JPH11507223A - Dnaポリメラーゼに対する結合・阻害核酸リガンド - Google Patents
Dnaポリメラーゼに対する結合・阻害核酸リガンドInfo
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.ポリメラーゼに対する核酸リガンドを同定する方法において、 a)核酸の候補混合物を調製し、 b)候補混合物に比較してポリメラーゼに対する親和性が高い核酸を候補混合 物の残部から分配できるように、核酸の候補混合物を上記ポリメラーゼと接触さ せ、 c)候補混合物の残部から親和性の高い核酸を分配し、 d)ポリメラーゼの核酸リガンドが同定できるように、親和性の高い核酸を増 幅し、ポリメラーゼに対して比較的に高い親和性で特異的に結合する核酸配列が 濃縮された核酸の混合物を生成させる工程からなる方法。 2.さらに、e)工程b),c)およびd)を反復することからなる「請求項 1」記載の方法。 3.ポリメラーゼはDNAポリメラーゼである「請求項1」記載の方法。 4.ポリメラーゼは逆転写酵素である「請求項1」記載の方法。 5.ポリメラーゼは熱安定性である「請求項1」記載の方法。 6.DNAポリメラーゼは Thermus aquaticusから単離される(Taqポリメ ラーゼ)「請求項3」記載の方法。 7.ポリメラーゼは Thermus thermophilus から単離される(Tthポリメラ ーゼ)「請求項3または4」記載の方法。 8.核酸の候補混合物は一本鎖核酸からなる「請求項1」記載の方法。 9.一本鎖核酸はデオキシリボ核酸である「請求項1」記載の方法。 10.DNAポリメラーゼの活性を阻害する方法において、室温に保持されてい るDNA重合反応混合物に高親和性DNAポリメラーゼ核酸リガンドの有効量を 添加することからなる方法。 11.DNAポリメラーゼ核酸リガンドは「請求項1」記載の方法によって同定 される「請求項10」記載の方法。 12.DNAポリメラーゼは、Taqポリメラーゼである「請求項10」記載の方 法。 13.ポリメラーゼリガンドは表2(配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36 〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73)または表5(配列番号:74)のリガ ンドの一つから選択されるDNAである「請求項12」記載の方法。 14.DNAポリメラーゼは、Tthポリメラーゼである「請求項10」記載の方 法。 15.ポリメラーゼリガンドは表2(配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36 〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73)または表5(配列番号:74)のリガ ンドの一つから選択されるDNAである「請求項14」記載の方法。 16.ポリメラーゼに対する天然に存在しない精製および単離核酸リガンド。 17.「請求項1」記載の方法によって同定される「請求項16」記載の核酸リガ ンド。 18.ポリメラーゼはTaqポリメラーゼであり、リガンドは表2(配列番号: 7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73)もし くは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相補性配列から なる群より選択される「請求項16」記載の天然に存在しない精製および単離核酸 リガンド。 19.ポリメラーゼはTaqポリメラーゼであり、リガンドは表2(配列番号: 7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73)もし くは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相補性配列から なる群より選択されるリガンドと実質的に相同であり、実質的に同じTaqポリ メラーゼに対する結合能を有するDNAである「請求項16」記載の天然に存在し ない精製および単離核酸リガンド。 20.ポリメラーゼはTaqポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2(配列番 号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73) もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相補性配列 からなる群より選択されるリガンドと実質的に同じ構造を有し、実質的に同一の Taqポリメラーゼに対する結合能を有する「請求項16」記載の天然に存在しな い精製および単離核酸リガンド。 21.ポリメラーゼはTthポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2(配列番 号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73) もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相補性配列 からなる群より選択される「請求項16」記載の天然に存在しない精製および単離 核酸リガンド。 22.ポリメラーゼはTthポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2(配列番 号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73) もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相補性配列 からなる群より選択されるリガンドと実質的に相同であり、実質的に同じTth ポリメラーゼに対する結合能を有する「請求項16」記載の天然に存在しない精製 および単離核酸リガンド。 23.ポリメラーゼはTthポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2(配列番 号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73) もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相補性配列 からなる群より選択されるリガンドと実質的に同じ構造を有し、実質的に同一の Tthポリメラーゼに対する結合能を有する「請求項16」記載の天然に存在しな い精製および単離核酸リガンド。 24.逆転写酵素に対する天然に存在しない精製および単離核酸リガンド。 25.a)核酸の候補混合物を調製し、 b)候補混合物に比較して逆転写酵素に対する親和性が高い核酸を候補混合物 の残部から分配できるように核酸の候補混合物を逆転写酵素と接触させ、 c)候補混合物の残部から親和性の高い核酸を分配し、 d)逆転写酵素の核酸リガンドが同定できるように、親和性の高い核酸を増幅 し、逆転写酵素に対して比較的に高い親和性で特異的に結合する核酸配列が濃縮 された核酸の混合物を生成させる工程からなる方法で同定される「請求項24」記 載の逆転写酵素に対する核酸リガンド。 26.逆転写酵素はTthポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2(配列番号: 7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73)もし くは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相補性配列から なる群より選択される「請求項24」記載の天然に存在しない精製および単離核酸 リガンド。 27.逆転写酵素はTthポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2(配列番号: 7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73)もし くは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相補性配列から なる群より選択されるリガンドと実質的に相同であり、実質的に同じTthポリ メラーゼに対する結合能を有する「請求項24」記載の天然に存在しない精製およ び単離核酸リガンド。 28.逆転写酵素はTthポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2(配列番号: 7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号:67〜73)もし くは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相補性配列から なる群より選択されるリガンドと実質的に同じ構造を有し、実質的に同一のTth ポリメラーゼに対する結合能を有する「請求項24」記載の天然に存在しない精製 および単離核酸リガンド。 29.ポリメラーゼ・チェーン反応(PCR)の実施方法において、 a)増幅すべき核酸配列を含有するサンプルを、増幅すべき配列に隣接する配 列と相補性であるプライマー、熱安定性ポリメラーゼ、および室温においてはポ リメラーゼを阻害できるが高温ではポリメラーゼの活性化を可能にする核酸リガ ンドを混合し、 b)混合物の温度サイクリングによって標的核酸の溶融、標的核酸に対するプ ライマーのアニーリング、および標的核酸の合成の標準PCR工程を実施するこ とからなる方法。 30.熱安定性ポリメラーゼはTaqポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2 (配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号: 67〜73)もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相 補性配列からなる群より選択される「請求項29」記載の方法。 31.熱安定性ポリメラーゼはTaqポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2 (配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号: 67〜73)もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相 補性配列からなる群より選択されるリガンドと実質的に相同であり、実質的に同 じTaqポリメラーゼに対する結合能を有する「請求項29」記載の方法。 32.熱安定性ポリメラーゼはTaqポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2 (配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号: 67〜73)もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相 補性配列からなる群より選択されるリガンドと実質的に同じ構造を有し、実質的 に同じTaqポリメラーゼに対する結合能を有する「請求項29」記載の方法。 33.熱安定性ポリメラーゼはTthポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2 (配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号: 67〜73)もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相 補性配列からなる群より選択される「請求項29」記載の方法。 34.熱安定性ポリメラーゼはTthポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2 (配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号: 67〜73)もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相 補性配列からなる群より選択されるリガンドと実質的に相同であり、実質的に同 じTthポリメラーゼに対する結合能を有するDNAである「請求項29」記載の 方法。 35.熱安定性ポリメラーゼはTthポリメラーゼであり、核酸リガンドは表2 (配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列番号: 67〜73)もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当する相 補性配列からなる群より選択されるリガンドと実質的に同じ構造を有し、実質的 に同じTthポリメラーゼに対する結合能を有する「請求項16」記載の方法。 36.熱安定性DNAポリメラーゼおよび、室温においてはそのポリメラーゼを 阻害するが、高温ではポリメラーゼの活性化を可能にする核酸リガンドからなる PCRキット。 37.熱安定性DNAポリメラーゼはTaqポリメラーゼであり、核酸リガンド は表2(配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列 番号:67〜73)もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当 する相補性配列からなる群より選択される「請求項36」記載のキット。 38.熱安定性DNAポリメラーゼはTthポリメラーゼであり、核酸リガンド は表2(配列番号:7〜35)、表3(配列番号:36〜66,76,77)、表4(配列 番号:67〜73)もしくは表5(配列番号:74)に掲げた配列またはそれらの相当 する相補性配列からなる群より選択される「請求項36」記載のキット。 39.ポリメラーゼ・チェーン反応(PCR)を実施するための改良方法であっ て、その改良は熱安定性ポリメラーゼに、室温においてはポリメラーゼを阻害す るが、PCR過程の高温度サイクルにおいてはポリメラーゼの活性化を可能にす る核酸リガンドを添加する工程からなる方法。 40.核酸スイッチを同定する方法において、 a)核酸の候補混合物を調製し、 b)候補混合物に比較して標的に対して親和性が高い核酸を候補混合物の残部 から分配できるように核酸の候補混合物を標的化合物と接触させ、 c)候補混合物の残部から親和性の高い核酸を分配し、この場合環境パラメー ターの変動時におけるそれらの標的への親和性の喪失に基づいてさらに分配し、 ついで、 d)ポリメラーゼの核酸リガンドが同定できるように、親和性の高い核酸を増 幅し、ポリメラーゼに対して比較的に高い親和性で特異的に結合する核酸配列が 濃縮された核酸の混合物を生成させる工程からなる方法。
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