが、抗ＦＬＡＧ抗体に
反応するバンドは検出されなかった。

【００８３】

【実施例６】 遺伝子導入細胞によるヒトスリット３のタグ付き蛋白質
の精製 実施例５の方法で発現が検出された当該ヒトスリット３
のタグ付き蛋白質を含むＣＯＳ−７細胞培養上清を大量
調製し、アフィニティーカラムによって該蛋白質を精製
した。すなわち、実施例５に記載した方法によって取得
した２リットルの培養上清をＡｎｔｉ−ＦＬＡＧ Ｍ２
Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｇｅｌ（コダック社製）を充填し
たカラムに通して、該ヒトスリット３のタグ付き蛋白質
が有するＦＬＡＧ配列とゲルのＡｎｔｉ−ＦＬＡＧ抗体
のアフィニティーにより該蛋白質をカラムに吸着させ
た。カラムは内径１０ｍｍのディスポカラム（バイオラ
ッド社製）を用い、上記ゲルを５ｍｌ充填した。次に、
培養上清タンク→カラム→ペリスターポンプ→培養上清
タンクの環流式回路を組み立て、流速１ｍｌ／分で７２
時間循環させ、該蛋白質をカラムに吸着させた。その
後、カラムをＰＢＳ（−）３５ｍｌで洗浄し、０．５Ｍ
Ｔｒｉｓ−グリシン（ｐＨ３．０）５０ｍｌで溶出し
た。あらかじめ小チューブ（ファルコン社製２０６３）
に０．５ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ９．５）を２００μ
ｌ分注しておき、溶出液は２ｍｌずつ２５画分をそのチ
ューブに分取し、各々の画分を中和した。

【００８４】上記の方法で精製された該蛋白質の溶出画
分の各１０μｌは実施例５に記載の還元処理を行い、５
−１５％濃度勾配ポリアクリルアミドゲルによるＳＤＳ
−ＰＡＧＥ電気泳動を行い、電気泳動終了後、和光純薬
社製ワコー銀染キットＩＩを用いて、添付の説明書に従
って銀染色を行った。第４番から第８番の溶出画分に約
１９０ｋダルトンのバンドが検出され、この分子量は実
施例５で得られた抗ＦＬＡＧ抗体によるウェスタンブロ
ッティングの結果と一致した。つまり該ヒトスリット３
のタグ付き蛋白質の純品の分離が確認された。

【００８５】

【実施例７】 新規ヒトスリット３を認識する抗体作製およびリコンビ
ナント・ヒトスリット３蛋白質の生産、精製 実施例６に記載の方法で精製された該ヒトスリット３の
タグ付き蛋白質を免疫原としてウサギに免疫して、抗体
価の測定後、全血の採血を行い、血清を採取して、Ｂｉ
ｏＲａｄ社製のエコノパック血清ＩｇＧ精製キットを用
いて、添付の取扱い説明書に従って、抗ヒトスリット３
ウサギポリクローナル抗体を精製して作製した。

【００８６】また、実施例６に記載した方法で精製され
た該ヒトスリット３のタグ付き蛋白質を免疫原として、
成書の方法に従いマウスモノクローナル抗体を作製し
た。すなわち、実施例６記載のヒトスリット３ＦＬＡＧ
タグ付き蛋白質をＢａｌｂ／ｃマウス（日本エスエルシ
ー社製）に１匹あたり１０μｇを皮下・皮内に免疫し
た。２回の免疫後、眼底採血を行い血清中の抗体価の上
昇を認めた後、３回目の免疫を行ってからマウスの脾臓
細胞を取り出し、マウスミエローマ細胞株Ｐ３Ｘ６３Ａ
ｇ８（ＡＴＣＣ ＴＩＢ９）とポリエチレングリコール
法にて細胞融合を行った。ＨＡＴ培地（日本免疫生物研
究所製）にてハイブリドーマを選択し、酵素抗体法にて
ヒトスリット３を認識する抗体を培地中に産生している
ハイブリドーマ株を分離し、ヒトスリット３を特異的に
認識するマウスモノクローナル抗体を産生するハイブリ
ドーマ産生株が樹立された。

【００８７】このようにして樹立されたハイブリドーマ
の培養上清をファルマシア社製Ｍａｂ ＴｒａｐＧ Ｉ
Ｉを用いて、添付の取扱い説明書に従って、抗ヒトスリ
ット３モノクローナル抗体を精製し作製した。このモノ
クローナル抗体を用いてアフィニティーカラムを作製し
た。アフィニティーカラムの作製はファルマシア社製Ｃ
ＮＢｒ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂにて添付の取扱い
説明書に従い行った。カップリング効率は９９％であっ
た。このゲルの２ｍｌを用いて２ｃｍ² ×１ｃｍのサイ
ズのカラムを作製した。

【００８８】実施例４で作製した該ヒトスリット３のタ
グなし蛋白質の発現ベクターｐｃＤＮＡ３／ＨＳＬ３を
実施例５と同様の方法でＣＯＳ−７細胞に遺伝子導入
し、得られるリコンビナント・ヒトスリット３蛋白質を
含む培養上清を、抗ヒトスリット３モノクローナル抗体
を結合させたアフィニティーカラムに対し、２０ｍｌ／
ｈｒの速度で流し、その後同一速度でＰＢＳ（−）を１
５ｍｌ流して洗浄し、最終的に０．１Ｍ酢酸ナトリウ
ム、０．５ＭＮａＣｌ（ＰＨ４．０）にて溶出した。こ
の溶離液を１ｍｌづつ分取し、各画分に１ＭＴｒｉｓ−
ＨＣｌ（ｐＨ９．５）を２００μｌづつ加えて、中和し
た。

【００８９】さらに実施例６に記載の方法に従って、こ
の精製蛋白質を還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、
銀染色、及びウエスタンブロッティングを行ない、該ヒ
トスリット３のリコンビナント蛋白質の発現を確認し
た。この結果、約２００ｋダルトンのバンドが検出さ
れ、このアフィニティーカラムで配列表の配列番号１記
載のアミノ酸配列を有するヒトスリット３のリコンビナ
ント蛋白質の生産および精製が可能であることが明らか
となった。

【００９０】

【発明の効果】本発明により、脊髄および内分泌系臓器
に発現する新規スリット様ポリペプチド、およびその遺
伝子、およびその製造方法、および該ポリペプチドを特
異的に認識する抗体が提供され、あらゆる脊髄、甲状
腺、卵巣、前立腺、副腎、小腸、心臓、気管、胸腺、リ
ンパ節、筋肉系、結腸の疾患の診断、治療への使用が可
能である。

【００９１】

【配列表】

配列番号：1 配列の長さ：1496 配列の型：アミノ酸 トポロジー：不明 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：ヒト 配列 Gly Pro Pro Ala Val Ala Cys Pro Thr Lys Cys Thr Cys Ser Ala 1 5 10 15 Ala Ser Val Asp Cys His Gly Leu Gly Leu Arg Ala Val Pro Arg Gly 20 25 30 Ile Pro Arg Asn Ala Glu Arg Leu Asp Leu Asp Arg Asn Asn Ile Thr 35 40 45 Arg Ile Thr Lys Met Asp Phe Ala Gly Leu Lys Asn Leu Arg Val Leu 50 55 60 His Leu Glu Asp Asn Gln Val Ser Val Ile Glu Arg Gly Ala Phe Gln 65 70 75 Asp Leu Lys Gln Leu Glu Arg Leu Arg Leu Asn Lys Asn Lys Leu Gln 80 85 90 95 Val Leu Pro Glu Leu Leu Phe Gln Ser Thr Pro Lys Leu Thr Arg Leu 100 105 110 Asp Leu Ser Glu Asn Gln Ile Gln Gly Ile Pro Arg Lys Ala Phe Arg 115 120 125 Gly Ile Thr Asp Val Lys Asn Leu Gln Leu Asp Asn Asn His Ile Ser 130 135 140 Cys Ile Glu Asp Gly Ala Phe Arg Ala Leu Arg Asp Leu Glu Ile Leu 145 150 155 Thr Leu Asn Asn Asn Asn Ile Ser Arg Ile Leu Val Thr Ser Phe Asn 160 165 170 175 His Met Pro Lys Ile Arg Thr Leu Arg Leu His Ser Asn His Leu Tyr 180 185 190 Cys Asp Cys His Leu Ala Trp Leu Ser Asp Trp Leu Arg Gln Arg Arg 195 200 205 Thr Val Gly Gln Phe Thr Leu Cys Met Ala Pro Val His Leu Arg Gly 210 215 220 Phe Asn Val Ala Asp Val Gln Lys Lys Glu Tyr Val Cys Pro Ala Pro 225 230 235 His Ser Glu Pro Pro Ser Cys Asn Ala Asn Ser Ile Ser Cys Pro Ser 240 245 250 255 Pro Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu 260 265 270 Met Glu Ile Pro Ala Asn Leu Pro Glu Gly Ile Val Glu Ile Arg Leu 275 280 285 Glu Gln Asn Ser Ile Lys Ala Ile Pro Ala Gly Ala Phe Thr Gln Tyr 290 295 300 Lys Lys Leu Lys Arg Ile Asp Ile Ser Lys Asn Gln Ile Ser Asp Ile 305 310 315 Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Lys Ser Leu Thr Ser Leu Val Leu 320 325 330 335 Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Ile Ala Lys Gly Leu Phe Asp Gly Leu 340 345 350 Val Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Leu 355 360 365 Arg Val Asn Thr Phe Gln Asp Leu Gln Asn Leu Asn Leu Leu Ser Leu 370 375 380 Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ser Lys Gly Leu Phe Ala Pro Leu 385 390 395 Gln Ser Ile Gln Thr Leu His Leu Ala Gln Asn Pro Phe Val Cys Asp 400 405 410 415 Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Gln Asp Asn Pro Ile Glu 420 425 430 Thr Ser Gly Ala Arg Cys Ser Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg 435 440 445 Ile Ser Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Glu Asp 450 455 460 Tyr Arg Ser Arg Phe Ser Ser Glu Cys Phe Met Asp Leu Val Cys Pro 465 470 475 Glu Lys Cys Arg Cys Glu Gly Thr Ile Val Asp Cys Ser Asn Gln Lys 480 485 490 495 Leu Val Arg Ile Pro Ser His Leu Pro Glu Tyr Val Thr Asp Leu Arg 500 505 510 Leu Asn Asp Asn Glu Val Ser Val Leu Glu Ala Thr Gly Ile Phe Lys 515 520 525 Lys Leu Pro Asn Leu Arg Lys Ile Asn Leu Ser Asn Asn Lys Ile Lys 530 535 540 Glu Val Arg Glu Gly Ala Phe Asp Gly Ala Ala Ser Val Gln Glu Leu 545 550 555 Met Leu Thr Gly Asn Gln Leu Glu Thr Val His Gly Arg Val Phe Arg 560 565 570 575 Gly Leu Ser Gly Leu Lys Thr Leu Met Leu Arg Ser Asn Leu Ile Gly 580 585 590 Cys Val Ser Asn Asp Thr Phe Ala Gly Leu Ser Ser Val Arg Leu Leu 595 600 605 Ser Leu Tyr Asp Asn Arg Ile Thr Thr Ile Thr Pro Gly Ala Phe Thr 610 615 620 Thr Leu Val Ser Leu Ser Thr Ile Asn Leu Leu Ser Asn Pro Phe Asn 625 630 635 Cys Asn Cys His Leu Ala Trp Leu Gly Lys Trp Leu Arg Lys Arg Arg 640 645 650 655 Ile Val Ser Gly Asn Pro Arg Cys Gln Lys Pro Phe Phe Leu Lys Glu 660 665 670 Ile Pro Ile Gln Asp Val Ala Ile Gln Asp Phe Thr Cys Asp Gly Asn 675 680 685 Glu Glu Ser Ser Cys Gln Leu Ser Pro Arg Cys Pro Glu Gln Cys Thr 690 695 700 Cys Met Glu Thr Val Val Arg Cys Ser Asn Lys Gly Leu Arg Ala Leu 705 710 715 Pro Arg Gly Met Pro Lys Asp Val Thr Glu Leu Tyr Leu Glu Gly Asn 720 725 730 735 His Leu Thr Ala Val Pro Arg Glu Leu Ser Ala Leu Arg His Leu Thr 740 745 750 Leu Ile Asp Leu Ser Asn Asn Ser Ile Ser Met Leu Thr Asn Tyr Thr 755 760 765 Phe Ser Asn Met Ser His Leu Ser Thr Leu Ile Leu Ser Tyr Asn Arg 770 775 780 Leu Arg Cys Ile Pro Val His Ala Phe Asn Gly Leu Arg Ser Leu Arg 785 790 795 Val Leu Thr Leu His Gly Asn Asp Ile Ser Ser Val Pro Glu Gly Ser 800 805 810 815 Phe Asn Asp Leu Thr Ser Leu Ser His Leu Ala Leu Gly Thr Asn Pro 820 825 830 Leu His Cys Asp Cys Ser Leu Arg Trp Leu Ser Glu Trp Val Lys Ala 835 840 845 Gly Tyr Lys Glu Pro Gly Ile Ala Arg Cys Ser Ser Pro Glu Pro Met 850 855 860 Ala Asp Arg Leu Leu Leu Thr Thr Pro Thr His Arg Phe Gln Cys Lys 865 870 875 Gly Pro Val Asp Ile Asn Ile Val Ala Lys Cys Asn Ala Cys Leu Ser 880 885 890 895 Ser Pro Cys Lys Asn Asn Gly Thr Cys Thr Gln Asp Pro Val Glu Leu 900 905 910 Tyr Arg Cys Ala Cys Pro Tyr Ser Tyr Lys Gly Lys Asp Cys Thr Val 915 920 925 Pro Ile Asn Thr Cys Ile Gln Asn Pro Cys Gln His Gly Gly Thr Cys 930 935 940 His Leu Ser Asp Ser His Lys Asp Gly Phe Ser Cys Ser Cys Pro Leu 945 950 955 Gly Phe Glu Gly Gln Arg Cys Glu Ile Asn Pro Asp Asp Cys Glu Asp 960 965 970 975 Asn Asp Cys Glu Asn Asn Ala Thr Cys Val Asp Gly Ile Asn Asn Tyr 980 985 990 Val Cys Ile Cys Pro Pro Asn Tyr Thr Gly Glu Leu Cys Asp Glu Val 995 1000 1005 Ile Asp His Cys Val Pro Glu Leu Asn Leu Cys Gln His Glu Ala Lys 1010 1015 1020 Cys Ile Pro Leu Asp Lys Gly Phe Ser Cys Glu Cys Val Pro Gly Tyr 1025 1030 1035 Ser Gly Lys Leu Cys Glu Thr Asp Asn Asp Asp Cys Val Ala His Lys 1040 1045 1050 1055 Cys Arg His Gly Ala Gln Cys Val Asp Thr Ile Asn Gly Tyr Thr Cys 1060 1065 1070 Thr Cys Pro Gln Gly Phe Ser Gly Pro Phe Cys Glu His Pro Pro Pro 1075 1080 1085 Met Val Leu Leu Gln Thr Ser Pro Cys Asp Gln Tyr Glu Cys Gln Asn 1090 1095 1100 Gly Ala Gln Cys Ile Val Val Gln Gln Glu Pro Thr Cys Arg Cys Pro 1105 1110 1115 Pro Gly Phe Ala Gly Pro Arg Cys Glu Lys Leu Ile Thr Val Asn Phe 1120 1125 1130 1135 Val Gly Lys Asp Ser Tyr Val Glu Leu Ala Ser Ala Lys Val Arg Pro 1140 1145 1150 Gln Ala Asn Ile Ser Leu Gln Val Ala Thr Asp Lys Asp Asn Gly Ile 1155 1160 1165 Leu Leu Tyr Lys Gly Asp Asn Asp Pro Leu Ala Leu Glu Leu Tyr Gln 1170 1175 1180 Gly His Val Arg Leu Val Tyr Asp Ser Leu Ser Ser Pro Pro Thr Thr 1185 1190 1195 Val Tyr Ser Val Glu Thr Val Asn Asp Gly Gln Phe His Ser Val Glu 1200 1205 1210 1215 Leu Val Thr Leu Asn Gln Thr Leu Asn Leu Val Val Asp Lys Gly Thr 1220 1225 1230 Pro Lys Ser Leu Gly Lys Leu Gln Lys Gln Pro Ala Val Gly Ile Asn 1235 1240 1245 Ser Pro Leu Tyr Leu Gly Gly Ile Pro Thr Ser Thr Gly Leu Ser Ala 1250 1255 1260 Leu Arg Gln Gly Thr Asp Arg Pro Leu Gly Gly Phe His Gly Cys Ile 1265 1270 1275 His Glu Val Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gln Asp Phe Lys Ala Leu Pro 1280 1285 1290 1295 Pro Gln Ser Leu Gly Val Ser Pro Gly Cys Lys Ser Cys Thr Val Cys 1300 1305 1310 Lys His Gly Leu Cys Arg Ser Val Glu Lys Asp Ser Val Val Cys Glu 1315 1320 1325 Cys Arg Pro Gly Trp Thr Gly Pro Leu Cys Asp Gln Glu Ala Arg Asp 1330 1335 1340 Pro Cys Leu Gly His Arg Cys His His Gly Lys Cys Val Ala Thr Gly 1345 1350 1355 Thr Ser Tyr Met Cys Lys Cys Ala Glu Gly Tyr Gly Gly Asp Leu Cys 1360 1365 1370 1375 Asp Asn Lys Asn Asp Ser Ala Asn Ala Cys Ser Ala Phe Lys Cys His 1380 1385 1390 His Gly Gln Cys His Ile Ser Asp Gln Gly Glu Pro Tyr Cys Leu Cys 1395 1400 1405 Gln Pro Gly Phe Ser Gly Glu His Cys Gln Gln Glu Asn Pro Cys Leu 1410 1415 1420 Gly Gln Val Val Arg Glu Val Ile Arg Arg Gln Lys Gly Tyr Ala Ser 1425 1430 1435 Cys Ala Thr Ala Ser Lys Val Pro Ile Met Glu Cys Arg Gly Gly Cys 1440 1445 1450 1455 Gly Pro Gln Cys Cys Gln Pro Thr Arg Ser Lys Arg Arg Lys Tyr Val 1460 1465 1470 Phe Gln Cys Thr Asp Gly Ser Ser Phe Val Glu Glu Val Glu Arg His 1475 1480 1485 Leu Glu Cys Gly Cys Leu Ala Cys Ser 1490 14951496

【００９２】配列番号：2 配列の長さ：5015 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 起源： 生物名：ヒト 組織の種類：胎児肺 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：264..4832 特徴を決定した方法：Ｓ 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：264..344 特徴を決定した方法：Ｓ 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：345..4832 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GCGCTCCGCA CCTGGGCACT CCCAGCGATG CGCAGCGGGG CAGCGCCGGC CCCGCCGATG 60 GAGCTGCTGT TGCTGCCGCC GCCGCCGCCC GGAGCGCCCC GCTCCGCCCG CGCCCCGTGC 120 GCCTGAGCAC CGAGCTCGCC CCTCCTCCGC GCTAACTCCG CCGCCCGCTC CCCAGGCCGC 180 CCGCGCTCCC CGCGCGCCTC CTCGGGCTCC ACGCGTCTTG CCCCGCAGAG GCAGCCTCCT 240 CCAGGAGCGG GGCCCTGCAC ACC ATG GCC CCC GGG TGG GCA GGG GTC GGC GCC 293 Met Ala Pro Gly Trp Ala Gly Val Gly Ala -27 -25 -20 GCC GTG CGC GCC CGC CTG GCG CTG GCC TTG GCG CTG GCG AGC GTC CTG 341 Ala Val Arg Ala Arg Leu Ala Leu Ala Leu Ala Leu Ala Ser Val Leu -15 -10 -5 AGT GGG CCT CCA GCC GTC GCC TGC CCC ACC AAG TGT ACC TGC TCC GCT 389 Ser Gly Pro Pro Ala Val Ala Cys Pro Thr Lys Cys Thr Cys Ser Ala -1 1 5 10 15 GCC AGC GTG GAC TGC CAC GGG CTG GGC CTC CGC GCG GTT CCT CGG GGC 437 Ala Ser Val Asp Cys His Gly Leu Gly Leu Arg Ala Val Pro Arg Gly 20 25 30 ATC CCC CGC AAC GCT GAG CGC CTT GAC CTG GAC AGA AAT AAT ATC ACC 485 Ile Pro Arg Asn Ala Glu Arg Leu Asp Leu Asp Arg Asn Asn Ile Thr 35 40 45 AGG ATC ACC AAG ATG GAC TTC GCT GGG CTC AAG AAC CTC CGA GTC TTG 533 Arg Ile Thr Lys Met Asp Phe Ala Gly Leu Lys Asn Leu Arg Val Leu 50 55 60 CAT CTG GAA GAC AAC CAG GTC AGC GTC ATC GAG AGA GGC GCC TTC CAG 581 His Leu Glu Asp Asn Gln Val Ser Val Ile Glu Arg Gly Ala Phe Gln 65 70 75 GAC CTG AAG CAG CTA GAG CGA CTG CGC CTG AAC AAG AAT AAG CTG CAA 629 Asp Leu Lys Gln Leu Glu Arg Leu Arg Leu Asn Lys Asn Lys Leu Gln 80 85 90 95 GTC CTT CCA GAA TTG CTT TTC CAG AGC ACG CCG AAG CTC ACC AGA CTA 677 Val Leu Pro Glu Leu Leu Phe Gln Ser Thr Pro Lys Leu Thr Arg Leu 100 105 110 GAT TTG AGT GAA AAC CAG ATC CAG GGG ATC CCG AGG AAG GCG TTC CGC 725 Asp Leu Ser Glu Asn Gln Ile Gln Gly Ile Pro Arg Lys Ala Phe Arg 115 120 125 GGC ATC ACC GAT GTG AAG AAC CTG CAA CTG GAC AAC AAC CAC ATC AGC 773 Gly Ile Thr Asp Val Lys Asn Leu Gln Leu Asp Asn Asn His Ile Ser 130 135 140 TGC ATT GAA GAT GGA GCC TTC CGA GCG CTG CGC GAT TTG GAG ATC CTT 821 Cys Ile Glu Asp Gly Ala Phe Arg Ala Leu Arg Asp Leu Glu Ile Leu 145 150 155 ACC CTC AAC AAC AAC AAC ATC AGT CGC ATC CTG GTC ACC AGC TTC AAC 869 Thr Leu Asn Asn Asn Asn Ile Ser Arg Ile Leu Val Thr Ser Phe Asn 160 165 170 175 CAC ATG CCG AAG ATC CGA ACT CTG CGC CTC CAC TCC AAC CAC CTG TAC 917 His Met Pro Lys Ile Arg Thr Leu Arg Leu His Ser Asn His Leu Tyr 180 185 190 TGC GAC TGC CAC CTG GCC TGG CTC TCG GAT TGG CTG CGA CAG CGA CGG 965 Cys Asp Cys His Leu Ala Trp Leu Ser Asp Trp Leu Arg Gln Arg Arg 195 200 205 ACA GTT GGC CAG TTC ACA CTC TGC ATG GCT CCT GTG CAT TTG AGG GGC 1013 Thr Val Gly Gln Phe Thr Leu Cys Met Ala Pro Val His Leu Arg Gly 210 215 220 TTC AAC GTG GCG GAT GTG CAG AAG AAG GAG TAC GTG TGC CCA GCC CCC 1061 Phe Asn Val Ala Asp Val Gln Lys Lys Glu Tyr Val Cys Pro Ala Pro 225 230 235 CAC TCG GAG CCC CCA TCC TGC AAT GCC AAC TCC ATC TCC TGC CCT TCG 1109 His Ser Glu Pro Pro Ser Cys Asn Ala Asn Ser Ile Ser Cys Pro Ser 240 245 250 255 CCC TGC ACG TGC AGC AAT AAC ATC GTG GAC TGT CGA GGA AAG GGC TTG 1157 Pro Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu 260 265 270 ATG GAG ATT CCT GCC AAC TTG CCG GAG GGC ATC GTC GAA ATA CGC CTA 1205 Met Glu Ile Pro Ala Asn Leu Pro Glu Gly Ile Val Glu Ile Arg Leu 275 280 285 GAA CAG AAC TCC ATC AAA GCC ATC CCT GCA GGA GCC TTC ACC CAG TAC 1253 Glu Gln Asn Ser Ile Lys Ala Ile Pro Ala Gly Ala Phe Thr Gln Tyr 290 295 300 AAG AAA CTG AAG CGA ATA GAC ATC AGC AAG AAT CAG ATA TCG GAT ATT 1301 Lys Lys Leu Lys Arg Ile Asp Ile Ser Lys Asn Gln Ile Ser Asp Ile 305 310 315 GCT CCA GAT GCC TTC CAG GGC CTG AAA TCA CTC ACA TCG CTG GTC CTG 1349 Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Lys Ser Leu Thr Ser Leu Val Leu 320 325 330 335 TAT GGG AAC AAG ATC ACC GAG ATT GCC AAG GGA CTG TTT GAT GGG CTG 1397 Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Ile Ala Lys Gly Leu Phe Asp Gly Leu 340 345 350 GTG TCC CTA CAG CTG CTC CTC CTC AAT GCC AAC 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AGC GAG TGC TTC ATG GAC CTC GTG TGC CCC 1781 Tyr Arg Ser Arg Phe Ser Ser Glu Cys Phe Met Asp Leu Val Cys Pro 465 470 475 GAG AAG TGT CGC TGT GAG GGC ACG ATT GTG GAC TGC TCC AAC CAG AAG 1829 Glu Lys Cys Arg Cys Glu Gly Thr Ile Val Asp Cys Ser Asn Gln Lys 480 485 490 495 CTG GTC CGC ATC CCA AGC CAC CTC CCT GAA TAT GTC ACC GAC CTG CGA 1877 Leu Val Arg Ile Pro Ser His Leu Pro Glu Tyr Val Thr Asp Leu Arg 500 505 510 CTG AAT GAC AAT GAG GTA TCT GTT CTG GAG GCC ACT GGC ATC TTC AAG 1925 Leu Asn Asp Asn Glu Val Ser Val Leu Glu Ala Thr Gly Ile Phe Lys 515 520 525 AAG TTG CCC AAC CTG CGG AAA ATA AAT CTG AGT AAC AAT AAG ATC AAG 1973 Lys Leu Pro Asn Leu Arg Lys Ile Asn Leu Ser Asn Asn Lys Ile Lys 530 535 540 GAG GTG CGA GAG GGA GCT TTC GAT GGA GCA GCC AGC GTG CAG GAG CTG 2021 Glu Val Arg Glu Gly Ala Phe Asp Gly Ala Ala Ser Val Gln Glu Leu 545 550 555 ATG CTG ACA GGG AAC CAG CTG GAG ACC GTG CAC GGG CGC GTG TTC CGT 2069 Met Leu Thr Gly Asn Gln Leu Glu Thr Val His Gly Arg Val Phe Arg 560 565 570 575 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Gly Asn 675 680 685 GAG GAG AGT AGC TGC CAG CTG AGC CCG CGC TGC CCG GAG CAG TGC ACC 2453 Glu Glu Ser Ser Cys Gln Leu Ser Pro Arg Cys Pro Glu Gln Cys Thr 690 695 700 TGT ATG GAG ACA GTG GTG CGA TGC AGC AAC AAG GGG CTC CGC GCC CTC 2501 Cys Met Glu Thr Val Val Arg Cys Ser Asn Lys Gly Leu Arg Ala Leu 705 710 715 CCC AGA GGC ATG CCC AAG GAT GTG ACC GAG CTG TAC CTG GAA GGA AAC 2549 Pro Arg Gly Met Pro Lys Asp Val Thr Glu Leu Tyr Leu Glu Gly Asn 720 725 730 735 CAC CTA ACA GCC GTG CCC AGA GAG CTG TCC GCC CTC CGA CAC CTG ACG 2597 His Leu Thr Ala Val Pro Arg Glu Leu Ser Ala Leu Arg His Leu Thr 740 745 750 CTT ATT GAC CTG AGC AAC AAC AGC ATC AGC ATG CTG ACC AAT TAC ACC 2645 Leu Ile Asp Leu Ser Asn Asn Ser Ile Ser Met Leu Thr Asn Tyr Thr 755 760 765 TTC AGT AAC ATG TCT CAC CTC TCC ACT CTG ATC CTG AGC TAC AAC CGG 2693 Phe Ser Asn Met Ser His Leu Ser Thr Leu Ile Leu Ser Tyr Asn Arg 770 775 780 CTG AGG TGC ATC CCC GTC CAC GCC TTC AAC GGG CTG CGG TCC CTG CGA 2741 Leu Arg Cys Ile Pro Val His Ala Phe Asn Gly Leu Arg Ser Leu Arg 785 790 795 GTG CTA ACC CTC CAT GGC AAT GAC ATT TCC AGC GTT CCT GAA GGC TCC 2789 Val Leu Thr Leu His Gly Asn Asp Ile Ser Ser Val Pro Glu Gly Ser 800 805 810 815 TTC AAC GAC CTC ACA TCT CTT TCC CAT CTG GCG CTG GGA ACC AAC CCA 2837 Phe Asn Asp Leu Thr Ser Leu Ser His Leu Ala Leu Gly Thr Asn Pro 820 825 830 CTC CAC TGT GAC TGC AGT CTT CGG TGG CTG TCG GAG TGG GTG AAG GCG 2885 Leu His Cys Asp Cys Ser Leu Arg Trp Leu Ser Glu Trp Val Lys Ala 835 840 845 GGG TAC AAG GAG CCT GGC ATC GCC CGC TGC AGT AGC CCT GAG CCC ATG 2933 Gly Tyr Lys Glu Pro Gly Ile Ala Arg Cys Ser Ser Pro Glu Pro Met 850 855 860 GCT GAC AGG CTC CTG CTC ACC ACC CCA ACC CAC CGC TTC CAG TGC AAA 2981 Ala Asp Arg Leu Leu Leu Thr Thr Pro Thr His Arg Phe Gln Cys Lys 865 870 875 GGG CCA GTG GAC ATC AAC ATT GTG GCC AAA TGC AAT GCC TGC CTC TCC 3029 Gly Pro Val Asp Ile Asn Ile Val Ala Lys Cys Asn Ala Cys Leu Ser 880 885 890 895 AGC CCG TGC AAG AAT AAC GGG ACA TGC ACC CAG GAC CCT GTG GAG CTG 3077 Ser Pro Cys 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CCC AGA TGC GAG AAG CTC ATC ACT GTC AAC TTC 3749 Pro Gly Phe Ala Gly Pro Arg Cys Glu Lys Leu Ile Thr Val Asn Phe 1120 1125 1130 1135 GTG GGC AAA GAC TCC TAC GTG GAA CTG GCC TCC GCC AAG GTC CGA CCC 3797 Val Gly Lys Asp Ser Tyr Val Glu Leu Ala Ser Ala Lys Val Arg Pro 1140 1145 1150 CAG GCC AAC ATC TCC CTG CAG GTG GCC ACT GAC AAG GAC AAC GGC ATC 3845 Gln Ala Asn Ile Ser Leu Gln Val Ala Thr Asp Lys Asp Asn Gly Ile 1155 1160 1165 CTT CTC TAC AAA GGA GAC AAT GAC CCC CTG GCA CTG GAG CTG TAC CAG 3893 Leu Leu Tyr Lys Gly Asp Asn Asp Pro Leu Ala Leu Glu Leu Tyr Gln 1170 1175 1180 GGC CAC GTG CGG CTG GTC TAT GAC AGC CTG AGT TCC CCT CCA ACC ACA 3941 Gly His Val Arg Leu Val Tyr Asp Ser Leu Ser Ser Pro Pro Thr Thr 1185 1190 1195 GTG TAC AGT GTG GAG ACA GTG AAT GAT GGG CAG TTT CAC AGT GTG GAG 3989 Val Tyr Ser Val Glu Thr Val Asn Asp Gly Gln Phe His Ser Val Glu 1200 1205 1210 1215 CTG GTG ACG CTA AAC CAG ACC CTG AAC CTA GTA GTG GAC AAA GGA ACT 4037 Leu Val Thr Leu Asn Gln Thr Leu Asn Leu Val Val Asp Lys Gly Thr 1220 1225 1230 CCA AAG AGC CTG GGG AAG CTC CAG AAG CAG CCA GCA GTG GGC ATC AAC 4085 Pro Lys Ser Leu Gly Lys Leu Gln Lys Gln Pro Ala Val Gly Ile Asn 1235 1240 1245 AGC CCC CTC TAC CTT GGA GGC ATC CCC ACC TCC ACC GGC CTC TCC GCC 4133 Ser Pro Leu Tyr Leu Gly Gly Ile Pro Thr Ser Thr Gly Leu Ser Ala 1250 1255 1260 TTG CGC CAG GGC ACG GAC CGG CCT CTA GGC GGC TTC CAC GGA TGC ATC 4181 Leu Arg Gln Gly Thr Asp Arg Pro Leu Gly Gly Phe His Gly Cys Ile 1265 1270 1275 CAT GAG GTG CGC ATC AAC AAC GAG CTG CAG GAC TTC AAG GCC CTC CCA 4229 His Glu Val Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gln Asp Phe Lys Ala Leu Pro 1280 1285 1290 1295 CCA CAG TCC CTG GGG GTG TCA CCA GGC TGC AAG TCC TGC ACC GTG TGC 4277 Pro Gln Ser Leu Gly Val Ser Pro Gly Cys Lys Ser Cys Thr Val Cys 1300 1305 1310 AAG CAC GGC CTG TGC CGC TCC GTG GAG AAG GAC AGC GTG GTG TGC GAG 4325 Lys His Gly Leu Cys Arg Ser Val Glu Lys Asp Ser Val Val Cys Glu 1315 1320 1325 TGC CGC CCA GGC TGG ACC GGC CCA CTC TGC GAT CAG GAG GCC CGG GAC 4373 Cys Arg Pro Gly Trp Thr Gly Pro Leu Cys Asp Gln Glu Ala Arg Asp 1330 1335 1340 CCC TGC CTC GGC CAC AGA TGC CAC CAT GGA AAA TGT GTG GCA ACT GGG 4421 Pro Cys Leu Gly His Arg Cys His His Gly Lys Cys Val Ala Thr Gly 1345 1350 1355 ACC TCA TAC ATG TGC AAG TGT GCC GAG GGC TAT GGA GGG GAC TTG TGT 4469 Thr Ser Tyr Met Cys Lys Cys Ala Glu Gly Tyr Gly Gly Asp Leu Cys 1360 1365 1370 1375 GAC AAC AAG AAT GAC TCT GCC AAT GCC TGC TCA GCC TTC AAG TGT CAC 4517 Asp Asn Lys Asn Asp Ser Ala Asn Ala Cys Ser Ala Phe Lys Cys His 1380 1385 1390 CAT GGG CAG TGC CAC ATC TCA GAC CAA GGG GAG CCC TAC TGC CTG TGC 4565 His Gly Gln Cys His Ile Ser Asp Gln Gly Glu Pro Tyr Cys Leu Cys 1395 1400 1405 CAG CCC GGC TTT AGC GGC GAG CAC TGC CAA CAA GAG AAT CCG TGC CTG 4613 Gln Pro Gly Phe Ser Gly Glu His Cys Gln Gln Glu Asn Pro Cys Leu 1410 1415 1420 GGA CAA GTA GTC CGA GAG GTG ATC CGC CGC CAG AAA GGT TAT GCA TCA 4661 Gly Gln Val Val Arg Glu Val Ile Arg Arg Gln Lys Gly Tyr Ala Ser 1425 1430 1435 TGT GCC ACA GCC TCC AAG GTG CCC ATC ATG GAA TGT CGT GGG GGC TGT 4709 Cys Ala Thr Ala Ser Lys Val Pro Ile Met Glu Cys Arg Gly Gly Cys 1440 1445 1450 1455 GGG CCC CAG TGC TGC CAG CCC ACC CGC AGC AAG CGG CGG AAA TAC GTC 4757 Gly Pro Gln Cys Cys Gln Pro Thr Arg Ser Lys Arg Arg Lys Tyr Val 1460 1465 1470 TTC CAG TGC ACG GAC GGC TCC TCG TTT GTA GAA GAG GTG GAG AGA CAC 4805 Phe Gln Cys Thr Asp Gly Ser Ser Phe Val Glu Glu Val Glu Arg His 1475 1480 1485 TTA GAG TGC GGC TGC CTC GCG TGT TCC TAA GCCCC TGCCCGCCTG 4850 Leu Glu Cys Gly Cys Leu Ala Cys Ser 1490 14951496 CCTGCCACCT CTCGGACTCC AGCTTGATGG AGTTGGGACA GCCATGTGGG ACCCCCTGGT 4910 GATTCAGCAT GAAGGAAATG AAGCTGGAGA GGAAGGTAAA GAAGAAGAGA ATATTAAGTA 4970 TATTGTAAAA TAAACAAAAA ATAGAACTTA TTTTTATTAT GGAAA 5015

【００９３】配列番号：3 配列の長さ：1523 配列の型：アミノ酸 トポロジー：不明 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：ヒト 配列 Met Ala Pro Gly Trp Ala Gly Val Gly Ala -27 -25 -20 Ala Val Arg Ala Arg Leu Ala Leu Ala Leu Ala Leu Ala Ser Val Leu -15 -10 -5 Ser Gly Pro Pro Ala Val Ala Cys Pro Thr Lys Cys Thr Cys Ser Ala -1 1 5 10 15 Ala Ser Val Asp Cys His Gly Leu Gly Leu Arg Ala Val Pro Arg Gly 20 25 30 Ile Pro Arg Asn Ala Glu Arg Leu Asp Leu Asp Arg Asn Asn Ile Thr 35 40 45 Arg Ile Thr Lys Met Asp Phe Ala Gly Leu Lys Asn Leu Arg Val Leu 50 55 60 His Leu Glu Asp Asn Gln Val Ser Val Ile Glu Arg Gly Ala Phe Gln 65 70 75 Asp Leu Lys Gln Leu Glu Arg Leu Arg Leu Asn Lys Asn Lys Leu Gln 80 85 90 95 Val Leu Pro Glu Leu Leu Phe Gln Ser Thr Pro Lys Leu Thr Arg Leu 100 105 110 Asp Leu Ser Glu Asn Gln Ile Gln Gly Ile Pro Arg Lys Ala Phe Arg 115 120 125 Gly Ile Thr Asp Val Lys Asn Leu Gln Leu Asp Asn Asn His Ile Ser 130 135 140 Cys Ile Glu Asp Gly Ala Phe Arg Ala Leu Arg Asp Leu Glu Ile Leu 145 150 155 Thr Leu Asn Asn Asn Asn Ile Ser Arg Ile Leu Val Thr Ser Phe Asn 160 165 170 175 His Met Pro Lys Ile Arg Thr Leu Arg Leu His Ser Asn His Leu Tyr 180 185 190 Cys Asp Cys His Leu Ala Trp Leu Ser Asp Trp Leu Arg Gln Arg Arg 195 200 205 Thr Val Gly Gln Phe Thr Leu Cys Met Ala Pro Val His Leu Arg Gly 210 215 220 Phe Asn Val Ala Asp Val Gln Lys Lys Glu Tyr Val Cys Pro Ala Pro 225 230 235 His Ser Glu Pro Pro Ser Cys Asn Ala Asn Ser Ile Ser Cys Pro Ser 240 245 250 255 Pro Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu 260 265 270 Met Glu Ile Pro Ala Asn Leu Pro Glu Gly Ile Val Glu Ile Arg Leu 275 280 285 Glu Gln Asn Ser Ile Lys Ala Ile Pro Ala Gly Ala Phe Thr Gln Tyr 290 295 300 Lys Lys Leu Lys Arg Ile Asp Ile Ser Lys Asn Gln Ile Ser Asp Ile 305 310 315 Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Lys Ser Leu Thr Ser Leu Val Leu 320 325 330 335 Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Ile Ala Lys Gly Leu Phe Asp Gly Leu 340 345 350 Val Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Leu 355 360 365 Arg Val Asn Thr Phe Gln Asp Leu Gln Asn Leu Asn Leu Leu Ser Leu 370 375 380 Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ser Lys Gly Leu Phe Ala Pro Leu 385 390 395 Gln Ser Ile Gln Thr Leu His Leu Ala Gln Asn Pro Phe Val Cys Asp 400 405 410 415 Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Gln Asp Asn Pro Ile Glu 420 425 430 Thr Ser Gly Ala Arg Cys Ser Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg 435 440 445 Ile Ser Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Glu Asp 450 455 460 Tyr Arg Ser Arg Phe Ser Ser Glu Cys Phe Met Asp Leu Val Cys Pro 465 470 475 Glu Lys Cys Arg Cys Glu Gly Thr Ile Val Asp Cys Ser Asn Gln Lys 480 485 490 495 Leu Val Arg Ile Pro Ser His Leu Pro Glu Tyr Val Thr Asp Leu Arg 500 505 510 Leu Asn Asp Asn Glu Val Ser Val Leu Glu Ala Thr Gly Ile Phe Lys 515 520 525 Lys Leu Pro Asn Leu Arg Lys Ile Asn Leu Ser Asn Asn Lys Ile Lys 530 535 540 Glu Val Arg Glu Gly Ala Phe Asp Gly Ala Ala Ser Val Gln Glu Leu 545 550 555 Met Leu Thr Gly Asn Gln Leu Glu Thr Val His Gly Arg Val Phe Arg 560 565 570 575 Gly Leu Ser Gly Leu Lys Thr Leu Met Leu Arg Ser Asn Leu Ile Gly 580 585 590 Cys Val Ser Asn Asp Thr Phe Ala Gly Leu Ser Ser Val Arg Leu Leu 595 600 605 Ser Leu Tyr Asp Asn Arg Ile Thr Thr Ile Thr Pro Gly Ala Phe Thr 610 615 620 Thr Leu Val Ser Leu Ser Thr Ile Asn Leu Leu Ser Asn Pro Phe Asn 625 630 635 Cys Asn Cys His Leu Ala Trp Leu Gly Lys Trp Leu Arg Lys Arg Arg 640 645 650 655 Ile Val Ser Gly Asn Pro Arg Cys Gln Lys Pro Phe Phe Leu Lys Glu 660 665 670 Ile Pro Ile Gln Asp Val Ala Ile Gln Asp Phe Thr Cys Asp Gly Asn 675 680 685 Glu Glu Ser Ser Cys Gln Leu Ser Pro Arg Cys Pro Glu Gln Cys Thr 690 695 700 Cys Met Glu Thr Val Val Arg Cys Ser Asn Lys Gly Leu Arg Ala Leu 705 710 715 Pro Arg Gly Met Pro Lys Asp Val Thr Glu Leu Tyr Leu Glu Gly Asn 720 725 730 735 His Leu Thr Ala Val Pro Arg Glu Leu Ser Ala Leu Arg His Leu Thr 740 745 750 Leu Ile Asp Leu Ser Asn Asn Ser Ile Ser Met Leu Thr Asn Tyr Thr 755 760 765 Phe Ser Asn Met Ser His Leu Ser Thr Leu Ile Leu Ser Tyr Asn Arg 770 775 780 Leu Arg Cys Ile Pro Val His Ala Phe Asn Gly Leu Arg Ser Leu Arg 785 790 795 Val Leu Thr Leu His Gly Asn Asp Ile Ser Ser Val Pro Glu Gly Ser 800 805 810 815 Phe Asn Asp Leu Thr Ser Leu Ser His Leu Ala Leu Gly Thr Asn Pro 820 825 830 Leu His Cys Asp Cys Ser Leu Arg Trp Leu Ser Glu Trp Val Lys Ala 835 840 845 Gly Tyr Lys Glu Pro Gly Ile Ala Arg Cys Ser Ser Pro Glu Pro Met 850 855 860 Ala Asp Arg Leu Leu Leu Thr Thr Pro Thr His Arg Phe Gln Cys Lys 865 870 875 Gly Pro Val Asp Ile Asn Ile Val Ala Lys Cys Asn Ala Cys Leu Ser 880 885 890 895 Ser Pro Cys Lys Asn Asn Gly Thr Cys Thr Gln Asp Pro Val Glu Leu 900 905 910 Tyr Arg Cys Ala Cys Pro Tyr Ser Tyr Lys Gly Lys Asp Cys Thr Val 915 920 925 Pro Ile Asn Thr Cys Ile Gln Asn Pro Cys Gln His Gly Gly Thr Cys 930 935 940 His Leu Ser Asp Ser His Lys Asp Gly Phe Ser Cys Ser Cys Pro Leu 945 950 955 Gly Phe Glu Gly Gln Arg Cys Glu Ile Asn Pro Asp Asp Cys Glu Asp 960 965 970 975 Asn Asp Cys Glu Asn Asn Ala Thr Cys Val Asp Gly Ile Asn Asn Tyr 980 985 990 Val Cys Ile Cys Pro Pro Asn Tyr Thr Gly Glu Leu Cys Asp Glu Val 995 1000 1005 Ile Asp His Cys Val Pro Glu Leu Asn Leu Cys Gln His Glu Ala Lys 1010 1015 1020 Cys Ile Pro Leu Asp Lys Gly Phe Ser Cys Glu Cys Val Pro Gly Tyr 1025 1030 1035 Ser Gly Lys Leu Cys Glu Thr Asp Asn Asp Asp Cys Val Ala His Lys 1040 1045 1050 1055 Cys Arg His Gly Ala Gln Cys Val Asp Thr Ile Asn Gly Tyr Thr Cys 1060 1065 1070 Thr Cys Pro Gln Gly Phe Ser Gly Pro Phe Cys Glu His Pro Pro Pro 1075 1080 1085 Met Val Leu Leu Gln Thr Ser Pro Cys Asp Gln Tyr Glu Cys Gln Asn 1090 1095 1100 Gly Ala Gln Cys Ile Val Val Gln Gln Glu Pro Thr Cys Arg Cys Pro 1105 1110 1115 Pro Gly Phe Ala Gly Pro Arg Cys Glu Lys Leu Ile Thr Val Asn Phe 1120 1125 1130 1135 Val Gly Lys Asp Ser Tyr Val Glu Leu Ala Ser Ala Lys Val Arg Pro 1140 1145 1150 Gln Ala Asn Ile Ser Leu Gln Val Ala Thr Asp Lys Asp Asn Gly Ile 1155 1160 1165 Leu Leu Tyr Lys Gly Asp Asn Asp Pro Leu Ala Leu Glu Leu Tyr Gln 1170 1175 1180 Gly His Val Arg Leu Val Tyr Asp Ser Leu Ser Ser Pro Pro Thr Thr 1185 1190 1195 Val Tyr Ser Val Glu Thr Val Asn Asp Gly Gln Phe His Ser Val Glu 1200 1205 1210 1215 Leu Val Thr Leu Asn Gln Thr Leu Asn Leu Val Val Asp Lys Gly Thr 1220 1225 1230 Pro Lys Ser Leu Gly Lys Leu Gln Lys Gln Pro Ala Val Gly Ile Asn 1235 1240 1245 Ser Pro Leu Tyr Leu Gly Gly Ile Pro Thr Ser Thr Gly Leu Ser Ala 1250 1255 1260 Leu Arg Gln Gly Thr Asp Arg Pro Leu Gly Gly Phe His Gly Cys Ile 1265 1270 1275 His Glu Val Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gln Asp Phe Lys Ala Leu Pro 1280 1285 1290 1295 Pro Gln Ser Leu Gly Val Ser Pro Gly Cys Lys Ser Cys Thr Val Cys 1300 1305 1310 Lys His Gly Leu Cys Arg Ser Val Glu Lys Asp Ser Val Val Cys Glu 1315 1320 1325 Cys Arg Pro Gly Trp Thr Gly Pro Leu Cys Asp Gln Glu Ala Arg Asp 1330 1335 1340 Pro Cys Leu Gly His Arg Cys His His Gly Lys Cys Val Ala Thr Gly 1345 1350 1355 Thr Ser Tyr Met Cys Lys Cys Ala Glu Gly Tyr Gly Gly Asp Leu Cys 1360 1365 1370 1375 Asp Asn Lys Asn Asp Ser Ala Asn Ala Cys Ser Ala Phe Lys Cys His 1380 1385 1390 His Gly Gln Cys His Ile Ser Asp Gln Gly Glu Pro Tyr Cys Leu Cys 1395 1400 1405 Gln Pro Gly Phe Ser Gly Glu His Cys Gln Gln Glu Asn Pro Cys Leu 1410 1415 1420 Gly Gln Val Val Arg Glu Val Ile Arg Arg Gln Lys Gly Tyr Ala Ser 1425 1430 1435 Cys Ala Thr Ala Ser Lys Val Pro Ile Met Glu Cys Arg Gly Gly Cys 1440 1445 1450 1455 Gly Pro Gln Cys Cys Gln Pro Thr Arg Ser Lys Arg Arg Lys Tyr Val 1460 1465 1470 Phe Gln Cys Thr Asp Gly Ser Ser Phe Val Glu Glu Val Glu Arg His 1475 1480 1485 Leu Glu Cys Gly Cys Leu Ala Cys Ser 1490 14951496

【００９４】配列番号：4 配列の長さ：1508 配列の型：アミノ酸 トポロジー：不明 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：ヒト 配列 Trp Arg Leu Gly Ala Ser Ala Cys Pro Ala Leu Cys Thr Cys Thr 1 5 10 15 Gly Thr Thr Val Asp Cys His Gly Thr Gly Leu Gln Ala Ile Pro 20 25 30 Lys Asn Ile Pro Arg Asn Thr Glu Arg Leu Glu Leu Asn Gly Asn 35 40 45 Asn Ile Thr Arg Ile His Lys Asn Asp Phe Ala Gly Leu Lys Gln 50 55 60 Leu Arg Val Leu Gln Leu Met Glu Asn Gln Ile Gly Ala Val Glu 65 70 75 Arg Gly Ala Phe Asp Asp Met Lys Glu Leu Glu Arg Leu Arg Leu 80 85 90 Asn Arg Asn Gln Leu His Met Leu Pro Glu Leu Leu Phe Gln Asn 95 100 105 Asn Gln Ala Leu Ser Arg Leu Asp Leu Ser Glu Asn Ala Ile Gln 110 115 120 Ala Ile Pro Arg Lys Ala Phe Arg Gly Ala Thr Asp Leu Lys Asn 125 130 135 Leu Arg Leu Asp Lys Asn Gln Ile Ser Cys Ile Glu Glu Gly Ala 140 145 150 Phe Arg Ala Leu Arg Gly Leu Glu Val Leu Thr Leu Asn Asn Asn 155 160 165 Asn Ile Thr Thr Ile Pro Val Ser Ser Phe Asn His Met Pro Lys 170 175 180 Leu Arg Thr Phe Arg Leu His Ser Asn His Leu Phe Cys Asp Cys 185 190 195 His Leu Ala Trp Leu Ser Gln Trp Leu Arg Gln Arg Pro Thr Ile 200 205 210 Glu Leu Phe Thr Gln Cys Ser Gly Pro Ala Ser Leu Arg Gly Leu 215 220 225 Asn Val Ala Glu Val Gln Lys Ser Glu Phe Ser Cys Ser Gly Gln 230 235 240 Gly Glu Ala Gly Arg Val Pro Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Ser 245 250 255 Cys Pro Ala Met Cys Thr Cys Ser Asn Gly Ile Val Asp Cys Arg 260 265 270 Gly Lys Gly Leu Thr Ala Ile Pro Ala Asn Leu Pro Glu Thr Met 275 280 285 Thr Glu Ile Arg Leu Glu Leu Asn Gly Ile Lys Ser Ile Pro Pro 290 295 300 Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Arg Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser 305 310 315 Asn Asn Gln Ile Ala Glu Ile Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu 320 325 330 Arg Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Asp 335 340 345 Leu Pro Arg Gly Val Phe Gly Gly Leu Tyr Thr Leu Gln Leu Leu 350 355 360 Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Ile Arg Pro Asp Ala Phe 365 370 375 Gln Asp Leu Gln Asn Leu Ser Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys 380 385 390 Ile Gln Ser Leu Ala Lys Gly Thr Phe Thr Ser Leu Arg Ala Ile 395 400 405 Gln Thr Leu His Leu Ala Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys Asn 410 415 420 Leu Lys Trp Leu Ala Asp Phe Leu Arg Thr Asn Pro Ile Glu Thr 425 430 435 Ser Gly Ala Arg Cys Ala Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg 440 445 450 Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Ala Lys Glu 455 460 465 Gln Tyr Phe Ile Pro Gly Thr Glu Asp Tyr Gln Leu Asn Ser Glu 470 475 480 Cys Asn Ser Asp Val Val Cys Pro His Lys Cys Arg Cys Glu Ala 485 490 495 Asn Val Val Glu Cys Ser Ser Leu Lys Leu Thr Lys Ile Pro Glu 500 505 510 Arg Ile Pro Gln Ser Thr Ala Glu Leu Arg Leu Asn Asn Asn Glu 515 520 525 Ile Ser Ile Leu Glu Ala Thr Gly Met Phe Lys Lys Leu Thr His 530 535 540 Leu Lys Lys Ile Asn Leu Ser Asn Asn Lys Val Ser Glu Ile Glu 545 550 555 Asp Gly Ala Phe Glu Gly Ala Ala Ser Val Ser Glu Leu His Leu 560 565 570 Thr Ala Asn Gln Leu Glu Ser Ile Arg Ser Gly Met Phe Arg Gly 575 580 585 Leu Asp Gly Leu Arg Thr Leu Met Leu Arg Asn Asn Arg Ile Ser 590 595 600 Cys Ile His Asn Asp Ser Phe Thr Gly Leu Arg Asn Val Arg Leu 605 610 615 Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Gln Ile Thr Thr Val Ser Pro Gly Ala 620 625 630 Phe Asp Thr Leu Gln Ser Leu Ser Thr Leu Asn Leu Leu Ala Asn 635 640 645 Pro Phe Asn Cys Asn Cys Gln Leu Ala Trp Leu Gly Gly Trp Leu 650 655 660 Arg Lys Arg Lys Ile Val Thr Gly Asn Pro Arg Cys Gln Asn Pro 665 670 675 Asp Phe Leu Arg Gln Ile Pro Leu Gln Asp Val Ala Phe Pro Asp 680 685 690 Phe Arg Cys Glu Glu Gly Gln Glu Glu Gly Gly Cys Leu Pro Arg 695 700 705 Pro Gln Cys Pro Gln Glu Cys Ala Cys Leu Asp Thr Val Val Arg 710 715 720 Cys Ser Asn Lys His Leu Arg Ala Leu Pro Lys Gly Ile Pro Lys 725 730 735 Asn Val Thr Glu Leu Tyr Leu Asp Gly Asn Gln Phe Thr Leu Val 740 745 750 Pro Gly Gln Leu Ser Thr Phe Lys Tyr Leu Gln Leu Val Asp Leu 755 760 765 Ser Asn Asn Lys Ile Ser Ser Leu Ser Asn Ser Ser Phe Thr Asn 770 775 780 Met Ser Gln Leu Thr Thr Leu Ile Leu Ser Tyr Asn Ala Leu Gln 785 790 795 Cys Ile Pro Pro Leu Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Arg Leu 800 805 810 Leu Ser Leu His Gly Asn Asp Ile Ser Thr Leu Gln Glu Gly Ile 815 820 825 Phe Ala Asp Val Thr Ser Leu Ser His Leu Ala Ile Gly Ala Asn 830 835 840 Pro Leu Tyr Cys Asp Cys His Leu Arg Trp Leu Ser Ser Trp Val 845 850 855 Lys Thr Gly Tyr Lys Glu Pro Gly Ile Ala Arg Cys Ala Gly Pro 860 865 870 Gln Asp Met Glu Gly Lys Leu Leu Leu Thr Thr Pro Ala Lys Lys 875 880 885 Phe Glu Cys Gln Gly Pro Pro Thr Leu Ala Val Gln Ala Lys Cys 890 895 900 Asp Leu Cys Leu Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gln Gly Thr Cys His 905 910 915 Asn Asp Pro Leu Glu Val Tyr Arg Cys Ala Cys Pro Ser Gly Tyr 920 925 930 Lys Gly Arg Asp Cys Glu Val Ser Leu Asn Ser Cys Ser Ser Gly 935 940 945 Pro Cys Glu Asn Gly Gly Thr Cys His Ala Gln Glu Gly Glu Asp 950 955 960 Ala Pro Phe Thr Cys Ser Cys Pro Thr Gly Phe Glu Gly Pro Thr 965 970 975 Cys Gly Val Asn Thr Asp Asp Cys Val Asp His Ala Cys Ala Asn 980 985 990 Gly Gly Val Cys Val Asp Gly Val Gly Asn Tyr Thr Cys Gln Cys 995 1000 1005 Pro Leu Gln Tyr Glu Gly Lys Ala Cys Glu Gln Leu Val Asp Leu 1010 1015 1020 Cys Ser Pro Asp Leu Asn Pro Cys Gln His Glu Ala Gln Cys Val 1025 1030 1035 Gly Thr Pro Asp Gly Pro Arg Cys Glu Cys Met Pro Gly Tyr Ala 1040 1045 1050 Gly Asp Asn Cys Ser Glu Asn Gln Asp Asp Cys Arg Asp His Arg 1055 1060 1065 Cys Gln Asn Gly Ala Gln Cys Met Asp Glu Val Asn Ser Tyr Ser 1070 1075 1080 Cys Leu Cys Ala Glu Gly Tyr Ser Gly Gln Leu Cys Glu Ile Pro 1085 1090 1095 Pro His Leu Pro Ala Pro Lys Ser Pro Cys Glu Gly Thr Glu Cys 1100 1105 1110 Gln Asn Gly Ala Asn Cys Val Asp Gln Gly Asn Arg Pro Val Cys 1115 1120 1125 Gln Cys Leu Pro Gly Phe Gly Gly Pro Glu Cys Glu Lys Leu Leu 1130 1135 1140 Ser Val Asn Phe Val Asp Arg Asp Thr Tyr Leu Gln Phe Thr Asp 1145 1150 1155 Leu Gln Asn Trp Pro Arg Ala Asn Ile Thr Leu Gln Val Ser Thr 1160 1165 1170 Ala Glu Asp Asn Gly Ile Leu Leu Tyr Asn Gly Asp Asn Asp His 1175 1180 1185 Ile Ala Val Glu Leu Tyr Gln Gly His Val Arg Val Ser Tyr Asp 1190 1195 1200 Pro Gly Ser Tyr Pro Ser Ser Ala Ile Tyr Ser Ala Glu Thr Ile 1205 1210 1215 Asn Asp Gly Gln Phe His Thr Val Glu Leu Val Ala Phe Asp Gln 1220 1225 1230 Met Val Asn Leu Ser Ile Asp Gly Gly Ser Pro Met Thr Met Asp 1235 1240 1245 Asn Phe Gly Lys His Tyr Thr Leu Asn Ser Glu Ala Pro Leu Tyr 1250 1255 1260 Val Gly Gly Met Pro Val Asp Val Asn Ser Ala Ala Phe Arg Leu 1265 1270 1275 Trp Gln Ile Leu Asn Gly Thr Gly Phe His Gly Cys Ile Arg Asn 1280 1285 1290 Leu Tyr Ile Asn Asn Glu Leu Gln Asp Phe Thr Lys Thr Gln Met 1295 1300 1305 Lys Pro Gly Val Val Pro Gly Cys Glu Pro Cys Arg Lys Leu Tyr 1310 1315 1320 Cys Leu His Gly Ile Cys Gln Pro Asn Ala Thr Pro Gly Pro Met 1325 1330 1335 Cys His Cys Glu Ala Gly Trp Val Gly Leu His Cys Asp Gln Pro 1340 1345 1350 Ala Asp Gly Pro Cys His Gly His Lys Cys Val His Gly Gln Cys 1355 1360 1365 Val Pro Leu Asp Ala Leu Ser Tyr Ser Cys Gln Cys Gln Asp Gly 1370 1375 1380 Tyr Ser Gly Ala Leu Cys Asn Gln Ala Gly Ala Leu Ala Glu Pro 1385 1390 1395 Cys Arg Gly Leu Gln Cys Leu His Gly His Cys Gln Ala Ser Gly 1400 1405 1410 Thr Lys Gly Ala His Cys Val Cys Asp Pro Gly Phe Ser Gly Glu 1415 1420 1425 Leu Cys Glu Gln Glu Ser Glu Cys Arg Gly Asp Pro Val Arg Asp 1430 1345 1440 Phe His Gln Val Gln Arg Gly Tyr Ala Ile Cys Gln Thr Thr Arg 1445 1450 1455 Pro Leu Ser Trp Val Glu Cys Arg Gly Ser Cys Pro Gly Gln Gly 1460 1465 1470 Cys Cys Gln Gly Leu Arg Leu Lys Arg Arg Lys Phe Thr Phe Glu 1475 1480 1485 Cys Ser Asp Gly Thr Ser Phe Ala Glu Glu Val Glu Lys Pro Thr 1490 1495 1500 Lys Cys Gly Cys Ala Leu Cys Ala 1505 1508

【００９５】配列番号：5 配列の長さ：5094 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 起源： 生物名：ヒト 組織の種類：脳 配列の特徴 特徴を表す記号：CDS 存在位置：233..4834 特徴を決定した方法：Ｓ 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：233..310 特徴を決定した方法：Ｓ 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：311..4834 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GCGAAACGGC AGAGGAGCCG AGCCCCCTCC GCCCAAGGCG CCCTCCCTCC GTCCGCGCAC 60 AGGCGCCGTC GCTTGGAGGA GCAAGGTGCC TCCCAGCCCG CAGGGGCGCC GCGCGCAAGC 120 CCGCGGGCTC TTCGGTGGCT CTGCCCCGGG ACTGCACCTG GAGGCGGCCC CGGACGGGGA 180 TGGTCAGCGG CTGCTGCCGT CTGGCTCGCG AGCGGGACGC TGTGAGGGCA CC 232 ATG GCG CTG ACT CCC GGG TGG GGG TCC TCG GCG 265 Met Ala Leu Thr Pro Gly Trp Gly Ser Ser Ala -26 -25 -20 GGG CCG GTC CGG CCG GAG CTC TGG CTG CTG CTG TGG GCA GCC GCG 310 Gly Pro Val Arg Pro Glu Leu Trp Leu Leu Leu Trp Ala Ala Ala -15 -10 -5 TGG CGC CTG GGT GCC TCG GCG TGC CCC GCC CTC TGC ACC TGC ACC 355 Trp Arg Leu Gly Ala Ser Ala Cys Pro Ala Leu Cys Thr Cys Thr 1 5 10 15 GGA ACC ACG GTG GAC TGC CAC GGC ACG GGG CTG CAG GCC ATT CCC 400 Gly Thr Thr Val Asp Cys His Gly Thr Gly Leu Gln Ala Ile Pro 20 25 30 AAG AAT ATA CCT CGG AAC ACC GAG CGC CTG GAA CTC AAT GGC AAC 445 Lys Asn Ile Pro Arg Asn Thr Glu Arg Leu Glu Leu Asn Gly Asn 35 40 45 AAC ATC ACT CGG ATC CAT AAG AAT GAC TTT GCG GGG CTC AAG CAG 490 Asn Ile Thr Arg Ile His Lys Asn Asp Phe Ala Gly Leu Lys Gln 50 55 60 CTG CGG GTG CTG CAG CTG ATG GAG AAC CAG ATT GGA GCA GTG GAA 535 Leu Arg Val Leu Gln Leu Met Glu Asn Gln Ile Gly Ala Val Glu 65 70 75 CGT GGT GCT TTT GAT GAC ATG AAG GAG CTG GAG CGG CTG CGA CTG 580 Arg Gly Ala Phe Asp Asp Met Lys Glu Leu Glu Arg Leu Arg Leu 80 85 90 AAC CGA AAC CAG CTG CAC ATG TTA CCG GAA CTG CTG TTC CAG AAC 625 Asn Arg Asn Gln Leu His Met Leu Pro Glu Leu Leu Phe Gln Asn 95 100 105 AAC CAG GCT TTG TCA AGA CTG GAC TTG AGT GAG AAC GCC ATC CAG 670 Asn Gln Ala Leu Ser Arg Leu Asp Leu Ser Glu Asn Ala Ile Gln 110 115 120 GCC ATC CCC AGG AAA GCT TTT CGG GGA GCT ACG GAC CTT AAA AAT 715 Ala Ile Pro Arg Lys Ala Phe Arg Gly Ala Thr Asp Leu Lys Asn 125 130 135 TTA CGG CTG GAC AAG AAC CAG ATC AGC TGC ATT GAG GAA GGG GCC 760 Leu Arg Leu Asp Lys Asn Gln Ile Ser Cys Ile Glu Glu Gly Ala 140 145 150 TTC CGT GCT CTG CGG GGG CTG GAG GTG CTG ACC CTG AAC AAC AAC 805 Phe Arg Ala Leu Arg Gly Leu Glu Val Leu Thr Leu Asn Asn Asn 155 160 165 AAT ATC ACC ACC ATC CCC GTG TCC AGC TTC AAC CAT ATG CCC AAG 850 Asn Ile Thr Thr Ile Pro Val Ser Ser Phe Asn His Met Pro Lys 170 175 180 CTA CGG ACC TTC CGC CTG CAC TCC AAC CAC CTG TTT TGC GAC TGC 895 Leu Arg Thr Phe Arg Leu His Ser Asn His Leu Phe Cys Asp Cys 185 190 195 CAC CTG GCC TGG CTC TCG CAG TGG CTG AGG CAG CGG CCA ACC ATC 940 His Leu Ala Trp Leu Ser Gln Trp Leu Arg Gln Arg Pro Thr Ile 200 205 210 GGG CTC TTC ACC CAG TGC TCG GGC CCA GCC AGC CTG CGT GGC CTC 985 Gly Leu Phe Thr Gln Cys Ser Gly Pro Ala Ser Leu Arg Gly Leu 215 220 225 AAT GTG GCA GAG GTC CAG AAG AGT GAG TTC AGC TGC TCA GGC CAG 1030 Asn Val Ala Glu Val Gln Lys Ser Glu Phe Ser Cys Ser Gly Gln 230 235 240 GGA GAA GCG GGG CGC GTG CCC ACC TGC ACC CTG TCC TCC GGC TCC 1075 Gly Glu Ala Gly Arg Val Pro Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Ser 245 250 255 TGC CCG GCC ATG TGC ACC TGC AGC AAT GGC ATC GTG GAC TGT CGT 1120 Cys Pro Ala Met Cys Thr Cys Ser Asn Gly Ile Val Asp Cys Arg 260 265 270 GGA AAA GGC CTC ACT GCC ATC CCG GCC AAC CTG CCC GAG ACC ATG 1165 Gly Lys Gly Leu Thr Ala Ile Pro Ala Asn Leu Pro Glu Thr Met 275 280 285 ACG GAG ATA CGC CTG GAG CTG AAC GGC ATC AAG TCC ATC CCT CCT 1210 Thr Glu Ile Arg Leu Glu Leu Asn Gly Ile Lys Ser Ile Pro Pro 290 295 300 GGA GCC TTC TCA CCC TAC AGA AAG CTA CGG AGG ATA GAC CTG AGC 1255 Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Arg Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser 305 310 315 AAC AAT CAG ATC GCT GAG ATT GCA CCC GAC GCC TTC CAG GGC CTC 1300 Asn Asn Gln Ile Ala Glu Ile Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu 320 325 330 CGC TCC CTG AAC TCG CTG GTC CTC TAT GGA AAC AAG ATC ACA GAC 1345 Arg Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Asp 335 340 345 CTC CCC CGT GGT GTG TTT GGA GGC CTA TAC ACC CTA CAG CTC CTG 1390 Leu Pro Arg Gly Val Phe Gly Gly Leu Tyr Thr Leu Gln Leu Leu 350 355 360 CTC CTG AAT GCC AAC AAG ATC AAC TGC ATC CGG CCC GAT GCC TTC 1435 Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Ile Arg Pro Asp Ala Phe 365 370 375 CAG GAC CTG CAG AAC CTC TCA CTG CTC TCC CTG TAT GAC AAC AAG 1480 Gln Asp Leu Gln Asn Leu Ser Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys 380 385 390 ATC CAG AGC CTC GCC AAG GGC ACT TTC ACC TCC CtG CGG GCC ATC 1525 Ile Gln Ser Leu Ala Lys Gly Thr Phe Thr Ser Leu Arg Ala Ile 395 400 405 CAG ACT CTG CAC CTG GCC CAG AAC CCT TTC ATT TGC GAC TGT AAC 1570 Gln Thr Leu His Leu Ala Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys Asn 410 415 420 CTC AAG TGG CTG GCA GAC TTC CTG CGC ACC AAT CCC ATC GAG ACG 1615 Leu Lys Trp Leu Ala Asp Phe Leu Arg Thr Asn Pro Ile Glu Thr 425 430 435 AGT GGT GCC CGC TGT GCC AGT CCC CGG CGC CTC GCC AAC AAG CGC 1660 Ser Gly Ala Arg Cys Ala Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg 440 445 450 ATC GGG CAG ATC AAG AGC AAG AAG TTC CGG TGC TCA GCC AAA GAG 1705 Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Ala Lys Glu 455 460 465 CAG TAC TTC ATT CCA GGC ACG GAG GAT TAC CAG CTG AAC AGC GAG 1750 Gln Tyr Phe Ile Pro Gly Thr Glu Asp Tyr Gln Leu Asn Ser Glu 470 475 480 TGC AAC AGC GAC GTG GTC TGT CCC CAC AAG TGC CGC TGT GAG GCC 1795 Cys Asn Ser Asp Val Val Cys Pro His Lys Cys Arg Cys Glu Ala 485 490 495 AAC GTG GTG GAG TGC TCC AGC CTG AAG CTC ACC AAG ATC CCT GAG 1840 Asn Val Val Glu Cys Ser Ser Leu Lys Leu Thr Lys Ile Pro Glu 500 505 510 CGC ATC CCC CAG TCC ACG GCA GAA CTG CGA TTG AAT AAC AAT GAG 1885 Arg Ile Pro Gln Ser Thr Ala Glu Leu Arg Leu Asn Asn Asn Glu 515 520 525 ATT TCC ATC CTG GAG GCC ACT GGG ATG TTT AAA AAA CTT ACA CAT 1930 Ile Ser Ile Leu Glu Ala Thr Gly Met Phe Lys Lys Leu Thr His 530 535 540 CTG AAG AAA ATC AAT CTG AGC AAC AAC AAG GTG TCA GAA ATT GAA 1975 Leu Lys Lys Ile Asn Leu Ser Asn Asn Lys Val Ser Glu Ile Glu 545 550 555 GAT GGG GCC TTC GAG GGC GCA GCC TCT GTG AGC GAG CTG CAC CTA 2020 Asp Gly Ala Phe Glu Gly Ala Ala Ser Val Ser Glu Leu His Leu 560 565 570 ACT GCC AAC CAG CTG GAG TCC ATC CGG AGC GGC ATG TTC CGG GGT 2065 Thr Ala Asn Gln Leu Glu Ser Ile Arg Ser Gly Met Phe Arg Gly 575 580 585 CTG GAT GGC TTG AGG ACC CTA ATG CTG CGG AAC AAC CGC ATC AGC 2110 Leu Asp Gly Leu Arg Thr Leu Met Leu Arg Asn Asn Arg Ile Ser 590 595 600 TGC ATC CAC AAC GAC AGC TTC ACG GGC CTG CGC AAC GTC CGG CTC 2155 Cys Ile His Asn Asp Ser Phe Thr Gly Leu Arg Asn Val Arg Leu 605 610 615 CTC TCG CTC TAC GAC AAC CAG ATC ACC ACC GTA TCC CCA GGA GCC 2200 Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Gln Ile Thr Thr Val Ser Pro Gly Ala 620 625 630 TTC GAC ACC CTC CAG TCC CTC TCC ACA CTG AAT CTC CTG GCC AAC 2245 Phe Asp Thr Leu Gln Ser Leu Ser Thr Leu Asn Leu Leu Ala Asn 635 640 645 CCT TTC AAC TGC AAC TGC CAG CTG GCC TGG CTA GGA GGC TGG CTA 2290 Pro Phe Asn Cys Asn Cys Gln Leu Ala Trp Leu Gly Gly Trp Leu 650 655 660 CGG AAG CGC AAG ATC GTG ACG GGG AAC CCG CGA TGC CAG AAC CCT 2335 Arg Lys Arg Lys Ile Val Thr Gly Asn Pro Arg Cys Gln Asn Pro 665 670 675 GAC TTT TTG CGG CAG ATT CCC CTG CAG GAC GTG GCC TTC CCT GAC 2380 Asp Phe Leu Arg Gln Ile Pro Leu Gln Asp Val Ala Phe Pro Asp 680 685 690 TTC AGG TGT GAG GAA GGC CAG GAG GAG GGG GGC TGC CTG CCC CGC 2425 Phe Arg Cys Glu Glu Gly Gln Glu Glu Gly Gly Cys Leu Pro Arg 695 700 705 CCA CAG TGC CCA CAG GAG TGC GCC TGC CTG GAC ACC GTG GTC CGA 2470 Pro Gln Cys Pro Gln Glu Cys Ala Cys Leu Asp Thr Val Val Arg 710 715 720 TGC AGC AAC AAG CAC CTG CGG GCC CTG CCC AAG GGC ATT CCC AAG 2515 Cys Ser Asn Lys His Leu Arg Ala Leu Pro Lys Gly Ile Pro Lys 725 730 735 AAT GTC ACA GAA CTC TAT TTG GAC GGG AAC CAG TTC ACG CTG GTT 2560 Asn Val Thr Glu Leu Tyr Leu Asp Gly Asn Gln Phe Thr Leu Val 740 745 750 CCG GGA CAG CTG TCT ACC TTC AAG TAC CTG CAG CTC GTG GAC CTG 2605 Pro Gly Gln Leu Ser Thr Phe Lys Tyr Leu Gln Leu Val Asp Leu 755 760 765 AGC AAC AAC AAG ATC AGT TCC TTA AGC AAT TCC TCC TTC ACC AAC 2650 Ser Asn Asn Lys Ile Ser Ser Leu Ser Asn Ser Ser Phe Thr Asn 770 775 780 ATG AGC CAG CTG ACC ACT CTG ATC CTC AGC TAC AAT GCC CTG CAG 2695 Met Ser Gln Leu Thr Thr Leu Ile Leu Ser Tyr Asn Ala Leu Gln 785 790 795 TGC ATC CCG CCT TTG GCC TTC CAG GGA CTC CGC TCC CTG CGC CTG 2740 Cys Ile Pro Pro Leu Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Arg Leu 800 805 810 CTG TCT CTC CAC GGC AAT GAC ATC TCC ACC CTC CAA GAG GGC ATC 2785 Leu Ser Leu His Gly Asn Asp Ile Ser Thr Leu Gln Glu Gly Ile 815 820 825 TTT GCA GAC GTG ACC TCC CTG TCT CAC CTG GCC ATT GGT GCC AAC 2830 Phe Ala Asp Val Thr Ser Leu Ser His Leu Ala Ile Gly Ala Asn 830 835 840 CCC CTA TAC TGT GAC TGC CAC CTC CGC TGG CTG TCC AGC TGG GTG 2875 Pro Leu Tyr Cys Asp Cys His Leu Arg Trp Leu Ser Ser Trp Val 845 850 855 AAG ACT GGC TAC AAG GAA CCG GGC ATT GCT CGT TGT GCT GGG CCC 2920 Lys Thr Gly Tyr Lys Glu Pro Gly Ile Ala Arg Cys Ala Gly Pro 860 865 870 CAG GAC ATG GAG GGC AAG CTG CTC CTC ACC ACG CCT GCC AAG AAG 2965 Gln Asp Met Glu Gly Lys Leu Leu Leu Thr Thr Pro Ala Lys Lys 875 880 885 TTT GAA TGC CAA GGT CCT CCA ACG CTG GCT GTC CAG GCC AAG TGT 3010 Phe Glu Cys Gln Gly Pro Pro Thr Leu Ala Val Gln Ala Lys Cys 890 895 900 GAT CTC TGC TTG TCC AGT CCG TGC CAG AAC CAG GGC ACC TGC CAC 3055 Asp Leu Cys Leu Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gln Gly Thr Cys His 905 910 915 AAC GAC CCC CTT GAG GTG TAC AGG TGC GCC TGC CCC AGC GGC TAT 3100 Asn Asp Pro Leu Glu Val Tyr Arg Cys Ala Cys Pro Ser Gly Tyr 920 925 930 AAG GGT CGA GAC TGT GAG GTG TCC CTG AAC AGC TGT TCC AGT GGC 3145 Lys Gly Arg Asp Cys Glu Val Ser Leu Asn Ser Cys Ser Ser Gly 935 940 945 CCC TGT GAA AAT GGG GGC ACC TGC CAT GCA CAG GAG GGC GAG GAT 3190 Pro Cys Glu Asn Gly Gly Thr Cys His Ala Gln Glu Gly Glu Asp 950 955 960 GCC CCG TTC ACG TGC TCC TGT CCC ACC GGC TTT GAA GGA CCA ACC 3235 Ala Pro Phe Thr Cys Ser Cys Pro Thr Gly Phe Glu Gly Pro Thr 965 970 975 TGT GGG GTG AAC ACA GAT GAC TGT GTG GAT CAT GCC TGT GCC AAT 3280 Cys Gly Val Asn Thr Asp Asp Cys Val Asp His Ala Cys Ala Asn 980 985 990 GGG GGC GTC TGT GTG GAT GGT GTG GGC AAC TAC ACC TGC CAG TGC 3325 Gly Gly Val Cys Val Asp Gly Val Gly Asn Tyr Thr Cys Gln Cys 995 1000 1005 CCC CTG CAG TAT GAG GGA AAG GCC TGT GAG CAG CTG GTG GAC TTG 3370 Pro Leu Gln Tyr Glu Gly Lys Ala Cys Glu Gln Leu Val Asp Leu 1010 1015 1020 TGC TCT CCG GAT CTG AAC CCA TGT CAA CAC GAG GCC CAG TGT GTG 3415 Cys Ser Pro Asp Leu Asn Pro Cys Gln His Glu Ala Gln Cys Val 1025 1030 1035 GGC ACC CCG GAT GGG CCC AGG TGT GAG TGC ATG CCA GGT TAT GCA 3460 Gly Thr Pro Asp Gly Pro Arg Cys Glu Cys Met Pro Gly Tyr Ala 1040 1045 1050 GGT GAC AAC TGC AGT GAG AAC CAG GAT GAC TGC AGG GAC CAC CGC 3505 Gly Asp Asn Cys Ser Glu Asn Gln Asp Asp Cys Arg Asp His Arg 1055 1060 1065 TGC CAG AAT GGG GCC CAG TGT ATG GAT GAA GTC AAC AGC TAC TCC 3550 Cys Gln Asn Gly Ala Gln Cys Met Asp Glu Val Asn Ser Tyr Ser 1070 1075 1080 TGC CTC TGT GCT GAG GGC TAC AGT GGA CAG CTC TGT GAG ATC CCT 3595 Cys Leu Cys Ala Glu Gly Tyr Ser Gly Gln Leu Cys Glu Ile Pro 1085 1090 1095 CCC CAT CTG CCT GCC CCC AAG AGC CCC TGT GAG GGG ACT GAG TGC 3640 Pro His Leu Pro Ala Pro Lys Ser Pro Cys Glu Gly Thr Glu Cys 1100 1105 1110 CAG AAT GGG GCC AAC TGT GTG GAC CAG GGC AAC AGG CCT GTG TGC 3685 Gln Asn Gly Ala Asn Cys Val Asp Gln Gly Asn Arg Pro Val Cys 1115 1120 1125 CAG TGC CTC CCA GGC TTC GGT GGC CCT GAG TGT GAG AAG TTG CTC 3730 Gln Cys Leu Pro Gly Phe Gly Gly Pro Glu Cys Glu Lys Leu Leu 1130 1135 1140 AGT GTC AAC TTT GTG GAT CGG GAC ACT TAC CTG CAG TTC ACT GAC 3775 Ser Val Asn Phe Val Asp Arg Asp Thr Tyr Leu Gln Phe Thr Asp 1145 1150 1155 CTG CAA AAC TGG CCA CGG GCC AAC ATC ACG TTG CAG GTC TCC ACG 3820 Leu Gln Asn Trp Pro Arg Ala Asn Ile Thr Leu Gln Val Ser Thr 1160 1165 1170 GCA GAG GAC AAT GGG ATC CTT CTG TAC AAC GGG GAC AAC GAC CAC 3865 Ala Glu Asp Asn Gly Ile Leu Leu Tyr Asn Gly Asp Asn Asp His 1175 1180 1185 ATT GCA GTT GAG CTG TAC CAG GGC CAT GTG CGT GTC AGC TAC GAC 3910 Ile Ala Val Glu Leu Tyr Gln Gly His Val Arg Val Ser Tyr Asp 1190 1195 1200 CCA GGC AGC TAC CCC AGC TCT GCC ATC TAC AGT GCT GAG ACG ATC 3955 Pro Gly Ser Tyr Pro Ser Ser Ala Ile Tyr Ser Ala Glu Thr Ile 1205 1210 1215 AAC GAT GGG CAA TTC CAC ACC GTT GAG CTG GTT GCC TTT GAC CAG 4000 Asn Asp Gly Gln Phe His Thr Val Glu Leu Val Ala Phe Asp Gln 1220 1225 1230 ATG GTG AAT CTC TCC ATT GAT GGC GGG AGC CCC ATG ACC ATG GAC 4045 Met Val Asn Leu Ser Ile Asp Gly Gly Ser Pro Met Thr Met Asp 1235 1240 1245 AAC TTT GGC AAA CAT TAC ACG CTC AAC AGC GAG GCG CCA CTC TAT 4090 Asn Phe Gly Lys His Tyr Thr Leu Asn Ser Glu Ala Pro Leu Tyr 1250 1255 1260 GTG GGA GGG ATG CCC GTG GAT GTC AAC TCA GCT GCC TTC CGC CTG 4135 Val Gly Gly Met Pro Val Asp Val Asn Ser Ala Ala Phe Arg Leu 1265 1270 1275 TGG CAG ATC CTC AAC GGC ACC GGC TTC CAC GGT TGC ATC CGA AAC 4180 Trp Gln Ile Leu Asn Gly Thr Gly Phe His Gly Cys Ile Arg Asn 1280 1285 1290 CTG TAC ATC AAC AAC GAG CTG CAG GAC TTC ACC AAG ACG CAG ATG 4225 Leu Tyr Ile Asn Asn Glu Leu Gln Asp Phe Thr Lys Thr Gln Met 1295 1300 1305 AAG CCA GGC GTG GTG CCA GGC TGC GAA CCC TGC CGC AAG CTC TAC 4270 Lys Pro Gly Val Val Pro Gly Cys Glu Pro Cys Arg Lys Leu Tyr 1310 1315 1320 TGC CTG CAT GGC ATC TGC CAG CCC AAT GCC ACC CCA GGG CCC ATG 4315 Cys Leu His Gly Ile Cys Gln Pro Asn Ala Thr Pro Gly Pro Met 1325 1330 1335 TGC CAC TGC GAG GCT GGC TGG GTG GGC CTG CAC TGT GAC CAG CCC 4360 Cys His Cys Glu Ala Gly Trp Val Gly Leu His Cys Asp Gln Pro 1340 1345 1350 GCT GAC GGC CCC TGC CAT GGC CAC AAG TGT GTC CAT GGG CAA TGC 4405 Ala Asp Gly Pro Cys His Gly His Lys Cys Val His Gly Gln Cys 1355 1360 1365 GTG CCC CTC GAC GCT CTT TCC TAC AGC TGC CAG TGC CAG GAT GGG 4450 Val Pro Leu Asp Ala Leu Ser Tyr Ser Cys Gln Cys Gln Asp Gly 1370 1375 1380 TAC TCG GGG GCA CTG TGC AAC CAG GCC GGG GCC CTG GCA GAG CCC 4495 Tyr Ser Gly Ala Leu Cys Asn Gln Ala Gly Ala Leu Ala Glu Pro 1385 1390 1395 TGC AGA GGC CTG CAG TGC CTG CAT GGC CAC TGC CAG GCC TCA GGC 4540 Cys Arg Gly Leu Gln Cys Leu His Gly His Cys Gln Ala Ser Gly 1400 1405 1410 ACC AAG GGG GCA CAC TGT GTG TGT GAC CCC GGC TTT TCG GGC GAG 4585 Thr Lys Gly Ala His Cys Val Cys Asp Pro Gly Phe Ser Gly Glu 1415 1420 1425 CTG TGT GAG CAA GAG TCC GAG TGC CGG GGG GAC CCT GTC CGG GAC 4630 Leu Cys Glu Gln Glu Ser Glu Cys Arg Gly Asp Pro Val Arg Asp 1430 1345 1440 TTT CAC CAG GTC CAG AGG GGC TAT GCC ATC TGC CAG ACC ACG CGC 4675 Phe His Gln Val Gln Arg Gly Tyr Ala Ile Cys Gln Thr Thr Arg 1445 1450 1455 CCC CTG TCA TGG GTG GAG TGC CGG GGC TCG TGC CCA GGC CAG GGC 4720 Pro Leu Ser Trp Val Glu Cys Arg Gly Ser Cys Pro Gly Gln Gly 1460 1465 1470 TGC TGC CAG GGC CTT CGG CTG AAG CGG AGG AAG TTC ACC TTT GAG 4765 Cys Cys Gln Gly Leu Arg Leu Lys Arg Arg Lys Phe Thr Phe Glu 1475 1480 1485 TGC AGC GAT GGG ACC TCT TTT GCC GAG GAG GTG GAA AAG CCC ACC 4810 Cys Ser Asp Gly Thr Ser Phe Ala Glu Glu Val Glu Lys Pro Thr 1490 1495 1500 AAG TGT GGC TGT GCC CTC TGC GCA TAGCGC TGGGCGTGGA CAGGCCGGTG 4860 Lys Cys Gly Cys Ala Leu Cys Ala 1505 1508 AGGGCGGGCA AGGGGCCCCA GCCGCTGCAG CAGCGGAGAC AGTCGCCAGC AGCTGGGCTG 4920 GGGTGCAGGT CATCACAGGA CGGCTCCTGG GCAGCTGGGC CCTCCTGGGT GGGGTGGTGC 4980 CAGAGCAGCC TTTTAAAAGC AAATTGCGCC ATAGCTGGGG GCAGCGGGGG TGGGCGAGGC 5040 CTGAGCTGCG GGCTGCCCTC TCCGGAAGTC CTTGCACAAA TAGGCGCTTA ATAA 5094

【００９６】配列番号：6 配列の長さ：1534 配列の型：アミノ酸 トポロジー：不明 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：ヒト 配列 Met Ala Leu Thr Pro Gly Trp Gly Ser Ser Ala -26 -25 -20 Gly Pro Val Arg Pro Glu Leu Trp Leu Leu Leu Trp Ala Ala Ala -15 -10 -5 Trp Arg Leu Gly Ala Ser Ala Cys Pro Ala Leu Cys Thr Cys Thr 1 5 10 15 Gly Thr Thr Val Asp Cys His Gly Thr Gly Leu Gln Ala Ile Pro 20 25 30 Lys Asn Ile Pro Arg Asn Thr Glu Arg Leu Glu Leu Asn Gly Asn 35 40 45 Asn Ile Thr Arg Ile His Lys Asn Asp Phe Ala Gly Leu Lys Gln 50 55 60 Leu Arg Val Leu Gln Leu Met Glu Asn Gln Ile Gly Ala Val Glu 65 70 75 Arg Gly Ala Phe Asp Asp Met Lys Glu Leu Glu Arg Leu Arg Leu 80 85 90 Asn Arg Asn Gln Leu His Met Leu Pro Glu Leu Leu Phe Gln Asn 95 100 105 Asn Gln Ala Leu Ser Arg Leu Asp Leu Ser Glu Asn Ala Ile Gln 110 115 120 Ala Ile Pro Arg Lys Ala Phe Arg Gly Ala Thr Asp Leu Lys Asn 125 130 135 Leu Arg Leu Asp Lys Asn Gln Ile Ser Cys Ile Glu Glu Gly Ala 140 145 150 Phe Arg Ala Leu Arg Gly Leu Glu Val Leu Thr Leu Asn Asn Asn 155 160 165 Asn Ile Thr Thr Ile Pro Val Ser Ser Phe Asn His Met Pro Lys 170 175 180 Leu Arg Thr Phe Arg Leu His Ser Asn His Leu Phe Cys Asp Cys 185 190 195 His Leu Ala Trp Leu Ser Gln Trp Leu Arg Gln Arg Pro Thr Ile 200 205 210 Glu Leu Phe Thr Gln Cys Ser Gly Pro Ala Ser Leu Arg Gly Leu 215 220 225 Asn Val Ala Glu Val Gln Lys Ser Glu Phe Ser Cys Ser Gly Gln 230 235 240 Gly Glu Ala Gly Arg Val Pro Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Ser 245 250 255 Cys Pro Ala Met Cys Thr Cys Ser Asn Gly Ile Val Asp Cys Arg 260 265 270 Gly Lys Gly Leu Thr Ala Ile Pro Ala Asn Leu Pro Glu Thr Met 275 280 285 Thr Glu Ile Arg Leu Glu Leu Asn Gly Ile Lys Ser Ile Pro Pro 290 295 300 Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Arg Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser 305 310 315 Asn Asn Gln Ile Ala Glu Ile Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu 320 325 330 Arg Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Asp 335 340 345 Leu Pro Arg Gly Val Phe Gly Gly Leu Tyr Thr Leu Gln Leu Leu 350 355 360 Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Ile Arg Pro Asp Ala Phe 365 370 375 Gln Asp Leu Gln Asn Leu Ser Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys 380 385 390 Ile Gln Ser Leu Ala Lys Gly Thr Phe Thr Ser Leu Arg Ala Ile 395 400 405 Gln Thr Leu His Leu Ala Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys Asn 410 415 420 Leu Lys Trp Leu Ala Asp Phe Leu Arg Thr Asn Pro Ile Glu Thr 425 430 435 Ser Gly Ala Arg Cys Ala Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg 440 445 450 Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Ala Lys Glu 455 460 465 Gln Tyr Phe Ile Pro Gly Thr Glu Asp Tyr Gln Leu Asn Ser Glu 470 475 480 Cys Asn Ser Asp Val Val Cys Pro His Lys Cys Arg Cys Glu Ala 485 490 495 Asn Val Val Glu Cys Ser Ser Leu Lys Leu Thr Lys Ile Pro Glu 500 505 510 Arg Ile Pro Gln Ser Thr Ala Glu Leu Arg Leu Asn Asn Asn Glu 515 520 525 Ile Ser Ile Leu Glu Ala Thr Gly Met Phe Lys Lys Leu Thr His 530 535 540 Leu Lys Lys Ile Asn Leu Ser Asn Asn Lys Val Ser Glu Ile Glu 545 550 555 Asp Gly Ala Phe Glu Gly Ala Ala Ser Val Ser Glu Leu His Leu 560 565 570 Thr Ala Asn Gln Leu Glu Ser Ile Arg Ser Gly Met Phe Arg Gly 575 580 585 Leu Asp Gly Leu Arg Thr Leu Met Leu Arg Asn Asn Arg Ile Ser 590 595 600 Cys Ile His Asn Asp Ser Phe Thr Gly Leu Arg Asn Val Arg Leu 605 610 615 Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Gln Ile Thr Thr Val Ser Pro Gly Ala 620 625 630 Phe Asp Thr Leu Gln Ser Leu Ser Thr Leu Asn Leu Leu Ala Asn 635 640 645 Pro Phe Asn Cys Asn Cys Gln Leu Ala Trp Leu Gly Gly Trp Leu 650 655 660 Arg Lys Arg Lys Ile Val Thr Gly Asn Pro Arg Cys Gln Asn Pro 665 670 675 Asp Phe Leu Arg Gln Ile Pro Leu Gln Asp Val Ala Phe Pro Asp 680 685 690 Phe Arg Cys Glu Glu Gly Gln Glu Glu Gly Gly Cys Leu Pro Arg 695 700 705 Pro Gln Cys Pro Gln Glu Cys Ala Cys Leu Asp Thr Val Val Arg 710 715 720 Cys Ser Asn Lys His Leu Arg Ala Leu Pro Lys Gly Ile Pro Lys 725 730 735 Asn Val Thr Glu Leu Tyr Leu Asp Gly Asn Gln Phe Thr Leu Val 740 745 750 Pro Gly Gln Leu Ser Thr Phe Lys Tyr Leu Gln Leu Val Asp Leu 755 760 765 Ser Asn Asn Lys Ile Ser Ser Leu Ser Asn Ser Ser Phe Thr Asn 770 775 780 Met Ser Gln Leu Thr Thr Leu Ile Leu Ser Tyr Asn Ala Leu Gln 785 790 795 Cys Ile Pro Pro Leu Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Arg Leu 800 805 810 Leu Ser Leu His Gly Asn Asp Ile Ser Thr Leu Gln Glu Gly Ile 815 820 825 Phe Ala Asp Val Thr Ser Leu Ser His Leu Ala Ile Gly Ala Asn 830 835 840 Pro Leu Tyr Cys Asp Cys His Leu Arg Trp Leu Ser Ser Trp Val 845 850 855 Lys Thr Gly Tyr Lys Glu Pro Gly Ile Ala Arg Cys Ala Gly Pro 860 865 870 Gln Asp Met Glu Gly Lys Leu Leu Leu Thr Thr Pro Ala Lys Lys 875 880 885 Phe Glu Cys Gln Gly Pro Pro Thr Leu Ala Val Gln Ala Lys Cys 890 895 900 Asp Leu Cys Leu Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gln Gly Thr Cys His 905 910 915 Asn Asp Pro Leu Glu Val Tyr Arg Cys Ala Cys Pro Ser Gly Tyr 920 925 930 Lys Gly Arg Asp Cys Glu Val Ser Leu Asn Ser Cys Ser Ser Gly 935 940 945 Pro Cys Glu Asn Gly Gly Thr Cys His Ala Gln Glu Gly Glu Asp 950 955 960 Ala Pro Phe Thr Cys Ser Cys Pro Thr Gly Phe Glu Gly Pro Thr 965 970 975 Cys Gly Val Asn Thr Asp Asp Cys Val Asp His Ala Cys Ala Asn 980 985 990 Gly Gly Val Cys Val Asp Gly Val Gly Asn Tyr Thr Cys Gln Cys 995 1000 1005 Pro Leu Gln Tyr Glu Gly Lys Ala Cys Glu Gln Leu Val Asp Leu 1010 1015 1020 Cys Ser Pro Asp Leu Asn Pro Cys Gln His Glu Ala Gln Cys Val 1025 1030 1035 Gly Thr Pro Asp Gly Pro Arg Cys Glu Cys Met Pro Gly Tyr Ala 1040 1045 1050 Gly Asp Asn Cys Ser Glu Asn Gln Asp Asp Cys Arg Asp His Arg 1055 1060 1065 Cys Gln Asn Gly Ala Gln Cys Met Asp Glu Val Asn Ser Tyr Ser 1070 1075 1080 Cys Leu Cys Ala Glu Gly Tyr Ser Gly Gln Leu Cys Glu Ile Pro 1085 1090 1095 Pro His Leu Pro Ala Pro Lys Ser Pro Cys Glu Gly Thr Glu Cys 1100 1105 1110 Gln Asn Gly Ala Asn Cys Val Asp Gln Gly Asn Arg Pro Val Cys 1115 1120 1125 Gln Cys Leu Pro Gly Phe Gly Gly Pro Glu Cys Glu Lys Leu Leu 1130 1135 1140 Ser Val Asn Phe Val Asp Arg Asp Thr Tyr Leu Gln Phe Thr Asp 1145 1150 1155 Leu Gln Asn Trp Pro Arg Ala Asn Ile Thr Leu Gln Val Ser Thr 1160 1165 1170 Ala Glu Asp Asn Gly Ile Leu Leu Tyr Asn Gly Asp Asn Asp His 1175 1180 1185 Ile Ala Val Glu Leu Tyr Gln Gly His Val Arg Val Ser Tyr Asp 1190 1195 1200 Pro Gly Ser Tyr Pro Ser Ser Ala Ile Tyr Ser Ala Glu Thr Ile 1205 1210 1215 Asn Asp Gly Gln Phe His Thr Val Glu Leu Val Ala Phe Asp Gln 1220 1225 1230 Met Val Asn Leu Ser Ile Asp Gly Gly Ser Pro Met Thr Met Asp 1235 1240 1245 Asn Phe Gly Lys His Tyr Thr Leu Asn Ser Glu Ala Pro Leu Tyr 1250 1255 1260 Val Gly Gly Met Pro Val Asp Val Asn Ser Ala Ala Phe Arg Leu 1265 1270 1275 Trp Gln Ile Leu Asn Gly Thr Gly Phe His Gly Cys Ile Arg Asn 1280 1285 1290 Leu Tyr Ile Asn Asn Glu Leu Gln Asp Phe Thr Lys Thr Gln Met 1295 1300 1305 Lys Pro Gly Val Val Pro Gly Cys Glu Pro Cys Arg Lys Leu Tyr 1310 1315 1320 Cys Leu His Gly Ile Cys Gln Pro Asn Ala Thr Pro Gly Pro Met 1325 1330 1335 Cys His Cys Glu Ala Gly Trp Val Gly Leu His Cys Asp Gln Pro 1340 1345 1350 Ala Asp Gly Pro Cys His Gly His Lys Cys Val His Gly Gln Cys 1355 1360 1365 Val Pro Leu Asp Ala Leu Ser Tyr Ser Cys Gln Cys Gln Asp Gly 1370 1375 1380 Tyr Ser Gly Ala Leu Cys Asn Gln Ala Gly Ala Leu Ala Glu Pro 1385 1390 1395 Cys Arg Gly Leu Gln Cys Leu His Gly His Cys Gln Ala Ser Gly 1400 1405 1410 Thr Lys Gly Ala His Cys Val Cys Asp Pro Gly Phe Ser Gly Glu 1415 1420 1425 Leu Cys Glu Gln Glu Ser Glu Cys Arg Gly Asp Pro Val Arg Asp 1430 1345 1440 Phe His Gln Val Gln Arg Gly Tyr Ala Ile Cys Gln Thr Thr Arg 1445 1450 1455 Pro Leu Ser Trp Val Glu Cys Arg Gly Ser Cys Pro Gly Gln Gly 1460 1465 1470 Cys Cys Gln Gly Leu Arg Leu Lys Arg Arg Lys Phe Thr Phe Glu 1475 1480 1485 Cys Ser Asp Gly Thr Ser Phe Ala Glu Glu Val Glu Lys Pro Thr 1490 1495 1500 Lys Cys Gly Cys Ala Leu Cys Ala 1505 1508

【００９７】配列番号：7 配列の長さ：101 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 起源 生物名：ヒト 組織の種類：胎児肺 配列 GTC TTC AGA GCA CAA GTA TTT CAA AGC AGC CTA CCT GGG AAC TGC TCA 48 Val Phe Arg Ala Gln Val Phe Gln Ser Ser Leu Pro Gly Asn Cys Ser 1 5 10 15 TGG TCC TGC TGG CCA CCT AGA CCA CCA ATG CCC TGACTTCTAT GCCCTCTGCA 101 Trp Ser Cys Trp Pro Pro Arg Pro Pro Met Pro 20 25 27 配列番号8 配列の長さ：27 配列の型：アミノ酸 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント 起源 生物名：ヒト 組織の種類：胎児肺 配列 Val Phe Arg Ala Gln Val Phe Gln Ser Ser Leu Pro Gly Asn Cys Ser 1 5 10 15 Trp Ser Cys Trp Pro Pro Arg Pro Pro Met Pro 20 25 27 配列番号9 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸、合成ＤＮＡ 配列 AAGTCAACAG CTACTCCTGC 20

【００９８】配列番号10 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸、合成ＤＮＡ 配列 TGAACTGCAG GTAAGTGTCC 20 配列番号11 配列の長さ：8 配列の型：アミノ酸 トポロジー：不明 配列の種類：ペプチド 配列 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 8 配列番号：12 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸、合成ＤＮＡ 配列 CTATGACAGC CTGAGTTCCC 20 配列番号：13 配列の長さ：53 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸、合成ＤＮＡ 配列 CTCGAGTCAT TTATCATCAT CATCTTTATA ATCTTGTTGG CAGTGCTCGC CGC 53

【００９９】配列番号：14 配列の長さ：33 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA to mRNA 配列 GAT TAT AAA GAT GAT GAT GAT AAA TGATCTAGA 33 Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 8 配列番号：15 配列の長さ：24 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸、合成ＤＮＡ 配列 GGTACCTGCA CACCATGGCC CCCG 24 配列番号：16 配列の長さ：20 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸、合成ＤＮＡ 配列 GGCGCAGAGT TCGGATCTTC 20

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/53 33/577 Ｂ 33/577 Ａ６１Ｋ 48/00 ＡＢＵ // Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＡＡ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ ＡＢＪ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＡ ＡＢＹ ＡＢＪ ＡＣＮ ＡＢＹ ＡＣＶ ＡＣＮ ＡＤＮ ＡＣＶ ＡＤＰ ＡＤＮ ＡＤＵ ＡＤＰ ＡＦＧ ＡＤＵ 48/00 ＡＢＵ ＡＦＧ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１に記載のアミノ酸配
   列を含有するポリペプチドまたはその変異体であるポリ
   ペプチド。
2. 【請求項２】 請求項１に記載のポリペプチドをコード
   するＤＮＡ。
3. 【請求項３】 請求項２に記載のＤＮＡが配列表の配列
   番号２に記載の３４５番から４８３２番の塩基配列を含
   有するＤＮＡ。
4. 【請求項４】 請求項２に記載のＤＮＡと、宿主細胞中
   で発現可能なベクターＤＮＡとを連結してなる組換えＤ
   ＮＡ体。
5. 【請求項５】 請求項４に記載の組換えＤＮＡ体によっ
   て形質転換された細胞。
6. 【請求項６】 請求項４に記載の組換えＤＮＡ体を用い
   て作製された当該アミノ酸配列を含有するポリペプチド
   の生産方法。
7. 【請求項７】 請求項１に記載のポリペプチドを特異的
   に認識する抗体。