JPH11511029A - 成長ホルモン分泌促進物質レセプターアッセイ - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1. 成長ホルモン分泌促進物質レセプター(GHSR)又は成長ホルモン関連 レセプター(GHSRR)をコードする核酸の存在の測定方法であって、 a)細胞膜上に天然ではGHSR又はGHSRRを発現しない細胞に、該レセプ ターをコードする可能性のある核酸を導入すること; b)該細胞に、検出用分子又は検出用分子をコードする核酸を導入すること、こ こで検出用分子は直接的に又は間接的にレセプター−リガンド結合事象に反応す るものとする; c)該細胞を成長ホルモン分泌促進物質と接触させること;及び d)該検出用分子を監視することによって、該核酸がレセプターをコードするか どうかを測定すること; を含むことを特徴とする該方法。 2. 成長ホルモン分泌促進物質の存在の測定方法であって、 a)成長ホルモン分泌促進物質レセプターが発現するような条件下、成長ホルモ ン分泌促進物質レセプターをコードする核酸 を、細胞内に導入すること; b)該細胞に、検出用分子又は検出用分子をコードする核酸を導入すること、こ こで検出用分子は直接的に又は間接的にGHSR−リガンド結合事象に反応する ものとする; c)該細胞を成長ホルモン分泌促進物質の可能性のある化合物と接触させること ;及び d)該検出用分子を監視することによって、該化合物が成長ホルモン分泌促進物 質であるかどうかを測定すること; を含むことを特徴とする該方法。 3. Gタンパク質細胞膜レセプターをコードする核酸の存在の測定方法であっ て、 a)細胞に、Gタンパク質細胞膜レセプターをコードする可能性のある少なくと も1種の核酸を導入すること; b)該細胞に、Gタンパク質サブユニットを導入すること; c)該細胞に、検出用分子又は検出用分子をコードする核酸を導入すること、こ こで検出用分子は直接的に又は間接的にGタンパク質レセプター−リガンド結合 事象に反応するものとする; d)該細胞をレセプターリガンドと接触させること;及び d)該検出用分子を監視することによって、該核酸がレセプターをコードするか どうかを測定すること; を含むことを特徴とする該方法。 4. 細胞が、その細胞膜上にレセプターを天然には発現しないことを特徴とす る請求項3に記載の方法。 5. レセプターが成長ホルモン分泌促進物質レセプター(GHSR)であるこ とを特徴とする請求項4に記載の方法。 6. レセプターが成長ホルモン分泌促進物質関連レセプター(GHSRR)で あることを特徴とする請求項4に記載の方法。 7. 成長ホルモン分泌促進物質レセプター(GHSR)又は成長ホルモン分泌 促進物質関連レセプター(GHSRR)をコードする核酸の存在を測定するアッ セイであって、 a)細胞膜上に天然にはGHSR又はGHSRRを発現しない細胞に、該レセプ ターをコードする可能性のある少なくとも1種の核酸を導入すること; b)該細胞に、Gタンパク質サブユニットを導入すること; c)該細胞に、検出用分子又は検出用分子をコードする核酸を導入すること、こ こで検出用分子は直接的に又は間接的にレセプター−リガンド結合事象に反応す るものとする; d)該細胞を成長ホルモン分泌促進物質と接触させること;及び e)該検出用分子を監視することによって、該核酸がレセプターをコードするか どうかを測定すること; を含むことを特徴とする該アッセイ。 8. 工程a)で、少なくとも500種の異なる核酸分子を含むプールを細胞に 導入することを特徴とする請求項7に記載の方法。 9. プールがRNA分子を含むことを特徴とする請求項8に記載の方法。 10. プールが、成長ホルモン分泌促進物質レセプターをコードする核酸を含 むことを測定するときに、プールがより少数の異なる核酸分子を含むことを除い て、工程a)〜e)を繰返すことを特徴とする請求項8に記載の方法。 11. 工程a)で、唯一つの型のオリゴヌクレオチドを細胞に導入することを 特徴とする請求項10に記載の方法。 12. Gタンパク質がG−アルファタンパク質サブユニットであることを特徴 とする請求項7に記載の方法。 13. Gタンパク質がGα11サブユニットであることを特徴 とする請求項12に記載の方法。 14. 検出用分子がエクオリンであることを特徴とする請求項7に記載の方法 。 15. 成長ホルモン分泌促進物質の存在の測定のアッセイ方法であって、 a)成長ホルモン分泌促進物質レセプターが発現するような条件下で、成長ホル モン分泌促進物質レセプターをコードする核酸を細胞に導入すること; b)該細胞に、Gタンパク質サブユニットを導入すること; c)該細胞に、検出用分子又は検出用分子をコードする核酸を導入すること、こ こで検出用分子は直接的に又は間接的にGHSR−リガンド結合事象に反応する ものとする; d)該細胞を、成長ホルモン分泌促進物質の可能性のある化合物と接触させるこ と;及び e)検出用分子を監視することによって、化合物が成長ホルモン分泌促進物質で あるかどうかを測定すること; を含むことを特徴とする該アッセイ方法。 16. Gタンパク質がG−アルファタンパク質サブユニットであることを特徴 とする請求項15に記載の方法。 17. Gタンパク質サブユニットがGα11サブユニットであることを特徴とす る請求項16に記載の方法。 18. 工程e)の結果を、公知の成長ホルモン分泌促進物質を用いて得られた 結果と比較することを特徴とする請求項15に記載の方法。 19. ヒト成長ホルモン分泌促進物質レセプターに結合するリガンドの同定の アッセイであって、Gタンパク質サブユニットα11の存在下、リガンドの可能 性のあるものを、ヒト成長ホルモン分泌促進物質レセプターと接触させ、結合が 起ったかどうかを測定することを含むことを特徴とする該アッセイ。 20. 天然ではヒト成長ホルモン分泌促進物質レセプターを発現しない宿主細 胞で、ヒト成長ホルモン分泌促進物質レセプターが発現されることを特徴とする 請求項19に記載のアッセイ。 21. 検出用分子の活性を測定することによって、結合を検出することを特徴 とする請求項20に記載のアッセイ。 22. 検出用分子がエクオリンであることを特徴とする請求項21に記載のア ッセイ。 23. 請求項15〜22のいずれかに記載のアッセイで同定 されることを特徴とするリガンド。 24. 標識リガンドを、GHSRタンパク質の可能性のあるものに曝し、結合 が起るかを測定することを含むことを特徴とする新規GHSRタンパク質の同定 方法。
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