JPH11510489A

JPH11510489A - 新規アミド基本カチオン性脂質

Info

Publication number: JPH11510489A
Application number: JP9506945A
Authority: JP
Inventors: シュワルツ，デイビッド・アーロン; デイリー，ウィリアム・ジェイ; ドワイヤー，ブライアン・パトリック; スリニバサン，クマール; ブラウン，ボブ・デイル
Original assignee: ジンタ・インコーポレイテッド
Priority date: 1995-07-21
Filing date: 1996-07-22
Publication date: 1999-09-14
Also published as: WO1997003939A1; AU707947B2; NZ313839A; CA2227373A1; AU6649496A; US6020526A; EP0869937A4; EP0869937A1

Abstract

(57)【要約】本発明は一般構造(Ｉ)：〔式中、(ａ)Ｙは直接結合または１から約２０の炭素原子のアルキレン；(ｂ)Ｒ₁はＨまたは親油性部分；(ｃ)Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は陽性荷電部分、またはＲ₂、Ｒ₃またはＲ₄の全てではないが少なくとも一つが陽性荷電部分であり、残りがＨ、１から約６の炭素原子のアルキル部分またはヘテロ環部分から独立して選択される；(ｄ)ｎおよびｐは、ｎおよびｏの合計が１から１６になるように０から８の整数からなる群から選択される整数；(ｅ)Ｘ^-はアニオンまたはポリアニオン；(ｆ)ｍは０から脂質に存在する陽性電荷と同じ数までの整数である；ただし、Ｙが直接結合であり、ｎとｐの合計が１である時、Ｒ₃またはＲ₄のいずれか一つは少なくとも１０炭素原子のアルキル部分でなければならない〕を有する新規アミド基本カチオン性脂質、またはその塩または溶媒和物またはそのエナンチオマーを提供する。本発明はさらにこれらの脂質とポリアニオン性巨大分子を含む組成物、これらの組成物を使用した細胞内でのタンパク質発現を妨害する方法およびこれらの製造するためのキットも提供する。

Description

【発明の詳細な説明】新規アミド基本カチオン性脂質発明の属する技術分野本発明は、細胞内への巨大分子の輸送のための脂質凝集体(lipid aggregates) として有用な新規アミド基本カチオン性脂質に関する。発明の背景リポソームのような脂質凝集体は、細胞内へのＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、タンパク質および医薬化合物のような巨大分子の輸送のための薬剤として有用であることが報告されている。特に、電荷および非電荷脂質を含む脂質凝集体は、ポリアニオン性分子の細胞への輸送に特に有効であることが記載されている。報告されているカチオン性脂質の効果は、全体として陰性電荷を有するとされている細胞との電荷相互作用に由来し得る。カチオン性脂質凝集体の全体としての陽性電荷は、それが核酸のようなポリアニオンと結合するのを可能にし得ることもまた想定されている。例えば、ＤＮＡを含む脂質凝集体は、細胞の効果的なトランスフェクションのための有効な薬剤であることが報告されている。種々のタイプの脂質凝集体の構造は、脂質の組成および凝集体の形成法を含む因子に依存して変化する。脂質凝集体は、例えば、リポソーム、単薄層小胞、多薄層小胞、ミセル等を含み、ナノメーターからマイクロメーター範囲の粒子サイズであり得る。脂質凝集体の種々の合成法が当分野で報告されている。脂質凝集体の一つのタイプはリポソームを含むリン脂質を含む。このタイプの凝集体を、細胞輸送媒体として使用する上での重要な欠点は、リポソームが陰性に電荷している細胞表面への結合効力を減少させる陰性電荷を有することである。ＤＮＡに結合できる陽性電荷リポソームがカチオン性脂質化合物とリン脂質を組み合わせることにより形成し得ることが報告されている。次いで、これらのリポソームをＤＮＡを標的細胞に輸送するのに使用する。(例えば、Ｆelgner et al.，Ｐroc ．Ｎat．Ａcad．Ｓci．84:7413-7417，1987；Ｅppstein et al．米国特許第４, ８９７,３５５号；Ｆelgner et al．米国特許第５,２６４,６１８号；およびＧe beyehu et al．米国特許第５,３３４,７６１号参照)。既知のカチオン性脂質はＮ[１−(２,３−ジオレオイルオキシ)プロピル]−Ｎ, Ｎ,Ｎ−トリメチル−アンモニウムクロリド(“ＤＯＴＭＡ”)を含み、ＤＯＴＭＡとジオレオイルホスファチジルエタノールアミン(“ＤＯＰＥ”)の組み合わせは商品として入手可能である。ＤＯＴＭＡの、それ自体またはＤＯＰＥとの１：１の組み合わせでの、既知の技術によるリポソーム形成が報告されている。しかしながら、ＤＯＴＭＡを含む組成物は細胞にいくらかの毒性を示すことが報告されている。他の商品として入手可能なカチオン性脂質である１,２−ビス(オレオイルオキシ)−３,３−(トリメチルアンモニア)プロパン(“ＤＯＴＡＰ”)は、オレオイル分子が、エーテルよりむしろエステル結合により、プロピルアミンに結合していることで、ＤＯＴＭＡと構造が異なる。しかしながら、ＤＯＴＡＰは標的細胞により、より容易に分解されることが報告されている。ＤＯＴＭＡおよびＤＯＴＡＰの構造修飾を示す他のカチオン性脂質もまた報告されている。他の報告されているカチオン性脂質化合物は、カルボキシスペルミンが二つのタイプの脂質の一つに結合するものを含み、５−カルボキシスペルミルグリシンジオクタオレオイルアミド(“ＤＯＧＳ”)およびジパルミトイル−ホスファチジルエタノールアミン５−カルボキシスペルミル−アミド(“ＤＰＰＥＳ”)のような化合物を含む。(例えば、Ｂehr et al．米国特許第５,１７１,６７８号参照) 。他の報告されているカチオン性脂質組成物は、ＤＯＰＥとの組み合わせでリポソームに調製されるカチオン性コレステロール誘導体(“ＤＣ−Ｃhol”)である。(Ｇao，Ｘ.およびＨuang，Ｌ.，Ｂiochem．Ｂiophys．Ｒes．Ｃommun．179:28 0, 1991参照)。ある細胞系に関して、これらのリポソームは低い毒性を示し、ＤＯＴＭＡ−含有組成物よりも有効なトランスフェクションを提供することが報告されていた。ポリリジンのＤＯＰＥへの結合により製造されるリポポリリジンが、血清存在下でのトランスフェクションに有効であることが報告されている。(Ｚhou，Ｘ． et al.，Ｂiochim．Ｂiophys．Ａcta 1065:8 1991)。しかしながら、細胞に巨大分子を輸送するための使用が提案されているカチオン性脂質に関して、特定のカチオン性脂質が広範囲のタイプの細胞に作用することは報告されていない。細胞のタイプ毎に膜組成が異なるため、異なるカチオン性脂質組成物および異なるタイプの脂質凝集体が、その標的細胞膜と直接接触および融合する能力、もしくは、細胞内膜または細胞内環境との異なる相互作用のため異なるタイプの細胞に有効であり得る。これらおよび他の理由のため、有効なカチオン性脂質の設計は非常に経験的なものである。内容物および輸送に加えて、他の重要と考えられる因子は、例えば、意図する目的に適した脂質凝集体を形成する能力、標的細胞への組成物の毒性、輸送すべき巨大分子の担体としての安定性、およびインビボ環境への機能を含む。従って、巨大分子を、高い効率で広範囲の細胞形に輸送できる改善されたカチオン性脂質の必要性がまだある。発明の要約本発明の一つの態様において、構造：〔式中、(ａ)Ｙは直接結合または１から約２０の炭素原子のアルキレン；(ｂ)Ｒ₁ はＨまたは親油性部分；(ｃ)Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は陽性荷電部分、またはＲ₂、Ｒ₃またはＲ₄の全てではないが少なくとも一つが陽性荷電部分であり、残りがＨ、１から約６の炭素原子のアルキル部分またはヘテロ環部分から独立して選択される；(ｄ)ｎおよびｐは、ｎおよびｏの合計が１から１６になるように０から８の整数から独立して選択される整数；(ｅ)Ｘ^-はアニオンまたはポリアニオン；および(ｆ)ｍは０から脂質に存在する陽性電荷と同じ数までの整数である；ただし、Ｙが直接結合であり、ｎとｐの合計が１である時、Ｒ₃またはＲ₄のいずれか一つは少なくとも１０炭素原子のアルキル部分でなければならない〕を有する新規アミド基本カチオン性脂質、またはその塩または溶媒和物またはそのエナンチオマーが提供される。一つの態様において、Ｒ₁は、１から約２４炭素原子の直鎖アルキル、２から約２４炭素原子の直鎖アルケニル、約１０から約５０炭素原子の対称に分枝したアルキルまたはアルケニル、約１０から約５０炭素原子の非対称に分枝したアルキルまたはアルケニル、ステロイジル部分、アミン誘導体、グリセリル誘導体またはＯＣＨ(Ｒ₅Ｒ₆)またはＮ(Ｒ₅Ｒ₆)(式中、Ｒ₅およびＲ₆は、約１０から約３０炭素原子の直鎖アルキル部分)を含む種々の親油性部分であり得る。他の態様において、Ｒ₂、Ｒ₃またはＲ₄が陽性荷電部分である場合、好ましくは、陽性荷電部分がアルキルアミン部分、フルオロアルキルアミン部分または１から約６炭素原子の過フルオロアルキルアミン部分、５から約１０炭素原子のアリールアミンまたはアラルキルアミン部分、グアニジニウム部分、エナミン部分、環状アミン部分、アミジン部分、イソチオウレア部分、もしくは、ＮＨ₂、Ｃ( ＝Ｏ)ＮＨ₂、ＮＨＲ₇、Ｃ(＝Ｏ)ＮＨＲ₇、ＮＨＲ₇Ｒ₈またはＣ(＝Ｏ)ＮＨＲ₇Ｒ₈ (式中、Ｒ₇およびＲ₈は１から約２４の炭素原子のアルキル部分、２から約２４炭素原子のアルケニル部分、約５から約２０炭素原子のアリール部分、約６から約２５炭素原子のアラルキル部分から独立して選択される)から選択される置換基で置換されている置換ヘテロ環状アミン部分、１から約６炭素原子の置換アルキル部分を含む、種々の陽性電荷部分である。Ｒ₂、Ｒ₃またはＲ₄が陽性荷電部分でない時、好ましくは、Ｒ₂、Ｒ₃またはＲ₄ の全てではないが少なくとも一つが、ＯＨ、チオ、約１から約２０炭素原子のアリールまたはＯＲ₇(式中、Ｒ₇は１から約２４炭素原子のアルキル部分、２から約２４炭素原子のアルケニル部分、約５から約２０炭素原子のアリール部分または約６から約２５炭素原子のアラルキル部分)から選択される置換基で置換されている１から約６炭素原子の置換ヘテロ環状部分または１から６炭素原子の置換アルキル部分からなる群から選択される。Ｒ₂、Ｒ₃またはＲ₄がトリプトファン、フェニルアラニンまたはチロシンであるアリールアミン部分である時が特に好ましい。他の好ましい態様において、Ｒ₂は、アミノ基が、所望により１から約６炭素原子のアルキルで置換されていてもよい、または２級、３級または４級アミンを形成するために、１から６炭素原子のアルキル部分(これは、所望によりヒドロキシル、アミノ、１から約６炭素原子のアルコキシ部分、１から約６炭素原子のアルキルアミン部分または２から約１２炭素原子のジアルキルアミノ部分で置換されていてもよい)で置換されていてもよい、陽性荷電側鎖を有するアミノ酸残基である。好ましくは、Ｒ₁がステロイジル部分である時、それはコレステリル部分である。好ましくは、Ｒ₂がアミノ酸である時、それはリジン、アルギニン、ヒスチジン、オルニチンまたはアミノ酸アナログである。特に、Ｒ₂がアミノ酸アナログである時、それは好ましくは、３−カルボキシスペルミジン、５−カルボキシスペルミジン、６−カルボキシスペルミジンまたはモノアルキル、ジアルキルまたは過アルキル置換誘導体(１から約６炭素原子のアルキル基を有する１個またはそれ以上のアミン窒素で置換されている)である。Ｒ₃およびＲ₄が独立して１から約２４炭素原子の親油性部分、陽性電荷部分、または陰性電荷部分であることが好ましい。特に、Ｒ₃およびＲ₄の両方またはいずれかが親油性部分である場合、約１から約２４炭素原子の直鎖アルキル部分、２から約２４炭素原子の直鎖アルケニル部分、約１０から約５０炭素原子の対称分枝アルキルまたはアルケニル部分、約１０から約５０炭素原子の非対称分枝アルキルまたはアルケニル部分、約５から約２０炭素原子のアリール部分、約６から約２５炭素原子のアラルキル部分、またはステロイジル部分であることが好ましい。Ｒ₃およびＲ₄の両方またはいずれかが陽性電荷部分である時、それは、側鎖に陽性電荷基を有するアミノ酸残基、アルキルアミノアルキル部分、フルオロアルキルアミノアルキル部分、過フルオロアルキルアミノアルキル部分、グアニジウムアルキル部分、エナミノアルキル部分、環状アミノアルキル部分、アミジノアルキル部分、イソチオウレアアルキル部分、またはヘテロ環状アミン部分であることが好ましい。Ｒ₃およびＲ₄の両方またはいずれかが陰性電荷部分である時、それはカルボキシアルキル部分、ホスホノアルキル部分、スルホノアルキル部分または１から約２４炭素原子炭素原子のホスファチジルアルキル部分であることが好ましい。さらに、ｎおよびｐの合計が１から８、より好ましくは１から４、最も好ましくは１から２であることが好ましい。また、Ｘ^-は医薬的に許容可能なアニオンまたはポリアニオンであることが好ましい。特に好ましい態様において、アミド基本カチオン性脂質は以下の構造を有する：本発明の他の態様において、ポリアニオン性巨大分子および上記の脂質構造を含む組成物が提供される。特に、ポリアニオン性巨大分子は細胞中でポリペプチドを発現できる発現ベクターを含む種々の巨大分子であり得る。好ましい態様において、ポリアニオン性巨大分子はオリゴヌクレオチドまたはオリゴマーおよびもっとも好ましくはＤＮＡである。本発明の更に別の態様は、上記の組成物を細胞と接触させることによる、ポリアニオン性巨大分子を細胞内に輸送する方法を提供する。特に、この方法は、細胞中のタンパク質の発現を、上記の組成物を細胞と接触させることにより妨害するために提供され、該組成物はタンパク質をコードする細胞中のＲＮＡ配列と実質的に相補的な塩基配列を有するオリゴマーを含む。本発明は、更に、上記組成物を含む、ポリアニオン性巨大分子を細胞内に輸送させるためのキットを提供する。図面の簡単な説明図１は、化合物１−９および１−１０の製造の合成スキームを記載する。この図において、ｉはヒドロキシルアミン塩酸塩；iiはラネイニッケル、４５psiのＨ₂および１：１ジクロロメタン：メタノール；iiiはクロロギ酸ベンジル、水性水酸化ナトリウム、水およびトルエン；ivはジシクロヘキシルカルボジイミド( “ＤＣＣ”)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール(“ＨＯＢＴ”または“ＨＯＢｔ”)およびテトラヒドロフラン(“ＴＨＦ”)；ｖはパラジウム炭素、５０psiのＨ₂ガスおよび９：１ジクロロメタン：メタノール；viはＮ,Ｎ²−ビス−[(１,１ −ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｌ−オルニチン、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミジルエステル；viiは化合物１−６；およびviiiはトリフルオロ酢酸およびジクロロメタンを意味する。図２は化合物２−５の製造の合成スキームを記載する。この図において、ｉはジクロロメタン中のジオクタデシルアミン(“ＤＯＤＡ”)、ＤＣＣおよびＨＯＢＴ；iiは化合物２−２の定量的(９９％)収率を得るためのトリフルオロ酢酸および１,２−ジクロロエタン(“ＤＣＥ”)；iiiは化合物２−３の７７％収率を得るための化合物１−６、Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１，１−ジメチルエトキシ)カルボニル] − Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ−プロピル] −Ｌ−オルニチン、ＤＣＣおよびＨＯＢＴ；ivは化合物２−４の９７％収率を得るための１０％パラジウム炭素、５５psiのＨ₂；およびｖは化合物２−５の定量的収率を得るためのジオキサン中の７．０ＭＨＣｌを意味する。図３は、化合物３−５の製造の合成スキームを記載する。この図において、i は化合物３−１の８５％収率を得るためのジクロロメタン中のＤＯＤＡ、ＤＣＣおよびＨＯＢＴ；iiは定量的化合物３−２を得るための１：１トリフルオロ酢酸：ジクロロメタンを使用した脱保護；iiiは化合物３−３の６０％収率を得るための化合物１−６、トリエチルアミン(“ＴＥＡ”)およびＤＣＭ；ivは化合物３ −４の８５％収率を得るための５５psiのＨ₂でのパラジウム炭素を使用した触媒的水素化；およびｖは化合物３−５の定量的収率を得るための１：１ＴＦＡ：ＤＣＭを使用したＢoc脱保護を意味する。図４は、化合物４−５の製造の合成スキームを記載する。この図において、ｉは化合物４−１の定量的収率(９５％)を得るためのＤＣＭ中のＤＯＤＡ、ＤＣＣおよびＨＯＢＴ；iiは化合物４−２の定量的収率を得るためのＴＦＡ；iiiは化合物４−３の２７％収率を得るためのＴＥＡおよびＤＣＭ(６７％の非反応脂質( 化合物４−２)が単離された)；ivは化合物４−４の５３％収率を得るためのパラジウム炭素および５０psiのＨ₂；およびｖは化合物４−５の９４％収率を得るためのＴＦＡでの脱保護を意味する。図５は、化合物５−６の合成スキームを記載する。この図において、ｉは化合物２−１の８５％収率を得るためのＤＣＭ中のＤＯＤＡ、ＤＣＣおよびＨＯＢＴ；iiは化合物５−１の８８％収率を得るための５５psiのＨ₂のパラジウム炭素； iiiは化合物５−２の８５％収率を得るためのＬ−グルタミン酸ビス(フェニラメチル)エステル、トルエンスルホン酸塩、ＤＣＣ、ＨＯＢＴ、ＴＥＡおよびＤＣＭ；ivは化合物５−３の定量的収率を得るためのＴＦＡおよびＤＣＥでの脱保護；ｖは化合物５−４の９０％収率を得るためのＤＣＭ中の化合物１−６；viは化合物５−５の９５％収率を得るための５５％psiのＨ₂のパラジウム炭素；および viiは化合物５−６の定量的収率を得るためのＴＦＡおよびＤＣＥでのＢoc脱保護を意味する。図６は、化合物６−５の合成スキームを記載する。この図において、ｉは化合物６−２の７０％収率を得るためのＤＣＮ中のＤＯＤＡ、ＤＣＣおよびＮＨＳ； iiは、化合物６−３の６６％収率を得るための２：１メタノール：ＤＣＭ中のＰｄ／Ｃ；iiiは、化合物６−４の２０％収率を得るためのＤＣＭ中のＴetraＢo cカルボキシスペルミン、ＤＣＣおよびＨＯＢｔ；およびivは化合物６−５の定量的収率を得るためのＴＦＡを意味する。化合物６−１および６−２に関して、 “Ｚ”はベンジルオキシカルボニルを意味する。図７は、カチオン性脂質、化合物７−１の構造を記載する。この化合物およびその合成法は、同じ譲受人で同時出願の米国特許出願、“新規メチルホスホン酸基本カチオン性脂質”、米国出願番号０８／４８４,７１６、１９９５年６月７日出願に記載されており、その内容を引用して本明細書に包含させる。発明の詳細な説明本発明をさらに記載する前に、最初に、以後使用する用語の定義を明らかにするのは、理解の助けとなる。これらの用語は、特記しない限り、以下の意味を有する。 “親油性部分”は、１個またはそれ以上の以下の特性を示す部分を意味する：水不溶性の傾向、非極性溶媒への溶解性の傾向、オクタノール／水分配測定においてオクタノールを選択する傾向、および脂質二重層形成と適合し、二重層を形成し得る傾向。部分に関して、“陽性電荷部分”および“陰性荷電部分”として使用される用語“荷電部分”は、ｐＨ範囲２から１２で、カチオン性脂質と独立した、正味の陽性または陰性電荷を有する置換基の部分を意味している。カチオン性脂質の正味の電荷は、全体としての電荷が陽性、中性または陰性であり得るように、脂質に発生するすべての電荷部分の合計である。 “アルキル”なる用語は、直鎖、分枝鎖および環状基を含む飽和脂肪族基を意味する。適当なアルキル基は、シクロヘキシルおよびシクロヘキシルメチルのようなシクロアルキル基を含むが、これらに限定されない。“低級アルキル”は、１から６炭素原子のアルキル基を意味する。フルオロアルキルまたは過フルオロアルキルは、単独で、部分的に、または完全にフッ素化されたアルキル基を意味する。 “アルケニル”なる用語は、少なくとも一つの二重結合を有する不飽和脂肪族基を意味する。 “アリールアミン”なる用語は、結合パイ電子システムを有する少なくとも一つの環を有する芳香族基を意味し、炭素環式アリール、ヘテロ環式アリールおよびビアリール基を含み、それらは全て、所望により、置換されていてもよい。 “アラルキルアミン”なる用語は、アリール基で置換されているアルキル基を意味する。適当なアラルキル基は、ベンジル、ピコリル等であり、全て所望により置換されていてもよい。 “アラルキル”なる用語は、アリール基で置換されているアルキル基を意味する。適当なアラルキル基は、ベンジル、ピコリル等であり、全て所望により置換されていてもよい。 “オリゴヌクレオシド”または“オリゴマー”なる用語は、一般に約４から約１００ヌクレオシド長さであるが、約１００ヌクレオシド長さより長いこともある、ヌクレオシド間結合により結合しているヌクレオシドの鎖を意味する。通常ヌクレオシドモノマーから製造されるが、また酵素的手段で得ることができる。従って、“オリゴマー”なる用語は、ヌクレオシドモノマーに結合するヌクレオシジル間結合を有するオリゴヌクレオシドの鎖を意味し、従ってオリゴヌクレオチド、ホスホトリエステルのような非イオン性オリゴヌクレオシドアルキル−およびアリールホスホネートアナログ、オリゴヌクレオチドのアルキル−およびアリール−ホスホノチオエート、ホスホロチオエートまたはホスホロジチオエートアナログ、オリゴヌクレオチドのホスホロアミデートアナログおよび他のオリゴヌクレオシドアナログおよび修飾オリゴヌクレオシドを含み、またヌクレオシド／非ヌクレオシドポリマーも含む。この用語は、モノマー単位間の１個またはそれ以上のリン酸結合がホルムアセタール結合、チオホルムアセタール結合、モルホリノ結合、スルファメート結合、シリル結合、カルバメート結合、アミド結合、グアニジン結合、ニトロオキシド結合または置換ヒドラジン結合のような非リン酸結合に置換されているヌクレオシド／非ヌクレオシドポリマーも含む。モルホリノ基本アナログまたはポリアミド基本アナログのような両方の糖およびリン酸部分が置換されているかまたは修飾されているヌクレオシド／非ヌクレオシドポリマーも含む。非ヌクレオシドの塩基、糖およびリン酸骨格が非ヌクレオシド部分に置換されているか、または非ヌクレオシド部分がヌクレオシド／非ヌクレオシドポリマーに挿入されているヌクレオシド／非ヌクレオシドポリマーも含む。所望により、該非ヌクレオシド部分は、標的配列と相互作用し得るか、または標的細胞への取り込みを変換する他の小分子と結合するために作用し得る。 “脂質凝集体”は、単薄層および多薄層のタイプのリポソームおよびミセルおよびカチオン性脂質のより無定形の凝集体またはリン脂質のような両親媒性脂質と混合した脂質を含む。 “標的細胞”は、所望の化合物の担体として脂質凝集体を使用する、所望の化合物を輸送させる細胞を意味する。本明細書で使用する“トランスフェクション”は、標的細胞が核酸の発現をするように、発現可能核酸を標的細胞に輸送させることを意味する。“核酸”なる用語は、分子量に関係無くＤＮＡおよびＲＮＡの両方を含み、“発現”なる用語は、一過性発現および安定発現を含むが、これに限定されない細胞中の核酸の機能的存在の表明を意味する。 “輸送”は、所望の化合物が、標的細胞内部または、標的細胞膜内または上に最後に位置するように、標的細胞に移される方法を意味するために使用する。本発明の化合物の多くの使用において、所望の化合物は標的細胞に容易に取り込まれないので、脂質凝集体を経由した輸送は所望の化合物を細胞内に入れる手段となるのである。ある使用において、特に、インビボ条件下で、具体的標的細胞形への輸送が好ましく、本発明の化合物により促進される。下記に記載する全ての文献は、その全部を引用して本明細書に包含させる。機能的に活性なカチオン性脂質の一般的構造は、３つの連続した部分、例えば、カチオン性頭部基、リンカーおよび脂質尾部基が必要である。広範囲の構造が各３つの部分に関して考えられるが、そのカチオン性脂質がアニオン性巨大分子を特定の細胞系に十分トランスフェクトするか予測する先験的な手段はないことが証明されている。次に、細胞系をトランスフェクトするように、アニオン性巨大分子と組み合わせるべきカチオン性脂質の特性は、経験的である。我々は、化学的に多重構造物と結合し、巨大分子の取り込みを促進する、新規カチオン性脂質の能力を証明した。本発明の新規アミド基本カチオン性脂質は、以下の一般式を有する：その塩、溶媒和物またはエナンチオマーを含む。記号Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｙ、Ｘ、ｎおよびｍは下記の通りである；Ｒ₁は、アミド基本カチオン性脂質の脂質尾部基を示し、種々の親油性部分、特に、例えば、１から約２４炭素原子の直鎖アルキル、２から約２４炭素原子の直鎖アルケニル、約１０から約５０炭素原子の対称分枝アルキルまたはアルケニル、約１０から約５０炭素原子の非対称分枝アルキルまたはアルケニル、アミン誘導体、ステロイジル部分、グリセリル誘導体およびＯＣＨ(Ｒ₅Ｒ₆)またはＮ( Ｒ₅Ｒ₆)(式中、Ｒ₅およびＲ₆は、約１０から約３０炭素原子の直鎖または分枝鎖アルキル部分)を含む。Ｒ₁がアミン誘導体である場合、種々のそのような誘導体、例えば１から約２４炭素原子の直鎖アルキルアミン部分、２から約２４炭素原子の直鎖アルケニルアミン部分、約１０から約５０炭素原子の非対称分枝アルキルアミンまたはアルケニルアミン部分、約１０から約５０炭素原子の非対称分枝アルキルアミンまたはアルケニルアミン部分、約３から約１０炭素原子の環状アミン部分、またはステロイジル部分を使用し得る。Ｒ₁がステロイダル部分である場合、例えば、プレグネノロン、プロゲステロン、コルチゾール、コルチコステロン、アルドステロン、アンドロステンジオン、テストステロンまたはコレステロールまたはこれらのアナログのような、このような種々の分子を使用し得る。Ｒ₂は、アミド基本カチオン性脂質のカチオン性頭部基を示し、Ｒ₃およびＲ₄ から独立した陽性荷電部分であり得る。このような場合、Ｒ₂は非置換または置換陽性荷電側鎖を有するアミノ酸残基であり得る。アミノ酸残基が置換されている時、置換基は１から約６炭素原子のアルキルまたは、ヒドロキシ、アミノ、１から約６炭素原子のアルコキシ、１から約６炭素原子のアルキルアミノまたは２から約１２の炭素原子のジアルキルアミノで置換されている１から約６炭素原子のアルキル部分を有する２級、３級または４級アミンをもたらす置換基であり得る。特に、Ｒ₂がアミノ酸残基である時、例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン、オルニチンまたはアミノ酸アナログであり得る。Ｒ₂は種々の陽性電荷アミノ酸アナログであり得るが、具体的例は、３−カルボキシスペルミジン、５−カルボキシスペルミジン、６−カルボキシスペルミンおよびモノアルキル、ジアルキルまたは過アルキル置換誘導体(１から約６個の炭素原子を有する１個またはそれ以上のアミン窒素で置換されている)を含む。Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、陽性荷電部分であり得、またはＲ₂、Ｒ₃およびＲ₄の全てではないが、少なくとも一つが陽性荷電部分であり得る。後者の場合、残るＲ基は、独立して水素、１から約６炭素原子の置換または非置換アルキル部分、または約５から約１０炭素原子の置換または非置換ヘテロ環部分であり得る。より具体的に、これらの基は、ヒドロキシル、チオ、１から約２０炭素原子のアリール、またはＯＲ₇(式中、Ｒ₇は１から約２４炭素原子のアルキル部分、２から約２４炭素原子のアルケニル、約５から約２０炭素原子のアリールまたは約６から約２５炭素原子のアラルキルである)で置換され得る。Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄が陽性荷電部分である時、それらは、独立して、アルキルアミン部分、フルオロアルキルアミン部分または１から約６炭素原子の過フルオロアルキルアミン部分、５から約１０炭素原子のアリールアミンまたはアラルキルアミン部分、グアニジニウム部分、エナミン部分、環状アミン部分、アミジン部分、イソチオウレア部分、ヘテロ環式アミン部分もしくは、ＮＨ₂、Ｃ(＝Ｏ) ＮＨ₂、ＮＨＲ₇、Ｃ(＝Ｏ)ＮＨＲ₇、ＮＨＲ₇Ｒ₈またはＣ(＝Ｏ)ＮＨＲ₇Ｒ₈(式中、Ｒ₇およびＲ₈は１から約２４の炭素原子のアルキル部分、２から約２４炭素原子のアルケニル部分、約５から約２０炭素原子のアリール部分、約６から約２５炭素原子のアラルキル部分から独立して選択される)から選択される置換基で置換されている置換ヘテロ環状アミン部分または１から約６炭素原子の置換アルキル部分であり得る。特に、少なくともＲ₂、Ｒ₃またはＲ₄がアリールアミンである時、例えば、トリプトファン、フェニルアナリンおよびチロシンを含む種々のこのような部分を使用し得る。Ｒ₃およびＲ₄は独立して親油性部分または陰性荷電部分でもあり得る。特に、Ｒ₃および／またはＲ₄が脂質部分である時、それらは約３から約２４炭素原子の直鎖アルキル部分、２から約２４炭素原子の直鎖アルケニル部分、約１０から約５０炭素原子の対称分枝アルキルまたはアルケニル部分、約１０から約５０炭素原子の非対称分枝アルキルまたはアルケニル部分、約５から約２０炭素原子のアリール部分、約６から約２５炭素原子のアラルキル部分、またはステロイジル部分であり得る。Ｒ₃および／またはＲ₄が陰性荷電部分である時、それらは１から約２４炭素原子のカルボキシアルキル部分、ホスホノアルキル部分、スルホノアルキル部分またはホスファチジルアルキル部分であり得る。リンカーは、頭部基、Ｒ₁と脂質尾部基、Ｒ₂を結合する構造を含む。Ｙを含むこの構造は、−(Ｃ＝Ｏ)−から−(ＣＨ₃)−への直接結合または１から約２０炭素原子のアルキレンであり得る。ｎおよびｐは、括弧内に記載の反復単位の数を示す整数であり、互いに独立して、ｎおよびｐの合計が１から１６になるような０から８の範囲の数を独立して有し、特別な例は、整数の合計が１から４および具体的例は１から２である。Ｘ^-により示される逆イオンは、ホスホン酸基本カチオン性脂質に存在する陽性電荷基と、電荷−電荷相互作用により結合するアニオンまたはポリアニオンである。これらのカチオン性脂質をインビボで使用する場合、アニオンまたはポリアニオンは薬学的に許容されるものであるべきである。ｍは、カチオン性脂質に関連するアニオンまたはポリアニオンの数を示す整数である。特に、この整数の範囲は０から脂質に存在する陽性電荷と等価の数の範囲である。特に、Ｙが直接結合であり、ｎとｐの合計が１である時、Ｒ₃またはＲ₄の一つまたは両方が少なくとも１０炭素原子のアルキル部分を含まなければならない。本発明のカチオン性脂質は、塩、溶媒和物または、脂質に存在する任意のまたは全ての不斉原子によりもたらされるエナンチオマー異性体を含む。本発明の範囲に、ラセミ体混合物、ジアステレオマー混合物、光学異性体または単離され、または他のエナンチオマーまたはジアステレオマー対を実質的に含まない合成光学異性体が含まれる。ラセミ混合物はその個々の、実質的に光学的に純粋な異性体に、例えば、光学活性酸または塩基付加物と形成されたジアステレオマー塩の分離、続いて光学活性物質へ変換して戻すような当分野で既知の技術により分離し得る。ほとんどの場合、所望の光学異性体を、所望の出発物質の適当な立体異性体で開始する、立体特異的反応の手段により合成する。異性体を富ませ、分割する方法および理論は記載されている(Ｊacques et al.，“Ｅnantiomers，Ｒac emates and Ｒesolutions”Ｋreiger，Ｍalabar，ＦＬ，1991)。塩は、これらの化合物の薬学的にまたは生理学的に許容される非毒性塩を含む。このような塩は、アルカリおよびアルカリ土類金属イオンまたはアンモニウムおよび第４級アミノイオンのような適当なカチオンと、ポリヌクレオチドに存在するリン酸またはホスホロチオエート酸基の酸アニオン部分との組み合わせに由来するものを含む。適当な塩は例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＦ、ＨＩ、Ｈ₂ＳＯ₄ およびトリフルオロ酢酸のような酸付加塩を含む。塩は、ある有機および無機酸、例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ₂ＳＯ₄、アミノ酸または有機スルホン酸のようなある有機または無機酸の塩基中心(例えばアミン)または酸性基への付加により形成し得る。本明細書の組成物はまた非イオン化および双性イオン形の形の本発明の化合物を含む。模範的に、本発明のカチオン性脂質は、上記の発明の要約に示した構造を有する。カチオン性脂質は、オリゴヌクレオチド、オリゴマー、ペプチドまたはポリペプチドのようなポリアニオン性巨大分子と、陽性電荷脂質および陰性電荷ポリアニオン性巨大分子の間の誘因により凝集体を形成する。凝集体は多薄層または単薄層リポソームまたは他の粒子を含み得る。カチオン性脂質および芳香族およびアルキル部分のようなポリアニオン性巨大分子の間の疎水性相互作用は、凝集体形成をまた促進し得る。カチオン性脂質は核酸およびペプチドを、血清存在下で有効に輸送することが示され、従ってインビボまたはエキソビボでの使用に好適である。カチオン性脂質−ポリアニオン性巨大分子凝集体は、当分野で既知の種々の方法で形成し得る。代表的な方法は、Ｆelgner et al．前掲；Ｅppstein et al．前掲；Ｂehr et al．前掲；Ｂangham，Ａ．et al.，Ｍ．Ｍol．Ｂiol．23:238 ，1965；Ｏlson，Ｆ．et al.，Ｂiochim．Ｂiophys．Ａcta 557:9，1979；Ｓzok a，Ｆ．et al.，Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．75:4194，1978；Ｍayhew，Ｅ．et al.，Ｂiochim．Ｂiophys．Ａcta 775:169，1984;Ｋim，Ｓ．et al.，Ｂiochim ．Ｂiophys．Ａcta 728:339，1983；およびＦukunaga，Ｍ．et al.，Ｅndocrino l．115:757，1984に記載されている。運搬媒体として使用するのに適当なサイズの脂質凝集体の製造に一般的に使用されている方法は、超音波処理および凍結融解＋押し出しを含む。例えば、Ｍayer，Ｌ．et al.，Ｂiochim．Ｂiophys．Ａct a 858:161，1986参照。一貫して小さく(５０から２００nm)、相対的に均質な凝集体が必要な時、微小流動化を使用する(Ｍayhew，Ｅ．前掲)。一般に、凝集体は(１)本発明のカチオン性脂質または(２)共脂質と混合されたカチオン性脂質のいずれかからなる粒子の製造、続く、ほぼ室温(約１８から２６℃)での脂質粒子へのポリアニオン性巨大分子の添加により形成し得る。一般に、条件は、保護基の脱保護の助けとならないように選択する。次いで、混合物を、約１０分から約２０時間、凝集体を形成させ、約１５分から６０分が最も慣用的に使用される。結合体を長時間にわたり形成させ得るが、トランスフェクション効率の更なる増加は、結合体の長時間により通常増加しない。本発明のカチオン性脂質との脂質凝集体の製造に適した共脂質は、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイル−ホスファチジルエタノールアミン、パルミトイルオレオイルホスファチジル−エタノールアミン、コレステロール、ジステアロイルホスファチジル−エタノールアミン、ポリエチレングリコールに共有結合したホスファチジルエタノールアミンおよびこれらの共脂質の混合物である。あるカチオン性脂質のための最適カチオン性脂質：共脂質の比は、約１：０. １から１：１０のカチオン性脂質：共脂質比を使用したポリアニオン性巨大分子との凝集体のための脂質混合物の製造の混合実験により決定する。最適カチオン性脂質：共脂質比を決定する方法は記載されている(Ｆelgner，前掲、参照)。各脂質混合物は、所望により、１個の以上の異なる核酸：脂質比を有するオリゴヌクレオチド−脂質混合物を使用して試験し、オリゴヌクレオチド：脂質比を最適化するために使用し得る。カチオン性脂質：共脂質の適当な分子比は、約０.１：１から１：０.１、０. ２：１から１：０.２、０.４：１から１：０.４または０.６：１から１：０.６である。共脂質の増加したモル比率を含む脂質粒子調製物は、共脂質濃度の増加に従って、オリゴヌクレオチドの細胞へのトランスフェクションを増加させることが判明した。加えて、カチオン性脂質は共脂質との混合物、または混合物中の２個またはそれ以上のカチオン性脂質の異なる濃度で、または共脂質無しで使用できる。リポソームまたは凝集体は、最初に減圧下で(クロロホルムのような)溶媒中の脂質を乾燥させることにより簡便には製造する。次いで、脂質を水和し、水または低イオン強度緩衝液(通常、約２００mＭ全イオン濃度より低い)を添加することによりリポソームまたは凝集体に変換し、続いて(ボルテックス処理および／または超音波処理のような)撹拌および／または凍結／融解処理をする。形成された凝集体またはリポソームのサイズは、直径で約４０nmから６００nmの範囲である。少なくともあるカチオン性脂質により代表的細胞に輸送されるオリゴヌクレオチドの量は、商品として入手可能な脂質により輸送される量より有意に多いことが判明した。細胞に輸送されるオリゴヌクレオチドの量は、蛍光標識オリゴヌクレオチドを使用したトランスフェクション後のトランスフェクト細胞の蛍光強度の観察をに基づいて、カチオン性脂質もより約２から１００倍多いと計算された。本明細書に記載のカチオン性脂質もまた、商品脂質により検出可能にトランスフェクトされないあるタイプの細胞をトランスフェクトする。カチオン性脂質− ＤＮＡ凝集体の機能性は、外因性ＤＮＡの遺伝子製造の検定により証明された。同様に、カチオン性脂質−オリゴヌクレオチド凝集体の機能性は、遺伝子生産物のアンチセンス阻害により証明された。本明細書に記載のカチオン性脂質はまた、約５０から１００％コンフルエントな細胞の組織培養物の細胞に、効率的にオリゴヌクレオチドを輸送することにより、商品として入手できる脂質と異なっていた。ほとんどの商品として入手できる脂質は、最適なトランスフェクション効率のために、相対的に狭いコンフルエント範囲の細胞を必要とする。例えば、Ｌipofectin(登録商標)は、細胞集団の最も高い比率をトランスフェクトするために、７０−８０％コンフルエントな細胞を必要とする。本明細書に記載のカチオン性脂質はまた約１０−５０％コンフルエントな細胞のトランスフェクトに使用し得るが、脂質の毒性が、約５０−１００％コンフルエントな細胞を使用して見られるより促進された。一般に、カチオン性脂質は、約６０−１００％コンフルエント細胞を、最小の毒性および最適効率でトランスフェクトした。従って、６０−９５％または６０−９０％のコンフルエント範囲が組織培養中のほとんどの細胞系のトランスフェクションプロトコールに簡便である。カチオン性脂質凝集体は、組織培養中の細胞のトランスフェクトに使用され、ＲＮＡおよびＤＮＡコード遺伝子生産物が、トランスフェクト細胞中で発現された。カチオン性脂質凝集体は、オリゴヌクレオチドおよびオリゴマーのような種々の巨大分子と形成し得る。凝集体形成に使用するオリゴヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ、オリゴヌクレオチドアナログおよびプラスミドであり得る。一般に、プラスミドまたはｍＲＮＡのような相対的に大きいオリゴヌクレオチドは、トランスフェクト細胞で発現すべき１個またはそれ以上の遺伝子を運搬し得るが、相対的に小さいオリゴヌクレオチドは、(１)細胞に存在するＤＮＡまたはＲＮＡと相補的(ワトソン・クリックまたはＨoogsteen結合を介して)な塩基配列または(２)ペプチド、タンパク質または糖タンパク質のような細胞内の分子とオリゴヌクレオチドを結合させる塩基配列を含む。典型的に、ＲＮＡはリボザイムおよび細胞内の標的ＲＮＡと相補的なアンチセンスＲＮＡ配列を含む。オリゴヌクレオチドは、(ａ)プリンまたはピリミジン塩基グアニン、アデニン、シトシン、チミンおよび／またはウラシル：(ｂ)リボースまたはデオキシリボース；および(ｃ)隣接ヌクレオシド部分に結合するホスホジエステル基を含む一本鎖非修飾ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。オリゴヌクレオチドは、典型的に２から約１００結合ヌクレオシドを含む。典型的なオリゴヌクレオチドは、２−１０、２−１５、２−２０、２−２５、２−３０、２−５０、８−２０、８−３０または２−１００結合ヌクレオチドのサイズ範囲である。オリゴヌクレオチドは、通常、均一極性の直線であり、逆極性の領域が存在する時、このような領域は１０ヌクレオチド当たり１個以上の極性逆転を含まない。２０ヌクレオチド当たり１つの逆転があるのが典型である。オリゴヌクレオチドは環状、分枝鎖または二本鎖であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一般に、細胞中に存在するＤＮＡまたはＲＮＡ塩基配列と実質的に相補的な約８−３０塩基対または約８−５０塩基対を含む。細胞に輸送するオリゴヌクレオチドのサイズは、合理的に製造できるポリアニオン性巨大分子のサイズによってのみ限定され、従って、０.１から１キロ塩基対(Ｋｂ)、１から２０Ｋｂ、２０Ｋｂから４０Ｋｂまたは４０Ｋｂから１,０００Ｋｂの長さのＤＮＡまたはＲＮＡを細胞に輸送し得る。オリゴヌクレオチドはまた、１個またはそれ以上の共有結合形修飾を含むＤＮＡまたはＲＮＡを含む。共有結合形修飾は、(ａ)ポリヌクレオチドのホスホジエステル結合の酸素原子の硫黄原子、メチル基等への置換、(ｂ)ホスホジエステル基の−Ｏ−ＣＨ₂Ｏ−、−Ｓ−ＣＨ₂Ｏ−または−Ｏ−ＣＨ₂Ｏ−Ｓのような非リン部分への置換および(ｃ)ホスホジエステル基の、−Ｏ−Ｐ(Ｓ)(Ｏ)−Ｏ、−Ｏ −Ｐ(Ｓ)(Ｓ)−Ｏ−、−Ｏ−Ｐ(ＣＨ₃)(Ｏ)−Ｏまたは−Ｏ−Ｐ(ＮＨＲ¹⁰)(Ｏ) −Ｏ−(式中、Ｒ¹⁰はアルキル(Ｃ_1-6)またはアルキルエーテル(Ｃ_1-6))のようなリン酸アナログへの置換を含む。このような置換は、非修飾ＤＮＡまたはＲＮＡのホスホジエステル基の約１０％から約１００％または約２０から約８０％を成した。他の修飾は、モルホリノ、アラビノース２'−フルオロリボース、２'−フルオロアラビノース、２'−Ｏ−メチルリボースまたは２'−Ｏ−アリルリボースのような糖部分のまたは糖部分上の置換を含む。オリゴヌクレオチドおよびそれらを合成する方法は記載されている(ＰＣＴ／ＵＳ９０／０３１３８、ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６１２８、ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６０９０、ＰＣＴ／ＵＳ９０／０６１１０、ＰＣＴ／ＵＳ９２／０３３８５、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０８８１１、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０３６８０、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０６８５５、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０１１４１、ＰＣＴ／ＵＳ９２／１０１１５、ＰＣＴ／ＵＳ９２／１０７９３、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０５１１０、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０５２０２、ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４２９４、ＷＯ８６／０５５１８、ＷＯ８９／１２０６０、ＷＯ９１／０８２１３、ＷＯ９０／１５０６５、ＷＯ９１／１５５００、ＷＯ９２／０２２５８、ＷＯ９２／２０７０２、ＷＯ９２／２０８２２、ＷＯ９２／２０８２３、米国特許第５,２１４,１３６号およびＵhlmann Ｃhem．Ｒev．90:543，1990 参照)。オリゴヌクレオチドのヌクレオチド間の結合は、リン含有部分およびホルムアセタール、チオホルムアセタール、リボアセタール等の非リン含有部分を含む種々の部分であり得る。結合は通常ヌクレオチドの５'位および隣接ヌクレオチドの２'または３'位の間の２または３原子を含む。しかしながら、他の合成リンカーは３原子以上を含み得る。オリゴヌクレオチドに含まれる塩基は、非修飾または修飾または天然または非天然プリンまたはピリミジン塩基であり得、αまたはβアノマーであり得る。このような塩基は、天然ＤＮＡまたはＲＮＡに見られる塩基と比較して、その相補的配列へのオリゴヌクレオチド結合の親和性を促進するために選択し得る。しかしながら、修飾塩基が、相補的配列に結合して、検出可能な安定２重鎖または３重鎖を製造できない程度オリゴヌクレオチドに含まれるのが好ましい。模範的に、塩基はアデニン、シトシン、グアニン、ヒポキサンチン、イノシン、チミン、ウラシル、キサンチン、２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、５−(４−メチルチアゾル−２−イル)ウラシル、５−(５−メチルチアゾル− ２−イル)ウラシル、５−(４−メチルチアゾル−２−イル)シトシン、５−(５− メチルチアゾル−２−イル)シトシン等を含む。他の模範的塩基は、例えば、ウラシル、チミンまたはシトシン以外のピリミジン塩基由来のピリミジンの５位に置換基を有するアルキル化またはアルキニル化塩基を含む(即ち、５−メチルシトシン、５−(１−プロピニル)シトシン、５−(１−ブチニル)シトシン、５−(１ −ブチニル)ウラシル、５−(１−プロピニル)ウラシル等)。オリゴヌクレオチドにおける修飾塩基または塩基アナログの使用は、先に記載されている(ＰＣＴ／ＵＳ９２／１０１１５；ＰＣＴ／ＵＳ９１／０８８１１；ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９１９５；ＷＯ９２／０９７０５；ＷＯ９２／０２２５８；Ｎikiforov et al. ，Ｔet．Ｌett．33:2379，1992；Ｃlivio et al.，Ｔet．Ｌett．33:65，1992；Ｎikiforov et al.，Ｔet．Ｌett．32:2505，1991；Ｘu，et al.，Ｔet．Ｌett ．32:2817，1991；Ｃlivio，et al.，Ｔet．Ｌett．33:69，1992；Ｃonnolly，e t al.，Ｎucl．Ａcids Ｒes．17:4957，1989参照)。凝集体は、治療的または診断的ポリペプチドをコードするオリゴヌクレオチドまたはオリゴマーを含み得る。このようなポリペプチドの例は、組織適合性抗原、細胞接着分子、サイトカイン、抗体、抗体フラグメント、細胞受容体サブユニット、細胞受容体、細胞内酵素および細胞外酵素またはこれらのフラグメントを含む。オリゴヌクレオチドはまた所望により発現制御配列を含み得、一般に転写プロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、オペレーターまたは他の発現制御配列を含む転写単位を含み得る。細胞をトランスフェクトするための凝集体を形成するために使用するオリゴヌクレオチドは、１つ以上の発現ベクターとして存在し得る。従って、１、２または３またはそれ以上の異なるベクターを、所望により細胞内に輸送し得る。発現ベクターは、細胞にトランスフェクトした時に、典型的に１、２または３個の遺伝子を発現するが、ヘルペスウイルスベクターまたは人工酵母染色体を細胞に輸送する時のように多くの遺伝子が存在し得る。細胞に挿入する発現ベクターは、選択可能マーカー(例えば、ネオマイシン、ホスホトランスフェラーゼ、チミジンキナーゼ、キサンチン−グアニンホスホリボシル−トランスフェラーゼ等)または代謝酵素または機能的タンパク質のような生理学的活性タンパク質(例えば、免疫グロブリン遺伝子、細胞受容体遺伝子、サイトカイン(例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦ、γ−ＩＮＦ等)、またはプリンまたはピリミジン代謝を媒介する酵素をコードする遺伝子)をコードできる。興味の対象の具体的遺伝子をコードするオリゴヌクレオチドの核酸配列を、実験成しに、ＥＭＢＬＤＮＡライブラリーのＧenＢankから回収し得る。このような配列は、コード配列、例えば、構造タンパク質、ホルモン、受容体等のコード配列並びに興味の対象の他のＤＮＡ、例えば、転写および翻訳調節要素(プロモーター、エンハンサー、ターミネーター、シグナル配列等)、ベクター(統合または自律)等のＤＮＡ配列を含み得る。細胞に本発明の薬剤で挿入し得るＤＮＡ配列の非限定的例は、線維芽成長因子(ＷＯ８７／０１７２８参照)；繊毛神経栄養因子(Ｌin et al.，Ｓcience，246:1023，1989)；ヒトインターフェロン−α 受容体(Ｕze，et al.，Ｃell，60:225，1990)；インターロイキンおよびその受容体(Ｍizal，FASEB Ｊ.，3:2379，1989にレビュー)；ハイブリッドインターフェロン(ＥＰＯ０５１，８７３参照)；ヒト鼻ウイルスのＲＮＡゲノム(Ｃallaha n，Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci.，82:732，1985)；キメラ抗体を含む抗体(米国特許第４,８１６,５６７号参照)；逆転写酵素(Ｍolleing，et al.，Ｊ．Ｖirol. ，32:370，1979参照)；ヒトＣＤ４およびその可溶性形(Ｍaddon et al.，Ｃell ，47:333，1986，ＷＯ８８／０１３０４およびＷＯ／０１９４０参照)をコードする配列；所望のタンパク質の多数をクローニングするのに有用な急速免疫選択クローニング法を記載したＥＰＯ３３０，１９１を含む。凝集体は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを細胞内に輸送することにより、細胞内の遺伝子発現のアンチセンス阻害に使用できる(Ｗagner，Ｓcience 260:1 510，1993およびＷＯ９３／１０８２０参照)。このようなオリゴヌクレオチドは一般に、細胞により発現される標的ＲＮＡに相補的な塩基配列を含む。しかしながら、オリゴヌクレオチドは細胞内遺伝子発現を、細胞内核酸結合タンパク質に結合することにより(Ｃlusel，Ｎucl．Ａcids Ｒes．21:3405，1993参照)、または核酸に結合することが知られていない細胞内タンパク質または細胞器官に結合することにより(ＷＯ９２／１４８４３参照)調節し得る。特異的な遺伝子の発現を阻止された細胞は、製造および治療的使用に有用である。模範的に、製造使用は、細胞内のプロテアーゼ合成の阻害を含み、治療的または診断的使用のためのタンパク質製造を増加させる(例えば、プロテアーゼによる標的タンパク質分解を減少させる)。模範的に、治療的使用は、細胞表面抗原の合成阻害を含み、患者に移植された後または細胞をインビボでトランスフェクトした時に、拒絶反応を減少しおよび／または細胞の免疫学的耐性を増加させる(例えば、ＭＨＣクラスII遺伝子のような組織適合抗原等)。凝集体を細胞にインビトロおよびインビボで挿入する方法は、先に記載されている(米国特許第５,２８３,１８５号および第５,１７１,６７８号；ＷＯ９４／００５６９；ＷＯ９３／２４６４０；ＷＯ９１／１６０２４；Ｆelgner，Ｊ．Ｂ iol．Ｃhem．269:2550，1994；Ｎabel，Ｐroc．Ｎatl．Ａcad．Ｓci．90:11307 ，1993；Ｎabel，Ｈuman Ｇene Ｔher．3:649，1992；Ｇershon，Ｂiochem．32: 7143，1993；およびＳtrauss EMBO Ｊ．11:417，1992参照)。リポソームまたは凝集体の細胞内への侵入は、エンドサイトシースまたはリポソームまたは凝集体と細胞膜の融合によるものであり得る。融合が行われる時、リポソーム膜を細胞膜に統合し、リポソームの水性成分が細胞内液と溶け合う。リポソームのエンドサイトーシスは限定されたクラスの細胞で起こる；貪食または異物粒子を摂取できるものである。貪食細胞がリポソームまたは凝集物を取り込んだ時、細胞はリソソームとして知られる細胞下細胞器官に当該球体を移動させ、そこでリポソーム膜が分解されると考えられる。リソソームから、リポソーム脂質成分が恐らく外に移動し、細胞膜の一部となり、リソソーム分解に耐性の他のリポソーム成分(修飾オリゴヌクレオチドまたはオリゴマー)は細胞質に侵入する。脂質融合は、リポソームまたは凝集体由来の個々の脂質成分の細胞質膜への移動(およびその逆)に関与する；リポソームの水性成分は次いで細胞に侵入し得る。脂質交換が起こるために、リポソーム脂質は標的細胞に関連した特定の化学を有しなければならない。リポソーム脂質が、細胞膜と結合すると、それは一定期間膜内に残るか、種々の細胞内膜に再分散する。本発明の脂質は、製造および治療的使用のための発現ベクターの細胞内への輸送に使用できる。発現ベクターは、細胞に治療的に有用なタンパク質を輸送するための遺伝子治療プロトコール、または治療的に有効なタンパク質または、宿主にワクチンまたは既知の方法に従った他の免疫調節目的を製造できるタンパク質をコードする核酸コード分子の輸送に使用できる(米国特許第５,３９９,３４６号および第５,３３６,６１５号、ＷＯ９４／２１８０７およびＷＯ９４／１２６２９参照)。ベクター形質転換細胞は、治療的タンパク質または酵素(例えば、エリスロポエチン等)、成長因子(例えば、ヒト成長ホルモン等)または他のタンパク質を製造する細胞系のような、商品として有用な細胞系の製造に使用できる。凝集体は、ヒトまたはマウス、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジまたは非ヒト霊長目種を含む他の種における遺伝子治療法のための細胞系の開発に使用し得る。凝集体は血清存在下で使用し得、従って、ポリアニオン性巨大分子を、インビトロの血清含有組織培養培地中の細胞またはインビボ動物に輸送する。以下の実施例は、説明のために提供し、限定するものではない。実施例一般的方法すべての反応は乾燥アルゴンの正圧下に行った。無水条件を必要とする反応は、アルゴン下で冷却した火炎乾燥ガラス製品を使用した。テトラヒドロフラン( ＴＨＦ、Ａldrich Ｍilwaukee，ＷＩ)はカリウム／ベンゾフェノンケチルから、使用直前に蒸留した。塩化メチレン、ピリジン、トルエン、ヘプタン、メタノールおよびエタノールは無水試薬として(＜０.００５％水)または試薬グレードで得、更に精製せずに使用した。ＴＬＣは０.２mm Ｅ．Ｍerck前コートシリカゲル６０Ｆ₂₅₄ＴＬＣプレート(２０×２０cmアルミニウムシート、Ｆisher，ＰＡ) で行った。フラッシュクロマトグラフィーは、Ｅ．Ｍerck２３０−４００メッシュシリカゲルを使用して行った。全ての¹Ｈ、¹³Ｃおよび³¹ＰＮＭＲスペクトルは、３００ＭＨz Ｂruker ＡＲＸスペクトロメーター(Ｂruker，Ｂoston，ＭＡ)で記録し、特記しない限り、ＣＤＣｌ₂で得た。マススペクトルは、Ｌa Ｌol la，ＣＡのＴhe Ｓcripps Ｒesearch Ｉnstitute Ｍass Ｓpectrometry Ｆacili tyにより提供された。ＦＡＢマススペクトルは、FISONG VG ZAB-VSE２焦点マススペクトロメーター(Ｆisons，Ａltrincham ＵＫ)装置で、セシウムイオンガンで得た。ＥＳＩマススペクトルは、API III PE Sciex３−４極マススペクトロメーター(Ｓciex，Ｔronto ＣＡ)で得た。実施例１Ｌ−オルニチルグリシル−Ｎ−(１−ヘプタデシルオクタデシル)グリシンアミド、ジヒドロトリフルオロアセテート(１−９)およびＮ²,Ｎ⁵−ビス(３−アミノプロピル)−Ｌ−オルニチルグリシル−Ｎ−(１−ヘプタデシルオクタデシル)グリシンアミド、テトラヒロドトリフルオロアセテート(１−１０)の合成ステアロンオキシム(１−１)の合成は、下記の様に製造し、更に精製することなく使用した。マグネティックスターラー、還流コンデンサーおよびアルゴン挿入管を備えた５００mＬ丸底反応フラスコにステアロン(１２.３ｇ、(２４.３mmo l))、ヒドロキシルアミン塩酸塩(８.５ｇ、(１２１.６mmol))、ピリジン(１２. ０mＬ、(１４８.４mmol))およびエタノール(１２５mＬ)を入れた。混合物を２時間反応させた後、それを室温に冷却させ、一晩放置した。得られる白色固体を回収し、水および注いでエタノールで洗浄し、３０分空気乾燥させ、次いで真空( ０.５mmＨg)で室温で１５時間乾燥させて、１１.５９ｇ(９１％収率)の化合物１ −１を白色固体として得た：ｍｐ６８−６９℃(文献(Ｇrun et al.，Ａngew Ｃhem．39，421，1926)ｍｐ６６−６７℃)；Ｒｆ０.４９(９：１ヘプタン：酢酸エチル)；¹ＨＮＭＲ δ７.４０(br s，１Ｈ)，２.３２(ｔ，Ｊ＝７.８Ｈｚ，２Ｈ)，２.１５(ｔ，Ｊ＝７.８Ｈｚ，２Ｈ)，１.４９(ｍ，４Ｈ)，１.２５( br s，５６Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ)。１８−ペンタトリアコンタナミン(１−２)の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。パール・ボトルにステアロンオキシム(５.０ｇ、 (９.６mmol))、塩化メチレン：メタノール１：１混合物５０mＬおよび湿潤ラネイニッケル(水を除去するために９５％エタノールで洗浄)１ｇを入れた。反応ボトルをパール・シェーカー装置に入れ、Ｈ₂ガスで満たし、真空で排出して空気を除去し、次いで室温で１５時間振りながら４５psi Ｈ₂ガスに付した。次いで、反応混合物を濾過し、１：１塩化メチレン：メタノールで洗浄した。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮し、粗生産物を、９５：５塩化メチレン：メタノールを使用したシリカゲルクロマトグラフィー(１００ｇ)で精製し、１．９９ｇ( ４１％収率)の１−２を白色固体としておよび１.２２ｇの１−２およびステアロンの混合物(比率は測定していない)を得た。化合物１−２で、以下のスペクトルデータを得た：Ｒｆ０.５８(４：１塩化メチレン：メタノール)；¹ＨＮＭＲ δ ７.５０−６.７０(br s，２Ｈ)，３.０３(見かけの５重，Ｊ＝６.３Ｈｚ，１Ｈ)，１.６２−１.０５(ｍ，６４Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，６Ｈ) ，ＭＳ(ＥＳＩ)ｍ／ｚ５０９(ＭＨ⁺)。Ｎ−カルボベンジルオキシグリコシルグリシン(１−３)の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。マグネティックスターラーを備えた２５０mＬ丸底反応フラスコに、グリシルグリシン(１.０ｇ、(７.６mmol))、水性水酸化ナトリウム(２Ｍの溶液８.３mＬ、(１６．６mmol))、水(２.０mＬ)およびトルエン(５.０mＬ)を入れた。得られる２相混合物混合物を氷水浴で冷却し、次いでグロロギ酸ベンジル(１.２mＬ、(８.３mmol))を反応混合物にシリンジから滴下した。反応混合物を室温に暖め、３時間撹拌した。次いで、反応混合物を分離漏斗に移し、酢酸エチルで抽出した。相を分離し、水性相を、６Ｎ水性ＨＣｌ溶液の滴下によりｐＨ２−３まで酸性化した。酸性水性相を３０分冷蔵庫に入れた。得られる白色固体を回収し、空気乾燥させ、次いで真空乾燥させて１.２１(６０％収率)の化合物１−３を白色固体として得た。Ｒｆ０.４４(１：１塩化メチレン：メタノール)；¹ＨＮＭＲ(ＣＤ₃ＯＤ) δ ７.３９−７．２７(ｍ，５Ｈ)，５.１０(ｓ，２Ｈ)，３.９７(ｓ，２Ｈ)，３.８２(ｓ，２Ｈ)。 (カルボベンジルオキシ)グリシル−Ｎ−(１−ヘプタデシル−オクタデシル)グリシンアミド(１−４)の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。マグネティックスターラーを備えた１００mＬ丸底反応フラスコに、Ｎ −カルボベンジルオキシグリシルグリシン(０.２１ｇ、(０.７８mmol))、１８− ペンタトリアコンタンアミン(１−２)(０.４０ｇ、(０.７８mmol))、ジシクロヘキシルカルボジイミド(０.１８ｇ、(０.８６mmol))、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールハイドレート(０.１２ｇ、(０.８６mmol))およびＴＨＦ(１０mＬ)を入れた。反応混合物を、室温でアルゴン下、１５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮し、粗生産物を、１：１酢酸エチル−ヘプタンを使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、０.３９ｇ(６６％収率)の化合物１−４を白色固体として得た。Ｒｆ０.２２(１：１酢酸エチル−ヘプタン)；¹ＨＮＭＲ δ ７.１５( ｔ，Ｊ＝４.５Ｈｚ，１Ｈ)，６.１８(ｄ，Ｊ＝９.６Ｈｚ，１Ｈ)，５.７４(ｔ，Ｊ＝４.５Ｈｚ，１Ｈ)，５.１０(ｓ，２Ｈ)，３.９０(ｍ，５Ｈ)，２.２０−１. ００(ｍ，６４Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，６Ｈ)；ＭＳ(ＦＡＢ)ｍ／ｚ７５７(ＭＨ⁺)。グリシル−Ｎ−(１−ヘプタデシルオクタデシル)−グリシンアミド(１−５)の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。パール・ボトルにＮ−(カルボベンジルオキシ)グリシル−Ｎ−(１−ヘプタデシルオクタデシル) グリシンアミド(１−４)(２.９５g、(３.９mmol))、パラジウム炭素(０.５ｇ、５％Ｐｄ含量)および塩化メチレン：メタノールの９：１混合物５０mＬを入れた。反応ボトルをパール・シェーカー装置に固定し、Ｈ₂ガスを満たし、２回真空で排気して酸素を除去し、次いで振盪しながら室温で１０時間５０psi Ｈ₂ガスに付した。反応混合物を濾過助剤を通して濾過し、１：１塩化メチレン：メタノールで洗浄し、触媒を除去した。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮し、１ .７５g(７２％収率)の化合物１−５を白色固体として得た。Ｒｆ０.４２(４：１塩化メチレンーメタノール)；¹ＨＮＭＲ δ ７.８８(br s，１Ｈ)，５.８５(br d，Ｊ＝１０.８Ｈｚ，１Ｈ)，４.０２−３.７９(ｍ，３Ｈ)，３.４０(br s，２Ｈ)，１.６９(br s，３Ｈ)，１.５８−０.９８(ｍ，６３Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６.５Ｈｚ，６Ｈ)。Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３− [(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチン、Ｎ −ヒドロキシサクシンイミジルエステル(１−６)の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。１００mＬ丸底反応フラスコに、Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチン(Ｂehr，Ａcc．Ｃh em．Ｒes．26:274，1933；(２.０８ｇ、(３.２mmol))、ジシクロヘキシルカルボジイミド(０.７３ｇ、(３.５mmol))、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド(０.４１ｇ、( ３.５mmol))および塩化メチレン(２０mＬ)を入れた。反応混合物を５時間撹拌し、次いで冷蔵庫(０−５℃)に一晩入れた。混合物を濾過し、塩化メチレンで洗浄した。濾液をロータリーエバポレーターで濃縮し、次いで粗生産物を１：１酢酸エチル−ヘプタンを使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製し、１.２ｇ(５０％収率)の化合物１−６を白色固体として得た。¹ＨＮＭＲ δ ５.２６(br s，１Ｈ)，４.７７(br s，１Ｈ)，４.２８(br s，１Ｈ)，３.２２ −３.０９(ｍ，１０Ｈ)，２.８４(ｓ，４Ｈ)，２.０５−１.６１(ｍ，８Ｈ)，１ .４８および１.４６および１.４４(３ｓ，３６Ｈ)；ＭＳ(ＥＳＩ)ｍ／ｚ７４４( ＭＨ⁺)。Ｎ²,Ｎ⁵−ビス−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｌ−オルニチルグリシル−Ｎ−(１−ヘプタデシルオクタデシル)グリシンアミド(１−７)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。５０mＬ丸底反応フラスコに、グリシルグリシンアミド１−５(０.５５ｇ、(０.０８mmol))、Ｎ,Ｎ²− ビス−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｌ−オルニチン、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミジルエステル(０.０４ｇ、(０.０９mmol))および塩化メチレン (３mＬ)を入れた。反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレーターで蒸発し、次いで酢酸エチルを使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(１０ｇ)で精製し、０.０６ｇ(８０％収率)の化合物１−７を白色蝋状半固体として得た。Ｒｆ０.５２(９：１塩化メチレン：メタノール)：¹ ＨＮＭＲ δ ７.６６(br s，１Ｈ)，７.４３(br s，１Ｈ)，６.４３(br s，１Ｈ)，５.５５(br s，１Ｈ)，４.８７(br s，１Ｈ)，４.２１(br s，１Ｈ)，４ .０７−３.７７(ｍ，４Ｈ)，３.３１−３.０２(ｍ，２Ｈ)，２.３５(br s，１Ｈ )，１.９３−１.００(ｍ，６８Ｈ)，１.４３(ｓ，１８Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６ .６Ｈｚ，６Ｈ)。Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３− [(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチルグリシル−Ｎ−(１−ヘプタデシルオクタデシル)グリシンアミド(１−８)の合成を、下記のように製造し、更に精製せずに使用した。５０mＬ丸底反応フラスコに、グリシルグリシンアミド１−５(０.０５ｇ、(０.０８mmol))、Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[( １,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチン、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミジルエステル(１−６)(０.０７ｇ、(０.０９mmol))および塩化メチレン (３mＬ)を入れた。反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、次いで酢酸エチルを使用したシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー(１０ｇ）で精製し、０.０５５ｇ(５５％収率)の化合物１−８を無色濃厚油状物として得た：Ｒｆ０.５７(９：１塩化メチレン：メタノール) ；¹ＨＮＭＲ δ ７.８７−７.５７(ｍ，２Ｈ)，６.４８(ｍ，１Ｈ)、(br s ，１Ｈ)，４.４５−３.３８(ｍ，６Ｈ)，３.３７−２.９２(ｍ，１０Ｈ)，２.３８−０.９８(ｍ，７２Ｈ)，１.４５(ｓ，３６Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ)；ＭＳ(ＥＳＩ)ｍ／ｚ１２５１(ＭＨ⁺)。化合物１−９を下記の方法に従い合成した。グリシルグリシンアミド１−７( ０.０７ｇ、(０.０８mmol))を含む５０mＬ丸底反応フラスコに塩化メチレン(２. ０mＬ)を添加し、この懸濁液にトリフルオロ酢酸(０.５mＬ)を加えた。反応混合物は均質黄色溶液となり、２０分放置した。反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、次いでヘプタン(３×１０mＬ)で共留去した。得られる残渣を室温で１５時間、高真空(０.１mmＨg)に付し、０.０７ｇ(９７％収率)の化合物１ −９を薄黄色蝋状固体として得た：¹ＨＮＭＲ(ＣＤ₃ＯＤ) δ ７．７２(ｄ，Ｊ＝９.０Ｈｚ，１Ｈ)，４.１３および４.０７および３.９４および３.８８( ４ｓ，アミド回転異性体，４Ｈ)，３.９５−３.８２(ｍ，２Ｈ)，２.９７(ｍ，２Ｈ)，１.９５−１.７６(ｍ，４Ｈ)，１.４８−１.２７(ｍ，６４Ｈ)，０.８９ (ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，６Ｈ)；ＭＳ(ＥＳＩ)ｍ／ｚ６９４(ＭＨ⁺)。化合物１−１０を下記の方法に従い合成した。グリシルグリシンアミド１−８ (０.０６ｇ、(０.０４mmol))を含む５０mＬ丸底反応フラスコに、塩化メチレン( ２.０mＬ)を添加し、この懸濁液にトリフルオロ酢酸(０.５mＬ)を加えた。反応混合物は均質黄色溶液となり、２０分放置した。反応混合物をロータリーエバポレーターで濃縮し、次いでヘプタン(３×１０mＬ)で共留去した。得られる残渣を室温で１５時間、高真空(０.１mmＨg)に付し、０.０６ｇ(９９％収率)の化合物１−１０を薄黄色蝋状固体として得た：¹ＨＮＭＲ(ＣＤ₃ＯＤ) ｄ７.７２( ｄ，Ｊ＝９.０Ｈｚ，１Ｈ)，４.０３(ｓ，２Ｈ)，３.８８(ｓ，２Ｈ)，４.０３ −３.７９(ｍ，２Ｈ)，３.１６−３.０２(ｍ，１０Ｈ)，２.２０−１.０５(ｍ，７２Ｈ)，０.８９(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，６Ｈ)；ＭＳ(ＥＳＩ)m／z８５１(ＭＨ⁺) 。実施例２Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス(３−アミノプロピル)−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミン、テトラヒドロクロリド(２−５)の合成Ｎ²−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ −グルタミン、フェニルメチルエステル(２−１)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。乾燥ＤＣＭ７５mＬ中のＢoc-Ｇlu−ａ−ＯＢｎ５.０ｇ(１４.８mmol)の溶液に、ジオクタデシルアミン(ＤＯＤＡ)８.５ｇ( １６.３mol、１：１当量)、ＤＣＣ３.４ｇ(４.６mmol、１：１当量)およびＨＯＢＴ２.０ｇ(１４.８mmol、１.０当量)を添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下一晩撹拌した。沈殿ジシクロヘキシルウレアを濾過し、残渣をＤＣＭ１５mＬで洗浄し、合わせた濾液を減圧下濃縮し、無色油状物を得た。粗生産物をシリカゲルクロマトグラフィー(９：１ヘプタン／酢酸エチル)で精製し、１２ .５ｇ(定量的収率)の化合物２−１を無色油状物として得た。Ｒｆ０.２８(４：１ヘプタン：酢酸エチル)¹ＨＮＭＲ δ：７.３５−７．３０(ｍ，５Ｈ)，５. ４４−５.４２(広いｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ)，５.１６(ＡＢｑ，Ｊ＝１２.３Ｈｚ，２Ｈ)，４.３１−４.２９(ｍ，１Ｈ)，３.３１−３.２１(ｍ，２Ｈ)，３.１３−３.０８(dd，Ｊ＝８.１，７.６Ｈｚ，２Ｈ)，２.３８−２.０１(ｍ，４Ｈ) ，１.５０−１.４５(ｍオーバーラップｓ，１３Ｈ)，１.２６(br s，６０Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，３Ｈ)。Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミン、フェニルメチルエステル、ヒドロトリフルオロアセテート(２−２)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。１,２−ジクロロエタン７０mＬ中のＮ²−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミン、フェニルメチルエステル２−１１２.５(１４.８mmol)の溶液に、ＴＦＡ５０mＬを添加した。反応混合物を室温で３０分撹拌し、減圧下濃縮した。得られた粗油状物を更にヘプタン(４×５０)と共留去し、高真空下で一晩放置し、１２.７ｇ(定量的収率)の化合物２−２を蝋状固体として得た。¹ＨＮＭＲ(ＣＤ₃ＯＤ)δ：７.２３−７.１４(ｍ，５Ｈ)，５.０７(ＡＢｑ，Ｊ＝１２.０Ｈｚ，２Ｈ)，３.９４ (ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，１Ｈ)，３.１１−２.９２(ｍ，４Ｈ)，２.３３(ｔ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，２Ｈ)，１.９７(dd，Ｊ＝６.６，１２.０Ｈｚ，２Ｈ)，１.３５−１ .３１(ｍ，４Ｈ)，１.０８(ｍ，６０Ｈ)，０.６９(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，３Ｈ)。Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[((１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル)アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタジル−Ｌ−グルタミン、フェニルメチルエーテル(２− ３)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。乾燥ＤＣＭ４０mＬ中のＮ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミン、フェニルメチルエステル、ヒドロトリフルオロアセテート、化合物２−２(３.７５ｇ、４.４mmol)の溶液に、トリメチルアミン(１０mＬ)を添加した。反応混合物を室温で５分撹拌し、Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３− [(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチン(１ −６Ａ)(３.１ｇ、４.８mmol、１．１当量)を一度に、続いてＤＣＣ(９９２mg、４.８mmol、１.１当量)およびＨＯＢｔ(３００mg、２.２mmol、０.５当量)を添加した。反応の進行をＴＬＣ(７：３ヘプタン：酢酸エチル)で追跡し、３時間後に終了と見なされた。反応混合物を減圧下で濃縮し、粗油状物を得、それをシリカゲルクロマトグラフィー(７：３ヘプタン：酢酸エチル)で精製し、４.６ｇ(７７％収率)の化合物２−３を無色油状物として得た。¹ＨＮＭＲ δ：７.３３ −７.２９(ｍ，５Ｈ)，５.２５(ｍ，１Ｈ），５.１４(ＡＢｑ、Ｊ＝１２.２Ｈｚ)，４.４７(ｍ，１Ｈ)，３.２３−３.０６(ｍ，１４Ｈ)，１.４４−１.３１(b r，４０Ｈ)，１.２９−１.２４(br，６０Ｈ)，０.８７(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，３Ｈ)。マススペクトル(ＥＳＩ＋)計算値：１３６９、実測値１３７０(ＭＨ⁺)。Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[((１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−アミノプロピル−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミン(２−４)の合成を下記のように製造し、更に精製することなく使用した。酢酸エチル７５mＬ中のＮ²−[Ｎ²,Ｎ⁵ −ビス[((１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[(１,１ −ジメチルエトキシ)カルボニル)アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ− ジオクタデシル−Ｌ−グルタミン、フェニルメチルエーテル、化合物２−３(４. ５ｇ、３.２mmol)の溶液を、パール・ハイドロゲネーター中で、１０％Ｐｄ／Ｃ (４５０mg)存在下、５５psi Ｈ₂下で水素化した。１２時間後、反応混合物を濾過して触媒を除去し、濃縮して化合物２−４を無色油状物として得た(４.１ｇ、９７％収率)。¹ＨＮＭＲ δ：９.４９(ｍ，１Ｈ)，４.２９(ｍ，３Ｈ)，３. ３１−３.２３(ｍ，１６Ｈ)，１.２８(ｍ，６０Ｈ)，０.８９(ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ)。化合物２−５を下記の方法に従い合成した。酸、化合物２−４(３．７ｇ)に、温ジオキサン(２０mＬ)を添加した。この溶液を室温に冷却し、次いでジオキサン中のＨＣｌの７.０Ｍ溶液(２.０mＬ)を添加した。反応混合物を次いで室温で５時間撹拌した。次いで減圧下で濃縮し、白色固体を得、それをヘプタン(４× １０mＬ)と共留去し、化合物２−５を白色固体として得た(定量的量)。¹ＨＮＭＲ(ＣＤ₃ＯＤ) δ：４.５０(ｔ，Ｊ＝６.０Ｈｚ，１Ｈ)，４.１５(ｍ，１Ｈ) ，３.３８−３．１１(ｍ，１４Ｈ)，２.５９−２.５５(ｍ，２Ｈ)，１.６１−１ .５６(ｍ，４Ｈ)，１.５４(br，６０Ｈ)，０.９０(ｔ，Ｊ＝６.０Ｈｚ)。マススペクトル(ＥＳＩ＋)計算値８７９、実測値８８０(ＭＨ＋)(ＥＳＩ−)実測値：８７８。実施例３Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス(アミノプロピル)−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−ａ−グルタミン、テトラヒドロトリフルオロアセテート(３−５)の合成４−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ−５−(ジオクタデシル) アミノ−５−オキソペンタン酸、フェニルメチルエステル(３−１)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。ＤＣＭ(１０mＬ)中のＢoc −Ｇlu−ｇ−ベンジルエステル(３３８mg、１.０mmol)の溶液に、ジオクタデシルアミン(５７４mg、１.１mmol)、ＤＣＣ(２２７mg、１.１mmol)およびＨＯＢｔ (１４mg、０.１mmol)を添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌し、次いで濾過した。濾液を減圧下濃縮し、無色油状物を得、それをシリカゲルクロマトグラフィー(４：１ヘプタン：酢酸エチル)で精製し、７１７mg(８５％収率)の化合物３−１を得た。¹ＨＮＭＲ δ：７.３６−７.２９(ｍ，５Ｈ)，５.３９−５. ３６(ｍ，１Ｈ)，５.１３(ＡＢｑ，Ｊ＝１２．０Ｈ)，４.６６，４.６１(ｍ，１Ｈ)，３.５２−３.４５(ｍ，２Ｈ)，３.０９−３.０７(ｍ，２Ｈ)，１.４１( ｓ，９Ｈ)，１.４１(br，６０Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６.０Ｈｚ，６Ｈ)。５−(ジオクタデシル)アミノ−５−オキソペンタン酸、フェニルメチルエステル、ヒドロトリフルオロアセテート(３−２)の合成を、標準Ｂoc脱保護方法を使用して製造した(例えば、ＴＦＡ：ＤＣＭ(１：１)を使用した実施例２参照(定量的収率)。¹ＨＮＭＲ δ：７.５６−７.３６(ｍ，５Ｈ)，５.１８(ＡＢｑ，Ｊ＝１２.２Ｈｚ)，４.３５(br dd，Ｊ＝４.２，３.３Ｈｚ，１Ｈ)，３.５７(dd オーバーラップdd，２Ｈ)，３.２２−３.１２(ddオーバーラップdd，２Ｈ)，２. ６０(ddオーバーラップdd，２Ｈ)，２.０７−２.０５(ｍ，２Ｈ)，１.５９−１. ５７(ｍ，４Ｈ)，１.２７(br s，６０Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６.３Ｈｚ,６Ｈ)。Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス [３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−ａ−グルタミン、フェニルメチルエステル (３−３)の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。(４Ｓ)−５−(ジオクタデシル)アミノ−５−オキソペンタン酸、フェニルメチルエステル、ヒドロトリフルオロアセテート(３−２)(２８５mg、０.３３mmol)を、実施例１記載のようなプロトコールを使用して、化合物１−６と結合させた。粗生産物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、２００mg(６０％収率)の化合物３−３を得た。(１５０mgの出発アミンもまた記録された)。¹ＨＮＭＲ δ：７.３４−７.２９(ｍ，５Ｈ)，５.１０(ｂｒ，２Ｈ)，３.１６−３．１０( ｍ，１４Ｈ)，１.４７(ｍオーバーラップ一重，４０Ｈ)，１.２４(ｍ，６０Ｈ) ，０.８７(ｔ，Ｊ＝６.３Ｈｚ，６Ｈ)。Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−ａ−グルタミン(３−４)をＥｔＯＡｃ中、５５psi下で、１０％Ｐｄ／Ｃを使用した触媒的水素化により製造した(８５％収率)(実施例２参照)。化合物３−５を以下の方法に従い製造した。化合物３−４をＴＦＡ：ＤＣＭ( １：１)を使用した標準Ｂoc脱保護に付し、定量的収率で化合物３−５を得た(実施例１参照)。¹ＨＮＭＲ(ＣＤ₃ＯＤ／ＣＤＣｌ₃)δ：４.０１−３.９８(ｍ，１Ｈ)，３.５９−３.５７(ｍ，２Ｈ)，３.１６−３.０１(ｍ，１２Ｈ)，３.０１ (ｍ，２Ｈ)，１.２１(br m，６０Ｈ)，０.８９(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ)。マススペクトル：計算値８７９、実測値８８０(ＭＨ＋)。実施例４Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス(３−アミノプロピル)−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−ａ−アスパラギン、テトラヒドロトリフルオロアセテート(４ −５)の合成３−アミノ−４−(ジオクタデシル)アミノ−４−オキソ酪酸、フェニルメチルエステル(４−１)の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。Ｂoc−Ａsp−ｂ−ベンジルエステルを、実施例２記載のように、ＤＣＣ結合方法を使用してジオクタデシルアミンと結合させた。(化合物４−１の定量的収率)。¹ＨＮＭＲ δ：７.３９−７.２７(ｍ，５Ｈ)，５.２８(br d，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ)，５.１０(ＡＢｑ，Ｊ＝１２.０Ｈｚ，２Ｈ)，４.９４(dd，Ｊ＝５.４，６.０Ｈｚ，１Ｈ)，３.４０−３.１５(ｍ，４Ｈ)，２.８２(dd，Ｊ＝６. ０，１５.６Ｈｚ，１Ｈ)，２.６３(dd，Ｊ＝５.９，１５.６Ｈｚ，１Ｈ)，１.４７(ｍオーバーラップｓ，１３Ｈ)，１.２５(br m，６０Ｈ)，０.８７(ｔ，Ｊ＝６.３Ｈｚ，６Ｈ)。３−アミノ−４−(ジオクタデシル)アミノ−４−オキソ酪酸、フェニルメチルエステル、ヒドロトリフルオロアセテート(４−２)の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。(３Ｓ)−３−アミノ−４−(ジオクタデシル)アミノ−４−オキソ酪酸、フェニルメチルエステル、化合物４−１をＴＦＡに曝し、Ｂoc保護基を除去した。定量的収率の化合物４−２を得た。¹ＨＮＭＲ δ：７.３９(ｍ，５Ｈ)，５.１９(ＡＢｑ，Ｊ＝１２.３Ｈｚ，２Ｈ)，４. ５５(ｔ，Ｊ＝６.３Ｈｚ，１Ｈ)，３.５４−３.１０(ｍ，４Ｈ)，２.９０(ｄ，Ｊ＝６.１Ｈｚ，２Ｈ)，１.６０−１.５０(ｍ，４Ｈ)，１.３８(ｍ，６０Ｈ)，０.８９(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，６Ｈ)。Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル] −Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−ａ−アスパラギン、フェニルメチルエステル(４ −３)の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。３−アミノ−４−(ジオクタデシル)アミノ−４−オキソ酪酸、フェニルメチルエステル、ヒドロトリフルオロアセテート(４−２)(４２０mg、０.５mmol)を乾燥ＤＣＭ( ５mＬ)に溶解した。この溶液に、ＴＥＡ(１.０mＬ)を添加した。反応混合物を５分撹拌し、その間にＢoc−カルボキシスペルミンサクシンイミジルエステル(３６９mg、０.５mmol)を一度に添加した。１２時間後、反応混合物を減圧下に濃縮し、粗生産物をシリカゲルクロマトグラフィー(７：３ヘプタン：ＥｔＯＡｃ)で精製し、１８６mgの生産物(２７％収率)を得た。Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−ａ−アスパラギン(４−４)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１ −ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ) カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ− ａ−アスパラギン、フェニルメチルエステル(４−３)を、標準方法(実施例２参照)を使用して水素化し、９２mgの生産物(５３％収率)を得た。化合物４−５を、以下の方法に従い合成した。Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１− ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル− Ｌ−ａ−アスパラギン(４−４)を標準Ｂoc脱保護条件(実施例１参照)に付し、生産物を白色蝋状固体として得た(９４％)。¹ＨＮＭＲ δ：３.８４(ｔ，Ｊ＝４.５Ｈｚ，１Ｈ)，３.４９−３.４４(ｍ，１Ｈ)，３.３３−３.３６(ｍ，２Ｈ) ，３.０７−２.９３(ｍ，１２Ｈ)，２.６８−２.５９(ｍ，２Ｈ)，２.０４−１. ６８(ｍ，１２Ｈ)，１.１９(br m，６０Ｈ)，０.８０(ｔ，Ｊ＝５.４Ｈｚ)。マススペクトル計算値：８６５実測値８６６(ＭＨ＋)。実施例５Ｎ−[Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵ −ビス[３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミニル]−Ｌ−グルタミン酸(５ −６)の合成Ｎ²−(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ− グルタミン酸(５−１)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。Ｎ²−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミン、フェニルメチルエステル(２−１)(２.４ｇ、２.８５mmol) を酢酸エチル３０mＬに溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ５００mgをこの溶液に添加した。得られる混合物をパール水素化装置で５５psiで１２時間水素化した。触媒を濾過し、濾液を濃縮して生産物である化合物５−１を無色油状物として得た。Ｎ−[Ｎ²−(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル− Ｌ−グルタミニル]−Ｌ−グルタミン酸、ビス(フェニルメチル)エステル(５−２ )の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。Ｎ²−(１,１ −ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミン５− １(６８０mg、０.９mmol)を、標準ＤＣＣ、ＨＯＢｔ媒介結合(実施例２および３参照)を使用して、Ｌ−グルタミン酸、ビス(フェニルメチル)エステル、トルエンスルホン酸(４５０mg、０.９mmol)と結合させ、８１２mgの生産物(８５％収率 )を得た。¹ＨＮＭＲ δ：７.８８(ｍ，１Ｈ)，７.３８−７.３２(ｍ，１０Ｈ )，５.８３(br，１Ｈ)，５.１７，５．１２(２見かけのｓ，４Ｈ)，４.６８(ｍ，１Ｈ)，４.１５(dd，Ｊ＝４.６，６Ｈｚ，１Ｈ)，３.３０−３.１８(ｍ，４Ｈ )，２.４８−２．４２(ｍ，５Ｈ)，２.１−１.０９(ｍ，４Ｈ)，１.５５−１.５３(ｍ，４Ｈ)，１.２０(br，６０Ｈ)，０.９１(ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ)。Ｎ−[Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミニル]−Ｌ−グルタミン酸、ビス( フェニルメチル)エステル、ヒドロトリフルオロアセテート(５−３)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。Ｎ−[Ｎ²−(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミニル]−Ｌ− グルタミン酸、ビス(フェニルメチル)エステル(５−２)を標準ＴＦＡ脱保護(例えば、実施例２参照)に付した。この生産物を実施例５において更特徴付することなく使用した。Ｎ−[Ｎ²−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵ −ビス[３−[１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル]−Ｌ−グルタミニル]−Ｌ−グルタミン酸、ビス(フェニルメチル)エステル(化合物５−４)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。化合物５−３(２００mg、０.１９mmol)をＮ²,Ｎ⁵ −ビス[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−Ｎ²,Ｎ⁵−ビス[３−[(１,１− ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノプロピル]−Ｌ−オルニチン、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミジエルエステル(１−６)(１５６mg、０.２１mmol)と、ＤＣＭ( ５mＬ)中で結合させた。６時間後、反応混合物を減圧下濃縮し、このようにして得た粗生産物をシリカゲルクロマトグラフィー(ＤＣＭ中１０％ＭｅＯＨ)で精製し、２７０mgの生産物を白色泡状物として得た(９０％収率)。¹ＨＮＭＲ δ ：８.７１(ｍ，１Ｈ)，８.３２(ｍ，１Ｈ)，７.３５−７.２９(ｍ，１０Ｈ)，５ .３５(ｍ，２Ｈ)，５.２０−５.１１(ｍ，４Ｈ)，４.３９−４.３７(ｑ，Ｊ＝６ .１Ｈｚ)，３.３６−３.１０(ｍ，１４Ｈ)，１.４５(br s，３６Ｈ)，１.２７( ｂｒ，６０Ｈ)，０.８９(ｔ，Ｊ＝６.５Ｈｚ，６Ｈ)。Ｎ−[Ｎ²,Ｎ⁵−ビス(３−アミノプロピル)−Ｌ−オルニチル]−Ｎ,Ｎ−ジオクタデシル−Ｌ−グルタミニル]−Ｌ−グルタミン酸、テトラヒドロトリフルオロアセテート(５−５)の合成を、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。化合物５−４(２００mg、０.１２mmol)を、Ｐｄ／Ｃで、５５psiで水素化した(９５％)収率。この化合物は、更に特徴付および／または単離することなく次段階に使用した。化合物５−６を以下の方法に従って合成した。化合物５−５(１００mg)を、ＴＦＡを使用して標準Ｂoc脱保護に付した(実施例１参照)。濁白色蝋状固体として生産物を得た(定量的収率)。¹ＨＮＭＲ(ＣＤＣｌ₃／ＣＤ₃ＯＤ) δ：７.３６ (ｄ，Ｊ＝３.０Ｈｚ，１Ｈ)，４.５４(dd，Ｊ＝４.７，９.０Ｈｚ，１Ｈ)，４. ４１(ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ)，４.００(ｍ，１Ｈ)，３.３７−３.３０(ｍ，１４Ｈ)，１.５７(ｍ，４Ｈ)，１.２９(br m，６０Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，６Ｈ)。マススペクトル(ＥＳＩ±)：計算値：１００８、実測値１００９(ＭＨ＋)および１００７(Ｍ−Ｈ＋)。実施例６化合物６−５の合成化合物６−２の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。ＤＣＭ１０mＬ中の６−ベンジルオキシカルボニルアミノカプロン酸(６−１ )(３００mg、１．１mmol)の溶液をジオクタデシルアミン(ＤＯＤＡ)(５９０mg、１.１mmol)、ＤＣＣ(２３３mg、１.１mmol)およびＮ−ヒドロキシサクシンイミド(“ＮＨＳ”)(１４３mg、１.１mmol)を添加した。反応混合物を暖め、出発物質を完全に溶解させた。次いで、アルゴン雰囲気下２日間撹拌し、次いで沈殿ＤＣ尿素を濾取した。濾液を１ＮＨＣｌ、次いで飽和ＮａＨＣＯ₃で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過して濃縮して６２０mg(７１％収率)の粘性油状物を得た。¹ＨＮＭＲ δ：７.３６−７.３０(ｍ，５Ｈ)，５.４３(ｍ，２Ｈ)，４. ８４(br m，１Ｈ)，３.４９−３.１９(ｍ，６Ｈ)，２.２５(ｔ，Ｊ＝７.５Ｈｚ，１Ｈ)，１.６７−１.５０(ｍ，６Ｈ)，１.２６(br s，６０Ｈ)，０.８８(ｔ，Ｊ＝６.０Ｈｚ，６Ｈ)。化合物６−３の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。化合物６−２(６２０mg、０.６２mmol)をメタノール：ＤＣＭの２：１混合物１５mＬに溶解し、１０％Ｐｄ／Ｃ１００mgを添加した。この混合物を３５psi で１２時間水素化に付した。反応混合物を次いで濾過して触媒を除去し、濃縮して４２０mgの化合物６−３を蝋状固体として得た。¹ＨＮＭＲ δ：３.２５− ３.０１(オーバーラップｍ，６Ｈ)，２.２８(ｔ，Ｊ＝７.２Ｈｚ，２Ｈ)，１.８１(ｍ，２Ｈ)，１.６４−１.５９(ｍ，１０Ｈ)，１.２３(br s，６０Ｈ)，０.８３(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，６Ｈ)。化合物６−４の合成は、下記のように製造し、更に精製することなく使用した。ＤＣＭ５mＬ中のアミンである化合物６−３(１９５mg、０.３mmol)の溶液に、テトラＢocカルボキシスペルミン(２２０mg、０.３４mmol)およびＨＯＢｔ(５０ mg、０.３７mmol)を添加した。この溶液に、次いで、ＤＣＭ３mＬ中のＤＤＣ( ７０mg、０.３４mmol)を添加した。反応混合物を一晩撹拌した。通常のＤＣＣ結合操作の後、粗混合物を得、それを次いで溶出液としてのヘキサン：酢酸エチル (４：６)のシリカゲルカラムクロマトグラフィー(１３ｇ)により精製し、７５mg の生産物である化合物６−４をガラス質固体として得た。¹ＨＮＭＲ δ：４. ３８(br，１Ｈ)，３.２４−３.１１(ｍ，１６Ｈ)，２.２６(ｔ，Ｊ＝７.２Ｈ，２Ｈ)，１.５７(オーバーラップｓおよびｍ，５０Ｈ)，１.２４(br s，６０Ｈ) ，０.８６(ｔ，Ｊ＝６.６Ｈｚ，６Ｈ)。マススペクトル、計算値１２６３、実測値１２６４(ｍＨ＋)、１２６６(ｍ＋Ｎａ⁺)。化合物６−５を以下の方法に従い合成した。化合物６−４(４mg)を、トリフルオロ酢酸を使用した標準Ｂoc脱保護条件および後処理条件に付し(実施例１参照) 、定量的収率の生産物６−５を薄黄色蝋状固体として得た。¹ＨＮＭＲ δ：３.３−２.９(ｍ，１２Ｈ)，２.４−２.２(ｍ，２０Ｈ)，１.２５(br s，６０Ｈ )，０.８５(ｔ，６０Ｈ)。実施例７ＣＯＳ−７、ＳＮＢ−１９、ＲＤおよびＣ８１６１細胞の製造と、カチオン性脂質およびＣＡＴプラスミドの混合物によるトランスフェクトンプロトコールＡ .細胞調製および処理細胞系を１.５×１０⁵細胞／ウェルで１２ウェルプレート型にトランスフェクション開始前日に入れた。全培養を５％ＣＯ₂中、３７℃に維持した。翌日、細胞が約８０％コンフルエントに到達した時、トランスフェクション混合物を下記の通り調整した：標的ＣＡＴプラスミド(下記)１２６μｇをＯpti−ＭＥＭ(登録商標)(Ｇibco／ＢＲＬ，Ｇaithersburg，ＭＤ)３６.０mＬに添加し、プラスミド貯蔵溶液を製造した。各脂質混合物(１００％エタノール溶液中の高濃度貯蔵から)を各１.５mＬアリコートのＯpti−ＭＥＭ(登録商標)に添加し、激しく撹拌した。次いで、ＤＮＡストック(プラスミド７μg含有)２mＬを脂質／Ｏpti−ＭＥＭ(登録商標)各１.５mＬアリコートに添加し、穏やかにボルテック処理した。この方法は、２μg／mＬプラスミドおよび１８μg／mＬ脂質で、９：１脂質：ＤＮＡ比で３.５mＬのプラスミド／脂質混合物を製造した。最終細胞培養中のエタノールの量は２％かそれ以下であった。この少量のエタノールは、細胞系に不利な作用のないことを確認した。トランスフェクションのための細胞を製造するために、培養培地をウェルから吸引除去し、細胞を２回Ｏpti−ＭＥＭ(登録商法)１mＬ／ウェルで濯いだ。トランスフェクション実験はトリプリケートで行った：従って、各トランスフェクション混合物の１mＬを次いで３つのウェルにそれぞれ入れた。細胞を次いでトランスフェクション混合物中で５から６時間培養した。トランスフェクション混合物を次いで除去し、１mＬの完全培養培地(ＤＭＥＭまたはＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１０％ウシ胎児血清およびペニシリン：ストレプトマイシン貯蔵の１：１００希釈、すべてＧibco/ＢＲＬ，(Ｇaithersburg，ＭＤ)から)に代え、ＣＡＴ遺伝子の発現の測定前に細胞を一晩回復させた。細胞融解物を、２回ＰＢＳで濯ぎ、次いで０.５mＬの１×Ｒeporter Ｌysis Ｂuffer(Ｐromega，Ｍadison，ＷＩ)で処理することにより製造した。融解細胞を１.５mＬ試験官にピペットで移し、ＣＯ₂／ＥｔＯＨで一度凍結融解させた。粗融解物を次いで１４,０００rpm、１０分の微少遠心により澄ませ、細胞残骸をペレットにした。透明上清を回収し、直接または−２０℃で貯蔵して検定に使用した。次いで、細胞融解物をＣＡＴ活性について検定し、全タンパク質濃度を下記実施例７に記載のように測定した。ＣＡＴ活性は全タンパク質に対して標準化し、示すようにプロットした。Ｂ.クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ検定この検定は一般に下記のように行った。最初に、以下の反応混合物を各サンプルについて製造した：０.２３Ｍトリス６５mL、pH８/０.５％ＢＳＡ(Ｓigma，Ｓt．Ｌouis，ＭＯ) ¹⁴Ｃ−クロラムフェニコール４mＬ、５０ｎＣi／μＬ(Ｄupont，Ｂoston，ＭＡ) およびｎ−ブチリルコエンザイムＡ５mＬ／mＬ(Ｐharmacia，Ｐiscataway，ＮＪ) ＣＡＴ活性標準曲線はＣＡＴストック(Ｐromega，Ｍadison，ＷＩ)を１：１０００、１：１０,０００および１：９０，０００に０.２５Ｍトリス、ｐＨ８／０ .５％ＢＳＡで連続希釈して製造した。本来のストックＣＡＴは７０００単位／m Ｌであった。次いで、ＣＡＴ融解物をトリス／ＢＡＳと共に標識試験管に、最終量５０mＬで入れた。約７４mＬの反応混合物を各試験管に入れ、それを次いで約１時間、３７℃オーブンでインキュベートした。プリスタン／混合キシレン(２：１)(Ｓigma，Ｓt ．Ｌouis，ＭＯ)を各試験管に添加することにより、反応を停止させた。試験管を次いで２分ボルテックスおよび５分回転させた。約４００mＬの上層を、５mＬＳcintiverse(Ｆisher，Ｐittsburgh，ＰＡ)含有シンチレーションバイアルに移した。次いで、サンプルをシンチレーションカンウターで計数した(Ｐackard)。Ｃ.プラスミドｐＧ１０３５の製造プラスミドｐＧ１０３５を、ＣＯＳ−７(ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ−１６５１)、ＳＮＢ−１９、Ｃ８１６１およびＲＤ(ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−１３６)細胞の一過性トランスフェクションに使用した。ｐＧ１３６は、真核ベクターｐＲｃ／ＣＭＶ(Ｉn vitrogen，Ｓan Ｄiego，ＣＡ)に挿入された修飾ＣＡＴ(クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ)遺伝子(ＳplicerCATと命名)から成る。SplicerCAT は、ｐＧ１０３６(またｐＲｃ／ＣＭＶ基本)という名のプラスミドの野生型ＣＡＴ遺伝子に、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して人工イントロン野生型ＣＡＴ遺伝子配列を挿入することにより製造した。トランスフェクションの結果は表ＩＡからＩＤに示す。 (ｉ)プラスミドＰｇ１０３５およびｐｇ１０３６の挿入ＣＡＴ配列の記載。ｐＧ１０３５(SplicerCAT)およびｐＧ１０３６(野生型ＣＡＴ)の合成スプライス部位は下記の通りである： (ａ)プラスミドpＧ１０３６の製造に使用した野生型ＣＡＴ遺伝子の部分的配列： (ｂ)SplicerCAT遺伝子およびプラスミドｐＧ１０３５の製造のためにｐＧ１０３６のＣＡＴコード配列内に挿入したイントロンの完全配列： (ii)プラスミドの製造イントロンを挿入するＣＡＴ遺伝子の領域は、上記配列(ａ)に示すｍＲＮＡである。野生型ＣＡＴＤＮＡ(Ｐharmacia)をpＲc／ＣＭＷ(Ｉnvitrogen，Ｓan Ｄiego，ＣＡ)、HindIII制限部位を介してに挿入し、プラスミドｐＧ１０３６を製造した。塩基＋４０９および＋４１０をｐＧ１０３５と比較するためにのみに配列番号１および２で標識する。上記配列(ｂ)として示す合成イントロンをＣＡＴＤＮＡに挿入し、プラスミドｐＧ１０３５を製造した。成熟ｍＲＮＡ配列を大文字で示し、イントロン配列を小文字で示す。スプライスドナーのカノニカル (canonical)グアノシンは標識＋４０９であり、ＣＡＴ開放読み取り枠の塩基４０９に対応する。イントロンの最初の塩基は標識１である。カノニカル枝別れ点のアデノシンは塩基３９であり、カノニカルイントロンスプライスアクセプターグアノシンはイントロンの塩基８７である。塩基４１０はＣＡＴ開放読み取り枠の回復を示す。オリゴマーが標的とする配列は下線を引く。コンセンサススプライス部位塩基は太字斜字で示す(Ｓmith et al.，Ａnn．Ｒev．Ｇenet．23:527， 1989；Ｇreen，Ａnn．Ｒev．Ｇenet．20:671，1986)。クローンｐＧ１０３５を合成ＤＮＡＰＣＲプライマーを使用して製造し、開放読み取り枠の最初の２／３および合成イントロンの半分を含むＨind III-Ｓpe Ｉ 5'フラグメントおよびイントロンの残りの半分および開放読み取り枠の最後の１／３を含むＳpe Ｉ−Ｎot Ｉフラグメントを製造した。これらを３方向ライゲーションでＨind III−Ｎot Ｉ切断ｐＲｃ／ＣＭＷと結合し、最終プラスミドを合成した。イントロン含有人工ＣＡＴ遺伝子をスプライサーＣＡＴと名付ける。前記に使用可能な参考文献は、Ｓmith et al.前掲およびＧreen前掲である。Ｄ.クーマシータンパク質検定浄化細胞融解物の全タンパク質含量を、非処理マイクロタイター検定プレート中で、各細胞融解物３００mＬにクーマシータンパク質検定試薬(Ｐierce，Ｒork ford，ＭＤ)を混合することにより測定した。濃度標準曲線を６μＬの０、７５、１００、２００、２５０、４００、５００、１０００および１５００mg／mＬＢＳＡストック溶液および３００mＬのクーマシー試薬を使用して調製した。検定サンプルを約３０分放置し、その後マイクロプレートリーダー(Ｍolecular Ｐ robes)で５７０nmの光学吸光度を読み取った。細胞を上記のようにＣＡＴタンパク質についで検定した。カチオン性脂質のトランスフェクション効率の結果は表ＩＡからＩＤに示す。実施例８ＦＩＴＣ−オリゴヌクレオチド取り込み検定全細胞系試験でカチオン性脂質媒介オリゴヌクレオチド取り込みの測定に使用するオリゴヌクレオチドは以下の通りであった： #3498-PS：５'ＦＩＴＣ-ggt-ata-tcc-agt-gat-ctt-ctt-ctc[配列番号１] オリゴマー３４９８−ＰＳは全ホスホロチオエート骨格を有する。このオリゴヌクレオチドは骨格に２３陰性電荷を有し、１００％陰性電荷と見なされる。 #3498：５'ＦＩＴＣ-ggt-ata-tcc-agt-gat-ctt-ctt-ctc[配列番号２] オリゴマー３４９８はキメラオリゴヌクレオチドである。下線塩基はホスホロチオエート骨格により結合しているが、オリゴマー中の他の結合は光学的に純粋なＲｐ−メチルホスホネートおよびホスホジエステルの代わりと考えられる。オリゴマーは１１メチルホネート、７ジエステルおよび５ホスホロチオエート結合を有する。全電荷密度は3498-PSの５７％であった。 #3793-2：５'ＦＩＴＣ-ggu-aua-ucc-agu-gau-cuu-cuu-cut[配列番号３] オリゴマー３２９３−２はオリゴヌクレオチドの各リボースの全２'−Ｏ−メチル基の光学的に純粋なＲp−メチルホスホネートおよびジエステル骨格への置換を有する。全電荷密度は3498-PSの５０％であった。オリゴヌクレオチド3498-PSおよび3498ストックは３００μmであったが、3793 -2ストックは４４０μmであった。Ｂ.試薬および細胞本試験で使用した商品として入手可能な脂質は以下の通りであった：表データ(表IIＡからＣ)に記載のように、これらの評価に使用した本発明の新規脂質は、１００％エタノール中１mg／mＬであった。組織培養細胞ストック、ＳＮＢ−１９(ヒト膠芽腫)、Ｃ８１６１(未確認組織由来ヒト癌)、ＲＤ(ヒト横紋筋肉腫、ATCC#CCL-136)およびＣＯＳ−７(アフリカミドリザル腎臓細胞、ATCC#1651)を標準培養培地：Ｍediatech，Ｌot#150901126 由来ＤＭＥＭ／Ｆ１２(１：１)混合物、Ｇemini Ｂioproducts，Ｌot#A1089K由来１０％ウシ胎児血清、Ｍediatech，Ｌot#30001044由来１００単位／mＬペニシリンおよび１００マイクログラム／mＬストレプトマイシンおよび３６５マイクログラム／mＬＬ−グルタミンに維持した。細胞を標準条件下、３７℃、５％ＣＯ₂雰囲気に固定および顕微鏡試験前の全時間、維持した。Ｃ.細胞およびトランスフェクション混合物の製造各ＦＩＴＣ−標識オリゴヌクレオチド輸送測定は、標準組織培養法に従って、適当な細胞を１６ウェルスライド(Nunc #178599、シリコンガスケットスライド表面に結合した１６個の除去可能プラスチックウェル付きガラス顕微鏡スライド )に、標準組織培養法に従い置くことにより開始した。各細胞系は、健康で、プレーティング後１から２日で６０−８０％コンフルエントになる、出発密度(約２,０００細胞／ウェル)でプレーティングした。細胞をガラスに接着させ、通常の成育培地中で、トランスフェクション開始２４から４８時間前にプレーティング工程から除去した。オリゴヌクレオチドトランスフェクション混合物をＯpti−ＭＥＭ(登録商標) に、下記のように構成物質内で製造した：3498-PS、3498または3793-2 ０.２５ μm(オリゴヌクレオチド２μｇ)含有Ｏpti−ＭＥＭ(登録商標)５００μＬアリコートを１.５mＬエッペンドルフ試験管にピペットで移動させた。次いで、各カチオン性脂質または脂質混合物を、表IIＡからＣに記載のように、カチオン性脂質対オリゴヌクレオチドの重量で最終９：１または６：１比(全脂質１８または１２μg)の比率となるようにオリゴヌクレオチド溶液に添加した。試験管を脂質添加直後ボルテックスにかけることにより撹拌した。トランスフェクションを、Ｏpti−ＭＥＭ(登録商標)２００μＬ中の細胞を濯ぎ、次いで細胞をダルベッコリン酸緩衝食塩水(ＰＢＳ)溶液で濯ぐことにより開始した。次いで、各オリゴヌクレオチドトランスフェクション混合物２００μＬを各ウェルに直接添加し、各トランスフェクション反応を開始させた。トランスフェクションを４から６時間続けた。次いで、細胞をＰＢＳで濯ぎ、３.７％ホルムアミド(Ｓigma，Ｓt．Ｌouis，ＭＯ)２００μＬで１０分固定化し、トランスフェクションを終了させ、次いで再びＰＢＳで濯いだ。ホルムアルデヒドを５０mＭグリシン(Ｓigma，Ｓt．Ｌoui s，ＭＯ)２００μＬで１０分停止させた。最後に、ウェルをグリシン溶液を振って空にし、プラスチックチャンバーおよびシリコンガスケットを除去し、細胞をＦluoromount−Ｇマウンティング培地(Ｆisherから、光タンパク阻害剤と共に) およびカバースリップで覆った。細胞内蛍光を２００×倍率でＮikon Ｌabophot-2顕微鏡およびエピスコピック (episcopic)−蛍光付属品で測定した。この装置を使用して、我々は、核由来の細胞外とエンドソーム蛍光を容易に区別できた。細胞を取り込みに関して下記のように点数付した：核蛍光無し、０；２０％までの蛍光核、１；４０％までの蛍光、２；６０％までの蛍光核、３；８０％までの蛍光核、４；１００％までの蛍光核、５。ＣＯＳ−７、ＳＮＢ−１９、Ｃ８１６１およびＲＤ細胞へのトランスフェクションの結果を表IIＡからIIＣに示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ // Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者ドワイヤー，ブライアン・パトリックアメリカ合衆国92128カリフォルニア州サンディエゴ、ダップル・コート11985番 (72)発明者スリニバサン，クマールアメリカ合衆国92122カリフォルニア州サンディエゴ、パルミラ・ドライブ・ナンバー2116、7693番 (72)発明者ブラウン，ボブ・デイルアメリカ合衆国92024カリフォルニア州エンシニタス、ノース・ウィロー・スプリング・ドライブ445番

Claims

【特許請求の範囲】１．構造：〔式中、(ａ)Ｙは直接結合または１から約２０の炭素原子のアルキレン；(ｂ)Ｒ₁ はＨまたは親油性部分；(ｃ)Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は陽性荷電部分、またはＲ₂、Ｒ₃またはＲ₄の全てではないが少なくとも一つが陽性荷電部分であり、残りがＨ、１から約６の炭素原子のアルキル部分またはヘテロ環部分から独立して選択される；(ｄ)ｎおよびｐは、ｎおよびｏの合計が１から１６になるように０から８の整数から独立して選択される整数；および(ｅ)Ｘ^-はアニオンまたはポリアニオン；(ｆ)ｍは０から脂質に存在する陽性電荷と同じ数までの整数である；ただし、Ｙが直接結合であり、ｎとｐの合計が１である時、Ｒ₃またはＲ₄のいずれか一つは少なくとも１０炭素原子のアルキル部分でなければならない〕を有する脂質、またはその塩または溶媒和物またはエナンチオマー。２．Ｒ₁が、１から約２４炭素原子の直鎖アルキル、２から約２４炭素原子の直鎖アルケニル、約１０から約５０炭素原子の対称に分枝したアルキルまたはアルケニル、約１０から約５０炭素原子の非対称に分枝したアルキルまたはアルケニル、ステロイジル部分、アミン誘導体、グリセリル誘導体またはＯＣＨ(Ｒ₅Ｒ₆ )またはＮ(Ｒ₅Ｒ₆)(式中、Ｒ₅およびＲ₆は、約１０から約３０炭素原子の直鎖アルキル部分)からなる群から選択される親油性部分である、請求項１記載の脂質。３．Ｒ₁が、１から約２４炭素原子の直鎖アルキルアミン部分、２から約２４炭素原子の直鎖アルケニルアミン部分、約１０から約５０炭素原子の非対称分枝アルキルアミンまたはアルケニルアミン部分、約１０から約５０炭素原子の非対称分枝アルキルアミンまたはアルケニルアミン部分、約３から約１０炭素原子の環状アミン部分、またはステロイジル部分からなる群から選択されるアミン誘導体である、請求項１記載の脂質。４．ステロイジル部分がコレステリルである、請求項３記載の脂質。５．Ｒ₂、Ｒ₃またはＲ₄の全てではないが、少なくとも一つが、ＯＨ、チオ、約１から約２０炭素原子のアリールまたはＯＲ₇(式中、Ｒ₇は１から約２４炭素原子のアルキル部分、２から約２４炭素原子のアルケニル部分、約５から約２０炭素原子のアリール部分または約６から約２５炭素原子のアラルキル部分)から選択される置換基で置換されている１から約６炭素原子の置換ヘテロ環状部分または１から６炭素原子の置換アルキル部分からなる群から選択される、請求項１記載の脂質。６．Ｒ₂、Ｒ₃またはＲ₄の全てではないが、少なくとも一つがアルキルアミン部分、フルオロアルキルアミン部分または１から約６炭素原子の過フルオロアルキルアミン部分、５から約１０炭素原子のアリールアミンまたはアラルキルアミン部分、グアニジニウム部分、エナミン部分、環状アミン部分、アミジン部分、イソチオウレア部分、もしくは、ＮＨ₂、Ｃ(＝Ｏ)ＮＨ₂、ＮＨＲ₇、Ｃ(＝Ｏ)ＮＨＲ₇、ＮＨＲ₇Ｒ₈またはＣ(＝Ｏ)ＮＨＲ₇Ｒ₈(式中、Ｒ₇およびＲ₈は１から約２４の炭素原子のアルキル部分、２から約２４炭素原子のアルケニル部分、約５から約２０炭素原子のアリール部分、約６から約２５炭素原子のアラルキル部分から独立して選択される)から選択される置換基で置換されている置換ヘテロ環状アミン部分、１から約６炭素原子の置換アルキル部分からなる群から選択される、請求項２記載の脂質。７．アリールアミンがトリプトファン、フェニルアラニンおよびチロシンからなる群から選択される、請求項６記載の脂質。８．Ｒ₂が、アミノ基が、所望により１から約６炭素原子のアルキルで置換されていてもよい、または２級、３級または４級アミンを形成するために、所望によりヒドロキシル、アミノ、１から約６炭素原子のアルキル部分、１から約６炭素原子のアルキルアミン部分または２から約１２炭素原子のジアルキルアミノ部分で置換されていてもよい１から６炭素原子のアルキル部分で置換されている陽性荷電側鎖を有するアミノ酸残基である、請求項１記載の脂質。９．Ｒ₂が、リジン、アルギニン、ヒスチジン、オルニチンまたはアミノ酸アナログからなる群から選択されるアミノ酸残基である、請求項８記載の脂質。１０．Ｒ₂が、３−カルボキシスペルミジン、５−カルボキシスペルミジン、６−カルボキシスペルミジンまたはモノアルキル、ジアルキルまたは過アルキル置換誘導体(１から約６炭素原子のアルキル基と共に１個またはそれ以上のアミン窒素で置換されている)からなる群から選択されるアミノ酸アナログである、請求項９記載の脂質。１１．Ｒ₃およびＲ₄が、独立して１から約２４炭素原子の親油性部分、陽性電荷部分、または陰性電荷部分である、請求項１記載の脂質。１２．親油性部分が約１から約２４炭素原子（最も好ましくは１つの炭素メチル基）の直鎖アルキル部分、２から約２４炭素原子の直鎖アルケニル部分、約１０から約５０炭素原子の対称分枝アルキルまたはアルケニル部分、約１０から約５０炭素原子の非対称分枝アルキルまたはアルケニル部分、約５から約２０炭素原子のアリール部分、約６から約２５炭素原子のアラルキル部分およびステロイジル部分からなる群から選択される、請求項１１記載の脂質。１３．陽性電荷部分が、側鎖に陽性電荷基を有するアミノ酸残基、アルキルアミノアルキル部分、フルオロアルキルアミノアルキル部分、過フルオロアルキルアミノアルキル部分、グアニジウムアルキル部分、エナミノアルキル部分、環状アミノアルキル部分、アミジノアルキル部分、イソチオウレアアルキル部分、またはヘテロ環状アミン部分からなる群から選択される、請求項１１記載の脂質。１４．陰性電荷部分が、カルボキシアルキル部分、ホスホノアルキル部分、スルホノアルキル部分または１から約２４炭素原子炭素原子のホスファチジルアルキル部分からなる群から選択される、請求項１１記載の脂質。１５．ｎおよびｐの合計が１から８である、請求項１記載の脂質。１６．ｎおよびｐの合計が１から４である、請求項１記載の脂質。１７．ｎおよびｐの合計が１から２である、請求項１記載の脂質。１８．Ｘ^-が医薬的に許容可能なアニオンまたはポリアニオンである、請求項１記載の脂質。１９．構造：を有するアミド基本脂質。２０．構造：を有するアミド基本脂質。２１．構造：を有するアミド基本脂質。２２．構造：を有するアミド基本脂質。２３．構造：を有するアミド基本脂質。２４．構造：を有するアミド基本脂質。２５．構造：を有するアミド基本脂質。２６．構造：を有するアミド基本脂質。２７．構造：を有するアミド基本脂質。２８．構造：を有するアミド基本脂質。２９．構造：を有するアミド基本脂質。３０．構造：を有するアミド基本脂質。３１．構造：を有するアミド基本脂質。３２．構造：を有するアミド基本脂質。３３．構造：を有するアミド基本脂質。３４．ポリアニオン性巨大分子および請求項１記載の脂質を含む組成物。３５．ポリアニオン性巨大分子が、細胞中でポリペプチドを発現できる発現ベクターを含むポリアニオン性巨大分子である、請求項３４記載の組成物。３６．ポリアニオン性巨大分子がオリゴヌクレオチドまたはオリゴマーである、請求項３４記載の組成物。３７．ポリアニオン性巨大分子がＤＮＡである、請求項３４記載の組成物。３８．請求項３４記載の組成物を細胞と接触させることを含む、ポリアニオン性巨大分子を細胞内に輸送する方法。３９．オリゴマーがタンパク質をコードする細胞中のＲＮＡ配列と実質的に相補的な塩基配列を有するものである、請求項３６記載の組成物を細胞と接触させることを含む、細胞中のタンパク質の発現を妨害する方法。４０．請求項３４記載の組成物を含む、ポリアニオン性巨大分子を細胞内に輸送させるためのキット。