JPH11507031A

JPH11507031A - チオカチオン性脂質，医薬組成物およびその使用方法

Info

Publication number: JPH11507031A
Application number: JP9500592A
Authority: JP
Inventors: スリドハール，シー・ナガラジャ; ダッタガプタ，ナニブフシャン; パテル，ジャズミン・アール; ダス，アディティア・ランジャン
Original assignee: ジェン−プローブ・インコーポレーテッド
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-05-17
Publication date: 1999-06-22
Also published as: KR19990022597A; CA2222586A1; WO1996040627A2; EP0747351A3; EP0747351A2; WO1996040627A3; AU5862296A

Abstract

(57)【要約】カチオン性の電荷を有する脂質分子が記載される。これらのカチオン性脂質は、生体分子、例えばオリゴヌクレオチド、核酸、ペプチド、診断イメージング剤、蛋白質および薬剤分子の送達に有用である。リポソームの形態において、これらは治療または診断目的での生体分子の細胞内送達に有効に用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】チオカチオン性脂質，医薬組成物およびその使用方法発明の分野本発明は合成のカチオン性親油性化合物に関する。特に、プラスに荷電したスルホニウムイオンを有するチオカチオン性脂質、生体分子結合体や複合体の成分としてのチオカチオン性脂質の使用およびそれらの医薬組成物としての使用に関する。発明の背景生体内(in vivo)治療剤のような生体分子を含む製剤は、毒性を発現せず、通常の生物学的工程によって最初に分解することなく生体系に効果を発揮することができる必要がある。時には毒性を有する化合物や不安定な化合物をより効果あるように、複合体配送（delivery）系または化学修飾の使用が必要となる。特に、高く荷電した、不溶性および／または高分子量の薬剤は、時には担体と結合されまたは配送媒体と混合されないと薬理学的有用性が限定される。薬剤の効果的な投与と関連する問題は、ある種の薬剤は細胞に取り込まれなければその生物学的効果を発現できないという事実により複雑化される。例えば、遺伝子機能の調整剤としてのオリゴヌクレオチドの使用は、細胞成分と細胞内、時には核内のレベルで相互に作用する能力に負っている。しかし、オリゴヌクレオチドは他のポリアニオン性物質と同様に、水溶液中で配送されるとき、貧弱な細胞取込みしか示さない。オリゴヌクレオチドの細胞内取込みを高めるために多くのアプローチが提案されている。そのいくつかは、ウイルスベクター（Cepko 等，Cell 37：1053-1062 (1984)）、細胞レセプターリガンドとの共有結合（Myers 等，ヨーロッパ特許第 273,085 号(1988)；Wu 等，J.Biol．Chem.,263：14621-14624(1988)；Vestweber 等，Nature 338: 170-172(1989)）の使用のような生物学的アプローチを含んでいる。他に細胞へのＤＮＡの直接的なマイクロインジェクション（Capecchi 等，Cell 22：479-488(1980)）や細胞エレクトロポレーション（Potter 等，Proc. Nat.Acad．Sci．81：7161-7165(1984)）のような物理学的アプローチを含む方法もある。さらには親油性部分の付加（Shea等，Nucleic Acid Research 18(13) :3777-3787(1990)；MacKellar 等，Nucleic Acid Research 20(13): 3411-3417( 1992)）やポリペプチド（Stevenson 等，J.Gen．Virol.,70:2673-2682(1989)）のような化学的アプローチを主に含む方法もある。リポソームのような配送媒体をオリゴヌクレオチドの細胞内配送に使用することも開示されている。（Felgner 等，ＵＳＰ5,264,618(1993)；Eppstein等，ＵＳＰ4,897,355（1993）；およびWang 等，Pro．Nat．Acad.Sci．84: 7851-7855( 1987)）。リポソーム製剤を使用する利点はこれらの物質の天然に発生した細胞膜成分に似せる能力である。これは細胞膜とエンドソーム膜の融合を促進し、結果的にリポソーム内容物を細胞質内に配送する。このような膜融合がなければ、細胞外物質はエンドサイトーシスによって取り込まれ、細胞質中に開放される前にファゴソームの中で分解するかもしれない。生体分子の細胞内配送に最も有用なリポソームはしばしば各種の親油性置換基の混合物を含む複合製剤である。これらの複合混合物はｐＨ感受性、温度感受性およびサイズのようなリポソームの物理的特性を最適化することを可能とする。最近のある進歩は、ジオレイルホスファチジル−エタノールアミン(“ＤＯＰＥ ”)のようなあるｐＨ感受性の両親媒性化合物は酸性ｐＨ下で不安定になるリポソームを処方するのに使用できることが認められたことである。これは分解性の酸性ｐＨおよびエンドソームの酵素含量に晒されたとき、リポソームとエンドソーム膜との融合を促進し、結果的にリソソームの内容物を細胞質内に開放する(R opert等，Biochem．Biophys．Res．Comm．183(2)：879-895（1992）；および Ju liano等,Antisense Research and Development 2：165-176(1992)を参照）。リポソーム中のステロール含有もよく知られている。一般にリポソーム製剤中のステロールの存在はin vitro、in vivo 両方において安定性が高まる。コレステロールやビタミンＤ₃のよう有機酸誘導体を含む生体分子の配送のためのリポソーム製剤はそれらの誘導体化されていない水不溶性の等価物よりも処方するのがより容易であることが報告されている(Janoff 等、ＵＳＰ4,721,612 および4,891 ,208)。しかし、ある極性の脂質を含む複合リポソーム製剤においては、そのような水溶性酸ステロール誘導体の包含はリポソームを不安定にし、効力を減ずる。カチオン性脂質（すなわち、プラスに荷電したアンモニウムやスルホニウムイオンを含むヘッドグループを有するグリセロリピドの誘導体）は、オリゴヌクレオチドのようなマイナスに荷電した生体分子の細胞内配送のためのリポソーム製剤に特に有用である。それらの有用性は、それらのプラスに荷電したヘッドグループとマイナスに荷電した細胞表面との相互反応能力に由来するものであろう。このカチオン性脂質、Ｎ−〔１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル〕−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド（“ＤＯＴＭＡ”）はFelgner 等によって開示されている（Proc．Nat．Acad．Sci．84: 7413-7417(1987)；ＵＳＰ4,897,355 も参照）。ここで、アンモニウム基を有するカチオン性脂質はリポソーム製剤中でポリヌクレオチドによる細胞のトランスフェクションを容易にするために用いられる。これらの製剤において、ＤＯＴＭＡは自発的にＤＮＡと反応して細胞表面のマイナスに荷電した脂質と融合することができるイオン性脂質 −ＤＮＡ複合体を形成し、最終的に細胞によるＤＮＡの取込みをもたらすことが示された。そのような応用のためのいくつかの他のアンモニウムイオンを含むカチオン性脂質製剤が報告されている。これらの製剤には、ＤＯＴＭＡ類似体、１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−トリメチルアンモニオ）プロパン(“ＤＯＴＡＰ ”)（Stamatatos 等，Biochemistry，27：3917-3925(1988)；スペルミンの親油性誘導体（Behr 等,Proc．Nat．Acad．Sci.，86: 6982-6986(1989)）；およびセチルトリメチルアンモニウムブロマイド(Pinnaduwage 等，Biochim.Biophys.A cta,985：33-37(1989))（以下も参照、Leventis等，Biochim.Biophys.Acta,1023 :124-132(1990);Zhou 等，Biochim．Biophys．Acta，1065: 8-14(1991);Farhoo d等，Biochim．Biophys．Acta，1111: 239-246(1992);およびGao等，Biochim．B iophys．Res．Commun.，179：280-285(1991)）がある。いくつかの商業的に使用できるカチオン性脂質には、ＤＯＴＭＡ(Gibco BRL，Bethesda,maryland)、ＤＯＴＡＰ（Boehringer Mannheim，Germany）、および１，２−ジアシル−３−トリメチルアンモニウムプロパン(“ＴＡＰ”)(Avanti Polar Lipids,Birmingham, Alabama)がある。しかし、これらのアンモニウムイオン含有脂質の多くは細胞毒性であることが報告されている。スルホニウムイオンはアンモニウムイオンとは全く異なる物理学的特性を有している。事実、アンモニウムイオン含有化合物は、窒素原子が高い電気陰性度を有し、極性化および酸化しにくく、原子価電子が核に強く所有されているため、強塩基として分類される。この特性はアンモニウムイオンを含む脂質製剤と関連した毒性のいくつかと関係があるかもしれない。これに対して、スルホニウムイオンを含む化合物は、イオウ原子が低い電気陰性度を有し、容易に極性化および酸化し、原子価電子が核によってゆるやかに所有されているため、弱塩基として分類される。スルホニウムイオンを含む（すなわち“チオカチオン性”）脂質の示すこの荷電密度の少なさは、マイナスに荷電した細胞膜との反応性を高め、ならびに毒性を低下させることができる。トランスフェクションを高める脂質の有用性と関連する一つの重要な特徴はそれらのヘッドグループの大きさであることも示唆されている。「相対的に小さな極性のヘッドグループ」を有するカチオン性脂質を含む製剤は最も有用であることが予測されている（Felgner等，J．Biol．Chem．269(4)：2550-2561(1994)）。加えて、Morris-Natschke 等は（J．Med．Chem．36: 2018-2025(1993)）抗腫瘍剤としてスルホニウム誘導体を含むホスホコリンエーテル脂質の使用を開示し、大きなヘッドグループの置換基の存在は効果を減少させることを報告している。スルホニウムイオンの物理化学的特性の故に、より大きなヘッドグループを有するチオカチオン性脂質は好適でありうる。特に、脂質ヘッドグループが隣接する飽和炭素原子に取り囲まれたイオウ原子からなるとき、スルホニウムイオンは隣接する炭素原子へ電荷の拡散を示し、これが細胞膜と脂質の反応を容易にし、ならびに毒性を低下させる。前述のアンモニウムおよびスルホニウムイオンを含有する脂質が多くの治療用途において有用であることが示されているにもかかわらず、それらの複合リポソーム製剤の形での取り込みおよび使用は未だ最適化されていない。特に、カチオン性脂質含有製剤にビタミンＤを取り込ませることにより効果を高めることは探究されていない。そこで、本発明の目的はそれらのアンモニウムイオン含有相対物より薬剤として低毒性のチオカチオン性脂質を提供することにある。前述の親油性化合物よりも広範囲に生体分子の細胞内配送を高めるチオカチオン性脂質を含有する薬剤を提供することも本発明の目的の一つである。顕著な効果を示すカチオン性脂質を含有するリポソーム製剤を提供することも本発明のさらなる目的である。発明の要約本発明は新規なスルホニウムイオン含有カチオン性脂質（“チオカチオン性脂質”）および生体分子の細胞内配送用薬剤としてのそれらの使用に関する。これらの新規化合物はスルホニウムイオンのプラスの荷電を拡散させるのに有効に働く少なくとも３個の隣接炭素原予によって囲まれたスルホニウムイオンを含むヘッドグループを有するグリセロリピドである。特に、本発明は下記一般式のチオカチオン性脂質およびそれらの光学異性体および／または塩類に関する。ここで、Ａ¹およびＡ²は同一または異なり、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｏ−、−Ｓ−ＣＯ−または−Ｓ−；Ａ³は−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−ＣＯ−、−ＣＯ −Ｓ−、−Ｏ−ＣＳ−、−ＣＳ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＳ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＳ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、− Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−または不在；Ｒ¹およびＲ²は同一または異なり、水素原子またはＣ₁からＣ₂₃の飽和もしくは一部不飽和のアルキルもしくはアラルキル、但しＲ¹およびＲ²の少なくとも一方は水素原子でない；Ｒ³はＣ₁からＣ₁₂のアルキル、アラルキル、アルカリール、ヘテロサイクリルもしくはヘテロアリール；またはＲ³はアミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドもしくはペンタペプチド；またはＲ³は −［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴、 −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺、ここで、ｐは１〜５、ｑは０〜４、Ｒ⁴は水素原子もしくはＣ₁〜Ｃ₄のアルキル；およびｍ，ｎおよびｏは０〜８、但しｍ≧１およびｍ＋ｎ＋ｏ≧３これらのカチオン性脂質は生体分子単独または他の脂質置換体と組み合わせて複合体の形で薬剤に用いることができる。またそれらは生体分子と共有結合的に結合させることができ、同様な薬剤として用いることができる。本発明による薬剤はこれらの複合体または結合体（conjugates）と薬学的に許容しうる担体からなる。薬学的に許容しうる担体の例は水溶液および複合体配送系を含む。好適には薬学的に許容しうる担体はリポソームである。本発明の重要な観点は、生体分子の細胞内配送に用いるある種のカチオン性脂質含有リポソーム製剤が高い効力を示すことの発見である。このようなリポソームは一般にアンモニウムまたはスルホニウムイオンを含有する脂質、ビタミンＤ、ｐＨ感受性の両親媒性化合物および生体分子からなる。本発明の他の特徴および利点は下記詳細な説明およびクレームから明らかである。図面の簡単な説明図１はＤＯＭＣＡＴＯＰおよび抗−ＨＩＶアンチセンス(antisense)オリゴヌクレオチドを含有するリポソーム製剤のウイルス抑制を示す。図２はＤＯＤＭＥＣＡＰおよび抗−ＨＩＶアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するリポソーム製剤のウイルス抑制を示す。図３はコレステロールまたはビタミンＤ３のいずれかと抗−ＨＩＶアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するリポソーム製剤のウイルス抑制を示す。図４はＤＯＤＭＥＨＡＰまたはＤＯＭＨＹＴＯＰのいずれかと抗−ＨＩＶアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するリポソーム製剤の細胞の代謝活性に及ぼす影響を示す。好適形態の詳細な説明本発明は脂質ヘッドグループにスルホニウムイオンを有する新しい部類の合成チオカチオン性脂質を提供する。これらのチオカチオン性脂質は共有結合体（co njugates）の構成成分および／または薬剤の成分として作用することによって生体分子の細胞内配送を高めるのに有用である。本発明の主題をさらに明らかに説明するために、ここに用いられた用語は他に示されない限り、下記のように定義される。アルカリール：“アルカリール”は、例えばトリルまたはｔ−ブチルフェニルおように、少なくとも１個のアルキル置換基を有するアリール基を意味する。アルケニル：“アルケニル”は二重結合によって互いに結合した少なくとも２個の炭素原子を有するアルキル基または部分を意味する。アルキル：“アルキル”は直鎖または分岐鎖の炭化水素基または部分を意味する。単独で用いられるとき、アルキルの用語は飽和炭化水素基を表す。アルキニル：“アルキニル”は三重結合によって結合した少なくとも２個の炭素原子を有するアルキル基または部分を意味する。両親媒性の：“両親媒性の(amphiphilic)”は、有機化合物に関して用いられるとき、該化合物が疎水性（非極性）部分と親水性（極性）部分の両方からなっていることを意味する。両親媒性化合物の例にはナトリウムオレート；ホスファチジルコリン、およびジオレイルホスファチジルコリン（“ＤＯＰＣ”）；およびジオレイルホスファチジルエタノールアミン（“ＤＯＰＥ”）のようなそれらの誘導体を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチド：“アンチセンスオリゴヌクレオチド”は標的“センス(sense)”核酸に相補性であり、少なくとも部分的には配列特異的機構によって機能し、標的核酸の機能を調整するオリゴヌクレオチドを意味する。アラルキル：“アラルキル”は、例えばベンジル、フェネチルまたはベンズヒドリルのように、少なくとも１個のアリール環部分が結合したアルキル基を意味する。アリール：“アリール”は、例えばフェニルやナフチルのような、芳香族炭化水素基または部分を意味する。生体分子：“生体分子”は望ましい生物学的活性または機能、すなわち in vi voで“生物学的効果”を有する有機化合物を意味する。例えば、治療剤からなる生体分子は遺伝子機能のような細胞の機能を変化させることができる。一方、ＭＲＩやＣＴ剤のような診断剤からなる生体分子は組織および／または器官の診断像を高める生物学的機能を有する。相補的：“相補的”は、核酸に関して用いられるとき、ワトソン−クリック水素結合を介して他の反対の極性の核酸のヌクレオチド塩基と対合する配列を有する一極の核酸を意味する。すなわち、アデニン（“Ａ”）はチミン（“Ｔ”）またはウラシル（“Ｕ”）と対合し、グアニン（“Ｇ”）はシトシン（“Ｃ”）と対合する。例えば、５′から３′方向に配列ＧＣＡＵを有する核酸は３′から５ ′方向に配列ＣＧＴＡを有する核酸と“相補的”である。ここで相補的の用語の使用は実質的に相補的である核酸を含むように意図される。相補的核酸は、一方をプラス（“（＋）”）または“センス”鎖および他方をマイナス（“（−）” ）または“アンチセンス”鎖として表すこともできる。複合体：“複合体(complex)”は二以上の化合物の非共有の物理的、通常イオン性の会合を意味する。複合体の例は、例えば、カチオン性脂質とイオン的に会合したマイナスに荷電したオリゴヌクレオチドを含む。ＤＯＤＭＥＣＡＰ：“ＤＯＤＭＥＣＡＰ”は１，２−ジヘキサデシルオキシ− ３−（Ｎ−（５−ヒドロキシペンチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ）プロパンおよびそれらの異性体および／または塩を意味する。ＤＯＤＭＥＨＡＰ：“ＤＯＤＭＥＨＡＰ”は１，２−ジヘキサデシルオキシ− ３−（Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ）プロパンおよびそれらの異性体および／または塩を意味する。ＤＯＭＣＡＴＯＰ：“ＤＯＭＣＡＴＯＰ”はＳ−（（２，３−ジヘキサデシルオキシ）プロピル）−Ｓ−（５−カルボキシペンチル）メチルスルホニウムおよびそれらの異性体および／または塩を意味する。ＤＯＭＨＹＴＯＰ：“ＤＯＭＨＹＴＯＰ”はＳ−（（２，３−ジヘキサデシルオキシ）プロピル）−Ｓ−（６−ヒドロキシヘキシル）メチルスルホニウムおよびそれらの異性体および／または塩を意味する。ＤＯＰＣ：“ＤＯＰＣ”はジオレイルホスファチジルコリンを意味する。ＤＯＰＥ：“ＤＯＰＥ”はジオレイルホスファチジルエタノールアミンを意味する。グリセロリピド：“グリセロリピド”はグリセリン骨格を有する親油性の分子を意味し、少なくとも１個の疎水性尾部を有し、親水性の極性のヘッドグループを有していてもよい。ヘッドグループ：“ヘッドグループ”はグリセリン骨格に末端の炭素原子の１つで結合するグリセロリピドの部分を意味する。ヘッドグループは中性でも極性でもよい。ヘテロアリール：“ヘテロアリール”は、例えばピロロまたはピリジルのような芳香環の一部として少なくとも１個のヘテロ原子を有する芳香族基を意味する。ヘテロサイクリル：例えば、ピペリジニル、ピロリジニルまたはモルホリノのような、環構造の部分として少なくとも１個のヘテロ原子を有する環状基。ハイブリダイズ：“ハイブリダイズ”は塩基対の相互反応を介して相補的核酸間でデュープレックスを形成することを意味する。リポソーム：“リポソーム”は球状の二重層に配列された両親媒性の脂質からなる小胞を意味する。修飾された：“修飾された（modefied）”は核酸に関して用いられるとき、天然構造の任意のものが変化を受けた核酸を意味する。これらはホスホジエステル結合、糖（ＲＮＡの場合のリボースまたはＤＮＡの場合のデオキシリボース）および／またはプリンまたはピリミジン塩基に対する修飾を含む。修飾されたホスホジエステル結合はホスホロチオエート、ホスホトリエステル、メチルホスホネートおよびホスホロジチオエートを含む。核酸配列：“核酸配列”または“配列”はヌクレオチドの特定の配列を有する核酸、および特定の核酸に存在するヌクレオチドの配列または順序の両方を意味する。この用語が用いられている文脈からこれらの２つの意味のいずれが適用されるかは明らかであろう。ＯＢＥＨＹＴＯＰ：“ＯＢＥＨＹＴＯＰ”はＳ−（（２−ベンジルオキシ−３ −オクタデシルオキシ）プロピル）−Ｓ−（６−ヒドロキシヘキシル）メチルスルホニウムおよびそれらの異性体および／または塩を意味する。ＯＢＥＣＡＴＯＰ：“ＯＢＥＣＡＴＯＰ”はＳ−（（２−ベンジルオキシ−３ −オクタデシルオキシ）プロピル）−Ｓ−（５−カルボキシペンチル）メチルスルホニウムを意味する。ＯＡ：“ＯＡ”はオレイン酸を意味する。オリゴヌクレオチド：“オリゴヌクレオチド”は核酸の短いセグメントを意味する。薬理学的に適合性の担体：“薬理学的に適合性の担体”は、生体分子をそれに添加して、毒性または薬理学的に逆効果を受容できないレベルで示すことなく、患者にその投与を容易にすることのできる配合物を意味する。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド：“ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド”は天然に生じたホスホジエステル結合の代わりに全ホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ポリアニオン：“ポリアニオン”は２以上のマイナス荷電を有する分子を意味する。配列：“配列”は核酸中のヌクレオチド塩基（Ａ，Ｇ，Ｃ，ＴまたはＵ）のパターンまたは順序を意味する。治療的有効量：“治療的有効量”は所望の治療上の効果を得るに十分な生物学的効果を示すに十分な量を意味する。本発明のチオカチオン性脂質の有用性は、脂質ヘッドグループに十分に分布されたプラス電荷の存在によって高められ、これがマイナスに荷電した細胞膜と効果的に相互作用することを可能とする。これらのチオカチオン性脂質の好適な用途はマイナスに荷電した生体分子の細胞内配送である。チオカチオン性脂質は、また生体分子のマイナス電荷をバランスして、生ずる製剤を中性にするように機能する。特に好適な用途は、例えばホスホロチオエートオリゴヌクレオチドのようなオリゴヌクレオチドの細胞内配送である。それらはヨードを含有するＣＴ剤のようなある種の診断イメージング剤の細胞内配送においても有用である。本発明のチオカチオン性脂質は天然発生の細胞膜成分を真似るよう設計される。このことにより、チオカチオン性脂質および関連生体分子が細胞膜と融合し、それが細胞内配送を促進することが可能となる。細胞膜と十分に融合することができないと(時には物質の“融合(fusogenic)”特性として表される)、外来物は食食されリソソームの酵素によって速やかに分解される。Ｉ．チオカチオン性グリセロリピドの構造本発明の新規なチオカチオン性脂質は構造式Ｉの一般式で表すことができるものおよびそれらの光学異性体および／または塩である。構造式Ｉによって与えられるチオカチオン性脂質は３つの部分；骨格、１以上の尾部およびヘッドグループを有するものとして説明できる。上に示すように骨格は３つの炭素のグリセリン部分からなり；尾部はＲ¹およびＲ²によって与えられ、Ａ¹およびＡ²を介して骨格に結合しており；ヘッドグループは［で与えられる。本発明のカチオン性グリセロリピドは、プラスに荷電したスルホニウムイオンＳ⁺を含んでいる。スルホニウムイオンはプラスに荷電したアンモニウムイオンに比較して低い電荷密度を提供する利点を有する。ヘッドグループの周囲の炭素と結合してプラス電荷は拡散され、マイナスに荷電した細胞表面と相互反応が高められ、ならびに効率が改良される。ここでｍ、ｎおよびｏはそれぞれ０〜８である。ただし、ｍ≧１、ｍ＋ｎ＋ｏ≧３である。Ａ¹およびＡ²はグリセリン骨格と親油性尾部間の結合を提供する。Ａ¹およびＡ²は同一または異なり、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｏ−、−Ｓ−ＣＯ−または−Ｓ−であることができる。特に好適な形態は、Ａ¹およびＡ²の双方が−Ｏ−で、Ｒ¹およびＲ²が−ＣＨ²−部分を介してＡ¹およびＡ²と結合している長鎖（Ｃ１６〜Ｃ１８）アルキル部分である構成である。これらの長鎖アルキルエーテル脂質はエステルベースの脂質よりも代謝的により安定であり、細胞中に核酸を運搬するのに優れていることが発見された。このタイプの特に好適な化合物は、ＤＯＭＨＹＴＯＰ、またはそのカルボン酸誘導体、ＤＯＭＣＡＴＯＰである。実施例１パートＡおよびＢをそれぞれ参照のこと。本発明の他の面は好適なリポソーム構造の形成を選択的に行うためにＲ²部分の炭化水素鎖の長さを変化させる能力である。例えば、Ａ²が−Ｏ−でＲ²がＨのとき、形成されるグリセロリピド（すなわち“リソリピド”）は単一の尾部をもつ。より長鎖のＲ²部分を有する脂質と組み合わせたリソリピドの使用は１個以上の二重層を有するリポソームの形成に好適でありうる。リソリピド単独の使用はミセルの形成に好適である。このような混合脂質製剤は成分の割合を変化させることによりサイズおよび細胞の取込みを最適化することができる。本発明による他の好適な部類のチオカチオン性脂質は、Ａ²が−Ｏ−で、Ｒ²がアラルキルＣＨ₂Ｃ₆Ｈ₅である。これらのベンジル誘導体は芳香族部分の存在により疎水性が高められ、したがって好適な製剤特性を示すことができる。このように変化したものの中で特に好適な化合物はＯＢＥＨＹＴＯＰ、または等価のカルボン酸誘導体、ＯＢＥＣＡＴＯＰである。それぞれ実施例１パートＣおよびＤ参照。融合特性および製剤特性を最適化するために種々の程度の不飽和度を有するＲ¹ およびＲ²部分を取り込ませることも可能である。本発明によって提供される他の新規なチオカチオン性脂質はＲ³の位置の分子に取り込まれた追加のカチオン基を有する分子である。このタイプのカチオン性脂質の好適な形態においては、付加的なカチオン性部分は、例えばリシン、アルギニン、ヒスチジンまたはトリプトファンのようなアミノ酸の付加により誘導される。Ｒ³は−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−ＣＯ−、−ＣＯ −Ｓ−、−Ｏ−ＣＳ−、−ＣＳ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＳ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＳ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、− Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、または不在であり得るＡ³を介してチオカチオン性脂質と結合している。リンカーの選択または必要性は当業者によって容易に決定される。本発明のチオカチオン性脂質は公知の方法を用いて容易に合成することができる。典型的には、グリセリンから誘導されるようなリピドアルコールを四臭化炭素とトリフェニルホスフィンの混合物のようなブロム化剤を用いてブロム誘導体に変換する。このようにして形成されたブロム誘導体をナトリウムチオメトキシドのようなアルキルメルカプタンのナトリウム塩と反応させてアルキルチオグリセリン中間体を得る。この中間体を、必要に応じ適当な溶媒を用いてハロアルキル化合物の存在下に還流してアルキル化して、カチオン性脂質をそのハロゲン塩として得る。チオカチオン性脂質−生体分子結合体（conjugates）本発明のチオカチオン性脂質は生体分子と共有結合的に結合したチオカチオン性脂質からなる組成物の形であってもよい。生体分子は所望の生物学的効果を示し、この生物学的効果をカチオン性脂質と結合した後も保持しているかぎり如何なる有機化合物でもよい。生体分子の例としては、限定されるものではないが、蛋白質、ホルモン、遺伝子、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、ヌクレオシド、薬物(drugs)、抗生物質、抗体、診断イメージング剤、およびそれらの誘導体および類似体を含む。チオカチオン性脂質と生体分子の間の共有結合は公知の方法を用いてなし遂げることができる。例えば、ＰＣＴＷＯ９４／０５６２４参照。生体分子は好ましくはオリゴヌクレオチドであり、さらに好ましくはヌクレアーゼによる分解に対する抵抗の目的でホスホロチオエートオリゴヌクレオチドである。加えて、オリゴヌクレオチドはＲＮＡでもＤＮＡでもよいが、ＲＮアーゼ（RNases）に対する抵抗性のためＤＮＡがより好ましい。薬剤処方に有用なオリゴヌクレオチドは、典型的には、目的とするかまたは目的とするヌクレオチド配列とハイブリダイズするのに十分相補的であるかのいずれかのヌクレオチド配列を有している。該オリゴヌクレオチドは典型的にレセプターホスト細胞において生化学的機能を発揮することができ、および／または細胞組織の運行を変化させることができる。このような作用の例はトランスフェクションまたはアンチセンス剤のようなものである。オリゴヌクレオチドの適当な長さはそのオリゴヌクレオチドが設計された特有の用途によるが、ある一般化は可能である。オリゴヌクレオチドがアンチセンス治療剤として用いられる場合、好ましくは約１２と５０の間であり、さらに好ましくは約１５と３０ヌクレオチドの間の長さである。本発明で用いることのできるオリゴヌクレオチドは、限定されるものではないが、天然に生じた核酸、およびホスホロチオエート、メチルホスホネートまたはホスホロジチオエートヌクレオチド間結合を有するような修飾された核酸を含む。さらに、生体分子は、アデノシン、グアノシン、シチジン、チミジンおよびウリジンまたは、５−フルオロウリジン、５−アルキルウリジン、デアザグアノシン、アザグアノシン、アザチミジンのようなそれらの類似体のような天然に生じたヌクレオシドであることができる。本発明のチオカチオン性脂質に対するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの結合部位は５′または３′末端のいずれか、ヌクレオチド間結合、ヌクレオシド塩基または骨格の糖部分を介することができる。そのような結合は如何なる公知の方法を用いてもよい。例えば、Goodechi ld 等，Bioconjugate Chemistry 1(3)：165-187（1990）。カチオン性脂質はＡ³ および／またはＲ³を介して３′−ＯＨまたは５′−ＯＨに結合することができる。または、カチオン性脂質はＡ³および／またはＲ³を介して、ヌクレオチド間のホスホロチオエート結合におけるＯまたはＳ原子を介して如何なるヌクレオチド間結合で結合することができる。さらに、カチオン性脂質はＡ³および／またはＲ³を介して、環内のＣまたはＮ、または環外のＮまたはＯで塩基と結合することができる。Ａ³および／またはＲ³を介して、糖部分の１′、２′または４′ 位に結合することもできる。 II．カチオン性脂質薬剤本明細書で説明されるチオカチオン性脂質を用いる薬剤はチオカチオン性脂質 −生体分子結合体（conjugates）からなるか、またはカチオン性脂質と生体分子を、脂質と生体分子間のイオン性および／または疎水性の相互反応を介して安定な会合が形成されるような条件下で互いに混合することによって形成されるカチオン性脂質−生体分子複合体(complexes)からなることができる。いずれの場合においても、カチオン性脂質−生体分子結合体／複合体は薬学的に許容できる担体中で調製され投与される。薬学的に許容できる担体の例としては、水、食塩水、緩衝液または炭水化物溶液のような水溶液、およびリポソーム、ミクロスフェア、またはエマルジョンのような複合体配送系を含む。 III．リポソーム薬剤本発明のチオカチオン性脂質含有生体分子薬剤は、好適にはリポソームからなる。前述のいずれの生体分子もリポソームの中にカプセル化されることができる。さらに、多くの生体分子含有リポソーム薬剤が文献に記述され、本明細書のリポソーム薬剤を用いるカプセル化に適当なその他追加の生体分子の例として役立つ。脂質集合体はカプセル化された水性の塊（aqueous volume）を含む脂質二重層を形成した完全に閉じた構造の形態（すなわち、単ラメラリポソーム）をとることができ、または水性の塊によって分離された１より多い同心の脂質二重層（すなわち、多層ラメラリポソーム）を含むことができる。各脂質二重層は２つの脂質の単層からなり、その各々は疎水性の（非極性）“尾”領域と親水性の（極性）“ヘッド”領域を有する。二重層においては、脂質単層の疎水性の“尾”は二重層の内側に向き、一方親水性の“ヘッド”は二重層の外側に向く。生体分子がリポソームに捕らえられるのは、生体分子が脂質−生体分子結合体の形でなければ、水相の内部である。脂質−生体分子の形の場合は生体分子は二重層の内部に埋め込まれることができる。リポソームは当業界で知られた種々の方法で作ることができる。（例えば、Ba ngham 等，J．Mol．Biol.，13：238-252(1965)。これらの方法は一般に、まず脂質を有機溶媒中で攪拌して溶解させ、続いて蒸発させることを含む。次に、適当量の水相を脂質相と混合し、リポソームが形成されるに十分な時間インキュベートさせる。該水相は一般に緩衝液または糖のような他の溶質とともに懸濁された生体分子からなる。カプセル化される生体分子に加えて、本発明のリポソームは本明細書記載のチオカチオン性脂質のみ、本明細書記載のチオカチオン性脂質の混合物、またはアニオン性脂質（例えば、ホスファチジルグリセロール、ホスファチシッド酸(pho sphaticid acid)、または類似のアニオン性リン脂質類似体）のような他の公知の脂質と結合した本発明のチオカチオン性脂質、または天然の脂質（例えば、ホスファチジルコリンまたはホスファチジルエタノールアミン）を含む。本発明のリポソーム製剤はさらに、リソホスファチジルコリン、リソホスファチジルエタノールアミン、またはカチオン性脂質類のリソ形のようなリソ脂質を含むことができる。リポソームは、またステロール、糖脂質、抗体や蛋白質のような組織または器官標的物質、脂肪酸、または他の天然または合成の親油性若しくは両親媒性の化合物の任意の置換基を含んでいてもよい。リポソームに含有させるのに適当なステロールは、限定されるものではないが、コレステロールおよびビタミンＤであり、これらはリポソーム製剤に安定剤として含有される。チオカチオン性脂質の全脂質に対するモル割合は、全体としてプラス電荷のリポソーム製剤が形成されるのに十分である必要がある。この量は、カプセル化された生体分子の電荷と量、ならびにリポソームの他の成分の電荷と量による。一般的にリポソームはカチオン脂質と全脂質のモル比が約９：１から１：９であり、好ましくは約１：２から２：１である。全脂質の生体分子に対するモル比は約２００：１−１００：１であり、好ましくは約１６０：１である。 IV．高い効果のリポソーム製剤本発明の一つの重要な面は、カチオン性脂質−生体分子リポソーム製剤の効果はビタミンＤおよび少なくとも一つのｐＨ感受性の両親媒性脂質の存在によって高められることの発見である。アンモニウムイオンおよびスルホニウムイオン含有カチオン性脂質の双方とも生体分子の細胞内配送のためのリポソーム薬剤で有用である。カチオン性脂質は本明細書に記載されたいずれかのチオカチオン性脂質または他の公知のアンモニウムまたはスルホニウムイオン含有カチオン性脂質であることができる。上述のように、カチオン性脂質は単独でも、他のカチオン性、中性またはアニオン性脂質と組み合わせても使用することができる。ビタミンＤはビタミンＤ₃（“コレカルシフェロール”とも称される）、またはビタミンＤの全体としての効果を高める効果を有意に減少させることのないビタミンＤ類似体または誘導体であることができ、これらを本明細書において集合的に“ビタミンＤ”として参照する。好適には、誘導されていないビタミンＤ₃ が用いられる。いくつかの両親媒体(amphiphiles)はｐＨの作用でそれらの荷電を変化させる作用を有し、それ故、“ｐＨ感受性”である。例えば、オレイン酸および／またはＤＯＰＥのようなｐＨ感受性の両親媒体を含有するリポソーム小胞はｐＨの作用でその電荷を変化させることができる。一方、ＤＯＰＣを含有する小胞はｐＨ依存的にそれらの電荷を変化させることはない。両親媒体がｐＨの作用としてその電荷を変化する能力はリポソームの他の構成成分による。特に、アルキル鎖の飽和の程度は効果を有する。さらに、ＤＯＰＥのマイナスに荷電したホスフェイトのような両親媒体のマイナス電荷と、カチオン性脂質のプラスに荷電したヘッドグループとの間のイオン対の相互作用がある。これはｐＨの作用として電荷を変化させやすいＤＯＰＥにプラスに荷電したアミノ基を残す。（Felgner 等，J. Bio．Chem．269：1-12（1994）参照）。両親媒体のｐＨ感受性は細胞内におけるリポソーム小胞のエンドソーム膜との融合性(fusogenicity)を高めるのに役立つ(Ropert 等，Biochem．Biophys．Res. Commun．183(2)：879-85(1992)）。適当なｐＨ感受性の両親媒性脂質はＤＯＰＥおよびオレイン酸を含むが、これに限定されない。好適には、ｐＨ感受性両親媒体はオレイン酸であるが、リポソームに組み入れられた後に生理的ｐＨ（約６から７．５）またはその近くで、ｐＨの作用として荷電を変化しやすい如何なる親油性の両親媒体も使用するのに適している。オリゴヌクレオチドの細胞内配送のための特に好適なリポソーム製剤は、モル比が１０：５：２のカチオン性脂質：オレイン酸：ビタミンＤ₃からなる。異なる成分および／または生体分子からなるリポソーム製剤の効果を最大限に発揮させるために他のモル比を設計することができる。そのようなモル比は公知の手法により容易に決定することができる。例えば、Liposome Technologies,CRC Pres s,発行者 Gregory Gregoriadis，ed.（1984）参照。Ｖ．薬剤の配送本発明のチオカチオン性脂質は、所望の治療効果を得るために種々の経路によりおよび動物体の種々の部位に生体分子を配送するために薬剤において用いることができる。これらの薬剤は、前述の薬学的に許容できる担体中のチオカチオン性脂質−生体分子複合体および／またはチオカチオン性脂質−生体分子結合体からなることができる。薬剤の局所または全身配送は、体腔への薬剤の挿入、エアーゾルの吸入または通気、または筋肉内、静脈内、皮内、腹膜、皮下および局所投与からなる非経口導入を含む投与により行うことができる。経口的に投与される薬剤は固体、液体、エマルジョン、懸濁液、またはゲルの形態であることができ、好ましくは、例えば錠剤またはカプセルのような投与量単位の形態である。錠剤は、タルク、植物油、ポリオール、ガム、ゼラチン、澱粉および他の担体のような慣習的に用いられている他の成分と組み合わせて製剤化することができる。皮下、筋肉内または静脈内の注射を意図される非経口剤は、液体、または注射に先立ち液体中に懸濁されるための固体またはエマルジョンのいずれかとして調製することができる。そのような製剤は無菌であり、静脈内に注入される液体は等張であるべきである。適当な賦形剤は、例えば水、デキストローズ、食塩水、グリセリンなどがある。該製剤はエアーゾルの形で鼻、喉、気管支のような体腔に投与されることもできる。これらの製剤におけるカチオン性脂質および他の混合剤に対する生体分子の割合は投与型および要求量により変わる。本発明の製剤の効果的な投与量は、生体分子およびその所望の生物学的活性、ならびに特定の製剤動力学、組成、物理的特性、所望の治療効果、被験者の重量による。最も効果的な投与量は公知の方法で容易に決定することができる。 VI．治療用途上述の生体分子製剤の好適な治療用途はアンチセンスオリゴヌクレオチドをカプセル化したリポソームを含む治療剤の細胞内配送分野である。ＨＩＶ抑制に有用な特に好適な治療薬剤は、ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１で与えられるホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの配送媒体としてのチオカチオン性脂質含有リポソームからなる。このオリゴヌクレオチドはＨＩＶＲＥＶタンパク質をコードするＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．２で与えられるｍＲＮＡ配列と相補的である。（Peters on等，公開ＰＣＴ出願番号ＷＯ９５／０３４０７参照）。実験工程本発明は好適な形態の代表である以下の実施例を通してよりよく理解されるが、発明の範囲を限定するように解釈されるべきではない。本明細書で用いられた全ての化合物は、特にことわらないかぎり、ミルウオーキー、ＷＩのアルドリッチケミカル社から購入した。実施例１カチオン性脂質の合成パートＡ：Ｄｏｍｈｙｔｏｐのブロマイド塩の形の合成ステップ１．１，２−Ｏ−ジヘキサデシル−３−ブロモ−１，２−プロパンジオールの合成磁石の攪拌棒を備えた２５０ｍｌの丸底フラスコ中で、１２０ｍｌのトルエンに１．９２ｇ（３．６mmol）のジヘキサデシルグリセリン（シグマケミカル社）を溶解させた。この溶液に３．５４ｇ（１０．７mmol）の四臭化炭素および２．８０ｇ（１０．７mmol）のトリフェニルホスフィンを添加し、反応混合液を室温で一夜（１８時間）攪拌した。黄色の懸濁液を濾過し、濾液をロータリーエバポレイターで濃縮して白色固体を得た。この残渣をトルエンに溶解させ、飽和の塩化ナトリウムで一回洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ロータリーエバポレイターで真空下に濃縮して２．５ｇの白色粉末として粗生成物を得た。この粗生成物をシリカゲル６０（Ｅ．メルク社，ドイツ）上でフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、１００ｍｌのヘキサン、ヘキサン中１％酢酸エチル、ヘキサン中２％酢酸エチル最終はヘキサン中３％酢酸エチルで連続溶出させて精製した。各分画（８ｍｌ）を集め、薄層クロマトグラフィー（“ＴＬＣ”）でスクリーンし、純生成物（シリカゲル、ヘキサン中５％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．５９）を含む分画をプールした。プールされた分画をロータリーエバポレイターで真空下に濃縮して量論的収量の１，２−ジヘキサデシル−３−ブロモ−１，２− プロパンジオールを白色粉末として得た。ステップ２．１，２−Ｏ−ジヘキサデシル−３−メチルチオ−１，２−プロパンジオールの合成磁石の攪拌棒を備えた２５０ｍｌの丸底フラスコ中で、乾燥テトラヒドロフラン１００ｍｌに、ラセミ体の１，２−Ｏ−ジヘキサデシル−３−ブロモ−１，２ −プロパンジオール（ステップ１より）２．０ｇ（３．３mmol）を溶解させた。この溶液に２．３３ｇ（３３．２mmol）のナトリウムチオメトキシド粉末を加え反応混合物を室温で一夜攪拌した。反応をＴＬＣ（シリカゲル、ヘキサン中５％酢酸エチル）でモニターし、反応液に４９０ｍｇ（７mmol）のナトリウムチオメトキシドを追加した。３時間後、混合物を濾過し、濾液を５０ｍｌのテトラヒドロフランで洗浄した。化合した濾液をロータリーエバポレイターで真空下に濃縮して黄色の残渣を得た。この残渣を５０ｍｌのクロロホルムに溶解させ、有機溶液を重炭酸ナトリウム濃縮液２５ｍｌで２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、ロータリーエバポレイターで真空下に濃縮して淡い黄色の油性残渣として粗生成物を得た。粗生成物はシリカゲル６０（Ｅ．メルク社、ドイツ）上、ヘキサン中酢酸エチル０から１０％の段階的勾配（step gradiennt）を用いるカラムクロマトグラフィーを用いて、精製した。各分画を集め、ＴＬＣでスクリーンした。純生成物を含む分画をプールし、濃縮して１，２−Ｏ−ジヘキサデシル−３−メチルチオ−１，２−プロパンジオールを収率９０％で得た。ステップ３．１，２−Ｏ−ジヘキサデシル−３−（Ｓ−メチル）−（６− ヒドロキシヘキシル）−スルホニウムブロマイドの合成磁石の攪拌棒と還流冷却器を備えた２５０ｍｌの丸底フラスコ中で、トルエン１２０ｍｌに、ラセミ体の１，２−Ｏ−ジヘキサデシル−３−メチルチオ−１，２−プロパンジオール（ステップ２より）１．０ｇ（１．７５mmol）を溶解させた。この溶液に３．１７ｇ（１７．５mmol）の６−ブロモヘキサノールを加え、この溶液を１３５℃で３日間加熱した。茶色い溶液を室温に冷却し、ロータリーエバポレイターで濃縮し、茶色い油性の残渣を得た。この残渣を５０ｍｌのクロロホルムに溶解し、３０ｍｌの飽和食塩水で２回洗浄した。クロロホルム層を硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過による硫酸マグネシウムの除去に続き、シリカ床を通して液中の極度に極性の不純物を完全に除去した。次にこの溶液を真空下に濃縮してワックス状の残渣として粗生成物を得た。粗生成物は、シリカゲル６０（Ｅ．メルク社，ドイツ）を用いるカラムクロマトグラフィーを用いて、最初に１００ｍｌヘキサン、続いて１００ｍｌのヘキサン中１０％酢酸エチル、最後的にヘキサン中３０％酢酸エチルで連続的に溶出させた。ＴＬＣにより決定されたような生成物を含む分画をプールし、濃縮し、低融点の黄色固体として収率８８％でＤＯＭＨＹＴＯＰの塩を得た。パートＢ：Ｄｏｍｃａｔｏｐのブロマイド塩の合成磁石の攪拌棒と還流冷却器を備えた２５０の丸底フラスコ中で、トルエン１２０ｍｌに、ラセミ体の１，２−Ｏ−ジヘキサデシル−３−メチルチオ−１，２− プロパンジオール（パートＡ、ステップ１および２のように調製）１．０ｇ（１．７５mmol）を溶解させた。この溶液に３．４１ｇ（１７．５mmol）の６−ブロモヘキサン酸(6-buromohexanoic acid)を添加し、溶液を４日間１３５℃で加熱した。茶色の溶液を室温まで冷却し、ロータリーエバポレイターで濃縮し、茶色い油性の残渣を得た。この残渣を５０ｍｌのクロロホルムに溶解し、シリカ床を通したて溶液中の極度に極性の不純物を除去した。得られた溶液は次に３０ｍｌの飽和食塩水で洗浄した。次にクロロホルム層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥させた。濾過による硫酸マグネシウムの除去に続き、真空下に濃縮して、黄色油性残渣として粗生成物を得た。この粗生成物をシリカゲル（Ｅ．メルク社、ドイツ）カラムを用いるカラムクロマトグラフィーにより、１００ｍｌのヘキサン、次に１０ｍｌのヘキサン中１０％酢酸エチル、最後にヘキサン中３０％酢酸エチルで連続的に溶出させて精製した。ヘキサン中３０％酢酸エチルからの分画はＴＬＣで決定されたような生成物を含んでおり、この分画をプールし、濃縮して低融点の黄色固体としてＤＯＭＣＡＴＯＰのブロマイド塩を収率４２％で得た。パートＣ：Ｏｂｅｈｙｔｏｐのブロマイド塩の合成ステップ１．１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−ベンジル−３−ブロモ−１，２−プロパンジオールの合成磁石の攪拌棒を備えた２５０ｍｌの丸底フラスコ中で２．００ｇ（４．６mmol ）の１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−ベンジルグリセリン（ベイケム社、スイス）を１２０ｍｌのトルエンに溶解させた。この溶液に４．５８ｇ（１３．８mmol ）の四臭化炭素と３．６２ｇ（１３．８mmol）のトリフェニルフォスフィンを加え、反応混合物を室温で４時間攪拌した。黄色の懸濁液を濾過し、濾液をロータリーエバポレイターで濃縮して白色固体を得た。この残渣を５０ｍｌのクロロホルムに溶解させ、３０ｍｌの飽和重炭酸ナトリウムで２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロータリーエバポレイターで真空下に濃縮して白色固体として２．５ｇの粗生成物を得た。この粗生成物をシリカゲル６０（Ｅ．メルク社、ドイツ）カラムを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、１００ｍｌのヘキサン、ヘキサン中１％酢酸エチル、ヘキサン中２％酢酸エチル、最後にヘキサン中３％酢酸エチルで連続溶出させることによって精製した。集められた分画をＴＬＣでスクリーンし、純生成物（シリカゲル、ヘキサン中５％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．５６）を含む分画をプールした。プールされた分画をロータリーエバポレイターで真空下に濃縮して白色粉末として１−Ｏ−オクタデシル−２ −Ｏ−ベンジル−３−ブロモ−１，２−プロパンジオールを量論的収量で得た。ステップ２．１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−ベンジル−３−メチルチオ１，２−プロパンジオールの合成磁石の攪拌棒を備えた２５０ｍｌの丸底フラスコ中で、ラセミ体の１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−ベンジル−３−ブロモ−１，２−プロパンジオール１．９９ｇ（４．０mmol）を１００ｍｌの乾燥テトラヒドロフランに溶解させた。この溶液に２．８ｇ（４０．０mmol）のナトリウムチオメトキシド粉末を添加し、反応混合物を室温で４．５時間攪拌した。反応をＴＬＣ（シリカゲル、ヘキサン中５％酢酸エチル；Ｒｆ＝０．５１）でモニターした。混合物を濾過し、濾液を５０ｍｌのテトラヒドロフランで洗浄した。化合した濾液をロータリーエバポレイターで真空下に濃縮して黄色粉末を得た。この残渣を５０ｍｌのクロロホルムに溶解させ、３０ｍｌの重炭酸ナトリウム濃縮溶液で２回洗浄した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロータリーエバポレイターで真空下に濃縮して淡い黄色の油性残渣として粗生成物を得た。この粗生成物をシリカゲル６０（Ｅ．メルク社、ドイツ）上、ヘキサン中酢酸エチル０から１０％の段階的勾配（step gradiennt）を用いるカラムクロマトグラフィーを用いて、精製した。集められた分画はＴＬＣでスクリーンした。純生成物を含む分画を（シリカゲル、ヘキサン中５％酢酸エチルＲｆ＝０．５１）プールし、濃縮して、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−ベンジル−３−メチルチオ−１，２−プロパンジオールを収率９０％で得た。ステップ３．１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−ベンジル−３−（Ｓ−メチル−Ｓ−（６−ヒドロキシヘキシル））−スルホニウムブロマイドの合成磁石の攪拌棒と還流冷却器を備えた２５０ｍｌの丸底フラスコ中で、ラセミ体の１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−ベンジル−３−メチルチオ−１，２−プロパンジオール１．０２ｇ（２．２mmol）を１２０ｍｌのトルエンに溶解させた。この溶液に３．９８ｇ（２２．０mmol）の６−ブロモヘキサノールを添加し、溶液を３日間１３５℃に加熱した。次に茶色の溶液を室温に冷却し、ロータリーエバポレイターで濃縮して茶色の油性残渣を得た。この残渣を５０ｍｌのクロロホルムに溶解させ、シリカ床を通して極端に極性の不純物を除去した。生じた溶液を、次に、飽和の重炭酸ナトリウム３０ｍｌで２回洗浄し、飽和の塩化ナトリウム溶液３０ｍｌで抽出した。クロロホルム層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥させた。濾過により硫酸マグネシウムを除去後、溶液を真空下に濃縮して黄色の油性残渣として粗生成物を得た。この粗生成物をシリカゲル６０（Ｅ．メルク社、ドイツ）を用いるカラムクロマトグラフィーにより、１００ｍｌのヘキサン、次に１０ｍｌのヘキサン中１０％酢酸エチル、最後にヘキサン中３０％酢酸エチルで連続的に溶出させて精製した。ＴＬＣ（シリカゲル、ヘキサン中３０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．４１）で決定されたような生成物を含む分画をプールし、濃縮して、低融点の黄色固体として収率８５％でＯＢＥＨＹＴＯＰのブロマイド塩を得た。パートＤ：実施例４：Ｏｂｅｃａｔｏｐのブロマイド塩の合成磁石の攪拌棒と還流冷却器を備えた２５０ｍｌの丸底フラスコ中で、ラセミ体の１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−ベンジル−３−メチルチオ−１，２−プロパンジオール（パートＣ、ステップ１および２のように調製）１．０ｇ（１．７５ mmol）を１２０ｍｌのトルエンに溶解させた。この溶液に４．３０ｇ（２２．０ mmol）の６−ブロモヘキサン酸を添加し、溶液を１３５℃で３日間加熱した。次に茶色の溶液を室温まで冷却し、ロータリーエバポレイターで濃縮し茶色の油性残渣を得た。この残渣を５０ｍｌのクロロホルムに溶解させ、シリカ床を通して極端に極性の不純物を除去した。生じた溶液を３０ｍｌの飽和の塩化ナトリウム溶液で洗浄した。次にクロロホルム層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムの濾過による除去後、溶液を真空下に濃縮して黄色の油性残渣として粗生成部物を得た。この粗生成物をシリカゲル６０（Ｅ．メルク社、ドイツ）を用いるカラムクロマトグラフィーにより、１００ｍｌのヘキサン、次に１００ｍｌのヘキサン中１０％酢酸エチル、最後にヘキサン中３０％酢酸エチルで連続的に溶出させて精製した。ＴＬＣ（シリカゲル、ヘキサン中３０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．３６）で決定されたような生成物を含む分画をプールし、濃縮して、低融点の黄色固体として収率４０％でＯＢＥＣＡＴＯＰのブロマイド塩を得た。パートＥ：Ｄｏｄｍｅｃａｐのブロマイド塩の合成ステップ１．１，２−ジヘキサデシルオキシグリセリンのブロム化１００ｍｌの丸底フラスコ中で１ｇの１，２−ジヘキサデシルオキシグリセリンを８０ｍｌのトルエンに溶解させた。この溶液に１．８４ｇの四臭化炭素と１．４６ｇのトリフェニルホスフィンを添加した。反応混合物を室温下で２４時間攪拌し、反応の進行を薄層クロマトグラフィー（ヘキサン中５％酢酸エチル）によってモニターした。生じた黄色固体を濾過し、濾液をロータリーエバポレイターで濃縮し、アセトンに溶解させた。この段階を繰り返し、白色固体（収量９００ｍｇ）の形で生成物を単離した。ステップ２．１，２−ジヘキサデシルオキシ−３−ジメチルアミノグリセリンの形成１００ｍｌの丸底フラスコ中で、９００ｍｇの３−ブロモ−１，２−ジヘキサデシルオキシグリセリンを３０ｍｌのクロロホルムに溶解させた。７２０ｍｇのジメチルアミンを約１０倍モル過剰になるように添加し、反応混合物を室温下に一夜攪拌した。反応の進行を薄層クロマトグラフィー（ヘキサン中３０％酢酸エチル）で測定した。反応混合物を分液ロートに移し、飽和塩化ナトリウム溶液で２回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過した。濾液をロータリーエバポレイターで濃縮し、６３０ｍｇの生成物を得た。ステップ３：Ｄｏｄｅｍｅｃａｐのブロマイド塩の形成１００ｍｌの丸底フラスコ中で、ステップ２で得られた１，２−ジヘキサデシルオキシ−３−ジメチルアミノグリセリン２７０ｍｇ、ブロモヘキサン酸０．６２８ｇおよび炭酸カリウム０．２７１ｇを８０ｍｌトルエンに溶解させた。反応混合物を油浴中で１２０℃に加熱し、連続攪拌しつつ条件を一夜維持した。反応の進行は薄層クロマトグラフィー（ヘキサン中３０％酢酸エチル）を用いてモニターし、２０時間で完全であることが示された。次いで反応混合物をロータリーエバポレイターで濃縮した。白色残渣を３０ｍｌのクロロホルムに溶解させ、３０ｍｌの脱イオン水で分液ロートで３回洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過した。濾液をロータリーエバポレイターで濃縮し、アセトンで沈殿させて白色ワックス状の生成物が得られた（収量４００ｍｇ）。パートＦ：Ｄｏｄｍｅｈａｐのブロマイド塩の合成１００ｍｌの丸底フラスコ中で、パートＥ、ステップ２で得られた６３０ｍｇの１，２−ジヘキサデシルオキシ−３−ジメチルアミノグリセリンおよび１．８３ｇのブロモヘキサノールを６０ｍｌのトルエンに溶解させた。反応混合物を連続攪拌しながら油浴で１１０℃に加熱し、条件を３日間維持した。反応の進行は薄層クロマトグラフィー（ヘキサン中３０％酢酸エチル）を用いてモニターし、３日後に完了したことが示された。反応混合物をロータリーエバポレイターで濃縮した。残渣を３０ｍｌのクロロホルムに溶解させ、分液ロートで飽和の重炭酸ナトリウム水溶液で３回洗浄して抽出した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過した。濾液をロータリーエバポレイターで濃縮し、シリカゲル６０充填カラム（イーエムサイエンス社、ギップスタウン、ＮＪ）で精製した。生成物はヘキサン中、酢酸エチル３０％溶液を用いて溶出させた。１００％ヘキサンでスタートし、酢酸エチルの濃度を各連続洗浄で３０％まで次第に増加させた。（生成物の収量：１．２５ｇ）。実施例IIＤｏｍｃａｔｏｐ−オリゴヌクレオチド（“リポヌクレオチド”）結合体の合成パートＡ：Ｄｏｍｃａｔｏｐのブロマイド塩のＮＨＳエステルの合成実施例１パートＢで製造されたＤＯＭＣＡＴＯＰのブロマイド塩（１３０ｍｇ、０．１７mmol）を２０ｍｌの乾燥テトラヒドロフランに溶解させ、この溶液に６５ｍｇ（０．５６mmol）のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドおよび１１６ｍｇ（（０．５６mmol）のジシクロヘキシルカルボジイミドを添加した。この溶液を室温で窒素下に２０時間攪拌した。反応により生成したジシクロヘキシルウレアを濾去し、濾液を減圧下に濃縮し、クロロホルムに溶解する残渣を得た。この溶液を飽和の重炭酸ナトリウムで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、量論的収量のＤＯＤＭＥＣＡＰのＮＨＳエステルを得た。パートＢ：５′−アミノ末端オリゴヌクレオチドの合成ＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１からなる５′−アミノ末端オリゴヌクレオチドの合成は、公知の標準的なホスホルアミダイト化学手順および商業的に入手可能な自動合成器を用いて行った。塩基アデノシン、グアノシン、シトシンおよびチロシンのシアノエチルホスホルアミダイトおよびアミノリンカーホスホルアミダイトから調節多孔ガラス固体支持体上で自動化合成を経てオリゴヌクレオチドを合成した。５′−アミノ末端オリゴヌクレオチドの合成の最後のステップにはアミノリンカーホスホルアミダイト（アプライドバイオシステム社，フォスターシテイ，ＣＡ）を用い、５′−アミノ末端オリゴヌクレオチドをカップリングさせた。ヌクレオシド塩基、Ｏ−シアノエチル基の脱保護、オリゴヌクレオチドの支持体との結合の切断は、水酸化アンモニウムで５５℃で少なくとも１５時間処理することにより一段階で行った。生じたアンモニア性溶液を濃縮すると、５′−アミノ末端オリゴヌクレオチドが得られ、これを水に溶解し、引き続く使用まで保存した。パートＣ：ＤｏｍｃａｔｏｐのＮＨＳエステルと５′−アミノ末端オリゴヌクレオチドのカップリングによるリポヌクレオチドの形成パートＢで製造されたホスホロチオエートオリゴヌクレオチド（３００μｌの水中２．２ｍｇ）に３３μｌの３Ｍ酢酸ナトリウムおよび１ｍｌのエタノールを加えて−２０℃、少なくとも１時間で沈殿させた。沈殿したオリゴヌクレオチドを４℃で少なくとも３０分間遠心分離して分離した。上清を除去し、オリゴヌクレオチドを含むペレットをスピード真空５分間で乾燥させ、４９０μｌの０．２５ＭのＨＥＰＥＳ溶液（ｐＨ８．１）に溶解させた。この溶液に２１０μｌのピリジンおよび２８０μｌの２５ｍＭチオカチオン性ＮＨＳエステルのピリジン液を加えた。生じた混合物をボルテックスし、５５℃で少なくとも１８時間反応させた。溶液を１０ｍｌのチューブに移し、２８０μｌの３Ｍ酢酸ナトリウム、７００μｌの水および７．９ｍｌのエタノールで−２０℃で少なくとも２時間処理した。生じた懸濁液を１７，０００ｒｐｍ、４℃で１時間遠心分離し、上清を除去した。得られたオリゴヌクレオチド含有ペレットを乾燥させ、１ｍｌの水に溶解させた。この粗生成物を０．１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ７）中増加するメタノール濃度勾配でＣ８ラジアルパック（radial pak）カラムを使用する逆相ＨＰＬＣによって精製した。リポヌクレオチドを含有する分画をプールし、濃縮して残渣を１−２ｍｌの水に溶解させ、０．２５ｍｌの３Ｍ酢酸ナトリウムおよび８ｍｌエタノールで−２０℃で一夜処理して、リポヌクレオチドのペレットを遠心分離して得た。実施例IIIリポソーム製剤の合成後述のリポソーム製剤は示された量のＤＯＰＥ（アバンチポーラーリピド社、アラバスター，ＡＬ）；コレステロール（アバンチポーラーリピド社、アラバスター,ＡＬ）；ビタミンＤ₃（アルドリッチケミカル社、ミルウオーキー,ＷＩ）；オレイン酸（“ＯＡ”；ヌチェックプレプ社、エリシアン、ＭＮ）；および上述のように製造されたＤＯＤＭＥＣＡＰ、ＤＯＭＣＡＴＯＰ、ＤＯＭＨＹＴＯＰ、ＤＯＤＭＥＣＡＰ、ＯＢＥＨＹＴＯＰおよびＯＢＥＣＡＳＴＯＰを含んでいた。与えられた全割合はモル割合である。他に示さないかぎり、本明細書でリポソームの製造に用いられたカチオン性脂質：滴定可能な両親媒体：ステロールのモル割合は、１０：５：２である。“全脂質”の用語は上述のリポソームの全成分の合計である。下記のホスホロチオエートオリゴヌクレオチドはＳＥＱ．ＩＤ．ＮＯ．１で与えられる。所望割合の全脂質の合計８０μモルをクロロホルムに溶解させ、乾燥させて、ｐＨ７．４の燐酸緩衝塩水でホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの０．５ｍＭ溶液を１ｍｌ含む水溶液で再び水和させた。製造物をボルテックスし、３７℃ で一夜振盪すると平衡に達し、小胞を形成し、次いで凍結−解凍した。これに続き、このように形成された多重ラメラリポソーム小胞を適当な孔のサイズのポリカーボネートフィルターを通して押し出し、単一の二重層を有するリポソームを得た。カプセル化されていない物質を除くため、リポソームをサイジングゲルカラムを通してゲル濾過した。カプセル化されたオリゴヌクレオチドの全量をハイブリダイゼイションプロテクションアッセイを用いて決定した。（Arnold 等，ＰＣＴＷＯ８９／０２４７６参照）。実施例IVリポソーム製剤の細胞内取込み１０％牛胎児血清（ギブコＢＲＬ社、グランドアイランド，ＮＹ）を含んだ２ｍｌのＲＰＭＩ−１６４０培地（バイオホイットテイカー社，ウオーカースビル，ＭＤ）中、全部で２×１０⁶細胞（Ｕ９３７細胞；ＡＴＣＣ，ロックビル、ＭＤ）を６−ウエルの組織培養プレートに播種し、５％ＣＯ₂中３５℃でインキュベートした。燐酸緩衝塩水（ｐＨ７．４）に溶解されたリポソームにカプセル化されたまたはフリーのオリゴヌクレオチドの１００ｎＭ溶液を細胞に導入した。４８時間後、細胞を溶解し、実施例IIIに記載されたようにしてオリゴヌクレオチドの量を決定した。実施例IIIに説明されたように製造し、オレイン酸およびビタミンＤ₃とともにカチオン性脂質ＤＯＤＭＥＣＡＰ、ＤＯＤＭＥＨＡＰ、ＤＯＭＣＡＴＯＰ、ＤＯＭＨＹＴＯＰ、ＯＢＥＨＹＴＯＰまたはＯＢＥＣＡＴＯＰを含むリポソームは類似のオリゴヌクレオチド取込みを示した。実施例Ｖウイルス抑制検定１０％牛胎児血清を含んだＲＰＭＩ−１６４０培地中、全部で２．８×１０⁶ 細胞（Jurkat 細胞；ＡＴＣＣ）を２本の１５ｍｌチューブに全量１０ｍｌになるように加えた。細胞を遠心分離し、上清を静かに別の容器に移し、細胞を上述の培地１ｍｌに再び懸濁させた。レトロウイルス（ＨＩＶ−１_IIIB）の試料４．０ｍｌを一本のチューブに添加し、培地のみ４．０ｍｌを対照に添加した。細胞は２時間３７℃、５％ＣＯ₂雰囲気でインキュベートした。フリーのウイルスは細胞から洗浄し、細胞は３５ｍｌの培地に再び懸濁した。感染細胞および対照細胞を９６ウエルの組織培養プレートに１２５μｌのアリコートで播種した。実施例III に従って製造した種々の濃度のリポソームまたはフリーのオリゴヌクレオチドをウエルに添加し、プレートを５％ＣＯ₂雰囲気下３７℃で６日間インキュベートした。製造社説明書および対照を用いて、ｐ２４蛋白レベルを抗原捕獲検定（antigen capture assay）（クールターイムノロジー社、ヒアリー、ＦＬ；ＵＳＰ４，８８６，７４２）により決定した。結果を図１，２および３に示す。ここで“−●−”はオリゴヌクレオチドを有するリポソームを表し、“−■−”はオリゴヌクレオチドを有しない対照リポソームを表し、“−▼−”はフリーのオリゴヌクレオチドを表す。図１においては、オリゴヌクレオチドを有し、または有しないチオカチオン性脂質ＤＯＭＣＡＴＯＰを用いて製造されたリポソーム、またはオリゴヌクレオチド単独の結果を示す。ここに示されるとおり、オリゴヌクレオチドを含むリポソームは、ｐ２４レベルの有意の減少によって示されるように、ウイルスの複製を効果的に抑制した。図２においては、アンモニウムイオンを含有する脂質ＤＯＤＭＥＣＡＰの結果を示す。ここに示されるとおり、ウイルス複製の抑制は観察されなかった。図３においては、アンモニウムイオン含有脂質ＤＯＤＭＥＨＡＰとステロールとしてビタミンＤ₃またはコレステロールを用いて製造されたリポソームの結果を表している。ここに示されるとおり、ビタミンＤ₃含有リポソームは、そのコレステロール含有等価物よりもウイルス複製の抑制に予想外により効果的であった。実施例VI細胞代謝活性検定細胞の代謝活性に与える影響を決定するために、各種のリポソーム製剤の毒性の測定として、実施例Ｖからの感染細胞を用いてＸＴＴ検定を次のように行った。細胞培地中、１ｍｇ／ｍｌのＸＴＴ（２，３−ビス〔２−メトキシ−４−ニトロ−Ｓ−スルホフェニル〕−２Ｈ−テトラゾリウム−Ｓ−カルボキシアニリド分子内塩；シグマケミカル社、セントルイス，ＭＯ）溶液を調製した。これに、ＸＴＴ溶液１ｍｌにつき、５μｌの５ｍＭフェナジンメトスルフェート（シグマケミカル社）を添加した。得られた混合物の５０μｌのアリコートを各ウエルに添加し、プレートを５％ＣＯ₂雰囲気下、３７℃で４時間インキュベートした。その後、各ウエルに１５μｌのトリトンＸ−１００（シグマケミカル社）を加え、４５０−６５０ｎｍの二重（dual）吸光度における光学密度（Ｏ．Ｄ．）を読んだ。補正後光学密度測定は、適当な対照レベルを減ずることにより決定した。図４に示されるとおり、実施例III に記載されているようにして調製したリポソームの濃度を増加させると、アンモニウムイオン含有脂質（ＤＯＤＭＥＨＡＰ）を有するリポソームは等価のスルホニウムイオン含有脂質（ＤＯＭＨＹＴＯＰ）を有するリポソームよりもはるかに低い濃度で毒性を示し始めた（光学密度の減少によって明らかなとおり）。本発明の他の観点、用途および利点は、本開示を検討することにより当業者に明らかとなるであろう。当業者はまた、発明の精神から離れることなく、本明細書に開示された構成および方法に対する多くの変化が可能であることを認識するであろう。それ故下記クレームは本発明の範囲を示すものであり、明細書において上述した特定の形態に限定されるものではない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ // Ｃ０７Ｍ 7:00 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ (31)優先権主張番号０８／４８０，６２２ (32)優先日 1995年６月７日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号０８／４８２，３０５ (32)優先日 1995年６月７日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号０８／４８２，４３０ (32)優先日 1995年６月７日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号０８／４８２，４９７ (32)優先日 1995年６月７日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，ＫＲ (72)発明者パテル，ジャズミン・アールアメリカ合衆国カリフォルニア州92131, サン・ディエゴ，スクリップス・ヴィスタ・ウェイ 10030−52 (72)発明者ダス，アディティア・ランジャンアメリカ合衆国カリフォルニア州92122, サン・ディエゴ，アヴェニダ・ナヴィダッド 7867，アパートメント 241

Claims

【特許請求の範囲】１．生体分子の細胞内への移送を容易にするための化合物であって、一般式：［式中、Ａ¹およびＡ²は、同一または異なり、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｏ−、−Ｓ−ＣＯ−または−Ｓ−であり；Ａ³は、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−ＣＯ−、−ＣＯ −Ｓ−、−Ｏ−ＣＳ−、−ＣＳ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＳ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＳ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、− Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、または存在せず；Ｒ¹およびＲ²は、同一または異なり、Ｈ、またはＣ₁からＣ₂₃の飽和または一部不飽和のアルキルまたはアラルキルであり、ただし、Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つはＨではなく；Ｒ³は、Ｃ₁からＣ₁₂のアルキル、アラルキル、アルカリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり；またはＲ³は、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドであり；またはＲ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴、 −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺、（式中、ｐは１から５であり、ｑは０から４であり、およびＲ⁴は、ＨまたはＣ₁ からＣ₄のアルキルである）であり；およびｍ、ｎおよびｏは０から８であり、ただし、ｍ≧１であり、かつ（ｍ＋ｎ＋ｏ） ≧３である］で表される化合物およびその光学異性体および／または塩。２．式中、ａ）Ａ¹およびＡ²は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−および−Ｓ −からなる群より選択され；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄の炭化水素基、 ii）ベンジル、および iii）フェネチルからなる群より選択され；ｃ）Ａ³は、−Ｏ−、ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−ＣＯ−からなる群より選択されるか、または存在せず；ｄ）Ｒ³は、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁−Ｃ₁₂のアルキルまたはアラルキル、 ii） −［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴（式中、ｐは３−４であり、ｑは０− ４であり、Ｒ⁴はＨである）、 iii） −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺（式中、ｐは２−３であり、およびＲ³はメチルである）、およびからなる群より選択される、請求項１記載の化合物。３．式中、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジル；からなる群より選択され；ｂ）Ａ³は、−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｆ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項２記載の化合物。４．式中、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジル、からなる群より選択され、かつｍ＝６である、請求項３記載の化合物。５．式中、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、Ｒ²はベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項４記載の化合物。６．式中、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルであり；からなる群より選択され；ｂ）Ａ³は−ＣＯ−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｇ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項２記載の化合物。７．式中、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジル、からなる群より選択され、およびｍ＝５である、請求項６記載の化合物。８．式中、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²はベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項７記載の化合物。９．式中、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；および．ｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項４記載の化合物。１０．少なくとも１つの生体分子を細胞内に導入する方法であって、ａ）生体分子および次の一般式の少なくとも１つのチオカチオン性脂質およびその光学異性体および／または塩：［式中、Ａ¹およびＡ²は、同一または異なり、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｏ−、−Ｓ−ＣＯ−または−Ｓ−であり；Ａ³は、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−ＣＯ−、−ＣＯ −Ｓ−、−Ｏ−ＣＳ−、−ＣＳ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＳ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＳ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、− Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、または存在せず；Ｒ¹およびＲ²は、同一または異なり、Ｈ、またはＣ₁からＣ₂₃の飽和または一部不飽和のアルキルまたはアラルキルであり、ただし、Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つはＨではなく；Ｒ³は、Ｃ₁からＣ₁₂のアルキル、アラルキル、アルカリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり；またはＲ³は、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドであり；またはＲ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴、 −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺、（式中、ｐは１から５であり、ｑは０から４であり、およびＲ⁴はＨまたはＣ₁からＣ₄のアルキルである）であり；およびｍ、ｎおよびｏは０から８であり、ただし、ｍ≧１でありかつ（ｍ＋ｎ＋ｏ）≧ ３である］を含む医薬組成物を用意し、そしてｂ）細胞を前記医薬組成物と接触させ、このことにより前記チオカチオン性脂質が１またはそれ以上の前記生体分子を前記細胞に導入することを容易にする；の各工程を含む方法。１１．前記チオカチオン性脂質がリポソーム中に含まれる、請求項１０記載の方法。１２．前記チオカチオン性脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−および−Ｓ −からなる群より選択され；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄の炭化水素基、 ii）ベンジル、および iii）フェネチルからなる群より選択され；ｃ）Ａ³は、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−ＣＯ−からなる群より選択されるか、または存在せず；ｄ）Ｒ³は、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁−Ｃ₁₂のアルキルまたはアラルキル、 ii） −［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴（式中、ｐは３−４であり、ｑは０− ４であり、およびＲ⁴はＨである）、 iii） −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺（式中、ｐは２−３であり、およびＲ³はメチルである）、およびからなる群より選択される、請求項１０記載の方法。１３．前記チオカチオン性脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は、−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｆ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項１２記載の方法。１４．前記チオカチオン性脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジル、からなる群より選択され、およびｍ＝６である、請求項１３記載の方法。１５．前記チオカチオン性脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²はベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項１４記載の方法。１６．前記チオカチオン性脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は、−ＣＯ−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）０＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｇ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項１２記載の方法。１７．前記チオカチオン性脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジルからなる群より選択され、およびｍ＝５である、請求項１６記載の方法。１８．前記チオカチオン性脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²は、ベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項１７記載の方法。１９．前記チオカチオン性脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項１４記載の方法。２０．前記生体分子がオリゴヌクレオチドである、請求項１０記載の方法。２１．動物細胞中にオリゴヌクレオチドを導入する方法であって、ａ）前記オリゴヌクレオチドおよびチオカチオン性脂質を含む医薬組成物を用意し、そしてｂ）前記細胞を前記医薬組成物と接触させ、このことにより前記チオカチオン性脂質は前記オリゴヌクレオチドの前記細胞中への取り込みを容易にする、の各工程を含む方法。２２．少なくとも１つの生体分子と、次の一般式：［式中、Ａ¹およびＡ²は、同一または異なり、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｏ−、−Ｓ−ＣＯ−または−Ｓ−であり；Ａ³は、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−ＣＯ−、−ＣＯ −Ｓ−、−Ｏ−ＣＳ−、−ＣＳ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＳ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＳ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、− Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、または存在せず；Ｒ¹およびＲ²は、同一または異なり、Ｈ、またはＣ₁からＣ₂₃の飽和または一部不飽和のアルキルまたはアラルキルであり、ただし、Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つはＨではなく；Ｒ³は、Ｃ₁からＣ₁₂のアルキル、アラルキル、アルカリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり；またはＲ³は、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドであり；またはＲ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴、 −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺、（式中、ｐは、１から５であり、ｑは、０から４であり、およびＲ⁴は、ＨまたはＣ₁からＣ₄のアルキルである）である；およびｍ、ｎおよびｏは０から８であり、ただし、ｍ≧１でありかつ（ｍ＋ｎ＋ｏ）≧ ３である］の少なくとも１つのチオカチオン性脂質およびその光学異性体および／または塩とのコンジュゲートを含む組成物。２３．前記生体分子がオリゴヌクレオチドである、請求項２２記載の組成物。２４．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−および−Ｓ −からなる群より選択され；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄の炭化水素基、 ii）ベンジル、および iii）フェネチルからなる群より選択され；ｃ）Ａ³は、−Ｏ−、ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−ＣＯ−からなる群より選択されるか、または存在せず；ｄ）Ｒ³は、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁−Ｃ₁₂のアルキルまたはアラルキル、 ii） −［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴（式中、ｐは３−４であり、ｑは０− ４であり、およびＲ⁴はＨである）、 iii） −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺（式中、ｐは２−３であり、およびＲ³はメチルである）、およびからなる群より選択される、請求項２２記載の組成物。２５．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は、−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｆ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項２４記載の組成物。２６．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジル、からなる群より選択され、およびｍ＝６である、請求項２５記載の組成物。２７．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²は、ベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項２６記載の組成物。２８．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は、−ＣＯ−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｇ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項２４記載の組成物。２９．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジル、からなる群より選択され、およびｍ＝５である、請求項２８記載の組成物。３０．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²は、ベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項２９記載の組成物。３１．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項２６記載の組成物。３２．前記オリゴヌクレオチドおよび前記チオカチオン性脂質が、共有結合により結合して前記コンジュゲートを形成する２つの成分を含む、請求項２３記載の組成物。３３．前記結合が前記成分の一方のＮ−ヒドロキシスクシネート基と他方の成分のアミノ基との反応により形成される、請求項３２記載の組成物。３４．薬学的に許容される配合物中に含まれる前記コンジュゲートをさらに含む、請求項２３記載の組成物。３５．少なくとも１つの生体分子と少なくとも１つのチオカチオン性脂質とのコンジュゲートを含む組成物。３６．少なくとも１つのオリゴヌクレオチドと少なくとも１つのチオカチオン性脂質とのコンジュゲートを含む治療用組成物。３７．少なくとも１つの生体分子を細胞内に導入する方法であって、ａ）次の一般式：［式中、Ａ¹およびＡ²は、同一または異なり、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｏ−、−Ｓ−ＣＯ−または−Ｓ−であり；Ａ³は、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−ＣＯ−、−ＣＯ −Ｓ−、−Ｏ−ＣＳ−、−ＣＳ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＳ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＳ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、− Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、または存在せず；Ｒ¹およびＲ²は、同一または異なり、ＨまたはＣ₁からＣ₂₃の飽和または一部不飽和のアルキルまたはアラルキルであり、ただし、Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つはＨではなく；Ｒ³は、Ｃ₁からＣ₁₂のアルキル、アラルキル、アルカリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり；またはＲ³は、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドであり；またはＲ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴、 −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺、（式中、ｐは１から５であり、ｑは０から４であり、およびＲ⁴はＨまたはＣ₁からＣ₄のアルキルである）であり；およびｍ、ｎおよびｏは０から８であり、ただし、ｍ≧１でありかつ（ｍ＋ｎ＋ｏ）≧ ３である］の少なくとも１つのチオカチオン性脂質およびその光学異性体および／または塩に連結した少なくとも１つの生体分子を含むコンジュゲートを含む医薬組成物を用意し；そしてｂ）前記医薬組成物を前記細胞と接触させて、前記生体分子の前記細胞内への送達を容易にする、の各工程を含む方法。３８．前記コンジュゲートがリポソーム中に含まれる、請求項２記載の方法。３９．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−および−Ｓ −からなる群より選択され；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄の炭化水素基、 ii）ベンジル、および iii）フェネチルからなる群より選択され；ｃ）Ａ³は、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−ＣＯ−からなる群より選択されるか、または存在せず；ｄ）Ｒ³は、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁−Ｃ₁₂のアルキルまたはアラルキル、 ii） −［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴（式中、ｐは３−４であり、ｑは０− ４であり、およびＲ⁴はＨである）、 iii） −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺（式中、ｐは２−３であり、およびＲ³はメチルである）、およびからなる群より選択される、請求項２記載の方法。４０．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は、−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｆ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項３９記載の方法。４１．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジル、からなる群より選択され、およびｍ＝６である、請求項４０記載の方法。４２．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²はベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項４１記載の方法。４３．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は−ＣＯ−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｇ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項３９記載の方法。４４．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジル、からなる群より選択され、およびｍ＝５である、請求項４３記載の方法。４５．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²は、ベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項４４記載の方法。４６．前記コンジュゲートの前記チオカチオン性脂質部分において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項４１記載の方法。４７．前記生体分子がオリゴヌクレオチドである、請求項３７記載の方法。４８．前記オリゴヌクレオチドおよび前記チオカチオン性脂質が、共有結合により結合して前記コンジュゲートを形成する２つの成分を含む、請求項４７記載の方法。４９．前記結合が、前記成分の一方のＮ−ヒドロキシスクシネート基と他方の成分のアミノ基との反応により形成される、請求項４８記載の方法。５０．リポソームを含む、少なくとも１つの生体分子を細胞内に導入するための組成物であって、前記リポソームはアンモニウムまたはスルホニウムイオン含有脂質、ビタミンＤ誘導体、ｐＨ感受性両親媒性物質、および生体分子を含むことを特徴とする組成物。５１．前記生体分子がオリゴヌクレオチドである、請求項５０記載の組成物。５２．前記脂質が次の一般構造：［式中、Ａ¹およびＡ²は、同一または異なり、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｏ−、−Ｓ−ＣＯ−または−Ｓ−であり；Ａ³は、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−ＣＯ−、−ＣＯ −Ｓ−、−Ｏ−ＣＳ−、−ＣＳ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＳ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＳ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、− Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、または存在せず；Ｒ¹およびＲ²は、同一または異なり、ＨまたはＣ₁からＣ₂₃の飽和または一部不飽和のアルキルまたはアラルキルであり、ただし、Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つはＨではなく；Ｒ³は、Ｃ₁からＣ₁₂のアルキル、アラルキル、アルカリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり；またはＲ³は、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドであり；またはＲ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴、 −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺、（式中、ｐは１から５であり、ｑは０から４であり、およびＲ⁴はＨまたはＣ₁からＣ₄のアルキルである）であり；およびｍ、ｎおよびｏは０から８であり、ただし、ｍ≧１でありかつ（ｍ＋ｎ＋ｏ）≧ ３である］およびその光学異性体および／または塩である、請求項５０記載の組成物。５３．前記リポソーム中の脂質対ビタミンＤ誘導体対両親媒性物質のモル比が約１０：５：２である、請求項５２記載の組成物。５４．前記ビタミンＤ誘導体がビタミンＤ₃である、請求項５３記載の組成物。５５．前記両親媒性物質が、脂肪族カルボン酸およびＤＯＰＥからなる群より選択される、請求項５４記載の組成物。５６．前記カルボン酸がオレイン酸である、請求項５５記載の組成物。５７．前記脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−および−Ｓ −からなる群より選択され；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄の炭化水素基、 ii）ベンジル、および iii）フェネチルからなる群より選択され；ｃ）Ａ³は、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−ＣＯ−からなる群より選択されるか、または存在せず；ｄ）Ｒ³は、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁−Ｃ₁₂のアルキルまたはアラルキル、 ii） −［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴（式中、ｐは３−４であり、ｑは０− ４であり、およびＲ⁴はＨである）、 iii） −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺（式中、ｐは２−３であり、およびＲ³はメチルである）、およびからなる群より選択される、請求項５２記載の組成物。５８．前記脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は、−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）０＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｆ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項５７記載の組成物。５９．前記脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジルからなる群より選択され、およびｍ＝６である、請求項５８記載の組成物。６０．前記脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²は、ベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項５９記載の組成物。６１．前記脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は、−ＣＯ−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｇ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項５７記載の組成物。６２．前記脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジルからなる群より選択され、およびｍ＝５である、請求項６１記載の組成物。６３．前記脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²は、ベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項６２記載の組成物。６４．前記脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項５９記載の組成物。６５．少なくとも１つの生体分子を細胞内に導入する方法であって、ａ）リポソームを含む医薬配合物を用意し、ここで、前記リポソームは、薬学的に許容される担体中に、アンモニウムまたはスルホニウムイオン含有脂質、ビタミンＤ誘導体、ｐＨ感受性両親媒性物質、および生体分子を含み；そしてｂ）前記細胞を医薬配合物と接触させて、前記生体分子の前記細胞中への送達を容易にする、の各工程を含む方法。６６．前記生体分子がオリゴヌクレオチドである、請求項６５記載の方法。６７．前記脂質が次の一般構造：［式中、Ａ¹およびＡ²は、同一または異なり、−Ｏ−ＣＯ−、−Ｏ−、−Ｓ−ＣＯ−または−Ｓ−であり；Ａ³は、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ−ＣＯ−、−ＣＯ −Ｓ−、−Ｏ−ＣＳ−、−ＣＳ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＳ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＳ−、−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、− Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−、または存在せず；Ｒ¹およびＲ²は、同一または異なり、Ｈ、またはＣ₁からＣ₂₃の飽和または一部不飽和のアルキルまたはアラルキルであり、ただし、Ｒ¹およびＲ²の少なくとも１つはＨではなく；Ｒ³は、Ｃ₁からＣ₁₂のアルキル、アラルキル、アルカリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり；またはＲ³は、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドであり；またはＲ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴、 −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺、（式中、ｐは１から５であり、ｑは０から４であり、およびＲ⁴はＨまたはＣ₁からＣ₄のアルキルである）であり；およびｍ、ｎおよびｏは０から８であり、ただし、ｍ≧１でありかつ（ｍ＋ｎ＋ｏ）≧ ３である］およびその光学異性体および／または塩である、請求項６５記載の方法。６８．前記リポソーム中の脂質対ビタミンＤ誘導体対両親媒性物質のモル比が約１０：５：２である、請求項６７記載の方法。６９．前記ビタミンＤ誘導体がビタミンＤ₃である、請求項６８記載の方法。７０．前記両親媒性物質が、脂肪族カルボン酸およびＤＯＰＥからなる群より選択される、請求項６９記載の方法。７１．前記カルボン酸がオレイン酸である、請求項７０記載の方法。７２．前記脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、それぞれ独立して、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−および−Ｓ −からなる群より選択され；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄の炭化水素基、 ii）ベンジル、および、 iii）フェネチルからなる群より選択され；ｃ）Ａ³は、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−および-ＮＨ−ＣＯ−からなる群より選択されるか、または存在せず；ｄ）Ｒ³は、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁−Ｃ₁₂のアルキルまたはアラルキル、 ii） −［（ＣＨ₂）ｐ−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴（式中、ｐは３−４であり、ｑは０− ４であり、およびＲ⁴はＨである）、 iii） −（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴ ₃ ⁺（式中、ｐは２−３であり、およびＲ³はメチルである）、およびからなる群より選択される、請求項６７記載の方法。７３．前記脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は、−Ｏ−であり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｆ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項７２記載の方法。７４．前記脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジルからなる群より選択され、およびｍ＝６である、請求項７３記載の方法。７５．前記脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²はベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項７４記載の方法。７６．前記脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₂−Ｃ₂₄のアルキル基、および ii）ベンジルからなる群より選択され；ｂ）Ａ³は−ＣＯ−Ｏであり；ｃ）ｎ＝０−８であり；ｄ）ｏ＝０−８であり；ｅ）ｍ＝１から２３であり；およびｇ）Ｒ³は、−［（ＣＨ₂）_p−ＮＲ⁴］_q−Ｒ⁴である、請求項７４記載の方法。７７．前記脂質において、ａ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ独立して、 i）飽和または一部不飽和のＣ₁₈アルキル基、 ii）飽和または一部不飽和のＣ₁₆アルキル基、および iii）ベンジルからなる群より選択され、およびｍ＝５である、請求項７６記載の方法。７８．前記脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹は、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり、およびＲ²はベンジル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項７７記載の方法。７９．前記脂質において、ａ）Ａ¹およびＡ²は、両方とも−Ｏ−であり；ｂ）Ｒ¹およびＲ²は、それぞれ、飽和Ｃ₁₆またはＣ₁₈のアルキル基であり；ｃ）ｎ＝０であり；ｄ）Ｏ＝０であり；ｅ）ｑ＝０であり；およびｆ）Ｒ⁴はＨである、請求項７４記載の方法。